Αυθόρμητη κοκκιοκυτταρική λευχαιμία σε ένα NOD/Shi-scid IL-2R null ποντίκι

Αφηρημένη:Εδώ, αναφέρουμε μια περίπτωση αυτόματης κοκκιοκυτταρικής λευχαιμίας σε 51-αρσενικό NOD/Shi- εβδομάδωνSCIDIL-2R null (NOG) ποντίκι. Το ποντίκι έδειξεπροοδευτική αναιμίακαιτραχιά αναπνευστική κίνηση. Μακροσκοπικά, ο σπλήνας αποχρωματίστηκε και μεγεθύνθηκε. Ιστολογικά, ο μυελός των οστών τουστέρνοκαι το μηριαίο οστό ήταν πολύ κυτταρικό και σχεδόν αποκλειστικά γεμάτονεοπλασματικά κύτταρα. Οι πυρήνες των νεοπλασματικών κυττάρων ήταν μεγάλοι, οβάλ έως ελαφρώς ακανόνιστος σε σχήμα και ένας μικρός αριθμός κυττάρων είχενεφρό- ή πυρήνες σε σχήμα δακτυλίου.Νεοπλασματικά κύτταραδιήθησε εκτενώς στα όργανα και ο σπλήνας και το συκώτι εμπλέκονταν σε εμφανή θέση. Ανοσοϊστοχημικά, ένας μεγάλος πληθυσμός νεοπλασματικών κυττάρων στον κόκκινο πολτό της σπλήνας και του ημιτονοειδούς του ήπατος ήταν θετικός γιαμυελοϋπεροξειδάση. Με βάση τα ιστολογικά χαρακτηριστικά, διαγνώστηκε αυτή η περίπτωσηκοκκιοκυτταρική λευχαιμία. Αυτές οι νέες πληροφορίες γιααυθόρμητους όγκουςμπορεί να είναι χρήσιμο για την κατάλληλη χρήση αυτού του στελέχους ποντικιού σε περαιτέρω έρευνα. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Λέξεις-κλειδιά: κοκκιοκυτταρική λευχαιμία, NOG ποντίκι, αυθόρμητος όγκος

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΝΑ ΠΑΡΕΤΕ ΦΥΣΙΚΟ ΟΡΓΑΝΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ ΜΕ 25% ΕΧΙΝΑΚΟΣΙΔΗ ΚΑΙ 9% ΑΚΤΕΟΣΙΔΗ ΓΙΑ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΩΝ ΝΕΦΡΩΝ

Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Αγορά για περισσότερες λεπτομέρειες Λεπτομέρειες:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-κατάστημα

Αυθόρμητη κοκκιοκυτταρική λευχαιμίααναφέρεται σπάνια σε πολλά στελέχη ποντικών, αν και οι χημικοί παράγοντες και η ιονίζουσα ακτινοβολία μπορεί να αυξήσουν τη συχνότητα εμφάνισης σε ορισμένα στελέχη ποντικών1, 2. Τα ποντίκια NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) είναι σοβαράζώα με ανοσοανεπάρκεια, και παρουσιάζουν ελαττώματα σε κύτταρα Τ-, Β- και φυσικών φονέων, και κακώς λειτουργούντα μακροφάγα και δενδριτικά κύτταρα λόγω της εξουδετέρωσης της αλυσίδας υποδοχέα IL-2 (IL2R c) στο στέλεχος NOD-scid3. Αυτό το στέλεχος ποντικού χρησιμοποιείται για μη κλινικές δοκιμές, όπως το τεστ ογκογένεσης, για την αξιολόγηση της ποιότητας και της ασφάλειας βιολογικών προϊόντων για αναγεννητική ιατρική με χρήση ανθρώπινων κυττάρων/ιστών, λόγω της αξιοσημείωτα καλύτερης εμφύτευσης ξενογενών κυττάρων4–6. Αν και η κατάσταση ανοσοανεπάρκειας και οι επιπτώσεις της στα ξενομοσχεύματα έχουν μελετηθεί καλά, λίγες πληροφορίες είναι διαθέσιμες για αυθόρμητους όγκους που εμφανίζονται σε αυτό το στέλεχος ποντικού, όπως το θυμικό λέμφωμα,μαστικόςαδένας αδένωμα/αδενοκαρκίνωμα, βρογχιοκυψελιδικό καρκίνωμα, ραβδομυοσάρκωμακαι τεράτωμα7. Εδώ, αναφέρουμε μια περίπτωση κοκκιοκυτταρικής λευχαιμίας σε αρσενικό ποντίκι NOG 51-εβδομάδων.

