Τριφθορομεθυλιωμένες ισοξαζόλες με βάση φλαβονοειδή ως αντιδιαβητικά και κατά της παχυσαρκίας παράγοντες: σύνθεση, in vitro ανασταλτική δράση αμυλάσης, μοριακή σύνδεση και ανάλυση σχέσης δομής-δραστικότητας

Παρακαλώ επικοινώνησεoscar.xiao@wecistanche.comγια να μάθετε περισσότερα

Faisal K. Algethami 1,*, Ilyes Saidi 2, Hani Nasser Abdelhamid 3, Mohamed R. Elamin 1, Babiker Y. Abdulkhair 1, Amani Chrouda 4 και Hichem Ben Jannet 2,*

Αφηρημένη:Ο σακχαρώδης διαβήτης είναι ένα σημαντικό πρόβλημα υγείας παγκοσμίως. Η διαχείριση της πέψης των υδατανθράκων παρέχει μια εναλλακτική θεραπεία.Φλαβονοειδήαποτελούν τη μεγαλύτερη ομάδα τωνπολυφαινολικόενώσεις, που παράγονται από φυτά που καταναλώνονται ευρέως ως τρόφιμα ή/και χρησιμοποιούνται για θεραπευτικούς σκοπούς. Ως εκ τούτου, οι ισοξαζόλες έχουν προσελκύσει την προσοχή των φαρμακοχημικών λόγω της σημαντικής βιοδραστικότητας τους. Έτσι, ο κύριος στόχος αυτής της εργασίας ήταν η ανακάλυψη νέων υβριδικών μορίων με ιδιότητες τόσο των φλαβονοειδών όσο και των ισοξαζολών για τον έλεγχο της πέψης των υδατανθράκων. Επιπλέον, η ομάδα τριφθορομεθυλίου είναι μια βασική οντότητα στην ανάπτυξη φαρμάκων, λόγω της ισχυρής λιποφιλικότητας και της μεταβολικής της σταθερότητας. Επομένως, η παρούσα εργασία περιγράφει τη συμπύκνωση μιας φλαβονόλης τριφθορομεθυλίωσης που είχε συντεθεί προηγουμένως με διαφορετικά οξείδια αρυλ νιτριλίου, δίνοντας 13 υβριδικά μόρια που υποδεικνύονται ως ισοξαζόλες με βάση φλαβονοειδή τριφθορομεθυλίωσης. Οι δομές των ληφθέντων ενώσεων συνήχθησαν από ανάλυση 1Η NMR, 13C NMR και HRMS. Οι 15 νεοσυντιθέμενες ενώσεις ανέστειλαν τη δράση της -αμυλάσης με αποτελεσματικότητα που κυμαίνεται από 64,5 ± 0,7 τοις εκατό έως 94,7 ± 1,2 τοις εκατό σε συγκέντρωση 50 μΜ και με τιμές IC50 12,6 ± 0,2 μΜ–27,6 ± 1,1 μΜ. Οι πιο αποτελεσματικές ενώσεις όσον αφορά την αποτελεσματικότητα και την ισχύ ήταν οι 3b, 3h, 3j και 3m. Μεταξύ των νέων τριφθορομεθυλίωσηςμε βάση τα φλαβονοειδήισοξαζόλες, η ένωση 3b ήταν ο πιο αποτελεσματικός αναστολέας της δραστηριότητας -αμυλάσης (PI=94.7 ± 1,2 τοις εκατό στα 50 μΜ), με ισχύ (IC50=12.6 ± { {13}}.2 μΜ) παρόμοια με εκείνη της ακαρβόζης θετικού μάρτυρα (IC50=12.4 ± 0.1 μΜ). Η μελέτη της σχέσης δομής-δραστικότητας με βάση την ανάλυση μοριακής σύνδεσης έδειξε χαμηλή ενέργεια δέσμευσης, σωστό τρόπο αλληλεπίδρασης στον ενεργό θύλακα του ενζύμου στόχου και ικανότητα αλληλεπίδρασης με τα βασικά υπολείμματα της γλυκοσιδικής διάσπασης (GLU{16 }} και ASP-206), εξηγώντας τις ανασταλτικές επιδράσεις της -αμυλάσης που δημιουργείται από διάφορα παράγωγα.

Λέξεις-κλειδιά:-αναστολή αμυλάσης; αντιδιαβητικός; κατά της παχυσαρκίας? κυκλοπροσθήκη; φλαβονοειδή; τριφθορομεθυλίωση ισοξαζόλες με βάση φλαβονοειδή. μοριακή σύνδεση? Ανάλυση SAR

