Ο ρόλος των νεφρικών μακροφάγων, του AIM και της έκφρασης του TGF-b1 στην εξέλιξη της νεφρικής ίνωσης σε ασθενείς με IgAN

Για περισσότερες πληροφορίες. Επικοινωνίαtina.xiang@wecistanche.com

Σκοπός: Για ανάλυση της έκφρασης μακροφάγων, AlM και TGF- 1 στους νεφρούς ασθενών με LgAN και για διερεύνηση του ρόλου των μακροφάγων, AlM και TGF- 1 στην εξέλιξη της νεφρικής ίνωσης σε ασθενείς με LgAN .

Μέθοδοι: Τα δείγματα παραφίνης νεφρικού ιστού από 40 ασθενείς lgAN επιλέχθηκαν ως ομάδα παρατήρησης. Ταυτόχρονα, δείγματα παραφίνης φυσιολογικού νεφρικού ιστού από 11 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε νεφρεκτομή επιλέχθηκαν ως φυσιολογική ομάδα ελέγχου. Παρατηρήσαμε την κατανομή των μακροφάγων και την έκφραση των AlM και TGF- 1 με ανοσοϊστοχημική χρώση και/ή ανοσοφθορισμό.

Αποτέλεσμα: Ο αριθμός των μακροφάγων MO, M1 και M2 μπορεί να βρεθεί ότι αυξάνεται σε ασθενείς με LgAN. Τα Μ0 μακροφάγα είναι κυρίως πολωμένα προς τα μακροφάγα Μ2. Η έκφραση του AlM και του TGF- 1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς με LgAN από ό,τι σε NC. Τα μακροφάγα M2, το AlM και το TGF- 1 συσχετίστηκαν θετικά με την κρεατινίνη ορού και την πρωτεϊνουρία 24-ώρας, αλλά αρνητικά με το eGFR. Μ2 μακροφάγα, AlM και TGF- 1 συσχετίστηκαν θετικά με την ινωτική περιοχή.

συμπέρασμα: Τα μακροφάγα M2, το AlM και το TGF- 1 παίζουν σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της ίνωσης lgAN και τα τρία επηρεάζουν το ένα το άλλο.

Λέξεις-κλειδιά: IgAN, νεφρική ίνωση, μακροφάγοι, AlM, TGF- 1

Γνωρίστε το cistanche από πού να αγοράσετε και την επίδραση του cistanche μέσω του συνδέσμου 

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η IgA νεφροπάθεια (IgAN) είναι μια συχνή συστηματική ανοσοσπειραματονεφρίτιδα, η οποία χαρακτηρίζεται από την εναπόθεση ανοσοσυμπλεγμάτων βασισμένων σε IgA ή IgA στη μεσαγγειακή περιοχή με πολλαπλασιασμό των μεσαγγειακών κυττάρων και επέκταση της μεσαγγειακής μήτρας (1,2). Αν και το IgAN εξελίσσεται αργά, έως και το 50 τοις εκατό των ασθενών αναπτύσσονται στο τελικό στάδιο και είναι ο κύριος τύπος που προκαλεί ESRD(3).Νεφρική ίνωσηείναι η κοινή οδός στην εξέλιξη τηςχρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ)(4). Τα τελευταία χρόνια, έχει βρεθεί ότι τα μακροφάγα, ο αναστολέας της απόπτωσης των μακροφάγων (AIM) και ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού- 1(TGF- 1) παίζουν όλα σημαντικό ρόλο στη νεφρική ίνωση.