Το ζώο ελήφθη από την In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Ιαπωνία) σε ηλικία 6 εβδομάδων και διατηρήθηκε χωρίς θεραπεία. Το ζώο στεγάστηκε μεμονωμένα σε πλαστικό κλουβί με ατομικό αεριζόμενο σύστημα κλουβιού (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) μέσα σε ένα περιβαλλοντικά ελεγχόμενο δωμάτιο συστήματος φραγμού, το οποίο διατηρήθηκε σε θερμοκρασία 22 ± 2 βαθμών με υγρασία 50 ± 20% και 12-h κύκλος φωτός/σκότους. Το ποντίκι τράφηκε με δίαιτα σε αυτόκλειστο σφαιρίδιο (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) με νερό βρύσης σε αυτόκλειστο και λίπος. Ο χειρισμός του ζώου έγινε σύμφωνα με το πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων της CMIC Pharma Science Co., Ltd., η οποία είναι διαπιστευμένη από την AAALAC International.

Αυτό το ποντίκι εμφάνισε κλινικά σημάδια αποδυνάμωσης, όπως αναιμία, σκληρή αναπνευστική κίνηση και μείωση σωματικού βάρους μεταξύ 49 και 51 εβδομάδων. Το ζώο υποβλήθηκε σε ευθανασία σε ηλικία 51 εβδομάδων. Κατά τη νεκροψία, ο σπλήνας αποχρωματίστηκε και μεγεθύνθηκε. Στα άλλα όργανα δεν παρατηρήθηκαν εμφανή μη φυσιολογικά ευρήματα. Ο θύμος και ο λεμφαδένας ήταν ατροφικοί, παρόμοιοι με εκείνους των φυσιολογικών ποντικών NOG.

Όλα τα δείγματα οργάνων και ιστών συλλέχθηκαν τακτικά, σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη φορμαλίνη με ρυθμιστικό διάλυμα, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη και τεμαχίστηκαν σε περίπου 3 μm. Για την παθολογική του εξέταση, οι τομές χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ). Τομές σπλήνας και ήπατος χρωματίστηκαν ανοσοϊστοχημικά για πολυκλωνικό αντίσωμα κατά της ανθρώπινης μυελοϋπεροξειδάσης (MPO) κουνελιού (Dako Japan, Τόκιο, Ιαπωνία) ως δείκτης μυελοειδών κυττάρων, μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-ανθρώπινου CD3 κουνελιού (Nichirei Biosciences, Japan, Tokyo). ) ως δείκτης Τ-λεμφοκυττάρων και ως δείκτης Β-λεμφοκυττάρου8. Οι τομές επωάστηκαν με τα αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα και η ανοσοανίχνευση διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα ΚΙΤ Histofine® MOUSESTAIN (Nichirei Biosciences Inc.) με 3,3'-διαμινοβενζιδίνη/Η2Ο2 ως χρωμογόνο. Τότε έγιναν ανοσοχρωματισμένες τομέςαντιχρωματισμένο με αιματοξυλίνη.