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

1. Εισαγωγή

Ευσαρκίακαι ο σακχαρώδης διαβήτης αποτελούν σημαντικά προβλήματα υγείας του ανθρώπου παγκοσμίως [1,2]. Πράγματι, ο σακχαρώδης διαβήτης χαρακτηρίζεται κυρίως από το μη ελεγχόμενο σάκχαρο στο αίμα. Ωστόσο, ο σακχαρώδης διαβήτης τύπου 1 προκύπτει από διαταραχή της έκκρισης ινσουλίνης (ινσουλινοεξαρτώμενος), ενώ ο τύπος 2 συνήθως προέρχεται από αντίσταση στην ινσουλίνη (αλλαγές της δομής του υποδοχέα στα κύτταρα-στόχους, που οδηγούν σε μείωση της συγγένειας ορμόνης-υποδοχέα), διαταραχή στην έκκριση ινσουλίνης ή και στα δύο [3,4]. Αναπόφευκτα, η αναστολή της αποδόμησης των πολυσακχαριτών σε μονοσακχαρίτες κατάλληλους για απορρόφηση στα κύτταρα εφαρμόζει θεμελιώδεις στρατηγικές για τον έλεγχο του διαβήτη και τη βοήθεια στη διαχείριση της παχυσαρκίας [3]. Το ένζυμο -αμυλάση (EC.3.2.1.1) είναι ένα πεπτικό ένζυμο που υδρολύει -1,4-γλυκοζιτικούς δεσμούς υδατανθράκων, όπως τα άμυλα [5]. Επομένως, η αναστολή της αμυλάσης συμβάλλει με τον ένα ή τον άλλο τρόπο στον έλεγχο της πέψης των υδατανθράκων [6,7]. Έτσι, αποτελεί ένα μερικό μονοπάτι για τη ρύθμιση της ενζυμικής δραστηριότητας της -αμυλάσης. Ως εκ τούτου, είναι μια ιδανική θεραπεία για τη ρύθμιση της παχυσαρκίας και του διαβήτη, καθώς και των σχετικών επιπλοκών τους [4]. Η πλειονότητα των εμπορικών αναστολέων αμυλάσης -όπως η ακαρβόζη, η μιγλιτόλη, η φαζολαμίνη και η βογλιβόζη- έχουν συσχετιστεί με εντερικές παρενέργειες, όπως μετεωρισμός, κοιλιακό άλγος, διάρροια, ηπατική ανεπάρκεια, σοβαρές δερματικές αλλεργίες και πνευματώδης κυστοειδής εντερική λοίμωξη [6. ]. Οι καλύτεροι αναστολείς -αμυλάσης είναι οι λεγόμενοι ανταγωνιστικοί αναστολείς, οι οποίοι αναστέλλουν το ένζυμο μη αναστρέψιμα. Ένας ανταγωνιστικός αναστολέας συνδέεται με την ενεργό θέση του ενζύμου στόχου και, έτσι, εμποδίζει τη δέσμευση του υποστρώματος. Επομένως, στην ανταγωνιστική αναστολή, ο αναστολέας ανταγωνίζεται το υπόστρωμα για την ενεργό θέση. Από την άλλη πλευρά, σε μη αναστρέψιμη αναστολή, ο αναστολέας διαχωρίζεται πολύ αργά από το ένζυμο στόχο, καθώς έχει συνδεθεί στενά με το ένζυμο. Συνήθως, οι μη αναστρέψιμοι αναστολείς συνδέονται ομοιοπολικά στην ενεργό θέση του ενζύμου τροποποιώντας τα υπολείμματα ή τις λειτουργικές ομάδες που είναι απαραίτητες για την ενζυματική δραστηριότητα, έτσι ώστε το ένζυμο να αναστέλλεται μη αναστρέψιμα. Για μια καλή αναστολή της πέψης των υδατανθράκων - η οποία μπορεί να βοηθήσει στον έλεγχο της παχυσαρκίας, ακόμη και του διαβήτη τύπου 2 - χρειαζόμαστε μια μη εκλεκτική ουσία ικανή να αναστέλλει τα περισσότερα πεπτικά ένζυμα των σακχάρων, δηλαδή την αμυλάση του σάλιου, την παγκρεατική αμυλάση και τη γλυκοσιδάση [8,9]. Προηγούμενη έρευνα για ημι-συνθετικά φλαβονοειδή διαπίστωσε ότι τα παράγωγα φλαβονοειδών με βάση την ισοξαζόλη εμφάνισαν σημαντικά αντιδιαβητικά αποτελέσματα ενισχύοντας την πρόσληψη γλυκόζης σε ανθεκτικά στην ινσουλίνη κύτταρα HepG2 [10]. Επιπλέον, τα φλαβονοειδή είναι η μεγαλύτερη ομάδα πολυφαινολικών δευτερογενών μεταβολιτών, που βρίσκονται συνήθως στα φυτά. Αυτοί οι δευτερογενείς μεταβολίτες είναι υπεύθυνοι για τα ελκυστικά χρώματα των οπαδών, των φρούτων και των φύλλων [11]. Δομικά, τα φλαβονοειδή έχουν έναν σκελετό άνθρακα C15 που αποτελείται από δύο αρωματικούς δακτυλίους (Α) και (Β), οι οποίοι συνδέονται μεταξύ τους με μια αλυσίδα C3 που σχηματίζει τον ετερόκυκλο (C) [12]. Πολλές βιολογικές ιδιότητες έχουν αναφερθεί για αυτόν τον τύπο πολυφαινολικής ένωσης, όπως η αναστολή της αμυλάσης [7,13-15], η αντιδιαβητική [16,17], η αντικαρκινική [18,19] καιαντιοξειδωτικόεπιδράσεις [20] και άλλες βιολογικές δραστηριότητες [21-25]. Ωστόσο, αυτό το πλούσιο βιολογικό προφίλ έχει παρακινήσει αρκετές χημικές ερευνητικές ομάδες να συνθέσουν φλαβονοειδή με ειδικά τμήματα και υποκαταστάτες για να στοχεύσουν συγκεκριμένες βιολογικές δραστηριότητες [26-30]. Από την άλλη, η ισοξαζόλη είναι ένας πενταμελής ετερόκυκλος μεγάλης σημασίας στη φαρμακευτική χημεία. Επιπλέον, οι φυσικές ισοξαζόλες -όπως το ιμοτενικό οξύ (παραισθησιογόνο, νευροτοξίνη) και η μουσκιμόλη (παραισθησιογόνος, ανταγωνιστής των υποδοχέων GABAA) [31-34]- έχουν προσελκύσει αυξανόμενη προσοχή από χημικούς και φαρμακολόγους λόγω των ισχυρών βιολογικών και φαρμακολόγων ιδιοτήτων τους. Επιπλέον, αποκαλύπτεται ότι τα παράγωγα ισοξαζόλης διαθέτουν ένα ευρύ φάσμα βιολογικών ιδιοτήτων, όπως αντιδιαβητικές, αναλγητικές, αντιφλεγμονώδεις, αντι-HIV και αντικαρκινικές δραστηριότητες [10,35-40]. Ο δακτύλιος ισοξαζόλης έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως ως βασικό δομικό στοιχείο για φάρμακα όπως η ζονισαμίδη (αντισπασμωδικό) [41], η βαλδεκοξίμπη, η παρεκοξίμπη (αναστολείς COX-2) [42] και η λεφλουνομίδη (αντιρευματική) [43]. Τις τελευταίες δεκαετίες, η ομάδα τριφθορομεθυλίου έχει αυξανόμενη ζήτηση για την ανάπτυξη βιοδραστικών ενώσεων, λόγω του ισχυρού χαρακτήρα της που αποσπά ηλεκτρονίων, της μεταβολικής της σταθερότητας και της λιπόφιλης φύσης της, που θεωρούνται σημαντικές φυσικοχημικές ιδιότητες των βιοδραστικών μορίων [44]. Αυτό το φθοριούχο τμήμα βρέθηκε ότι είναι απαραίτητο σε πολλά σημαντικά φάρμακα, όπως η φλουφαιναζίνη (αντιψυχωσικό, αντικαρκινικό) [45], η λεφλουνομίδη (αντιρευματική) [43], η σελεκοξίμπη (COX-2 εκλεκτικός αναστολέας) [46], η φλουοξετίνη (αντικαταθλιπτικό) [47] και φλουαζινάμ (μυκητοκτόνο) [48]. Μια ανασκόπηση της βιβλιογραφίας αναφέρει ότι η τριφθορομεθυλίωση 5-αμινο-νικοτινικού οξέος έχει αναφερθεί ότι παρουσιάζει πολλά υποσχόμενη δράση -αμυλάσης [49]. Επιπλέον, τα χλωριωμένα υβριδικά μόρια πυραζόλης-θειαζόλης βρέθηκαν να είναι καλοί αναστολείς του ενζύμου -αμυλάση [50], γεγονός που υποδεικνύει επίσης τη σημασία του ατόμου χλωρίου στις ανασταλτικές δομές της αμυλάσης. Τα παραπάνω βιβλιογραφικά δεδομένα που αναφέρουν τις σημαντικές φυσικοχημικές ιδιότητες της ομάδας τριφθορομεθυλίου - και τη συμβολή της, μαζί με τα φλαβονοειδή και τις ισοξαζόλες, στην αναστολή της -αμυλάσης και στην άσκηση αντιδιαβητικών ενεργειών- μας ενθάρρυναν να παρασκευάσουμε μια νέα σειρά υβριδικών μορίων, όπου ένα φλαβονοειδές τριφθορομεθυλίωσης έχει συσχετίζεται με μια σειρά αρυλ ισοξαζολών μέσω ενός συνδέτη μεθυλενίου και για την αξιολόγηση της ανασταλτικής τους δύναμης του ενζύμου -αμυλάση. Η σχέση δομής-δραστικότητας (SAR) μελετήθηκε και εγκρίθηκε μέσω ανάλυσης μοριακής σύνδεσης.

