Μετάδοση του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων σε συγκατοικούντα χοιρίδια με διάφορες ανοσολογικές καταστάσεις μετά από εξασθενημένο ζωντανό εμβόλιο

Απλή περίληψη:

Η κλασική πανώλη των χοίρων είναι ένα εξαιρετικά επικίνδυνο παθογόνο που επηρεάζει τους οικόσιτους χοίρους. Ο εμβολιασμός με το τροποποιημένο ζωντανό εμβόλιο είναι κρίσιμος για την πρόληψη και τον έλεγχο της κλασικής πανώλης των χοίρων. Ωστόσο, πολλοί παράγοντες, όπως τα μητρικά αντισώματα μέσω του πρωτογάλακτος, θα μπορούσαν να επηρεάσουν την αποτελεσματικότητα του ζωντανού εμβολίου, οδηγώντας σε ατελή προστασία στα εμπορικά κοπάδια. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τη μετάδοση του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων σε πειραματόζωα με διάφορες ανοσιακές καταστάσεις μετά τον εμβολιασμό. Ένα χοιρίδιο απαλλαγμένο από συγκεκριμένο παθογόνο μολυσμένο με τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων χρησίμευσε ως ιικός δότης και κύριος εισβολέας και συγκατοικούσε με χοιρίδια με μητρικά αντισώματα που είχαν ή δεν είχαν εμβολιαστεί. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα, τα περισσότερα από τα χοιρίδια με μητρικά αντισώματα που εμβολιάστηκαν προστατεύτηκαν πλήρως από τη μετάδοση εξ επαφής από τον ιό δότη και εμπόδισαν τη μετάδοση του ιού στο τρίτο μέρος (αυτά τα χοιρίδια που εκτέθηκαν δευτερογενώς μέσω της συμβίωσης). Η κυτταρομεσολαβούμενη ανοσία, που αντιπροσωπεύεται από συγκεκριμένα κύτταρα που εκκρίνουν ιντερφερόνη- -, χρησίμευσε ως το κλειδί για την κάθαρση και την ανάκτηση του ιού. Αντίθετα, τα μη εμβολιασμένα χοιρίδια με χαμηλά επίπεδα αντισωμάτων που προέρχονται από τη μητέρα είχαν επιταχύνει τη μόλυνση από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων μετά την ιική εισβολή. Συμπερασματικά, ο εμβολιασμός εξακολουθεί να προκαλεί στερεή ανοσία σε εμπορικές αγέλες υπό μητρική παρέμβαση αντισωμάτων και μπορεί να εμποδίσει τη μετάδοση του ιού στα κοπάδια.

φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα

Αφηρημένη:

Η κλασική πανώλη των χοίρων (ΕΝΥ) είναι μια συστηματική αιμορραγική νόσος που προσβάλλει οικόσιτους χοίρους και αγριόχοιρους. Το τροποποιημένο ζωντανό εμβόλιο (MLV) προκαλεί γρήγορη και σταθερή προστασία έναντι της μόλυνσης από τον ιό του ΕΝΥ (CSFV). Τα μητρικά αντισώματα (MDAs) μέσω του πρωτογάλακτος θα μπορούσαν να επηρεάσουν την αποτελεσματικότητα του MLV, οδηγώντας σε ατελή προστασία έναντι της μόλυνσης από CSFV στους χοίρους. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τη μετάδοση του CSFV μεταξύ πειραματικών χοιριδίων με διάφορες ανοσολογικές καταστάσεις μετά τον MLV. Δεκαεννέα χοιρίδια, 18 με MDAs και 1 χοιρίδιο απαλλαγμένο από συγκεκριμένο παθογόνο μολυσμένο με CSFV που χρησίμευσε ως δότης CSFV, συγκατοικούσαν με χοιρίδια που είχαν ή δεν είχαν λάβει το MLV. Τα πέντε έκτα των χοιριδίων με MDA στα οποία είχε χορηγηθεί μία δόση MLV προστατεύτηκαν πλήρως από τη μετάδοση εξ επαφής από τον δότη CSFV και δεν μετέδωσαν τον CSFV στα χοιρίδια που εκτέθηκαν δευτερογενώς μέσω της συμβίωσης. Η κυτταρική ανοσία, που αντιπροσωπεύεται από τα ειδικά αντι-CSFV κύτταρα που εκκρίνουν ιντερφερόνη- -, ήταν το κλειδί για την κάθαρση και την ανάκτηση του ιού. Μετά τη συγκατοίκηση με έναν δότη CSFV, τα μη εμβολιασμένα χοιρίδια με χαμηλά επίπεδα MDA εμφάνισαν μόλυνση από CSFV και διέδωσαν τον CSFV σε άλλα χοιρίδια μέσω επαφής. εκείνοι με υψηλά επίπεδα MDA ανέρρωσαν αλλά έδρασαν ως ασυμπτωματικοί φορείς. Συμπερασματικά, το MLV εξακολουθεί να προκαλεί στερεή ανοσία σε εμπορικά κοπάδια υπό παρεμβολή MDA και εμποδίζει τη μετάδοση του CSFV μέσα σε αυτά τα κοπάδια.

Λέξεις-κλειδιά:

κλασική πανώλη των χοίρων? τροποποιημένο ζωντανό εμβόλιο. μητρικής προέλευσης αντίσωμα? μετάδοση

1. Εισαγωγή

Η κλασική πανώλη των χοίρων (CSF) είναι μια διασυνοριακή, εξαιρετικά μεταδοτική, αιμορραγική ασθένεια που προσβάλλει οικόσιτους χοίρους και αγριόχοιρους και προκαλείται από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων (CSFV) [1,2]. Το ΕΝΥ είναι μια ασθένεια που μπορεί να κοινοποιηθεί από τον Παγκόσμιο Οργανισμό για την Υγεία των Ζώων (WOAH) και το ΕΝΥ είναι ακόμα ενδημική ασθένεια στην Ασία, τη Νότια Αμερική, την Κεντρική Αμερική και την Καραϊβική. Μόνο οι χώρες της Βόρειας Αμερικής, του Ωκεανού και της Δυτικής Ευρώπης έχουν εξαλείψει επιτυχώς το ΕΝΥ [3-6].

Ο CSFV είναι ένας περικαλυμμένος ιός RNA μονού στελέχους τουPestivirusγένος της οικογένειας Flaviviridae που περιλαμβάνει επίσης τον ιό της ιογενούς διάρροιας των βοοειδών και τον ιό της οριακής νόσου [1,2]. Το ιικό γονιδίωμα περιέχει περίπου 12,3 kb και κωδικοποιεί 3898 αμινοξέα πολυπρωτεΐνης, τα οποία αργότερα υποβάλλονται σε επεξεργασία σε τέσσερα δομικά (C, Erns, E1 και E2) και οκτώ μη δομικά (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, και NS5B) πρωτεΐνες από ιικές και κυτταρικές πρωτεάσες [7]. Με βάση τις αλληλουχίες E2 ή NS5B, ο CSFV ταξινομείται σε τρεις γονότυπους με τρεις ή τέσσερις υποτύπους (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Ανάλογα με τη μολυσματικότητα του CSFV και τους παράγοντες χοίρου, συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας, της φυλής, της κατάστασης υγείας και της ανοσολογικής κατάστασης, οι χοίροι που έχουν μολυνθεί με CSFV μπορούν να εμφανίσουν είτε οξεία, υποξεία ή χρόνια κλινικά συμπτώματα [9-11]. Οι χοίροι που έχουν μολυνθεί με CSFV υψηλής μολυσματικότητας παρουσιάζουν οξύ πυρετό και σοβαρές αιμορραγικές βλάβες και εκκρίνουν υψηλά ιικά φορτία στα κόπρανα, το σάλιο και τις εκκρίσεις τους κατά τη διάρκεια των σύντομων ημερών επιβίωσής τους. Αντίθετα, οι χοίροι που έχουν μολυνθεί με CSFV μέτριας μολυσματικότητας και χαμηλής μολυσματικότητας παρουσιάζουν υποξείες και χρόνιες κλινικές ενδείξεις και ηπιότερες βλάβες και εκκρίνουν μέτρια-χαμηλά επίπεδα CSFV στα κόπρανα, το σάλιο και τις εκκρίσεις τους κατά τις σχετικά μεγαλύτερες ημέρες επιβίωσής τους [12,13 ]. Στο πεδίο, οι κυρίως μολυσμένοι χοίροι μπορούν να διαδραματίσουν εξέχοντα ρόλο στη δευτερογενή μετάδοση του CSFV σε άλλους χοίρους με μεταβλητή ανοσία στο CSFV. Η μεταδοτικότητα του CSFV μέτριας μολυσματικότητας και υψηλής μολυσματικότητας είναι υψηλότερη από αυτή του CSFV χαμηλής μολυσματικότητας [12,13].

Ο εμβολιασμός είναι ζωτικής σημασίας για την πρόληψη και τον έλεγχο του ΕΝΥ σε ενδημικές χώρες. Το τροποποιημένο ζωντανό εμβόλιο (MLV) είναι ένα υψηλής αποτελεσματικότητας, ασφαλές και προσιτό εμβόλιο που είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο μεταξύ των εμπορικών κοπαδιών. Το MLV μπορεί γρήγορα να προκαλέσει ανοσία για να παρέχει μερική προστασία 3 ημέρες μετά τον εμβολιασμό και πλήρη προστασία 5 ημέρες μετά τον εμβολιασμό [14-16]. Ωστόσο, πολλοί παράγοντες, συμπεριλαμβανομένης της κατάστασης της υγείας των χοίρων ποιότητας του εμβολίου και του επιπέδου των μητρικών αντισωμάτων (MDAs), μπορούν να μειώσουν την αποτελεσματικότητα του MLV, οδηγώντας σε ατελή προστασία των εμβολιασμένων χοίρων [14-16]. Σε κοπάδια ενδημικά του ΕΝΥ, ο χρόνος του εμβολιασμού κατά του MLV εξαρτάται από τα επίπεδα MDA των χοίρων. Τα υψηλά επίπεδα MDA παρεμβαίνουν στην αποτελεσματικότητα του MLV και τα χαμηλά επίπεδα MDA αυξάνουν τον κίνδυνο μόλυνσης των χοιριδίων [17,18]. Επομένως, τα σκευάσματα των προγραμμάτων εμβολιασμού κατά του MLV σε κοπάδια πρέπει να βασίζονται σε μειώσεις των επιπέδων των MDAs. Ένα πρόγραμμα εμβολιασμού που εφαρμόζεται τακτικά κατά του ΕΝΥ στην Ταϊβάν περιλαμβάνει τον εμβολιασμό εγκύων χοιρομητέρων για την παροχή MDA μέσω του πρωτογάλακτος τους στα νεογνά και στη συνέχεια τη χορήγηση της πρώτης δόσης MLV στα χοιρίδια ηλικίας 3-12 εβδομάδων. Σύμφωνα με την επιτήρηση στην Ταϊβάν, οι μέσοι τίτλοι των εξουδετερωτικών αντισωμάτων κατά του CSFV (NAs) των MDA σε χοιρίδια κατά τον πρώτο εμβολιασμό τους κατά του MLV είναι υψηλότεροι από 1:32 [19], γεγονός που θα μπορούσε να βλάψει την αποτελεσματικότητα του MLV και να οδηγήσει σε διάφορες ανοσοποιητικές καταστάσεις στα κοπάδια. Αυτή η μελέτη περιγράφει ένα πείραμα σε ζώα για να εξετάσει την ικανότητα του MLV να προστατεύει χοιρίδια με ποικίλα επίπεδα MDA μετά από συγκατοίκηση με ένα μολυσμένο με CSFV χοιρίδιο που έδρασε ως δότης CSFV (δηλ. ο «πρωτεύων εισβολέας»).

