Η κολοβωμένη γλυκοπρωτεΐνη Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα είναι ένα ιδανικό ανοσογόνο για σχεδιασμό εμβολίου με βάση το Escherichia Coli

Ο ιός της ανεμευλογιάς-ζωστήρα (VZV) είναι ένας εξαιρετικά μολυσματικός παράγοντας υπεύθυνος τόσο για την ανεμευλογιά όσο και για τη νόσο του έρπητα ζωστήρα. Παρά την υψηλή αποτελεσματικότητα, εξακολουθούν να υπάρχουν ανησυχίες για την ασφάλεια και την προσβασιμότητα με τα αδειοδοτημένα εμβόλια. Εδώ, επιδιώξαμε να παράγουμε ένα ανοσογόνο VZV gE χρησιμοποιώντας ένα σύστημα έκφρασης E. coli. Βρήκαμε ότι η διαλυτή έκφραση και η απόδοση της πρωτεΐνης gE θα μπορούσε να ενισχυθεί μέσω C-τερματικών περικοπών στην πρωτεΐνη, διευκολύνοντας έτσι μια ισχυρή και κλιμακούμενη διαδικασία καθαρισμού για την παρασκευή εμβολίου. Το κολοβωμένο gE μολύβδου (aa 31-358), στο εξής θα αναφέρεται ως tgE, ήταν ένα ομοιογενές μονομερές σε διάλυμα και έδειξε εξαιρετική αντιγονικότητα. Τέλος, αξιολογήσαμε και συγκρίναμε την ανοσογονικότητα του tgE με το εμβόλιο LAV της εμπορικής βότκας και Shingrix. Βρήκαμε ότι το ανοσοενισχυμένο με αλουμίνιο tgE ήταν ανοσογονικό σε σύγκριση με τη βότκα LAV. Όταν χορηγήθηκε ανοσοενισχυτικό με AS01B, μια ανοσοποίηση δύο δόσεων tgE έδειξε συγκρίσιμη ή καλύτερη ισχύ στις αποκρίσεις αντισωμάτων και στην κυτταρική ανοσία με εκείνες του εμβολίου Shingrix στην ίδια δόση, ειδικά όσον αφορά την αναλογία της IFN που εκφράζει- - CD4+ Τ κύτταρα. Συμπερασματικά, αυτή η μέθοδος έκφρασης tgE μεσολαβητής E. coli προσφέρει μια οικονομικά αποδοτική και επεκτάσιμη στρατηγική για τη δημιουργία ενός ιδανικού ανοσογόνου VZV gE για την ανάπτυξη εμβολίων ανεμευλογιάς και ζωστήρα.

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

ιός ανεμευλογιάς-ζωστήρα, γλυκοπρωτεΐνη Ε, Escherichia coli, εμβόλιο

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Ο ιός ανεμευλογιάς-ζωστήρα (VZV) είναι ένας παθογόνος, ανθρώπινος άλφα ερπητοϊός που προκαλεί δύο κύριες κατηγορίες ασθενειών: πρωτογενή μόλυνση με ανεμευλογιά, μια εξαιρετικά μεταδοτική ασθένεια που χαρακτηρίζεται από εξάνθημα που μοιάζει με φουσκάλες στο δέρμα και ήπια συστηματικά συμπτώματα όπως πυρετός και κακουχία. κυρίως σε παιδιά. και έρπη ζωστήρα (HZ), η λανθάνουσα επανενεργοποίηση του ιού ως απόκριση σε ένα εξασθενημένο κυτταρικό ανοσοποιητικό σύστημα που προκαλείται από τη γήρανση που προκαλεί ένα επώδυνο, εντοπισμένο φυσαλιδώδες εξάνθημα (HZ) με ή χωρίς πολλές άλλες επιπλοκές (Cohen, 2013; Heininger and Seward, 2006, Zerboni et al., 2014). Η ανεμευλογιά και η HZ μπορούν και οι δύο να προληφθούν με εμβόλια ζωντανού εξασθενημένου ιού (LAV). Το πρώτο LAV για την πρόληψη της ανεμευλογιάς αναπτύχθηκε από τους Takahashi et al. (1974) βασισμένο στο στέλεχος του ιού vOka και αργότερα έλαβε άδεια χρήσης ως Varivax για χρήση ρουτίνας στις Ηνωμένες Πολιτείες. Ακολούθησε η ανάπτυξη και η αδειοδότηση του Zostavax για την πρόληψη της HZ (Tseng et al., 2011). Δυστυχώς, στα 10 χρόνια από την έναρξη των εμβολιασμών με το Varivax, σχεδόν το 1/3 των περιπτώσεων HZ έχει επιβεβαιωθεί ότι σχετίζεται με το στέλεχος vOka (Galea et al., 2008), υποδηλώνοντας ότι το vOka μπορεί να μολύνει και να δημιουργήσει λανθάνουσα κατάσταση, όπως ένα άγριο -πληκτρολογήστε ιό και στη συνέχεια ενεργοποιήστε ξανά για να προκαλέσετε HZ. Επιπλέον, η αποτελεσματικότητα του Zostavax είναι αντιστρόφως ανάλογη με την ηλικία του ασθενούς τη στιγμή της χορήγησης, με αυξημένη ηλικία να σχετίζεται με χαμηλότερη αποτελεσματικότητα (Oxman et al., 2005). Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η VZV γλυκοπρωτεΐνη Ε (gE) είναι η πιο άφθονη ιική γλυκοπρωτεΐνη στο περίβλημα του ιού και στη μολυσμένη κυτταρική επιφάνεια. Το GE είναι επίσης ένα από τα πιο σημαντικά προστατευτικά αντιγόνα VZV ικανά να επάγουν κυτταρική και χυμική ανοσία κατά τη διάρκεια φυσικής λοίμωξης από ανεμευλογιά καθώς και μετά από εμβολιασμό με vOka (Arvin, 1992; Oliver et al., 2016). Πρόσφατα, εγκρίθηκε ένα ανασυνδυασμένο εμβόλιο υπομονάδας HZ, το Shingrix (HZ/su), για την πρόληψη της HZ και της σχετιζόμενης μεθερπητικής νευραλγίας (PHN) σε ενήλικες ηλικίας μεγαλύτερης ή ίσης των 50 ετών (Shah et al., 2019; Syed, 2018). Σε κλινικές δοκιμές, το Shingrix προκάλεσε μια αποτελεσματική, ειδική για τον VZV, κυτταρική ανοσία (CMI), με συνολική αποτελεσματικότητα εμβολίου 97,2% μεταξύ των συμμετεχόντων μεγαλύτερη από ή ίση με 50 έτη και ποσοστό προστασίας 91,3% στους συμμετέχοντες Μεγαλύτερο ή ίσο έως 70 ετών. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν συλλογικά έναν σημαντικά μειωμένο κίνδυνο HZ σε εμβολιασμένα άτομα ανεξάρτητα από την ηλικία, και επομένως μια πιο ισχυρή επιλογή εμβολίου σε σύγκριση με το ZOSTAVAX (Lal et al., 2015· Shah et al., 2019).

φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα

Το Shingrix έχει σχεδιαστεί από ένα ανασυνδυασμένο αντιγόνο gE που εκφράζεται σε κύτταρα ωοθηκών κινέζικου χάμστερ (CHO) και ένα ανοσοενισχυτικό σύστημα που βασίζεται σε λιπόσωμα (AS01B) που περιέχει 3-Οδεσακύλ-4'-μονοφωσφορυλικό λιπίδιο Α (MPL) και Quillaja saponaria Molina, κλάσμα 21 (QS21) (Dendouga et al., 2012). Ωστόσο, τα ανασυνδυασμένα κύτταρα CHO απαιτούν μακρύ κύκλο παραγωγής και συνδέονται με μια πολύπλοκη διαδικασία καθαρισμού που έχει ως αποτέλεσμα υψηλό κόστος κατασκευής και περιορισμένη προσφορά. Ως εκ τούτου, το Shingrix δεν είναι ιδανική λύση εμβολιασμού για ευρεία χρήση, ιδιαίτερα στις αναπτυσσόμενες χώρες (Kim et al., 2012). Τα μικροβιακά συστήματα έκφρασης προσφέρουν πολλά πλεονεκτήματα σε σχέση με τα συστήματα έκφρασης θηλαστικών, συμπεριλαμβανομένης της ταχείας ανάπτυξης, της ευκολίας καλλιέργειας και του χαμηλότερου κόστους παραγωγής (Overton, 2014), και επομένως χρησιμοποιούνται ευρέως στην έκφραση και παραγωγή πολυάριθμων βιοφαρμακευτικών προϊόντων (Adkins and Wagstaff, 1998· Monie et al., 2008· Wu et al., 2012). Ωστόσο, αρκετές δυσκολίες κατά την παραγωγή πρέπει να ξεπεραστούν για την επιτυχή έκφραση των ανασυνδυασμένων ευκαρυωτικών πρωτεϊνών σε προκαρυωτικά συστήματα, όπως η λανθασμένη αναδίπλωση και η έλλειψη μετα-μεταφραστικής τροποποίησης (Singh and Panda, 2005). Παρά αυτές τις δυσκολίες, τα συστήματα μικροβιακής έκφρασης θα μπορούσαν να προσφέρουν ένα ιδανικό σύστημα για ευρεία, οικονομικά αποδοτική παραγωγή εμβολίων και, ως εκ τούτου, δικαιολογεί τη διερεύνηση αντιγόνων από ένα σύστημα έκφρασης E. coli για το σχεδιασμό εμβολίου VZV. Σε προηγούμενη εργασία, δείξαμε την επιτυχή έκφραση μιας ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης gE (rgE) σε κύτταρα εντόμων και λάβαμε καθαρισμένες πρωτεΐνες για ανοσοποίηση ποντικού και παραγωγή mAb (Liu et al., 2015). Βασιζόμενοι σε αυτήν την εργασία, εδώ διερευνούμε εάν η πρωτεΐνη gE μπορεί να εκφραστεί σε E. coli. Εξερευνήσαμε τη μη συγχωνευμένη διαλυτή έκφραση υποψήφιων αντιγόνων gE με C-τερματική περικοπή (εφεξής θα αναφέρεται ως κολοβωμένη gE (tgE) ή tgE) σε E. coli και χαρακτηρίσαμε τις καθαρισμένες πρωτεΐνες tgE. Δείχνουμε ότι το καθαρισμένο tgE είναι αντιγονικό παρόμοιο με το φυσικό gE και ικανό να επάγει υψηλούς τίτλους αντισωμάτων με δράση εξουδετέρωσης vOka σε ποντίκια. Συγκρίνοντας την ανοσογονικότητα του αντιγόνου tgE που δημιουργήθηκε στη μελέτη μας με το LAV και το Shingrix, διαπιστώνουμε ότι το αντιγόνο μας όχι μόνο παρουσιάζει μια αποτελεσματική χυμική απόκριση αλλά επίσης επάγει ένα ειδικό για το αντιγόνο CMI. Συνολικά, η στρατηγική μας για το E. coli για την παραγωγή πρωτεΐνης tgE μπορεί να ανοίξει το δρόμο για ένα εναλλακτικό βιομηχανικά παραγόμενο ανοσογόνο τόσο για τον εμβολιασμό της ανεμευλογιάς όσο και για τον HZ.

Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Έκφραση και καθαρισμός ανασυνδυασμένης tgE σε Ε. coli

Αλληλουχίες DNA που κωδικοποιούν την εξωκυτταρική περιοχή VZV gE παρασκευάστηκαν ως κατασκευάσματα με διάφορες αμινοτελικές ή Ο-τελικές περικοπές και κλωνοποιήθηκαν στον φορέα ρΤΟ-Τ7 για έκφραση πρωτεΐνης σε Ε. coli. Η πλήρους μήκους εξωκυτταρική περιοχή της gE έτεινε να σχηματίζει σώματα εγκλεισμού στο E. coli κατά την έκφραση, και αυτό θα μπορούσε να βελτιωθεί με μια καρβοξυτελική περικοπή. Από τις διάφορες κολοβωμένες πρωτεΐνες, η καλύτερη διαλυτότητα επιτεύχθηκε με το κατασκεύασμα gE (aa 31-358) (Σχήμα 1Α), που στο εξής θα αναφέρεται ως κολοβωμένη gE ή tgE. Η υποψήφια tgE εκφράστηκε επιτυχώς ως διαλυτή ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη και καθαρίστηκε από το υπερκείμενο λύματα βακτηρίων χρησιμοποιώντας χρωματογραφία τριών σταδίων σε εργαστηριακή κλίμακα για περαιτέρω αξιολόγηση και ανάπτυξη ως πιθανό εμβόλιο. Χρησιμοποιήθηκε ισχυρή ανιοντοανταλλακτική χρωματογραφία για σύλληψη ακολουθούμενη από στάδια κεραμικού υδροξυαπατίτη και υδρόφοβης χρωματογραφίας (Εικόνα 1Β). Διαδοχικά στάδια της διαδικασίας καθαρισμού είδαν μια αύξηση στην καθαρότητα του tgE στο SDS-PAGE (Εικόνα 1C). Το tgE μετανάστευσε ως ζώνη περίπου 40 kD και έδειξε καλή αντιδραστικότητα με το ειδικό αντίσωμα 1Β11 (Εικόνα 1D). Η συνολική απόδοση ήταν περίπου 500 μg καθαρισμένης tgE ανά γραμμάριο βακτηρίων.

