Προστατευτικές επιδράσεις της ταξιφολίνης στην τοξικότητα του ήπατος που προκαλείται από το Pazopanib: Ένα Πειραματικό Μοντέλο Αρουραίων

Παρακαλώ επικοινώνησε:oscar.xiao@wecistanche.comγια να μάθετε περισσότερα

Αφηρημένη:Το pazopanib είναι ένας αναστολέας της τυροσινικής κινάσης που χρησιμοποιείται γενικά για τη θεραπεία μεταστατικών νεφρώνκυτταρικός καρκίνοςκαι προχωρημένο σάρκωμα μαλακών μορίων. Μπορεί να προκαλέσει διάφορους βαθμούς ηπατοτοξικότητας. Η μελέτη μας είχε ως στόχο να διερευνήσει την επίδραση της ταξιφολίνης στην επαγόμενη από το pazopanibηπατική τοξικότητα. Συνολικά 18 αρουραίοι χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες: την ομάδα pazopanib (PP), pazopanib συν ταξιφολίνη (TPP) και ελέγχου (C). Η ταξιφολίνη χορηγήθηκε στην ομάδα TPP (n=6) με δόση 50 mg/kg. Το απεσταγμένο νερό χορηγήθηκε από το στόμα στις ομάδες C (n=6) και PP (n=6) ως διαλύτης. Στη συνέχεια, το pazopanib 200 mg/kg χορηγήθηκε στις ομάδες TPP και PP μέσω του στομάχου. Αυτή η διαδικασία επαναλαμβανόταν μία φορά την ημέρα για τέσσερις εβδομάδες. Στη συνέχεια, όλοι οι αρουραίοι θυσιάστηκαν και τα συκώτια τους αφαιρέθηκαν. Αξιολογήθηκαν τα επίπεδα μηλονοδιαλδεΰδης (MDA), ολικής γλουταθειόνης (TSH), ολικής οξειδωτικής κατάστασης (TOS) και ολικής αντιοξειδωτικής κατάστασης (TAS). Τα επίπεδα MDA και TOS ήταν υψηλότερα στην ομάδα PP σε σύγκριση με τα επίπεδα των άλλων παραμέτρων (P<0.001). this="" and="" tas="" levels="" were="" lower="" in="" the="" pp="" group="" than="" in="" the="" tpp="" and="" c="" groups=""><0.001), and="" the="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" alanine="" aminotransferase="" (alt),="" and="" lactate="" dehydrogenase="" (ldh)="" levels="" were="" higher.="" furthermore,="" liver="" tissue="" damage,="" including="" hemorrhage,="" hydropic="" degeneration,="" and="" necrosis="" was="" observed="" in="" the="" pp="" group.="" administration="" of="" taxifolin="" before="" pazopanib="" significantly="" improved="" degenerative="" changes.="" our="" study="" demonstrated="" that="" the="" administration="" of="" taxifolin="" is="" significantly="" effective="" in="" preventing="" pazopanib-induced="" hepatotoxicity="" in="">

Λέξεις-κλειδιά:πειραματικά μοντέλα, ηπατική τοξικότητα, οξειδωτικό στρες, pazopanib, ταξιφολίνη

κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

Εισαγωγή

Το Pazopanib (Votrient), ένας αναστολέας της τυροσινοκινάσης, εγκρίθηκε από τον Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων των Ηνωμένων Πολιτειών (US FDA) και τον Ευρωπαϊκό Οργανισμό Φαρμάκων για τη θεραπεία του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων [1]. Έχει επίσης δείξει θεραπευτική αποτελεσματικότητα στη θεραπεία του μη λιποκυττάρου προχωρημένου σαρκώματος μαλακών ιστών [2, 3] και του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών [4]. Το pazopanib είναι ένας αναστολέας της κινάσης πολλαπλών τυροσίνης που στοχεύει τους υποδοχείς αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) 1, 2 και 3. c-kit? και υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια (PDGF-R) [5]. Διάρροια, υπέρταση, καρδιακή τοξικότητα, αιμορραγικά και θρομβοεμβολικά επεισόδια, γαστρεντερική διάτρηση, νευρολογικές διαταραχές, οξεία παγκρεατίτιδα, πνευμοθώρακας και μεταβολικές παρενέργειες έχουν παρατηρηθεί κατά τη χρήση του pazopanib [6]. Σε κλινικές δοκιμές του pazopanib, η ηπατοτοξικότητα εκδηλώθηκε ως αύξηση των επιπέδων τρανσαμινάσης ορού (αμινοτρανσφεράση αλανίνης, ALT, ασπαρτική αμινοτρανσφεράση, AST) και χολερυθρίνης. Η ηπατοτοξικότητα μπορεί να είναι σοβαρή και θανατηφόρα. Τα ηπατικά ένζυμα ορού θα πρέπει να παρακολουθούνται πριν από την έναρξη του pazopanib και η παρακολούθηση θα πρέπει να επαναλαμβάνεται τις εβδομάδες 3, 5, 7 και 9. στους μήνες 3 και 4. και όπως ενδείκνυται κλινικά. Στη συνέχεια θα πρέπει να γίνεται περιοδικός έλεγχος. Λόγω αυτής της σημαντικής παρενέργειας του pazopanib, φέρει μια προειδοποίηση σε κουτί για να προειδοποιεί τους ασθενείς και τους επαγγελματίες υγείας σχετικά με τον πιθανό κίνδυνο ηπατικής βλάβης [7]. Ο in vitro έλεγχος 31 μικρών μορίων αναστολέων κινάσης που εγκρίθηκαν από τον FDA των ΗΠΑ αποκάλυψε ότι η ηπατική τοξικότητα που σχετίζεται με το pazopanib περιλαμβάνει βλάβη στα μιτοχόνδρια [8]. Σε πρόσφατες μελέτες, τα παράγωγα αλδεΰδης και οι μεταβολίτες του n-οξειδίου του pazopanib έχει αποδειχθεί ότι προκαλούν οξειδωτικό στρες και αυξάνουν τις ελεύθερες ρίζες οξυγόνου, προκαλώντας έτσι ηπατοτοξικότητα [9-11]. Mingard et al. έδειξε ότι ο μηχανισμός της επαγόμενης από το pazopanib ηπατοτοξικότητας μπορεί να οφείλεται κυρίως σε αυξημένο οξειδωτικό στρες στα μιτοχόνδρια [12]. Σε αυτό το πλαίσιο, πληροφορίες από τη βιβλιογραφία υποδηλώνουν ότι το οξειδωτικό στρες είναι ένας από τους βασικούς μηχανισμούς ηπατοτοξικότητας που προκαλείται από το pazopanib και αυτό μπορεί να εξαλειφθεί με αντιοξειδωτική θεραπεία. Τα φλαβονοειδή είναι ένας από τους πιο συχνά μελετημένους φυτικούς παράγοντες λόγω της ευρείας κατανομής και της ισχυρής αντιοξειδωτικής τους ικανότητας [13]. Διυδροφλαβονόλες μια ομάδα απόφλαβονοειδή, επιδεικνύουν διάφορες βιολογικές δραστηριότητες, συμπεριλαμβανομένης της δραστικής δραστηριότητας δέσμευσης ειδών οξυγόνου (ROS) και της δραστηριότητας δέσμευσης μετάλλων. Η ταξιφολίνη (3,5,7,3',4'-pen-tahydroxy-flavanone ή 2,{10}}dihydroquercetin) είναι μία από τις διυδροφλαβονόλες με ένα δευτερεύον συστατικό silymarin, Pycnogenol και Venoruton [14]. Η ταξιφολίνη υπάρχει στον φλοιό γαλλικού θαλάσσιου πεύκου, στο φλοιό του έλατου Ντάγκλας, στο ξύλο Λάριξ Σιβηρίας, καθώς και στα εσπεριδοειδή, στα σταφύλια, στο ελαιόλαδο και στα κρεμμύδια στη φύση [15]. Μπορεί εύκολα να εξαχθεί και να χρησιμοποιηθεί. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει το ρόλο τους στην αναστολή του σχηματισμού ελεύθερων ριζών σε βασικά στάδια της απόπτωσης, ειδικά σε τραυματισμό εγκεφαλικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης [16, 17]. Η ταξιφολίνη έχει επίσης βρεθεί ότι έχει αντικαρκινική καινευροπροστατευτικές επιδράσεις[18-20]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, οι Zhou et al. απέδειξε ότι η ταξιφολίνη έδειξε υψηλή αντιοξειδωτική ικανότητα [21]. Από όσο γνωρίζουμε, οι προστατευτικές επιδράσεις της ταξιφολίνης έναντι της ηπατοτοξικότητας που σχετίζεται με το pazopanib δεν έχουν μελετηθεί. Έτσι, στοχεύσαμε να διερευνήσουμε εάν υπάρχουν πιθανές προστατευτικές επιδράσεις της ταξιφολίνης στην ηπατική βλάβη που προκαλείται από το pazopanib σε αρουραίους.