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Κύτταρα και Ιός

Κύτταρα-1-ελεύθερου νεφρού χοίρου-15 (PK{4}}) τύπου κυκλοϊού χοίρου καλλιεργήθηκαν σε ελάχιστο απαραίτητο μέσο (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) με 5% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS) και επωάστηκε στους 37 ◦C σε 5% CO2. Τα κύτταρα PK-15 υποστήριξαν τη διάδοση του CSFV, συμπεριλαμβανομένου του στελέχους εμβολίου Lapinized Philippines Coronel (LPC) του γονότυπου 1.1 και του στελέχους TD/96 του γονότυπου 2.1. Οι τίτλοι του ιού των στελεχών LPC και TD/96 ήταν 107,71 και 105,87 μολυσματική δόση ιστοκαλλιέργειας 50% (TCID50), αντίστοιχα.

2.2. Πειραματικό σχέδιο

Συνολικά χοιρίδια {{0}} εβδομαδιαίας ηλικίας που περιλαμβάνουν 1 χοιρίδιο ελεύθερο ειδικών παθογόνων (SPF) χωρίς αντι-CSFV NAs (Ομάδα 1) και 18 υγιή χοιρίδια (Ομάδες 2-5) από το εμβολιασμένο με LPC Στο πείραμα χρησιμοποιήθηκαν χοιρομητέρες μιας αγέλης χωρίς CSFV (Εικόνα 1). Τα 18 υγιή χοιρίδια χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες (Ομάδες 2-5). οι μέσοι όροι του τίτλου αντι-LPC NA (log2) μεταξύ των Ομάδων 2-5 ήταν, αντίστοιχα, 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 και 4,3 ± 1,3 log2 πτυχές και δεν ήταν σημαντικά διαφορετικοί στις {{53} ημέρες μετά το πείραμα (DPE). Το χοιρίδιο SPF (Ομάδα 1) εμβολιάστηκε ειρωνικά χρησιμοποιώντας το στέλεχος 5 × 105 TCID50 TD/96 σε 7 DPE και χρησίμευσε ως ο κύριος εισβολέας ή δότης CSFV όταν συγκατοικούσε στο δωμάτιο 12 με τις ομάδες 2 και 3 (Εικόνα 1). Για να ελεγχθεί εάν τα MDA μείωσαν την αποτελεσματικότητα του MLV, η Ομάδα 2 (n=6) εμβολιάστηκε με μία δόση εμβολίου LPC (πάνω από 1 × 104 TCID50/δόση) σε 0 DPE. Για να ελεγχθεί η ικανότητα προστασίας του MDA, η Ομάδα 3 (ο έλεγχος για την Ομάδα 2, n=3) δεν εμβολιάστηκε με το εμβόλιο LPC και έτσι αυτά τα χοιρίδια εμφάνισαν αποσύνθεση του MDA μετά από 7 ημέρες μετά την πρώτη επαφή με τον κύριο εισβολέα. Η ομάδα 1 (πρωτεύων εισβολέας) συγκατοικούσε με τις ομάδες 2 και 3 για 10 ημέρες (από 7 έως 17 DPE). Η ομάδα 2 μεταφέρθηκε στη συνέχεια στο δωμάτιο 2 για να χρησιμεύσει ως δευτερεύοντες εισβολείς μέσω της συγκατοίκησης με την Ομάδα 4 (n=6) από 17 έως 36 DPE. Η ομάδα 3 μεταφέρθηκε στο δωμάτιο 4 για να συγκατοικήσει με την ομάδα 5 (n=3). Οι ομάδες 4 και 5 ήταν επομένως χοιρίδια με 17 ημέρες αποσύνθεσης MDA μετά την πρώτη επαφή με τους δευτερογενείς εισβολείς. Η Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Ινστιτούτου Έρευνας για την Υγεία των Ζώων ενέκρινε αυτό το πείραμα σε ζώα (αριθμός έγκρισης A09007).

Εικόνα 1. Πειραματικός σχεδιασμός.

Τα ζώα παρακολουθούνταν καθημερινά για κλινικά σημεία και κάθε παράμετρος βαθμολογήθηκε από 0 έως 3, που αντιπροσωπεύει το φυσιολογικό έως το σοβαρό, σύμφωνα με τη μέθοδο του Mittelholzer [19]. Μετρήθηκε η θερμοκρασία του ορθού και δείγματα αίματος, σάλιου και κοπράνων συλλέχθηκαν δύο φορές την εβδομάδα μέχρι 35 DPE. Τα δείγματα αναλύθηκαν για φορτία CSFV και αντισώματα κατά του CSFV. Πραγματοποιήθηκε νεκροψία σε 18 DPE για την Ομάδα 1, σε 36 DPE για τις Ομάδες 2 και 3 και σε 39 DPE για τις Ομάδες 4 και 5. Τα περιβαλλοντικά δείγματα (π. και το σιντριβάνι) αναλύθηκαν επίσης για CSFV.

2.3. Ποσοτική αντίστροφη μεταγραφή Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (QRRT-PCR) του CSFV

Τα ιικά RNA των δειγμάτων εκχυλίστηκαν με το QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Γερμανία) και ανιχνεύθηκαν μέσω ποσοτικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής (QRRT-PCR) [20]. Το QRTT-PCR χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των διαφόρων γονότυπων και τον ποσοτικό προσδιορισμό των φορτίων CSFV των δειγμάτων.

Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Αντι-CSFV NA

Η θέρμανση των ορών των χοιριδίων στους 56 ◦C αδρανοποιημένο συμπλήρωμα επέτρεψε την ανίχνευση αντι-LPC και TD/96 NA. Εν συντομία, 2-διπλάσια σειριακά αραιωμένα δείγματα ορού, ξεκινώντας από το 1:4, αναμίχθηκαν με ίσους όγκους 100 TCID50 του στελέχους LPC ή TD/96. Τα μείγματα επωάστηκαν στους 37 ◦C για 1 ώρα και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε κύτταρα ΡΚ{11}} σε τρυβλία 96-φρεατίων. Μετά από επώαση για 3 ημέρες, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν και χρωματίστηκαν για να ανιχνευθεί η παρουσία αντιγόνου CSFV μέσω έμμεσης δοκιμασίας φθορισμού. Ο τίτλος εξουδετέρωσης του αντισώματος είναι ο log2 του παράγοντα αραίωσης του αντισώματος (αντίστροφη αραίωση) όταν το 50% των φρεατίων προστατεύεται από μόλυνση.

2.5. Ειδική ιντερφερόνη CSFV (IFN)- -Έκκριση κυττάρων

Για να αξιολογηθεί η προκαλούμενη από αντι-CSFV κυτταρική ανοσία (CMI) των χοιριδίων, πραγματοποιήθηκε ex vivo δοκιμή ανταπόκρισης IFN για CSFV των μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος (PBMCs). Τα PBMC από το αντιπηκτικό αίμα με EDTA υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση στα 400× g χρησιμοποιώντας Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ΗΠΑ). Τα PBMC εναιωρήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) που περιείχε 10% (vol/vol) απενεργοποιημένο με θερμότητα FBS, 100 μονάδες/mL πενικιλλίνη G, 100 μg/mL στρεπτόκοκκο τομυκίνη και 0,25 μg/ mL αμφοτερικίνη Β. Ο αριθμός των ειδικών για το CSFV IFN- - που εκκρίνουν PBMC ανιχνεύθηκε μέσω της μονόχρωμης ενζυματικής ανάλυσης ELISPOT χοίρου IFN (CTL, Shaker Heights, OH, ΗΠΑ). Σε 96-πλάκες φρεατίων, PBMCs στα 5 × 106 κύτταρα/mL στα 100 μL ανά φρεάτιο με αντίσωμα σύλληψης IFN- χοίρου κατανεμήθηκαν στην ψευδή ομάδα (ενοφθαλμισμένη με μέσο RPMI 1640), την ομάδα TD/96 (μολυσμένη με 0,1 MOI) και η ομάδα ConA (συμπληρωμένη με 5 μg/mL κονκαναβαλίνη Α, Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ), που χρησιμεύει ως θετικός μάρτυρας. Διέγερση διπλής όψης χρησιμοποιήθηκαν κάθε φορά. Μετά από 48 ώρες διέγερσης, τα φρεάτια πλύθηκαν, το αντίσωμα που ανιχνεύτηκε με IFN- -συνδέθηκε και το υπόστρωμα σπάρθηκε. Οι κηλίδες σε κάθε φρεάτιο υποβλήθηκαν σε διαλογή και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τον αναλυτή CTL.

2.6. Ανοσοϊστοχημεία

Οι λεμφικοί ιστοί εξετάστηκαν μέσω ανοσοϊστοχημικής ανάλυσης χρησιμοποιώντας το σύστημα ανίχνευσης Super Sensitive Polymer HRP IHC (BioGenex, Χάγη, Ολλανδία) και το μονοκλωνικό αντίσωμα 1C7A1 έναντι των στελεχών CSFV του γονότυπου 2.1 [21]. Η ανάπτυξη ενός καφέ χρώματος υποδηλώνει την παρουσία CSFV.