Cistanche για τη βελτίωση του ανοσοποιητικού

2. Αποτελέσματα και Συζήτηση

2.1. Χημεία Η παρασκευή μιας φλαβονόλης τριφθορομεθυλίωσης (1)—που είχε συντεθεί προηγουμένως στο εργαστήριό μας και παρουσίαζε ενδιαφέρον κυτταροτοξικό δυναμικό— αναφέρθηκε σύμφωνα με τη διαδικασία που υιοθετήθηκε από τους Znati et al. (2019) [30]. 5-Χλωρο-2-υδροξυ ακετοφαινόνη συμπυκνώθηκε με 4-(τριφθορομεθυλ)βενζαλδεΰδη υπό αναρροή μεθανόλης και παρουσία υδροξειδίου του νατρίου για 3 ώρες για να παραχθεί 5-χλωρό{10 }}(τριφθορομεθυλ)-2-υδροξυ χαλκόνη. Στη συνέχεια, ο πυρανικός δακτύλιος (C) κυκλοποιήθηκε και ο άνθρακας C{12}} οξειδώθηκε με την προσθήκη (H2O2, NaOH) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (Σχήμα 1). Το μόριο 1 ελήφθη με καλή απόδοση (79 τοις εκατό), μετά από καθίζηση σε παγωμένο νερό. Σχήμα 1. Συνθετική οδός της φλαβονόλης τριφθορομεθυλίωσης (1). Η δομή της φλαβονόλης (1) επιβεβαιώθηκε μέσω φασματοσκοπικής ανάλυσης και με σύγκριση με δεδομένα της βιβλιογραφίας [30]. Η 1,3-διπολική κυκλοπροσθήκη είναι μια χημική αντίδραση μεταξύ ενός 1,3-διπόλου και ενός διπολόφιλου για να σχηματιστεί ένας πενταμελής δακτύλιος. Ως εκ τούτου, η 1,3-διπολική κυκλοπροσθήκη θεωρείται ο πιο σημαντικός τρόπος σύνθεσης ενός ευρέος φάσματος ισοξαζολών. Επιπλέον, η τοποειδική σύνθεση ισοξαζολών που καταλύεται από Cu(I) υπό ακτινοβολία μικροκυμάτων βασίζεται στην [3 συν 2] κυκλοπροσθήκη μεταξύ τερματικών αλκυνίων (διπολόφιλα) και αρυλο νιτριλικών οξειδίων (δίπολα), παρέχοντας αποκλειστικά 3,{33}}διυποκατεστημένα τοποϊσομερή [39,51]. Η προσέγγισή μας για τη στόχευση των φλαβονοειδών ισοξαζολών τριφθορομεθυλίωσης (3a–m), ξεκίνησε αρχικά με την παρασκευή του διπολαρόφιλου (2) μέσω της προπαργυλίωσης της ομάδας υδροξυλίου στη θέση C-3 της φλαβονόλης (1) σε άνυδρο DMF για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, παρουσία K2CO3, όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 2. Το διπολόφιλο (2) παρασκευάστηκε με εξαιρετική απόδοση (94 τοις εκατό). Σχήμα 2. Συνθετική οδός του διπολόφιλου (2).

Η δομή της ένωσης 2 καθορίστηκε σύμφωνα με τα φασματικά δεδομένα της. Πράγματι, εκτός από τα σήματα που αντιστοιχούν στα πρωτόνια και τους άνθρακες που εισάγονται από τη φλαβονόλη (1), ανιχνεύθηκαν νέα σήματα του προπαργυλικού τμήματος στα φάσματα NMR 1Η και 13C. Επιπλέον, το φάσμα 1H NMR του διπολόφιλου (2), που καταγράφηκε σε CDCl3 στα 300 MHz, έδειξε διπλή σε δΗ 5,06 (2H, d, J=2},4 Hz) που αντιστοιχεί στο πρωτόνιο μεθυλενίου Η{{13 }}" και μια τριάδα στο δΗ 2,36 (1Η, t, J=2,4 Hz) που αποδίδεται στο πρωτόνιο της ομάδας αιθυνυλίου (Η-3"). Το φάσμα 13C NMR επιβεβαίωσε την εισαγωγή της προπαργυλικής ομάδας με την παρατήρηση νέων σημάτων στα δC 78.4, 76.9 και 59.6, που αποδίδονται στα C-2", C-3", και C{{29} }", αντίστοιχα. Τα υδροξιμυλοχλωρίδια a-m είναι οι κύριοι πρόδρομοι για τις in situ γενιές αρυλονιτριλικών οξειδίων—αντιδραστηρίων που συμμετέχουν στην αντίδραση 1,3-διπολικής κυκλοπροσθήκης για τη σύνθεση ισοξαζολών. Οι πρόδρομοι (α –m) συντέθηκαν από τις κατάλληλες αλδεΰδες σύμφωνα με τη γενική διαδικασία που περιγράφεται από τους Himo et al. (2005) [51] Τα επιθυμητά υδροξυχλωρίδια (a–m) ελήφθησαν με καλές αποδόσεις, που κυμαίνονται από 80 έως 98 τοις εκατό (Πίνακας 1) Έτσι, τα αντίστοιχα αρυλο-νιτριλικά οξείδια σχηματίστηκαν in situ με αφυδροαλογόνωση των αντίστοιχων υδροξυχλωριδίων χρησιμοποιώντας την τριαιθυλαμίνη ως βάση. -Μ).

