Μεταφορά εχινακοσίδης και ακτεοσίδης ευαίσθητη στη χλωριδίνη και αλλοιωμένη οδός εντερικής απορρόφησης μετά την εφαρμογή του εκχυλίσματος Cistanche Tubulosa

Για περισσότερες πληροφορίες:ali.ma@wecistanche.com

Οι Tadatoshi Tanino et al

Περίληψη Στόχοι

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αντιμετωπίσει τις ευεργετικές επιδράσεις τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosaσχετικά με τη βελτίωση της χαμηλής εντερικής διαπερατότητας της εχινακοσίδης (ECH) και της ακτεοσίδης (ACT).

Μέθοδοι

Απορρόφηση ECH και ACT σεΕκχύλισμα Cistanche tubulosaχαρακτηρίστηκε ότι χρησιμοποιεί μονοστοιβάδες ανθρώπινων εντερικών Caco{0}} κυττάρων με άθικτες ενώσεις. Η εξαρτώμενη από τον μεταφορέα γλυκόζης απορρόφηση των ECH και ACT επιβεβαιώθηκε με μια τεχνική επιτόπιας αιμάτωσης.

Σημαντικά ευρήματα

Η φαινομενική διαπερατότητα (Papp) δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ του ανέπαφου ECH και του ανέπαφου ACT. Παρουσία χλωριτζίνης, το Papp του theECH και του ACT σε υψηλή δόση μειώθηκε στο 20 τοις εκατό της αντίστοιχης μη θεραπείας, αλλά δεν μεταβλήθηκε από τη φλορετίνη και τη βεραπαμίλη.Εκχύλισμα Cistanche tubulosaσε χαμηλές και υψηλές δόσεις ενίσχυσαν το Papp των ECH και ACT (και οι δύο κατά τρεις φορές), με αποτέλεσμα τη μεγάλη συμμετοχή τους στην ανεξάρτητη από το νάτριο απορρόφηση του μεταφορέα γλυκόζης. Σε χαμηλή συγκέντρωση, τα ταυτόχρονα επίπεδα ECH και ACT στο πυλαίο αίμα καταστέλλονταν σημαντικά από τη phloridzin.

συμπέρασμα

Η διαιτητική και φαρμακευτικήΕκχύλισμα Cistanche tubulosaΗ ενίσχυση της εντερικής απορρόφησης του ECH και του ACT μπορεί να χρησιμεύσει για την καλύτερη διαχείριση της ανθρώπινης υγείας, αν και η συμμετοχή των ευαίσθητων στη χλωριδίνη μεταφοράς θα πρέπει να μειωθεί.

Λέξεις-κλειδιάακτεοσίδη; Caco-2 μονοστιβάδες κυττάρων.Εκχύλισμα Cistanchetubulosa; εχινακοσίδηΜεταφορέας γλυκόζης ευαίσθητος στη χλωριδίνη

Εκχύλισμα Cistanche tubulosa

Κάντε κλικ στην σκόνη Cistanche tubulosa

Εισαγωγή

Οι ρίζες του Cistanche tubulosa χρησιμοποιούνται παραδοσιακά για φάρμακα και τρόφιμα.Εκχύλισμα Cistanche tubulosaείναι γνωστό ότι έχει φαρμακολογικές επιδράσεις σε διάφορες ασθένειες του εγκεφάλου, λειτουργίες αντιγήρανσης, μεταβολισμό λίπους και ανάπτυξη μαλλιών.Cistanche tubulosa[5,6] Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, μια κατηγορία πολυφαινολικών ενώσεων, είναι τα κύρια χημικά συστατικά στα είδη Cistanche,[7] αν και οι ποσότητες τους ποικίλλουν μεταξύ διαφορετικών ειδών. Η εχινακοσίδη (ECH, Εικόνα 1) είναι ένας από τους κύριους φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίτες στο HerbaCistanchis. Υδρολύεται σε ακτεοσίδη (ACT; ονομάζεται επίσης βερβασκοσίδη) από ένζυμα βακτηριακής προέλευσης στο παχύ έντερο. Παραδόξως, η εξαιρετικά υδατοδιαλυτή ECH βελτιώνει τα συμπεριφορικά και νευροχημικά αποτελέσματα σε ένα μοντέλο ποντικού της νόσου του Πάρκινσον και ανέστειλε την ενεργοποίηση της κασπάσης-3 και της κασπάσης-8 σε νευρώνες με κοκκώδη παρεγκεφαλίδα.[9] Είναι ευρέως γνωστό ότι ο αιματοεγκεφαλικός φραγμός περιορίζει αυστηρά την είσοδο και την κατανομή των ξενοβιοτικών στον εγκέφαλο από το αίμα. Wu et al.[12] έδειξε επίσης ότι το υδατοδιαλυτό ACT κατανεμήθηκε γρήγορα στους ιστούς του εγκεφάλου των αρουραίων. Επομένως, το ECHand ACT μπορεί να μεταφερθεί στον εγκέφαλο, τα έντερα και το ήπαρ από το συγκεκριμένο σύστημα.

