Μέρος Ⅱ: Η υπερέκφραση της PKD1 προκαλεί πολυκυστική νόσο των νεφρών

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Caroline Thivierge, Almira Kurbegovic, Martin Couillard, Richard Guillaume, Olivier Coté και Marie Trudel

Οι υποκείμενοι παθογενετικοί μηχανισμοίαυτοσωματική επικρατούσα πολυκυστική νεφρική νόσο(ADPKD) μένει να διευκρινιστεί. Ενώ υπάρχουν ενδείξεις ότι PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) η γονιδιακή απλοανεπάρκεια και η απώλεια της ετεροζυγωτίας μπορεί να προκαλέσουν σχηματισμό κύστης σε ποντίκια, παραδόξως υψηλά επίπεδα PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) έχει ανιχνευθεί έκφραση στους νεφρούς ασθενών με ADPKD (αυτοσωματική κυρίαρχη πολυκυστική νεφρική νόσο). Για να προσδιορίσετε εάν PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) το κέρδος της λειτουργίας μπορεί να είναι μια παθογενετική διαδικασία, μια PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-BAC) τροποποιήθηκε με ομόλογο ανασυνδυασμό για να στοχεύσει αποκλειστικά ένα παρατεταμένο PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) έκφραση κατά προτίμηση στον ενήλικο νεφρό. Δημιουργήθηκαν αρκετές διαγονιδιακές σειρές που υπερέκφρασαν ειδικά την PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) διαγονίδιο στους νεφρούς 2- έως 15-διπλώσει πάνω από το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο1) ενδογενή επίπεδα. Όλα τα διαγονιδιακά ποντίκια ανέπτυξαν αναπαραγώγιμα σωληναριακές και σπειραματικές κύστεις και νεφρική ανεπάρκεια και πέθαναν από νεφρική ανεπάρκεια. Αυτό το μοντέλο δείχνει ότι η υπερέκφραση του άγριου τύπου PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) από μόνη της αρκεί για να πυροδοτήσει κυστεογένεση που μοιάζει με ανθρώπινη ADPKD (αυτοσωματική επικρατούσαπολυκυστική νεφρική νόσο). Τα αποτελέσματά μας αποκάλυψαν επίσης μια εντυπωσιακή αυξημένη νεφρική έκφραση c-Myc σε ποντίκια από όλες τις διαγονιδιακές σειρές, υποδεικνύοντας ότι το c-Myc είναι ένας κρίσιμος in vivo κατάντη τελεστής της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) μοριακή οδό. Αυτή η μελέτη όχι μόνο παρήγαγε ένα ανεκτίμητο και πρώτο PKD(πολυκυστική νεφρική νόσο）μοντέλο για την αξιολόγηση της μοριακής παθογένεσης και των θεραπειών, αλλά παρέχει επίσης στοιχεία ότι το κέρδος της λειτουργίας θα μπορούσε να είναι ένας παθογενετικός μηχανισμός στην ADPKD (αυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρών).

Cistanche που θεραπεύει νεφρική νόσο

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΜΕΡΟΣ Ⅰ

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Παραγωγή PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-Ac-BAC με ομόλογο ανασυνδυασμό. Για να προσδιορίσετε εάν PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) το κέρδος της λειτουργίας από μόνο του επαρκεί για την παραγωγή του φαινοτύπου ADPKD (αυτοσωματική κυρίαρχη πολυκυστική νόσος των νεφρών), πρώτα απομονώσαμε έναν γονιδιωματικό κλώνο που περιέχει ολόκληρο το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο σε μια βιβλιοθήκη φορέα BAC 129/Sv. Αυτή η βιβλιοθήκη εξετάστηκε με PCR με δύο σετ εκκινητών για το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο που εκτείνεται στο εξόνιο 1 στο 5' άκρο και τα εξόνια 39 έως 40 προς το 3' άκρο (Εικ. 1). Ένας θετικός κλώνος BAC για το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) ταυτοποιήθηκε γονίδιο που περιελάμβανε ολόκληρο το παρακείμενο σώμα γονιδίου Tsc2. Το ένθετο PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) χαρακτηρίστηκε λεπτομερώς για να διασφαλιστεί ότι η γονιδιωματική δομή ταιριάζει με εκείνη του ενδογενούς PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο1) γονίδιο του στελέχους ποντικού 129/Sv από το οποίο προήλθε το ένθετο και από το ενδογαμικό στέλεχος C57BL/6J. Γονιδιωματικοί χάρτες του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1(πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο, εμφανίστηκε πανομοιότυπο χωρίς ενδείξεις αναδιατάξεων (Εικ. 1). Αυτό το BAC περιείχε ένα -121-kb ένθετο που περιλαμβάνει ~37 kb upstream και -39 kb μιας κατάντη ακολουθίας του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο1) γονίδιο όπως προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση και αλληλούχιση.