Η 1,3-διπολική αντίδραση κυκλοπροσθήκης εφαρμόστηκε σε μια γεωειδική προσέγγιση χρησιμοποιώντας το τερματικό αλκίνιο (2) και τα διαφορετικά υδροξυχλωρίδια (a–m) υποκατεστημένα με διάφορους τρόπους (Σχήμα 3). Τα ληφθέντα αποτελέσματα παρατίθενται στον Πίνακα 1. Σχήμα 3. Συνθετική οδός του φλαβονοειδούς ισοξαζολών τριφθορομεθυλίωσης 3a–m. Όλες οι αντιδράσεις διεξήχθησαν υπό ακτινοβολία μικροκυμάτων (250 W) σε DMF παρουσία τριαιθυλαμίνης και ιωδιούχου χαλκού (CuI) για 5 λεπτά. Τα προϊόντα απομονώθηκαν από το μίγμα της αντίδρασης με απλό καθαρισμό σε στήλη πυριτικής πηκτής. Τα πρόσφατα παρασκευασμένα 3,{{1{0}}διυποκατεστημένα ισοξαζόλια (3a–m) ελήφθησαν σε αποδόσεις που κυμαίνονται από 73 έως 96 τοις εκατό (Πίνακας 1). Οι δομές των συντιθέμενων ισοξαζολών με βάση φλαβονοειδή τριφθορομεθυλίωσης (3a–m) (Πίνακας 1) προσδιορίστηκαν μέσω 1H, 13C NMR και DEPT 135. Τα φάσματα 1H NMR αυτών των ενώσεων έδειξαν έναν απλό συντονισμό σε δΗ 6.3{{6 }}–6,60 που αποδίδεται στο πρωτόνιο μεθίνης H{-4" του δακτυλίου ισοξαζόλης, ένα άλλο μονό σε δΗ 5,35–5,45 που αποδίδεται στο πρωτόνιο μεθυλενίου Η-6", και άλλα σήματα στο η ζώνη αρωματικού πρωτονίου που σχετίζεται με τα πρωτόνια που εισάγονται από την αρυλομάδα. Επιπλέον, αυτές οι δομές επιβεβαιώθηκαν από τα φάσματα 13C NMR και DEPT 135, δείχνοντας όλα τα αναμενόμενα σήματα άνθρακα—ειδικά τα αρωματικά που εισάγονται από τα χρησιμοποιημένα υδροξυχλωρίδια, καθώς και τον άνθρακα της μεθίνης C-4» του ο δακτύλιος ισοξαζόλης που αντηχεί σε δC 1{{9{{1{{{1{{05}}0}}}}2,5–103.0 και αυτό του οποίου το σήμα είναι ανεστραμμένο στο φάσμα DEPT 135, που συντονίζεται σε δC 63,5–63,9, που αποδίδεται στο μεθυλένιο C-6". 2.2. Εκτίμηση της αναστολής -αμυλάσης Για τον έλεγχο της ενζυμικής δραστηριότητας, η αναστολή είναι ένα από τα πιο επιτυχημένα θεραπευτικά μέσα. Επομένως, η αναστολή του ενζύμου -αμυλάση αποτελεί μια μερική οδό για τη διαχείριση του διαβήτη και τον έλεγχο του βάρους, παρεμποδίζοντας την πέψη των υδατανθράκων. Μέχρι σήμερα, φάρμακα όπως η ακαρβόζη έχουν αποτελέσει μέρος του οπλοστασίου των φαρμάκων που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία του ΣΔ και της παχυσαρκίας. Ωστόσο, η ακαρβόζη δεν χρησιμοποιείται ως μονοθεραπεία, λόγω της αποτελεσματικότητάς της και των παρενεργειών της. Αντίθετα, η ακαρβόζη χρησιμοποιείται ως συμπληρωματική θεραπεία και πολύ συχνά χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με άλλα υπογλυκαιμικά φάρμακα. Μαζί με αυτό, αυτό το φάρμακο χρησιμοποιείται συνήθως ως τυπική ένωση στη μελέτη της αναστολής της αμυλάσης. Σε αυτή τη μελέτη, οι 15 συντιθέμενες ενώσεις (1, 2 και 3a–m) αξιολογήθηκαν για την ανασταλτική τους δράση στην αμυλάση. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν σε παραμέτρους ισχύος (IC50 ± SEM μM) και αποτελεσματικότητας (PI σε 50 μΜ) και δίνονται στον Πίνακα 2. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα, τα μόρια που συντέθηκαν (1, 2, και 3a–m) κατείχαν δηλωτική δράση κατά της- -αμυλάσης (p Λιγότερο ή ίσο με 0.05), με αποτελεσματικότητα που κυμαίνεται από 64,5 ± {{177} }.7 έως 94.7 ± 1.2 τοις εκατό σε συγκέντρωση 50 μΜ και ισχύς τιμών IC5{{2{{2{07}}2}} που κυμαίνονται από 12.6 ± {{219} }.2 έως 27.6 ± 1.1 μΜ. Μεταξύ των πρόσφατα παρασκευασμένων ισοξαζολών με βάση φλαβονοειδή τριφθορομεθυλίωσης, το 3b (R1=F, R{2=H) βρέθηκε να είναι το πιο ισχυρό (IC50=12.6 ± 0.2 μΜ) και το πιο αποτελεσματική (PI=94.7 ± 1,2 τοις εκατό στα 50 μΜ) ένωση για την αναστολή της δραστηριότητας του ενζύμου -αμυλάση. Αυτές οι σημαντικές τιμές βρέθηκαν να είναι συγκρίσιμες με εκείνες της ακαρβόζης (PI=97,8 ± 0,5 τοις εκατό στα 50 μΜ· IC50=12,4 ± 0,1 μΜ), που χρησιμοποιείται ως τυπική ουσία. Ομοίως, οι ενώσεις 3h, 3j και 3m μπορούν να θεωρηθούν βιοδραστικές όσον αφορά την αποτελεσματικότητα και την ισχύ (PI{110}}.1 ± 0,9 τοις εκατό –93,5 ± 1,1 τοις εκατό στα 50 μΜ· IC50=13.3 ± 0,2 µM–13,8 ± 0,1 µM) σε σύγκριση µε το ανάλογό τους 3b και την ακαρβόζη. Οι υπόλοιπες ενώσεις (1, 2, 3a, 3c, 3d, 3e, 3f, 3g, 3i, 3k, και 3l) βρέθηκε επίσης ότι είναι ικανές να αναστέλλουν το ένζυμο -αμυλάση, αλλά παραμένουν λιγότερο αποτελεσματικές (PI{{ 140}}.5 ± 0.7 τοις εκατό -87.1 ± 0.7 τοις εκατό στα 50 μΜ· IC50=14.4 ± 0.2 μΜ έως 27.6 ± 1.1 μΜ) από τα προαναφερθέντα ανάλογα. Η δράση κατά της αμυλάσης που επιτυγχάνεται από τις συντιθέμενες ενώσεις είναι σύμφωνη με προηγούμενες αναφορές, μεταξύ των οποίων οι Nie et al. (2020) [10] ανέφερε ότι οι ισοξαζόλες με βάση τα φλαβονοειδή θα μπορούσαν να εμφανίσουν πολύτιμα ικριώματα για την ανακάλυψη αντιδιαβητικών φαρμάκων. Συγκρίνοντας τις δομές και τις δραστηριότητες των συντιθέμενων μορίων, οι ενώσεις 3bd, αλογονωμένες στη θέση παρα της ομάδας φαινυλίου που συνδέεται με τον δακτύλιο ισοξαζόλης, εμφάνισαν σημαντική αποτελεσματικότητα (PI= 85.4 ± 0,9 τοις εκατό -94,7 ± 1,2 τοις εκατό στο 50 μΜ) και ισχύς (IC50=12.6 ± 0.2 μΜ–14.6 ± 0.3 μΜ) στην αναστολή του ενζύμου -αμυλάση. Αυτό το εύρημα συμφωνεί καλά με τη βιβλιογραφία, δείχνοντας ότι η παρουσία ατόμων αλογόνου (F, Cl, ή Br) στη δομή ήταν απαραίτητη για μια ισχυρή αναστολή της αμυλάσης [49,50]. Επιπλέον, η μελέτη σχέσης δομής-δραστηριότητας μας επέτρεψε να συμπεράνουμε ότι τα περισσότερα επαγωγικά αποτελέσματα ελκυστήρα (-I) και μεσομερούς δότη (συν Μ) αυξάνουν την ανασταλτική αποτελεσματικότητα και ισχύ της αμυλάσης (δραστηριότητα του φθοριούχου παραγώγου 3b (R{{186} } F, R2=H; PI=94.7 ± 1,2 τοις εκατό στα 50 μΜ, IC50=12.6 ± 0,2 μΜ) είναι υψηλότερο από αυτό του χλωριωμένου παραγώγου 3c (R{ {198}} Cl, R2=H· PI=87.1 ± 0.7 τοις εκατό στα 50 μΜ· IC50=14.4 ± 0.2 μΜ), ακολουθούμενο από το βρωμιούχο παράγωγο 3d (R 1=Br, R2=H; PI=85.4 ± 0,9 τοις εκατό στα 50 μΜ· IC{50=14.6 ± 0,3 μΜ)), σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [ 4,49]. Είναι προφανές ότι η αναστολή της -αμυλάσης αυξάνεται με τα αποτελέσματα του επαγωγικού ελκυστήρα (-I) και του μεσομερούς δότη (συν Μ) των ατόμων αλογόνου.