Χαρακτηρισμός του περικομμένου gE

Η χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους υψηλής απόδοσης (HPSEC) και η αναλυτική υπερφυγοκέντρηση (AUC) χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση της ομοιογένειας και των συντελεστών καθίζησης των καθαρισμένων πρωτεϊνών. Η πρωτεΐνη rgE που καθαρίστηκε από το σύστημα κυττάρων εντόμου (Liu et al., 2015) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Στο HPSEC, το tgE εμφανίστηκε μια απότομη κορυφή στον κυρίαρχο χρόνο κατακράτησης των 16,1 λεπτών (Εικόνα 2Α), αντανακλώντας υψηλή ομοιογένεια για τις καθαρισμένες πρωτεΐνες tgE. Σε πειράματα AUC, μια κυρίαρχη κορυφή καθίζησης παρατηρήθηκε στους ~ 2,3 S (Εικόνα 2Β), που ισοδυναμεί με ~ 39,4 kD, υποδεικνύοντας ότι η tgE εμφανίζεται ως μονομερές στο διάλυμα. Η θερμιδομετρία διαφορικής σάρωσης (DSC) χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο της θερμικής σταθερότητας της πρωτεΐνης tgE παρακολουθώντας τη θερμική ικανότητα κατά τη διάρκεια της διαδικασίας θερμικής ξεδίπλωσης. Τα προφίλ DSC έδειξαν μόνο μία θερμική μετάβαση κατά την εκτύλιξη της πρωτεΐνης σε τιμή θερμοκρασίας μετάπτωσης (Tm) 63,80 μοιρών για tgE, συγκρίσιμη με εκείνη του rgE (63,64 μοίρες) (Εικόνα 2C). Για να διερευνήσουμε τη διαμορφωτική ακεραιότητα των καθαρισμένων πρωτεϊνών tgE, αναλύσαμε την αντιγονικότητα της tgE χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία ELISA, με καθαρισμένες πρωτεΐνες rgE που εκφράζονται σε κύτταρα εντόμων που χρησιμεύουν ως μάρτυρες. Στη δοκιμή ELISA χρησιμοποιήθηκαν εννέα mAb που μπορούσαν να αναγνωρίσουν διαμορφωτικούς επιτόπους (mAb 1B11, 4G4, 14G1) ή γραμμικούς επίτοπους (4A2, 11B11, 11B12, 6H6, 10H6, 11E3). Βρήκαμε παρόμοιες τιμές μέσης αποτελεσματικής συγκέντρωσης (EC50, ng mL−1) για τις πρωτεΐνες tgE και rgE για τα περισσότερα από τα αντισώματα εκτός από το 1B11, το οποίο είχε σχεδόν 10- φορές χαμηλότερη αντιδραστικότητα, υποδηλώνοντας την παρόμοια αντιγονικότητά τους. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι οι βασικοί επίτοποι στο rgE διατηρούνται καλά στην πρωτεΐνη tgE.

Εικόνα 1 (Χρώμα online) Έκφραση και καθαρισμός των πρωτεϊνών. Σχηματική αναπαράσταση του σχεδίου κατασκευής tgE. Τα κύτταρα E. coli μετασχηματίστηκαν με ανασυνδυασμένα πλασμίδια που έφεραν το κολοβωμένο γονίδιο gE (aa 31-358). Β, Σχηματική αναπαράσταση της διαδικασίας καθαρισμού tgE. Το tgE καθαρίστηκε από λυμένο υπερκείμενο με χρήση χρωματογραφίας τριών σταδίων. C, προφίλ SDS-PAGE της tgE κατά τη διάρκεια της διαδικασίας καθαρισμού. Το μοριακό βάρος του tgE είναι περίπου 40 kD. Μ: δείκτης μοριακού βάρους. Λωρίδα 1: υπερκείμενο διαχωρισμένο από κυτταρόλυμα. λωρίδα 2: κλάσμα που περιέχει tgE από το χρωματογράφο Q-FF. Λωρίδα 3: κλάσμα που περιέχει tgE από CHT χρωματογράφο. λωρίδα 4: κλάσμα από το χρωματογράφο βουτυλίου, που περιέχει την πρωτεΐνη tgE με υψηλή καθαρότητα. D, Ανοσοκηλίδωση του καθαρισμένου tgE.

Ανάλυση ανοσοαποκρίσεων που προκαλούνται από tgE σε ποντικούς

Για να συγκρίνουμε την ανοσογονικότητα του tgE με το rgE, διαμορφώσαμε τις πρωτεΐνες με δύο ανοσοενισχυτικά που χρησιμοποιούνται συνήθως για ερευνητικές εργασίες: το ανοσοενισχυτικό Al-001 με βάση το αλουμίνιο και το ανοσοενισχυτικό του Freund. Τα ποντίκια ανοσοποιήθηκαν τρεις φορές τις εβδομάδες 0, 2 και 4 με δόση 1 ug τόσο για το ανοσοενισχυμένο tgE όσο και για το rgE. Οι ειδικοί για gE τίτλοι αντισωμάτων και οι αποκρίσεις Τ-κυττάρων την εβδομάδα 5 μετά την πρώτη ανοσοποίηση χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της ανοσογονικότητας διαφορετικών ανοσοενισχυτικών σκευασμάτων. Τα ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με το εμβόλιο tgE που διαμορφώθηκε με ΑΙ-001 έδειξαν παρόμοια προφίλ αντισωμάτων με τα ποντίκια στην ομάδα rgE και το ανοσοενισχυτικό Freund έδειξε καλύτερη διεγερτική δράση όταν συνταγοποιήθηκε με tgE παρά με rgE (Εικόνα 4Α). Οι τίτλοι εξουδετέρωσης δεν έδειξαν διαφορές σε ποντικούς που ανοσοποιήθηκαν με εμβόλιο tgE ή rgE, με τίτλους εξουδετέρωσης ~103 για tgE που διαμορφώθηκαν με τα διαφορετικά ανοσοενισχυτικά (Εικόνα 4Β). Ωστόσο, στην ανάλυση CD{13}} Τ κυττάρων από σπληνοκύτταρα με ενδοκυτταρική χρώση κυτοκίνης (ICS), τόσο τα εμβόλια tgE όσο και τα rgE προκάλεσαν παρόμοια επίπεδα ειδικής για gE IFN- σε σύγκριση με την ομάδα φυσιολογικού ορού (Εικόνα 4C, ~{ {22}}.1% είτε για ομάδες εμβολίων είτε για ομάδα φυσιολογικού ορού) και μόνο μια μέτρια προσομοίωση της ειδικής για gE IL{{20}} (Εικόνα 4Δ, ~0.2% για ομάδες εμβολίων έναντι ~0.1 % για την ομάδα φυσιολογικού ορού). Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το tgE/Al-001 και το ανοσοενισχυτικό tgE/Freund προκαλούν ανοσοαποκρίσεις ειδικές για gE συγκρίσιμες με αυτές που προκαλούνται από το rgE, με ιδιαίτερα ισχυρή χυμική απόκριση.