ΣΥΚΟ. 2.Παραγωγή κατασκευών SBPkdlrAc και διαγονιδιακών ποντικών. (α)Διεξήχθησαν διαδοχικά συμβάντα ομόλογου ανασυνδυασμού στο Pkdl-BAC ποντικού για να εισαχθούν δύο τροποποιήσεις: τα ρυθμιστικά στοιχεία SB που εισήχθησαν αμέσως ανάντη του κωδικονίου έναρξης Pkdl και μια μετάλλαξη σιωπηρού σημείου του EcoRI (RI*) που εισήχθη στο εξόνιο (ex) 10. Ο φορέας ανασυνδυασμού BAC περιέχει μια αρχή αντιγραφής R6Ky, ένα γονίδιο ανθεκτικό στην αμπικιλλίνη, ένα γονίδιο SacB, ένα γονίδιο RecA και μια μοναδική θέση κλωνοποίησης Smal στην οποία κλωνοποιήθηκαν τα ρυθμιστικά στοιχεία "SB" (ή η μετάλλαξη σιωπηλού σημείου του εξονίου 10). με πλευρικούς βραχίονες γονιδίου Pkd1. Ο φορέας ανασυνδυασμού BAC ηλεκτροδιατρήθηκε σε κύτταρα Ε, coli (DH10B) που περιείχαν τον άγριο τύπο Pkdl-BAC και μετά από επιλογή έλαβε χώρα ένα πρώτο γεγονός ομόλογου ανασυνδυασμού μέσω ενός από τους δύο βραχίονες Pkd1 για να παραχθούν συνολοκληρώματα BAC. Ο φορέας ανασυνδυασμού και οι διπλές περιοχές Pkdl των συνολοκληρώσεων BAC εξαλείφθηκαν σε ένα δεύτερο στάδιο επιλογής. Τα επιλυμένα Pkdl-BAC μπορούν είτε να επανέλθουν σε άγριο τύπο είτε να περιλαμβάνουν την προβλεπόμενη τροποποίηση. Ο επακόλουθος ομόλογος ανασυνδυασμός στο πρόσφατα τροποποιημένο BAC μπορεί στη συνέχεια να εισαχθεί. (β) (inomc DNA ot SBPkd l-etransgenic mxce was anakZed bv Sou thern blot.AVicToiD1ecLon γραμμικοποιημένων θραυσμάτων προκάλεσε την εισαγωγή του διαγονιδίου σε ένα κεφάλι με κεφάλι. Το 5' άκρο αναλύθηκε με πέψη του γονιδιωματικού DNA με HindIII και υβριδοποιήθηκε με το ειδικό διαγονιδιακό ανιχνευτή SB (αριστερό πλαίσιο). Και οι τρεις διαγονιδιακές σειρές ποντικών παρήγαγαν το αναμενόμενο 10 .9-ζώνη kb για εισαγωγή από την κεφαλή στην ουρά· η πρόσθετη ζώνη που παρατηρείται στη γραμμή 39 πιθανότατα αντιπροσωπεύει ένα θραύσμα σύνδεσης μεταξύ του SB και του γονιδιώματος του ποντικού. Η εσωτερική ακεραιότητα του διαγονιδίου παρακολουθήθηκε με αρκετές πέψεις με ένζυμα περιορισμού και Εμφανίζεται ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα γονιδιωματικού DNA που έχει υποστεί πέψη με EcoRI και υβριδοποιήθηκε με τον ανιχνευτή Pkdl (εξόνιο 7-15) (μεσαίο πλαίσιο).

Αυτό το SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1Ο κλώνος )-BAC τροποποιήθηκε με δύο διαδοχικά συμβάντα ομόλογου ανασυνδυασμού σε Ε. coli. Το γονίδιο PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) επισημάνθηκε στο εξόνιο 10 με υποκατάσταση ενός νουκλεοτιδίου (G έως Α) για τη δημιουργία μιας νέας θέσης EcoRI στη θέση 2355 στον χάρτη cDNA. Αυτή η μετάλλαξη σιωπηλού σημείου δημιουργήθηκε για να διακρίνει το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο και μεταγραφή του BAC από αυτό ενδογενούς προέλευσης. Επιπλέον, έχουμε αντικαταστήσει τα 5'ρυθμιστικά στοιχεία του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-BAC γονίδιο αξιοποιώντας προηγουμένως αναγνωρισμένα «SB» ειδικά για το νεφρικό επιθήλιο στοιχεία από το κατασκεύασμα-trans-γονίδιο SBM (συνδεδεμένο με c-Myc) ή SBF που συνδέεται με c-fos) για περιορισμό της έκφρασης στους νεφρούς (36, 38) (Εικ. 2α).

Αυτό το νέο SBPkdlrAG-BAC χωνεύτηκε με NotL, μια μοναδική θέση που βρίσκεται αμέσως ανάντη των στοιχείων SB, και ClaI μέσα στο γονιδιακό σώμα Tsc2, περικόπτοντας τα ρυθμιστικά στοιχεία Tsc2 και το 5' του γονιδιακού σώματος για να διασφαλιστεί η έλλειψη T'sc2 εξωγενής έκφραση σε όλους τους ιστούς και για την αφαίρεση των προκαρυωτικών αλληλουχιών φορέων BAC (Εικ. 1 και 2). Αυτό το γραμμικό θραύσμα 70-kb NotI-ClaI απομονώθηκε, καθαρίστηκε. και ποσοτικοποιήθηκε για μικροέγχυση ωαρίων (36).

ΟΦΕΛΗ CISTANCHE: ΘΕΡΑΠΕΙΑ ΝΕΦΡΩΝ ΠΑΘΗΣΕΩΝ

Παραγωγή και ανάλυση διαγονιδιακών ποντικών SBPkdl-ac. Τέσσερις διαγονιδιακοί ιδρυτές που φέρουν πολλά αντίγραφα του διαγονιδίου SBPkdlrAc ανέπτυξαν με συνέπεια PKD. Από τα τέσσερα SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)Ποντίκια ιδρυτών RAC που προσδιορίστηκαν με ανάλυση Southern, τρία SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) Οι διαγονιδιακές γραμμές TAG δημιουργήθηκαν με δύο έως εννέα αντίγραφα του διαγονιδίου (Εικ. 2b). Ο χαρακτηρισμός της ακεραιότητας του διαγονιδίου σε αυτές τις γραμμές παρακολουθήθηκε με 5', εσωτερικούς και 3' ανιχνευτές όπως φαίνεται από αντιπροσωπευτικά παραδείγματα στο Σχήμα 2β. Οι διαγονιδιακές γραμμές αποκάλυψαν με τον ανιχνευτή 5'"SB" μια ζώνη στα 10,9 kb σύμφωνα με το SBPkdlrAc trans-γονίδιο που ενσωματώνεται σε προσανατολισμό από το κεφάλι προς την ουρά και αποκαλύπτεται με τον ανιχνευτή 3' μια ζώνη 7,{12}}kb (Εικ.2b). Επιπλέον, ο εσωτερικός ανιχνευτής ανίχνευσε τη ζώνη 9.4-kb ενδογενούς PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) καθώς και τις ζώνες 6.9-kb και 2.5-kb του διαγονιδίου. λόγω της θέσης εισαγωγής EcoRI στο εξόνιο 10 (Εικ. 2β). Αυτά τα ποντίκια περιείχαν πλήρη αντίγραφα του διαγονιδίου με βάση την ανάλυση γονιδιωματικής αλληλοεπικαλυπτόμενης δομής.

PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) κέρδος λειτουργίας σε ενήλικα διαγονιδιακά ποντίκια SBPkdl-Ac. Έκφραση του SBPkdl-AG. διαγονίδιο και PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο διερευνήθηκε σε διάφορα όργανα. Η ποσοτικοποίηση των επιπέδων μεταγραφής από το διαγονίδιο και/ή το ενδογενές γονίδιο διεξήχθη με ανάλυση στυπώματος Northern (Εικ. 3a). Όπως αναμενόταν, οι μεταγραφές διαγονιδίου και ενδογενούς γονιδίου ήταν παρόμοιου μήκους (14,2 kb). Με βάση την έκφραση GAPDH ελέγχου, οι νεφροί από όλες τις γραμμές ποντικού SBPkd 1 A είχαν σταθερά αυξημένη έκφραση μεταγραφής σε σύγκριση με την κανονική PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) επίπεδα σε νεφρούς ενηλίκων (n=3) παρόμοιας ηλικίας. Το νεφρικό διαγονίδιο και η ενδογενής έκφραση για τις διαφορετικές διαγονιδιακές σειρές εμφάνισαν ένα εύρος από 2- έως 15-φορές πάνω από το νεφρικό ενδογενές PKD1 ελέγχου(πολυκυστική νεφρική νόσος 1)επίπεδα (Εικ.3α). Ιδιαίτερα, η διαγονιδιακή γραμμή39(n=4) έδειξε υψηλότερη PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) επίπεδα από τις γραμμές 3 (n=3) και 41 (n=4). Επιπλέον, PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) τα επίπεδα έκφρασης που μετρήθηκαν με ανάλυση στυπώματος Northern συσχετίστηκαν με εκείνα που ελήφθησαν με PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιώντας εκκινητές στα εξόνια 1 και 2 (Εικ. 3b).

ΣΧ.3.Ανάλυση νεφρικής έκφρασης ποντικών SBPkdlrA. (α) Ανάλυση έκφρασης μεταγραφών Pkd1 ενδογενούς(ενδο) και SBPkdlrA διαγονιδίου (Tg) σε νεφρούς από τρεις διαγονιδιακές σειρές με στύπωμα Northern. Δύο δείγματα από κάθε διαγονιδιακή γραμμή, 3, 39 και 41 συγκρίθηκαν με το ενδογενές νεφρικό μεταγράφημα Pkdl ποντικών φυσιολογικού μάρτυρα ταιριάσματος ηλικίας από το ίδιο γενετικό υπόβαθρο (C5BI 6I ×CBA/DE, δείγματα RNA νεφρού ελήφθησαν από διαγονιδιακά ποντίκια πριν από νεφρική νόσο τελικού σταδίου. Οι μεταγραφές από το ενδο και το Tg έχουν μήκος -14.2 kb. Παρατηρήθηκε συστηματική υπερέκφραση των μεταγραφών στους νεφρούς όλων των διαγονιδιακών ποντικών σε σχέση με τους μη διαγονιδιακούς μάρτυρες. Το GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος Η ποσοτικοποίηση της νεφρικής έκφρασης σε αυτά τα διαγονιδιακά ποντίκια κυμαινόταν από 2- έως 15-πλάσια σε σχέση με τα ενδογενή επίπεδα Pkd1 από ποντίκια ελέγχου ορίστηκαν αυθαίρετα στο 1. (β) Η σχηματική αναπαράσταση του διαγονιδίου SBPkdl- και των εκκινητών ήταν χρησιμοποιήθηκε για την ενίσχυση του συνολικού Pkdl, συμπεριλαμβανομένου του ενδογενούς και διαγονιδίου (εξόνιο 1 και εξόνιο 2) και μόνο Pkd1 διαγονίδιο (Β. εξόνιο 2) με PCR πραγματικού χρόνου και ημιποσοτική RT-PCR, η ανάλυση RT-PCR της έκφρασης διαγονιδίου SBPkdlAc ποσοτικοποιήθηκε σε νεφρική και επιπλέον νεφρικούς ιστούς. Δείχνεται μια αντιπροσωπευτική ημιποσοτική αξιολόγηση του διαγονιδίου SBPkdl.Ac (Tg) που περιλαμβάνει ένα δείγμα νεφρικού ιστού (Κ) από έναν ποντικό και από τις τρεις διαγονιδιακές σειρές (3. 39 και 41) και εξωνεφρικούς ιστούς. H, καρδιά; Lu, πνεύμονας; Β. εγκέφαλος; Li, συκώτι; και S. spleen από ένα ποντίκι της γραμμής 39. Η έκφραση του διαγονιδίου είναι εύκολα ανιχνεύσιμη στους νεφρούς όλων των διαγονιδιακών ποντικών, ενώ είναι χαμηλή έως μη ανιχνεύσιμη σε εξωνεφρικούς ιστούς. Η έκφραση από το διαγονίδιο SBPkd1rAc παρήγαγε ένα συγκεκριμένο αμπλικόνιο 307-bp, ενώ ο εσωτερικός έλεγχος S16 παρήγαγε ένα ενισχυτικό 102-bp. Μ,100-δείκτης bp; Η, Ο, αρνητικός έλεγχος για ενίσχυση PCR. (γ) Ανάλυση έκφρασης PCR σε πραγματικό χρόνο του SBPkdlr. Το διαγονίδιο προσδιορίστηκε από πολλά ανεξάρτητα ποντίκια. Το διαγονίδιο SBPkdl.Ac από τις τρεις διαγονιδιακές γραμμές ποντικού 3 (n=5), 39(n =7) και 41 (n=5) έδειξε ότι οι γραμμές 39 και 41 είχαν το υψηλότερο επίπεδα νεφρικής έκφρασης. Η έκφραση του διαγονιδίου SBPkdlrAc σε εξωνεφρικούς ιστούς από ποντίκια (n=3) από τις τρεις διαγονιδιακές σειρές αξιολογήθηκε με PCR πραγματικού χρόνου. Σε σύγκριση με τους νεφρούς κάθε διαγονιδιακής γραμμής (100 τοις εκατό ), η ανάλυση των εξωνεφρικών ιστών έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης διαγονιδίων ήταν σταθερά χαμηλότερα κατά 10- έως 1,000-πλάσια στον εγκέφαλο, την καρδιά, το ήπαρ, το πάγκρεας , σπλήνα και πνεύμονα. (δ) Έκφραση του ενδογενούς γονιδίου c-mc στους νεφρούς SBPkdl.Ac με ημιποσοτική RT-PCR. Μια σχηματική απεικόνιση δείχνει τους εκκινητές που χρησιμοποιούνται για την ενίσχυση του c-Myc. Όπως αναμενόταν, η έκφραση του c-Myc είναι ελάχιστη στους μη διαγονιδιακούς νεφρούς ενηλίκων (μάρτυρες). Αντίθετα, αυξημένη έκφραση του c-Mye ανιχνεύεται σε όλους τους νεφρούς SBPkdlrAc ενηλίκων των τριών γραμμών, όπως παρατηρείται στους διαγονιδιακούς νεφρούς SBM ενηλίκων που χρησιμοποιούνται ως θετικός έλεγχος. Το αμπλικόνιο του c-Myc ήταν 250 bp. το αμπλικόνιο του S16, ενός εσωτερικού ελέγχου, ήταν δείκτης 102 bp.M,100-bp.