2.3. Μελέτες Molecular DockingΤο ένζυμο -αμυλάση (EC 3.2.1.1)—μια γλυκοσυλική υδρολάση—υδρολύει -1,4-γλυκοσιδικούς δεσμούς σε άμυλα, όπως η αμυλόζη. Η κρυσταλλική δομή του ενζύμου -αμυλάση (PDB: 7TAA) αποτελείται από μια αλυσίδα Α με μήκος αλληλουχίας 478 αμινοξέων [52]. -Η αμυλάση είναι ένα από τα πιο σημαντικά βασικά ένζυμα που είναι υπεύθυνα για την πέψη των υδατανθράκων [5]. Έτσι, ο αποκλεισμός του ενζύμου -αμυλάση προσφέρει μια στρατηγική για τον έλεγχο του διαβήτη και βοηθά στη διαχείριση της παχυσαρκίας [6,7]. Εκτενής ανάλυση μοριακής σύνδεσης εκτελέστηκε για να διερευνήσει τον τρόπο δέσμευσης, να καθορίσει τις πιθανές αλληλεπιδράσεις των συντιθέμενων μορίων (1, 2 και 3a–m) μέσα στον υδρόφοβο θύλακα δέσμευσης του ABC (τροποποιημένος εξασακχαρίτης ακαρβόζης) της κρυσταλλικής δομής πρωτεΐνης του Aspergillus oryzae - ένζυμο αμυλάσης (PDB: 7TAA) [52] χρησιμοποιώντας το λογισμικό AutoDock Vina και εξορθολογίστε την παρατηρούμενη in vitro ανασταλτική δράση της αμυλάσης των πρόσφατα συντεθειμένων ενώσεων. Όλα τα συντιθέμενα μόρια (1, 2 και 3a–m) —και η ακαρβόζη, που χρησιμοποιείται ως τυπική ουσία— μελετήθηκαν σε πυρίτιο. Οι ενέργειες δέσμευσης και οι λεπτομέρειες αλληλεπίδρασης (αριθμός αλληλεπιδράσεων, αριθμός αμινοξέων που αλληλεπιδρούν, αμινοξέα που αλληλεπιδρούν και δεσμοί υδρογόνου) των προσδεμάτων με το ένζυμο στόχο παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Από τα αποτελέσματα σύνδεσης in silico (Πίνακας 2), παρατηρήθηκε ότι οι ενώσεις 1 και 2 εμφάνισαν καλές ενέργειες δέσμευσης (-7,7 και -7,8 kcal/mol, αντίστοιχα) εντός της θέσης δέσμευσης του ενζύμου -αμυλάση (PDB: 7TAA). Αυτές οι τιμές είναι συγκρίσιμες με αυτές της τυπικής ουσίας (ακαρβόζη, −7,9 kcal/mol), επιτρέποντάς της να ταιριάζουν ευνοϊκά στη δραστική θέση του ενζύμου στόχου. Είναι ενδιαφέρον ότι οι πρόσφατα συντιθέμενες ισοξαζόλες τριφθορομεθυλίωσης με βάση φλαβονοειδή (3a–m) έδωσαν τα αναμενόμενα αποτελέσματα. ήταν σωστά στη θέση σύνδεσης και εμφάνισαν θαυμάσιες ενέργειες δέσμευσης που κυμαίνονταν από -9,6 έως -8,2 kcal/mol (Πίνακας 2). Αυτό θα επέτρεπε σε όλα αυτά να ταιριάζουν ευνοϊκά στην ενεργό θέση του ενζύμου -αμυλάση, καλύτερα από την ακαρβόζη. Ο τρόπος δέσμευσης των τριών πιο δραστικών ενώσεων (3b, 3h και 3j) με το ένζυμο στόχο συζητείται παρακάτω. Η ένωση 3b - ο πιο ισχυρός και αποτελεσματικός αναστολέας του ενζύμου -αμυλάση στη δοκιμασμένη σειρά ισοξαζολών τριφθορομεθυλίωσης με βάση φλαβονοειδή - εμφάνισε εξαιρετική ενέργεια δέσμευσης -9,6 kcal/mol. Επιπλέον, ο τρόπος δέσμευσης του 3b υποδηλώνει ότι εμπλέκεται σε 16 μη ομοιοπολικές αλληλεπιδράσεις με 10 αμινοξέα (Πίνακας 2). Εντελώς, το τμήμα 3-(3-({4-φθοροφαινυλ)ισοξαζόλη-5-υλ)μεθοξυλίου σχηματίζει δύο δεσμούς αλογόνου (φθόριο) με το ASP-206, ένα Pi –Pi T-shaped bond with the TYR{-82, a Pi–cation bond with the HIS-80, Molecules 2021, 26, 5214 8 of 18 two συμβατικών δεσμών υδρογόνου με ARG{{71 }}, και ένα Pi-ανιόν και έναν δεσμό άνθρακα-υδρογόνου με κατάλοιπο ASP-340. Επιπλέον, η ομάδα τριφθορομεθυλίου που συνδέεται με το C-40 του σκελετού των φλαβονοειδών εμπλέκεται στη συμβατική δέσμευση υδρογόνου με GLY{-167 και δύο αλκυλικούς δεσμούς με την αμινομάδα LEU{-166 και LEU{-173 οξέα. Από την άλλη πλευρά, ο σκελετός φφλλαβονοειδούς αλληλεπιδρά μέσω ενός δεσμού Pi-ανιόντος με ASP-340, ενός συμβατικού δεσμού υδρογόνου με το GLN-35 και ενός Pi-αλκυλίου και δύο στοιβαγμένων δεσμών Pi-Pi με το TYR {80}} (Εικόνα 1).