Ιστοπαθολογικά, ο μυελός των οστών του στέρνου και του μηριαίου οστού ήταν εξαιρετικά κυτταρικός και σχεδόν αποκλειστικά γεμάτος με νεοπλασματικά κύτταρα (Εικ. 1Α). Ο λιπώδης ιστός μετατοπίστηκε πλήρως. Υπήρχαν περιστασιακά κυτταρικές εστίες αποτελούμενες από ερυθροειδή και μεγακαρυοκυτταρικά στοιχεία στον μυελό, οι οποίες θεωρήθηκαν ότι ήταν υπολείμματαφυσιολογική αιμοποίηση. Τα περισσότερα νεοπλασματικά κύτταρα έδειξαν βλαστική εμφάνιση, που χαρακτηρίζεται από μεγάλους, ωοειδείς έως ελαφρώς ακανόνιστους πυρήνες και με δικτυωτή χρωματίνη που περιέχει έναν ή περισσότερους προεξέχοντες πυρήνες. Υπήρχε ένας μικρός αριθμός κυττάρων με πυρήνες σε σχήμα νεφρού ή δακτυλίου και μερικά κύτταρα με λοβωτούς πυρήνες ήταν επίσης παρόντα (Εικ. 1Β). Οι κόκκοι στο κυτταρόπλασμα των νεοπλασματικών κυττάρων δεν ήταν εμφανείς στις τομές που βάφτηκαν με ΗΕ. Βρέθηκαν πολυάριθμες μιτωτικές μορφές στον μυελό και περιστασιακά παρατηρήθηκαν επίσης αποπτωτικά σώματα. Τα νεοπλασματικά κύτταρα εισέβαλαν σημαντικά στο περιόστεο και στους γύρω σκελετικούς μυς. Υπήρξε εκτεταμένη διήθηση νεοπλασματικών κυττάρων σε άλλα όργανα και ιστούς και ο σπλήνας και το ήπαρ εμπλέκονταν σε εμφανή θέση. Στον σπλήνα, νεοπλασματικά κύτταρα παρατηρήθηκαν σε όλο τον κόκκινο πολφό (Εικ. 2). Η καψική διήθηση νεοπλασματικών κυττάρων ήταν εμφανής. Παρατηρήθηκαν μερικές αναπτυσσόμενες σειρές ερυθροειδών και μεγακαρυοκύτταρα. Μεγακαρυοκύτταρα που περιείχαν ένα ή μερικά μυελοειδή κύτταρα στο κυτταρόπλασμα, υποδηλώνοντας εμπεριπόλωση, παρατηρήθηκαν περιστασιακά. Στο ήπαρ, νεοπλασματικά κύτταρα διήθησαν διάχυτα την κάψουλα του Glisson και τα ηπατικά ιγμόρεια (Εικ. 3). Νεοπλαστικά κύτταρα με πυρήνες σε σχήμα νεφρού ή δακτυλίου ήταν επίσης εμφανή σε ορισμένα αιμοφόρα αγγεία. Ορισμένα ηπατοκύτταρα στην περιπυλαία περιοχή, με εμφανή νεοπλασματική κυτταρική διήθηση, εμφάνισαν εκφυλισμό ή νέκρωση, ενώ η φυσιολογική δομή του ηπατικού λοβού παρέμεινε ανέπαφη. Νεοπλασματική κυτταρική διήθηση βρέθηκε επίσης σε άλλα όργανα, συμπεριλαμβανομένου του κυψελιδικού τοιχώματος και της περιαγγειακής περιοχής του πνεύμονα, μεταξύ σταδίων στο νεφρό, ιγμορινοειδούς στα επινεφρίδια και βλεννογόνου και υποβλεννογόνου στο γαστρικό σωλήνα (στομάχι και έντερο). Ανοσοϊστοχημικά, ένας μεγάλος πληθυσμός νεοπλασματικών κυττάρων στον κόκκινο πολτό του σπλήνα (Εικ. 4) και στο ημιτονοειδές του ήπατος ήταν θετικός για ΜΡΟ. CD3 και Pax-5 θετικά κύτταρα δεν ανιχνεύθηκαν. Τα αποτελέσματα της ανοσοχρώσης CD3 και Pax-5 ήταν παρόμοια με εκείνα της σπλήνας φυσιολογικών ποντικών NOG, τα οποία ήταν ιστολογικά υποπλαστικά και δεν έδειξαν θετικά κύτταρα CD3 ή Pax-5.

Η ανοσοϊστοχημική έρευνα αποκάλυψε ότι τα νεοπλασματικά κύτταρα προήλθαν από τις γενεαλογίες των μυελοειδών κυττάρων. Σε ορισμένες από τις εμπλεκόμενες περιοχές, ειδικά τη σπλήνα και το ήπαρ, ένας μικρός αριθμός κυττάρων είχαν σχήματα νεφρού, δακτυλίου ή λοβού ενδεικτικά της διαφοροποίησης των μυελοειδών σειρών. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι τα νεοπλασματικά κύτταρα προέρχονται από ανώριμα κοκκιοκύτταρα. Η περίπτωση της σοβαρής μυελοποίησης μπορεί να είναι εμφανής από την παρουσία όλων των τύπων αναπτυσσόμενων μυελοειδών σειρών, σε αντίθεση με την κυριαρχία των ανώριμων κυττάρων στη λευχαιμία. Επιπλέον, η προοδευτική αναιμία είναι ένα κοινό κλινικό σημάδι της κοκκιοκυτταρικής λευχαιμίας και οι αυξήσεις στα ερυθροειδή και μεγακαρυοκυτταρικά κύτταρα είναι φτωχές1. Ο μικρός πληθυσμός κοκκιοκυττάρων με λοβωτούς πυρήνες στην πληγείσα περιοχή χωρίς εμφανή φλεγμονή υποδηλώνει ότι τα ευρήματα της παρούσας περίπτωσης είναι νεοπλασματική και όχι αντιδραστική μυελοποίηση.

