Αφηρημένη

Ιστορικό: Έχει αναφερθεί ότι ο βασιλικός πολτός θα μείωνε τη σύνθεση μελανίνης και θα αναστέλλει την έκφραση πρωτεϊνών και γονιδίων που σχετίζονται με τη μελανογένεση. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογούμε την αντιμελανογόνο και αποχρωματιστική δράση του 10-υδροξυ-2-δεκανοϊκού οξέος (10-HDA) από τον βασιλικό πολτό του Apis mellifera.

Κάποιες μελέτες το έχουν προτείνεικιστανάκιμπορεί να βοηθήσει στην πρόληψη της γήρανσης του δέρματοςμείωση του οξειδωτικού στρεςκαιφλεγμονή, τα οποία και τα δύο μπορούν να συμβάλουνρυτίδες, σκοτεινά σημείακαι άλλα σημάδια γήρανσης. Ωστόσο, δεν είναι σαφές εάνκιστανάκιμπορώφωτίζουν το δέρμαήμειώνουν τη μελάγχρωση. Εν ολίγοις, ενώ το cistanche μπορεί να έχει κάποια ευεργετικά αποτελέσματα στο δέρμα, δεν είναι σαφές εάν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αξιόπιστολεύκανση δέρματοςμέσο. Είναι πάντα καλύτερο να συμβουλευτείτε έναν δερματολόγο για συμβουλές σχετικά με ασφαλείς και αποτελεσματικούς τρόπους φροντίδας του δέρματός σας.

Κάντε κλικ στο Cistanche Tubulosa για λεύκανση

Για περισσότερες πληροφορίες:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Μέθοδοι:Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογούμε τη {0}}λευκαντική δραστηριότητα HDA σε σύγκριση με τις αλλαγές στην ενδοκυτταρική δραστηριότητα τυροσινάσης, την περιεκτικότητα σε μελανίνη και τα επίπεδα πρωτεΐνης που σχετίζονται με την παραγωγή μελανίνης σε κύτταρα μελανώματος B16F1 μετά από θεραπεία με {{4 }}HDA. Επιπλέον, το αποτέλεσμα λεύκανσης του δέρματος αξιολογήθηκε εφαρμόζοντας ένα προϊόν κρέμας που περιέχει 0,5 τοις εκατό , 1 τοις εκατό και 2 τοις εκατό 10-HDA στο δέρμα ποντικών (C57BL/6 J) για 3 εβδομάδες για να παρατηρηθεί η επίδραση του DL *-αξίες.

Αποτελέσματα:Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το 10-HDA ανέστειλε την έκφραση πρωτεΐνης MITF (IC50 0.86 mM) σε κύτταρα μελανώματος B16F1. Η ανάλυση Western blot αποκάλυψε ότι το 10-HDA ανέστειλε τη δραστηριότητα της τυροσινάσης και την έκφραση της πρωτεΐνης 1 που σχετίζεται με την τυροσινάση (TRP-1), της TRP-2 και του μεταγραφικού παράγοντα που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία (MITF) σε κύτταρα μελανώματος B16F1. Επιπλέον, το 10-HDA που εφαρμόζεται στο δέρμα ποντικών δείχνει σημαντικά αυξημένο μέσο δείκτη λεύκανσης δέρματος (τιμή L).

Συμπεράσματα:Τα δεδομένα επικύρωσης έδειξαν τη δυνατότητα του 10-HDA για χρήση στην καταστολή της μελάγχρωσης του δέρματος. Το 10-HDA προτείνεται ως υποψήφιο για την αναστολή της μελανογένεσης, επομένως θα μπορούσε να αναπτυχθεί ως καλλυντικό προϊόν περιποίησης δέρματος.

Λέξεις-κλειδιά:Βασιλικός πολτός, 10-υδροξυ-2-δεκανοϊκό οξύ, μελανογένεση, λεύκανση δέρματος, αναστολέας μελανογένεσης

Ιστορικό

Ο βασιλικός πολτός (RJ) είναι ένα εκκρίμα νεαρής εργάτριας μέλισσας (Apis mellifera) που παράγεται από τον υποφαρυγγικό και την κάτω γνάθο αδένα και η αναπτυσσόμενη βασίλισσα το ταΐζονταν αποκλειστικά για τη ζωή της [1]. Το RJ παρέχει υψηλές θρεπτικές αξίες λόγω των άφθονων ποσοτήτων πρωτεϊνών, ελεύθερων αμινοξέων, λιπιδίων, βιταμινών και σακχάρων [2, 3]. Οι βιοδραστικές πρωτεΐνες του RJ είναι οι κύριες πρωτεΐνες του βασιλικού πολτού (MRJPs), η απισιμίνη και η βασιλική, οι οποίες έχουν δείξει ανοσορυθμιστικά και αντιβακτηριακά αποτελέσματα σε αρκετές μελέτες [4-6]. Το 10-υδροξυ-2- δεκανοϊκό οξύ (10-HDA) ήταν το κύριο λιπαρό οξύ στο RJ που έχει αρκετές ευεργετικές για την υγεία αποτελέσματα για τον άνθρωπο, το οποίο έχει επιδείξει αντικαρκινικές, αντιβακτηριακές και ανοσοτροποποιητικές δραστηριότητες [7 –9]. 10-Το HDA βρίσκεται μόνο στο RJ, επομένως έχει χρησιμοποιηθεί ως δείκτης ποιότητας προϊόντων βασιλικού πολτού [10, 11]. Αρκετές φαρμακολογικές δραστηριότητες του RJ έχουν ήδη επιβεβαιωθεί από πειράματα σε ζώα και οι φαρμακολογικές δραστηριότητες, όπως η αντιοξείδωση [12, 13], η αντιφλεγμονώδης [14], η κατά του όγκου [15, 16], η αντι-αγένεση [17], αντιβακτηριακή [18-20], αγγειοδιασταλτική [21, 22], υπερτασική [21, 22], αντι-υπερχοληστερολαιμική [23], νεφροπροστατευτική [24] και λεύκανση του δέρματος [25]. Με βάση τη διατροφική του αξία και το όφελος για την ανθρώπινη υγεία, κυκλοφορούν όλο και περισσότερα εμπορικά προϊόντα RJ στις αγορές.