Υλικά και μέθοδοι

Των ζώων

Στη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν δεκαοκτώ αρσενικοί αλμπίνο αρουραίοι Wistar, ο καθένας με βάρος μεταξύ 277–290 g, που προμηθεύτηκαν από το Κέντρο Εφαρμογών και Ερευνών Ιατρικών Πειραμάτων του Πανεπιστημίου Ataturk. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες (έξι σε καθεμία) και κρατήθηκαν σε κλουβιά σε αεριζόμενο δωμάτιο με περίοδο 12-h φωτός/12-h σκότους, σε σταθερή θερμοκρασία (22 βαθμοί ) και ελεύθερο πρόσβαση σε τροφή και νερό. Πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Χρήση και τη Φροντίδα των Ζώων Εργαστηρίου (Εκδόσεις ΝΙΗ Νο. 8023, αναθεωρημένη το 1978). Η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας των ζώων του Πανεπιστημίου Ατατούρκ, Ερζερούμ, Τουρκία (Επιτροπή Δεοντολογίας Αρ.: 2020/46, ημερομηνία 16 Απριλίου 2020). Χημικοί παράγοντες Το pazopanib που χρησιμοποιήθηκε στο πείραμα προμηθεύτηκε από τη Novartis (Κωνσταντινούπολη, Τουρκία), η κεταμίνη παρεχόταν από την Pfizer (Κωνσταντινούπολη, Τουρκία) και το ταξιφολίνη από την Evalar Russia (Μόσχα, Ρωσία). Πειραματικές ομάδες Τα πειραματόζωα χωρίστηκαν στις ακόλουθες 3 ομάδες: την ομάδα ελέγχου (C), το pazopanib μόνο του (PP) και το taxifolin συν pazopanib (TPP). Πειραματική διαδικασία Το Taxifolin χορηγήθηκε από το στόμα στην ομάδα TPP (n=6) με δόση 50 mg/kg με καθετήρα στο στομάχι. Ένα σύνολο 0,5 ml απεσταγμένου νερού χορηγήθηκε από το στόμα στις ομάδες C (n=6) και PP (n=6) ως διαλύτης. Μία ώρα μετά τη χορήγηση ταξιφολίνης ή απεσταγμένου νερού, το pazopanib 200 mg/kg χορηγήθηκε στις ομάδες TPP και PP μέσω του στομάχου. Προσδιορίσαμε τη δόση ταξιφολίνης και pazopanib με βάση προηγούμενες μελέτες. Η ταξι-φολίνη βρέθηκε να είναι αποτελεσματική με δόση 50 mg/kg στη θεραπεία της οξειδωτικής βλάβης που προκαλείται από τη σισπλατίνη [22]. Επιπλέον, προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι το pazopanib είναι ηπατοτοξικό σε δόση 150–300 mg/kg [9]. Η παραπάνω διαδικασία επαναλαμβανόταν μία φορά την ημέρα για τέσσερις εβδομάδες. Στο τέλος αυτής της περιόδου, όλα τα ζώα θυσιάστηκαν υπό αναισθησία με υψηλή δόση κεταμίνης (120 mg/kg) σε συνδυασμό με διαζεπάμη (5 mg/kg). Οι ιστοί του ήπατος των αρουραίων αφαιρέθηκαν για να μετρηθούν τα επίπεδα μηλονοδιαλδεΰδης (MDA), ολικής γλουταθειόνης (TSH), ολικής οξειδωτικής κατάστασης (TOS) και ολικής αντιοξειδωτικής κατάστασης (TAS). Οι ιστοί του ήπατος εξετάστηκαν ιστοπαθολογικά. Επιπλέον, μετρήθηκαν οι δραστηριότητες ALT, AST και γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH) σε δείγματα αίματος ζώων.

Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει την ανοσία

Χημικοί παράγοντες

Το pazopanib που χρησιμοποιήθηκε στο πείραμα προμηθεύτηκε από τη Novartis (Κωνσταντινούπολη, Τουρκία), η κεταμίνη παρεχόταν από την Pfizer (Κωνσταντινούπολη, Τουρκία) και το ταξιφολίνη από την Evalar Russia (Μόσχα, Ρωσία).

Πειραματικές ομάδες

Τα πειραματόζωα χωρίστηκαν στις ακόλουθες 3 ομάδες: την ομάδα ελέγχου (C), το pazopanib μόνο του (PP) και το taxifolin συν pazopanib (TPP).

Πειραματική διαδικασία

Η ταξιφολίνη χορηγήθηκε από το στόμα στην ομάδα TPP (n{{0}}) με δόση 50 mg/kg με καθετήρα στο στομάχι. Ένα σύνολο 0,5 ml απεσταγμένου νερού χορηγήθηκε από το στόμα στις ομάδες C (n=6) και PP (n=6) ως διαλύτης. Μία ώρα μετά τη χορήγηση ταξιφολίνης ή απεσταγμένου νερού, το pazopanib 200 mg/kg χορηγήθηκε στις ομάδες TPP και PP μέσω του στομάχου. Προσδιορίσαμε τη δόση ταξιφολίνης και pazopanib με βάση προηγούμενες μελέτες. Η ταξι-φολίνη βρέθηκε να είναι αποτελεσματική με δόση 50 mg/kg στη θεραπεία της οξειδωτικής βλάβης που προκαλείται από τη σισπλατίνη [22]. Επιπλέον, προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι το pazopanib είναι ηπατοτοξικό σε δόση 150–300 mg/kg [9]. Η παραπάνω διαδικασία επαναλαμβανόταν μία φορά την ημέρα για τέσσερις εβδομάδες. Στο τέλος αυτής της περιόδου, όλα τα ζώα θυσιάστηκαν υπό αναισθησία με υψηλή δόση κεταμίνης (120 mg/kg) σε συνδυασμό με διαζεπάμη (5 mg/kg). Οι ηπατικοί ιστοί των αρουραίων αφαιρέθηκαν για να μετρηθούν τα επίπεδα μηλονοδιαλδεΰδης (MDA), ολικής γλουταθειόνης (αυτή), ολικής οξειδωτικής κατάστασης (TOS) και ολικής αντιοξειδωτικής κατάστασης (TAS). Οι ιστοί του ήπατος εξετάστηκαν ιστοπαθολογικά. Επιπλέον, μετρήθηκαν οι δραστηριότητες ALT, AST και γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH) σε δείγματα αίματος ζώων. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος από την πλευρική φλέβα της ουράς μη αναισθητοποιημένων αρουραίων. Μετά την επεξεργασία της ουράς με ζεστό νερό, τα αιμοφόρα αγγεία ήταν καλά διασταλμένα και κατάλληλα για χειρισμό.

