Θετική συσχέτιση μεταξύ νεφρικής σωληναριακής ισοπέδωσης και τραυματισμού νεφρικών σωληναρίων/διάμεσης ίνωσης σε μοντέλα νεφρικής νόσου ποντικού
Mar 17, 2022
ΑΦΗΡΗΜΕΝΗ.Ο αριθμός των ασθενών με χρόνια Νεφρική Νόσος(ΧΝΝ) αυξάνεται συνεχώς παγκοσμίως. Για τη μελέτη της παθογένεσης και των μηχανισμών, έχουν αναπτυχθεί πολλά ζωικά μοντέλα, συμπεριλαμβανομένων αυθόρμητων, γενετικών και επαγόμενων μοντέλων. Αν και κάθε τύπος ΧΝΝ εμφανίζει ειδικές για τη νόσο αλλαγές ιστού στα πρώιμα στάδια, η σωληναριακή διαταραχή και η διάμεση ίνωση ιστολογικά εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης στο τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ. Ως εκ τούτου, ο ποσοτικός προσδιορισμός της σωληναριακής διαταραχής και της διάμεσης ίνωσης στην έρευνα για τη ΧΝΝ με χρήση ζωικών μοντέλων είναι απαραίτητος για τη μέτρηση του βαθμού σοβαρότητας της ΧΝΝ και, επομένως, της αποτελεσματικότητας των θεραπευτικών παραγόντων. Έχουν χρησιμοποιηθεί διάφορες στρατηγικές για την ποσοτικοποίηση της διάμεσης ίνωσης. Μεταξύ των παραγόντων βαθμολογίας,νεφρώνΗ σωληνοειδής ισοπέδωση μπορεί να αξιολογηθεί ποσοτικά εύκολα και ανέξοδα. Ωστόσο, η διαγνωστική αξία τουνεφρώνΗ αξιολόγηση της σωληνοειδούς ισοπέδωσης δεν έχει διερευνηθεί προηγουμένως. Επομένως, σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τη συσχέτιση μεταξύνεφρώνσωληναριακή ισοπέδωση και διάμεση ίνωση ήνεφρώνδείκτες σωληνωτού τραυματισμού. Παρατηρήσαμε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του βαθμού σωληναριακής βλάβης/διάμεσης ίνωσης καινεφρώνσωληνοειδής ισοπέδωση σε τρεις τύπους ποντικιώννεφρική νόσομοντέλα. Αυτό είναι επωφελές επειδή οι ταχέως προχωρημένες τεχνολογίες όπως η τεχνητή νοημοσύνη και η επεξεργασία εικόνας μπορούν να εφαρμοστούν εύκολα. Ως εκ τούτου, μια πιο ακριβής, αντικειμενική και ποσοτική διάγνωση θα πρέπει να είναι δυνατή στο μέλλον.
Λέξεις-κλειδιά:διάμεση ίνωση, νεφρική νόσο, νεφρική σωληναριακή ισοπέδωση, νεφρική σωληναριακή βλάβη. ΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΝΟΣΟ
Ασθενείς με χρόνιαΝεφρική Νόσος(ΧΝΝ) παρουσιάζουν συμπτώματα πρωτεϊνουρίας ή παρατεταμένη (περισσότερο από τρεις μήνες) μείωση του ρυθμού σπειραματικής διήθησης [15]. Αυτή η ασθένεια ταξινομείται στην ομάδα ασθενών υψηλού κινδύνου με τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ.Ο αριθμός των ασθενών με ΧΝΝ αυξάνεται συνεχώς παγκοσμίως. Όταν η ΧΝΝ εξελίσσεται, οδηγεί στο τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ, η οποία απαιτεί αιμοκάθαρση που κοστίζει τεράστιο ποσό, οδηγώντας σε αύξηση των ιατρικών δαπανών [14]. Ως εκ τούτου, απαιτείται επειγόντως η ανάπτυξη νέων δεικτών για την παρακολούθηση της έναρξης και της εξέλιξης της ΧΝΝ και η καθιέρωση νέων μεθόδων θεραπείας. Οι κοινές αιτίες της ΧΝΝ περιλαμβάνουν διαβήτη, υψηλή αρτηριακή πίεση, σπειραματική νόσο και άλλους παράγοντες κινδύνου για ΧΝΝ. Αν και κάθε τύπος ΧΝΝ εμφανίζει ειδικές για τη νόσο αλλαγές ιστού στα πρώιμα στάδια, η σωληναριακή διαταραχή και η διάμεση ίνωση ιστολογικά εμφανίζονται κατά τη διάρκεια της εξέλιξης στο τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ. ΝεφρώνΗ ίνωση είναι αλλαγή ιστού που σχετίζεται κυρίως με σχετιζόμενη με ΚΝΝ διαταραχή των σωληνώσεων και διάμεση ίνωση και θεωρείται σημαντικός στόχος θεραπείας για την πρόληψη της εξέλιξης στο τελικό στάδιοΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ[25]. Ως εκ τούτου, ο ποσοτικός προσδιορισμός της σωληναριακής διαταραχής και της διάμεσης ίνωσης στην έρευνα για τη ΧΝΝ με χρήση ζωικών μοντέλων είναι απαραίτητος για τη μέτρηση του βαθμού σοβαρότητας της ΧΝΝ και, επομένως, της αποτελεσματικότητας των θεραπευτικών παραγόντων. Έχουν χρησιμοποιηθεί διάφορες στρατηγικές για τον ποσοτικό προσδιορισμό της διάμεσης ίνωσης, συμπεριλαμβανομένης της χρώσης με κόκκινο Sirius ή της χρώσης τρίχρωμου Masson για την ποσοτικοποίηση των περιοχών ινιδοποίησης, της βαθμολογίας σωληναριακής διαταραχής για μορφολογική ανάλυσηνεφρώνσωληνάρια και διάφορους δείκτες τραυματισμού, όπως -SMA, λιποκαλίνη που σχετίζεται με ουδετεροφιλική ζελατινάση (NGAL), L-FABP και Kim-1 [6, 7, 9, 10, 16, 23]. Η βαθμολογία σωληναριακής διαταραχής περιλαμβάνει ισοπέδωση, επέκταση, εκφύλιση, ατροφία και απώλεια ορίου βουρτσίσματοςνεφρώνσωληνάρια [27]. Μεταξύ αυτών των παραγόντων βαθμολόγησης,νεφρώνΗ σωληνοειδής ισοπέδωση (μείωση ύψους) μπορεί να αξιολογηθεί ποσοτικά εύκολα και ανέξοδα [1–3, 19, 20]. Ωστόσο, η διαγνωστική αξία της αξιολόγησης της επιπέδωσης των νεφρικών σωληναρίων δεν έχει διερευνηθεί προηγουμένως. Ως εκ τούτου, αναλύσαμε τη συσχέτιση μεταξύ του βαθμού της διάμεσης ίνωσης καινεφρώνσωληνοειδής ισοπέδωση μέσαΝεφρική Νόσος.