Το χρώμα του δέρματος των ζώων και των ανθρώπων σχετίζεται με την περιεκτικότητα της χρωστικής μελανίνης στο δέρμα. Ο ρόλος της μελανίνης είναι να προστατεύει το δέρμα από βλάβες από την υπεριώδη ακτινοβολία, αλλά η υπερβολική συσσώρευση μελανίνης προκαλεί σοβαρές δερματικές διαταραχές, όπως αποχρωματισμό και μελάγχρωση και επιτάχυνση της γήρανσης του δέρματος [26]. Η μελανίνη συντέθηκε στα μελανοκύτταρα που βρίσκονται στο εσώτερο στρώμα της επιδερμίδας μέσω μηχανισμών μελανογένεσης [27]. Η μελανογένεση είναι μια σύνθετη βιοσυνθετική οδός που ελέγχεται από την τυροσινάση, τις πρωτεΐνες 1 και 2 που σχετίζονται με την τυροσινάση (TRP-1 και TRP-2) και τον παράγοντα μεταγραφής που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία (MITF) [28, 29]. Η τυροσινάση είναι ένα ένζυμο που περιορίζει τον ρυθμό για τον έλεγχο της σύνθεσης της μελανίνης. Το πρώτο βήμα παραγωγής μελανίνης είναι η υδροξυλίωση της L-τυροσίνης σε L-3,4-διυδροξυφαινυλαλανίνη (L-DOPA) και η μετατροπή της L-DOPA σε ντοπακινόνη [30]. Το TRP{17}} καταλύει την παραγωγή 5,6- διυδροξυ ινδολο-καρβοξυλικού οξέος που μετατρέπεται από ντοπαχρώμιο και το προϊόν του TRP-2, 5,{6- διυδροξυ ινδόλης καρβοξυλικού οξέος ως υπόστρωμα για TRP-1 μετατρέπεται σε ινδόλη-5,6-κινονικό καρβοξυλικό οξύ, καταλήγοντας τελικά σε σύνθεση μελανίνης [31, 32]. Η αναστολή της σύνθεσης μελανίνης μέσω της διαταραχής της μελανογένεσης θα ήταν ο κύριος τρόπος για την πρόληψη ή τη βελτίωση των υπερμελάγχρωσης διαταραχών, όπως το μέλασμα και οι κηλίδες ηλικίας. Επομένως, η αναζήτηση μιας πιθανής, ασφαλούς και αποτελεσματικής ένωσης για τη μείωση αυτών των παραγόντων στη μελανογένεση θα ήταν αξιοσημείωτη στην ιατρική και τη βιομηχανία καλλυντικών [25, 33, 34].

Ο βασιλικός πολτός έχει αποδειχθεί ότι θα μπορούσε να μειώσει τη σύνθεση μελανίνης [22], αλλά η κύρια δραστική ένωση ή ο μηχανισμός που κρύβεται πίσω από αυτές τις δραστηριότητες του RJ παραμένει άγνωστος. Στην προηγούμενη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι το 10-HDA θα μπορούσε να αναστείλει τη δραστηριότητα της τυροσινάσης (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Σε αυτή τη μελέτη, η ανασταλτική επίδραση στην τυροσινάση από το 10-HDA αξιολογήθηκε περαιτέρω. Μοντέλα βιοσύνθεσης μελανίνης in vitro με χρήση κυτταρικής καλλιέργειας μελανώματος B16F10 και ζωικού μοντέλου ποντικού με εφαρμογή δέρματος πραγματοποιήθηκαν και τα δύο για τη διερεύνηση της ανασταλτικής μελανογένεσης επίδρασης του 10-HDA.

Μέθοδοι

Παρασκευή 10-HDA από βασιλικό πολτό

Ο βασιλικός πολτός παρασκευάστηκε από την Fu-Chang Beekeeping στο Hualien της Ταϊβάν. Προνύμφες ηλικίας 3-ημέρας μεταφέρθηκαν σε κύπελλα βασίλισσας στα πλαίσια και κάθε πλαίσιο περιείχε 30 κύπελλα βασίλισσας. Τα πλαίσια μεταφέρθηκαν σε κυψέλες μελισσών και το RJ συλλέχθηκε 72 ώρες μετά τη μεταφορά των προνυμφών. Κάθε κυψέλη περιέχει περίπου 25,000 μέλισσες [35]. Τα συλλεχθέντα δείγματα RJ διατηρήθηκαν στους -20 βαθμούς μέχρι περαιτέρω ανάλυση. Ο βασιλικός πολτός (40 g) ανέρρευσε με μεθανόλη (400 mL χ 4 χ 30 λεπτά) και το υπερκείμενο συλλέχτηκε μέσω φυγοκέντρησης στα 4500 xg για 30 λεπτά. Το υπερκείμενο συμπυκνώθηκε υπό μειωμένη πίεση για να ληφθεί το ακατέργαστο εκχύλισμα (10,76 g) που ονομάζεται RJM. Το RJM εναιωρημένο σε μεθανόλη καθαρίστηκε με χρωματογραφία στήλης πυριτικής πηκτής (SiO2 CC) και στη συνέχεια εκλούστηκε με βαθμίδες χλωροφορμίου και μεθανόλης (300:1 έως 1:1) για να ληφθούν δέκα κλάσματα που αναλύθηκαν με TLC. Τα κλάσματα 4 και 5 εμφάνισαν σημαντικές κηλίδες, και ως εκ τούτου υποβλήθηκαν σε περαιτέρω καθαρισμό και ανάλυση. Τα κλάσματα 4 και 5 καθαρίστηκαν επανειλημμένα με SiO2 CC (εκλούστηκαν με χλωροφόρμιο/μεθανόλη, 300:1 έως 1:1) και περαιτέρω κρυσταλλώθηκαν με ακετόνη για να ληφθεί 10-υδροξυ-2-δεκανοϊκό οξύ ({{32} } HDA). Η χημική δομή του καθαρισμένου προϊόντος επιβεβαιώθηκε με ανάλυση φασμάτων μάζας NMR και GC. Η 10-ποσοτική ανάλυση HDA προσδιορίστηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) με σύστημα άντλησης Waters 1525 εξοπλισμένο με ανιχνευτή Water 2489, στήλη RP{38}} GP250 (4,6 mm) και Waters 717 plus autosampler. Η κινητή φάση ήταν διάλυμα μεθανόλης (60:40 v/v με υπερκαθαρό και απιονισμένο νερό) ρυθμίστηκε με φωσφορικό οξύ σε pH 2,5, διηθήθηκε μέσω μιας μεμβράνης (0,45 μm) και απαερώθηκε για 5 λεπτά. Ο ρυθμός ροής κινητής φάσης ρυθμίστηκε σε 1,0 mL/min και η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε στα 225 nm. Η περιεκτικότητα σε 10HDA στο τελικό καθαρισμένο δείγμα είναι 90 τοις εκατό, το οποίο χρησιμοποιείται για περαιτέρω ανάλυση.

Κυτταρική καλλιέργεια και 10-θεραπείες HDA

Κύτταρα μελανώματος B16F10 (αριθμός BCRC: 60.031) καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Eagle's Dulbecco (DMEM) συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό (v/v) εμβρυϊκό βόειο ορό στους 37 βαθμούς σε επωαστήρα με υγρασία, ελεγχόμενο με CO2- (5 τοις εκατό) . Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε κατάλληλη κυτταρική πυκνότητα σε 24-πηγάδι ή 6-πλάκα φρεατίου. Μετά από 1 ημέρα επώασης, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις 10-HDA. Το μέσο χρησιμοποιήθηκε στην ομάδα ελέγχου αντί για 10-HDA. Στη συνέχεια, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για διάφορες δοκιμασίες.