Βιοχημική ανάλυση

Για βιοχημική ανάλυση ηπατικών ιστών, παρασκευάστηκαν ομογενοποιήματα από ιστούς και λήφθηκαν 0,2 gr δείγματος από κάθε ιστό. Τα ολικά επίπεδα γλουταθειόνης και μηλονοδιαλδεΰδης στα υπερκείμενα που ελήφθησαν από αυτά τα ομογενοποιήματα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας κατάλληλες μεθόδους που βασίζονται στη βιβλιογραφία. Οι ιστοί ομογενοποιήθηκαν σε παγωμένα ρυθμιστικά φωσφορικών (50 mM, ρΗ 7,4) που ήταν κατάλληλα για τη μεταβλητή που έπρεπε να μετρηθεί. Τα ομογενοποιήματα ιστού φυγοκεντρήθηκαν στις 5,000 rpm για 20 λεπτά στους 4 βαθμούς και τα υπερκείμενα εκχυλίστηκαν για να αναλυθεί αυτό και το MDA. Όλες οι φασματοφωτομετρικές μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν μέσω συσκευής ανάγνωσης μικροπλακών (Bio Tek, Winooski, VT, USA).

Ανάλυση μηλοδιαλδεΰδης (MDA).

Η ποσοτική ανάλυση του MDA βασίστηκε στην προσέγγιση που χρησιμοποιήθηκε από τους Ohkawa et al. σχετίζεται με τη φασματοφωτομετρική μέτρηση της απορρόφησης του ροζ χρώματος συμπλόκου που σχηματίζεται από θειοβαρβιτουρικό οξύ (TBA) και MDA. Το δείγμα ομογενοποιημένου ιστού (25 μl) προστέθηκε σε διάλυμα που περιείχε 25 μl 80 g/l δωδεκυλοθειικού νατρίου και 1 ml διαλύματος μίγματος (200 g/l οξικού οξέος συν 1,5 ml 8 g/l 2- θειοβαρβιτουρικό) [23]. Το μίγμα επωάστηκε στους 95 βαθμούς για 1 ώρα. Κατά την ψύξη, προστέθηκε 1 ml η-βουτανόλης πυριδίνης (15:1). Το μίγμα στροβιλίστηκε για 1 λεπτό και φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτά στις 4,000 μ.μ. Η απορρόφηση του υπερκειμένου μετρήθηκε στα 532 nm. Η τυπική καμπύλη αποκτήθηκε μέσω μιας προσέγγισης που χρησιμοποιεί 1,1,3,3-τετραμεθοξυπροπάνιο.

Ανάλυση ολικής γλουταθειόνης

Η ολική γλουταθειόνη αναλύθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που ορίστηκε από τους Sedlak και Lindsay. Το διθειώδες DTNB (5,5'διθειοδις [2νι-τροβενζοϊκό οξύ]) είναι ένα χρωμογόνο μέσο και το DTNB ανάγεται εύκολα χρησιμοποιώντας σουλφυδρυλικές ομάδες [24]. Ο κίτρινος χρωματισμός κατά την πορεία της αναγωγής μετράται μέσω φασματοφωτομετρίας στα 412 nm. Για μέτρηση, ένα διάλυμα κοκτέιλ (5,85 ml 100 mM ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου, 2,8 ml 1 mM DTNB 3,75 ml 1 mM NADPH και 80 μl 625 U/l γλουταθειόνης αναγωγάση) παρασκευάστηκε. Πριν από τη μέτρηση, 0,1 ml μετα-φωσφορικού οξέος προστέθηκε σε 0,1 ml ομογενοποιημένου ιστού και φυγοκεντρήθηκε για 2 λεπτά στις 2,000 rpm για αποπρωτεϊνοποίηση. Στη συνέχεια 0,15 ml διαλύματος κοκτέιλ προστέθηκαν σε 50 μΐ υπερκειμένου. Η πρότυπη καμπύλη λήφθηκε χρησιμοποιώντας δισουλφίδιο γλουταθειόνης (GSSG).