Στην κοκκιοκυτταρική λευχαιμία, ο μυελός των οστών μπορεί να αντικατασταθεί από ανώριμα και ώριμα μυελοειδή κύτταρα. Σε μια προηγούμενη αναφορά σε άλλα στελέχη ποντικών, αυτά τα νεοπλασματικά κύτταρα διήθησαν πλήρως το ήπαρ, τον σπλήνα, τους λεμφαδένες κ.λπ.2, και αυτά τα κύτταρα στη σπλήνα και στο ήπαρ εντοπίζονταν κυρίως στον κόκκινο πολτό και γύρω από την κάψουλα του Glisson1. Έτσι, η κατανομή των λευχαιμικών κυττάρων στην παρούσα περίπτωση ήταν πανομοιότυπη με αυτήν στην προηγούμενη περίπτωση. Με βάση τη μορφολογία των κυττάρων, η κοκκιοκυτταρική λευχαιμία σε ποντίκια ταξινομείται σε δύο τύπους: τον νεανικό τύπο, ο οποίος είναι συγκρίσιμος με την ανθρώπινη οξεία μυελογενή λευχαιμία και τον ώριμο τύπο με την ανθρώπινη χρόνια μυελογενή λευχαιμία1. Στη νεανική περίπτωση, τα νεοπλασματικά κύτταρα στο μυελό των οστών, τον σπλήνα και το ήπαρ κυριαρχούνταν από κακώς διαφοροποιημένα κύτταρα, ενώ μυελοειδή στοιχεία που αντιπροσωπεύουν διάφορους βαθμούς ωρίμανσης μπορούν να φανούν και το ποσοστό των μυελοβλαστών ήταν χαμηλό σε ορισμένες ώριμες περιπτώσεις2, 9. Στην παρούσα περίπτωση, τα λευχαιμικά κύτταρα κυριαρχούνταν από μια ανώριμη μορφή με μεγάλους, οβάλ έως ελαφρώς ακανόνιστου σχήματος πυρήνες. Επιπλέον, λαμβάνοντας υπόψη τα κλινικά ευρήματα ότι η γενική επιδείνωση της υγείας, συμπεριλαμβανομένης της προοδευτικής αναιμίας και της σκληρής αναπνευστικής κίνησης, αναπτύχθηκε οξεία· Επομένως, η παρούσα υπόθεση θεωρείται ότι είναι νεανικού τύπου.

Εικ. 1. Ιστολογικές εικόνες του μυελού των οστών του μηριαίου οστού. Α: Τα νεοπλασματικά κύτταρα πολλαπλασιάζονται διάχυτα, αντικαθιστώντας έτσι τον μυελό των οστών. Β: Οι πυρήνες είναι μεγάλοι, οβάλ έως ελαφρώς ακανόνιστο σχήμα. Ένας μικρός αριθμός κυττάρων έχει πυρήνες σε σχήμα νεφρού (κίτρινη αιχμή βέλους), δακτυλίου (πράσινη αιχμή βέλους) ή λοβού (λευκή αιχμή βέλους). Το μιτωτικό σχήμα υποδεικνύεται με το λευκό βέλος. ΑΥΤΟΣ λεκέδες. Μαύρη γραμμή=50 μm (A), 10 μm (B).

Σε προηγούμενη δημοσίευση σε ποντίκια NOG, οι νεοπλασματικές βλάβες ήταν γενικά ασυνήθιστες. Ωστόσο, το θυμικό λέμφωμα έχει αναφερθεί σε 0.82% στην ηλικιακή ομάδα που κυμαίνεται από 16 έως 40 εβδομάδες7, 10. Από όσο γνωρίζουμε, δεν έχει αναφερθεί αυθόρμητη κοκκιοκυτταρική λευχαιμία στο παρελθόν σε ποντικούς NOG. Σε αρκετά στελέχη ποντικών, συμπεριλαμβανομένων των B6C3F1 και BALB/c, σπάνια εμφανίστηκε κοκκιοκυτταρική λευχαιμία2, 11, και δεν έχει αναφερθεί στην περίπτωση αυτών των ποντικών σε ηλικία 12 μηνών ή μικρότερη. Η παρούσα περίπτωση ανέπτυξε κοκκιοκυτταρική λευχαιμία σε ηλικία 51 εβδομάδων, η οποία ήταν σχετικά νεαρή ηλικία. Αυτές οι νέες πληροφορίες για τους αυθόρμητους όγκους μπορεί να είναι χρήσιμες για την κατάλληλη χρήση αυτού του στελέχους ποντικού σε περαιτέρω έρευνα.