Μέτρηση της βιωσιμότητας των κυττάρων

Η κυτταρική βιωσιμότητα μετρήθηκε με ανάλυση {{0}}(4,5-διμεθυλθειαζολ-2- υλ)-2,5 -βρωμιούχου διφαινυλτετραζολίου (MTT) σύμφωνα με την μέθοδος που αναφέρεται από τους Carmichael et al. [36]. Κύτταρα μελανώματος B16F10 καλλιεργήθηκαν σε DMEM που περιείχε 10 τοις εκατό FBS και 1 τοις εκατό L-γλουταμίνη (4 mM) σε επωαστήρα 5 τοις εκατό CO2 στους 37 βαθμούς. Καλλιεργημένα κύτταρα (1 × 104 κύτταρα/φρεάτιο) σπάρθηκαν σε μια πλάκα 96-πηγαδιού, 10-HDA (διαλυμένη σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO)) αραιωμένη από το μέσο σε συγκέντρωση 1, 0,5, 0,1 mM και κοτζικό οξύ 1 mM προστέθηκαν στα φρεάτια. Το μέσο χρησιμοποιήθηκε ως κενό. Μετά από 24-h επώαση στους 37 βαθμούς κάτω από 5 τοις εκατό CO2, το μέσο αφαιρέθηκε από κάθε φρεάτιο, μετά τα φρεάτια πλύθηκαν με PBS (1 Μ φωσφορικό-ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα) δύο φορές. 200 μΙ διαλύματος ΜΤΤ (2 mg/ml) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Η αντίδραση τερματίστηκε με την προσθήκη 100 μL DMSO μετά από 4- ώρες επώασης. Η απορρόφηση κάθε φρεατίου μετρήθηκε στα 540 nm χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη ανοσοπροσδιορισμού (BIO-TEK, Winooski, VT) [20-23]. Η κυτταρική βιωσιμότητα προσδιορίστηκε από την ακόλουθη εξίσωση: Βιωσιμότητα κυττάρων ( εκατοστιαία αναλογία )=[(AB)/ C] × 100 τοις εκατό, Α: όγκος απορρόφησης δείγματος, Β: όγκος απορρόφησης τυφλού, Γ: όγκος απορρόφησης ελέγχου.

Μέτρηση της περιεκτικότητας σε κυτταρική μελανίνη

Η περιεκτικότητα σε ενδοκυτταρική μελανίνη των κυττάρων μελανώματος B16F10 μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την τροποποιημένη μέθοδο που περιγράφεται από τους Bilodeau et al., [37]. Στο τέλος της καλλιέργειας κυττάρων μελανώματος B16F10, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και πλύθηκαν με PBS. Τα συλλεχθέντα κύτταρα λύθηκαν σε ψυχρό ρυθμιστικό λύσης (20 mM φωσφορικό νάτριο (ρΗ 6,8), 1 τοις εκατό Triton Χ-100, 1 mM φαινυλμεθυλσουλφονυλ φθορίδιο (PMSF), 1 mM αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA)). Μετά από φυγοκέντρηση στους 15,000×g για 30 λεπτά, τα σφαιρίδια διαλύθηκαν σε 1 Ν NaOH που περιείχε 20 τοις εκατό DMSO για 1 ώρα στους 60 βαθμούς. Η περιεκτικότητα πρωτεΐνης στο υπερκείμενο προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Bradford. Η απορρόφηση στα 405 nm μετρήθηκε και η περιεκτικότητα σε μελανίνη υπολογίστηκε έναντι ενός γνωστού προτύπου συνθετικής μελανίνης. Επίπεδο μελανίνης ( τοις εκατό )=[(AB)/ C] × 100 τοις εκατό ; Α: όγκος απορρόφησης δείγματος. Β: όγκος απορρόφησης τυφλού. C: έλεγχος του όγκου απορρόφησης.

Μέτρηση της δραστηριότητας της κυτταρικής τυροσινάσης

Πραγματοποιήθηκε μια δοκιμασία δραστικότητας τυροσινάσης σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως από τους Martinez-Esparza et al., [38], με μικρές τροποποιήσεις. Κύτταρα μελανώματος B16F10 λύθηκαν σε 20 mM φωσφορικό νάτριο (ρΗ 6,8), 1 τοις εκατό Triton X-100 και 1 mM φαινυλομεθανοσουλφονυλοφθορίδιο ή PMSF και φυγοκεντρήθηκαν στις 14,{{11} rpm για 15 λεπτά. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη κάθε υπερκειμένου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Bradford με λευκωματίνη ορού βοοειδών (BSA) ως πρότυπο πρωτεΐνης. Η δραστικότητα τυροσινάσης προσδιορίστηκε σε ένα μίγμα αντίδρασης (1 mL) που περιείχε 50 mM ρυθμιστικό φωσφορικού (ρΗ 6,8), 2 mM L DOPA και 300 ug υπερκείμενων πρωτεϊνών. Μετά από επώαση στους 37 βαθμούς για 15 λεπτά, η απορρόφηση στα 475 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Δραστηριότητα τυροσινάσης ( τοις εκατό )=[(AB)/ C] × 100 τοις εκατό ; Α: όγκος απορρόφησης δείγματος. Β: όγκος απορρόφησης τυφλού. C: έλεγχος του όγκου απορρόφησης.

Ανάλυση Western blot

Τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές σε παγωμένο PBS και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA (ρΗ 7,4, 50 mM tris, 0,1 τοις εκατό SDS, 50 mM NaCl, 1 τοις εκατό NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/mL απρωτινίνης και 10 ug/mL λευπεπτίνης). Ένα κλάσμα του προϊόντος λύσης χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη με τη μέθοδο της δοκιμασίας Bradford χρησιμοποιώντας αλβουμίνη ορού βοοειδών ως πρότυπο. Οι πρωτεΐνες (40 μg) διαχωρίστηκαν σε ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου 10 τοις εκατό SDS και στυπώθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης Hybond-C Extra (Amersham Bioscience, UK). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5 τοις εκατό μη λιπαρό γάλα σε αλατούχο διάλυμα Tris-ρυθμιστικού διαλύματος (TBS) που περιείχε 10 mM Tris-HCl, ρΗ 7,5 και 150 mM NaCl για 30 λεπτά. Το MITF, η τυροσινάση, η ταυτομεράση της ντοπάχρωμης 2 (TRP-2), η TRP-1 και η -ακτίνη (ως εσωτερικός έλεγχος) ανιχνεύθηκαν με χρήση πολυκλωνικών αντισωμάτων κουνελιού, αντίστοιχα. Οι μεμβράνες επωάστηκαν περαιτέρω με πολυκλωνικό δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας κατά IgG-H&L (HRP) κουνελιού. Στη συνέχεια, όλα τα δεσμευμένα αντισώματα ανιχνεύθηκαν με χρήση υποστρώματος χημειοφωταύγειας Super Signal® West Pico (ECL) (Thermo Scientific). Η ένταση του σήματος κάθε ζώνης ποσοτικοποιήθηκε με ένα σύστημα πυκνομέτρου Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) εξοπλισμένο με ολοκληρωτή και κανονικοποιήθηκε με αυτό του εσωτερικού ελέγχου.