2.7. Στατιστική

Για τον προσδιορισμό των στατιστικά σημαντικών διαφορών μεταξύ των ομάδων χρησιμοποιήθηκαν ανάλυση διακύμανσης και δοκιμή πολλαπλών εύρους Duncan. Η ανάλυση δεδομένων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA). Μια τιμή p μικρότερη από 0.05 έδειξε στατιστική σημασία.

3. Αποτελέσματα

3.1. Κλινικά σημεία

Όλα τα χοιρίδια ήταν υγιή πριν από το πείραμα (Πίνακας 1). Το χοιρίδιο της Ομάδας 1 ήταν ο δότης CSFV (πρωτεύων εισβολέας) και εμβολιάστηκε με το στέλεχος TD/96. Τα κλινικά σημεία που σχετίζονται με τον πυρετό και το CSFV στην Ομάδα 1 ανιχνεύθηκαν σε 12 DPE και 13 DPE, αντίστοιχα, με συνεχώς αυξανόμενες βαθμολογίες από 13–18 DPE που κορυφώθηκαν με βαθμολογία 20 σε 18 DPE. Για τα χοιρίδια των Ομάδων 2 και 3 που συγκατοικούσαν με τον δότη CSFV, η ομάδα 2, η οποία αποτελούνταν από τα χοιρίδια με MDA που είχαν εμβολιαστεί με το εμβόλιο LPC, ήταν υγιή και δεν εμφάνισαν πυρετό ή οποιαδήποτε κλινικά σημεία σχετιζόμενα με το CSFV κατά τη διάρκεια του πειράματος . Ωστόσο, εκείνα της Ομάδας 3, η οποία περιελάμβανε τα χοιρίδια με MDA που δεν είχαν υποβληθεί σε εμβολιασμό LPC, εμφάνισαν πυρετό σε 23 DPE (16 ημέρες μετά την πρώτη επαφή, DP1C) και ο αριθμός των εμπύρετων χοίρων αυξήθηκε από 23-36 DPE. Ο πυρετός συσχετίστηκε με κλινικά σημεία που σχετίζονται με το CSFV που εκδηλώθηκαν σε 24 DPE (17 DP1C). Παρόλο που ένα χοιρίδιο (8138) παρουσίασε ήπια κλινικά σημεία (βαθμολογίες κάτω από 5), τα άλλα δύο χοιρίδια επιδεινώθηκαν κλινικά από 24–36 DPE, με τις βαθμολογίες τους να κυμαίνονται μεταξύ 12 και 16. Το χοιρίδιο 8136 της Ομάδας 3 πέθανε σε 29 DPE. Τα χοιρίδια της Ομάδας 4 που ήρθαν σε επαφή (συγκατοικούσαν) με αυτά της Ομάδας 2 ήταν επίσης υγιή και δεν είχαν πυρετό ή κλινικά σημεία σχετιζόμενα με το CSFV κατά την πειραματική περίοδο. Τα χοιρίδια της Ομάδας 5 που ήταν σε επαφή με εκείνα της Ομάδας 3 εμφάνισαν πυρετό σε 27 DPE (10 ημέρες μετά τη δεύτερη επαφή, DP2C) και κλινικά σημεία σχετιζόμενα με το CSFV σε 30 DPE (13 DP2C). Ο αριθμός των εμπύρετων χοιριδίων και οι κλινικές βαθμολογίες στην Ομάδα 5 αυξήθηκαν με την πάροδο του χρόνου. η βαθμολογία σε 39 DPE ήταν 21 ± 1,4, κυμαινόμενη μεταξύ 19 και 22.

Πίνακας 1. Ποσοστό εμπύρετων χοιριδίων σε κάθε ομάδα κατά την πειραματική περίοδο.

Σύμφωνα με τις κλινικές παραμέτρους, η παρουσία μόνο MDAs (Ομάδα 3) δεν μπορούσε να προστατεύσει τα χοιρίδια από τη μετάδοση με επαφή που προκαλείται από τον κύριο εισβολέα (Ομάδα 1). Μια εφάπαξ δόση του εμβολίου LPC επιπλέον των MDAs (Ομάδα 2, δηλαδή η ευρέως εφαρμοσμένη πρακτική) προσέφερε προστασία από τη μετάδοση εξ επαφής που προκαλείται από τον πρωτεύοντα εισβολέα (Ομάδα 1, Πίνακας 1). Η ευρέως εφαρμοζόμενη πρακτική εμβολιασμού ωφέλησε επίσης τα δευτερογενώς προσβεβλημένα χοιρίδια (δηλαδή την Ομάδα 4, τα οποία είχαν μόνο MDAs αλλά δεν είχαν πυρετό και κλινικά συμπτώματα). Κλινικά, η κατάσταση στην Ομάδα 5 (τα χοιρίδια με μετάδοση επαφής που προκαλείται από τους δευτερεύοντες εισβολείς) ανακεφαλαίωσε την κατάσταση στην Ομάδα 3 (μετάδοση επαφής που προκαλείται από τον κύριο εισβολέα).

3.2. CSFV Viremia

Το στέλεχος CSFV TD/96 δεν ανιχνεύθηκε στο αίμα κανενός από τα χοιρίδια πριν από το πείραμα (Εικόνες 2Α και 3Α). Μετά τον εμβολιασμό TD/96, η ιαιμία TD/96 στο χοιρίδιο της Ομάδας 1 ανιχνεύθηκε για πρώτη φορά σε 10 DPE (3 ημέρες μετά τον ενοφθαλμισμό, POI) και ανιχνεύτηκε συνεχώς μέχρι την 17 DPE. Τα φορτία CSFV αυξήθηκαν από 101,2 TCID50/mL σε 10 DPE σε 106,4 TCID50/mL σε 17 DPE. Στην Ομάδα 2, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια με εμβολιασμό LPC που είχαν συγκατοικήσει με τον κύριο εισβολέα, ανιχνεύτηκε ιαιμία TD/96 μόνο σε ένα χοιρίδιο (8134) από 21-35 DPE. Τα φορτία CSFV στο αίμα του Piglet 8134 κορυφώθηκαν (104,9 TCID50/mL) σε 24 DPE και στη συνέχεια μειώθηκαν σε 101,7 TCID50/mL σε 35 DPE. Στην ομάδα 3, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια χωρίς εμβολιασμό LPC που είχαν συγκατοικήσει με τον κύριο εισβολέα, η ιαιμία TD/96 ανιχνεύθηκε για πρώτη φορά στο 66,7% (2/3) των χοιριδίων σε 21 DPE (14 DP1C) και όλα ήταν θετικά κατά 24 DPE. Ωστόσο, το Piglet 8138 ήταν αρνητικό για ιαιμία TD/96 από 28–35 DPI (Εικόνα 2Α). Στην Ομάδα 4, που αποτελείται από τα χοιρίδια που συγκατοικούσαν με την Ομάδα 2 στο δωμάτιο 2, η ιαιμία TD/96 δεν ανιχνεύθηκε κατά την πειραματική περίοδο. Όλα τα χοιρίδια της Ομάδας 5, που αποτελούνταν από τα χοιρίδια που είχαν έρθει σε επαφή με την Ομάδα 3, ήταν θετικά για ιαιμία TD/96 από 31–35 DPE. Τα φορτία CSFV κυμαίνονταν μεταξύ 105,1 και 106,7 TCID50/mL σε 35 DPE (Εικόνα 3Α). Στις Ομάδες 2 και 3, η παρουσία MDA καθυστέρησε την πρώτη ανίχνευση ιαιμίας έως τους 10 DP1C (δηλαδή, τα χοιρίδια παρέμειναν ασυμπτωματικά έως την 17 DPE· Πίνακας 1) με τον κύριο εισβολέα, σε σύγκριση με την ημέρα 3 POI στην Ομάδα 1 στην οξεία φάση. Η πρόσθετη εφάπαξ δόση του εμβολίου LPC (Ομάδα 2) μείωσε το ποσοστό των ιαιμικών χοίρων κατά 83% (Εικόνα 2Α). Ομοίως, η πρόσθετη εφάπαξ δόση του εμβολίου LPC μείωσε τα ιικά φορτία στο αίμα από 28–35 DPE (Εικόνα 3Α). Ο εμβολιασμός LPC της Ομάδας 2 ωφέλησε επίσης τα χοιρίδια της Ομάδας 4 με τα οποία στη συνέχεια συγκατοικούσαν (δευτερογενώς εισέβαλαν), παρά το γεγονός ότι ένα από τα χοιρίδια της Ομάδας 2 είχε παροδική ιαιμία (Εικόνα 2Α) και σάλιο (Εικόνα 2Β) και αποβολή κοπράνων (Εικόνα 2C) του TD /96. Αυτή η αλλαγή στη ιαιμική κατάσταση συσχετίστηκε με αυτή που προσδιορίστηκε με βάση τις κλινικές παραμέτρους (Ενότητα 3.2), αν και η εργαστηριακή ανίχνευση ήταν πιο ευαίσθητη.

Εικόνα 2. Αριθμός (ποσοστό) χοιριδίων θετικών για TD/96 όπως ανιχνεύθηκε μέσω QRTT-PCR [20] του (Α) αίματος, (Β) σάλιου και (C) περιττωμάτων των χοιριδίων σε κάθε ομάδα κατά την πειραματική περίοδο. Το χοιρίδιο της Ομάδας 1 εμβολιάστηκε ειρωνικά με TD/96 σε 7 DPE και χρησίμευσε ως δότης CSFV (δηλαδή, κύριος εισβολέας) για τις Ομάδες 2 και 3. Τα χοιρίδια της Ομάδας 2 που υποβλήθηκαν σε εμβολιασμό LPC σε 0 DPE και εκείνα της Ομάδας 3 που δεν υποβλήθηκε σε εμβολιασμό LPC και συγκατοικούσε με το χοιρίδιο της Ομάδας 1 από 7–17 DPE. Τα χοιρίδια στις Ομάδες 4 και 5 συγκατοικούσαν με εκείνα των Ομάδων 2 και 3 (δηλαδή, δευτερογενείς εισβολείς), αντίστοιχα, από 17–36 DPE.