Μέτρηση TOS και TAS

Τα επίπεδα TOS και TAS ομογενοποιημάτων ιστών μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας μια σύγχρονη, αυτοματοποιημένη μέθοδο προσδιορισμού και διαθέσιμα κιτ (Rel Assay Diagnostics, Sehitka mil, Τουρκία), το καθένα που παρήχθη από τους Erel et al. [25,26]. Η μέθοδος μέτρησης TAS βασίστηκε στη λεύκανση απόαντιοξειδωτικά τουτο χαρακτηριστικό χρώμα ενός πιο σταθερού κατιόντος ABTS (2,2'-and-bis (3-αιθυλβενζοθειαζολίνη- 6-σουλφονικό οξύ)) και μετρήσεις στα 660 nm. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν σε nmol ισοδύναμο υπεροξειδίου του υδρογόνου (H2O2)/l. Στη μέθοδο TOS, τα οξειδωτικά που υπάρχουν στο δείγμα οξειδώνουν το σύμπλοκο ιόντος σιδήρου-ο διανισιδίνης σε ιόν σιδήρου. Τα μόρια γλυκερόλης, τα οποία υπήρχαν άφθονα στο μέσο αντίδρασης, έχουν βελτιώσει την αντίδραση οξείδωσης. Το ιόν σιδήρου παρήγαγε ένα έγχρωμο σύμπλοκο με πορτοκαλί ξυλενόλης σε όξινο μέσο. Η ένταση του χρώματος, το οποίο μπορούσε να μετρηθεί φασματοφωτομετρικά στα 530 nm, σχετιζόταν με τη συνολική ποσότητα μορίων οξειδωτικού που υπήρχαν στο δείγμα. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν σε μmol ισοδύναμου Trolox/l. Ο δείκτης οξειδωτικού στρες (OSI) χρησιμοποιήθηκε ως η ποσοστιαία αναλογία TOS προς TAS. Το OSI υπολογίστηκε ως TOS / TAS × 100.

Ανάλυση ALT

Ο ποσοτικός προσδιορισμός της ALT ορού πραγματοποιήθηκε με τη φασματοφωτομετρική μέθοδο με αυτοαναλυτή Roche Cobas 8000. Η αντίδραση μεταξύ L-αλανίνης και 2-οξογλουταρικού καταλύθηκε με 3,4 ALT. Το πυροσταφυλικό που σχηματίζεται ανάγεται με NADH σε μια αντίδραση που καταλύεται από L-γαλακτικό και LDH, στην οποία σχηματίζεται NAD plus. Η φωσφορική πυριδοξάλη δρα ως συνένζυμο στην αντίδραση μεταφοράς αμινοξέων. Εξασφαλίζει πλήρη ενεργοποίηση ενζύμων. Η L-αλανίνη συν 2-οξογλουταρικό αποδίδει (ALT) πυροσταφυλικό συν L-γλουταμινικό και το πυροσταφυλικό συν NADH συν H συν αποδίδει (LDH) L-γαλακτικό συν NAD συν . Ο ρυθμός του ρυθμού οξείδωσης NADH είναι ευθέως ανάλογος με τον καταλυτικό Δραστηριότητα ALT. Ανάλυση AST Ο ποσοτικός προσδιορισμός του AST ορού πραγματοποιήθηκε με φασματοφωτομετρική μέθοδο με αυτοαναλυτή Roche Cobas 8000.

Το AST καταλύει

τη μεταφορά μιας αμινομάδας μεταξύ L-ασπαρτικού και 2-οξογλουταρικού για να σχηματιστεί οξαλοξικό 3,4 AST και L-γλουταμινικό στο δείγμα. Το οξαλοξικό αντιδρά στη συνέχεια με το NADH παρουσία μηλικής αφυδρογονάσης (MDH) για να σχηματίσει NAD συν. Η φωσφορική πυριδοξάλη δρα ως συνένζυμο στην αντίδραση μεταφοράς αμινοξέων. Το L-ασπαρτικό συν 2-οξογλουταρικό αποδίδει (AST) οξαλοξικό συν L-γλουταμινικό και το οξαλοξικό συν NADH συν Η συν αποδίδει (MDH) L-μηλικό συν NAD συν . Ο ρυθμός οξείδωσης NADH είναι ευθέως ανάλογος με την καταλυτική δραστηριότητα AST.

Ανάλυση LDH

Ο ποσοτικός προσδιορισμός της LDH ορού πραγματοποιήθηκε με τη φασματοφωτομετρική μέθοδο με αυτοαναλυτή Roche Cobas 8000. Αυτή είναι η τυπική μέθοδος που βελτιστοποιήθηκε σύμφωνα με την Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie (DGKC). Η LDH καταλύει την αντίδραση μεταξύ πυροσταφυλικού και NADH για να σχηματίσει NAD plus με L-γαλακτικό. Το πυροσταφυλικό συν NADH συν Η συν αποδίδει (LDH) L-γαλακτικό συν NAD συν. Ο αρχικός ρυθμός οξείδωσης του NADH είναι ευθέως ανάλογος με την καταλυτική δραστηριότητα της LDH. Η μείωση στην απορρόφηση προσδιορίστηκε με μέτρηση στα 340 nm.