Αν και υπάρχουν ισχυρά στοιχεία που υποδηλώνουν ότι η κατανάλωση τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosaείναι ευεργετική για την υγεία του ανθρώπου, η διαπερατότητα της καθαρής ECH σε κυτταρικές μονοστοιβάδες Caco{{0}} σε κορυφαία συγκέντρωση 8,4 ± 1,6 ug/ml είναι ίση ή μικρότερη με εκείνη του δείκτη παρακυτταρικής μεταφοράς μαννιτόλης.[13] Όταν η καθαρή ECH χορηγείται από το στόμα σε αρουραίους (δόση, 1{{10}}0 mg/kg), η απορρόφηση είναι εξαιρετικά γρήγορη (Tmax, 15 λεπτά) και η μέγιστη συγκέντρωση ορού είναι πολύ χαμηλή (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] Η απόλυτη βιοδιαθεσιμότητα του ECH είναι μόνο 0,83 τοις εκατό . Ομοίως, όταν τα κύτταρα Caco{15}} επωάζονται με ένα φαινολικό κλάσμα που έχει καθαριστεί μερικώς από λύματα ελαιοτριβείου, η καθαρή πρόσληψη ACT είναι ταχεία με τη μέγιστη συσσώρευση να εμφανίζεται μετά από 30 λεπτά και μια συνολική απόδοση συσσώρευσης 0,1 τοις εκατό, παρέχοντας ενδοκυτταρικά επίπεδα pmol/mg κυτταρικής πρωτεΐνης.[15] Σε αρουραίους, η μέγιστη συγκέντρωση (0,13 ± 0,03 ug/ml) του καθαρού ACT επιτεύχθηκε εντός 30 λεπτών μετά τη χορήγηση από το στόμα με 100 mg/kg,[12] υποδηλώνοντας ταχεία εντερική απορρόφηση. Η από του στόματος βιοδιαθεσιμότητα του ACT, καθώς και της ECH, είναι αρκετά χαμηλή (0,12 ± 0,04 τοις εκατό), υποδηλώνοντας την πιθανότητα επιδράσεων πρώτης διόδου στον εντερικό σωλήνα και στο ήπαρ. Στη χολή αρουραίου, τα συζεύγματα μεθυλίωσης και γλυκουρονιδίωσης της ECH είναι κύριοι μεταβολίτες,[16] αν και η έκταση του ηπατικού μεταβολισμού παραμένει ασαφής. Βρήκαμε προκαταρκτικά ότι το ECH και το ACT ήταν αρκετά σταθερά στα ομογενοποιημένα άλατα του εντερικού βλεννογόνου του αρουραίου και του τεχνητού γαστρικού οξέος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Najar et al.[17] έδειξε ότι το ACT αναστέλλει τη δράση της P-γλυκοπρωτεΐνης (P-gp)-ATPase με τρόπο παρόμοιο με τη βεραπαμίλη (αντιπροσωπευτικός αναστολέας P-gp), υποδηλώνοντας έναν ρυθμιστή P-gp. Ωστόσο, είναι αβέβαιο εάν το ACT είναι διαθέσιμο ως υπόστρωμα P-gp. Είναι ενδιαφέρον ότι τα πρόσφατα ευρήματα του διατροφικού φλαβονοειδούς-D-γλυκοζίτη έδειξαν ότι η πρωτεΐνη ανθεκτικής σε πολλά φάρμακα (MRP2) κάλυπτε τον εξαρτώμενο από το νάτριο μεταφορέα γλυκόζης (SGLT)1-διαμεσολαβούσε την πρόσληψη της κερκετίνης 4'-O{48}}γλυκόζης,[18] ,19] που ευθύνεται για πολύ κακή απορρόφηση. Ωστόσο, πολύ λίγα είναι γνωστά για την ευαισθησία των πολυφαινολικών γλυκοσιδών στους απορροφητικούς μεταφορείς, συμπεριλαμβανομένων των μεταφορέων γλυκόζης. Οι πληροφορίες σχετικά με τα χαρακτηριστικά απορρόφησης της κερκετίνης 4'-γλυκοσίδης και της ταχέως διαπερατής από τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό ECH μας ώθησαν να διερευνήσουμε την ευαισθησία των μεταφορέων στη διαιτητική πρόσληψη γλυκοειδών C του p. σωληνώσεις.

Σε αυτήν τη μελέτη, διερευνήσαμε την απορρόφηση άθικτης ECH και ACT με τη μεσολάβηση του μεταφορέα γλυκόζης χρησιμοποιώντας μονοστοιβάδες ανθρώπινων εντερικών κυττάρων Caco-2. Ταυτόχρονα, η μεταφορά απορρόφησης ECH και ACT ταυτόχρονα διατροφικάΕκχύλισμα Cistanche tubulosaχαρακτηρίστηκε από ένα in-vitromodel και in-situ σύστημα εντερικής αιμάτωσης με δειγματοληψία πυλαίου αίματος, το οποίο μπορεί εύκολα να διακρίνει μεταξύ της έκτασης της απορρόφησης και της αποφυγής της ηπατικής πρώτης διέλευσης.

Υλικά και μέθοδοι

Υλικά

Το Intact ECH και ACT ήταν γενναιόδωρα δώρα από την EishinTrading Co., Ltd (Οσάκα, Ιαπωνία). Το Phloridzin και η phloretin αγοράστηκαν από την Tokyo Kasei Co., Ltd. (Τόκιο, Ιαπωνία). Η βεραπαμίλη και το π-κουμαρικό οξύ, που χρησιμοποιούνται ως εσωτερικά πρότυπα για τη δοκιμασία υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC), ελήφθησαν από τη Sigma-Aldrich (St Louis, MO ,ΗΠΑ). Όλα τα άλλα χημικά που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής ποιότητας και διαθέσιμα στο εμπόριο.

Φυτικό υλικό και παρασκευή θεμεθανολικού εκχυλίσματος

Το C. tubulosa (SCHRENK) Το R. WIGHT (Orobanchaceae) είναι πολυετές παρασιτικό φυτό που αναπτύσσεται στις ρίζες του είδους Salvadoraor Calotropis και διανέμεται σε χώρες της Βόρειας Αφρικής, της Αραβίας και της Ασίας. Οι ξηροί μίσχοι του C. tubulosa κονιοποιήθηκαν και εκχυλίστηκαν τρεις φορές με αναρροή μεθανολύματος για 3 ώρες. Η εξάτμιση του διαλύτη υπολειπόμενη πίεση έδωσε το μεθανολικό εκχύλισμα. Το θεμεθανολικό εκχύλισμα (εμπορικής ποιότητας, Αρ. παρτίδας 20070130, καταχωρημένη εμπορική ονομασία, Sabaku Ninnjinn Kanka) ήταν ένα γενναιόδωρο δώρο από την Eishin Trading Co., Ltd μέσω Muraoka andMorikawa (Πανεπιστήμιο Kinki, Ιαπωνία) και η βοτανική ταυτοποίηση έγινε από τον καθηγητή Jia Xiaoguang στο το Ινστιτούτο Παραδοσιακών Κινέζων και Εθνολογικών Φαρμάκων του Xinjiang.