Σχήμα 3. Φορτία CSFV υπάρχουν στο (Α) αίμα, (Β) στο σάλιο και (C) στα κόπρανα των χοιριδίων σε κάθε ομάδα.

3.3. Έκπτωση CSFV στο σάλιο

Το στέλεχος CSFV TD/96 δεν ανιχνεύθηκε στο σάλιο κανενός από τα χοιρίδια πριν από το πείραμα (Εικόνες 2Β και 3Β). Το σάλιο του χοιριδίου της Ομάδας 1 ήταν αρχικά θετικό για TD/96 σε 14 DPE (7 DP1C), το οποίο συνεχίστηκε μέχρι τις 17 DPE. Τα φορτία CSFV αυξήθηκαν από 105,8 TCID50/mL σε 14 DPE σε 107,6 TCID50/mL σε 17 DPE. Συγκεκριμένα, στα χοιρίδια της Ομάδας 2 που είχαν εμβολιαστεί με LPC και είχαν συγκατοικήσει με τον δότη CSFV, το TD/96 εντοπίστηκε για πρώτη φορά στο 66,7% (4/6) των δειγμάτων σάλιου σε 14 DPE (7 DP1C), το οποίο έγινε αρνητικό έπειτα. Αργότερα, ένα άλλο χοιρίδιο (1/6, Piglet 8134 με ιαιμία TD/96· Εικόνα 2Α), απέκρουσε TD/96 στο σάλιο του από 21–24 DPE στα 101,2 και 102,7 TCID50/mL, χαμηλότερο επίπεδο από αυτά των προαναφερθέντων χοιριδίων . Στην ομάδα 3 με τα χοιρίδια μόνο με MDA και χωρίς εμβολιασμό LPC που είχαν συγκατοικήσει με τον δότη CSFV, το TD/96 ανιχνεύθηκε αρχικά στο 66,7% (2/3) των δειγμάτων σάλιου σε 21 DPE και όλα τα δείγματα σάλιου ήταν θετικά με 24 DPE. Στην ομάδα 4 που περιλαμβάνει τα χοιρίδια που συγκατοικούσαν με αυτά της Ομάδας 2, το TD/96 δεν ανιχνεύθηκε στα δείγματα σάλιου κατά τη διάρκεια του πειράματος, ενώ στην ομάδα 5, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια που συγκατοικούσαν με αυτά της Ομάδας 3, όλα τα δείγματα σάλιου ήταν θετικά για TD/96 από 24–35 DPE. Τα φορτία CSFV αυξήθηκαν με την πάροδο του χρόνου και κυμαίνονταν από 105,9 έως 107,3 ​​TCID50/mL κατά 35 DPE. Συνολικά τα τέσσερα έκτα των χοιριδίων της Ομάδας 2 (με εμβολιασμό LPC μίας δόσης) είχαν θετικό σάλιο TD/96- σε 14 DPE πριν από τη ιαιμία. Ο CSFV εντοπίστηκε νωρίτερα στα χοιρίδια της Ομάδας 2 που είχαν έρθει σε επαφή με το χοιρίδιο της Ομάδας 1 κατά τη διάρκεια της αποβολής του TD/96. Ένα χοιρίδιο (Piglet 8134) στην Ομάδα 2 αργότερα εμφάνισε παροδική αποβολή από 21-24 DPE, η οποία είναι πιο πιθανό αντιπροσωπευτική της αντιγραφής του CSFV στους σιελογόνους αδένες μετά από ιαιμία. Σύμφωνα με τη σύγκριση μεταξύ των Ομάδων 2 και 3, ο εμβολιασμός LPC μείωσε την αποβολή του CSFV.

3.4. Έκπτωση CSFV στα κόπρανα

Το στέλεχος CSFV TD/96 δεν ανιχνεύθηκε στα κόπρανα κανενός από τα χοιρίδια πριν από το πείραμα (Εικόνες 2C και 3C). Τα κόπρανα του χοιριδίου της Ομάδας 1 ήταν θετικά TD/96 πρώτα σε 14 DPE (7 DPIC), τα οποία συνεχίστηκαν μέχρι την 17 DPE. Τα φορτία CSFV αυξήθηκαν από 105,1 TCID50/g σε 14 DPE σε 108,8 TCID50/mL σε 17 DPE. Στην Ομάδα 2, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια με εμβολιασμό LPC που συγκατοικούσαν με τον δότη CSFV της Ομάδας 1, μόνο το Piglet 8134 αποβλήθηκε παροδικά σε 24 DPE (17 DPIC), ενώ όλα τα άλλα χοιρίδια στην Ομάδα 2 ήταν αρνητικά. Στην Ομάδα 3, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια χωρίς εμβολιασμό LPC που συγκατοικούσαν με τον δότη CSFV, τα δύο τρίτα των χοιριδίων (όλα εκτός από το Piglet 8138) ήταν θετικά μεταξύ 21 (14 DP1C) και 35 DPE, κατά τη διάρκεια του οποίου τα φορτία CSFV αυξήθηκαν από 105. TCID50/g σε 21 DPE έως 107,5 TCID50/mL σε 31 DPE. Ωστόσο, τα δείγματα κοπράνων του Piglet 8138 με παροδική ιαιμία TD/96 δεν ήταν θετικά για TD/96. Στην Ομάδα 4, που αποτελείται από τα χοιρίδια που συγκατοικούσαν με αυτά της Ομάδας 2, όλα τα δείγματα κοπράνων ήταν αρνητικά για TD/96 κατά την πειραματική περίοδο. Στην ομάδα 5, η οποία περιελάμβανε τα χοιρίδια που συγκατοικούσαν με την ομάδα 3, ο αριθμός των θετικών δειγμάτων TD/96-θετικών κοπράνων αυξήθηκε με την πάροδο του χρόνου από 24–35 DPE και τα φορτία κυμαίνονταν από 105,7 έως 107,2 TCID50/g σε 35 DPE . Στην ομάδα 5, η πρώτη ανίχνευση εμφανίστηκε σε 24 DPE (7 DP2C), η οποία ήταν παρόμοια με εκείνη στην Ομάδα 1 (14 DPE) και το συνολικό προφίλ ήταν παράλληλο με αυτό της ιαιμίας (Εικόνα 2Α), υποδηλώνοντας ότι το CSFV αναδιπλασιάστηκε τοπικά μετά από ιαιμία . Όπως περιγράφεται λεπτομερώς στις Ενότητες 3.3 και 3.4, τα κόπρανα και το σάλιο ήταν τα κύρια οχήματα μετάδοσης επαφής CSFV.

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

3.5. Φορτία CSFV σε ιστούς που λαμβάνονται μέσω νεκροψίας

Οι ιστοί του χοιριδίου δότη CSFV της Ομάδας 1 και των χοιριδίων των Ομάδων 3 και 5 με τα οποία συγκατοικούσε ήταν θετικοί σε TD/96 (Πίνακας 2). Τα φορτία TD/96 στους ιστούς του χοιριδίου της Ομάδας 1 κυμαίνονταν μεταξύ 103,76 και 109,37 TCID50/g. Στην ομάδα 5, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια που ήταν σε επαφή με εκείνα της Ομάδας 3, το TD/96 ανιχνεύθηκε σε όλα τα χοιρίδια και κατανεμήθηκε σε όλους τους ιστούς, με υψηλότερα φορτία στα αιματολεμφοειδή όργανα (αμυγδαλές, λεμφαδένες και σπλήνα) και σε αυτά τα όργανα με πιο άφθονη παροχή αίματος (ήπαρ, πνεύμονες, καρδιά και νεφρά), όπως παρουσιάζεται στο Σχήμα 2Α, Γ. Τα υψηλότερα φορτία TD/96 ήταν στους λεμφικούς ιστούς (πάνω από 109,0 TCID50/g). Αντίθετα, οι μη αιματολεμφικοί ιστοί από τα συγκατοικούντα χοιρίδια των ομάδων 2 και 4, εκτός από το χοιρίδιο 8134 της ομάδας 2, το οποίο είχε παροδική ιαιμία TD/96, ήταν θετικοί χαμηλού επιπέδου TD/96 μόνο στο αίμα, τις αμυγδαλές, τους βουβωνικούς λεμφαδένες. και στους υπογνάθιους λεμφαδένες, με αυτά τα επίπεδα να κυμαίνονται μεταξύ 101,65 και 103,78 TCID50/g. Στην Ομάδα 3, που περιλαμβάνει τα χοιρίδια χωρίς εμβολιασμό LPC που είχαν έρθει σε επαφή με τον δότη CSFV της Ομάδας 1, το TD/96 ανιχνεύθηκε σε όλους τους ιστούς δύο από τα τρία χοιρίδια (εκτός από το Piglet 8138). Το χοιρίδιο 8138 της Ομάδας 3, το οποίο είχε παροδική ιαιμία TD/96, είχε TD/96 στις αμυγδαλές, στους υπογνάθιους λεμφαδένες και στους βρογχικούς λεμφαδένες, αν και τα ιικά φορτία ήταν χαμηλότερα από το μέσο όρο, κυμαινόμενα μεταξύ 103,08 και 104,69/mLID5.

Πίνακας 2. Φορτία CSFV που ανιχνεύθηκαν σε διάφορους ιστούς των χοιριδίων μέσω CSFV QRTT-PCR

3.6. CSFV στο Πειραματικό Περιβάλλον

Ο φράκτης, τα περιττώματα στο πάτωμα, η γούρνα τροφοδοσίας και το σιντριβάνι κάθε πειραματικού δωματίου δοκιμάστηκαν για TD/96 μέσω QRRT-PCR (Πίνακας 3). Το TD/96 ανιχνεύθηκε στα 14 και 17 DPE στα κόπρανα στο δάπεδο του δωματίου 12, όπου ο δότης CSFV της Ομάδας 1 συγκατοικούσε με τα χοιρίδια στις Ομάδες 2 και 3. Ο φράχτης, η γούρνα τροφοδοσίας και το συντριβάνι ήταν αρνητικά. Τα δείγματα από το δωμάτιο 2 στο οποίο συγκατοικούσαν οι ομάδες 2 και 4 ήταν όλα αρνητικά από 21–35 DPE. Το TD/96 ανιχνεύθηκε για πρώτη φορά στα κόπρανα στο πάτωμα του δωματίου 4 (Ομάδες 3 και 5) στο 24 DPE. Στη συνέχεια, το TD/96 εντοπίστηκε στον φράχτη, στη γούρνα και στο σιντριβάνι του δωματίου 4 από 28–35 DPE. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι τα περιττώματα (τα οποία θα μπορούσαν να υπάρχουν σε όλους τους τύπους περιβαλλοντικών δειγμάτων) και το σάλιο (το οποίο πιθανότατα θα υπήρχε στα δείγματα της γούρνας και της βρύσης πόσιμου νερού) ήταν τα κύρια οχήματα για μετάδοση με επαφή. Η παροδική ιική αποβολή των χοιριδίων της Ομάδας 2 (Εικόνες 2 και 3) δεν εισήχθη στο δωμάτιο 2, όπου συγκατοικούσαν με τα χοιρίδια της Ομάδας 4.

