Διαφορές στη σύνθεση και τη φαρμακευτική αποτελεσματικότητα των ακατέργαστων προϊόντων και των επεξεργασμένων με ατμό προϊόντων κρασιού από το Cistanches Herba

Περίληψη:

ΣκοπόςΝα συγκρίνουν τις αλλαγές στη χημική σύσταση και τη φαρμακευτική αποτελεσματικότητα του Roucongrong (Cistanches Herba) πριν και μετά την επεξεργασία, ώστε να διευκρινιστεί η αρχή του μαγειρέματος με κρασί.

Μέθοδοι Το LC-MS εφαρμόστηκε για τον προσδιορισμό των τύπων χημικής σύνθεσης πριν και μετά το παρασκεύασμα του Cistanches Herba, σε συνδυασμό με πολυπαραγοντική στατιστική ανάλυση για την εύρεση των ανισοτήτων στα συστατικά πριν και μετά το βράσιμο με κρασί. Η διαφορά αποτελεσματικότητας αποδείχθηκε από το μοντέλο αρουραίου υδρογονωμένης ανεπάρκειας κορτιζονεκειδών γιανγκ.

ΑποτελέσματαΣυνολικά 45 χημικά συστατικά ταυτοποιήθηκαν απόΔείγματα Cistanches Herba; Οι ενώσεις συνέβαλαν στις διαφορές μεταξύCistanches Herba και Cistanches Herba με κρασιάεκτάριοεχινακοσίδη, βερμπασκοσίδη, ισοακτεοσίδη και τουμπουλοσίδη Β; Το εκχύλισμα ολικών φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από το Cistanches Herba έχει καλύτερη επίδραση στη βελτίωση του μοντέλου αρουραίου με ανεπάρκεια νεφρού yang από το Cistanches Herba με στιφάδο κρασιού. Συμπέρασμα Η σύνθεση του Cistanche αλλάζει μετά το βράσιμο με κρασί και η επίδραση στην ανεπάρκεια του νεφρού yang έχει ενισχυθεί. Τα συστατικά της μεταμόρφωσης από το Cistanches Herbato με κρασάτο Cistanches Herba μπορεί να είναι ενεργά συστατικά που ενισχύουν τα νεφρά και υποστηρίζουν το yang.

Λέξεις κλειδιά: Cistanches Herba; κρασιά Cistanches Herba;ανεπάρκεια yang των νεφρών;εχινακοσίδη;βερμπασκοσίδη; ισοακτεοσίτης, σωληνοζίτης Β

ΠΩΛΕΙΤΑΙ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE ΥΨΗΛΗΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ

Υποστήριξη της Wecistanche

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Είναι γνωστό ως "ginseng" και διανέμεται κυρίως στην Εσωτερική Μογγολία, τη Ningxia (Azuqi), το Gansu (Changma), το Xinjiang και άλλες περιοχές [1]. Το Cistanche είναι ζεστό στη φύση, γλυκό και αλμυρό στη γεύση και εισέρχεται στους μεσημβρινούς των νεφρών και του παχέος εντέρου. Έχει τα αποτελέσματα της θρέψης του ήπατος και των νεφρών, ωφελώντας την ουσία και το αίμα, και ενυδατώνει τα έντερα και ανακουφίζει από τη δυσκοιλιότητα. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για ανεπάρκεια νεφρού yang, ανικανότητα και στειρότητα, πόνο στη μέση και τα γόνατα, αδυναμία των μυών και των οστών, ξηρά έντερα και δυσκοιλιότητα [2]. Η σύγχρονη έρευνα δείχνει ότι οι σαρκώδεις μίσχοι με τα λέπια φύλλα του Cistanche περιέχουν κυρίως μια ποικιλία χημικών συστατικών όπως γλυκοσίδες φαινυλαιθανόλης, τερπένια κυκλοπεντανίου και τα γλυκοσίδια τους, λιγνάνες, σάκχαρα κ.λπ. [3], και έχουν πολλαπλές φαρμακολογικές επιδράσεις όπωςαντιγηραντική,αντιοξειδωτικό,κατά της άνοιας,κατά της κούρασης, και ενυδάτωση των εντέρων και ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα [4].