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΩΝ ΝΕΦΡΩΝ/ΝΕΦΡΩΝ
ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ
Ηθική δήλωσηΌλα τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από τον Πρόεδρο του Πανεπιστημίου Kitasato, μετά από εξέταση από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Πανεπιστημίου Kitasato (Αναγνωριστικό έγκρισης: Αρ. 19-153,19-154, 19-155). Αρσενικά ποντίκια FVB/NJcl (FVB) και BALB/cAJcl (BALB/c) ελήφθησαν από την CLEA (Τόκιο, Ιαπωνία). Όλα τα ποντίκια διατηρήθηκαν υπό συγκεκριμένες συνθήκες απαλλαγμένες από παθογόνα. Τους δόθηκε πρόσβαση σε αποστειρωμένα τρόφιμα και νερό κατά βούληση πριν και κατά τη διάρκεια των πειραμάτων.Των ζώωνΜοντέλο Tns2nph: Τα μεταλλαγμένα ποντίκια FVB-Tns2nph (FVB-nph) χρησιμοποιήθηκαν ως μοντέλο ΧΝΝ όπως περιγράφεται στο [22]. Μοντέλο ισχαιμίας-επαναιμάτωσης (IR): Το μοντέλο IR που δημιουργήθηκε πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Ποντίκια ηλικίας οκτώ εβδομάδων (αρσενικό FVB) αναισθητοποιήθηκαν με εισπνοή ισοφλουράνιου και οι αριστεροί νεφροί του οποίου αφαιρέθηκαν, στη συνέχεια η μυϊκή στιβάδα και το πρόσωπο κλείστηκαν με τη χρήση απορροφήσιμου ράμματος. Μετά από δέκα ημέρες ανάρρωσης, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση του συνδυασμού αναισθησιολογικών φαρμάκων όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11].νεφρώνοι αρτηρίες και οι φλέβες διατηρήθηκαν σε ισχαιμική κατάσταση με αρτηριακούς σφιγκτήρες (TKS-1-40, BEAR Medic, Ibaraki, Ιαπωνία) για 30 και 60 λεπτά, αντίστοιχα, και στη συνέχεια το μυϊκό στρώμα και το πρόσωπο κλείστηκαν με τη χρήση απορροφήσιμου ράμματος. Επιπλέον, ποντίκια ελέγχου που υποβλήθηκαν σε ψευδή χειρουργική επέμβαση υποβλήθηκαν σε ανοιχτή χειρουργική επέμβαση χωρίς σφιγκτήρες. Μετά από αυτό, όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με εισπνοή υπερβολικής δόσης ισοφλουρανίου (Escain, Pfizer Japan Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) για να πραγματοποιηθεί η συλλογή του δείγματος. ονεφράαφαιρέθηκαν 24 ώρες μετά την αναπαραγωγή της ισχαιμίας. Μοντέλο νεφροπάθειας που προκαλείται από αδριαμυκίνη (ADR): μοντέλο νεφροπάθειας: ποντίκια BALB/c ηλικίας οκτώ εβδομάδων χορηγήθηκαν είτε ADR (FUJIFILM Wako Pure Chemical Co., Ltd., Osaka, Ιαπωνία) είτε αλατούχο διάλυμα (ομάδα οχήματος ) μέσω της ουραίας φλέβας για την αξιολόγηση τουςνεφρική διαταραχήιστολογικά 14 ημέρες μετά τη χορήγηση.
ΙστολογίαΤα νεφρά ποντικών σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη (PFA) στους 4 βαθμούς κατά τη διάρκεια της νύχτας.ΝεφρόΤα μπλοκ κόπηκαν σε φέτες στα 2 μm (για χρώση Περιοδικού Οξέος- Schiff (PAS)) και 4 μm (για χρώση Picro-Sirius Red). Γιανεφρώνσωληνοειδής μέτρηση ύψους, οι πλευρές του φλοιού τουΝεφρότα τμήματα φωτογραφήθηκαν τυχαία σε τέσσερις διαφορετικές όψεις (×100). Δύο ανεξάρτητοι ερευνητές μέτρησαν τυφλά τονεφρώνσωληνοειδές ύψος σε όλες τις προβολές για τον υπολογισμό του μέσου ύψους κάθε θέματος. Για τα άτομα με ανομοιόμορφα σωληνοειδή ύψη, επιλέχθηκαν μετρήσεις δύο έως πέντε θέσεων ανά σωληνάριο για να ληφθεί η μέση τιμή (Εικ. 1Α). Λήφθηκαν περίπου 700 μετρήσεις σωληνοειδούς ύψους ανά άτομο χρησιμοποιώντας την προαναφερθείσα διαδικασία για τον υπολογισμό της μέσης τιμής για κάθε άτομο. Για τη χρώση Sirius Red, οι αντικειμενοφόρες πλάκες αποπαραφινώθηκαν και χρωματίστηκαν 1 ώρα με Sirius red σε κορεσμένο υδατικό πικρικό οξύ και πλύθηκαν με 0,5 τοις εκατό οξικό οξύ. Για να βαθμολογηθούν οι περιοχές ινιδοποίησης χρησιμοποιώντας χρώση κόκκινου Sirius, οι περιοχές στόχοι φωτογραφήθηκαν τυχαία σε οκτώ προβολές (×100) και οι θετικές περιοχές ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/) για τον υπολογισμό του ποσοστού πληρότητάς τους ως προς τη συνολική έκταση. Σπειράματα βαμμένα με κόκκινο Sirius και αιμοφόρα αγγεία εξαιρέθηκαν από τον υπολογισμό.