Σχήμα 1. Η ένωση 3b ταιριάζει στον υδρόφοβο θύλακα δέσμευσης του ABC στο PDB: 7TAA.

Επιπλέον, η ένωση 3h εμφάνισε ενδιαφέρουσα ενέργεια δέσμευσης −9,3 kcal/mol. Ο τρόπος δέσμευσής του δείχνει ότι εμπλέκεται σε 15 μη ομοιοπολικές αλληλεπιδράσεις με 10 υπολείμματα (Πίνακας 2). Κατά συνέπεια, η μοριακή εικόνα από την ανάλυση σύνδεσης υποδηλώνει ότι το τμήμα 3-(3-(4- μεθοξυφαινυλ)ισοξαζόλη-5-υλ)μεθοξυλίου σχηματίζει δύο δεσμούς άνθρακα-υδρογόνου με GLU{{12 }}, ένας δεσμός σε σχήμα Pi–Pi με TYR-82, δύο συμβατικοί δεσμοί υδρογόνου με ARG-344, ένας δεσμός άνθρακα-υδρογόνου με HIS-80 και ένας δεσμός Pi–ανιόντος με το υπόλειμμα ASP-340. Επιπλέον, η ομάδα τριφθορομεθυλίου εμπλέκεται σε έναν συμβατικό δεσμό υδρογόνου με GLY-167 και σε δύο αλκυλικές αλληλεπιδράσεις με τα αμινοξέα LEU{-166 και LEU-173. Επιπλέον, ο σκελετός φφλλαβονοειδούς εμπλέκεται σε έναν συμβατικό δεσμό υδρογόνου με GLN-35, έναν δεσμό Pi-ανιόντος με ASP-340, δύο στοιβαγμένους δεσμούς Pi-Pi και έναν δεσμό Pi-αλκυλίου με το TYR {24}} (Εικόνα 2)

Από την άλλη πλευρά, η ένωση 3j εμφάνισε σημαντική ενέργεια δέσμευσης -9,2 kcal/mol. Ο τρόπος δέσμευσής του δείχνει ότι εμπλέκεται σε 16 μη ομοιοπολικές αλληλεπιδράσεις με 13 αμινοξέα (Πίνακας 2). Επομένως, η εις βάθος ανάλυση της μοριακής σύνδεσης υποδηλώνει ότι το τμήμα 3-(3-({4-βουτοξυ-3-χλωροφαινυλ)ισοξαζόλη-5-υλ)μεθοξυλίου σχηματίζει δύο συμβατικές δεσμοί υδρογόνου με ARG-344, τρεις δεσμοί Pi-αλκυλίου με TYR-82, HIS{{-210 και HIS-296, μια αλληλεπίδραση αλκυλίου με LEU{-232, ένα δεσμός άνθρακα-υδρογόνου με το υπόλειμμα GLU-230, έναν δεσμό Pi-ανιόν με ASP-340 και έναν δεσμό Pi-κατιόν με το HIS-80. Επιπλέον, η ομάδα τριφθορομεθυλίου που συνδέεται με τον αρωματικό δακτύλιο Β του σκελετού φφλλαβονοειδούς εμπλέκεται σε έναν συμβατικό δεσμό υδρογόνου με GLY{-167 και δύο αλκυλικές αλληλεπιδράσεις με τα υπολείμματα LEU{-166 και LEU{24}}. Επιπλέον, ο σκελετός των φφλλαβονοειδών εμπλέκεται σε έναν συμβατικό δεσμό υδρογόνου με GLN-35 και έναν στοιβαγμένους δεσμούς Pi-αλκυλίου και δύο Pi-Pi με το αμινοξύ TYR{-75 (Εικόνα 3). Στο ένζυμο Aspergillus oryzae -αμυλάση (PDB: 7TAA), τα πυρηνόφιλα και τα υπολείμματα καταλυτικού οξέος/βάσης, τα οποία είναι υπεύθυνα για τη διάσπαση των γλυκοσιδικών δεσμών, είναι τα ASP-206 και GLU-230 αμινοξέα , αντίστοιχα [5]. Επομένως, οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ πρωτεΐνης και συνδέτη, κυρίως μέσω των υπολειμμάτων GLU{-230 και ASP-206, είναι ο καλύτερος τρόπος για να αποκλειστεί η διάσπαση των γλυκοσιδικών δεσμών. Στην πραγματικότητα, η χαμηλή ενέργεια δέσμευσης, η σωστή στάση δέσμευσης, η ικανότητα αλληλεπίδρασης με βασικά υπολείμματα γλυκοσιδικής διάσπασης (GLU-230 και ASP-206) και ένας μεγάλος αριθμός αλληλεπιδράσεων στον ενεργό θύλακα του το ένζυμο στόχος (Πίνακας 2) μπορεί να εξηγήσει την ισχυρή ανασταλτική αποτελεσματικότητα της αμυλάσης που καθιερώθηκε από τις περισσότερες ενώσεις.