Η ποσοτικοποίηση των επιπέδων έκφρασης διαγονιδίου συγκεκριμένα πραγματοποιήθηκε με PCR πραγματικού χρόνου και ημιποσοτική RT-PCR στις τρεις διαγονιδιακές σειρές σε ενήλικη ηλικία χρησιμοποιώντας εκκινητές στην 5'μη μεταφρασμένη περιοχή (Β, -προαγωγέας σφαιρίνης) και στο εξόνιο 2 της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)(Εικ.3β). Το SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) Η έκφραση RAC σε διαγονιδιακά ποντίκια συγκρίθηκε με το προϊόν γονιδίου ριβοσωμικής πρωτεΐνης S16 ως εσωτερικό πρότυπο. Οι συνθήκες που χρησιμοποιήθηκαν για την ημιποσοτική ενίσχυση RT-PCR ήταν εντός του γραμμικού εύρους. Η διαγονιδιακή έκφραση με PCR πραγματικού χρόνου και ημιποσοτική RT-PCR έδειξε σταθερά και συγκεκριμένα την υψηλότερη έκφραση στο νεφρό από όλες τις διαγονιδιακές σειρές σε σχέση με άλλα όργανα (Εικ. 3b και c). Τα επίπεδα νεφρικής έκφρασης για ένα μεμονωμένο δείγμα ήταν αναπαραγώγιμα με οποιαδήποτε από τις τεχνικές ανίχνευσης που χρησιμοποιήθηκαν. Τα υψηλότερα επίπεδα PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) μετρήθηκε η διαγονιδιακή νεφρική έκφραση για τις γραμμές 39 και 41. Για να παρακολουθηθεί εάν η αυξημένη έκφραση PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) προήλθε από το διαγονίδιο ή το ενδογενές γονίδιο, η ίδια ομάδα ποντικών από τις τρεις διαγονιδιακές γραμμές συγκρίθηκε για νεφρική PKD1 ( πολυκυστική νεφρική νόσος 1) έκφραση διαγονιδίου και για νεφρική PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) συνολική (διαγονιδιακή και ενδογενής) έκφραση με PCR σε πραγματικό χρόνο. Με ενδιαφέρο. οι γραμμές 39 και 41 σε σχέση με τη γραμμή 3 έδειξαν ότι η αυξημένη PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) η διαγονιδιακή νεφρική έκφραση ήταν παρόμοια ή μεγαλύτερη από αυτήν της ολικής νεφρικής έκφρασης PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1), υποδεικνύοντας το διαγονίδιο ως ειδικά υπεύθυνο για αυτήν την επαγόμενη έκφραση. Σε διάφορα όργανα (συμπεριλαμβανομένης της καρδιάς, του πνεύμονα, του εγκεφάλου, του ήπατος, του παγκρέατος και του σπλήνα), το SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) ΠΓΣ; Το διαγονίδιο έδειξε πολύ ασθενή έκφραση περιστασιακά ανιχνευμένη σε σπλήνα και πνεύμονα, με μικρή έως μη ανιχνεύσιμη έκφραση σε άλλα όργανα (Εικ. 3β). Η ποσοτικοποίηση με PCR πραγματικού χρόνου έδειξε 10-έως 1,000-πλάσιο χαμηλότερο επίπεδο έκφρασης διαγονιδίου σε εξωνεφρικούς ιστούς σε σχέση με την έκφραση των νεφρών (Εικ. 3γ). Τα ρυθμιστικά στοιχεία "SB" του διαγονιδίου SBPkdlrAc προσέδωσαν προτιμησιακή νεφρική έκφραση. Αυτή η συγκεκριμένη κατανομή οργάνων προσδιορίστηκε επίσης όταν χρησιμοποιήθηκε σε διαγονίδια που συνδέονται με c-Myc (SBM) και c-fos (SBF) (36, 38). c-Mye, ένας μεταγενέστερος τελεστής της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) μονοπάτια σηματοδότησης στο SBPkdlrAc: ποντίκια. Για να κατανοήσουμε τον ενδοκυτταρικό παθογενετικό μηχανισμό των διαγονιδιακών ποντικών SBPkdlrAc, προσπαθήσαμε στη συνέχεια να παρακολουθήσουμε το επίπεδο νεφρικής έκφρασης του c-Myc με βάση την προηγούμενη παρατήρησή μας για την απορρύθμιση του c-Myc στους ανθρώπινους νεφρούς ADPKD (αυτοσωματική κυρίαρχη πολυκυστική νεφρική νόσος) (22). Η ανάλυση των νεφρών πραγματοποιήθηκε και από τις τρεις διαγονιδιακές γραμμές 3(n=4).39(n{=7) και 41 (n =4) ​​καθώς και από τους ελέγχους (n {{9 }}). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3δ, υπάρχει μια ουσιαστική έκφραση του ενδογενούς c-Mye που προκαλείται σε ποντικούς SBPkdlrAa σε σχέση με ποντίκια ελέγχου παρόμοιας ηλικίας. Είναι ενδιαφέρον ότι το επίπεδο έκφρασης c-Myc σε ορισμένους νεφρούς SBPkdlrAG, ιδιαίτερα τη γραμμή 39, έφτασε σε επίπεδα συγκρίσιμα με αυτά που παρατηρήθηκαν στο διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού PKD SBM που παράγεται από νεφρική έκφραση c-Myc.