Προσδιορισμός της αποχρωματιστικής δραστηριότητας σε ποντίκια

Η δραστηριότητα αποχρωματισμού προσδιορίστηκε μέσω του συστήματος μοντέλου ποντικού με το τροποποιημένο πρωτόκολλο των Tai et al. [39]. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Εθνικού Πανεπιστημίου Formosa (αριθμός έγκρισης: 10,401). Θηλυκά μαύρα ποντίκια πέντε εβδομάδων (C57BL/6 J), βάρους 20 έως 25 g, αγοράστηκαν από το Εθνικό Εργαστήριο Ζώων, Ταϊπέι. Σε όλα τα πειράματα, τα ζώα στεγάστηκαν σε ένα κλιματιζόμενο δωμάτιο με σταθερή θερμοκρασία (25 βαθμοί ± 2 βαθμοί) και διατηρήθηκαν σε κύκλο φωτός: σκοτάδι 12 ωρών. Τα ζώα εγκλιματίστηκαν για 7 ημέρες πριν από το πείραμα. Μετά το ξύρισμα των μαλλιών τους, τα ζώα έλαβαν 1-ημερήσια ανάπαυση. Παρασκευάστηκαν δείγματα γέλης που περιείχαν 10-HDA με διασπορά των φαρμάκων σε βαζελίνη. Συνολικά σαράντα ποντίκια χωρίστηκαν εξίσου σε πέντε ομάδες και κάθε ομάδα επαλείφθηκε δύο φορές την ημέρα με 0,1 g βαζελίνης (μάρτυρας), 1 τοις εκατό kojic οξύ σε βαζελίνη, 0,5 τοις εκατό , 1 τοις εκατό ή 2 τοις εκατό 10-HDA σε βαζελίνη . Οι εφαρμογές συνεχίστηκαν για 3 εβδομάδες και ο δείκτης λεύκανσης του δέρματος (τιμή L) μετρήθηκε στην ίδια περιοχή δέρματος κάθε μέρα με ένα DermaLab® Combo (Cotex Technology, Δανία), το οποίο είναι ένα χρωματομετρικό όργανο που χρησιμοποιεί λευκό υψηλής έντασης LED ως πηγή φωτός. Το χρωματομετρικό όργανο είναι συνδεδεμένο σε υπολογιστή [40]. Θεωρήσαμε μόνο την παράμετρο L και η τιμή L ήταν η σχετική φωτεινότητα, που κυμαινόταν από ολικό μαύρο (L=0) έως ολικό λευκό (L=100). Η αρχική τιμή L δείκτη λεύκανσης δέρματος προσδιορίστηκε από το δέρμα κάθε ποντικού πριν εφαρμοστεί με τις ελεγχόμενες ουσίες.

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα αποτελέσματα σε αυτή τη μελέτη αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη γενική διαδικασία γραμμικού μοντέλου που είναι διαθέσιμη από το πακέτο λογισμικού Statistical Analysis System έκδοση 9.1 (Statistical Analysis System Institute, 2002). Η δοκιμή πολλαπλών εύρους του Duncan [41] χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση διαφορών μεταξύ των μέσων των θεραπειών. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν.

Αποτελέσματα

Επίδραση του 10-HDA στη βιωσιμότητα των κυττάρων μελανώματος B16F1

Η βέλτιστη δόση από τον προσδιορισμό βιωσιμότητας των κυττάρων με MTT σε κύτταρα μελανώματος B16F1 φαίνεται στο Σχήμα 1. Έδειξε ξεκάθαρα ότι το 10-HDA δεν ήταν κυτταροτοξικό για τα κύτταρα μελανώματος B16F1 σε συγκεντρώσεις 0.1, { {8}}.5, και 1 mM, και το κοζικό οξύ δεν ήταν κυτταροτοξικό στα κύτταρα μελανώματος σε συγκέντρωση 1 mM. Η κυτταρική βιωσιμότητα μειώθηκε σημαντικά (μείωση 20 τοις εκατό) στα κύτταρα μελανώματος που εκτέθηκαν σε 1,5 mM 10-HDA (P < 0.05) (δεν εμφανίζονται τα δεδομένα) και 5 mM κοτζικό οξύ. Επομένως, οι συγκεντρώσεις 0,1, 0,5, 1 mM 10-HDA και 1 mM κοζικού οξέος εφαρμόστηκαν σε επόμενα πειράματα.

Αναστολή της δραστηριότητας της τυροσινάσης και της σύνθεσης μελανίνης σε κύτταρα μελανώματος B16F10 από 10-HDA

Το Kojic acid είναι ένας αποτελεσματικός και πολύ γνωστός παράγοντας κατά της μελανογένεσης και χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας σε αυτή τη μελέτη. 10-Η HDA κατέστειλε σημαντικά (p < 0.05) τη σύνθεση μελανίνης και τη δραστηριότητα τυροσινάσης σε σύγκριση με τον έλεγχο των μη υποβληθέντων σε αγωγή κυττάρων μελανώματος B16F1. Στη δόση του 1 mM, το 10- HDA προκάλεσε 28 ± 2,4 τοις εκατό μείωση της δραστηριότητας της κυτταρικής τυροσινάσης (P < 0.01) και 40.4 ± 3 .0 τοις εκατό μείωση στη σύνθεση κυτταρικής μελανίνης (P < 0,001), ενώ το κοτζικό οξύ (1 mM) μείωσε επίσης σημαντικά τη δραστηριότητα της τυροσινάσης και τη σύνθεση μελανίνης κατά 14,4 ± 3,7 τοις εκατό (P < 0,05) και 19,3 ± 1,5 τοις εκατό (Ρ < 0,001), αντίστοιχα (Εικ. 2 και 3).

Καταστολή της έκφρασης πρωτεΐνης τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2 σε κύτταρα μελανώματος B16F10 από 10-HDA

Για να διερευνηθεί εάν το 10-HDA μπορεί να επηρεάσει την έκφραση μελανογόνου πρωτεΐνης, πραγματοποιήθηκε ανάλυση Western blotting χρησιμοποιώντας το προϊόν λύσης των κυττάρων μελανώματος B16F10 που υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10-HDA (Εικ. 4). Η 10-HDA ανέστειλε δραματικά τις εκφράσεις τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2 σε κύτταρα μελανώματος B16F1 σε σύγκριση με εκείνες των κυττάρων που δεν υποβλήθηκαν σε θεραπεία (Εικ. 4b–d). Η -ακτίνη, μια πρωτεΐνη οικιακής χρήσης που χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος, δεν έδειξε καμία αλλαγή. Το 10-HDA ανέστειλε τα επίπεδα πρωτεϊνικής έκφρασης των μελανογόνων ενζύμων παρόμοια με το κοτζικό οξύ.

Ανασταλτική επίδραση του 10-HDA στο επίπεδο πρωτεΐνης που σχετίζεται με μελανογόνους παράγοντες στα κύτταρα B16F10

Κατά τη διαδικασία της μελανογένεσης σε κύτταρα θηλαστικών, το MITF παίζει τον κύριο ρυθμιστικό ρόλο στη σύνθεση της οδού TRPs, συμπεριλαμβανομένων των TYR, TRP{{0}} και TRP-2 [25, 26]. Η επίδραση του 10-HDA στην έκφραση MITF αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας στύπωμα Western. B16F1{{10}} κύτταρα μελανώματος εκτέθηκαν σε διάφορες συγκεντρώσεις 10- HDA (0,1, 0,5 και 1 mM), με αποτέλεσμα τη μείωση της έκφρασης MITF από 10-HAD ( Εικ. 4ε). Η τιμή IC50 για την 10-καταστολή HDA της έκφρασης MITF εκτιμήθηκε ότι είναι 0.86 mM. Τα παρόντα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα επίπεδα πρωτεΐνης MITF μειώνονται από το 10-HDA. Η επίδραση της υπομελάγχρωσης του 10-HDA μπορεί να είναι το αποτέλεσμα της προς τα κάτω ρυθμισμένης έκφρασης γονιδίου MITF, η οποία στη συνέχεια θα καταστέλλει τις πρωτεϊνικές και γονιδιακές εκφράσεις της τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2.