Σχήμα 3. Η ένωση 3j ταιριάζει στον υδρόφοβο θύλακα δέσμευσης του ABC στο PDB: 7TAA

3. Υλικά και Μέθοδοι

3.1. Γενικό ΠειραματικόΔιαδικασίεςΌλοι οι χρησιμοποιημένοι διαλύτες αποστάχθηκαν πρόσφατα πριν από τη χρήση. Όλες οι χημικές αντιδράσεις παρακολουθήθηκαν χρησιμοποιώντας εμπορικές πλάκες TLC (Silica gel 60, F254, SDS). Μια συσκευή Büchi 510 χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των σημείων τήξης. Όλα τα φάσματα 1H NMR (300 MHz), DEPT 135 και 13C NMR (75 MHz) καταγράφηκαν σε δευτεριωμένο χλωροφόρμιο και διμεθυλοσουλφοξείδιο-d6 με φασματόμετρο Bruker AC-300. Όλες οι χημικές μετατοπίσεις (δ) αναφέρθηκαν σε μέρη ανά εκατομμύριο (ppm), οι σταθερές σύζευξης (J) δόθηκαν σε Hertz (Hz) και ο υπολειπόμενος συντονισμός μη δευτεριωμένου διαλύτη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερική αναφορά. Τα φάσματα DCI-HRMS εκτελέστηκαν σε aWaters GCT 1er στον τρόπο λειτουργίας θετικών ιόντων. Τα φάσματα ESI-HRMS καταγράφηκαν με ESI-TOF (Waters LCT, Markham, Οντάριο, Καναδάς) στη λειτουργία θετικών ιόντων χρησιμοποιώντας τη λειτουργία ανακλαστήρα.

4. Συμπεράσματα

Οι 15 νεοσυντιθέμενες ισοξαζόλες με βάση φλαβονοειδή τριφθορομεθυλίωσης (3a–m) αξιολογήθηκαν in vitro για την ανασταλτική τους δράση στην αμυλάση και σημειώθηκαν σημαντικά αποτελέσματα. Τα κυκλοπροσαγωγά 3b, 3h, 3j και 3m επέδειξαν συγκρίσιμη αποτελεσματικότητα και ισχύ με αυτά της ακαρβόζης που χρησιμοποιείται ως τυπική ουσία για την αναστολή του ενζύμου -αμυλάση. Επιπλέον, η ανάλυση της σχέσης δομής-δραστικότητας αποκάλυψε ότι τα αλογονωμένα και αλκοξυλιωμένα παράγωγα ήταν οι πιο δραστικές ενώσεις. Σύμφωνα με την ανάλυση silicodocking, οι ισοξαζόλες με βάση φλαβονοειδή τριφθορομεθυλίωσης έδειξαν χαμηλή ενέργεια δέσμευσης, μεγάλο αριθμό αλληλεπιδράσεων και τη σωστή θέση δέσμευσης στον ενεργό θύλακα του ενζύμου στόχου. Τα περισσότερα από αυτά αλληλεπιδρούσαν με τα πυρηνόφιλα και τα υπολείμματα καταλυτικού οξέος/βάσης (GLU-230 και ASP-206), γεγονός που μπορεί να εξηγήσει την αποτελεσματικότητα και την ισχύ τους στην αναστολή της ενζυμικής δραστηριότητας της -αμυλάσης. Οι πολλά υποσχόμενες δραστηριότητες που επιδεικνύονται από τις συντιθέμενες υβριδικές ενώσεις ενθαρρύνουν τη συμμετοχή τους ως υποψηφίων για την ανακάλυψη νέων αντιδιαβητικών και κατά της παχυσαρκίας παραγόντων. Ωστόσο, πολύ σε βάθος μελέτες και παράγοντες ασφάλειας πρέπει να λαμβάνουν υπόψη τους κινδύνους που συνδέονται με την καινοτομία της δραστικής ουσίας, την τοξικότητα, τη σταθερότητα και τη διαλυτότητα στο υδατικό μέσο και τα φαρμακοδυναμικά χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένης της αξιοπιστίας με την οποία μπορούν να παρακολουθούνται οι ανεπιθύμητες ενέργειες στον άνθρωπο προτού αναπτυχθούν δυνητικά σοβαρές/μη αναστρέψιμες επιδράσεις. Συμπληρωματικά Υλικά: Τα ακόλουθα είναι διαθέσιμα στο Διαδίκτυο, Φάσματα NMR των συντιθέμενων ενώσεων (1, 2 και 3a–m), Πίνακας S1: Οι καμπύλες συγκέντρωσης-απόκρισης που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό των τιμών IC50. Συνεισφορές του συγγραφέα: Conceptualization FKA and IS; μεθοδολογία, HBJ; λογισμικό, IS andH.NA; επικύρωση, FKA και AC. επίσημη ανάλυση, MRE; έρευνα, FKA και IS? πόροι, BYA; επιμέλεια δεδομένων, FKA και IS. σύνταξη — προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, FKA και IS. συγγραφή — κριτική και επεξεργασία, HBJ. οπτικοποίηση, FKA και BYA. εποπτεία, HBJ; διαχείριση έργου, FKA και HBJ· εξαγορά χρηματοδότησης, FKA Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου. Χρηματοδότηση: Αυτή η έρευνα δεν έλαβε εξωτερική χρηματοδότηση. Δήλωση επιτροπής θεσμικής αναθεώρησης: Δεν ισχύει. Δήλωση ενημερωμένης συναίνεσης: Δεν ισχύει. Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων: Δεν ισχύει. Ευχαριστίες: Οι συγγραφείς εκφράζουν την εκτίμησή τους στην Κοσμητεία Επιστημονικής Έρευνας στο Imam Mohammad Ibn Saud Islam Πανεπιστήμιο για τη χρηματοδότηση αυτής της εργασίας μέσω της Ερευνητικής Ομάδας. RG-21-09-69.Σύγκρουση συμφερόντων: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων. Διαθεσιμότητα δείγματος: Δείγματα των ενώσεων δεν είναι διαθέσιμα από τους συγγραφείς.