Πίνακας 3. Φορτία CSFV περιβαλλοντικών δειγμάτων από τα πειραματικά δωμάτια.

3.7. CSFV-Specific IFN- -Έκκριση PBMC

Τα ειδικά για το CSFV κύτταρα που εκκρίνουν IFN- -εξετάστηκαν στα PBMC των χοιριδίων στις Ομάδες 2 έως 5 μεταξύ 7 και 35 DPE (Εικόνα 4). Στα χοιρίδια της Ομάδας 2, ο αριθμός των κυττάρων που εκκρίνουν IFN, αν και σε συχνότητα μικρότερη από 0.1% των PBMC, ήταν σημαντικά υψηλότεροι από εκείνους των Ομάδων 3, 4 και 5 μεταξύ 7 και 35 DPE. Ο αριθμός των κυττάρων που εκκρίνουν IFN στο Piglet 8134 της Ομάδας 2, το οποίο είχε παροδική ιαιμία TD/96 εντός παρόμοιου χρονικού πλαισίου (Εικόνα 2Α), συσχετίστηκε με τους σημαντικά χαμηλότερους αριθμούς των 56 (21 DPE) και 62 (28 DPE· μέσος όρος ομάδας Μεγαλύτερο ή ίσο με 116). Ωστόσο, αυτοί οι αριθμοί έφτασαν τον μέσο όρο του ομίλου κατά 35 DPE. Ο αριθμός των ειδικών για το CSFV κυττάρων που εκκρίνουν IFN- - στις Ομάδες 3, 4 και 5 δεν ήταν σημαντικά διαφορετικός.

Σχήμα 4. Τα ειδικά για το CSFV κύτταρα που εκκρίνουν IFN- -εξετάστηκαν στα PBMC χοιριδίων στις Ομάδες 2 έως 5 μεταξύ 7 και 35 DPE. Τα χοιρίδια της Ομάδας 2 με εμβολιασμό LPC σε 0 DPE και αυτά της Ομάδας 3 χωρίς εμβολιασμό LPC συγκατοικούσαν με το χοιρίδιο δότη CSFV της Ομάδας 1 από 7 έως 17 DPE. Τα χοιρίδια στις Ομάδες 4 και 5 συζούσαν με εκείνα των Ομάδων 2 και 3, αντίστοιχα, από 17 έως 35 DPE. Οι τιμές με διαφορετικά εκθέτα γράμματα, a και b, υποδεικνύουν μια στατιστικά σημαντική διαφορά (p < 0.05) μεταξύ τους. Δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές μεταξύ τιμών που περιέχουν το ίδιο γράμμα

3.8. Αντι-CSFV NA

Τα αντι-CSFV NA στους ορούς των χοιριδίων δημιουργήθηκαν σε απόκριση είτε στο στέλεχος LPC (Εικόνα 5Α) είτε στο στέλεχος TD/96 (Σχήμα 5Β). Τα αντι-CSFV NA δεν ανιχνεύθηκαν στον δότη CSFV της Ομάδας 1 μεταξύ 7 και 17 DPE. Οι οροί των χοιριδίων στις Ομάδες 2 έως 5 στο {{10}} DPE εμφάνισαν τίτλους που κυμαίνονταν μεταξύ 5 και 7 log2 (μεταξύ 32- και 128-πτυχών). Αφού τα χοιρίδια της Ομάδας 2 εμβολιάστηκαν με το εμβόλιο LPC και συγκατοικούσαν με τον δότη CSFV, ο μέσος τίτλος δεν μειώθηκε μεταξύ 0 και 28 DPE. Λόγω της αύξησης των αντι-LPC NA στο Piglet 8134 από 31–35 DPE, ο μέσος τίτλος της Ομάδας 2 αυξήθηκε σημαντικά. Στα χοιρίδια της Ομάδας 3 χωρίς εμβολιασμό LPC που συγκατοικούσαν με τον δότη CSFV, ο μέσος τίτλος μειώθηκε σταδιακά μεταξύ 0 και 28 DPE. Καθώς ο τίτλος του Piglet 8138 αυξήθηκε σταδιακά μεταξύ 21 και 35 DPE, ο μέσος τίτλος της Ομάδας 3 αυξήθηκε αντίστροφα μεταξύ 31 και 35 DPE. Οι μέσοι τίτλοι των Ομάδων 4 και 5 μειώθηκαν με την πάροδο του χρόνου. Σε γενικές γραμμές, το προφίλ αντι-TD/96 NA κάθε ομάδας ήταν παράλληλο με αυτό των προφίλ NA anti-LPC, αν και ο μέσος όρος NA αντι-TD/96 ήταν μεταξύ 1,3 και 3,7 log2 (περίπου 2–12- φορές. Σχήμα 5Β), το οποίο ήταν χαμηλότερο από τον μέσο όρο NA anti-LPC.

Εικόνα 5. Τα αντι-LPC (A) ή TD/96 (B) NA στους ορούς των χοιριδίων σε κάθε ομάδα κατά τη διάρκεια της πειραματικής περιόδου. Το χοιρίδιο της Ομάδας 1 εμβολιάστηκε ειρωνικά με TD/96 σε 7 DPE και χρησίμευσε ως δότης CSFV (δηλαδή, πρωτεύων εισβολέας), που στη συνέχεια συγκατοικούσε με τα χοιρίδια των Ομάδων 2 και 3 από 7 έως 17 DPE. Τα χοιρίδια της Ομάδας 2 εμβολιάστηκαν με LPC σε 0 DPE και τα χοιρίδια της Ομάδας 3 δεν εμβολιάστηκαν με LPC. Τα χοιρίδια στις Ομάδες 4 και 5 συζούσαν με εκείνα των Ομάδων 2 και 3, αντίστοιχα, από 17 έως 35 DPE.

Ο εκτιμώμενος χρόνος ημιζωής των MDA που προέρχονται από τους τίτλους αντισωμάτων των χοιριδίων της Ομάδας 4 που μεταφέρθηκαν μέσω του πρωτογάλακτος των εμβολιασμένων με LPC χοιρομητέρων ήταν 10,7 ημέρες (Εικόνα 5Α). Αυτή η εκτίμηση υποστηρίζεται από τον αρνητικό πυρετό και τα κλινικά σημεία (Πίνακας 1), την αρνητική ιαιμία, το σάλιο και τα ιικά φορτία των κοπράνων (Εικόνες 2 και 3) και τους ιστούς (Πίνακας 2, βλ. Ενότητα 3.9) και περιβαλλοντικά δείγματα (Πίνακας 3 ) των χοιριδίων της Ομάδας 4, τα οποία έδειξαν ότι δεν είχαν μολυνθεί με τον ιό TD/96 κατά την πειραματική περίοδο.

3.9. Ανοσοϊστοχημεία που ανιχνεύει σήματα αντιγόνου CSFV σε δείγματα ιστών νεκροψίας

Τα σήματα του CSFV TD/96 ανιχνεύθηκαν στους λεμφικούς ιστούς του δότη CSFV της Ομάδας 1 (Εικόνα 6I), ενός χοιριδίου στην Ομάδα 2 (Γουρουνάκι 8134, το οποίο είχε φορτία CSFV στο αίμα που ήταν στο υψηλότερο επίπεδο 104,9 TCID50 /mL σε 24 DPE και αυτό στη συνέχεια μειώθηκε σε 101,7 TCID50/mL σε 35 DPE), σε τρία χοιρίδια στην Ομάδα 3 και σε τρία χοιρίδια στην Ομάδα 5. Τα χοιρίδια της Ομάδας 4 δεν ήταν θετικά για TD/96 (Εικόνα 6J). Τα ισχυρά σήματα CSFV TD/96 κατανεμήθηκαν ευρέως στις αμυγδαλές, τους σπλήνες και τους λεμφαδένες των χοιριδίων στις Ομάδες 1, 3 (εκτός από το Piglet 8138) και 5. Για το Piglet 8134 (Ομάδα 2) με παροδική ιαιμία TD/96 , διάσπαρτα θετικά σήματα TD/96-εντοπίστηκαν ως επί το πλείστον στις παρεγχυματικές περιοχές των αμυγδαλών, στο μυελό των βουβωνικών λεμφαδένων και στους υπογνάθιους λεμφαδένες (Εικόνα 6A–D), κάτι που είναι σύμφωνο με τα αποτελέσματα του ιικού φορτίου ποσοτικοποίηση αυτών των ιστών (Πίνακας 2). Η μορφολογία και η κατανομή των TD/96-θετικών κυττάρων ήταν έντονα μακροφαγικά. Στο Piglet 8138 (Ομάδα 3) με παροδική ιαιμία TD/96, ο αριθμός και η κατανομή των θετικών σημάτων TD/96- (Εικόνα 6E–H) ήταν παρόμοια με εκείνα στο Piglet 8134.

Σχήμα 6. Τα αντιγόνα CSFV στους λεμφικούς ιστούς σημειώθηκαν από το μονοκλωνικό αντίσωμα 1C7A1. Ένας λεμφαδένας (Α, Β) και η αμυγδαλή (C, D) του Piglet 8134 (Ομάδα 2), που είχαν παροδική ιαιμία TD/96, παρουσιάζουν το καφέ TD/96-θετικό σήμα. Ένας λεμφαδένας (E, F) και μια αμυγδαλή (G, H) του Piglet 8138 (Ομάδα 3), που είχαν παροδική ιαιμία TD/96, παρουσιάζουν το καφέ TD/96-θετικό σήμα. Ένας λεμφαδένας (Ι) του Piglet 8150 (Ομάδα 1) παρουσιάζει ένα διάχυτο καφέ TD/{14}}θετικό σήμα στον παραφλοιό. Ένας λεμφαδένας (J) του Piglet 8146 (Ομάδα 4) ήταν αρνητικός για TD/96

Στο Piglet 8134 (Ομάδα 2) και στο Piglet 8138 (Ομάδα 3), και τα δύο με παροδική ιαιμία χαμηλού επιπέδου (Εικόνες 2Α και 3Α, Πίνακας 2), τα αντιγόνα CSFV εξακολουθούσαν να ανιχνεύονται στους ιστούς μακροφάγους των αμυγδαλών (Εικόνα 6A–H) , το οποίο και πάλι απέδειξε ότι οι αμυγδαλές είναι ένας ιδανικός ιστός για τη διάγνωση του CSFV.