Αξιολόγηση του υποψήφιου εμβολίου ανεμευλογιάς tgE σε σύγκριση με το LAV

Στη συνέχεια αξιολογήσαμε την παραγωγή αντισωμάτων και την επιμονή των πρωτεϊνών tgE με ανοσοενισχυτικό αλουμίνιο σε ποντικούς BALB/c. Δύο ομάδες ποντικών (n=5 ανά ομάδα) ανοσοποιήθηκαν τρεις φορές τις εβδομάδες 0, 2 και 4 με διαφορετικές δόσεις 0.5 ug και 5 ug tgE/Al{{{ 8}} (Εικόνα 5Α και Β). Τα προφίλ απόκρισης αντισωμάτων έδειξαν ότι ο πρωτογενής εμβολιασμός της πρωτεΐνης tgE προκάλεσε υψηλούς τίτλους αντισωμάτων, με συνεχή αύξηση μετά τις δύο ενισχυτικές ανοσοποιήσεις στις εβδομάδες 2 και 4 και φθάνοντας σε ένα μέγιστο επίπεδο την εβδομάδα 6 πριν πέσει αργά σε περισσότερο από 1{{ 20}}4 κατά την περίοδο παρακολούθησης. Διαφορετικές ομάδες δοσολογίας μοιράστηκαν παρόμοια προφίλ τίτλου αντισωμάτων κατά την περίοδο παρακολούθησης, με παρόμοιους υψηλούς τίτλους εξουδετέρωσης την εβδομάδα 6. Η ανοσογονικότητα της tgE αξιολογήθηκε και συγκρίθηκε με τη βότκα. Η ημι-αποτελεσματική δόση (ED50) σε ποντίκια χρησιμοποιήθηκε ως μέτρο ορομετατροπής, με χαμηλότερο ED50 ενδεικτικό καλύτερης ανοσογονικότητας. Τα ποντίκια Balb/c διαχωρίστηκαν σε ομάδες και ανοσοποιήθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με ανοσοενισχυμένη με αλουμίνιο tgE (1, 0.5, 0.25, {{50}}.125, {{ 54}}.0625 ή 0.03125 ug; n{{30}}) ή εμβόλιο vOka (1,000, 500, 250, 125 ή 62,5 pfu· n=6) σε σειριακές αραιώσεις. Οι οροί συλλέχθηκαν μετά από 4 εβδομάδες και δοκιμάστηκαν χρησιμοποιώντας ELISA. Η ορομετατροπή αναλύθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο Reed and Muench (Εικόνα 5C). Στις ηλικιακές ομάδες, τα ποντίκια είχαν ποσοστά ορομετατροπής 83%, 100%, 100%, 100%, 50% και 17% για δόσεις 1, 0,5, 0,25, 0,125, 0,0625 και 0,03125 ug, αντίστοιχα. Στις ομάδες βότκας, τα ποντίκια είχαν χαμηλότερα ποσοστά ορομετατροπής 67%, 50%, 33%, 17% και 0% για δόσεις 1,000, 500, 250, 125 ή 62,5 pfu, αντίστοιχα. Οι τιμές ED50 ήταν 0,063 ug για το tgE και 449,425 pfu για την vOka, υποδεικνύοντας ότι η ανοσογονικότητα της tgE σε χαμηλότερη δόση 0,3 ug ήταν ισοδύναμη με αυτή που επιτυγχάνεται με μια εφάπαξ δόση εμβολίου ανεμευλογιάς που περιέχει vOka (συνήθως πάνω από 2,{{7}, } pfu ανά δόση).

Σχήμα 2 Χαρακτηρισμός των πρωτεϊνών tgE και rgE. Α, προφίλ HPSEC του καθαρισμένου tgE. Υποδεικνύεται ο χρόνος κατακράτησης του gE. Β, Ανάλυση ταχύτητας καθίζησης της καθαρισμένης πρωτεΐνης tgE. Ο συντελεστής καθίζησης και το μοριακό βάρος της tgE προσδιορίστηκαν με μεθόδους c(s) και c(M) ανεξάρτητα. Στα (Α) και (Β), το tgE εμφανίζεται με μαύρο και κόκκινο με μπλε. C, Προφίλ θερμιδομετρίας διαφορικής σάρωσης της καθαρισμένης πρωτεΐνης tgE και rgE.

Σχήμα 3 Δραστικότητα των tgE και rgE με mAbs. Τα mAbs αραιώθηκαν σειριακά και αντέδρασαν με επικαλυμμένες πρωτεΐνες tgE ή rgE σε μια δοκιμασία ELISA. Οι αντιδράσεις ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας αντισώματα αντι-ποντικού σημασμένα με HRP. Τα διπλά φρεάτια μετρήθηκαν στην ίδια πλάκα για κάθε αραίωση. Οι τιμές EC50 υπολογίστηκαν με προσαρμογή σιγμοειδούς τάσης χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Prism.

Σχήμα 4 Ανοσογονικότητα των tgE και rgE που δοκιμάστηκαν σε ποντικούς BALB/c 1 εβδομάδα μετά την ανοσοποίηση τριών δόσεων. Α, Παραγωγή αντισωμάτων σε ποντικούς για tgE και rgE σκευασμένα με διαφορετικά ανοσοενισχυτικά. Β, Τίτλοι εξουδετέρωσης αντισωμάτων σε ποντίκια για tgE και rgE σκευασμένα με διαφορετικά ανοσοενισχυτικά. C και D, Αξιολογήσεις των ειδικών ανταποκρίσεων gE IFN- και IL-2 που προκαλούνται από τα εμβόλια tgE ή rgE.

Σχήμα 5 Δοκιμές ανοσογονικότητας εμβολίου tgE σκευασμένου με αλουμίνιο σε ποντικούς BALB/c. Α και Β, Εμμονή αντισωμάτων και απόκριση εξουδετερωτικού αντισώματος tgE/Al-001. Οι τίτλοι παρακολουθήθηκαν για έως και 16 εβδομάδες. C, ED50 σε ποντίκια για tgE με σύνθεση αλουμινίου και βότκα.