Ανάλυση φυτικού εκχυλίσματος: χρωματογραφία

Καθορίσαμε τα περιεχόμενα ECH και ACT στοΕκχύλισμα Cistanche tubulosa(Αρ. παρτίδας 20070130) με ανάλυση HPLC που περιγράφεται παρακάτω. Τα δεδομένα που ελήφθησαν φαίνονται στον Πίνακα 1.

Κυτταρικής καλλιέργειας

Κύτταρα Caco{{0}}, που αγοράστηκαν από την American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA), χρησιμοποιήθηκαν στα περάσματα 38–53. Αναπτύχθηκαν σε μέσο καλλιέργειας που αποτελείται από τροποποιημένο μέσο Eagle's Dulbecco (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Ιαπωνία) συμπληρωμένο με 0.1 mM μη απαραίτητα αμινοξέα, 10 τοις εκατό εμβρυϊκό ορό βοοειδών απενεργοποιημένο με θερμότητα, 100 U/ml πενικιλλίνη G και 0,1 mg/ml θειική στρεπτομυκίνη.

Μεταφορικές μελέτες

Κύτταρα Caco{0}} επιστρώθηκαν σε πυκνότητα 6,4 × 103 κύτταρα/cm2 σε πολυανθρακικά φίλτρα. Οι μονοστοιβάδες χρησιμοποιήθηκαν για πειράματα μεταφοράς 21-25 ημέρες μετά τη σπορά. Άθικτα ECH καιACT που ήταν ισοδύναμα με το περιεχόμενό τους στοΕκχύλισμα Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Εχινακοσίδη σεΕκχύλισμα Cistanche tubulosa

In situ εντερική αιμάτωση

Αρσενικοί αρουραίοι Wistar (230-250 g) ελήφθησαν από την SLCJapan (Hamamatsu, Ιαπωνία). Τα ζώα στεγάστηκαν σε ένα κλιματιζόμενο δωμάτιο σε κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών για 1 εβδομάδα πριν από τη χρήση. Οι αρουραίοι τράφηκαν με τυπική εργαστηριακή τροφή (Oriental Yeast Co., Ltd., Τόκιο, Ιαπωνία) με νερό κατά βούληση και νηστεύτηκαν όλη τη νύχτα πριν από τη δοκιμή. Η μελέτη αιμάτωσης εντός της κυκλοφορίας πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με την τροποποιημένη διαδικασία που περιγράφεται από τους Mihara et al.[20]Συνοπτικά, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με διάλυμα ουρεθάνης 25 τοις εκατό (1 mg/kg) για να αποφευχθούν μειώσεις της αρτηριακής πίεσης. Έγινε μια μέση κοιλιακή τομή και το λεπτό έντερο εκτέθηκε. Ο χοληδόχος πόρος απολινώθηκε για να αποφευχθεί η έκκριση χολής στο έγχυμα. Ολόκληρο το λεπτό έντερο ως ένα τμήμα (από το δωδεκαδάκτυλο έως τον ειλεό) ξεπλύθηκε με φυσιολογικό ορό στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά έως ότου το πλύσιμο εμφανίστηκε διαυγές. Οι γυάλινες σωλήνες που συνδέονται με τη σωλήνωση σιλικόνης στη συνέχεια διασωληνώθηκαν και στα δύο άκρα του λεπτού εντέρου και ασφαλίστηκαν με νήμα ράμματος. Στη συνέχεια, το λεπτό έντερο αντικαταστάθηκε στην κοιλιά και οι σωληνίσκοι συνδέθηκαν με περισταλτική αντλία. Η πυλαία φλέβα σωληνώθηκε με σωλήνα πολυαιθυλενίου (PE10).Εκχύλισμα Cistanche tubulosaπου διατίθεται στο εμπόριο εναιωρήθηκε σε ρυθμιστικό διττανθρακικών Krebs-Henseleit (pH 7,4) για να δώσει τελική συγκέντρωση 4,5 mg/ml και φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτό στις 8000 rpm για να απομακρυνθούν τα αδιάλυτα συστατικά. Το υπερκείμενο υγρό απουσία ή παρουσία χλωριτζίνης (1 mM) συλλέχθηκε ξανά σε μια δεξαμενή, η οποία διατηρήθηκε σε θερμοκρασία 37 ± 0,5 μοιρών καθ' όλη τη διάρκεια του πειράματος. Στους υποδεικνυόμενους χρόνους, λήφθηκε αίμα μέσω του σωληνίσκου της πυλαίας φλέβας. Μετά τη φυγοκέντρηση των δειγμάτων αίματος, το προκύπτον πλάσμα αποπρωτεϊνώθηκε με ακετονιτρίλιο που περιέχει το εσωτερικό πρότυπο και φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm. Τα υπερκείμενα εξατμίστηκαν και το υπόλειμμα διαχωρίστηκε με μια κινητή φάση που αποτελείται από ακετονιτρίλιο και 0,5 τοις εκατό οξικό οξύ. Το μικτό διάλυμα φορτώθηκε σε στήλη HPLC. Οι αρουραίοι χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με ηθικές διαδικασίες ακολουθώντας τις Κατευθυντήριες οδηγίες για τη Φροντίδα και τη Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου που εκδόθηκαν από την ιαπωνική κυβέρνηση και το Πανεπιστήμιο Kinki.