Αφού μαγειρευτεί με κρασί, ενισχύεται η τονωτική και ενισχυτική δράση των νεφρών του Cistanche. Η αρχή της επεξεργασίας δεν έχει επεξηγηθεί με σαφήνεια. Οι Fan Yanan et al. [5-7] μελέτησε τις επιδράσεις του Cistanche στην αφόδευση των αρουραίων, στη λειτουργία του ανοσοποιητικού, στους εντερικούς νευροδιαβιβαστές και στις σχετικές γονιδιακές εκφράσεις πριν και μετά την επεξεργασία. Οι Da et al. χρησιμοποίησε την επίδραση των γλυκοσιδίων φαινυλαιθανόλης πριν και μετά την επεξεργασία για να εξηγήσει την αρχή της επεξεργασίας της· Οι Zhang Chao et al. [8] χρησιμοποίησε τις αλλαγές στην περιεκτικότητα σε γλυκοσίδες φαινυλαιθανόλης πριν και μετά την επεξεργασία για να εξηγήσει την αρχή της επεξεργασίας. Οι Zhang Shuyun et al. [9] χρησιμοποίησε τις αλλαγές στην περιεκτικότητα σε βεταΐνη πριν και μετά την επεξεργασία για να εξηγήσει την επίδραση της επεξεργασίας στο Cistanche. Η υπάρχουσα βιβλιογραφία για την επεξεργασία του Cistanche επικεντρώνεται κυρίως στη φαρμακολογία και η έρευνα για τα συστατικά επικεντρώνεται επίσης στις αλλαγές στο περιεχόμενο συγκεκριμένων συστατικών, χωρίς συστηματική μελέτη των διαφορών των συστατικών. Αυτό το πείραμα χρησιμοποίησε τεχνολογία υγρής χρωματογραφίας-φασματομετρίας μάζας (LC-MS) σε συνδυασμό με στατιστική ανάλυση πολλαπλών μεταβλητών για τον εντοπισμό των χημικών συστατικών στο Cistanche, για την εύρεση των δεικτών διαφοράς μεταξύ ακατέργαστου Cistanche και προϊόντων με κρασιά και για τη μελέτη της διαφοράς στην αποτελεσματικότητα του ακατέργαστο Κιστάντσι και προϊόντα κρασιού μέσω ενός μοντέλου αρουραίου ανεπάρκειας νεφρού yang που προκαλείται από υδροκορτιζόνη, έτσι ώστε να εξηγηθεί η υλική βάση τουCistanche στην τονωτική του νεφρού και την προώθηση του yangκαι την αρχή επεξεργασίας του κρασιού Cistanche.

ΠΩΛΕΙΤΑΙ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE ΥΨΗΛΗΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ

1 Υλικά

1.1 Όργανα

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL φασματόμετρο μάζας διαδοχικής παγίδας ηλεκτροστατικού πεδίου υψηλής ανάλυσης (Thermo Fisher Scientific, ΗΠΑ), σταθμός εργασίας Theraio Xcaliber. BT125D 1/100000 ηλεκτρονική ισορροπία (Sartorius Instrument System, Γερμανία); Καθαριστικό υπερήχων KQ500DE CNC (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Διασπορέας υψηλής ταχύτητας XHF-D (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών Multiskan FC (Thermo Scientific); Φυγόκεντρος υψηλής ταχύτητας HC-3518 (Anhui Zhongke Zhongkia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS{12}}Β πολυλειτουργικός καταγραφέας εθελοντικής δραστηριότητας αρουραίων (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Ναρκωτικά

Μεθανόλη βαθμού φασματομετρίας μάζας (Fisher); Μυρμηκικό οξύ ποιότητας φασματομετρίας μάζας (κλάσμα μάζας 99%, Sigma Aldrich); νερό (απεσταγμένο νερό της Watsons). Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, αριθμός παρτίδας 1701653); άλας νατρίου ηλεκτρικής υδροκορτιζόνης (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., αριθμός παρτίδας 011705067); κιτ υπεροξειδίου δισμουτάσης (SOD) (αριθμός παρτίδας 20170115) και κιτ μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) (αριθμός παρτίδας 20170117) αγοράστηκαν από την Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Η τεστοστερόνη (Τ) και η οιστραδιόλη (Ε2) προσδιορίστηκαν στο Κέντρο Επιθεώρησης Ποιότητας Qingdao Kechuang και η κρεατινίνη (CREA) και το άζωτο ουρίας του αίματος (BUN) προσδιορίστηκαν στο Κέντρο Ανάλυσης και Δοκιμών του Ιατρικού Πανεπιστημίου Inner Mongolia.