Νεφρικές ανωμαλίες στο SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) ARC mice similar to PKD. To characterize the phenotype caused by the transgene expression, gross and histologic examinations were undertaken on transgenic kidneys. Adult kidneys from all transgenic lines were affected bilaterally. Kidneys contained numerous cortical cysts that varied from microscopic to macroscopic in size (Fig.4a and b). SBPkdlrAc. kidneys were pale, a typical finding in PKD. On histologic examination, all transgenic founder mice and progenies (n = 25;n>6 για κάθε γραμμή) ανέπτυξαν πολλαπλές σωληναριακές (Τ) και σπειραματικές κύστεις (G) (Εικ. 4δ, στ και ζ). Παρατηρήθηκαν κύστεις σε σωληνάρια από τις περιοχές του φλοιού και του μυελού καθώς και σωλήνες συλλογής από τη θηλή (Εικ. 4δ και ε). Τα διαγονιδιακά ποντίκια εμφάνισαν σωληναριακή υπερπλασία του επιθηλίου (κεφαλή βέλους) που αφορούσε τόσο κυστικά όσο και μη κυστικά σωληνάρια και συχνή υπερτροφία (Εικ. 4g και h). αλλά η σοβαρότητα διέφερε μεταξύ μεμονωμένων ποντικών. Διάμεση ίνωση (F). Περιαγγειακές λεμφικές διηθήσεις και πρωτεϊνικοί γύψοι (Ρ) παρατηρήθηκαν συχνά (Εικ. 4δ και ε)

Εικ. 4

Για ακριβέστερο ορισμό της θέσης εντοπισμού της αυξημένης PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)έκφραση στους νεφρούς, πραγματοποιήσαμε in situ υβριδισμό χρησιμοποιώντας τον ανιχνευτή εξονίου 36-45 που χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως(16). Το σήμα υβριδισμού εντοπίστηκε ειδικά στα επιθηλιακά κύτταρα που καλύπτουν την κύστη και τα υπερπλαστικά σωληνάρια καθώς και τις σπειραματικές κύστεις. Επιπρόσθετα, παρατηρήθηκε κάποιο σήμα πάνω από το επιθήλιο των μη κυστικών ή ελαφρώς διεσταλμένων σωληναρίων, που πιθανώς εντοπίζουν σωληνάρια που προορίζονται να υποστούν μελλοντικές κυστικές αλλαγές (Εικ. 4i και j). Η νεφρική ιστολογική ανάλυση πραγματοποιήθηκε επίσης σε διαγονιδιακά ποντίκια κατά τη γέννηση (n=8), μεταγεννητική ημέρα 10 (P10) (n=3), P20 (n=5), P35 (n{ {10}}), και P45(n{= 3) σε σύγκριση με αρνητικά θηλυκά της ίδιας ηλικιακής ομάδας (n =2 έως 4). Είναι ενδιαφέρον ότι όλα τα νεογέννητα διαγονιδιακά ποντίκια εμφάνισαν σωληναριακή και σπειραματική διάταση σε σχέση με μάρτυρες αρνητικών νεογνών (Εικ. 4k και 1), υποδεικνύοντας ότι οι νεφρικές ανωμαλίες ξεκίνησαν στη μήτρα όπως παρατηρήθηκαν σε ποντικούς SBM και σε ADPKD (αυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρών) ασθενείς. Η σωληναριακή και σπειραματική διάταση αυξήθηκε σε μέγεθος και αριθμό με την προοδευτική ηλικία. Μέχρι το P35, τα διαγονιδιακά ποντίκια εμφάνισαν πιο σοβαρή υπερπλασία και ενδείξεις σπειραματοσκλήρωσης Αλλοιωμένες νεφρικές φυσιολογικές λειτουργίες σε ποντίκια SBPkdlrsc. Οι νεφρικές φυσιολογικές λειτουργίες όλων των διαγονιδιακών ποντικών εμφάνισαν χαρακτηριστικά παρόμοια με την PKD, ενώ τα μη διαγονιδιακά νεογνά δεν ανέπτυξαν ποτέ τη νόσο. Μέσα σε λίγους μήνες μετά τη γέννηση, τα προσβεβλημένα ζώα ανέπτυξαν χρόνια νεφρική ανεπάρκεια. Αυτά τα ζώα παρακολουθήθηκαν για νεφρικές λειτουργικές παραμέτρους με μέτρηση των επιπέδων ορού και ούρων. άζωτο ουρίας αίματος (BUN) και κρεατινίνη, ωσμωτικότητα ούρων, πρωτεΐνες ούρων και απέκκριση ιόντων (Πίνακας 1). Όλα τα ποντίκια από τις τρεις σειρές σε σύγκριση με τους ελέγχους εμφάνισαν ελαττώματα συγκέντρωσης, ένα κοινό εύρημα στην ADPKD (αυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρών). και κατά συνέπεια έδειξε μειωμένο BUN ούρων. συγκεντρώσεις κρεατινίνης, πρωτεΐνης και σιδήρου. Διαγονιδιακό SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1Οι ιδρυτές του rAc. και οι απόγονοι (n=6) από κάθε γραμμή παρακολουθήθηκαν ποιοτικά για πρωτεϊνουρία σε δείγματα ούρων με SDS-PAGE (Εικ. 5). Τα ποντίκια ηλικίας άνω των 2 μηνών εμφάνισαν μη εκλεκτική πρωτεϊνουρία που προχωρούσε με την ηλικία. Επιπλέον, τα επίπεδα του BUN ορού και της κρεατινίνης ορού ήταν αυξημένα, αποκαλύπτοντας νεφρική ανεπάρκεια (Πίνακας 2). Επειδή η χρόνια νεφρική ανεπάρκεια οδηγεί συνήθως σε αλλαγές στις αιματολογικές παραμέτρους, αυτές εξετάστηκαν σε διαγονιδιακά ποντίκια SBPkdlAc ηλικίας 3 έως 14 μηνών (Πίνακας 2). Αυτά τα διαγονιδιακά ποντίκια ήταν αναιμικά, όπως αποδεικνύεται από τον σημαντικά μειωμένο αριθμό ερυθρών αιμοσφαιρίων, με την αιμοσφαιρίνη και τον αιματοκρίτη να φτάνουν τα μισά από τα φυσιολογικά επίπεδα. Άλλες παράμετροι των ερυθρών αιμοσφαιρίων, όπως το ποσοστό των δικτυοερυθροκυττάρων, δεν επηρεάστηκαν, όπως αναμενόταν όταν προκλήθηκαν από νεφρική ανεπάρκεια. Αυτά τα ζώα πέθαναν σταθερά από νεφρική ανεπάρκεια σε ηλικία -5.9± 2,8 μηνών (n {{12} }) για τη διαγονιδιακή γραμμή 39 και σε μεταγενέστερες ηλικίες,-14,6± 3,1 μήνες (n= 20) και-11.7 ±6,5 μήνες (n {= 7) , για τις γραμμές 3 και 41, αντίστοιχα.