Ανάλυση HPLC

Η ανάλυση HPLC πραγματοποιήθηκε σε ένα σύστημα εξοπλισμένο με aShimadzu SPD{{0}}A, ανιχνευτή υπεριώδους ακτινοβολίας, αντλία Shimadzu LC-10 και ολοκληρωμένο χρωματοπακ Shimadzu C-R4A (Κιότο, Ιαπωνία). Το ECH και το ACT διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας στήλη Inertsil ODS (5 μm, 4,6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan). Χρησιμοποιήθηκε κινητή φάση ακετονιτριλίου και 0,5 τοις εκατό οξικού οξέος σε αναλογία 15:85 (ν/ν) με ταχύτητα ροής 1,0 ml/min. Η ανίχνευση πραγματοποιήθηκε στα 334 nm

Κινητική ανάλυση

Οι συντελεστές φαινομενικής διαπερατότητας (Papp) υπολογίστηκαν από την κλίση του γραμμικού τμήματος της χρονικής πορείας της μεταφοράς σύνθετων υλικών κατά μήκος των μονοστοιβάδων κυψελών Caco-2, ως εξής: P dQ dt AC app=( ) ( )

όπου dQ/dt είναι ο ρυθμός διαπερατότητας, C0 είναι η αρχική συγκέντρωση της διαλυμένης ουσίας στον θάλαμο δότη και A είναι η επιφάνεια της μεμβράνης (4,7 cm2).

Στη μελέτη επί τόπου εντερικής αιμάτωσης σε αρουραίους, η περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκέντρωσης πλάσματος-χρόνου (AUC{0–90) στην πυλαία φλέβα από το χρόνο μηδέν έως την τελευταία μετρηθείσα υπολογίστηκε σύμφωνα με τον γραμμικό τραπεζοειδή κανόνα.

Ακτεοσίδη σεΕκχύλισμα Cistanche tubulosa

Φυσικοχημικές ιδιότητες

Η πολική επιφάνεια και η μη πολική επιφάνεια των ενώσεων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα SAS (έκδοση 0). , NC, ΗΠΑ). Πειραματικά προσδιορισμένες τιμές log P και pKa ελήφθησαν από τη βιβλιογραφία.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης που ακολουθήθηκε από το post-hoc τεστ Tukey. Τιμές πιθανότητας μικρότερες από 5 τοις εκατό θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

Απορροφητική μεταφορά εχινακοσίδης και ακτεοσίδης μέσω μονοστοιβάδων κυττάρων Caco-2

Σε ποντίκια και αρουραίους, άθικτη ECH[10,14] και ACT[12,21] χορηγούνται από το στόμα σε δόσεις 100–1000 mg/kg. οΕκχύλισμα Cistanche tubulosaπου χρησιμοποιήθηκε περιείχε περίπου 30 τοις εκατό ECH και 15 τοις εκατό ACT ανά δόση. Εφόσον το εκχύλισμα άλλαξε την οσμωτική πίεση και το pH στο μέσο επώασης, προσδιορίστηκαν συγκεντρώσεις 4,5 και 13,5 mg/ml με βάση την από του στόματος δόση (άθικτες ενώσεις: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g σωματικού βάρους) σε ποντικούς. Το εκχύλισμα σε χαμηλές (4,5 mg/ml) και υψηλές δόσεις (13,5 mg/ml) περιείχε 2.0 και 6,1 mg για ECH και 1.0 και 3,0 mg για ACT, αντίστοιχα. Εφαρμόσαμε ποσότητες εκχυλίσματος C. tubulosa που ήταν πολύ χαμηλότερες από την από του στόματος δόση ECH και ACT που αναφέρθηκε σε ανθρώπους (συνιστώμενη διατροφική δόση εκχυλίσματος: 150 mg που περιέχει περίπου 45 mg για ECH και 22,5 mg για ACT). Σε χαμηλές και υψηλές δόσεις ανέπαφων ενώσεων, τα προφίλ απορρόφησης (Εικόνα 2) και το Papp δεν ήταν σημαντικά διαφορετικά μεταξύ ECH και ACT ως ισοδύναμο ECH (Πίνακας 2). Όταν το εκχύλισμα C. tubulosa σε υψηλή δόση 13,5 mg/ml φορτώθηκε στο μέσο, ​​Pappvalues ​​(1,27 ± 0,13 και 0,34 ± 0,03 × 10−6 cm/s, αντίστοιχα) των συνοδών ECH και ACT ήταν τρεις φορές υψηλότερες από εκείνες (0,38 ± 0,09 και 0,10 ± 0,03 × 10−6 cm/s, αντίστοιχα) των ανέπαφων ECH και ACT (Πίνακας 2). Το εκχύλισμα, σε αντίθεση με τις ανέπαφες ενώσεις, ενίσχυσε σημαντικά τη μεταφορά απορρόφησης των ECH και ACT.

Ανασταλτική δράση της φλοριτζίνης, της φλορετίνης και της βεραπαμίλης

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) φλορετίνης δεν μπόρεσε να χρησιμοποιηθεί λόγω αισθητής κυτταρικής τοξικότητας. Επιπλέον, το P-gp έχει αναγνωριστεί ως σημαντικός παράγοντας υπεύθυνος για την αλληλεπίδραση μεταξύ φυτικών φαρμάκων και κλινικά σημαντικών P-gpsυποστρωμάτων. Η βεραπαμίλη δεν ενίσχυσε την απορροφητική μεταφορά ανέπαφων ενώσεων (Εικόνα 3).

Η απορροφητική μεταφορά ECH και ACT στο εκχύλισμα (χαμηλή δόση) αναστέλλεται σημαντικά από τη phloridzin (Πίνακας 2 και Εικόνα 4). Το εκχύλισμα στην υψηλή δόση κατέστειλε την αναστολή της ευαίσθητης στη φθοριτζίνη, αν και η μεταφορά ανέπαφων ECH και ACT ήταν πιο ευαίσθητη στη χλωριτζίνη (Πίνακας 2).