Αξιολόγηση της αποχρωματιστικής δραστηριότητας του 10-HDA in vivo μέσω ποντικών

Για να υποθέσουμε τη δοσολογία στον άνθρωπο, χρησιμοποιήσαμε ποντίκια ως ζωικό μοντέλο για να διερευνήσουμε τη δραστηριότητα αποχρωματισμού του {{0}}HDA. Μετά το ξύρισμα, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 1 τοις εκατό kojic acid σε βαζελίνη, 0.5 τοις εκατό , 1 τοις εκατό ή 2 τοις εκατό 10-HDA σε βαζελίνη και ο δείκτης λεύκανσης του δέρματος μετρήθηκε και καταγράφηκε. Για αυτήν τη in vivo μελέτη, χρησιμοποιήσαμε το κοτζικό οξύ ως θετικό μάρτυρα. Το Kojic acid χρησιμοποιείται ευρέως ως παράγοντας θεραπείας αποχρωματισμού του δέρματος σε όλο τον κόσμο. Μετά την πρώτη εβδομάδα θεραπείας, ο βαθμός λεύκανσης του δέρματος αυξήθηκε σημαντικά στα ποντίκια που έλαβαν 10- HDA, σε σύγκριση με τον έλεγχο, και αυτή η αύξηση συνεχίστηκε μέχρι το τέλος του πειράματος. Η δραστηριότητα αποχρωματισμού του 0.5, 1 και 2 τοις εκατό 10-HDA ήταν συγκρίσιμη με εκείνη του 1 τοις εκατό κοτζικικού οξέος. Τα αποτελέσματά μας αποκάλυψαν ότι 10-Το HDA μπόρεσε να προωθήσει σημαντικά τη λεύκανση του δέρματος στο δέρμα των ποντικών σε συγκέντρωση τουλάχιστον 0,5 τοις εκατό (Εικ. 5). Επομένως, 10-Το HDA φαίνεται να είναι καλός υποψήφιος ως λευκαντικός παράγοντας για τη θεραπεία της υπερμελάγχρωσης του δέρματος.

Συζήτηση

Η σύνθεση μελανίνης ελέγχεται από τον σύνθετο ενζυματικό καταρράκτη τυροσινάσης, TRP1 και TRP2. Ο βαθμός αναστολής των γονιδίων και των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη μελανογένεση παίζει σημαντικό ρόλο στην αποτελεσματικότητα ενός παράγοντα αποχρωματισμού, ο οποίος συνήθως χρησιμοποιείται στη θεραπεία της υπερμελάγχρωσης ή των καλλυντικών προϊόντων [28]. Για να αποσαφηνιστεί η πραγματική ανασταλτική επίδραση του 10-HDA στη μελανογένεση, η περιεκτικότητα σε μελανίνη και η ενδοκυτταρική δραστηριότητα τυροσινάσης των κυττάρων B16F10 προσδιορίστηκαν στο ίδιο εύρος συγκεντρώσεων. Τα αποτελέσματα στα Σχ. Τα σχ. 2 και 3 έδειξαν ότι το 10-HDA εμφάνισε υψηλότερη ανασταλτική δραστηριότητα στη σύνθεση μελανίνης σε κύτταρα B16F10 από το κοζικό οξύ. Τα δεδομένα αποκάλυψαν ότι το 10- HDA μπλοκάρει τη μελανογένεση σε κύτταρα μελανώματος B16F10.

Η μελανογένεση κυριαρχείται από τουλάχιστον τρεις ρυθμιστικές πρωτεΐνες, την τυροσινάση, την TRP1 και την TRP2 στα μελανοκύτταρα των θηλαστικών [29]. Οι εκφράσεις των TRP-1, TRP-2 και MITF αναστέλλονται όλες στα κύτταρα μελανώματος B16F10, τα οποία υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 10-HDA. Το MITF είναι ένας κύριος μεταγραφικός παράγοντας για τη ρύθμιση της έκφρασης μελανογόνων ενζύμων, όπως η τυροσινάση, η TRP-1 και η TRP-2 [42, 43]. Σύμφωνα με τα δεδομένα Western blotting (Εικ. 4), τα κύτταρα θηλαστικών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 10-HDA θα μείωναν την έκφραση όλων των ενζύμων που περιορίζουν τον ρυθμό, συμπεριλαμβανομένων των τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2 και να αποτρέψει τη μη φυσιολογική συσσώρευση μελανίνης κατά τη διαδικασία της μελανογένεσης. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι το 10- HDA θα μπορούσε να αναστείλει τη διαδικασία μελανογένεσης αναστέλλοντας την έκφραση του MITF. Σε αυτήν τη μελέτη, δείξαμε ότι 10-Το HDA αναστέλλει τη μελανογένεση μειώνοντας την παραγωγή πρωτεΐνης MITF, τυροσινάσης και μελανίνης. Η ανασταλτική οδός του 10-HDA στην έκφραση του MITF ήταν διαφορετική από τους άλλους αναστολείς μελανογένεσης, όπως το κοτζικό οξύ, η αρβουτίνη και το ασκορβικό οξύ, τα οποία δεν επηρέασαν την έκφραση του MITF [44, 45]. Αυτό υποδηλώνει ότι 10-Το HDA έχει εξαιρετική δυνατότητα να χρησιμοποιηθεί ως ασφαλής και φυσικός παράγοντας λεύκανσης του δέρματος για λειτουργικά καλλυντικά [46].

Το μελάνωμα, ένας καρκίνος του δέρματος προκύπτει από το κακοήθη trans που σχηματίζεται από τα μελανοκύτταρα. Τα μελανώματα που προέκυψαν σε χρόνια κατεστραμμένο από τον ήλιο δέρμα, επιφάνειες του βλεννογόνου και ακραίου δέρματος προκλήθηκαν από υπερβολική ενεργοποίηση BRAF και NRAS [47], απώλεια του τόπου CDKN2A [48], υπερέκφραση του MITF [49], κιτ υπερενεργοποίησης [50 ], υπερενεργοποιούν το mGluR1 [51, 52]…et al. Σε αυτήν τη μελέτη, το 10-HDA θα μπορούσε να αναστείλει την έκφραση MITF σε κύτταρα μελανώματος B16F10. Αυτό έδειξε ότι 10-Το HDA έχει τη δυνατότητα να είναι το συστατικό για δερματικό φάρμακο ή αντικαρκινικό κατά του μελανώματος.