Τα μακροφάγα εμπλέκονται στην ανάπτυξη πολλών νεφρικών παθήσεων. Ορισμένοι μελετητές πιστεύουν ότι η εναπόθεση μακροφάγων στο νεφρό μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως σημαντικός δείκτης για να κριθεί η ανάπτυξη και η πρόγνωση των νεφρικών παθήσεων. Τα μακροφάγα χωρίζονται σε τύπους M0, M1 και M2(5). Τα μακροφάγα Ml προάγουν τον τύπο της φλεγμονώδους απόκρισης και αφαιρούν βακτήρια ή καρκινικά κύτταρα εκκρίνοντας φλεγμονώδεις παράγοντες όπως IL-1, IL-6, IL-12, TNF-, αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS), και όχι. Ωστόσο, εάν η φλεγμονή επιμένει, θα εξαπλωθεί περαιτέρω και τελικά θα οδηγήσει σε ίνωση των ιστών (6). Εκφράζοντας την αργινάση 1 (Argl), την πρωτεΐνη 3 παρόμοια με χιτινάση (Yml) και τον επαγόμενο από υποξία μιτογόνο παράγοντα (HIMF) για να αντισταθεί στη διέγερση παθογόνων μικροοργανισμών και αλλεργιογόνων, τα μακροφάγα Μ2 περιορίζουν τη φλεγμονώδη απόκριση και προσαρμόζονται τύπου Ιασυλία, ανοσία, εξαλείφουν τα υπολείμματα, προάγουν την αγγειογένεση, παίζουν αντιφλεγμονώδες ρόλο, μειώνουν την απόπτωση των κυττάρων, προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και προάγουν την επιδιόρθωση των ιστών(7,8).Ακριβώς, ποιος τύπος μακροφάγου παίζει σημαντικό ρόλο στη νεφρική ίνωση του IgAN εξακολουθεί να είναι αμφιλεγόμενος . Μελέτες έδειξαν ότι τα CD68 και CD80 μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως ειδικοί επιφανειακοί δείκτες των μακροφάγων ΜΟ και Μ1(9). Το CD163 είναι ένας εξαιρετικά ειδικός υποδοχέας μαννόζης που εκφράζεται σε μακροφάγους Μ2, ο οποίος δεν εκφράζεται στους μακροφάγους Μ1. Έτσι τα CD68, CD80 και CD163 μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως δείκτες για να αναπαραστήσουν την παρουσία διαφορετικών τύπων μακροφάγων (10-12).

Επιπλέον, το AIM ανακαλύφθηκε αρχικά ως εκκρινόμενη πρωτεΐνη μακροφάγων και έτσι ονομάστηκε Spa(13). Αργότερα ονομάστηκε AIM αφού βρέθηκε η αντιαποπτωτική του δράση στα λευκά αιμοσφαίρια(14), ή CD5L σύμφωνα με την ονοματολογία οργάνωσης του ανθρώπινου γονιδιώματος. Το AIM έχει ένα ευρύ φάσμα λειτουργιών και παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ισορροπίας της μετανάστευσης των λευκοκυττάρων, του μεταβολισμού καιφλεγμονώδηςαπάντηση. Πολλά είδη βιβλιογραφίας έχουν αναφέρει ότι το AIM παίζει ρόλο στην ανοσο-φλεγμονώδη απόκριση(15), στην ομοιόσταση των λιπιδίων, στη μη αλκοολικήηπατική νόσο(16), αυτοάνοση νόσο, αθηροσκλήρωση (17) και άλλες ασθένειες. Τα τελευταία χρόνια, έχουν γίνει πολυάριθμες μελέτες για το ρόλο του AIM στη νεφρική νόσο. Για παράδειγμα, οι Tadashi Uramat et al. (18) βρέθηκε στο μοντέλο ποντικού με την τάση υπέρτασης ότι η μείωση της έκφρασης του AIM και της oxLDL (οξειδωμένης λιποπρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας, η οποία έχει ως αποτέλεσμα τη ρύθμιση προς τα πάνω της έκφρασης του AIM) μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά την ίνωση του νεφρικού ιστού. Ομοίως, οι Megumi Oshima et al. (19) διαπίστωσε ότι η περιοχή της εναπόθεσης AIM και μακροφάγων στον νεφρικό ιστό συσχετίστηκε θετικά με τη σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας και τη μείωση του eGFR σε ασθενείς με ΧΝΝ. Όλες οι παραπάνω μελέτες υποδηλώνουν ότι το AIM παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της νεφρικής ίνωσης. Ωστόσο, υπάρχουν προς το παρόν αντίθετα αποτελέσματα: Έχει βρεθεί στο μοντέλο οξείας νεφρικής βλάβης ότι το AIM μπορεί να προάγει την αφαίρεση υπολειμμάτων αποπτωτικών κυττάρων από επιθηλιακά κύτταρα νεφρικών σωληναριακών (20).