Η in situ μελέτη εντερικής αιμάτωσης

Σε μια επιτόπια μελέτη, δοκιμάσαμε εάν το ECH και το ACT είναι μέσαΕκχύλισμα Cistanche tubulosaμεταφέρθηκαν με SGLT1 που βρίσκεται στην κορυφαία πλευρά του λεπτού εντέρου. Όταν το διαιτητικό εκχύλισμα στη χαμηλή δόση (4,5 mg/ml) εγχύθηκε, το ECH andACT εμφανίστηκε γρήγορα στο αίμα της πύλης (Εικόνα 5). Η AUC καθορίστηκε ως 2702,8 ± 384,1 μm·min για το ECH και 698,3 ± 197,2 μm·min για το ACT. Αφού κανονικοποιήθηκε η AUC με περιεχόμενο απόΕκχύλισμα Cistanche tubulosa, η απορροφούμενη ποσότητα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ ECH καιACT. Η ευαίσθητη σε SGLT1-φλοριτζίνη, σε αντίθεση με τη φλορετίνη, κατέστειλε σημαντικά την απορροφητική μεταφορά της ταυτόχρονης ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) και του ACT (δεν ανιχνεύθηκε).

Συζήτηση

Ορισμένα φυτικά συστατικά είναι υποστρώματα της P-gp που εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό στο ήπαρ, το έντερο, τον εγκέφαλο και τα νεφρά. Το P-gp είναι καθοριστικός παράγοντας για τη βιοδιαθεσιμότητα, τη διάθεση και τη διανομή φυτικών φαρμάκων in vivo, όπως το St John'swort, η κουρκουμίνη, η εχινάκεια, το ginseng, το ginkgo και το τζίντζερ.[22,23]Η βιοδιαθεσιμότητα της γενιστεΐνης{{5} Η γλυκοσίδη, ένα φλαβονοειδές παράγωγο, περιορίστηκε επίσης από τον εντερικό μεταφορέα MRP2.[24] Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τις ιδιότητες απορρόφησης του ECH και του ACT ταυτόχρονα με διαιτητικά και φαρμακευτικάΕκχύλισμα Cistanche tubulosa.

Οι πολωμένες μονοστοιβάδες Caco{{0}} κυττάρων, καθώς και το έντερο,[25] εκφράζουν τους κύριους μεταφορείς της εντερικής εκροής φαρμάκων, όπως το P-gp, τα MRPs και η πρωτεΐνη αντοχής στον καρκίνο του μαστού.[26]Διατροφικά φλαβονοειδή. Η κερκετίνη[27] και η μυρικετίνη[28] έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν την εκροή που προκαλείται από P-gp τόσο στις κυτταρικές σειρές όσο και στα ζωικά μοντέλα. Η βεραπαμίλη, ένας αναστολέας της P-gp, δεν άλλαξε τη διαπερατότητα του ACT και του ECH στις μονοστοιβάδες των κυττάρων Caco (Εικόνα 3), υποδεικνύοντας ότι το ανέπαφο ECH και το ACT δεν περιορίζονταν από την αντλία εκροής P-gp. Οι προηγούμενες μελέτες μας έδειξαν ότι οι πρωτεΐνες MRP2 δεν εκφράζονται σε μονοστιβάδες κυττάρων Caco{13}}.[29] Η διαμεσολαβούμενη εκροή P-gp και MRP{16}}θα μπορούσε να αποκλειστεί στη μεταφορά ECH και ACT. Ορισμένες γλυκοσίδες της κερκετίνης με χαμηλή λιποφιλικότητα απορροφήθηκαν πιο αποτελεσματικά από την ίδια την κερκετίνη. Η προσοχή μας έχει επικεντρωθεί στη συνδυασμένη δράση δύο εντεροκυττάρων μεταφορέων γλυκόζης: SGLT στη μεμβράνη βουρτσίσματος και διευκόλυνση μεταφοράς γλυκόζης διάχυσης (GLUT) στη βασοπλευρική μεμβράνη. Η κυτταροκαλλιέργεια Caco{19}} μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μοντέλο για τη μελέτη των ευαίσθητων στη φλορετίνη GLUT2, και των ευαίσθητων στη φλοριτζίνη SGLT1 και 2 μεταφορέων. σε υψηλό ρυθμό με Pappof 36,8 ± 1,1×10−6 cm/s.[35] Διαθέτει υψηλότερο Pappt από τον δείκτη διακυτταρικής μεταφοράς προπρανολόλη (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, το ανέπαφο ECHand ACT είχε πολύ χαμηλότερο Papp από αυτό που αναφέρεται στη γλυκόζη και την παθητική προπρανολόλη. Υπολογίσαμε τον λογάριθμο του συντελεστή κατανομής (οκτανόλη-νερό), log P, υπολογίστηκε ότι είναι −2,32 και 0,077 για ECH και ACT, αντίστοιχα. Οι πολικές υδρόφιλες ενώσεις πιστεύεται ότι μεταφέρονται μέσω μιας παρακυτταρικής οδού (σε στενούς συνδέσμους). Οι δύο φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, όπως η μαννιτόλη, φαίνεται να μεταφέρονται μέσω μιας παρακυτταρικής οδού. Ωστόσο, η phloridzin μείωσε δραματικά την απορροφητική διαπερατότητα του ανέπαφου ECH και ACT (Πίνακας 2), υποδηλώνοντας ότι το apicalSGLT1 παίζει σημαντικό ρόλο στην εντερική απορρόφηση ανέπαφων ECH και ACT. Σε ισοδύναμη δόση, η υψηλότερη υδρόφοβη διαπερατότητα ACT ήταν κοντά στη διαπερατότητα ECH (Εικόνα 2 και Πίνακας 2). Yoshikawa et al.[36] έχουν αποδείξει ότι οι διευκολυντικοί μεταφορείς (GLUT 1 και 2), καθώς και το ευαίσθητο στη χλωριδίνη SGLT1, εκφράζονται έντονα στο λεπτό έντερο. Εφόσον οι απορροφούμενες ποσότητες των ενώσεων βασίζονται στο ισοζύγιο μάζας μεταξύ της πρόσληψης και της αποβολής, αξιολογήσαμε τη συμμετοχή της GLUT2. Η γλυκόζη διασχίζει τις κορυφαίες μεμβράνες των εντεροκυττάρων από το SGLT1 με υψηλή συγγένεια και χαμηλή χωρητικότητα και εξέρχεται κατά μήκος της βασοπλευρικής μεμβράνης μέσω του GLUT2 με χαμηλή συγγένεια και υψηλή χωρητικότητα. Η φλορετίνη (ένας ειδικός αναστολέας της GLUT2) δεν κατάργησε τη μεταφορά ανέπαφου ECH andACT (Εικόνα 3). Funes et al.[37] έδειξε ότι το ACT αλληλεπιδρά έντονα με τις φωσφορικές ομάδες των φωσφολιπιδικών μεμβρανών. Καθώς οι υδροξυλομάδες είναι άφθονες στη δομή της ACT, οι δεσμοί υδρογόνου μεταξύ αυτών των ομάδων και των πολικών κεφαλών της γλυκερίνης ή των φωσφορικών ομάδων των φωσφολιπιδίων είναι οι πιο πιθανές αλληλεπιδράσεις. Όταν το ανέπαφο ECH και το ισοδύναμό του ACT επωάστηκαν με μονοστιβάδες Caco-2 για 11 ώρες, η κυτταρική συσσώρευση του ACT (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) ήταν τρεις φορές μεγαλύτερη από εκείνη του ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Θεωρήσαμε ότι τα ευαίσθητα SGLT1-ECH και ACT μετακινήθηκαν αργά από τα εντεροκύτταρα στην κυκλοφορία του αίματος, οδηγώντας πιθανώς στο χαμηλό Papp που παρατηρήθηκε. Σε σύγκριση με την εξαιρετικά υδρόφιλη ECH, η χαμηλή διαπερατότητα του ACT μπορεί να οφείλεται στην παρεμβολή στις κυτταρικές μεμβράνες.