4. Συζήτηση

Ο εμβολιασμός είναι ζωτικής σημασίας για την πρόληψη και τον έλεγχο του ΕΝΥ σε ενδημικές περιοχές του ΕΝΥ. Μια ευρέως εφαρμοσμένη πρακτική είναι η παροχή MDA στα νεογνά μέσω του πρωτογάλακτος των εμβολιασμένων χοιρομητέρων και στη συνέχεια η χορήγηση μίας δόσης MLV (όπως LPC) όταν τα χοιρίδια είναι ηλικίας 3 έως 6 εβδομάδων. αυτή η διαδικασία χρησιμοποιήθηκε για την Ομάδα 2 στην παρούσα μελέτη (Εικόνα 1). Πολλοί παράγοντες, συμπεριλαμβανομένης της ποιότητας του εμβολίου, των διαδικασιών του προγράμματος εμβολιασμού (π.χ. χρονοδιαγράμματα, τύποι και διαδρομές) και τα επίπεδα MDA και η κατάσταση υγείας των χοίρων (συμπεριλαμβανομένης της ατομικής διαφοροποίησης), μπορούν να επηρεάσουν την αποτελεσματικότητα του εμβολιασμού του CSFV, μειώνοντας την προστασία από τη μόλυνση [14- 16]. Στην παρούσα μελέτη, παρόλο που τα χοιρίδια στις Ομάδες 2 και 3 είχαν υψηλά επίπεδα MDA στο 1:32–128- φορές στο 7 DPE (Εικόνα 5Α, δηλαδή, 0 DP1C με τον δότη CSFV της Ομάδας 1. Σχήμα 1), τα MDA καθυστέρησαν την πρόοδο της λοίμωξης, όπως υποδεικνύεται από την καθυστερημένη εμφάνιση της ιαιμίας στους 10 DP1C (Ομάδες 2 και 3, Εικόνα 2Α). Αυτό έκανε τα χοιρίδια να είναι ασυμπτωματικά (Πίνακας 1), αν και μερικά από τα χοιρίδια εξακολουθούν να αποβάλλουν τον ιό στο σάλιο και τα κόπρανα τους (Εικόνα 2Β, Γ). Αυτές οι περιστασιακές αποβολές ιών στην Ομάδα 2 αντιπροσώπευαν μεμονωμένες παραλλαγές στην κατάσταση της υγείας της ομάδας ή στις ανοσολογικές αποκρίσεις που αναλύθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Τα MDA από μόνα τους μπορούν να προσφέρουν μόνο μερική προστασία προτού εμφανιστεί η αντιγραφή του ιού στο αίμα και τους ιστούς. Το επίπεδο αντι-CSFV TD/96 NA δεν μετατράπηκε θετικά μετά τον εμβολιασμό LPC (Εικόνα 5Β), ακόμη και αφού τα χοιρίδια συγκατοικούσαν με τον κύριο εισβολέα της Ομάδας 1. Αυτό πιθανότατα συνέβη επειδή το επίπεδο MDA πράγματι παρενέβη στην αποτελεσματικότητα του MLV και λόγω της ανοσοκατασταλτικής φύσης του εισβάλλοντος CSFV TD/96.

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Οι τίτλοι των αντι-CSFV NAs και CMI που αντιπροσωπεύονται από τον αριθμό των CSFV-ειδικών κυττάρων που εκκρίνουν IFN- -συσχετίζονται στενά με την προστασία των χοίρων έναντι της μόλυνσης από CSFV [17,22-24]. Το χοιρίδιο 8134 (Ομάδα 2), με χαμηλά επίπεδα αντι-CSFV NA και χαμηλό αριθμό κυττάρων IFN{10}}που εκκρίνουν ειδικά για το CSFV μετά τον εμβολιασμό MLV (Εικόνες 4 και 5), εμφάνισε παροδική ιαιμία του CSFV και αποβολή μετά από επαφή με το CSFV δότη (Εικόνες 2 και 3). Αντίθετα, τα άλλα χοιρίδια στην Ομάδα 2, με χαμηλά αντι-CSFV NAs αλλά σχετικά υψηλά κύτταρα που εκκρίνουν IFN- -ειδικά για το CSFV μετά τον εμβολιασμό MLV, δεν μολύνθηκαν με CSFV, ακόμη και μετά από συγκατοίκηση με τον δότη CSFV για 10 ημέρες . Επιπλέον, αν και το Piglet 8138 (Ομάδα 3) είχε υψηλό τίτλο αντι-LPC NA (πάνω από 128-πλάσιο) χωρίς εμβολιασμό κατά MLV και με ελάχιστα κύτταρα που εκκρίνουν ειδικά για το CSFV IFN- -, εμφάνισε επίσης παροδικό CSFV ιαιμία μετά από συγκατοίκηση με τον δότη TD/96 αλλά ήταν απαλλαγμένο από CSFV μέχρι το τέλος της πειραματικής περιόδου. Τα άλλα χοιρίδια της Ομάδας 3, με χαμηλά επίπεδα αντι-LPC NA (χαμηλότερα από 64-πλάσια) και χωρίς εμβολιασμό κατά του MLV, παρουσίασαν σοβαρά κλινικά σημεία, βλάβες και υψηλά φορτία ιστού CSFV, που οδήγησαν σε θάνατο. Μια σύγκριση των αποτελεσμάτων των Ομάδων 2 και 3, που είχαν παρόμοιους τίτλους και προφίλ anti-CSFV (Εικόνα 5), δείχνει ότι το CMI είναι ο βασικός παράγοντας για την κάθαρση και την ανάκτηση του ιού. Τα χοιρίδια της Ομάδας 2 είχαν περισσότερο CMI (Εικόνα 4), κάτι που είναι σύμφωνο με τις δωρεάν κλινικές βαθμολογίες (Πίνακας 1) και όλες τις δοκιμασμένες παραμέτρους (Εικόνα 2, Εικόνα 3 και Εικόνα 6).

Συγκεκριμένα, στην Ομάδα 2 και στις άλλες ομάδες, τα επίπεδα CMI δεν αυξήθηκαν σημαντικά (και μόνο σε συχνότητα χαμηλότερη από το 0.1% των PBMC) καθ' όλη την πειραματική περίοδο (Εικόνα 4), παρά τα χοιρίδια συνεχής έκθεση στην αποβολή του ιού του δότη CSFV της Ομάδας 1 και των χοιριδίων της Ομάδας 3 από 7–17 DPE (Εικόνες 2 και 3). Οι χαμηλές συχνότητες των κυττάρων που εκκρίνουν IFN{10}}πιθανότατα αντικατοπτρίζουν τα εξής: (1) την ανοσοκατασταλτική φύση του CSFV, (2) την παρεμβολή MDA και (3) τον τεχνικό περιορισμό της ανάλυσης που πραγματοποιήσαμε. Επομένως, ο καθορισμός ενός κατάλληλου παραθύρου στο οποίο το επίπεδο MDA είναι αρκετά χαμηλό για την αποφυγή παρεμβολών και ωστόσο αρκετά υψηλό για την παροχή αρχικής προστασίας και την ενίσχυση του αντι-CSFV CMI είναι απαραίτητο για τη βελτίωση της ανοσίας των κοπαδιών.

Για τα χοιρίδια της Ομάδας 2 που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με την ευρέως εφαρμοσμένη διαδικασία εμβολιασμού, η περιστασιακή αποβολή του CSFV στο σάλιο και τα κόπρανα συνέβη για σύντομο χρονικό διάστημα (Εικόνα 2) σε χαμηλά φορτία CSFV (Εικόνα 3). Έτσι, τα χοιρίδια της Ομάδας 4 (μόνο με MDA) εμπόδισαν τη μετάδοση του CSFV στην Ομάδα 4, όπως υποδεικνύεται από τα αρνητικά αποτελέσματα του CSFV των περιβαλλοντικών δειγμάτων που συλλέχθηκαν από το δωμάτιο 2 (Πίνακας 3), την έλλειψη πυρετού και κλινικά σημεία (Πίνακας 1 ), και την απουσία αποβολής σάλιου και κοπράνων και ιαιμίας (Εικόνες 2 και 3) κατά τη διάρκεια της συμβίωσης. Ωστόσο, οι ασυμπτωματικοί φορείς CSFV στην Ομάδα 2 θα μπορούσαν να ήταν μια μη ανιχνεύσιμη ευθύνη στο πεδίο.

Η ανοσολογική απόκριση μπορεί να προκληθεί γρήγορα και σταθερά σε χοιρίδια με SPF που έχουν εμβολιαστεί με το MLV. Οι κυτταρικές και χυμικές ανοσοαποκρίσεις των εμβολιασμένων με MLV χοιριδίων αποκαλύπτονται στις 5 και 12 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, αντίστοιχα, το νωρίτερο [14-16,22]. Όταν το MLV χρησιμοποιείται σε εμπορικά κοπάδια, τα MDA μειώνουν την αποτελεσματικότητα του MLV. Στην παρούσα μελέτη, το CMI των χοιριδίων της Ομάδας 2 με σημαντικά επίπεδα MDA αυξήθηκε γρήγορα σε 0 DP1C (7 DPE· Εικόνα 4· δηλαδή, πολύ πιο γρήγορα από ό,τι σε χοίρους SPF χωρίς MDA), αν και ούτε το αντίσωμα ούτε το CMI τα προφίλ άλλαξαν δραματικά (Εικόνες 4 και 5). Μια τέτοια γρήγορη αύξηση σε 7 DPE (Εικόνα 4) μετά τον εμβολιασμό LPC υποδηλώνει ότι το πρωτόγαλα μπορεί να παρέχει άλλα ανοσολογικά συστατικά, εκτός από τα MDAs, που προκαλούν μια αναμνηστική απόκριση.