Προς το παρόν, πολλές μελέτες έχουν επεξεργαστεί τον ρόλο των μακροφάγων, του AIM και του TGF- 1 στη νεφρική νόσο, αλλά υπάρχουν λίγες μελέτες σχετικά με το ρόλο των τριών στην πρόοδο του IgAN, τη διαδικασία ίνωσης και τη συσχέτιση μεταξύ το δέντρο. Εάν μπορεί να διευκρινιστεί η παθογένεια της εξέλιξης της ίνωσης IgAN, μπορεί να ανοίξει ένα νέο παράθυρο για τη θεραπεία και την πρόγνωση του IgAN. Για τη διερεύνηση του ρόλου των μακροφάγων, του AIM και του TGF- 1 στην εξέλιξη της ίνωσης IgAN, εντοπίσαμε διήθηση μακροφάγων σε νεφρικούς ιστούς ασθενών με IgAN και το επίπεδο έκφρασης και τα χαρακτηριστικά των AIM και TGF- 1 και στη συνέχεια ανέλυσε τη σχέση μεταξύ των τριών και των κλινικών σχετικών δεικτών και της περιοχής νεφρικής ίνωσης ασθενών με IgAN.

ΜΕΘΟΔΟΙ

μαθήματα

Σαράντα ασθενείς με IgAN που επιβεβαιώθηκε μέσω βιοψίας νεφρού επιλέχθηκαν από το Subei People Hospital. Ασθενείς με χρόνιες συστηματικές ασθένειες (συστηματικός ερυθηματώδης λύκος, σακχαρώδης διαβήτης, πορφύρα Henoch-Schönlein, κίρρωση ήπατος, κ.λπ.) (θεραπεία γλυκοκορτικοειδών, ανοσοκαταστολή, ΜΕΑ, ARB, κ.λπ.) ή προχωρημένο ποσοστό νεφρικής ανεπάρκειας (εκτιμώμενη σπειραματική ανεπάρκεια eGFR) Λιγότερο από ή ίσο με 15ml/min/1,73m2) εξαιρέθηκαν. Τα επίπεδα eGFR υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την εξίσωση Τροποποίηση Διατροφής στη Νεφρική Νόσο (MDRD). Κλινικές πληροφορίες (φύλο, ηλικία, βάρος, ιστορικό ασθένειας) και εργαστηριακά δεδομένα ( Η αλβουμίνη ορού, η κρεατινίνη ορού, τα ερυθρά αιμοσφαίρια ούρων, τα επίπεδα πρωτεΐνης στα ούρα 24 ωρών και τα επίπεδα eGFR) συλλέχθηκαν τη στιγμή της βιοψίας. Ιστολογικά φυσιολογικοί ιστοί νεφρού που ανατέμνονται δίπλα σε νεφρικούς όγκους χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι (n=11). Ελήφθη γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση από όλα τα υποκείμενα και η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Subei People Hospital.

Ανοσοφθορισμού και ανοσοϊστοχημική χρώση

Τομές ιστού ανθρώπινου νεφρού αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημική και ανοσοφθορισμό χρώση. Η χρώση Masson πραγματοποιήθηκε σε όλες τις τομές ιστού ανθρώπινου νεφρού. Οι τομές αποπαραφινώθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 3 τοις εκατό διοξείδιο του υδρογόνου. Μετά την ανάκτηση και τον αποκλεισμό του αντιγόνου, οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα με ανθρώπινο αντίσωμα CD68 (αραιωμένο 1:600, Abcam), ανθρώπινο αντίσωμα CD80 (αραιωμένο 1:600, Abcam), ανθρώπινο αντίσωμα CD163 (αραιωμένο 1:600, Abcam), ανθρώπινο AIM αντίσωμα (αραιωμένο 1:150, Abcam) ή ανθρώπινο αντίσωμα TGF- 1 (αραιωμένο 1:500, Abcam). Μετά από επεξεργασία με δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με βιοτίνη σημασμένο με υπεροξειδάση χρένου (αραιωμένο 1:200, Biosynthesis Biotechnology, China) και χρώση DAB (ZSGB-Bio, China), παρατηρήθηκαν τομές υπό μικροσκόπιο. 10 τυχαία επιλεγμένα πεδία (400×) απεικονίστηκαν ανά τμήμα. Η έκφραση των μακροφάγων σε σπειράματα και σωληνάρια ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Image-Pro Plus Image Analysis Software (Meyer Instruments, Inc., Houston, ΤΧ, ΗΠΑ). Οι εκφράσεις του AIM και του TGF- 1 στα σπειράματα ποσοτικοποιήθηκαν με τον ίδιο τρόπο. Η ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD) μετρήθηκε για κάθε εικόνα από δύο παθολογικούς ειδικούς ανεξάρτητα. Στη συνέχεια υπολογίστηκε η μέση IOD/θετικά χρωματισμένη περιοχή (AIOD). Τα επίπεδα έκφρασης μακροφάγων, AIM και TGF- 1 σε βιοψίες νεφρού IgAN και φυσιολογικές βιοψίες νεφρού συγκρίθηκαν με τον υπολογισμό του AIOD. Οι πυρήνες χρωματίστηκαν με DAPI σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά. Ελήφθησαν εικόνες τμημάτων σημασμένων με φθορισμό χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού (ZEISS, Axioimager.Z2).