Αξιολόγηση του υποψήφιου εμβολίου tgE Zoster σε σύγκριση με το Shingrix

Για να συγκριθεί η ανοσογονικότητα του εμβολίου μας tgE με το Shingrix, τυποποιήθηκε λυοφιλοποιημένη πρωτεΐνη tgE με το ανοσοενισχυτικό Shingrix, AS01B. Τα ποντίκια C57BL/6 ανοσοποιήθηκαν με δύο δόσεις tgE/AS01B ή Shingrix ενδομυϊκά στον κνημιαίο μυ τις εβδομάδες 0 και 4. Τα επίπεδα αντισωμάτων μετά την πρώτη ανοσοποίηση υποδηλώνουν ότι η ανοσοποίηση με Shingrix ήταν επαρκής για να προκαλέσει υψηλά επίπεδα αντισωμάτων αντι-gE. σημαντικά υψηλότερα από αυτά που παράγονται από το tgE/AS01B. μετά τη δεύτερη ανοσοποίηση, ωστόσο, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην παραγωγή αντισωμάτων μεταξύ των δύο ομάδων (Εικόνα 6Α). Όσον αφορά τα επίπεδα εξουδετερωτικού αντισώματος, μια ανοσοποίηση μιας δόσης tgE/AS01B οδήγησε στην παραγωγή αμελητέων ποσοτήτων εξουδετερωτικού αντισώματος, σημαντικά χαμηλότερες από αυτές που παρήγαγε η Shingrix. Ωστόσο, και πάλι, μετά την αναμνηστική ανοσοποίηση, δεν μπορούσαμε να δούμε καμία σημαντική διαφορά όσον αφορά την παραγωγή εξουδετερωτικών αντισωμάτων μεταξύ των δύο ομάδων (Εικόνα 6Β). Για να επαληθευτεί ο τρόπος με τον οποίο η ανοσοποίηση επηρεάζει το CMI, τα επίπεδα IFN- και IL{14}} που είναι ειδικά για gE ανιχνεύθηκαν μετά την πρώτη και τη δεύτερη ανοσοποίηση χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής κηλίδας (ELISPOT) και τη χρώση με ενδοκυτταρική κυτοκίνη. Η ανοσοποίηση tgE/AS01B προκάλεσε κακή χυμική ανοσολογική απόκριση σε σύγκριση με μια εφάπαξ δόση Shingrix, αλλά έδειξε συγκρίσιμη ισχύ όσον αφορά την επαγωγή σπληνοκυττάρων που παράγουν IFN- - και IL{{18} (Εικόνα 6C). Πράγματι, μετά τη δεύτερη ανοσοποίηση, ανιχνεύθηκε σημαντικός αριθμός gE-ειδικών κυττάρων που παράγουν κυτοκίνη στην ομάδα tgE/AS01B σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου φυσιολογικού ορού, τα οποία ήταν επίσης συγκρίσιμα ή καλύτερα από αυτά για την ομάδα Shingrix (Εικόνα 6D ). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν στην ανάλυση κυτταρομετρίας ροής, με παρατηρήσεις παρόμοιων αναλογιών IFN{- -που εκφράζουν CD4+ Τ-λεμφοκύτταρα (Εικόνα 6Ε), IL-2-που εκφράζουν CD4+ T κύτταρα (Εικόνα 6F) και IFN- -CD8+ Τ-κύτταρα (Εικόνα 6G) μεταξύ των tgE/AS01B- και των ποντικών που ανοσοποιήθηκαν με Shingrixim, ανεξάρτητα από ανοσοποίηση εφάπαξ ή ενισχυτικής δόσης. Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η πρωτεΐνη tgE που προέρχεται από το σύστημα βακτηριακής έκφρασης μπορεί να επάγει τόσο χυμικές όσο και κυτταρικές ανοσοαποκρίσεις όταν συνταγοποιείται με κατάλληλα ανοσοενισχυτικά, και έτσι μπορεί να θεωρηθεί ως υποψήφιο αντιγόνο για τη δημιουργία ενός εμβολίου κατά του VZV.

Σχήμα 6 Ανοσογονικότητα του tgE σε ποντικούς C57BL/6. Χορηγήθηκαν δόσεις 5 ug tgE σκευασμένες με 50 μL ανοσοενισχυτικού AS01B. Αυτή ήταν το 1/10 της δόσης του εμβολίου Shingrix. Η ανοσοποίηση πραγματοποιήθηκε στις εβδομάδες 0 και 4. Α, Σύγκριση της παραγωγής αντισωμάτων που προκαλείται από το εμβόλιο tgE/AS01B σε σύγκριση με το Shingrix. Οι τίτλοι ορού προσδιορίστηκαν με δοκιμασία ELISA χρησιμοποιώντας πλακίδια επικαλυμμένα με rgE. Β, Σύγκριση της απόκρισης εξουδετερωτικού αντισώματος στο vOka μετά από εμβολιασμό με εμβόλιο tgE/AS01B ή Shingrix. Οι τίτλοι εξουδετέρωσης του αντιορού την εβδομάδα 2 (αριστερό πλαίσιο) και την εβδομάδα 6 (δεξιό πλαίσιο) εκφράζονται ως το αντίστροφο της αραίωσης ορού με αποτέλεσμα 50% αναστολή. C, Αξιολόγηση των ειδικών για την gE αποκρίσεων IFN- και IL-2 που προκλήθηκαν από το εμβόλιο tgE/AS01B ή το Shingrix την εβδομάδα 2. Οι αριθμοί των σπληνοκυττάρων που παράγουν IFN{- - και IL-2-υπολογίστηκαν από Δοκιμασία ELISPOT μετά από επαναδιέγερση με δεξαμενή πεπτιδίων gE. D, Αξιολόγηση των ειδικών για την gE αποκρίσεων IFN- και IL-2 που προκλήθηκαν από το εμβόλιο tgE/AS01B ή το Shingrix την εβδομάδα 8. Οι αριθμοί των σπληνοκυττάρων που παράγουν IFN{- - και IL-2-υπολογίστηκαν από Δοκιμασία ELISPOT μετά από επαναδιέγερση με δεξαμενή πεπτιδίων gE. Δοκιμασίες E–G, κυτταρομετρίας ροής για κύτταρα CD4+ και CD8+ που εκφράζουν ειδικά για gE κυτοκίνη. Το ποσοστό των IFN- -που παράγουν CD4+ Τ-λεμφοκύτταρα, IL-2-που παράγουν CD4+ Τ κύτταρα και IFN- -παράγουν CD8+ T προσδιορίστηκαν κύτταρα μεταξύ των σπληνοκυττάρων.

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Το VZV gE είναι ένας κύριος στόχος της χυμικής και κυτταρικής ανοσοαπόκρισης κατά τη διάρκεια της φυσικής μόλυνσης από ανεμευλογιά και μετά τον εμβολιασμό VZV Oka. Το Shingrix (GSK) είναι ένα εμβόλιο ανασυνδυασμένης υπομονάδας που περιλαμβάνει ένα VZV gE που εκφράζεται σε κύτταρα CHO και το ανοσοενισχυτικό AS01B που βασίζεται σε λιπόσωμα. Άλλη εργασία επιδίωξε να διερευνήσει εμβόλια υπομονάδας κατά του HZ χρησιμοποιώντας πρωτεΐνες gE που παράγονται από CHO ή κύτταρα εντόμων που έχουν διαμορφωθεί με νέα ανοσοενισχυτικά (Cao et al., 2021; Lee et al., 2020; Luan et al., 2022a, Luan et al., 2022b· Wang et al., 2021· Wui et al., 2019· Wui et al., 2021). Εδώ, ερευνήσαμε και δείξαμε ότι η πρωτεΐνη gE μπορούσε να εκφραστεί διαλυτά και να καθαριστεί από Ε. coli, και στη συνέχεια να τυποποιηθεί ως υποψήφιο εμβόλιο υπομονάδας με ένα κατάλληλο ανοσοενισχυτικό για να προκαλέσει όχι μόνο έναν ισχυρό τίτλο εξουδετέρωσης αλλά και μια ισχυρή απόκριση CMI.

φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα

Το E. coli ως σύστημα έκφρασης προσφέρει πολλά πλεονεκτήματα: γρήγορο ρυθμό ανάπτυξης κυττάρων, φθηνές συνθήκες καλλιέργειας και ένα αποτελεσματικό και ευέλικτο εργαλείο για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών. Η έρευνα αντιγόνου που σχετίζεται με τον ιό του έρπητα είχε αρκετές επιτυχίες χρησιμοποιώντας το σύστημα έκφρασης που βασίζεται σε E. coli. Ένας εξουδετερωτικός γραμμικός επίτοπος gE (aa 121-135) έχει συντηχθεί με 149 aa της πρωτεΐνης του πυρήνα του ιού της ηπατίτιδας Β (HBc) για την παραγωγή χιμαιρικών VLP που θα μπορούσαν να επάγουν ειδικά για τον VZV εξουδετερωτικά αντισώματα σε ποντίκια (Zhu et al., 2016). Σε μια άλλη μελέτη, μια ομόλογη πρωτεΐνη gE από τον ιό της ανεμευλογιάς πιθήκου (SVV) εκφράστηκε σε E. coli χρησιμοποιώντας μια ετικέτα σύντηξης GST για τη δημιουργία αντιορού gE (Gray et al., 2001). Μέχρι στιγμής, δεν έχουν υπάρξει αναφορές για πρωτεΐνη VZV gE χωρίς ετικέτα σύντηξης που έχει καθαριστεί από Ε. coli ως υποψήφιο εμβόλιο.

Το gE αποτελείται από τρεις περιοχές: μια 544-aa υδρόφιλη εξωτομή με πεπτίδιο σήματος (aa 1–30), μια 17-aa υδρόφοβη διαμεμβρανική περιοχή και μια 62-aa περιοχή κυτταροπλασματικής ουράς. Ερευνήσαμε αρκετά υποψήφια μόρια με διαφορετικές περικοπές στις αμινοτελικές ή καρβοξυτελικές περιοχές της εξωτομέας gE και βρήκαμε ότι η εξωγενής έκφραση αυτών των πρωτεϊνών στο E. coli ήταν καλύτερη χρησιμοποιώντας το περικομμένο τμήμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ένας άθικτος εξωτομέας gE χωρίς ετικέτα σύντηξης τείνει να σχηματίζει σώματα εγκλεισμού όταν εκφράζεται από E. coli και είναι δύσκολο να καθαριστεί. Μεταξύ των υποψηφίων κολοβώματος που δοκιμάστηκαν, η πρωτεΐνη gE (aa 31-358) έδειξε υψηλή διαλυτή έκφραση με ελάχιστες δυσκολίες στον καθαρισμό της, καθώς και υψηλή καθαρότητα και υψηλή ομοιογένεια (Εικόνα 1). Έτσι, αυτό το κατασκεύασμα περικοπής θεωρήθηκε ως ιδανικό υποψήφιο εμβόλιο αντιγόνο. Αυτή η στρατηγική περικοπής θα μπορούσε να είχε μια πιθανή επίδραση στις ιδιότητες της πρωτεΐνης, ιδιαίτερα στην αντιγονικότητά της. Είχαμε εκφράσει προηγουμένως ανασυνδυασμένη gE σε κύτταρα εντόμων και καθαρίσαμε αυτό το κατασκεύασμα για να ανοσοποιήσουμε ποντίκια BALB/c, λαμβάνοντας 70 gE μονοκλωνικά αντισώματα για ανάλυση επιτόπου (Liu et al., 2015). Μέσω της ανάλυσής μας, αναγνωρίσαμε το aa 1–194 ως την ανοσοκυρίαρχη περιοχή (τα δεδομένα δεν φαίνονται). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν και αλλού, με τα gE-ειδικά mAbs να υποδεικνύουν τις περιοχές aa 109-123 και 160-316 που είναι οι περιοχές που είναι υπεύθυνες για τη σταθερή σύνδεση αντισωμάτων αντισωμάτων μεταξύ των παραλλαγών απομονώσεων (Vafai, 1994). Σε μια άλλη μελέτη, χρησιμοποιώντας ανασυνδυασμένα υβριδικά θραύσματα gE-VLPs, οι συγγραφείς αναγνώρισαν τα υπολείμματα 1-134 ως την πιο αντιγονική περιοχή της πρωτεΐνης gE και έδειξαν ότι το καρβοξυτελικό άκρο της gE (υπολείμματα 303-623) που περιείχε αρκετά υπολείμματα κυστεΐνης απέτυχε να παράγει σωματίδια σε ζυμομύκητες (Fowler et al., 1995), προτείνοντας ότι η ετερόλογη έκφραση της gE θα πρέπει να λαμβάνει υπόψη όχι μόνο την αντιγονικότητα αλλά και την ευκολία έκφρασης. Εδώ, βελτιστοποιήσαμε το μήκος της πρωτεΐνης gE για την αποτελεσματική διαλυτή έκφρασή της με ελάχιστες μειώσεις στην αντιγονικότητα. Το tgE έδειξε παρόμοια αντιδραστικότητα με τα περισσότερα από τα αντισώματα στο Σχήμα 3 όπως το rgE που παρήχθη σε κύτταρα εντόμων, υποδηλώνοντας ότι οι βασικοί επίτοποι διατηρούνται καλά στην πρωτεΐνη tgE που καθαρίστηκε από το E. coli. Ωστόσο, μια μελέτη έδειξε ότι οι ανοσοκυρίαρχοι επίτοποι Τ-λεμφοκυττάρων CD{4+ που αναγνωρίστηκαν από δότες εμβολίου Shingrix διασκορπίστηκαν σε όλη την πρωτεΐνη gE (Voic et al., 2020). Η ανοσογονικότητα του tgE στη μελέτη μας ήταν πανομοιότυπη με εκείνη που βρέθηκε για gE που προέρχεται από κύτταρα CHO στο Shingrix όταν το αντιγόνο συνδυάστηκε με ανοσοενισχυτικό AS01B, με παρόμοια αποτελεσματικές χυμικές αποκρίσεις και αποκρίσεις CMI, όπως φαίνεται στο Σχήμα 5. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κολοβωμένη gE που προερχόταν από το προκαρυωτικό σύστημα ήταν τόσο καλή όσο η άθικτη gE εκτοτομή από το ευκαρυωτικό σύστημα όσον αφορά την αντιγονικότητα.