Ιστοπαθολογική εξέταση

Οι ιστοί του ήπατος τοποθετήθηκαν σε ένα ρυθμισμένο διάλυμα φορμαλίνης 10 τοις εκατό μετά από νεκροψία των αρουραίων. Τα δείγματα στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε παρακολούθηση ρουτίνας και ενσωματώθηκαν σε μπλοκ παραφίνης. Ελήφθησαν τομές πέντε μικρομέτρων από το μπλοκ, τοποθετήθηκαν σε αντικειμενοφόρους πλάκες και υποβλήθηκαν σε παθολογική εξέταση κάτω από μικροσκόπιο φωτός με χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης. Η αξιολόγηση της αιμορραγίας, του υδροπικού εκφυλισμού και της νέκρωσης πραγματοποιήθηκε ημιποσοτικά. 0, κανένα; 1, ήπιο; 2, μέτρια? και 3, σοβαρή.

Στατιστική ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας IBM SPSS Statistics for Windows, έκδοση 19.0 Armonk, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ. Για κάθε μεταβλητή υπολογίστηκαν περιγραφικά στατιστικά στοιχεία. Τα αποτελέσματα καταγράφηκαν ως η μέση τιμή ± SD για συνεχείς μεταβλητές. Η σημασία των διακυμάνσεων μεταξύ των ομάδων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο της μονόδρομης ανάλυσης διακύμανσης (ANOVA), ακολουθούμενη από την ανάλυση με το τεστ Τουρκίας. Μια τιμή P<0.05 was="" considered="" significant.="" in="" the="" histopathological="" examination,="" the="" differences="" between="" the="" groups="" were="" determined="" by="" the="" kruskal-wallis="" test,="" which="" is="" one="" of="" the="" nonparametric="" tests,="" and="" groups="" that="" exhibited="" differences="" were="" determined="" by="" the="" mann-whitney="" u="" test.="" between-group="" statistical="" differences="" for="" body="" weight="" changes="" of="" the="" rats="" were="" analyzed="" using="" the="" paired="">

Αποτέλεσμα

Βιοχημικά αποτελέσματα

Τα μέσα και διάμεση επίπεδα των παραμέτρων φαίνονται στον Πίνακα 1. Τα επίπεδα ALT, AST και LDH ορού ήταν σημαντικά υψηλότερα στην ομάδα PP σε σύγκριση με τις ομάδες C και TPP (P<0.001). alt="" and="" ast="" levels="" were="" higher="" in="" the="" tpp="" group="" compared="" with="" the="" c="" group=""><0.001;><0,01); however,="" alt="" and="" ast="" levels="" were="" significantly="" decreased="" in="" the="" tpp="" compared="" with="" the="" pp=""  group.="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the=""  c="" and="" tpp="" groups="" in="" terms="" of="" ldh="" levels=""><0.001)  (fig.="" 1).="" mda="" levels="" were="" significantly="" higher="" in="" the="" pp=""  group="" compared="" with="" the="" c="" and="" tpp="" groups=""><0.001).  the="" levels="" were="" significantly="" lower="" in="" the="" pp="" group="" compared="" with="" the="" c="" and="" ttp="" groups=""><0.001). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" c=""  and="" tpp="" groups="" in="" terms="" of="" mda=""><0.001). tsh="" levels="" were="" lower="" in="" the="" tpp="" group="" compared="" with="" the="" c="" group=""><0.001) but="" compared="" with="" the="" pp="" group,="" the="" tsh="" levels="" were="" significantly="" increased="" in="" the="" tpp=""  group="" (fig.="" 2).="" tos="" levels="" were="" significantly="" higher="" in=""  the="" pp="" group="" compared="" with="" the="" c="" and="" tpp="">

Εικ. 1. Οι επιδράσεις της ταξιφολίνης στα επίπεδα AST, ALT και LDH σε δείγματα αίματος αρουραίων που έλαβαν pazopanib. Οι ράβδοι υποδεικνύουν τη μέση τιμή ± SD.