Χρώση Masson για Εκτίμηση Ίνωσης

Η περιοχή ίνωσης ήταν πράσινη και υπολογίσαμε το ποσοστό της πράσινης περιοχής στην περιοχή του οπτικού πεδίου για να αντικατοπτρίζει τον βαθμό ίνωσης. Τρία πεδία υψηλής μεγέθυνσης επιλέχθηκαν τυχαία για κάθε τμήμα (Όλα τα δείγματα φωτογραφήθηκαν υπό τις ίδιες συνθήκες), αποφεύγοντας τα μεγάλα σκάφη. IPP6.0 σύστημα ανάλυσης εικόνας χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση της αναλογίας εμβαδών της περιοχής ίνωσης (Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν με τον ίδιο τρόπο).

Στατιστικές αναλύσεις

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SPSS 22.0. Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέσος όρος ± SD ή ως διάμεσοι (εύρος). Οι σημαντικές διαφορές αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας είτε σε δοκιμασία είτε μονόδρομη ANOVA. Πραγματοποιήθηκε μια μη παραμετρική δοκιμή Mann-Whitney U για τη σύγκριση της ολοκληρωμένης οπτικής πυκνότητας μεταξύ των πειραματικών ομάδων. Ένα δίουρο Π<0.05 was="" considered="" statistically="">

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Η κατανομή των μακροφάγων στο νεφρό Ο ανοσοφθορισμός και η ανοσοϊστοχημεία (Εικόνες 1,2) έδειξαν ότι τα μακροφάγα στην ομάδα IgAN κατανέμονταν κυρίως στο νεφρικό σωληναριακό διάμεσο και περιστασιακά στο σπειραματικό τριχοειδές πλέγμα και οι νεφρικοί αυλοί δεν ήταν φυσιολογικοί στον αυλό νεφρικό ιστό.

Επιπλέον, ο αριθμός των μακροφάγων M{{0}}, Ml και M2 στο νεφρικό διάμεσο του IgAN ήταν διαφορετικός και υπήρχε μεγαλύτερη πόλωση του M0 προς το M2(P<0.05, figure="">

Έκφραση του AIM, TGF- 1 στον νεφρικό ιστό Στην ομάδα IgAN, το AIM εκφράζεται κυρίως σε σπειραματικού τριχοειδούς βρόγχους και νεφρικά σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα, καθώς και στον αυλό των νεφρικών σωληνώσεων. Ο TGF- 1 εκφράζεται κυρίως σε νεφρικά σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα, αλλά και στο νεφρικό διάμεσο. Ωστόσο, η έκφραση του AIM και του TGF- 1 ήταν σπάνια ή απουσίαζε σε φυσιολογικούς νεφρικούς ιστούς (Εικόνες 4,5).