Το RJ έχει χρησιμοποιηθεί για πολλά δερματολογικά σκευάσματα, συμπεριλαμβανομένης της ανανέωσης του δέρματος, της αναγέννησης του δέρματος, της αναζωογόνησης, του εγκαύματος για επούλωση ή της επούλωσης πληγών [53, 54]. Επιπλέον, αναφέρθηκε ότι ορισμένα ακόρεστα λιπαρά οξέα στο RJ θα μπορούσαν να αναστείλουν τη σύνθεση μελανίνης και τη δραστηριότητα τυροσινάσης, οδηγώντας σε μείωση της μελανογένεσης [55], και δείξαμε ότι η επίδραση αποχρωματισμού του RJ μπορεί να είναι αποτέλεσμα της παρουσίας του {{3 }}HDA. Επειδή το δέρμα των ποντικών είναι παρόμοιο με τον άνθρωπο, χρησιμοποιήσαμε ποντίκια ως ζωικό μοντέλο in vivo για την εξέταση της αποχρωματιστικής δραστηριότητας του 10-HAD. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5, ο δείκτης λεύκανσης δέρματος του χρώματος του δέρματος αυξήθηκε σημαντικά σε ποντίκια που έλαβαν 10-HAD, σε σύγκριση με τον έλεγχο. Επιπλέον, οι Koya-Miyata et al. αξιολογήθηκε η δραστηριότητα προώθησης της παραγωγής κολλαγόνου του 10-HDA σε κυτταρικές σειρές ινοβλαστών που παράγουν αυξητικό παράγοντα μετασχηματισμού- 1 (TGF- 1), ο οποίος είναι ένας σημαντικός παράγοντας για την παραγωγή κολλαγόνου [55] . Επομένως, 10-Το HDA φαίνεται να είναι μια πολλά υποσχόμενη φυσική ένωση για την αναγέννηση του δέρματος και τη θεραπεία υπερμελάγχρωσης.

συμπέρασμα

10-Το HDA ανέστειλε όχι μόνο τη δραστηριότητα της τυροσινάσης αλλά και τις εκφράσεις μελανογόνου ενζύμου, συμπεριλαμβανομένων των τυροσινάσης, TRP{-1 και TRP-2, καταστέλλοντας το MITF στα κύτταρα μελανώματος B16F10. Κατά συνέπεια, η χρωστική της μελανίνης μειώθηκε στα κύτταρα μελανώματος B16F10. Επιπλέον, το ζωικό μοντέλο in vivo έδειξε την αποχρωματιστική δραστηριότητα του 10-HDA σε τοπική εφαρμογή. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι 10-Η HDA έχει έναν υποψήφιο που θα μπορούσε να είναι ένας ασφαλής και φυσικός αναστολέας μελανογένεσης για τη βιομηχανία καλλυντικών, στην οποία η αναζήτηση μιας φυσικής και αποτελεσματικής ένωσης είναι ένας από τους πολύ σημαντικούς στόχους για την ανάπτυξη ενός καλύτερου προϊόντος φροντίδας δέρματος .

Συντομογραφίες

10-HDA: 10-υδροξυ-2-δεκανοϊκό οξύ; BSA: Λευκωματίνη ορού βοοειδών; DMEM: Το τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco. DMSO: Διμεθυλοσουλφοξείδιο. EDTA: Αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ; L-DOPA: L-3,4- διυδροξυφαινυλαλανίνη. MITF: μεταγραφικός παράγοντας που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία. MRJP: κύριες πρωτεΐνες βασιλικού πολτού. ΜΤΤ: 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5- βρωμιούχο διφαινυλτετραζόλιο. PBS: αλατούχο φωσφορικό-ρυθμιστικό διάλυμα. PMSF: φαινυλομεθανοσουλφονυλοφθορίδιο ή φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο. TLC: χρωματογραφία λεπτής στιβάδας. TRP{14}}: πρωτεΐνη 1 που σχετίζεται με την τυροσινάση; TRP{17}}: πρωτεΐνη 2 που σχετίζεται με την τυροσινάση

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε την κα Li-Yu Lee της Fu-Chang Beekeeping για την προετοιμασία του βασιλικού πολτού

Χρηματοδότηση

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από επιχορήγηση από το Υπουργείο Επιστημών και Τεχνολογίας, Ταϊβάν, ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 έως CC Peng).

Διαθεσιμότητα δεδομένων και υλικών

Όλα τα δεδομένα που δημιουργήθηκαν ή αναλύθηκαν κατά τη διάρκεια αυτής της μελέτης περιλαμβάνονται σε αυτό το δημοσιευμένο άρθρο και τα συμπληρωματικά αρχεία πληροφοριών του.

Συνεισφορές συγγραφέων

Το CCP συνέλαβε και σχεδίασε τα πειράματα. Οι HZS και IPL πραγματοποίησαν τα πειράματα. Το CCP και το PCK ανέλυσαν τα δεδομένα. Τα CCP, PCK και JCL συνεισέφεραν αντιδραστήρια/υλικά/εργαλεία ανάλυσης. Το CCP και το IPL έγραψαν και αναθεώρησαν το έγγραφο. Όλοι οι συγγραφείς ενέκριναν την τελική έκδοση του χειρογράφου.

Πληροφορίες συγγραφέων

CCP, Διδάκτωρ Βιοτεχνολογίας, Αναπληρωτής Καθηγητής στο Τμήμα Βιοτεχνολογίας, Εθνικό Πανεπιστήμιο Formosa. HZS, Master in Biotechnology, πτυχιούχος του Τμήματος Βιοτεχνολογίας του Εθνικού Πανεπιστημίου Formosa. IPL, Διδάκτωρ Βιοτεχνολογίας, Διευθυντής στο Τμήμα Έρευνας και Ανάπτυξης, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK, Διδάκτωρ χημείας, αναπληρωτής καθηγητής στο Τμήμα Βιοτεχνολογίας, Εθνικό Πανεπιστήμιο Formosa. JCL, Γενικός Διευθυντής της Honey Bee Town Co., Ltd.

Έγκριση δεοντολογίας

Όλα τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Εθνικού Πανεπιστημίου Formosa (αριθμός έγκρισης: 10.401) και συμμορφώθηκαν με τις Κατευθυντήριες γραμμές για τη φροντίδα και τη χρήση των εργαστηριακών ζώων.

Συγκατάθεση για δημοσίευση

Δεν ισχύει σε αυτή την ενότητα. Αυτό το άρθρο δεν είναι μια κλινική μελέτη στην οποία συμμετέχουν άνθρωποι και αυτό το χειρόγραφο δεν περιέχει μεμονωμένα κλινικά δεδομένα.

Ανταγωνιστικά συμφέροντα

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Σημείωση εκδότη

Το Springer Nature παραμένει ουδέτερο σχετικά με αξιώσεις δικαιοδοσίας σε δημοσιευμένους χάρτες και θεσμικές σχέσεις.

Στοιχεία συγγραφέα

1 Τμήμα Βιοτεχνολογίας, Εθνικό Πανεπιστήμιο Formosa, Huwei, Yunlin, Ταϊβάν. 2 Τμήμα Έρευνας και Ανάπτυξης, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taiwan. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., No.77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taiwan.