1.3 Ζώα

100 αρσενικοί αρουραίοι SD, βάρους 180-200 g, αγοράστηκαν από την Xinglong Experimental Animal Farm στην περιοχή Haidian, Πεκίνο, αριθμός άδειας: SCXK (Πεκίνο) 2016-0003. Αυτό το πείραμα σε ζώα έχει εγκριθεί από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Κινεζικής Ιατρικής του Πεκίνου, αριθμός δεοντολογίας: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Δείγματα

Έξι παρτίδες Cistanche deserticola αναγνωρίστηκαν ως αυθεντικές από τον καθηγητή Li Xiangri της Σχολής Κινεζικής Ιατρικής του Πανεπιστημίου Κινέζικης Ιατρικής του Πεκίνου και προήλθαν από τους αποξηραμένους σαρκώδεις μίσχους με φύλλα λεπίδας του Cistanche deserticola YC Ma, ενός φυτού της οικογένειας Orobanchaceae. Λεπτομερείς πληροφορίες για τα δείγματα φαίνονται στον Πίνακα 1.

Πίνακας 1 Φύλλο πληροφοριών δειγμάτων Cistanches Herba

2 Μέθοδοι

2.1 Προετοιμασία δείγματος

2.1.1 Προετοιμασία ακατέργαστων προϊόντων Πάρτε καθαρό Cistanche deserticola, μαλακώστε το, κόψτε το σε χοντρές φέτες και στεγνώστε το.

2.1.2 Παρασκευή κρασιού

Παίρνετε 100 g φέτες Cistanche deserticola, προσθέτετε 30 mL κρασί από ρύζι, ανακατεύετε καλά και σιγοβράζετε μέχρι να απορροφηθεί το κρασί. Το βράζουμε σε νερό για 12 ώρες, το βγάζουμε και το αφήνουμε να κρυώσει ελαφρώς και το στεγνώνουμε. Δείτε την Εικόνα 1 για ακατέργαστα δείγματα Cistanche deserticola και Cistanche deserticola βρασμένα με κρασί.

2.2 Μελέτη για τη διαφορά των συστατικών του Cistanche deserticola πριν και μετά το βράσιμο στο κρασί

2.2.1 Παρασκευή διαλύματος

Πάρτε περίπου {{{0}}.2 g ξηρής σκόνης δείγματος (πέρασμα από 65-δικτυωτό κόσκινο), ζυγίστε με ακρίβεια, τοποθετήστε το σε καφέ ογκομετρική φιάλη 50 mL, προσθέστε 25 mL μεθανόλης 50% υδατικό διάλυμα, σφραγίστε καλά, ζυγίστε τη μάζα, μουλιάστε για 30 λεπτά, επεξεργαστείτε με υπερήχους για 40 λεπτά (ισχύς 250 W, συχνότητα 35 kHz), ψύξτε, ζυγίστε ξανά, προσθέστε υδατικό διάλυμα μεθανόλης 50% για να αναπληρώσετε τη χαμένη μάζα, ανακινήστε καλά, αφήστε το να σταθεί, διηθήστε το υπερκείμενο μέσω μιας μικροπορώδους μεμβράνης φίλτρου 0,22 μm και τοποθετήστε το διήθημα σε καφέ φιάλη υγρής φάσης για να λάβετε το διάλυμα.

ΠΩΛΕΙΤΑΙ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE ΥΨΗΛΗΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ

2.2.2 Χρωματογραφικές συνθήκες

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 χρωματογραφική στήλη (100 mm×2,1 mm, 1,7 μm), θερμοκρασία στήλης 35 μοίρες ; Θερμοκρασία θαλάμου δείγματος 10 βαθμών, όγκος έγχυσης δείγματος 3 μL, μεθανόλη (A)-0.1% υδατικό διάλυμα μυρμηκικού οξέος (Β) ως κινητή φάση, έκλουση βαθμίδωσης: 0-4 min, 10%{ {13}}% μεθανόλη; 4-18 min, 26%-40% μεθανόλη; 18-24 min, 40%-100% μεθανόλη; 24-28 min, 100% μεθανόλη. Ο ρυθμός ροής όγκου ήταν 0,3 mL/min και το μήκος κύματος ανίχνευσης ήταν 330 nm.

