Μέρος 2: Κλινικά και Γενετικά Φάσματα Αυτοσωμικής Κυρίαρχης Σωληναριακής Διάμεσης Νεφρικής Νόσου λόγω Μεταλλάξεων σε UMOD και MUC1

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Κάντε κλικ εδώ για το Μέρος 1

Βαθμολογία UMOD και επίπεδα UMOD ούρων για καθοδήγηση γενετικού ελέγχου στο ADTKD

Η βαθμολογία επικυρώθηκε σε ασθενείς που ήταν θετικοί σε UMOD (n ¼ 124) και αρνητικοί σε UMOD (n ¼ 183) από το μητρώο ADTKD των ΗΠΑ, αποδίδοντας παρόμοια υψηλή ευαισθησία και χαμηλή εξειδίκευση για μεταλλάξεις UMOD χρησιμοποιώντας μια αποκοπή των 5 $ (ευαισθησία : 97,6 τοις εκατό , ειδικότητα: 16,4 τοις εκατό , NPV: 91.0 τοις εκατό , PPV: 44,2 τοις εκατό , τα δεδομένα δεν εμφανίζονται), καθιστώντας συνολικά το ADTKD-UMOD πολύ απίθανο για αποτελέσματα βαθμολογίας<5. we="" tested="" how="" the="" clinical="" score="" separated="" the="" 2="" most="" common="" etiologies="" of="" adtkd="" in="" a="" subset="" of="" patients="" with="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 125)="" and="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 80)="" from="" the="" us="" registry="" for="" which="" at="" least="" 5="" of="" the="" 8="" clinical="" items="" and/or="" urinary="" umod="" levels="" were="" available.="" the="" clinical="" umod-score="" alone="" separated="" the="" 2="" entities="" with="" an="" auc="" of="" 0.69="" (95%="" ci:="" 0.62–0.77,="" p="" ¼="" 0.037)="" (figure="" 7a,="" left="" panel).="" however,="" the="" specificity="" for="" umod="" increased="" considerably="" with="" higher="" umod-score="" values="" (for="" instance,="" a="" score="" of="" $8="" had="" a="" sensitivity="" of="" 48.8%,="" a="" specificity="" of="" 83.7%,="" and="" npv="" of="" 50.8%="" and="" a="" ppv="" of="" 81.3%="" for="" umod="" mutation)="" (supplementary="" table="" s5).="" only="" a="" few="" patients,="" mostly="" those="" with="" adtkd-muc1,="" had="" score="" results="" of=""><5 (figure="" 7a,="" right="">

Στη συνέχεια, διερευνήσαμε εάν η προσθήκη των επιπέδων UMOD στα ούρα στην κλινική βαθμολογία βελτίωσε την ικανότητά του να διακρίνει το ADTKD-UMOD από το ADTKD-MUC1. Με βάση τις κανονικοποιημένες τιμές UMOD ούρων στον πληθυσμό αναφοράς [(mg/g κρεατινίνης)/eGFR] (Εικόνα 5a, δεξιός πίνακας), εκχωρήσαμε, αντίστοιχα, þ1 και þ3 μονάδες για τις τιμές UMOD ούρων μεταξύ της διάμεσης και του 25ου εκατοστημόριου [( 0.14–0.23 mg/g κρεατινίνης)/eGFR] και κάτω από το 25ο εκατοστημόριο. Ομοίως, εκχωρήσαμε, αντίστοιχα, 1 και 3 βαθμούς για τις τιμές UMOD ούρων μεταξύ της διάμεσης και του 75ου εκατοστημόριου [(0.23–{0.35 mg/g κρεατινίνης)/eGFR] και πάνω από το 75ο εκατοστημόριο. Εφαρμοσμένη σε μια ομάδα 51 ασθενών με ADTKD-UMOD και 35 ασθενών με ADTKD-MUC1 για τους οποίους ήταν διαθέσιμα δεδομένα UMOD ούρων, αυτή η συνδυασμένη κλινική και βιοχημική βαθμολογία διαχώρισε το ADTKD-UMOD από το ADTKD-MUC1 με βελτιωμένη AUC {{28} .89.