Εκχύλισμα Cistanche tubulosa

Οι πολυφαινολικές ενώσεις καταναλώνονται σε μείγματα βοτάνων κατά την κλινική τους εφαρμογή και διατίθενται στο εμπόριο ως συμπληρώματα διατροφής. Σε μια in vitro μελέτη, έδειξε ότι η απορρόφηση της φαινολικής επικατεχίνης δεν επηρεάστηκε από τη σύνθεση των συστατικών των υλικών τροφίμων ποτών.[38] Αντίθετα, το Hypericum perforatumL. Οι μήτρες προϊόντων επηρεάζουν τη μεταφορά κερκετινγκλουκοζιδίων (ρουτίνη και ισοκερκιτρίνη) και υπεροσιδέα μεταξύ των κυττάρων Caco-2 λόγω διαφορών στη φυτοχημική σύνθεση της μήτρας και στα χαρακτηριστικά μεταφοράς, π.χ. παρακυτταρική μεταφορά και μεταφορά μέσω φορέα ή ενεργή μεταφορά.[39] Σε αυτή τη μελέτη, το C. tubulosa παρείχε τριπλή μεγαλύτερη διαεπιθηλιακή μεταφορά από το άθικτο ECH και ACT (Εικόνα 2 και Πίνακας 2). Υποθέτουμε ότι τα εξαρτήματα στοΕκχύλισμα Cistanche tubulosaενεργοποιούν τον ευαίσθητο στη χλωριδζίνη μεταφορέα και/ή επιταχύνουν την αποβολή των ενδοκυτταρικών ECH και ACT.Εκχύλισμα Cistanche tubulosaστην υψηλή δόση φαινόταν να συγκαλύπτει σε μεγάλο βαθμό την ισχύ της ευαίσθητης στη χλωριδίνη μεταφοράς (Πίνακας 2). Οι διατροφικοί υδατάνθρακες[40] και οι πρωτεΐνες[41] αλληλεπιδρούν με ορισμένες πολυφαινόλες στο γαστρεντερικό σωλήνα.Morikawa et al.[10] έδειξε ότι πέντε ιριδοειδή, κανκανοσίδες AD και κανκανόλη, ένας μονοτερπενικός γλυκοσίδης, κανκανοσίδη Ε, δύο φαινυλαιθανοειδείς ολιγογλυκοσίδες, κανκανοσίδες F και G και ένα ακυλιωμένο ολιγοσάκχαρο, κανκανόζη, μπορούσαν να απομονωθούν από τοΕκχύλισμα Cistanche tubulosa

χρησιμοποιείται επί του παρόντος. Άλλα συστατικά, συμπεριλαμβανομένων των πρωτεϊνών στοΕκχύλισμα Cistanche tubulosa, παραμένουν ασαφή. Μαζί με την παραπάνω εικασία, έχουμε σχεδιαστεί να εξετάζουμε εάν άλλα συστατικά αλληλεπιδρούν με το SGLT1 και αναστέλλουν την απορρόφηση του ECH και του ACT.