Έκφραση Μακροφάγων, AlM, TGF- 1 με κλινική εκδήλωση lgAN

The infiltration of MO and M1 macrophages in the renal tissue of the IgAN group was not significantly correlated with age, sex, urinary red blood cell count,24-hour proteinuria, and eGFR (P>{{0}}.05). Ο αριθμός της διήθησης των μακροφάγων Μ2 συσχετίστηκε θετικά με την κρεατινίνη ορού και την 24-ώρα πρωτεϊνουρία(r=0.447, P=0.004; r=0.436, P{ {10}}.005), και συσχετίστηκε αρνητικά με το eGFR(r=-0.332, P=0.004)(Εικόνα 6).24-ώρα πρωτεΐνης ούρων, κρεατινίνη ορού και Το eGFR συσχετίστηκε με το AIM και το TGF- 1, μεταξύ των οποίων 24-ώρα πρωτεΐνης ούρων και κρεατινίνη ορού συσχετίστηκαν θετικά με AIM και TGF- 1, ενώ το eGFR συσχετίστηκε αρνητικά με AIM και TGF-B1 (Τραπέζι 1). Δεδομένου ότι δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των μακροφάγων Μ0 και Μ1 και των κλινικών δεικτών, τα μεταγενέστερα δεδομένα μέτρησαν μόνο τα μακροφάγα Μ2. Περαιτέρω στατιστική ανάλυση έδειξε ότι οι εκφράσεις των μακροφάγων M2, AIM και TGF-B1 ήταν διαφορετικές σε διαφορετικούς παθολογικούς τύπους και υπήρχε συσχέτιση μεταξύ των μακροφάγων M2, AIM και TGF- 1 (Πίνακας 2).

Συσχέτιση Μ2 Μακροφάγων, AlM, TGF- 1 και ινωτικής περιοχής

Η στατιστική ανάλυση της συσχέτισης μεταξύ της ινωτικής περιοχής και των μακροφάγων Μ{0}τύπου, AIM και TGF- 1 στους ιστούς ασθενών με IgAN έδειξε ότι τα μακροφάγα Μ2 συσχετίστηκαν θετικά με την ινωτική περιοχή (Εικόνα 7, r {4}}.777, Π<0.01);aim was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area(figure="" 8,r="0.768,"><0.01); tgf-β1="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area="" (figure="" 9,="" r="0.853,"><>

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Το IgAN είναι η πιο συχνή πρωτοπαθής σπειραματονεφρίτιδα και περίπου το 40 τοις εκατό των ασθενών θα αναπτύξουν τη νεφρική νόσο τελικού σταδίου (ESRD) εντός 20-30 ετών (21). Η νεφρική ίνωση είναι μια απαραίτητη διαδικασία για να εξελιχθεί όλη η ΧΝΝ σε ESRD. Οι παθολογικές εκδηλώσεις είναι ο σχηματισμός μεγάλου αριθμού ινοβλαστών και μυοϊνοβλαστών και η συσσώρευση μεγάλου αριθμού εξωκυτταρικής μήτρας, που οδηγεί σε σπειραματοσκλήρωση και νεφρική σωληναριακή διάμεση ίνωση. Τελικά, η νεφρική λειτουργία χάνει εξαιτίας της απώλειας μεγάλου αριθμού φυσιολογικών νεφρώνων(4). Επί του παρόντος, η νεφρική ίνωση χωρίζεται κυρίως σε τέσσερα στάδια: 1. Η ενεργοποίηση των νεφρικών σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων και η διήθηση μονοκυττάρων/μακροφάγων λόγω της φλεγμονής. 2.Η απελευθέρωση κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων και άλλων προϊνογονικών παραγόντων.3. Ο σχηματισμός ίνωσης έχει εκδηλωθεί κυρίως στην εναπόθεση πρωτεϊνών μήτρας. 4. Η εναπόθεση της εξωκυτταρικής μήτρας (ECM), είναι ένα σημαντικό στάδιο δομικής και λειτουργικής βλάβης του νεφρού (σημαντική μείωση των αποτελεσματικών νεφρώνων και περαιτέρω μείωση του ρυθμού σπειραματικής διήθησης).