Παραλαβή: 9 Μαρτίου 2017 Αποδοχή: 21 Ιουλίου 2017

Δημοσιεύθηκε διαδικτυακά: 09 Αυγούστου 2017

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Chen C, Chen S. Αλλαγές σε πρωτεϊνικά συστατικά και σταθερότητα αποθήκευσης Βασιλικού πολτού υπό διάφορες συνθήκες. Food Chem. 1995; 54:195-200.

2. Takenaka T. Χημική σύνθεση βασιλικού πολτού. Honeybee Sci. 1982; 3:69-74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. Μια οικογένεια βασικών πρωτεϊνών βασιλικού πολτού της μέλισσας Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998; 54:1020-30.

4. Okamoto I, Taniguchi Y, Kunikita T, Kohno K, Iwaki K, Ikeda M. Η κύρια πρωτεΐνη 3 του βασιλικού πολτού ρυθμίζει τις ανοσοαποκρίσεις in vitro και in vivo. Life Sci. 2003; 1:2029–45.

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. Μια ισχυρή αντιβακτηριακή πρωτεΐνη σε βασιλικό πολτό. J Biol Chem. 1990; 265:11333-7.

6. Bilikova J, Hanes J, Nordhoff E, Saenger W, Klaudiny J, Simuth J. Apisimin, ένα νέο πεπτίδιο πλούσιο σε σερίνη βαλίνη από βασιλικό πολτό μέλισσας (Apis Mellifera L.): καθαρισμός και μοριακός χαρακτηρισμός. FEBS Lett. 2002; 528:125–9.

7. Townsend GF, Brown WH, Felauer EE, Hazlett B. Μελέτες για την in vitro αντικαρκινική δράση των λιπαρών οξέων. IV. Οι εστέρες οξέων που σχετίζονται στενά με τα 10- υδροξυ-2-δεκανοϊκά οξέα από τον βασιλικό πολτό κατά της μεταμοσχεύσιμης λευχαιμίας ποντικού. Can J Biochem Physiol. 1961; 39: 1765-70.

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Υδροξυ-2Δ-δεκανοϊκό οξύ, ένα αντιβιοτικό που βρίσκεται στον βασιλικό πολτό. Sci. 1959; 130:452-3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. Λιπαρά οξέα που απομονώνονται από βασιλικό πολτό ρυθμίζουν την ανοσοαπόκριση που προκαλείται από δενδριτικά κύτταρα in vitro. Int Immunopharmacol. 2007; 7:1211-20.

10. Weaver N, Law JH. Ετερογένεια λιπαρών οξέων από βασιλικό πολτό. Φύση. 1960, 188:938–9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. Αξιολόγηση (Ε)-10-υδροξειδίων-ενοϊκού οξέος ως παραμέτρου φρεσκάδας για βασιλικό πολτό. Food Chem. 2003; 80:85–9.

12. Takeshi N, Reiji I. Παρασκευή και λειτουργικές ιδιότητες του εκχυλίσματος νερού και του αλκαλικού εκχυλίσματος βασιλικού πολτού. Food Chem. 2004; 84:181-6.

13. Takeshi N, Mizuho S, Rriji I, Hachiro I, Nobutaka S. Αντιοξειδωτικές δράσεις ορισμένων εμπορικών μελιών, βασιλικού πολτού και πρόπολης. Food Chem. 2001, 75: 237–40.

14. Martos MV, Navajas YR, López JF. Λειτουργικές ιδιότητες του μελιού, της πρόπολης και του βασιλικού πολτού. J Food Sci. 2008; 73:117-24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. Τα προϊόντα μέλισσας αποτρέπουν την επαγόμενη από VEGF αγγειογένεση σε ενδοθηλιακά κύτταρα ανθρώπινης ομφαλικής φλέβας. BMC Complement Altern Med. 2009; 9:1–10.

16. Tamura T, Fujii Α, Kuboyama Ν. Αντικαρκινικά αποτελέσματα βασιλικού πολτού (RJ). Nippon Yakurigaku Zasshi. 1987; 89:73-80.

17. Park HM, Cho MH, Cho Y, Kim SY. Ο βασιλικός πολτός αυξάνει την παραγωγή κολλαγόνου στο δέρμα του αρουραίου μετά από ωοθηκεκτομή. J Med Food. 2012; 15:568–75. doi:10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. Τα προϊόντα μέλισσας αποτρέπουν την επαγόμενη από VEGF αγγειογένεση σε ενδοθηλιακά κύτταρα ανθρώπινης ομφαλικής φλέβας. BMC Complement Altern Med. 2009; 6:489–94.

19. Tseng JM, Huang JR, Huang HC, Tzen JTC, Chou WM, Peng CC. Διευκολυντική παραγωγή ενός αντιμικροβιακού πεπτιδίου-Royalisin και του αντισώματος του μέσω ενός συστήματος τεχνητού σώματος λαδιού. Biotechnol Prog. 2011; 27:153–61.

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. Σχέση δομής και αντιμικροβιακής δράσης του royalizing, ενός αντιμικροβιακού πεπτιδίου από τον βασιλικό πολτό του Apis Mellifera. Πεπτίδια. 2015; 68:190–6.

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. Μελέτες σχετικά με τις ουσίες που μοιάζουν με ινσουλίνη και τις ανασταλτικές ουσίες προς το ένζυμο μετατροπής της αγγειοτενσίνης στον βασιλικό πολτό. Mitsubachi Kagaku. 1998; 19:9-14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. Βιοχημικές μελέτες στον αγγειοδιασταλτικό παράγοντα στον βασιλικό πολτό. Yakugaku Zasshi. 1978; 98:139-45. 23. Vittek J. Επίδραση βασιλικού πολτού στα λιπίδια του ορού σε πειραματόζωα και ανθρώπους με αθηροσκλήρωση. Experientia. 1995; 51:927-35.

24. Ibrahim A, Eldaim MA, Abdel-Daim MM. Νεφροπροστατευτική δράση του μελιού και του βασιλικού πολτού έναντι της υποχρόνιας τοξικότητας της σισπλατίνης σε αρουραίους. Κυτταροτεχνολογία. 2016; 68:1039–48.

25. Han SM, Yeo JH, Cho YH, Pak SC. Ο βασιλικός πολτός μειώνει τη σύνθεση μελανίνης μέσω της μείωσης της ρύθμισης της έκφρασης της τυροσινάσης. Am J Chin Med. 2011; 39:1253–60.

26. Gilchrest BA, Eller MS. Η φωτοφθορά του DNA διεγείρει τη μελανογένεση και άλλες φωτοπροστατευτικές αποκρίσεις. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999; 4:35-40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. Μονοπάτια σηματοδότησης στη Μελανογένεση. Int J Mol Sci. 2016; 17:1144. doi:10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, Hearing VJ. Τροποποίηση της έκφρασης μελανογενούς πρωτεΐνης κατά τη μετάβαση από την ΕΕ στη φαιομελανογένεση. J Cell Sci. 1995; 108:2301-9.

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. Down-regulation of tyrosinase, TRP-1, TRP-2 and MITF εκφράσεις από πιεστήρια εσπεριδοειδών σε μελάνωμα ποντικού B16 F10. Asian Pac J Trop Biomed. 2013; 3: 617–22.