Τα αντι-CSFV NA χρησιμοποιούνται συνήθως για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του εμβολίου και για την έρευνα για μόλυνση από CSFV σε κοπάδια. Σύμφωνα με το στέλεχος CSFV, ο τίτλος των αντι-CSFV NAs έναντι ομόλογων στελεχών (π.χ. LPC του γονότυπου 1.1) είναι υψηλότερος από εκείνον έναντι ετερογενών στελεχών (π.χ. TD/96 του γονότυπου 2.1) και, σε αυτή τη μελέτη, ήταν log2 1.3 έως 3,7 (Εικόνα 5Α) υψηλότερο από αυτό έναντι του στελέχους TD/96 (Εικόνα 5Β) [14]. Παρόμοια διαφορά τίτλου NA παρατηρήθηκε επίσης σε διαφορετικά στελέχη του ιού του αναπαραγωγικού και αναπνευστικού συνδρόμου των χοίρων (PRRSV) και του SARS-CoV-2 [25,26]. Καθώς τα MDA είναι ζωτικής σημασίας παράγοντας παρεμβολής για την αποτελεσματικότητα του MLV, το βέλτιστο πρόγραμμα εμβολιασμού για τον εμβολιασμό με MLV σε χοιρίδια είναι όταν τα MDA των χοιριδίων είναι χαμηλότερα από 1:32-πλάσιο του τίτλου NA αντι-LPC. Ως εκ τούτου, ο βέλτιστος χρόνος εμβολιασμού κατά του MLV στην παρούσα μελέτη ήταν στις 28 DPE, κάτι που συνάδει με την εκτίμησή μας ότι ο χρόνος ημιζωής των MDA ήταν 10,7 ημέρες (Ομάδα 2, Εικόνα 5Α) και παρόμοιος με τα αποτελέσματα της ανάλυσης του αντι- Τίτλοι LPC NA των Ομάδων 4 και 5. Παραδόξως, το 32-πλάσιο επίπεδο του τίτλου αντι-CSFV NA (περίπου ισοδύναμο με 1:128-πλάσιο των αντι-LPC NA) θεωρείται ο προστατευτικός δείκτης για Λοίμωξη CSFV [17]. Τα περισσότερα από τα χοιρίδια στις Ομάδες 4 και 5 είχαν λιγότερους από 1:{40}}διπλάσιους τίτλους αντι-TD/96 NA από 7 DPE και μετά. Έτσι, η περίοδος παραθύρου όπου τα επίπεδα MDA είναι κατάλληλα χαμηλά για να μην παρεμβαίνουν στον εμβολιασμό κατά του MLV αλλά αρκετά υψηλή για να είναι προστατευτική είναι στενή, ενώ το παράθυρο για τον κίνδυνο μόλυνσης από CSFV είναι ευρύ. Η κατάλληλη περίοδος για τον εμβολιασμό κατά του MLV μπορεί να παραταθεί μόνο εάν ο MLV παράγεται από ομόλογα στελέχη, τα οποία συνήθως δεν είναι διαθέσιμα στις περισσότερες ενδημικές περιοχές του CSFV.

Η ανοσία της αγέλης συσχετίζεται αρνητικά με την εξάπλωση των παθογόνων για την πρόληψη και τον έλεγχο ασθενειών. Η αυξημένη ανοσία της αγέλης μπορεί να μειώσει τόσο την ευαισθησία στη μόλυνση όσο και το μέγεθος της αποβολής του παθογόνου στο κοπάδι [27,28]. Ο εμβολιασμός χρησιμοποιείται συνήθως ως άμεσο και γρήγορο εργαλείο για την αύξηση της ανοσίας της αγέλης. Η βελτίωση της κάλυψης της ανοσίας της αγέλης μέσω ανοσοποίησης εμβολίων για τη μείωση της εξάπλωσης παθογόνου έχει αποδειχθεί αποτελεσματική για τον έλεγχο του PRRSV, του κυκλοϊού των χοίρων τύπου 2, του CSFV, του ιού της ψευδολύσσας και του SARS-CoV-2 [29-36]. Σε μελέτες CSFV, η χορήγηση και των δύο εμβολίων υπομονάδας MLV και E2 μείωσε επίσης τη μετάδοση του CSFV στα κοπάδια [14-16,22,32]. Στην παρούσα μελέτη, παρόλο που μερικά εμβολιασμένα με MLV χοιρίδια εμφάνισαν παροδική ιαιμία και αποβολή του CSFV (Ομάδες 2 και 3, Σχήματα 2 και 3), ο εμβολιασμός με MLV όχι μόνο προσέφερε πλήρη προστασία στους εμβολιασμένους χοίρους αλλά επίσης εξασφάλισε ότι το στέλεχος TD/96 δεν μεταδόθηκε από τον πρωτεύοντα εισβολέα (Ομάδα 1) στην ομάδα δευτερογενώς εισβολέα (Ομάδα 4). Αντίθετα, το TD/96 εξαπλώθηκε από τον δότη CSFV της Ομάδας 1 στην Ομάδα 3 (χωρίς εμβολιασμό MLV) και στην ομάδα 5, αποδεικνύοντας ότι ο εμβολιασμός MLV κατά του CSFV μπορεί να εμποδίσει τη μετάδοση του CSFV, αυξάνοντας έτσι την πιθανότητα εκρίζωσης του CSFV μειώνοντας την τιμή του ο βασικός αριθμός αναπαραγωγής (R0) του παθογόνου [28]. Απαιτείται εκτενέστερη κάλυψη εμβολίων για την εξάλειψη ασθενειών με παθογόνα υψηλού R0. Το R0 του CSFV σχετίζεται με τη λοιμογόνο δύναμη του στελέχους και τη δόση εμβολιασμού του CSFV. Τα επίπεδα παθογόνου R0 των δόσεων μέτριου εμβολιασμού και υψηλού εμβολιασμού ενός μετρίως λοιμογόνου στελέχους και της χαμηλής δόσης εμβολιασμού ενός υψηλά λοιμογόνου στελέχους είναι σημαντικά υψηλότερα από αυτά μιας δόσης υψηλού εμβολιασμού ενός στελέχους χαμηλής μολυσματικότητας στέλεχος [13]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι απαιτείται περισσότερη κάλυψη της ανοσίας της αγέλης σε ενδημικές περιοχές του ΕΝΥ με μέτρια ή εξαιρετικά λοιμώδη στελέχη CSFV.

Τα κύτταρα της σειράς μονοκυττάρων-μακροφάγων είναι κύτταρα τροπισμού CSFV που παίζουν ρόλο στη μετάδοση του CSFV [37-39]. Στην παρούσα μελέτη, τα χοιρίδια που ανάρρωσαν ήταν υγιή και ασυμπτωματικά. Ωστόσο, το CSFV μπορεί επίμονα να μολύνει και να κρύβεται στους λεμφικούς ιστούς (Εικόνα 6), αποφεύγοντας έτσι την ανοσολογική κάθαρση. Αυτό υποστηρίζει επίσης τη χρήση λεμφοειδών ιστών ως ιδανικών δειγμάτων για διάγνωση. Επίμονη ιογενής λοίμωξη έχει επίσης παρατηρηθεί με το CSFV, τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας τύπου 1 και τον αναπνευστικό συγκυτιακό ιό [40-42]. Το CSFV έχει την ικανότητα να μεταβάλλει την έκφραση των κυτοκινών, των υποδοχέων κυτοκίνης, των χημειοκινών, των ιντερφερονών και των υποδοχέων που μοιάζουν με toll στα μακροφάγα, αντανακλώντας την ανοσοκατασταλτική φύση του και τη σχεδόν αδράνεια του αντισώματος (Εικόνα 5) και τα προφίλ CMI (Εικόνα 4). πειραματικοί χοίροι, παρά τη συνεχή έκθεσή τους στο CSFV που απορρίπτεται στο σάλιο και τα κόπρανα των πρωτογενών (Ομάδα 1) και δευτερογενούς (Ομάδα 3) εισβολέων. Η ανοσορύθμιση των χοίρων μετά τη μόλυνση από CSFV αυξάνει τους προφλεγμονώδεις (IL-1, IL-6, IL-8 και MCF) και τους αντιικούς παράγοντες (IFN- και ) [43]. Ωστόσο, οι εξελιγμένοι μηχανισμοί και η επίμονη μόλυνση του CSFV παραμένουν ασαφείς.

Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα

5. Συμπεράσματα

Τα MDA που ακολουθούνται από εμβολιασμό κατά του MLV μπορούν να προκαλέσουν επαρκή ανοσία, ιδιαίτερα CMI, επιτρέποντας την κάθαρση και την ανάκτηση του ιού. Αν και μερικά εμβολιασμένα με MLV χοιρίδια είχαν παροδική ιαιμία χαμηλού επιπέδου και αποβολή ιού στο σάλιο και τα κόπρανα τους, η μετάδοση του CSFV στο τρίτο μέρος (Ομάδα 4) θα μπορούσε να αποκλειστεί μέσω του εμβολιασμού κατά του MLV, μειώνοντας έτσι το R{3}} του CSFV και αύξηση της πιθανότητας εκρίζωσης του ΕΝΥ.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. ΟΥΑΧ. Κεφάλαιο 15.2: Λοίμωξη από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων. Στον Κώδικα Υγείας Χερσαίων Ζώων; WOAH: Παρίσι, Γαλλία, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, HR; Bohórquez, JA; Postel, Α.; Sakoda, Υ.; Becher, Ρ.; Ruggli, N. Ιός της κλασικής πανώλης των χοίρων: Το παρελθόν, το παρόν και το μέλλον. Virus Res. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Κλασική πανώλη των χοίρων: Επίσημη κατάσταση ασθένειας. Διαθέσιμο στο διαδίκτυο: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (πρόσβαση την 1η Σεπτεμβρίου 2022).