Τα μυελοειδή βλαστοκύτταρα διαφοροποιούνται σε μονοκύτταρα και εισέρχονται στην κυκλοφορία από τον μυελό των οστών. Τα μονοκύτταρα στην κυκλοφορία μεταναστεύουν και διεισδύουν στους ιστούς υπό διαφορετικά ερεθίσματα όπως φλεγμονή και τραύμα, και στη συνέχεια διαφοροποιούνται σε μακροφάγα. Τα μακροφάγα είναι ετερογενή κύτταρα του φυσικού ανοσοποιητικού συστήματος, τα οποία μπορούν να ρυθμίσουν δυναμικά τους φαινότυπους τους για να προσαρμοστούν στο τοπικό μικροπεριβάλλον. Τα μονοκύτταρα στην κυκλοφορία, καθοδηγούμενα από φλεγμονώδη σήματα, εισέρχονται στο νεφρό και προσκολλώνται στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα, προκαλώντας την απελευθέρωση χημειοκινών και χρόνιων φλεγμονωδών παραγόντων ταυτόχρονα. Αυτό οδηγεί σε εκτεταμένη τοπική συσσώρευση μονοκυττάρων στο νεφρικό διάμεσο, τα οποία διαφοροποιούνται σε κλασικά ενεργοποιημένα μακροφάγα (M1) ή επιλεκτικά ενεργοποιημένα μακροφάγα (M2) από διαφορετικές οδούς. Αρχικά, παθογόνα και νεκρωτικά κύτταρα ενεργοποιούν υποδοχείς τύπου Toll και άλλους έμφυτους υποδοχείς του ανοσοποιητικού, προάγοντας την πόλωση των μακροφάγων Μ0 σε μακροφάγους Μ1. Τα μακροφάγα Μ1 εναποτίθενται μέσω της βασικής μεμβράνης στο πρώιμο στάδιο της νεφρικής βλάβης, προάγοντας μια σειρά από φλεγμονώδεις αποκρίσεις και οδηγώντας σε περαιτέρω νεφρική βλάβη. Καθώς η ανάπτυξη τραυματισμού, τα αποπτωτικά και νεκρωτικά κύτταρα που φαγοκυτταρώνονται από μακροφάγα, καθώς και η επακόλουθη δημιουργία αντιφλεγμονωδών παραγόντων, προάγουν την πόλωση των μακροφάγων προς τα μακροφάγα Μ2. Τα μακροφάγα Μ2 παίζουν κυρίως το ρόλο του αντιφλεγμονώδους, προάγοντας την επισκευή των νεφρών και προκαλώντας ίνωση(6,22-26). Ως εκ τούτου, η δυναμική ισορροπία των μακροφάγων Μ1 και Μ2 υποδηλώνει τη διαδικασία της φλεγμονής και της επιδιόρθωσης των ιστών, η οποία καθορίζει την πρόγνωση των νεφρών και οδηγεί τις προσπάθειες για θεραπείες που στοχεύουν τα μακροφάγα.

Σε αυτή τη μελέτη, επιλέξαμε νεφρικούς παθολογικούς ιστούς ασθενών που διαγνώστηκαν με IgAN και παρατηρήσαμε την πόλωση διαφορετικών μακροφάγων. Επιλέξαμε το CD68 για να αντιπροσωπεύει το M0, το CD80 για το M1 και το CD163 για το M2. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι ο αριθμός των M0(CD68*)μακροφάγων, M1(CD80*)μακροφάγων και M2(CD163*)μακροφάγων ήταν αντίστοιχα σημαντικά αυξημένος σε σύγκριση με τον φυσιολογικό νεφρό, υποδεικνύοντας ότι υπήρχε σχετικά εμφανής διήθηση μακροφάγων στο νεφρικούς ιστούς ασθενών με LgAN.

It was not only found that the infiltration of macrophages in the renal tissue of IgAN patients increased significantly, but also found that there were differences in the number of M0, Ml, and M2 macrophages in the interstitium of lgAN patients, with more polarization of M0 towards M2. In other words, the infiltration of M2 macrophages is mainly found in the renal tissue of IgAN patients. There was a positive correlation between M2 macrophages and fibrotic area; The distribution of M0 and M1 macrophages in the lgAN group had no significant correlation with age, sex, urinary red blood cell count, 24-hour proteinuria, and eGFR(P>0.05); Ωστόσο, ο αριθμός της διήθησης των μακροφάγων Μ2 συσχετίζεται θετικά με την κρεατινίνη ορού και την πρωτεϊνουρία 24-ωρών. Έχει αποδειχθεί ότι τα μακροφάγα Μ2 παίζουν σημαντικότερο ρόλο στην εξέλιξη της ίνωσης IgAN.