30. Land EJ, Ito S, Wakamatsu K, Riley PA. Σταθερές ρυθμού για τα δύο πρώτα χημικά στάδια της ευμελανογένεσης. Pigment Cell Res. 2003; 16:487–93.

31. Yen FL, Wang MC, Liang CJ, Ko HH, Lee CW. Αναστολέας(-οι) μελανογένεσης από εκχύλισμα Phyla nodiflora. Evid Based Complement Alternat Med 2012; Αναγνωριστικό: 867494. doi 10.1155/2012/867494.

32. Tachibana M. MITF: ένα ρεύμα που ρέει για χρωστικά κύτταρα. Pigment Cell Res. 2000; 3:230-40.

33. Jung SO, Kim DH, Son JH, Nam KC, Ahn DU, Jo CR. Η λειτουργική ιδιότητα της φωσβιτίνης του κρόκου αυγού ως αναστολέας της μελανογένεσης. Food Chem. 2012; 135: 993–8.

34. Yeon HK, Youn OJ, Cho CW, Son DW, Park SJ, Rho JH, Sang YC. Ανασταλτικές επιδράσεις του Cinnamic acid στη βιοσύνθεση μελανίνης στο δέρμα. Biol Pharm Bull. 2008; 31:946-8.

35. Liu JR, Yang YC, Shi LS, Peng CC. Οι αντιοξειδωτικές ιδιότητες του βασιλικού πολτού συνδέονται με την ηλικία των προνυμφών και τον χρόνο συγκομιδής. J Agri Food Chem. 2007, 56: 11447–52.

36. Carmichael J, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB. Αξιολόγηση ημιαυτοματοποιημένης χρωματομετρικής δοκιμασίας με βάση το τετραζόλιο: αξιολόγηση δοκιμής χημειοευαισθησίας. Cancer Res. 1987, 47:936-42.

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 διεγείρει την έκφραση γονιδίου τυροσινάσης και τη μελανογένεση σε διαφοροποιημένα μελανοκύτταρα. Pigment Cell Res. 2001; 14:328-36.

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. Μηχανισμός αναστολής μελανογένεσης από παράγοντα νέκρωσης όγκου-άλφα σε κύτταρα μελανώματος ποντικού B16/F10. Eur J Biochem. 1998; 255:139-46.

39. Ding HY, Chang TS, Shen HC, Tai SK. Αναστολείς τυροσινάσης ποντικού από το Cynanchum Bungei και αξιολόγηση in vitro και in vivo αποχρωματιστικής δραστηριότητας. Exp Dermatology. 2011; 20:720–4.

40. Takiwaki H, Serup J. Μέτρηση χρωματικών παραμέτρων ψωριασικών πλακών με φασματοφωτομετρία ανάκλασης στενής ζώνης και χρωματομετρία τριδιέγερσης. Skin Pharmacol. 1994; 7:145-50.

41. Montgomery DC. Πειράματα με έναν μόνο παράγοντα: Η ανάλυση διασποράς. Στο Σχεδιασμό και Ανάλυση Πειραμάτων. Montgomery, DC, Eds., John Wiley and Sons, Νέα Υόρκη, 1991; 75–77.

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM. Το MITF μεσολαβεί στην έκφραση Cb πρωτεΐνης κινάσης που προκαλείται από cAMP σε ανθρώπινα μελανοκύτταρα. Biochem J. 2006; 395:571-8.

43. Goding CR. Mitf από τη νευρική κορυφή στο μελάνωμα: μεταγωγή σήματος και μεταγραφή στη σειρά των μελανοκυττάρων. Genes Dev. 2000; 14:1712-28.

44. Kim DS, Park SH, Kwon SB, Li K, Youn SW, Park KC. Η (−)-επιγαλλοκατεχίνη-3- και η ινοκιτιόλη μειώνουν τη σύνθεση μελανίνης μέσω της μειωμένης παραγωγής MITF. Arch Pharm Res. 2004; 27:334–9.

45. Choi YK, RhoYK, Yoo KH, Lim YY, Li K, Kim BJ. Επιδράσεις της βιταμίνης C έναντι της πολυβιταμίνης στη μελανογένεση: Συγκριτική μελέτη in vitro και in vivo. Intern J Dermatol. 2011; 49:218–26.

46. ​​Dynek JN, Chan SM, Liu J, Zha J, Fairbrother WJ, Vucic D. Ο μεταγραφικός παράγοντας που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία είναι ένας κρίσιμος μεταγραφικός ρυθμιστής του μελανώματος αναστολέας απόπτωσης στα μελανώματα. Cancer Res. 2008; 68:3124–32.

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC. Διακεκριμένα σύνολα γενετικών αλλαγών στο μελάνωμα. N Engl J Med. 2005;353(20):2135–47.

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. Germline hemizygous deletion of CDKN2A–CDKN2B locus in a ασθενή που παρουσιάζεται με σύνδρομο Li–Fraumeni. npj Γονιδιωματική Ιατρική. 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML, Czyz M. MITF στο μελάνωμα: μηχανισμοί πίσω από την έκφραση και τη δραστηριότητά του. Cell ΜοΙ Life Sci. 2015; 72:1249–60. doi:10.1007/s00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francone TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. Η μετάλλαξη L576P KIT στα μελανώματα του πρωκτού συσχετίζεται με την έκφραση της πρωτεΐνης KIT και είναι ευαίσθητη στην ειδική αναστολή κινάσης. Int J Cancer. 2007; 121:257-64.

51. Abdel-Daim Μ, Funasaka Υ, Komoto Μ, Nakagawa Υ, Yanagita Ε, et αϊ. Φαρμακογονιδιωματική του υποτύπου 1 του μεταβοτροπικού υποδοχέα γλουταμικού και του σχηματισμού κακοήθους μελανώματος in vivo. J Dermatol. 2010; 37:635-46.

52. Ohtani Υ, Harada Τ, Funasaka Υ, Nakao Κ, Takahara C, et αϊ. Ο υποτύπος του μεταβοτροπικού υποδοχέα γλουταμινικού-1 είναι απαραίτητος για την in vivo ανάπτυξη του μελανώματος. Ογκογόνο. 2008; 27:7162-70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. Ο βασιλικός πολτός ενισχύει τη μετανάστευση των ανθρώπινων δερματικών ινοβλαστών και μεταβάλλει τα επίπεδα χοληστερόλης και σφιγγανίνης σε ένα in vitro μοντέλο επούλωσης πληγών. Nutr Res Pract. 2010; 4:362–8.

54. Fujii Α, Kobayashi S, Kuboyama Ν, Furukawa Υ, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto Η, Tamura Τ. Αύξηση της επούλωσης τραυμάτων από βασιλικό πολτό (RJ) σε αρουραίους διαβητικούς με στρεπτοζοτοκίνη. Jpn J Pharmacol. 1990, 53:331-7.

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. Προσδιορισμός παράγοντα προαγωγής της παραγωγής κολλαγόνου από εκχύλισμα βασιλικού πολτού και ο πιθανός μηχανισμός του. Biosci Biotechnol Biochem. 2004; 68:767-73.

Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501