Τα πειράματα in vivo δεν μπορούν εύκολα να διακρίνουν την έκταση της απορρόφησης και την αποφυγή της διάθεσης πρώτης διέλευσης μέσω του ήπατος. Το μοντέλο in-situ εντερικής αιμάτωσης έχει πλεονέκτημα έναντι των μοντέλων in-vivo και in-vitro λόγω του εύκολου ελέγχου των παραμέτρων του πειράματος και του αποκλεισμού των επιπτώσεων άλλων οργάνων και της διατήρησης της ανέπαφης εντερικής παροχής αίματος.[22] Η εμπλοκή του ευαίσθητου στη θεφλοριτζίνη μεταφορέα γλυκόζης αξιολογήθηκε στο σύστημα εντερικής αιμάτωσης anin-situ. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, απορροφήθηκαν ποσότητες ECH και ACT συνοδώνΕκχύλισμα Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 cm/s απορροφάται πλήρως στον άνθρωπο, ενώ τα φάρμακα και τα πεπτίδια που απορροφώνται ελάχιστα (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 cm/s (Πίνακας 2), υποδηλώνοντας υψηλή βιοδιαθεσιμότητα από το στόμα σε ζώα και ανθρώπους. Crespy et al.[43] έδειξε ότι η εκροή σε μια επιτόπια μελέτη εντερικής αιμάτωσης δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ της φλοριτζίνης και της φλορετίνης. [44] έδειξαν επίσης ότι η από του στόματος βιοδιαθεσιμότητα της phloridzin με υψηλή ευαισθησία στο SGLT1 ήταν μόνο 10 τοις εκατό σε αρουραίους. Μελλοντικές μελέτες πρέπει να αξιολογήσουν τη βιοδιαθεσιμότητα και την ηπατική επίδραση πρώτης διόδου της ECH ταυτόχρονης χορήγησης του διατροφικού εκχυλίσματος από το στόμα σε υψηλή δόση. Τα in situ αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η πρόσληψη τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosaμπορεί να βελτιώσει τη χαμηλή στοματική απορρόφηση ανέπαφων ECH και ACT.

συμπέρασμα

Η διαιτητική και φαρμακευτικήΕκχύλισμα Cistanche tubulosaΗ ενίσχυση της εντερικής απορρόφησης του ECH και του ACT μπορεί να χρησιμεύσει για την καλύτερη διαχείριση της ανθρώπινης υγείας, αν και η συμμετοχή των ευαίσθητων στη χλωριδίνη μεταφοράς θα πρέπει να μειωθεί.

Δηλώσεις

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι Συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν καμία σύγκρουση συμφερόντων για γνωστοποίηση

Χρηματοδότηση

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε εν μέρει από το High-Tech Research Center του Πανεπιστημίου Kinki.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς επιθυμούν να ευχαριστήσουν τον Osamu Muraoka (Πανεπιστήμιο Kinki, Οσάκα, Ιαπωνία) και τον Toshio Morikawa (Πανεπιστήμιο Kinki, Οσάκα, Ιαπωνία) για την προσφοράΕκχύλισμα Cistanche tubulosaκαι καθαρά συστατικά. Είμαστε πολύ ευγνώμονες στον Masahiro Iwaki (Πανεπιστήμιο Kinki) για την υποστήριξη της μελέτης.

Εκχύλισμα Cistanche tubulosaπροϊόντα

ΑποΕκχύλισμα Cistanche tubulosa' μεΟι Tadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, σελ. 1457–1465,Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοζίτες που μεταφέρονται με SGLT1