ΕΠΙΔΡΑΣΕΙΣ ΤΟΥ CISTANCHE: ΑΝΤΙΜΕΤΩΠΙΣΗ ΝΕΦΡΩΝ ΠΑΘΗΣΕΩΝ

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Εδώ αναφέρουμε την απομόνωση και τον χαρακτηρισμό ενός ποντικού PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-BAC. Αυτό το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) επισημάνθηκε το γονίδιο και αντικαταστάθηκαν ρυθμιστικά στοιχεία για να στοχεύσουν την έκφραση ειδικά στους νεφρούς από δύο διαδοχικά συμβάντα ομόλογου ανασυνδυασμού. Τα διαγονιδιακά ποντίκια που παρήχθησαν με αυτό το νέο γονίδιο SBPkdlrAG εμφάνισαν 2-έως 15-πλάσια αύξηση στην έκφραση της PKD1 (πολυκυστική νόσος 1) και ανέπτυξαν αναπαραγώγιμα πρώιμες μορφολογικές αλλοιώσεις των νεφρών τυπικές της PKD. Η νεφρική ανεπάρκεια είναι εμφανής στη μέση ηλικία και τα ποντίκια πεθαίνουν πρόωρα από νεφρική ανεπάρκεια. Τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν επίσης ότι ο μηχανισμός υπερέκφρασης του PKD1 (νόσος πολυκυστικών νεφρών 1) που είναι υπεύθυνος για αυτόν τον φαινότυπο διαμεσολαβείται από τη σηματοδοτική ενεργοποίηση του c-Myc in vivo. Αυτή η μελέτη καταδεικνύει ότι η αύξηση της λειτουργίας PKD1 ποντικού (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) στους νεφρούς είναι επαρκής για την παραγωγή ενός νεφρικού φαινότυπου PKD.

Από το μυϊκό PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) το γονίδιο δεν διπλασιάζεται όπως συμβαίνει στους ανθρώπους (27), εντοπίσαμε και απομονώσαμε άμεσα έναν κλώνο BAC που περιείχε ολόκληρο το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο. Πλήρης χαρακτηρισμός του ποντικού PKD1 129/Sv (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-BAC. Η έμμεση σύγκριση με δύο άλλα συγγενή στελέχη ποντικών επιβεβαίωσε την ακεραιότητα του τόπου PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1). Το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1Το )-BACinsert περιείχε-37 έως 39 kb ανοδικές και κατάντη αλληλουχίες από το γονίδιο PKD1 (νόσος πολυκυστικών νεφρών 1). Η ανάλυσή μας έδειξε ότι το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) το γονίδιο σε αυτό το BAC ήταν ένας καλόπιστος τόπος άγριου τύπου ποντικού που θα μπορούσε να χρησιμεύσει για περαιτέρω μελέτες.

Αν και υπάρχουν ισχυρές ενδείξεις ότι ο σχηματισμός κύστης στην ADPKD (αυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρών) μπορεί να προκύψει από απώλεια ετεροζυγωτίας μετά από σωματική αδρανοποίηση της φυσιολογικής PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) αλληλόμορφο (3.21.32), υπάρχουν επίσης ενδεικτικά στοιχεία για παρατεταμένη ή ακόμη και αυξημένη έκφραση πολυκυστίνης-1 στο κυστικό σωληναριακό επιθήλιο (22.29). Η τελευταία παρατήρηση εγείρει το ερώτημα εάν η υπερέκφραση της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) αυτή καθεαυτή είναι μια επαρκής κοντινή αιτία κυστεογένεσης. Σε διαγονιδιακά ποντίκια που φέρουν την ανθρώπινη PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1), TSC2. RAB26. Τα γονίδια NTHL1 και SLC9A3R2, μόνο μια μειοψηφία ποντικών ανέπτυξε κύστεις και κανένα δεν είχε ανιχνεύσιμη έκφραση διαγονιδίου στην ενήλικη ζωή παρά τα 30 αντίγραφα του διαγονιδίου (31). Σε αυτά τα διαγονιδιακά ποντίκια. ήταν δύσκολο να καθοριστεί ένας σαφής ρόλος για την υπερέκφραση της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) στην κυστογένεση. Το μοντέλο μας διαφέρει, καθώς δύο έως εννέα αντίγραφα άγριου τύπου του PKD1 (πολυκυστική νόσος 1) μόνο, χωρίς συνεχόμενα γονίδια, ενσωματώθηκαν σε διαγονιδιακά ποντίκια. Δεδομένου ότι το γονίδιο PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) έχει βασικές λειτουργίες σε διάφορα όργανα ή ιστούς, όπως περιγράφεται για πολλά ποντίκια με κατάλυση του γονιδίου PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1), μια συστηματική υπερέκφραση της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) θα μπορούσε να οδηγήσει σε πρόσθετα συγχυτικά αποτελέσματα. Κατά συνέπεια, έχουμε ασχοληθεί με το ρόλο του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) κέρδος λειτουργίας χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση που στοχεύει την PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) ειδικά στους νεφρούς. Με ομόλογο ανασυνδυασμό, έχουμε πρώτα αντικαταστήσει την ανοδική ρυθμιστική περιοχή PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) με τα νεφρικά περιορισμένα ρυθμιστικά στοιχεία "SB", αποτρέποντας έτσι τη μειωμένη γονιδιακή έκφραση που παρατηρείται φυσιολογικά για την PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)στην ενήλικη ζωή καθώς και πιθανή δευτερεύουσα ρύθμιση βρόχου ανάδρασης(36,38). Δεύτερον, σημειώσαμε το PKD1 ποντικού (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) διαγονίδιο (Pkdlr) με μετάλλαξη σιωπηλού σημείου στο εξόνιο 10 αλλά δεν εισήγαγε ετικέτα επιτόπου για να διασφαλιστεί ότι θα παραχθεί μια πλήρως λειτουργική πρωτεΐνη "άγριου τύπου" με διατηρημένη δομή και ακεραιότητα. Από αυτό το τροποποιημένο BAC, ένα θραύσμα SBPkdlrAG καθαρίστηκε μακριά από το γονίδιο Tsc2 και τον φορέα BAC για να αποτραπεί η παρεμβολή από το γονίδιο Tsc2, το οποίο μπορεί επίσης να προκαλέσει έναν κυστικό φαινότυπο (8.20.28). καθώς και για την αποφυγή της ανασταλτικής δράσης των προκαρυωτικών αλληλουχιών(5).