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΛΟΙΜΩΞΗ
Ανοσοχημεία χρώσηΤομές νεφρών (5 μm) αποπαραφινώθηκαν και υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα, στους 121 βαθμούς για 15 λεπτά. μετά από πλύση με φυσιολογικό ορό Tris-ρυθμισμένου διαλύματος (TBS),ΝεφρόΟι τομές σφραγίστηκαν με 0.3 τοις εκατό υπεροξείδιο του υδρογόνου/μεθανόλη για 20 λεπτά και στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς με αντίσωμα αντι-NGAL (Abcam, Cambridge, UK). Οι τομές πλύθηκαν με TBS και στη συνέχεια επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα (Histofine SimpleStain ΜΑΧ ΡΟ (Κουνέλι), Nichirei Biosciences Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πλύση με TBS, οι τομές επωάστηκαν με 3,3'-διαμινοβενζιδίνη (DAB) (Wako Pure Chemical Industries Ltd., Osaka, Japan) και αιματοξυλίνη σε θερμοκρασία δωματίου. Για να βαθμολογηθεί η σωληναριακή διαταραχή μέσω χρώσης ανοσοχημείας χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα αντι-NGAL, δείγματα ιστών φωτογραφήθηκαν τυχαία σε οκτώ προβολές (×100) και οι περιοχές χρώσης DAB ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ImageJ για τον υπολογισμό του ποσοστού κατάληψης σε σχέση με τη συνολική επιφάνεια.
ΣτατιστικήΤα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση. Το τεστ t του μαθητή χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο σημαντικών διαφορών μεταξύ δύο ομάδων και το τεστ πολλαπλών ομάδων του Bonferroni χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο πολλαπλών ομάδων. P-τιμή<0.05 was="" statistically="" significant.="" bonferroni's="" multigroup="" test="" was="" carried="" out="" using="" graphpad="" prism="" 5="" software="" (mdf,="" tokyo,="">
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, ο ποσοτικός προσδιορισμός των διάμεσων ινωτικών περιοχών με χρήση χρώσης ερυθρού Sirius θα πρέπει να είναι η τυπική μέθοδος αξιολόγησης για τις σωληναριακές διαταραχές σε ασθενείς μεΝεφρική Νόσοςή μέσαΝεφρική Νόσοςμοντέλα. Έτσι, για τον ποσοτικό προσδιορισμό της σωληναριακής διαταραχής και της διάμεσης ίνωσης χρησιμοποιώντας μοντέλο ποντικού ΚΝΠ ζώων, χρησιμοποιήσαμε μεταλλαγμένο ποντίκι FVB-Tns2nph (FVB-nph), το οποίο είναι ένα ζωικό μοντέλο ΧΝΝ που παρουσιάζει πολλά συμπτώματα ανθρώπινης ΚΝΝ που εξελίσσεται σταδιακά σε εκτεταμένη περίοδο , συμπεριλαμβανομένης της γενετικής έναρξης της σπειραματοσκλήρωσης από τη γέννηση, της ινιδοποίησης του ενδιάμεσου σωληναρίου,νεφρώναναιμία καιΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ[17, 21, 22]. Το ποντίκι FVB-nph αναπαράγει τα τυπικά συμπτώματα που παρατηρούνται στην εξέλιξη της ανθρώπινης ΧΝΝ. Σε αυτή τη μελέτη, εισαγάγαμε τη μετάλλαξη nph σε γραμμές FVB που είναι ευαίσθητες στη νεφροπάθεια. Η ομάδα FVB-nph έδειξε μεγαλύτερη σωληναριακή επιπέδωση από την ομάδα WT, με βάση την επιδείνωση της ινιδοποίησης του διάμεσου ιστού στονεφρώνσωληνάρια (Εικ. 1B–D). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε σημαντική αντίθετη συσχέτιση μεταξύ του ύψους του σωληναρίου και του βαθμού της διάμεσης ίνωσης (R2=0.7086: P{3}}.0023) (Εικ. 1Ε).