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Tanaka J et al. Επίδραση τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosaσε διάφορες παθήσεις του εγκεφάλου. Στυλ φαγητού 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J et al. Αντιγηραντικές λειτουργίες τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosa. Στυλ φαγητού 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et al. Λειτουργίες ομορφιάς και ανάπτυξης μαλλιών τουΕκχύλισμα Cistanche tubulosa. Στυλ φαγητού 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et al. Η επίδραση του μεταβολισμού του λίπουςΕκχύλισμα Cistanche tubulosa. Στυλ φαγητού 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F et al. Τα συστατικά του Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. απομόνωση και δομή ενός νέου φαινυλαιθανοειδούς γλυκοζίτη και ενός νέου νεολιγνικού γλυκοσιδίου. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Φαινυλαιθανοειδείς ολιγογλυκοσίδες και ακυλιωμένα ολιγοσάκχαρα με αγγειοχαλαρωτική δράση από το Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et al. Ανάλυση φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων Herba cistance με RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. Μεταβολική ρύθμιση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από το Herba cistanches στο γαστρεντερικό του σκύλου. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. Νευροπροστατευτικές επιδράσεις της εχινακοσίδης στο μοντέλο MPTP ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. Ακυλιωμένοι φαινυλαιθανοειδείς ολιγογλυκοσίδες με ηπατοπροστατευτική δράση από το φυτό της ερήμου Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et al. Επιδράσεις βερμπασκοσίδης, βιοτεχνολογικά καθαρισμένου με φυτικές κυτταρικές καλλιέργειες syringa Vulgaris, σε μοντέλο τρωκτικών περιοδοντίτιδας. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT et al. Προσδιορισμός ακτεοσίδης σε Cistanche deserticola και Boschniakia rossica και η φαρμακοκινητική του σε ελεύθερα κινούμενους αρουραίους χρησιμοποιώντας LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. Μελέτες διαπερατότητας αλκυλαμιδίων και συζυγών καφεϊκού οξέος από εχινάκεια χρησιμοποιώντας μοντέλο μονοστιβάδας κυττάρου caco-2. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C et al. Προσδιορισμός εχινακοσίδης σε ορό αρουραίου με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης με ανίχνευση υπεριώδους και εφαρμογή της στη φαρμακοκινητική και τη βιοδιαθεσιμότητα. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Βερμπασκοσίδες από νερό ελαιοτριβείου: αξιολόγηση της βιοπροσβασιμότητας και της εντερικής πρόσληψής τους χρησιμοποιώντας ένα σύστημα μοντέλων πέψης/κακο{1}} in vitro. J Food Sci 2011; 176: Η48–Η54.
16. Jia C et al. Μεταβολισμός της εχινακοσίδης, ενός καλού αντιοξειδωτικού, σε αρουραίους: απομόνωση και ταυτοποίηση των χοληφόρων μεταβολιτών του. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA et al. Τροποποίηση της δραστηριότητας της P-γλυκοπρωτεϊνικής ΑΤΡάσης από ορισμένα φυτοσυστατικά. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. Εκροή διαιτητικών φλαβονοειδών κερκετίνης 4'-βήτα-γλυκοζίτη σε μονοστοιβάδες ανθρώπινων εντερικών caco{4}} κυττάρων από κορυφαία πρωτεΐνη σχετιζόμενη με πολλαπλή αντοχή σε φάρμακα-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. Κυτταρική πρόσληψη διαιτητικής φλαβονοειδούς κερκετίνης 4'-βήτα-γλυκοσιδάσης από τον εξαρτώμενο από το νάτριο μεταφορέα γλυκόζης SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Εντερικός μεταβολισμός πρώτης διόδου της επερισόνης στον αρουραίο. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi Β et al. Αντιυπεραλγητική δράση της βερμπασκοσίδης σε δύο μοντέλα νευροπαθητικού πόνου. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ et al. Εντερική διαπερατότητα του chlorpyrifos με χρήση της μεθόδου εντερικής αιμάτωσης μονής διέλευσης στον αρουραίο. Τοξικολογία 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS et al. Αλληλεπίδραση φυτικών φαρμάκων με τη μεσολάβηση της P-γλυκοπρωτεΐνης και του κυτοχρώματος P-450-. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK et al. Μεταφορά γλυκοσίδης γενιστεΐνης-7- από ανθρώπινα εντερικά κύτταρα CACO-2: ένας πιθανός ρόλος για το MRP2. Res Commun ΜοΙ Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et al. Έκφραση κορυφαίας/βασοπλευρικής επιφάνειας μεταφορέων φαρμάκων και ο ρόλος της στη διανυσματική μεταφορά φαρμάκου. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Κυτταρικές καλλιέργειες Caco-2 στην αξιολόγηση της εντερικής απορρόφησης: επιδράσεις ορισμένων συγχορηγούμενων φαρμάκων και φυσικών ενώσεων σε βιολογικές μήτρες. (Πανεπιστήμιο του Ελσίνκι, Φινλανδία, 2006) Ακαδημαϊκή Διατριβή, σελ. 1–66.
27. Scambia G et al. Η κουερσετίνη ενισχύει την επίδραση της αδριαμυκίνης σε μια πολυανθεκτική κυτταρική σειρά ανθρώπινου καρκίνου του μαστού MCF-7: την P-γλυκοπρωτεΐνη ως πιθανός στόχος. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. Επίδραση της μυρικετίνης, ενός αντιοξειδωτικού, στη φαρμακοκινητική της λοσαρτάνης και του ενεργού μεταβολίτη της, EXP-3174, σε επίμυες: πιθανός ρόλος του κυτοχρώματος P450 3A4, του κυτοχρώματος P450 2C9 και του P- αναστολή της γλυκοπρωτεΐνης από τη μυρικετίνη. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. Το προφάρμακο της πακλιταξέλης-2'-ανθρακικού αιθυλεστέρα μπορεί να παρακάμψει την κυτταρική εκροή που προκαλείται από την Ρ-γλυκοπρωτεΐνη για να αυξήσει την κυτταροτοξικότητα του φαρμάκου. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et al. Απορρόφηση διατροφικών γλυκοσιδίων κερκετίνης και κερκετίνης σε υγιείς εθελοντές ειλεοστομίας. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. Το διαχυτικό συστατικό της εντερικής απορρόφησης γλυκόζης μεσολαβείται από την επαγόμενη από τη γλυκόζη πρόσληψη του GLUT2 στη μεμβράνη της σανίδας της βούρτσας. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. Η ταξινόμηση των ενδογενών πρωτεϊνών της μεμβράνης του πλάσματος γίνεται από δύο θέσεις σε καλλιεργημένα ανθρώπινα εντερικά επιθηλιακά κύτταρα (Caco-2). Cell 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. Παρουσία και διαφορική έκφραση των mRNA μεταφορέων εξόζης SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 και GLUT5 σε κυτταρικούς κλώνους Caco-2 σε σχέση με την κυτταρική ανάπτυξη και την κατανάλωση γλυκόζης. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. Η εξαρτώμενη από το σάκχαρο έκφραση του μεταφορέα φρουκτόζης GLUT 5 σε κύτταρα Cac-2. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA et al. Μεταφορά κερκετίνης και των γλυκοζιδίων της μέσω των ανθρώπινων εντερικών επιθηλιακών κυττάρων Caco-2. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. Συγκριτική έκφραση μεταφορέων εξόζης (SGLT1, GLUT1, GLUT2 και GLUT5) σε όλο το γαστρεντερικό σωλήνα του ποντικού. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Επιδράσεις της βερμπασκοσίδης, ενός φαινυλοπροπανοειδούς γλυκοζίτη από λουίζα λεμονιού, σε μεμβράνες μοντέλων φωσφολιπιδίων. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. Επίδραση της σύνθεσης της μήτρας σοκολάτας στη βιοπροσβασιμότητα in vitro και στη βιοδιαθεσιμότητα στον άνθρωπο. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et al. Η υψηλή μεταβλητή περιεκτικότητα σε φαινολικές ουσίες στα προϊόντα του St. John's wort επηρεάζει τη μεταφορά τους στο ανθρώπινο εντερικό μοντέλο Caco{1}}: φαρμακευτική και βιοφαρμακευτική λογική για την τυποποίηση του προϊόντος. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. Επιδράσεις των τροφίμων στην απορρόφηση και στη φαρμακοκινητική των φλαβανολών κακάο. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Η αιθανόλη και η μήτρα κρασιού χωρίς πολυφαινολικά διεγείρουν τη διαφοροποίηση των ανθρώπινων εντερικών Caco{1}} κυττάρων. Επίδραση της συσχέτισής τους με εκχύλισμα σπόρων σταφυλιού πλούσιο σε προκυανιδίνη. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et al. Συσχέτιση μεταξύ της από του στόματος απορρόφησης φαρμάκου στον άνθρωπο και των φαινομενικών συντελεστών διαπερατότητας του φαρμάκου σε ανθρώπινα εσωτερικά επιθηλιακά κύτταρα (Caco{1}}). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. Σύγκριση της εντερικής απορρόφησης της κερκετίνης, της φλορετίνης και των γλυκοσιδών τους σε αρουραίους. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. Βιοδιαθεσιμότητα της φλορετίνης και της χλωριτζίνης σε αρουραίους. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.