2.2.3 Συνθήκες φασματομετρίας μάζας

Χρησιμοποιήθηκε πηγή ιονισμού ηλεκτροψεκασμού (ESI), σάρωση σε λειτουργία αρνητικού ιόντος, θερμοκρασία τριχοειδών ήταν 350 μοίρες, ο ρυθμός ροής όγκου αερίου θήκης ήταν 30 arb, ο ρυθμός ροής βοηθητικού όγκου αερίου ήταν 10 arb, η τάση ψεκασμού ήταν 3

KV, η τριχοειδής τάση ήταν −35 V, η τάση φακού σωλήνα ήταν −110 V, η περιοχή σάρωσης ήταν m/z 100-1 000, το σύστημα συλλογής δεδομένων ήταν Xcalibur 2.1.

2.2.4 Ανάλυση βασικών στοιχείων (PCA)

Αφού λάβετε τη δισδιάστατη μήτρα των ακριβών ζευγών δεδομένων χρόνου διατήρησης μάζας, ο πίνακας οργάνων θα εμφανίσει όλες τις αυτόματα εισαγόμενες ακριβείς πληροφορίες χρόνου διατήρησης και η μέθοδος PCA της εκτεταμένης μονάδας στατιστικών στοιχείων θα χρησιμοποιηθεί για ανάλυση.

2.2.5 Ορθογώνια ανάλυση διάκρισης ελαχίστων τετραγώνων (OPLS-DA) Το LCMS συνδυάζει τον υψηλό διαχωρισμό της υγρής χρωματογραφίας με την υψηλή ευαισθησία της φασματομετρίας μάζας. Τα δεδομένα που συλλέγονται είναι αρκετά μεγάλα και απαιτείται πολυπαραγοντική στατιστική ανάλυση για την επεξεργασία των δεδομένων. Το OPLS-DA διαιρεί τα δεδομένα σε δύο ομάδες και χρησιμοποιεί ένα εποπτευόμενο στατιστικό μοντέλο για να αποκτήσει μεγάλο αριθμό ορθογωνοποιημένων φασμάτων, τα οποία δείχνουν ξεκάθαρα τις διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων δειγμάτων. Στην πρόσθετη μορφή σχήματος S-Plot, κάθε σημείο αντιπροσωπεύει ένα ακριβές ζεύγος δεδομένων χρόνου διατήρησης μάζας, ο άξονας Χ αντιπροσωπεύει τη μεταβλητή, όσο πιο μακριά είναι το σημείο δεδομένων από το σημείο μηδέν, τόσο μεγαλύτερη είναι η συμβολή του σημείου στη διαφορά δείγματος ; ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει τη συσχέτιση μεταξύ δειγμάτων στην ίδια ομάδα δειγμάτων, όσο πιο μακριά είναι το ακριβές ζεύγος δεδομένων μάζας και χρόνου συγκράτησης από το σημείο μηδέν, τόσο ισχυρότερη είναι η συσχέτιση. Επομένως, τα ακριβή ζεύγη δεδομένων χρόνου κατακράτησης μάζας και στα δύο άκρα της καμπύλης σχήματος S αντιπροσωπεύουν τα πιο αξιόπιστα χαρακτηριστικά ιόντα από κάθε ομάδα δειγμάτων.

ΠΩΛΕΙΤΑΙ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE ΥΨΗΛΗΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ

2.2.6 Ανάλυση δομής φασματομετρίας μάζας

Μετά τη λήψη των χαρακτηριστικών ιόντων, η σύνθεση του στοιχείου και η αντιστοίχιση της ένωσης πραγματοποιήθηκαν με τον υπολογισμό της ακριβούς σχετικής μοριακής μάζας και τον συνδυασμό της υπάρχουσας βάσης δεδομένων και της σχετικής βιβλιογραφίας για τον προσδιορισμό των διαφορικών συστατικών.