Το AIM παίζει επίσης σημαντικό ρόλο σε πολλές ασθένειες, όπως η αθηροσκλήρωση, η μη αλκοολική ηπατική νόσος(16), η αντίσταση στην ινσουλίνη (27), τα αυτοάνοσα νοσήματα κ.λπ. Ταυτόχρονα, το AIM σχετίζεται στενά με τη νεφρική ίνωση. Οι Megumi Oshima et al.(19) πήραν νεφρικό ιστό από 43 ασθενείς με νεφρική βιοψία και διαπίστωσαν ότι η περιοχή εναπόθεσης του AIM και των μακροφάγων συσχετίστηκε θετικά με τη σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας και τη μείωση του eGFR στους ασθενείς. Υπέδειξε ότι το AIM μπορεί να έχει επιδεινώσει τη νεφρική βλάβη. Οι Tadashi Uramat et al.(18) καθιέρωσαν σοβαρή υπέρταση και προκάλεσαν νεφρική βλάβη χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο αυθόρμητης τάσης υπέρτασης (SHRsp) σε ποντίκια. Μετά τη θεραπεία της υπέρτασης με σχετικά φάρμακα, διαπιστώθηκε ότι ο αριθμός των μακροφάγων που διεισδύουν στα σπειράματα και το διάμεσο μειώθηκε σημαντικά. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, οι εκφράσεις των AIM και oxLDL μειώθηκαν σημαντικά. Επιπλέον, ο βαθμός ίνωσης στον νεφρικό ιστό ήταν μικρότερος από εκείνον στην ομάδα που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία.

Στη μελέτη μας, υπήρχαν σημαντικές διαφορές στην έκφραση του AIM σε κάθε παθολογικό βαθμό και η έκφρασή του συσχετίστηκε σημαντικά θετικά με τα μακροφάγα Μ2, τον TGF- 1 και τον βαθμό νεφρικής ίνωσης. Αυτό το πείραμα και οι παραπάνω συνθήκες υποδηλώνουν ότι το AIM σχετίζεται με τη διαδικασία νεφρικής ίνωσης της ΧΝΝ, η οποία μπορεί να σχετίζεται με την αντι-αποπτωτική επίδραση του ΑΙΜ στα μακροφάγα, και στη συνέχεια τα συνεχή φλεγμονώδη σήματα προάγουν την περαιτέρω ανάπτυξη της ίνωσης. Ο Takako Tomita et al.(28) εξήγαγε νεκρωτικά κύτταρα από ποντίκια με περιτονίτιδα που προκαλείται από πολυσακχαρίτες ζυμομύκητα in vitro και διαπίστωσαν ότι το AIM θα μπορούσε να προάγει τη φαγοκυττάρωση των μακροφάγων Ml και M2a σε νεκρωτικά κύτταρα. Βρέθηκε επίσης στο μοντέλο IgAN και στο μοντέλο οξείας νεφρικής βλάβης της ισχαιμίας-επαναιμάτωσης (IRI) ότι το AIM θα μπορούσε να προάγει την κάθαρση του IgAl και των αποπτωτικών κυττάρων που προκαλούν νεφρίτιδα από μακροφάγα. Από τις παραπάνω μελέτες, διαπιστώθηκε ότι το AIM, όπως και τα μακροφάγα, μπορεί να διαδραματίζουν διαφορετικούς ρόλους σε διαφορετικά στάδια της νόσου, ενώ ο ρόλος του AIM στη νεφρική νόσο μπορεί να είναι παρόμοιος με τους μακροφάγους.