4. Sawai, Κ.; Nishi, Τ.; Fukai, Κ.; Κάτω, Τ.; Hayama, Υ.; Yamamoto, T. Φυλογενετική και φυλοδυναμική ανάλυση μιας εστίας του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων στην Ιαπωνία (2018–2020). Transbound. Emerg. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, Κ.; Storino, GY Επιτεύγματα και προκλήσεις της εξάλειψης της κλασικής πανώλης των χοίρων στη Βραζιλία. Viruses 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, Χ.; Liu, Μ.; Wu, Χ.; Ma, W.; Zhao, X. Φυλογενετική ανάλυση απομονώσεων του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων από την Κίνα. Αψίδα. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Ρύζι, CM Flaviviridae: Οι ιοί και η αναπαραγωγή τους. In Fields Virology, 5η έκδ.; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, Eds.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, ΗΠΑ, 2007; σελ. 1101–1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, Α.; Greiser-Wilke, Ι.; Parchariyanon, S.; Τραγούδι, JY; Liou, PP; Stadejek, Τ.; Lowings, JP; Bjorklund, Η.; Belak, S. Γενετική τυποποίηση του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων. Κτηνίατρος. Microbiol. 2000, 73, 137–157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, Κ.; Greiser-Wilke, Ι.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Επίδραση παραγόντων που σχετίζονται με τη φυλή στην πορεία της λοίμωξης από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων. Κτηνίατρος. Rec. 1997, 140, 506–507. [CrossRef]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Μολυσματικός ιός πρόσφατων και πρώην απομονώσεων του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων που αξιολογήθηκε από τα κλινικά και παθολογικά τους σημεία. J. Vet. Med. Ser. Β 2003, 50, 214–220. [CrossRef]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Κλινικά σημεία και επιδημιολογία της κλασικής πανώλης των χοίρων: Μια ανασκόπηση της νέας γνώσης. Κτηνίατρος. J. 2003, 165, 11–20. [CrossRef]

12. Durand, Β.; Davila, S.; Cariolet, R.; Mesplède, Α.; Le Potier, MF Σύγκριση εκτιμήσεων με βάση τη ιαιμία και την κλινική μετάδοση εντός και μεταξύ της συσκευής τύπου πένας του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων από τρία πειράματα μετάδοσης. Κτηνίατρος. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [CrossRef]

13. Weesendorp, Ε.; Backer, J.; Stegeman, Α.; Loeffen, W. Επίδραση του στελέχους και της δόσης εμβολιασμού του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων στη μετάδοση εντός της συσκευής τύπου πένας. Κτηνίατρος. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Οι προκλήσεις του ελέγχου της κλασικής πανώλης των χοίρων: Τροποποιημένη ζωή και εμβόλια υπομονάδας Ε2. Virus Res. 2014, 179, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Παράγοντες κρίσιμοι για τον επιτυχή εμβολιασμό κατά της κλασικής πανώλης των χοίρων σε ενδημικές περιοχές. Κτηνίατρος. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Εμβολιολογία της κλασικής πανώλης των χοίρων: Από εργαστήριο σε χωράφι. Κτηνίατρος. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [CrossRef]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. Η προστατευτική αξία των τίτλων εξουδετέρωσης αντισωμάτων που προκαλούνται από το εμβόλιο στην πανώλη των χοίρων. Κτηνίατρος. Microbiol. 1988, 16, 123-128. [CrossRef]

18. Vandeputte, J.; Επίσης, HL? Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA. Είμαι. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805–1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Διερεύνηση της απόδοσης αντισωμάτων και της παρουσίας ιικού RNA πριν και μετά τον εμβολιασμό του στελέχους εμβολίου για την κλασική πανώλη των χοίρων σε χοιροτροφικές μονάδες της Ταϊβάν. Ταϊβάν κτηνίατρος. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA Η ανάλυση της κινητικής αντιγραφής του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων επιτρέπει τη διαφοροποίηση στελεχών υψηλής λοιμογόνου δράσης από μη λοιμογόνους. Κτηνίατρος. Microbiol. 2000, 74, 293-308. [CrossRef]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Ανάπτυξη πολυπλεξίας αντίστροφης μεταγραφής σε πραγματικό χρόνο PCR για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό του γονότυπου του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων. J. Virol. Methods 2009, 160, 111–118. [CrossRef]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, Α.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, Ν.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Προσδιορισμός ενός κοινού διαμορφωτικού επιτόπου στη γλυκοπρωτεΐνη Ε2 του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων και του ιού της οριακής νόσου. Viruses 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, ΟΑ; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. Η πρόκληση των χοίρων με ιούς της κλασικής πανώλης των χοίρων μετά τον εμβολιασμό με στέλεχος C αποκαλύπτει αξιοσημείωτα γρήγορη προστασία και γνώσεις σχετικά με την πρώιμη ανοσία. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [CrossRef]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, Ο.; Rocca, SAL; Λάμπα, Β.; Rumenapf, Τ.; Everett, Η.; Crooke, H. Χαρακτηρισμός των επαγόμενων από το εμβόλιο, ευρέως διασταυρούμενης αντίδρασης των Τ-λεμφοκυττάρων που εκκρίνουν IFN που συσχετίζονται με την ταχεία προστασία έναντι του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων. Vaccine 2012, 30, 2742-2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, Μ.; Damrongwatanapokin, S. Η συσχέτιση της ειδικής για τον ιό παραγωγής ιντερφερόνης-γάμα και η προστασία έναντι της λοίμωξης από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων. Κτηνίατρος. Immunol. Ανοσοπαθόλη. 2001, 83, 177–189. [CrossRef] [PubMed]

26. Πλανάς, Δ.; Veyer, D.; Baidaliuk, Α.; Σταρόπολη, Ι.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, Ν.; Puech, J.; et al. Μειωμένη ευαισθησία της παραλλαγής δέλτα SARS-CoV-2 στην εξουδετέρωση αντισωμάτων. Nature 2021, 596, 276–280. [CrossRef]

27. Zhang, C.; Hu, J. Εμβόλια ιού αναπαραγωγικού και αναπνευστικού συνδρόμου χοίρου: Τρέχουσα κατάσταση και στρατηγικές για ένα καθολικό εμβόλιο. Transbound. Emerg. Dis. 2014, 61, 109–120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, Η.; Ruff, TA; et al. Ο εμβολιασμός μειώνει σημαντικά τις ασθένειες, την αναπηρία, τον θάνατο και την ανισότητα παγκοσμίως. Ταύρος. Παγκόσμιο όργανο υγείας. 2008, 86, 140–146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rose, Ν.; Andraud, M. Η χρήση εμβολίων για τον έλεγχο της εξάπλωσης παθογόνων σε πληθυσμούς χοίρων. Διαχείριση Υγείας Χοίρων. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, Μ.; Grasland, Β.; Durand, Β.; Cariolet, R.; Jestin, Α.; Madec, F.; Rose, N. Ποσοτικοποίηση της μετάδοσης κυκλοϊού χοίρου τύπου 2 (PCV-2) εντός και μεταξύ της μάντρας σε χοίρους. Κτηνίατρος. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, Ν.; Andraud, Μ.; Bigault, L.; Jestin, Α.; Grasland, B. Ένα εμπορικό εμβόλιο με βάση το PCV2 μειώνει σημαντικά τη μετάδοση του PCV2b σε πειραματικές συνθήκες. Vaccine 2016, 34, 3738–3745. [CrossRef]

32. Rose, Ν.; Renson, Ρ.; Andraud, Μ.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. Το εμβόλιο τροποποιημένου ζωντανού ιού του αναπαραγωγικού και αναπνευστικού συνδρόμου χοίρου (PRRSv) μειώνει τη μετάδοση του ιού σε πειραματικές συνθήκες. Vaccine 2015, 33, 2493-2499. [CrossRef]

33. Μπούμα, Α.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Προσδιορισμός της έναρξης της ανοσίας αγέλης που προκαλείται από το εμβόλιο υπομονάδας Ε2 κατά του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων. Vaccine 2000, 18, 1374-1381. [CrossRef]

34. De Smit, AJ; Μπούμα, Α.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Οι ιοί του στελέχους C Moormann, RJM Chimeric (δείκτης) επάγουν κλινική προστασία έναντι του λοιμογόνου ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων (CSFV) και μειώνουν τη μετάδοση του CSFV μεταξύ των εμβολιασμένων χοίρων. Vaccine 2001, 19, 1467-1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, Α.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM Δεν υπάρχουν σημαντικά κρούσματα ιού ψευδολύσσας σε καλά ανοσοποιημένα κοπάδια χοιρομητέρων. Vaccine 1996, 14, 1042-1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, PC; Nowacki, AS; Terpeluk, Ρ.; Gordon, SM Αναγκαιότητα της νόσου του κορωνοϊού 2019 (COVID-19) εμβολιασμός σε άτομα που έχουν ήδη περάσει από COVID-19. Clin. Μολύνω. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, Ε.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Morpho λογικές και ανοσοϊστοχημικές αλλαγές σε σπληνικούς μακροφάγους χοίρων μολυσμένων με κλασική πανώλη των χοίρων. J. Comp. Pathol. 2001, 125, 98–109. [CrossRef]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, Ε.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC Μια ιστοπαθολογική, ανοσοϊστοχημική και υπερδομική μελέτη του εντέρου σε χοίρους που εμβολιάστηκαν με τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων. Κτηνίατρος. Pathol. 2003, 40, 254–262. [CrossRef]

39. Sah, V.; Kumar, Α.; Dhar, Ρ.; Upmanyu, V.; Tiwari, AK; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, Α.; Badasara, SK; Pandey, Α.; et al. Υπογραφή της γονιδιακής έκφρασης σε όλο το γονιδίωμα σε μακροφάγα μολυσμένα από τον ιό της κλασικής πανώλης των χοίρων και PBMC των αυτόχθονων vis-a-vis διασταυρωμένων χοίρων. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Perez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, Ο.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Διερεύνηση χρόνιων και επίμονων λοιμώξεων από κλασική πανώλη των χοίρων υπό συνθήκες πεδίου και η επίδρασή τους στην αποτελεσματικότητα του εμβολίου. BMC Vet. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. Η επιμονή του αναπνευστικού συγκυτιακού ιού στα μακροφάγα αλλάζει το προφίλ της έκφρασης κυτταρικών γονιδίων. Viruses 2012, 4, 3270–3280. [CrossRef]

42. Kruize, Ζ.; Kootstra, NA Ο ρόλος των μακροφάγων στην εμμονή και την παθογένεια του HIV-1. Εμπρός. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, Ι.; Fernandez-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Μοτίβα έκφρασης κυτταρικού γονιδίου σε μακροφάγα χοίρων που έχουν μολυνθεί με εξαιρετικά λοιμογόνο στέλεχος του ιού της κλασικής πανώλης των χοίρων Brescia. Virus Res. 2008, 138, 89–96. [CrossRef]