Εικ. 1. (Α) Μέτρηση του ύψους των σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων. Οι κόκκινες ράβδοι δείχνουν το ύψος του σωληναρίου. (Β) Αντιπροσωπευτικές εικόνες χρώσης Periodic Acid- Schiff (PAS) και Sirius Red-stailed εικόνες 10-εβδομάδων FVB-Tns2WT (FVB-WT) (αριστερό πλαίσιο) και FVB-Tns2nph μεταλλαγμένου ποντικιού (FVB- nph) (δεξιός πίνακας) τομές νεφρού. Ο επάνω πίνακας αντιπροσωπεύει εικόνες που έχουν χρωματιστεί με PAS και ο κάτω πίνακας αντιπροσωπεύει εικόνες με χρωματισμό Sirius Red. Ράβδοι κλίμακας: 50 μm. (Γ) Γράφημα που συγκρίνει τα σωληνοειδή ύψη των FVB-WT και FVB-nph. (Δ) Γράφημα που συγκρίνει την περιοχή ίνωσης με τη συνολική επιφάνεια. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Οι τιμές P υπολογίστηκαν με τη δοκιμή t Student. (Ε) Τα διαγράμματα διασποράς με γραμμική παλινδρόμηση δείχνουν ανάλυση συσχέτισης μεταξύ του ύψους του ύψους των σωληναρίων και του βαθμού της βαθμολογίας ίνωσης. Η γραμμή γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του ύψους του σωληναρίου και της περιοχής ίνωσης. Εμφανίζονται οι τιμές των συντελεστών συσχέτισης R και P. Οι μαύροι κύκλοι υποδηλώνουν την ομάδα FVB-WT (n=5) και τα μαύρα τετράγωνα την ομάδα FVB-nph (n=5). **Π<0.01,><>
Οι βλάβες των νεφρικών σωληναρίων και τα ύψη των νεφρών μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας την οξείανεφρική βλάβη(AKI) μοντέλο-δηλαδή το μοντέλο IR [5, 12, 18]. Αν και η διάμεση ίνωση δεν θα πρέπει να παρατηρείται στις περισσότερες περιπτώσεις AKI, συμπεριλαμβανομένωννεφρώνισχαιμική διαταραχή, αυξημένη έκφραση NGAL στα νεφρικά σωληναριακά κύτταρα [7]. Επιπλέον, το NGAL είναι γνωστό ότι εμπλέκεται στην εξέλιξη του ΑΚΙ σε ΧΝΝ και έχει προταθεί ως ζωτικός παράγοντας και στα δύο. Επομένως, δείξαμε ότι η έκφραση NGAL συσχετίζεται μενεφρώνσωληνωτό ύψος χρησιμοποιώντας το μοντέλο IR. Έχει αναφερθεί ότι ο χρόνος ισχαιμίας συχνά ορίζεται στα 20 έως 60 λεπτά και ότι η σωληναριακή βλάβη επιδεινώνεται με την αύξηση του χρόνου ισχαιμίας [4, 5, 12, 18]. Σε αυτή τη μελέτη, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ισχαιμία για 30 λεπτά ως αδύναμη σωληναριακή βλάβη και 60 λεπτά ως ισχυρή σωληναριακή βλάβη. Αυξημένη έκφραση NGAL και σωληναριακή ισοπέδωση παρατηρήθηκαν στις ομάδες των 30 και 60 λεπτών. Η αύξηση της έκφρασης NGAL και η ισοπέδωση των σωληναρίων ήταν πιο έντονη στην ομάδα των 60 λεπτών επειδή είχε υποστεί περισσότερο τραυματισμό (Εικ. 2A–C). Μια μείωση στο ύψος του σωληναρίου και μια αύξηση στην έκφραση NGAL καταδείχθηκαν με βάση μια αύξηση στη διάρκεια της ισχαιμικής κατάστασης (Εικ. 2A-C). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης των αποτελεσμάτων έδειξε επίσης αρνητική συσχέτιση μεταξύνεφρώνσωληνοειδές ύψος και έκφραση NGAL (R2=0.6266, P=0.011) (Εικ. 2D).