βιβλιογραφικές αναφορές
1. Boutayeb, Α.; Boutayeb, S. Το βάρος των μη μεταδοτικών ασθενειών στις αναπτυσσόμενες χώρες. Int. J. Equity Health 2005, 4, 1–8. [CrossRef]
2. Wagner, KH; Brath, H. Μια σφαιρική άποψη για την ανάπτυξη των μη μεταδοτικών ασθενειών. Προηγ. Med. 2012, 54, S38–S41. [CrossRef]
3. Tseng, CH Οι πιθανοί βιολογικοί μηχανισμοί του σακχαρώδους διαβήτη που προκαλείται από αρσενικό. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2004, 197, 67–83. [CrossRef]
4. Sala, D.; Zorzano, A. Διαφορικός έλεγχος μυϊκής μάζας σε σακχαρώδη διαβήτη τύπου 1 και τύπου 2. Κύτταρο. ΜοΙ. Life Sci. 2015, 72, 3803–3817. [CrossRef]
5. Brzozowski, AM; Davies, GJ Δομή της -αμυλάσης του aspergillus oryzae σε σύμπλοκο με τον αναστολέα ακαρβόζη σε ανάλυση 2.{3}} Å. Biochemistry 1997, 36, 10837-10845. [CrossRef]
6. Jayaraj, S.; Suresh, S.; Kadeppagari, αναστολείς αμυλάσης RK και οι βιοϊατρικές εφαρμογές τους. Starch-Stärke 2013, 65, 535–542. [CrossRef]
7. Khan, S.; Nazir, Μ.; Raiz, Ν.; Saleem, Μ.; Zengin, G.; Fazal, G.; Saleem, Η.; Mukhtar, Μ.; Tousif, MI; Tareen, RB; et al. Φυτοχημικό προφίλ, in vitro βιολογικές ιδιότητες και μελέτες σε πυρίτιο σε αποθέματα Caragana ambigua (Fabaceae): Μια ολοκληρωμένη προσέγγιση. Ind. Crops Παρ. 2019, 131, 117–124. [CrossRef]
8. Berg, JM; Tymoczko, JL; Stryer, L. Τα ένζυμα μπορούν να ανασταλούν από συγκεκριμένα μόρια. In Biochemistry, 5η έκδ.; WH Freeman: Νέα Υόρκη, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ, 2002.
9. Kam, Α.; Li, KM; Razmovski-Naumovski, V.; Nammi, S.; Shi, J.; Chan, Κ.; Li, GQ Μια συγκριτική μελέτη για τις ανασταλτικές επιδράσεις διαφορετικών μερών και χημικών συστατικών του ροδιού στην -αμυλάση και -γλυκοσιδάση. Phytother. Res. 2013, 27, 1614–1620. [CrossRef]
10. Nie, JP; Qu, ZN; Chen, Υ.; Chen, JH; Jiang, Υ.; Jin, ΜΝ; Yu, Υ.; Niu, WY; Duan, HQ; Qin, N. Ανακάλυψη και αντιδιαβητικά αποτελέσματα νέων φλαβονοειδών παραγώγων με βάση την ισοξαζόλη. Fitoterapia 2020, 142, 104499. [CrossRef]
11. Malešev, D.; Kunti´c, V. Διερεύνηση χηλικών ενώσεων μετάλλου-φλαβονοειδών και προσδιορισμός φλαβονοειδών μέσω αντιδράσεων συμπλοκοποίησης μετάλλου-φλαβονοειδών. J. Σερβ. Chem. Soc. 2007, 72, 921-939. [CrossRef]
12. Pinheiro, PF; Goncalon, CJ Structural Analysis of Flavonoids and Related Compounds—A Review of Spectroscopic Applications. Στα φυτοχημικά—μια παγκόσμια προοπτική του ρόλου τους στη διατροφή και την υγεία. InTech: Λονδίνο, Ηνωμένο Βασίλειο, 2012.
13. Lo Piparo, Ε.; Scheib, Η.; Frei, Ν.; Williamson, G.; Grigorov, Μ.; Chou, CJΦλαβονοειδή γιαέλεγχος της πέψης του αμύλου: Δομικές απαιτήσεις για την αναστολή της ανθρώπινης αμυλάσης. J. Med. Chem. 2008, 51, 3555–3561. [CrossRef]
14. Xiao, J.; Νί, Χ.; Kai, G.; Chen, X. Μια ανασκόπηση της σχέσης δομής-δραστηριότητας της διατροφήςαναστέλλουν τις πολυφαινόλες-αμυλάση. Κριτ. Rev. Food Sci. Nutr. 2013, 53, 497–506. [CrossRef] [PubMed]
15. Hua, F.; Zhou, Ρ.; Wu, HY; Chu, GX; Xie, ZW; Bao, GH Αναστολή -γλυκοσιδάσης και -αμυλάσης από φλαβονοειδή γλυκοσίδες από το τσάι Lu'an GuaPian: Μηχανισμός μοριακής σύνδεσης και αλληλεπίδρασης. Λειτουργία Τροφίμων. 2018, 9, 4173–4183. [CrossRef] [PubMed]
16. Vinayagam, R.; Xu, B. Αντιδιαβητικές ιδιότητες των διαιτητικών φλαβονοειδών: Ανασκόπηση κυτταρικού μηχανισμού. Nutr. Metab. 2015, 12, 1–20. [CrossRef] [PubMed] 17. Ghorbani, Α. Μηχανισμοί αντιδιαβητικών επιδράσεων της φλαβονοειδούς ρουτίνης. Biomed. Pharmacother. 2017, 96, 305–312. [CrossRef] [PubMed]