Συζήτηση

Το pazopanib είναι ένας από του στόματος παράγοντας που αναστέλλει τους αναστολείς της τυροσινικής κινάσης που σχετίζονται με τον αγγειακό ενδοθηλιακό αυξητικό παράγοντα, τον αυξητικό παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια και τους υποδοχείς του κιτ. Είναι μια αποτελεσματική θεραπεία για προχωρημένο νεφρικό καρκίνωμα (RCC) και σάρκωμα μαλακών μορίων [27-29]. Η ηπατοτοξικότητα αποτελεί ανησυχία για την κλινική εφαρμογή του. Οι αυξήσεις ALT και AST που προκαλούνται από το Pazopanib παρατηρούνται συνήθως σε ασθενείς και κυμαίνονται από 46 έως 60 τοις εκατό για όλους τους βαθμούς τοξικότητας, από 8 έως 15 τοις εκατό για την τοξικότητα βαθμού 3 και από<1% to="" 2%="" for="" grade="" 4=""  toxicity="" [7].="" a="" meta-analysis="" of="" clinical="" trials="" of="" pazopanib="" confirmed="" a="" 42%="" incidence="" of="" all-grade="" alt="" increase="" and="" an="" 8.2%="" incidence="" of="" high-grade="" alt="" increase=""  [30].="" pazopanib-induced="" hepatotoxicity="" has="" been="" associated="" with="" the="" hfe="" (hemochromatosis="" gene)="" mutation="" on="" chromosome="" 6="" [31],="" but="" the="" exact="" mechanisms="" of="" pazopanib-induced="" liver="" injury="" remain="" unclear.="" cetin="" et="" al.="" demonstrated="" the="" pazopanib-induced="" hepatotoxicity="" biochemically="" and="" histopathologically="" in="" an="" experimental="" rat="" model="" [32].="" wang="" et="" al.="" demonstrated="" that="" pazopanib="" triggered="" oxidative="" stress,="" increased="" free="" oxygen="" radicals,="" and="" caused="" hepatotoxicity="" [9].="" it="" has="" also="" been="" reported="" that="" pazopanib-induced="" hepatotoxicity="" can="" be="" due="" to="" increased="" oxidative="" stress="" in="" mitochondria="" [12].=""  these="" findings="" indicate="" that="" oxidative="" stress="" can="" be="" an="" important="" mechanism="" of="" pazopanib-induced="" hepatotoxicity.="" flavonoids="" are="" one="" of="" the="" main="" groups="" of="" plant="">αντιοξειδωτικάκαι έχουν υψηλές χηλικές ιδιότητες.

[33]. Βρίσκονται ευρέως στα φύλλα και τα άνθη των φυτών και επίσης βρίσκονται σε αφθονία σε τρόφιμα και ποτά που παρασκευάζονται από φυτά [34]. Η ταξιφολίνη (3,5,7,3,4-Penta-hydroxy flavanone ή dihydroquercetin) είναι μια φλαβονόλη, η οποία είναι μια υποκατηγορία φλαβονοειδών και βρίσκεται κυρίως στα εσπεριδοειδή, τα κρεμμύδια, το ελαιόλαδο κ.λπ. 35]. Οι Topal et al. έδειξε ότι η ταξιφολίνη είχε σημαντική αντιοξειδωτική, καθαριστική δράση ριζών και χηλική δράση. Πρότειναν ότι μπορεί να χρησιμοποιηθεί στη βιομηχανία τροφίμων και φαρμακευτικών προϊόντων για τη μείωση του σχηματισμού τοξικών προϊόντων οξείδωσης [36]. Ο Kara και οι συνεργάτες του έδειξαν ότι η ταξιφολίνη έχει προστατευτικά αποτελέσματα που μειώνουν την οξειδωτική νεφρική βλάβη που προκαλείται από τη σισπλατίνη [37]. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε την προστατευτική επίδραση της ταξιφολίνης στην ηπατική τοξικότητα που προκαλείται από το pazopanib σε αρουραίους. Τα βιοχημικά μας αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το pazopanib αύξησε τα επίπεδα MDA και TOS, που είναι οξειδωτικές παραμέτρους, και μείωσε τα επίπεδα TSH και TAS, που είναι αντιοξειδωτικές παράμετροι, στους ηπατικούς ιστούς των αρουραίων. Ομοίως, τα επίπεδα AST, ALT και LDH στον ορό ήταν σημαντικά υψηλότερα στην ομάδα PP σε σύγκριση με την ομάδα TPP. Το pazopanib προκάλεσε αιμορραγία, υδροπικό εκφυλισμό και νέκρωση στους ιστούς του ήπατος αρουραίου. Οι ιστοπαθολογικές εξετάσεις αποκάλυψαν μειωμένη ηπατική βλάβη με pazopanib στην ομάδα TPP. Παρατηρήσαμε ότι η ταξιφολίνη σε δόση 50 mg/kg έχει ιστοπαθολογικές και βιοχημικές προστατευτικές επιδράσεις έναντι της επαγόμενης από το pazopanib οξειδωτικής ηπατικής τοξικότητας. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το pazopanib άλλαξε την ισορροπία οξειδωτικού-αντιοξειδωτικού προς όφελος των οξειδωτικών στον ηπατικό ιστό των αρουραίων και στη συνέχεια προκάλεσε βλάβη στον ηπατικό ιστό και αύξησε τα επίπεδα AST, ALT και LDH ορού. Τα βιοχημικά αποτελέσματα αυτής της μελέτης ήταν πλήρως συνεπή με τα ιστοπαθολογικά αποτελέσματα. Η ταξιφολίνη ανέστειλε τις οξειδωτικές επιδράσεις του pazopanib.

Cistanche για τη νόσο του Αλτσχάιμερ

Συμπέρασμα

Συμπερασματικά, αποδείξαμε για πρώτη φορά στη βιβλιογραφία ότι η ταξιφολίνη μπορεί να αποτρέψει την ηπατική τοξικότητα που προκαλείται από το pazopanib σε μοντέλα αρουραίων. Τα πολλά υποσχόμενα αποτελέσματα αυτής της μελέτης υποδεικνύουν ότι απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για τη δοκιμή αυτού του παράγοντα σε άλλα ζωικά μοντέλα και σε ανθρώπους.