2.3 Μελέτη για τη διαφορά στην αποτελεσματικότητα πριν και μετά το βράσιμο με κρασί

2.3.1 Παρασκευή εκχυλίσματος Cistanche deserticola

Το Cistanche deserticola (αριθμός παρτίδας 160901) και η αντίστοιχη σκόνη Cistanche deserticola βρασμένο με κρασί εκχυλίστηκαν σύμφωνα με τις συνθήκες υπό "2.2.1", διηθήθηκαν μετά από επεξεργασία με υπερήχους, επαναλήφθηκαν δύο φορές, το διήθημα συνδυάστηκε, συμπυκνώθηκε με απόσταξη υπό κενό και καταψύχθηκε αποξηραμένα.

2.3.2 Ομαδοποίηση πειραμάτων σε ζώα και χορήγηση φαρμάκων

Εικ. 1 Cistanches Herba A και Cistanches Herba B με κρασιά

(1) Ομαδοποίηση: Οι αρουραίοι είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε νερό και δίαιτα. Μετά από 1 εβδομάδα προσαρμοστικής σίτισης, χωρίστηκαν τυχαία σε 5 ομάδες (Πίνακας 2), με 10 αρουραίους σε κάθε ομάδα, συγκεκριμένα κανονική ομάδα, ομάδα μοντέλου, ομάδα ωμής Cistanche deserticola (PR), ομάδα Cistanche deserticola με κρασιά (PW) , και θετικός έλεγχος ομάδα χαπιών Jinkui Shenqi (JK). (2) Μοντελοποίηση: Εκτός από την κανονική ομάδα, στις άλλες τέσσερις ομάδες ενέθηκαν όλες με ένεση ηλεκτρικής υδροκορτιζόνης νατρίου, με δόση 20 mg/kg, για 14 διαδοχικές ημέρες. Η φυσιολογική ομάδα εγχύθηκε με την ίδια δόση φυσιολογικού ορού. Η γενική κατάσταση των αρουραίων σε κάθε ομάδα παρατηρήθηκε για να καθοριστεί εάν εμφάνιζαν συμπτώματα όπως φόβο για το κρύο, προτίμηση για ζεστασιά, κρύα άκρα, καθαρά και μακριά ούρα, κουλουριασμένες και καμαρωτές πλάτες, θαμπά και ακατάστατα μαλλιά και ψυχική κατάθλιψη. Ταυτόχρονα, μετρήθηκαν το σωματικό βάρος, ο αριθμός των αυθόρμητων δραστηριοτήτων, η πρόσληψη τροφής, η πρόσληψη νερού, η παραγωγή ούρων και άλλοι δείκτες των αρουραίων σε κάθε ομάδα.

(3) Χορήγηση: Η δόση των αρουραίων υπολογίστηκε με βάση την κλινική δόση των χαπιών Jinkui Shenqi και του Cistanche deserticola. Η δόση κάθε ομάδας Cistanche deserticola ήταν 1,80 g/kg ως προς την ποσότητα ακατέργαστου φαρμάκου. Η ειδική δοσολογία φαίνεται στον Πίνακα 2. Κάθε εκχύλισμα από Cistanche deserticola και χάπια Jinkui Shenqi παρασκευάστηκε σε διαλύματα ορισμένης συγκέντρωσης με απιονισμένο νερό. Το διάλυμα χορηγήθηκε ενδογαστρικά κάθε μέρα με ενδογαστρικό όγκο 10 mL/kg για 30 διαδοχικές ημέρες. Η φυσιολογική ομάδα και η ομάδα μοντέλου χορηγήθηκαν ενδογαστρικά με ίσο όγκο απιονισμένου νερού κάθε μέρα. Το σωματικό βάρος μετρήθηκε εβδομαδιαία και ο ενδογαστρικός όγκος προσαρμόστηκε σύμφωνα με το σωματικό βάρος των αρουραίων. Μετά τη χορήγηση, οι αρουραίοι έμειναν νηστικοί για 12 ώρες. Μετά την αναισθησία με πεντοβαρβιτάλη, συλλέχθηκε αίμα από την κοιλιακή αορτή για ανίχνευση δείκτη ορού. Τα νεφρά, οι όρχεις, η επιδιδυμίδα, οι σπερματοδόχοι και ο προστάτης αφαιρέθηκαν για ανίχνευση σχετικού δείκτη.