Το μοντέλο νεφροπάθειας ADR χρησιμοποιείται συχνά σεΝεφρική Νόσοςέρευνα γιατί προκαλεί σπειραματικές βλάβες και μικρές σωληναριακές διαταραχές με υψηλό επίπεδο αναπαραγωγιμότητας χρησιμοποιώντας μία μόνο δόση ADR [13]. Το μοντέλο ποντικού νεφροπάθειας ADR χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη για την αξιολόγησηνεφρώνσωληνοειδείς τραυματισμοί και ύψη. Το μοντέλο τρωκτικών της νεφροπάθειας που προκαλείται από ADR χρησιμοποιείται συχνά για να εξηγήσει τους μηχανισμούς της εστιακής σπειραματοσκλήρωσης (FSGS) και της ΧΝΝ. Μια εφάπαξ δόση ADR μπορεί να προκαλέσει απώλεια ποδοκυττάρων, επίμονη πρωτεϊνουρία και FSGS. Μεταξύ των διαφορετικών στελεχών ποντικών, το BALB/c είναι ευαίσθητο στην ADR, ενώ το C57BL/6 (B6) είναι ανθεκτικό. Έτσι, χρησιμοποιήσαμε το BALB/c σε αυτό το πείραμα ADR. Στη νεφροπάθεια ADR,νεφρώνη διάμεση ίνωση, που είναι τυπικό εύρημα της ΧΝΝ, είναι
Εικ. 2. (Α) Αντιπροσωπευτικές εικόνες χρώσης περιοδικού οξέος- Schiff (PAS) και εικόνων με ανοσοχημική χρώση με αντίσωμα αντι-ουδετεροφιλικής ζελατινάσης (NGAL) ψευδούς (αριστερό πλαίσιο), 30 λεπτών (μεσαίο πλαίσιο) και Νεφρικές τομές 60 λεπτών (δεξιός πίνακας). Το επάνω πλαίσιο αντιπροσωπεύει την εικόνα χρωματισμένη με PAS και το κάτω πλαίσιο αντιπροσωπεύει την ανοσοχημική χρωματισμένη εικόνα με αντίσωμα αντι-NGAL. Ράβδοι κλίμακας: 50 μm. (Β) Γράφημα που συγκρίνει τα σωληνωτά ύψη του εικονικού, 30 λεπτά και 60 λεπτά. (Γ) Γράφημα που συγκρίνει την περιοχή θετικής NGAL έναντι της συνολικής επιφάνειας εικονικής, 30 λεπτά και 60 λεπτά. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Οι τιμές P υπολογίστηκαν με τη δοκιμή πολλαπλών ομάδων Bonferroni. (Δ) Τα διαγράμματα διασποράς με γραμμική παλινδρόμηση δείχνουν ανάλυση συσχέτισης μεταξύ του ύψους του ύψους των σωληναρίων και της θετικής για NGAL περιοχής. Η γραμμή γραμμικής παλινδρόμησης δείχνει μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του σωληνοειδούς ύψους και των θετικών για NGAL περιοχών. Εμφανίζονται οι τιμές των συντελεστών συσχέτισης R και P. Οι μαύροι κύκλοι υποδεικνύουν την εικονική ομάδα (n=3), τα μαύρα τετράγωνα υποδηλώνουν την ομάδα των 30 λεπτών (n=3) και τα μαύρα τρίγωνα υποδηλώνουν την ομάδα των 60 λεπτών (n=3). *Π<0.05,><>