Τέσσερα διαφορετικά SBPkdlrActransgenic founder ποντίκια και τρεις ανεξάρτητες σειρές παρήχθησαν με ειδική νεφρική PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-ενισχυμένη έκφραση. Ιδιαίτερα εντυπωσιακή είναι η πλήρης διείσδυση του φαινοτύπου σε αυτά τα διαγονιδιακά ποντίκια. Το SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) Οι γραμμές ιδρυτή rAc και ποντικών μοιράζονταν πολλά κοινά φυσιοπαθολογικά χαρακτηριστικά με την ADPKD (αυτοσωματική κυρίαρχη πολυκυστική νόσος των νεφρών). Αυτές περιλαμβάνουν την ανάπτυξη κύστεων στο φλοιό, το μυελό και τα σπειράματα μαζί με επιθηλιακή υπερπλασία, διάμεση ίνωση και εστιακή διάμεση φλεγμονή.

Επειδή ο φαινότυπος PKD παρατηρήθηκε σταθερά σε όλα τα διαφορετικά διαγονιδιακά ποντίκια-ιδρυτές και η ενσωμάτωση διαγονιδίου στο γονιδίωμα του ποντικού είναι ένα τυχαίο φαινόμενο, ο φαινότυπος δεν μπορεί να προκύψει από το φαινόμενο της χρωμοσωμικής θέσης αλλά μόνο από την αυξημένη PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)έκφραση. Πράγματι, η έκφραση του διαγονιδίου PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) σε όλες τις γραμμές αποδείχθηκε ότι είναι νεφρική περιορισμένη. όπως παρατηρήθηκε προηγουμένως για άλλα διαγονίδια που ρυθμίζονται από τα στοιχεία "SB" (36,38). Επιπλέον, αυτή η αυξημένη έκφραση PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) προκλήθηκε από το διαγονίδιο και όχι από ένα έμμεσο ενδογενές PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) ενεργοποίηση. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας παρέχουν σαφή στοιχεία ότι το κέρδος της λειτουργίας μιας λειτουργικής PKD1 άγριου τύπου (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) μπορεί να προκαλέσει πολλαπλές νεφρικές κύστεις. Είναι σημαντικό ότι αυτές οι πρακτικές SBPKD1 (πολυκυστική νόσος των νεφρών 1) αποτελούν το πρώτο μοντέλο ποντικού που δημιουργήθηκε από τη μοναδική υπερέκφραση του ορθολόγου ποντικού της ανθρώπινης PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονίδιο.

Τα ποντίκια SBPkdl-Ac αποδεικνύουν ότι το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) η υπερέκφραση είναι ένας πρωταρχικός παθογενετικός μηχανισμός της νεφρικής κυστογένεσης. Είναι σημαντικό ότι τα υψηλότερα επίπεδα διαγονιδιακής έκφρασης στους νεφρούς φάνηκε να συσχετίζονται με την εξέλιξη και τη σοβαρότητα του φαινοτύπου. Βρήκαμε επίσης ότι η υπερέκφραση της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) στην ανάπτυξη της SBPKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)-Ο φαινότυπος Ac είναι πιθανό να σηματοδοτήσει την ενεργοποίηση του c-Myc in vivo. Πιθανότατα, αυτή η ενεργοποίηση θα μπορούσε ακόμη και να είναι άμεση μέσω της ουράς πολυκυστίνης-1 C-τερματικής που υφίσταται πρωτεολυτική διάσπαση και πυρηνική μετατόπιση (7), δεδομένου ότι η ενισχυμένη νεφρική έκφραση του c-Myc σε ενήλικα ποντίκια αποδείχθηκε ότι επάγει PKD, θα ήταν εξαιρετικά συνεπές να υποστηρίξει το c-Myc ως κύριο μεταγενέστερο παράγοντα του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) μονοπάτια σηματοδότησης Αυτό το αποτέλεσμα συσχετίστηκε επίσης με τα προηγούμενα ευρήματά μας για αυξημένη έκφραση c-Myc σε νεφρούς όλων των ανθρώπινων ADPKD (αυτοσωματική κυρίαρχη πολυκυστική νόσος των νεφρών) που αναλύθηκαν (22), Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το c-Mye είναι ο κύριος μεσολαβητής της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)κυστογένεση.

Τα αποτελέσματά μας από το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)μοντέλο κέρδους λειτουργίας, μαζί με απλοανεπάρκεια και απώλεια λειτουργίας PKD1 ποντικού (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) υποδεικνύουν ότι οποιαδήποτε PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) η απορρύθμιση θα μπορούσε να οδηγήσει σε κυστογένεση (2.19.23-26.31.40). Σοβαρή ανισορροπία PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο 1) σε ποντίκια που προκαλείται από PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) η κατάλυση ή η διαγονιδιακή υπερέκφραση προκάλεσε πρώιμη έναρξη και ταχεία εξέλιξη των νεφρικών κύστεων και επηρέασε μεγάλο ποσοστό σωληναρίων. Αντίθετα, ένα ηπιότερο PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) ανισορροπία όπως η απλοανεπάρκεια οδήγησε σε βραδύτερη εξέλιξη της PKD με περισσότερες εστιακές κύστεις. Η φαινομενική παράδοξη ανάπτυξη ενός παρόμοιου φαινοτύπου μέσω της αντίθετης απορρύθμισης της πολυκυστίνης-1 θα μπορούσε να εξηγηθεί από το κοινό αποτέλεσμα, δηλαδή μια σχετική ανισορροπία συγκέντρωσης πρωτεΐνης που θα μπορούσε να αλλάξει τον σχηματισμό ή τη λειτουργία ενός ενεργού πολυπρωτεϊνικού συμπλέγματος πολυκυστίνης. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας και αυτά άλλων ερευνητών υποστηρίζουν ότι ο μηχανισμός σχηματισμού κύστης στην ADPKD (αυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρών) είναι πιθανό να προκύψει από τρεις παθογενετικούς μηχανισμούς: αύξηση της λειτουργίας, απώλεια λειτουργίας και επιδράσεις γονιδιακής δοσολογίας.