Σε ένα μοντέλο ΧΝΝ που προκαλείται από IRI, τα μακροφάγα Μ2 συσχετίζονται στενά με τη διαδικασία της νεφρικής ίνωσης, η οποία προκαλείται κυρίως από την έκκριση TGF- 1 (29). Ο TGF- 1 ανήκει στην υπεροικογένεια των TGF και παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη της ΧΝΝ(30). Η διαδιαφοροποίηση των σωληνοειδών επιθηλιακών μυοϊνοβλαστών (TEMT) είναι επίσης ένας σημαντικός μηχανισμός της νεφρικής διάμεσης ίνωσης και ο TGF- 1 είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής κυτοκίνης TEMT (31). Με τη χρήση αντισωμάτων εξουδετέρωσης του TGF- 1, αναστολέων, γονιδιακού νοκ-άουτ και άλλων μεθόδων για την κατανάλωση του TGF- 1, ο βαθμός νεφρικής ίνωσης μπορεί να μειωθεί αποτελεσματικά (32). Μέχρι τώρα, οι μηχανισμοί του TGF- 1 που προκαλούν νεφρική ίνωση περιλαμβάνουν κυρίως τα ακόλουθα σημεία: 1. Διέγερση της σύνθεσης εξωκυτταρικής μήτρας, όπως το κολλαγόνο Ι και η φιμπρονεκτίνη(33). 2. Η μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας (MMPs) και ο ιστικός αναστολέας της μεταλλοπρωτεϊνάσης (TIMPs) είναι εκτός ισορροπίας, μειώνοντας έτσι την αποικοδόμηση της εξωκυτταρικής μήτρας.3. Προάγουν τον πολλαπλασιασμό των μεσαγγειακών κυττάρων και την έκκριση κολλαγόνου και προκαλούν βλάβες στα επιθηλιακά και τα ποδοκύτταρα, προάγοντας έτσι τη φλεγμονή και την περαιτέρω ίνωση των ιστών (34).4. Προωθεί τη διαδιαφοροποίηση και τον πολλαπλασιασμό των μυοϊνοβλαστών από διάφορες πηγές (όπως περικύτταρα, επιθηλιακά κύτταρα, ενδοθηλιακά κύτταρα, ινοβλάστες, μακροφάγα κ.λπ.), μεσολαβώντας έτσι στην ανάπτυξη ίνωσης(35). Προηγούμενες μελέτες έχουν παρατηρήσει ότι η έκφραση mRNA και πρωτεΐνης του TGF-B1 στο IgAN και ο βαθμός διήθησης των μακροφάγων Μ2 στον νεφρικό ιστό αυξήθηκαν σημαντικά σε σύγκριση με τον φυσιολογικό νεφρικό ιστό(31), ο TGF- 1 συνεκφράστηκε με τα μακροφάγα Μ2 σε ιστό νεφρικής βιοψίας της υπέρτασης που προκαλείται από ΧΝΝ. Όλα αυτά υποδηλώνουν ότι τα μακροφάγα Μ2 μπορεί να παίζουν ρόλο στη νεφρική ίνωση μέσω του TGF- 1.

Σε αυτό το πείραμα, διαπιστώσαμε ότι με την αύξηση του παθολογικού βαθμού, η διήθηση των μακροφάγων Μ2 και ο βαθμός έκφρασης των AIM και TGF- 1 αυξάνονταν επίσης. Υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των διαφόρων παθολογικών ομάδων. Και οι τρεις σχετίζονταν στενά με 24-ωρη πρωτεΐνη ούρων, κρεατινίνη ορού, eGFR και άλλους κλινικούς δείκτες ασθενών με IgAN και υπήρχε σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ των τριών και της περιοχής της νεφρικής ίνωσης, γεγονός που υποδεικνύει ότι το Μ2 Τα μακροφάγα, το AIM και το TGF-B1 συμμετείχαν όλα στην εμφάνιση και την ανάπτυξη του lgAN και σχετίζονταν στενά με τη διαδικασία ίνωσης του IgAN. Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος ήταν σύμφωνα με τη μελέτη των Braga et al. (36,37), η οποία διαπίστωσε ότι τα μακροφάγα Μ2 εμπλέκονται στη νεφρική ίνωση της μονόπλευρης απόφραξης του ουρητήρα (UUO) σε μια οδό σηματοδότησης MyD88. Αντίθετα, μελέτες έχουν βρει ότι τα μακροφάγα παίζουν έναν αντιηρωικό ρόλο στη φάση ανάρρωσης της αποφρακτικής νεφροπάθειας. Οι Nishida et al. (38) απέδειξε ότι ο υποδοχέας της αγγειοτενσίνης II τύπου 1 (Agtr1) σε διάμεσους μακροφάγους λειτουργεί για τη μείωση της νεφρικής ίνωσης σε μεταγενέστερο στάδιο της UUO. Οι Lopez-Guisa et al. (39) επιβεβαίωσαν ότι τα μακροφάγα εμφάνισαν ρόλο εξασθένησης της ίνωσης μέσω της ενεργοποίησης μιας οδού ανακύκλωσης λυσοσωμικού κολλαγόνου εκφράζοντας τον υποδοχέα μαννόζης 2 (Mrc2) σε UUO.

Τα μακροφάγα M2, το AIM και το TGF- 1 παίζουν σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της ίνωσης IgAN και τα τρία επηρεάζουν το ένα το άλλο. Ωστόσο, λόγω του μικρού μεγέθους δείγματος αυτού του πειράματος και του μηχανισμού αλληλεπίδρασης και της σχέσης μεταξύ των τριών, θα χρειαστεί περαιτέρω επαλήθευση των σχετικών πειραμάτων σε ζώα.