εμφανής στις 4 εβδομάδες μετά τη χορήγηση της ADR, ενώ μια ενδιάμεση κατάσταση μεταξύ AKI και ΧΝΝ παρατηρείται σε λιγότερο από 4 εβδομάδες [24]. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τη σωληναριακή ισοπέδωση σε ποντίκια 2 εβδομάδες μετά τη θεραπεία με ADR, μια ενδιάμεση κατάσταση. Το επίπεδο τωννεφρώνΗ σωληναριακή βλάβη αξιολογήθηκε μετρώντας την έκφραση της NGAL, η οποία αυξάνεται στα κύτταρα των κατεστραμμένων νεφρικών σωληναρίων [6]. Μετρήθηκαν τα ύψη των νεφρικών σωληναρίων και πραγματοποιήθηκε χρώση ανοσοχημείας με χρήση αντισώματος αντι-NGAL στους νεφρικούς ιστούς των ομάδων ADR και φορέα. Δεν ανιχνεύθηκε θετική εικόνα χρώσης με κόκκινο Sirius (δεν εμφανίζονται τα δεδομένα). Η σωληναριακή ισοπέδωση ενισχύθηκε με τη χορήγηση ADR και καταδείχθηκε εμφανής αύξηση στην έκφραση NGAL (Εικ. 3A-C). Επιπλέον, η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης των σωληναριακών υψών και των επιπέδων έκφρασης NGAL έδειξε αντίθετη συσχέτιση (R2=0.522, P=0.043) (Εικ. 3D).
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Σε αυτή τη μελέτη επιδείχθηκαν ισχυρές συσχετίσεις μεταξύ της επιπέδωσης των νεφρικών σωληναριών και της διάμεσης ινώδους σε σοβαρά μοντέλα ΧΝΝ και μεταξύ της σωληναριακής επιπέδωσης και της διαταραχής των σωληναρίων σε μοντέλα ADR και IR. Υπάρχουν διάφοροι μηχανισμοί με τους οποίους οι σπειραματικές αλλοιώσεις εξαπλώνονται στη διάμεση ίνωση μέσω των σωληναριακών διαταραχών. Μια μελέτη ανέφερε ότινεφρώνβλάβη των σωληναρίων (επιπέδωση) προκαλεί διάμεση ίνωση, παραγωγή εξωκυτταρικής μήτρας (ECM) και διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων. Η ισχυρή συσχέτιση μεταξύνεφρώνσωληναριακή ισοπέδωση και νεφρική σωληναριακή διάμεση μαρμαρυγή που παρατηρήθηκε σε αυτή τη μελέτη πιθανώς αντιστοιχεί στην προηγουμένως αναφερθείσα αιτιολογική συσχέτιση. δηλαδή,νεφρώνΟι σωληναριακές βλάβες προκαλούν ινοποίηση, παραγωγή ECM και κυτταρική διήθηση. Μια άλλη μελέτη έδειξε επίσης συσχέτιση μεταξύ της ενισχυμένης έκφρασης NGAL και της ατροφίας των νεφρικών σωληναρίων (άλλο στοιχείο βαθμολογίας βλάβης της νεφρικής διαταραχής), με αποτελέσματα παρόμοια με τη βαθμολογία ισοπέδωσης νεφρικών σωληναριών που λήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη [26]. Σε αυτή τη μελέτη, μόνο άνδρες
Εικ. 3. (Α) Αντιπροσωπευτικές εικόνες χρώσης περιοδικού οξέος- Schiff (PAS) και εικόνων με ανοσοχημική χρώση με αντίσωμα λιποκαλίνης (NGAL) του φορέα (αριστερό πλαίσιο) και αδριαμυκίνη (ADR) (δεξιό πλαίσιο) νεφρικά τμήματα. Το επάνω πλαίσιο αντιπροσωπεύει την εικόνα χρωματισμένη με PAS και το κάτω πλαίσιο αντιπροσωπεύει την ανοσοχημική χρωματισμένη εικόνα με αντίσωμα αντι-NGAL. Ράβδοι κλίμακας: 50 μm. (Β) Γράφημα που συγκρίνει τα σωληνωτά ύψη του οχήματος και το ADR. (Γ) Γράφημα που συγκρίνει την περιοχή θετικής NGAL έναντι της συνολικής επιφάνειας. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Οι τιμές P υπολογίστηκαν με τη δοκιμή πολλαπλών ομάδων Bonferroni. (Δ) Τα διαγράμματα διασποράς με γραμμική παλινδρόμηση δείχνουν ανάλυση συσχέτισης μεταξύ του ύψους των σωληναρίων και της θετικής για NGAL περιοχής. Η γραμμή γραμμικής παλινδρόμησης δείχνει μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ του σωληνοειδούς ύψους και των θετικών για NGAL περιοχών. Εμφανίζονται οι τιμές των συντελεστών συσχέτισης R και P. Οι μαύροι κύκλοι υποδηλώνουν την ομάδα οχημάτων (n=3) και τα μαύρα τετράγωνα υποδηλώνουν την ομάδα ADR (n=5). *Π<0.05,><>
Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΟΝ ΝΕΦΡΟ/ΝΕΦΡΟ ΠΟΝΟ
χρησιμοποιήθηκαν ποντίκια, αλλά η ισοπέδωση των σωληναρίων στη νεφροπάθεια μπορεί να παρατηρηθεί και στα δύο φύλα. Ωστόσο, τα θηλυκά ποντίκια έχουν αναφερθεί ότι είναι ανθεκτικά στο IR και άλλα μοντέλα νεφροπάθειας, επομένως η χρήση αρσενικών ή θηλυκών ποντικών θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ανάλογα με το μοντέλο νεφροπάθειας που χρησιμοποιείται [8]. Ήταν επίσης δύσκολο να εκτιμηθεί η σωληναριακή ισοπέδωση στο μυελό, επειδή τα σωληνάρια στον μυελό τη στιγμή του μη τραυματισμού έχουν λεπτά σωληνοειδή κύτταρα, αν και εκτιμήθηκε το ύψος των σωληναρίων στον φλοιό. Επομένως, στο μέλλον θα πρέπει να αναπτυχθεί μια απλή μέθοδος για την αξιολόγηση της σωληναριακής βλάβης στο μυελό (τα δεδομένα δεν φαίνονται). Εμπειρογνώμονες όπως παθολόγοι ή κλινικοί γιατροί γενικά εκτελούν μια αξιολόγηση του επιπέδου ατροφίας, επέκτασης ή μετάλλαξης των νεφρικών σωληναρίων για να βαθμολογήσουν την ιστολογία των νεφρικών σωληναρίων. Ωστόσο, η μέτρηση των υψών των νεφρικών σωληναρίων για τη βαθμολογία του επιπέδου ισοπέδωσης μπορεί να πραγματοποιηθεί πολύ πιο εύκολα σε σύγκριση με άλλες μεθόδους. Αυτό είναι επίσης επωφελές επειδή οι ταχέως εξελισσόμενες τεχνολογίες όπως η τεχνητή νοημοσύνη και η επεξεργασία εικόνας μπορούν να εφαρμοστούν εύκολα. Ως εκ τούτου, μια πιο ακριβής, αντικειμενική και ποσοτική διάγνωση θα πρέπει να είναι δυνατή στο μέλλον. Για να επιβεβαιωθεί εάν η επιπέδωση των νεφρικών σωληναρίων θα μπορούσε να είναι ένα φαινόμενο που παρατηρείται παγκοσμίως ως δείκτης κακοήθειας ΧΝΝ σε διαφορετικά είδη, θα πρέπει να διεξαχθούν περαιτέρω έρευνες χρησιμοποιώντας μοντέλα ΧΝΝ άλλων τρωκτικών, ζώων συντροφιάς όπως σκύλοι και γάτες ή δείγματα που συλλέγονται από ανθρώπους.