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Υπάρχουν σημαντικές διαφορές μεταξύ των πρωτεϊνών gE που προέρχονται από διαφορετικά συστήματα έκφρασης. Οι πιο εμφανείς διαφορές σημειώνονται με τις μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις, ιδιαίτερα τη γλυκοζυλίωση. Οι Ο-συνδεδεμένες γλυκάνες από μεμβρανικές γλυκοπρωτεΐνες έχουν συνάφεια όσον αφορά την αναγνώριση των Τ-κυττάρων και των αντισωμάτων των επιτόπων ιϊκού γλυκοπεπτιδίου και αυτή η αναγνώριση έχει τη δυνατότητα υψηλής βιοϊατρικής σημασίας στις προσπάθειές μας να μεσολαβήσουμε στην ανοσολογική προστασία έναντι των ιών χρησιμοποιώντας εμβόλια υπομονάδας. Η απομάκρυνση των γλυκανών σε gE που παρήχθη σε κύτταρα CHO-K1 είχε ως αποτέλεσμα 17% μείωση της αντιδραστικότητας με ορούς θετικούς για VZV. Αντίθετα, η Ο-γλυκοζυλίωση μπορεί να επηρεάσει την ανοσοαντιδραστικότητα των επιτόπων Β-λεμφοκυττάρων: ορισμένοι σημαντικοί επίτοποι αποκλείονται από πρόσθετες γλυκάνες συνδεδεμένες με Ο (Nordén et al., 2019). Στη μελέτη μας, το tgE που παράγεται από το E. coli φαίνεται να συμπεριφέρεται εξίσου καλά με το rgE που προέρχεται από κύτταρα εντόμου όσον αφορά την ανοσοαντιδραστικότητα και την ανοσογονικότητά του, υποδηλώνοντας ότι η "γυμνή" πρωτεΐνη tgE έχει υποσχεθεί ως υποψήφια εμβόλια. Τα εμβόλια με tgE ως αντιγόνο είναι πιθανό να επάγουν όχι μόνο υψηλούς τίτλους IgG, ενδεικτικά της δυνατότητάς του ως εμβόλιο ανεμευλογιάς υπομονάδας χωρίς πιθανό κίνδυνο λανθάνουσας κατάστασης του ιού, αλλά και υψηλό CMI, υποδηλώνοντας επίσης τη δυνατότητά του ως εμβόλιο ζωστήρα. Συνολικά, το αντιγόνο gE που προέρχεται από το σύστημα βακτηριακής έκφρασης σε αυτή τη μελέτη προσφέρει μια πολύ πιο οικονομική στρατηγική για την ανάπτυξη εμβολίων VZV.

βιβλιογραφικές αναφορές

Adkins, JC, and Wagstaff, AJ (1998). Ανασυνδυασμένο εμβόλιο ηπατίτιδας Β: ανασκόπηση της ανοσογονικότητας και της προστατευτικής του αποτελεσματικότητας έναντι της ηπατίτιδας Β. Biodrugs 10, 137-158.

Arvin, ΑΜ (1992). Κυτταρική ανοσία στον ιό της ανεμευλογιάς-ζωστήρα. J Infect Dis 166, S35–S41.

Cao, H., Wang, Y., Luan, N., and Liu, C. (2021). Ανοσογονικότητα της γλυκοπρωτεΐνης Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα που σχηματίζεται με νανοσωματίδια λιπιδίων και νουκλεϊκούς ανοσοδιεγέρτες σε ποντίκια. Vaccines 9, 310.

Chen, L., Liu, J., Wang, W., Ye, J., Wen, L., Zhao, Q., Zhu, H., Cheng, T., and Xia, N. (2014). Ανάπτυξη μιας δοκιμασίας εξουδετέρωσης του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία ανοσοπροσροφητικής κηλίδας συνδεδεμένου με ένζυμο αντισώματος γλυκοπρωτεΐνης Κ. J Virol Methods 200, 10–14.

Cohen, JI (2013). Κλινική πρακτική: έρπης ζωστήρας. N Engl J Med 369, 255– 263. Dendouga, N., Fochesato, M., Lockman, L., Mossman, S., and Giannini, SL (2012). Κυτταρικές ανοσοαποκρίσεις σε εμβόλιο γλυκοπρωτεΐνης Ε του ιού ανεμευλογιάς-ζωστήρα χρησιμοποιώντας αγωνιστή TLR και QS21 σε ποντίκια. Vaccine 30, 3126-3135.

Fowler, WJ, Garcia-Valcarcel, Μ., Hill-Perkins, MS, Murphy, G., Harper, DR, Jeffries, DJ, Burns, NR, Adams, SE, Kingsman, AJ και Layton, GT (1995). Προσδιορισμός ανοσοκυρίαρχων περιοχών και γραμμικών επιτόπων Β κυττάρων της πρωτεΐνης φακέλου gE του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα. Virology 214, 531-540.

Galea, SA, Sweet, A., Beninger, P., Steinberg, SP, LaRussa, PS, Gershon, AA, and Sharrar, RG (2008). Το προφίλ ασφάλειας του εμβολίου κατά της ανεμευλογιάς: μια 10-ετής ανασκόπηση. J Infect Dis 197, S165–S169.

Gray, WL, Mullis, LB και Soike, KF (2001). Έκφραση της γλυκοπρωτεΐνης Ε του ιού της ανεμευλογιάς πιθήκου. Virus Res 79, 27-37.

Heininger, U., and Seward, JF (2006). Ανεμοβλογιά. Lancet 368, 1365–1376.

Kim, JY, Kim, YG και Lee, GM (2012). Κύτταρα CHO στη βιοτεχνολογία για την παραγωγή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών: τρέχουσα κατάσταση και περαιτέρω δυνατότητες. Appl Microbiol Biotechnol 93, 917–930.

Lal, H., Cunningham, AL, Godeaux, O., Chlibek, R., Diez-Domingo, J., Hwang, SJ, Levin, MJ, McElhaney, JE, Poder, A., Puig-Barberà, J., et al. (2015). Αποτελεσματικότητα ενός ανοσοενισχυμένου εμβολίου υπομονάδας έρπη ζωστήρα σε ενήλικες μεγαλύτερης ηλικίας. N Engl J Med 372, 2087–2096.

Lee, SJ, Park, HJ, Ko, HL, Lee, JE, Lee, HJ, Kim, H. και Nam, JH (2020). Αξιολόγηση εμβολίων υπομονάδας γλυκοπρωτεΐνης Ε και ζωντανών εξασθενημένων εμβολίων ιού ανεμευλογιάς-ζωστήρα που έχουν διαμορφωθεί με ένα μονόκλωνο ανοσοενισχυτικό με βάση το RNA. Immun Inflamm Dis 8, 216–227.

Liu, J., Zhu, R., Ye, X., Yang, L., Wang, Y., Huang, Y., Wu, J., Wang, W., Ye, J., Li, Y., et al. (2015). Μια ποσοτική δοκιμασία VZV γλυκοπρωτεΐνης Ε βασισμένη σε μονοκλωνικό αντίσωμα και η εφαρμογή της στον ποσοτικό προσδιορισμό αντιγόνου σε εμβόλιο VZV. Appl Microbiol Biotechnol 99, 4845-4853.