Αναφορά

1. Pal SK, Hossain DMS, Zhang Q, Frankel PH, Jones JO, Car-Michael C, et al. Το pazopanib ως θεραπεία τρίτης γραμμής για μεταστατικό νεφρικό καρκίνωμα: κλινική αποτελεσματικότητα και χρονική ανάλυση του προφίλ κυτοκίνης. J Urol. 2015; 193: 1114–1121. [Medline] [CrossRef]
2. Endo M, Nielsen TO. Pazopanib για μεταστατικό σάρκωμα μαλακών μορίων. Νυστέρι. 2012; 380: 801, απάντηση συγγραφέα 801. [Medline] [CrossRef]
3. Karch A, Koch A, Grünwald V. Μια δοκιμή φάσης II που συγκρίνει το pazopanib με doxorubicin ως θεραπεία πρώτης γραμμής σε ηλικιωμένους ασθενείς με μεταστατικό ή προχωρημένο σάρκωμα μαλακών μορίων (EPAZ): πρωτόκολλο μελέτης για μια τυχαιοποιημένη ελεγχόμενη δοκιμή. Δοκιμές. 2016; 17: 312. [Medline] [CrossRef]
4. Dinkic C, Eichbaum Μ, Schmidt Μ, Grischke ΕΜ, Gebauer G, Fricke HC, et αϊ. Pazopanib (GW786034) και κυκλοφωσφαμίδη σε ασθενείς με ανθεκτικό στην πλατίνα, υποτροπιάζοντα, προθεραπευμένο καρκίνο των ωοθηκών - Αποτελέσματα της δοκιμής PACOVAR. Gy-Gynecol Oncol. 2017; 146: 279–284. [Medline] [CrossRef]
5. Sleijfer S, Ray-Coquard I, Papai Z, Le Cesne A, Scurr M, Schöffski P, et al. Το Pazopanib, ένας αναστολέας αγγειογένεσης πολυκινάσης, σε ασθενείς με υποτροπιάζον ή ανθεκτικό προχωρημένο σάρκωμα μαλακών ιστών: μελέτη φάσης ΙΙ από τον Ευρωπαϊκό οργανισμό για την έρευνα και τη θεραπεία της ομάδας σαρκώματος καρκίνου-μαλακών ιστών και οστών (μελέτη EORTC 62043). J Clin Oncol. 2009; 27: 3126–3132. [Medline] [CrossRef]
6. Pick AM, Nystrom KK. Pazopanib για τη θεραπεία του μεταστατικού καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων. Clin Ther. 2012; 34: 511–520. [Medline] [CrossRef]

7. Χορήγηση USF και D. Pazopanib (Votrient) πληροφορίες συνταγογράφησης. 2010.
8. Zhang J, Salminen Α, Yang X, Luo Y, Wu Q, White Μ, et αϊ. Επιδράσεις 31 εγκεκριμένων από τον FDA αναστολέων κινάσης μικρού μορίου σε μεμονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος αρουραίου. Arch Toxicol. 2017; 91: 2921–2938. [Medline] [CrossRef]
9. Wang YK, Yang XN, Liang WQ, Xiao Y, Zhao Q, Xiao XR, et al. Μια μεταβολική προοπτική της επαγόμενης από το pazopanib οξείας ηπατοτοξικότητας σε ποντικούς. Ξενοβιοτικά. 2019; 49: 655–670. [Medline] [CrossRef]
10. Yang Μ, Ruan J, Gao Η, Li N, Ma J, Xue J, et αϊ. Πρώτη ένδειξη συνδρόμου ηπατικής ημιτονοειδούς απόφραξης που προκαλείται από το αλκαλοειδές πυρρολιζιδίνης σε ανθρώπους. Arch Toxicol. 2017; 91: 3913–3925. [Medline] [CrossRef]
11. Choudhury Y, Toh YC, Xing J, Qu Y, Poh J, Li Η, et αϊ. Ειδικά για τον ασθενή κύτταρα που μοιάζουν με ηπατοκύτταρα που προέρχονται από επαγόμενα πολυδύναμα βλαστοκύτταρα μοντελοποιούν ηπατοτοξικότητα που προκαλείται από pazopanib. Sci Rep. 2017; 7: 41238. [Medline] [CrossRef]
12. Mingard C, Paech F, Bouitbir J, Krähenbühl S. Μηχανισμοί τοξικότητας που σχετίζονται με έξι αναστολείς κινάσης τυροσίνης σε κυτταρικές σειρές ανθρώπινων ηπατοκυττάρων. J Appl Toxicol. 2018; 38: 418–431. [Medline] [CrossRef]
13. Kumar S, Pandey AK. 2013. Χημεία και βιολογικές δραστηριότητες των φλαβονοειδών: μια επισκόπηση. ScientificWorldJournal 2013: 162750. [Medline] [CrossRef]

Mater0

ıals και Μέθοδοι

Εισαγωγή

Εισαγωγή