Το μυθιστόρημα SBPkdlrAc; τα ποντίκια αποτελούν ένα ισχυρό μοντέλο νεφρικής κυστεογένεσης που μπορεί να προσφέρει σημαντικές πληροφορίες για την παθοφυσιολογία της PKD, PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) μονοπάτια μεταγωγής σήματος και συνεργάτες που αλληλεπιδρούν. Η μελέτη αυτού του μοντέλου μπορεί επίσης να οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγικών για την αποκατάσταση της φυσιολογικής ισορροπίας πρωτεΐνης εντός της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) πολυμερές σύμπλοκο.

Το Cistanche αντιμετωπίζει τη νεφρική νόσο και βελτιώνει τη λειτουργία των νεφρών

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Blouin, MJ, H.Beachemin, A Wright, M E. De Paepe, M. Surrette, AM. Θαυμαστής. B. Nakamoto, CN. Ou, G. Stamatoyannopoulos, and M. Trudel. 2000. Γενετική διόρθωση της δρεπανοκυτταρικής αναιμίας: insights χρησιμοποιώντας διαγονιδιακά μοντέλα ποντικών Nat. Med.17-182.

2 Boulter, C, S.Mulroy, S. Webb, S. Fleming, K. Brindle και R. Sandford. 2001.Καρδιαγγειακά, σκελετικά. και νεφρικά ελαττώματα σε ποντικούς με στοχευμένη διαταραχή της PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1)γονίδιο. Proc. Natl.Acad. Sci. ΗΠΑ 9812174-12179.

3. Brasier, JL, and EPHenske.1997. Απώλεια τουπολυκυστική νεφρική νόσο(PKD1）περιοχή του χρωμοσώματος 1φp13 σε κύτταρο νεφρικής κύστης υποστηρίζει ένα μοντέλο απώλειας λειτουργίας για την παθογένεση της κύστης. J. Clin. Investig.99:194-199.

4. Burn, TC, TD Connars, W. R Dackowski, LR.Petry, TJVan Raay, JMMilhalland, M. Venet, G. Milker, R ML Hakim, G. ML Landes, KW Klinger, F. Qiam, LF. Onuchic, T. Watnick GGGermino, and N. A Doggett.1995.Anay sis of the genomic sequence for theαυτοσωμική επικρατούσα πολυκυστική νόσος των νεφρώνγονίδιο προβλέπει την παρουσία μιας επανάληψης πλούσιας σε λευκίνη. Hum Mol, Genet.4-575-58.

5. Chada, K, J.Magram, K. Raphael, G.Radice, E. Lacy, and F.Costantini. 1985. Ειδική έκφραση ενός ξένου γονιδίου σφαιρίνης στο ερυθροειδές κύτταρο διαγονιδιακών ποντικών Nature 337-380.

6. Chauvet, V, F.Qian, N. Bought, Y.Cai B.Phakdeekitacharoen, LF.Onuchi, T. Attie-Bitach, L. Guicharnaud, O.Devuryst, GG Germino και M.-C. Gubler.2002. Έκφραση μεταγραφών και πρωτεϊνών PKDI και PKD2 στο ανθρώπινο έμβρυο και κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής ανάπτυξης των νεφρών. Είμαι. J.Pathol. 160973-983.

7.Chaurvet,V, X Tian, ​​H.Husson, DH Grimm,T.Wang T.Hiesberger, P. Igarashi, AMBennett, O.braghimov-Beskrovnaya,S.Somlo, and MJ Caplan.2004 Τα μηχανικά ερεθίσματα προκαλούν διάσπαση και πυρηνικά μετατόπιση του pobeystin-1 C άκρο.J. Cin.Investig 114:1433-1443.

8. Cheadle, JP, MPReeve, JR Sampson, and DJ Kwiatkowski 2000. Μοριακή γενετική πρόοδος στην κονδυλώδη σκλήρυνση. Βουητό. Genet10797-114.

9. Κοινοπραξία, ΕΠΚΔ1993. Ταυτοποίηση και χαρακτηρισμός του γονιδίου της κονδυλώδους σκλήρυνσης στο χρωμόσωμα 16. Κύτταρο75:1305-1315.

10. Κοινοπραξία, ΕΠΚΔ1994.Θπολυκυστική νεφρική νόσος 1γονίδιο κωδικοποιεί όλα τα μεταγραφόμενα μέσα σε μια διπλή περιοχή στο χρωμόσωμα 16 του κυττάρου 7781-894.

11. Consortium, L PK D 1995.Πολυκυστική νεφρική νόσο: η πλήρης δομή του PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσο1) γονίδιο και η πρωτεΐνη του. Ce 81:289-298

12. Couillard, M.,R Guilkume, N Tanj, V.DAgati, and M. Trudel.2002. c-Myc-επαγόμενη απόπτωση σεπολυκυστική νεφρική νόσοείναι ανεξάρτητη από την αλληλεπίδραση FasL/Fas. Cancer Res. 62:2210-2214.

13. De Paepe, M Land M Trudy 1904, A model of human sickle cell glomerulopathy. Kidney Int. 46:1337-1345.

14. GengL,Y, Segal B.PekseL N.Den Y. Pei, F.Carone, H G. Rennke, AM Glücksman-Kuis, MCSchneider, M Ericsson, STReeders και J.Zhou. 1996. Αναγνώριση και εντοπισμός πολυεστέρα, το PKD1 (πολυκυστική νεφρική νόσος 1) γονιδιακό προϊόν. J. Clin. Ερευνήστε. 98-2674-2682