Luan, N., Cao, H., Wang, Y., Lin, K., and Liu, C. (2022a). Τα ιονιζόμενα νανοσωματίδια λιπιδίου ενίσχυσαν τη συνεργική επικουρική δράση των CpG ODNs και QS21 σε ένα εμβόλιο υπομονάδας γλυκοπρωτεΐνης Ε του ιού ανεμευλογιάς-ζωστήρα. Pharmaceutics 14, 973.

Luan, N., Cao, H., Wang, Y., Lin, K., and Liu, C. (2022b). Η γλυκοπρωτεΐνη Ε του ιού ανεμευλογιάς-ζωστήρα με ανοσοενισχυμένο LNP-CpG ODN προκάλεσε συγκρίσιμα επίπεδα ανοσίας με το Shingrix™ σε ποντικούς που είχαν εκκινήσει με VZV. Virol Sin 37, 731–739.

Monie, A., Hung, CF, Roden, R., and Wu, TC (2008). Cervarix: ένα εμβόλιο για την πρόληψη του HPV 16, 18-που σχετίζεται με τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Biologics 2, 97-105.

Nordén, R., Nilsson, J., Samuelsson, E., Risinger, C., Sihlbom, C., Blixt, O., Larson, G., Olofsson, S., and Bergström, T. (2019). Η ανασυνδυασμένη γλυκοπρωτεΐνη Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα περιέχει μοτίβα γλυκάνης-πεπτιδίου που ρυθμίζουν τους επιτόπους Β κυττάρων σε διακριτές ανοσολογικές υπογραφές. Int J Mol Sci 20, 954.

Oliver, SL, Yang, E., and Arvin, AM (2016). Γλυκοπρωτεΐνες του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα: είσοδος, αντιγραφή και παθογένεση. Curr Clin Microbiol Rep 3, 204–215.

Overton, TW (2014). Παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης σε βακτηριακούς ξενιστές. Drug Discov Today 19, 590–601.

Oxman, MN, Levin, MJ, Johnson, GR, Schmader, KE, Straus, SE, Gelb, LD, Arbeit, RD, Simberkoff, MS, Gershon, AA, Davis, LE, et al. (2005). Ένα εμβόλιο για την πρόληψη του έρπητα ζωστήρα και της μεθερπητικής νευραλγίας σε ενήλικες μεγαλύτερης ηλικίας. N Engl J Med 352, 2271–2284.

Shah, RA, Limmer, AL, Nwannunu, CE, Patel, RR, Mui, UN και Tyring, SK (2019). Shingrix για τον έρπητα ζωστήρα: μια ανασκόπηση. Skin Therapy Lett 24, 5–7. Singh, SM και Panda, AK (2005). Διαλυτοποίηση και αναδίπλωση των πρωτεϊνών του σώματος εγκλεισμού βακτηρίων. J Biosci Bioeng 99, 303–310.

Syed, YY (2018). Ανασυνδυασμένο εμβόλιο ζωστήρα (Shingrix®): μια ανασκόπηση στον έρπητα ζωστήρα. Drugs Aging 35, 1031–1040.

Takahashi, Μ., Otsuka, Τ., Okuno, Υ., Asano, Υ., Yazaki, Τ., and Isomura, S. (1974). Το ζωντανό εμβόλιο χρησιμοποιείται για την πρόληψη της εξάπλωσης της ανεμευλογιάς σε παιδιά στα νοσοκομεία. Lancet 304, 1288–1290.

Tseng, HF, Smith, N., Harpaz, R., Bialek, SR, Sy, LS και Jacobsen, SJ (2011). Εμβόλιο κατά του έρπητα ζωστήρα σε ενήλικες μεγαλύτερης ηλικίας και ο κίνδυνος επακόλουθης νόσου του έρπητα ζωστήρα. JAMA 305, 160–166.

Βαφάη, Α. (1994). Θέσεις δέσμευσης αντισωμάτων σε κολοβωμένες μορφές γλυκοπρωτεΐνης gpI(gE) του ιού της ανεμευλογιάς ζωστήρα. Vaccine 12, 1265–1269.

Voic, H., de Vries, RD, Sidney, J., Rubiro, P., Moore, E., Phillips, E., Mallal, S., Schwan, B., Weiskopf, D., Sette, A., et al. (2020). Ταυτοποίηση και χαρακτηρισμός επιτόπων CD4+ Τ κυττάρων μετά τον εμβολιασμό Shingrix. J Virol 94, e01641-20.

Wang, Y., Qi, J., Cao, H., and Liu, C. (2021). Ανοσοποιητικές αποκρίσεις στη γλυκοπρωτεΐνη Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα που διαμορφώνεται με νανοσωματίδια πολυ(γαλακτικού-κογλυκολικού οξέος) και ανοσοενισχυτικά νουκλεϊκού οξέος σε ποντίκια. Virol Sin 36, 122–132.

Wu, T., Li, SW, Zhang, J., Ng, MH, Xia, NS και Zhao, Q. (2012). Ανάπτυξη εμβολίου για την ηπατίτιδα Ε: Οδύσσεια 14-χρόνων. Hum Vaccin Immunother 8, 823–827.

Wui, SR, Kim, KS, Ryu, JI, Ko, A., Do, HTT, Lee, YJ, Kim, HJ, Lim, SJ, Park, SA, Cho, YJ, et al. (2019). Αποτελεσματική επαγωγή κυτταρικής ανοσίας στη γλυκοπρωτεΐνη Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα λυοφιλοποιημένη με ένα κατιονικό ανοσοενισχυτικό με βάση το λιπόσωμα σε ποντίκια. Vaccine 37, 2131-2141.

Wui, SR, Ko, A., Ryu, JI, Sim, E., Lim, SJ, Park, SA, Kim, KS, Kim, H., Youn, H., and Lee, NG (2021). Η επίδραση ενός TLR4 αγωνιστή/κατιονικού ανοσοενισχυτικού λιποσώματος στην αποτελεσματικότητα του εμβολίου γλυκοπρωτεΐνης Ε του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα: παρουσίαση αντιγόνου, πρόσληψη και παροχή στους λεμφαδένες. Pharmaceutics 13, 390.

Zerboni, L., Sen, N., Oliver, SL, and Arvin, AM (2014). Μοριακοί μηχανισμοί παθογένεσης του ιού της ανεμευλογιάς ζωστήρα. Nat Rev Microbiol 12, 197–210.

Zhu, R., Liu, J., Chen, C., Ye, X., Xu, L., Wang, W., Zhao, Q., Zhu, H., Cheng, T. και Xia, N. (2016). Ένα εξαιρετικά διατηρημένο υποψήφιο εμβόλιο επίτοπου κατά του ιού της ανεμευλογιάς-ζωστήρα επάγει εξουδετερωτικά αντισώματα σε ποντίκια. Vaccine 34, 1589–1596.