Το Cistanche μπορεί να βοηθήσει στη λειτουργία των νεφρών

Εικόνα 5| Επεξεργασία UMOD σε αυτοσωμικό κυρίαρχο σωληναριστήριονεφρόνόσος(ADTKD)–UMOD και ADTKD-MUC1. (α) Η απέκκριση UMOD στα ούρα κανονικοποιημένη σε κρεατινίνη ούρων (creat) (αριστερό πλαίσιο) και κανονικοποιημένη σε κρεατινίνη ούρων και εκτιμώμενος ρυθμός σπειραματικής διήθησης (eGFR) (δεξιός πίνακας) σε ασθενείς με ADTKD-MUC1 και ADTKD-UMOD και πληθυσμό αναφοράς (μάρτυρες) . Υποδεικνύονται οι διάμεσες τιμές, το 25ο εκατοστημόριο και το 75ο εκατοστημόριο στον πληθυσμό αναφοράς (δεξιό πλαίσιο). Οι αριθμητικές τιμές (διάμεσοι και διατεταρτημοριακό εύρος) για το UMOD ούρων (uUMOD), το eGFR και το μέγεθος του δείγματος είναι κάτω από το γράφημα. Το ακραίο στοιχείο αφαιρέθηκε με το GraphPad (ROUT Q ¼ 1 τοις εκατό ), 1-ανάλυση διακύμανσης τρόπου P < 0.0001="" και="" για="" τα="" δύο="" γραφήματα="" και="" η="" δοκιμή="" πολλαπλής="" σύγκρισης="" του="" tukey="" εφαρμόστηκε="" χωρίς="" σημαντικό="" (="" ns)="" και="" ***p="">< 0,0001.="" (β)="" χρώση="" ανοσοφθορισμού="" για="" umod="" (πράσινη)="" και="" ρυθμιζόμενη="" με="" γλυκόζη="" πρωτεΐνη="" 78="" (grp78,="" κόκκινο)="" σε="" adtkd-muc1,="" adtkd-umod="" και="" φυσιολογικό="">νεφρό(NHK) βιοψία. Μπάρες ¼ 50 mm. DAPI, 40,6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη. Για να βελτιστοποιήσετε την προβολή αυτής της εικόνας, ανατρέξτε στην ηλεκτρονική έκδοση αυτού του άρθρου στη διεύθυνση www.kidney-international.org. CI: 0.82–{0.96, P < 0,001).="" η="" τιμή="" αποκοπής="" των="" $5="" εξακολουθεί="" να="" εμφανίζεται="" ως="" η="" βέλτιστη="" τιμή="" αποκοπής="" για="" τη="" διάκριση="" του="" adtkd-umod="" από="" το="" adtkd-muc1="" (δείκτης="" youden:="" 0,684)="" με="" ευαισθησία="" 94,1="" τοις="" εκατό="" ,="" ειδικότητα="" 74,3="" τοις="" εκατό="" ,="" npv="" 89,7="" τοις="" εκατό="" ,="" npv="" ,="" 89,7="" τοις="" εκατό="" .="" και="" ppv="" 84,2="" τοις="" εκατό="" για="" μετάλλαξη="" umod="" (εικόνα="" 7β,="" συμπληρωματικός="" πίνακας="" s5).="" με="" βάση="" την="" κλινική="" και="" βιοχημική="" βαθμολογία="" umod,="" προτείνουμε="" έναν="" διαγνωστικό="" αλγόριθμο="" για="" την="" καθοδήγηση="" του="" γενετικού="" ελέγχου="" στο="" adtkd="" (εικόνα="">

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Αυτή η διεθνής μελέτη κοόρτης αντιπροσωπεύει το μεγαλύτερο σύνολο δεδομένων ασθενών με ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1 που έχουν αναφερθεί μέχρι σήμερα, παρέχοντας νέες γνώσεις για τον φαινότυπο και την εξέλιξη της νόσου των κύριων υποτύπων της ADTKD. Λόγω της αυτοσωμικής επικρατούσας κληρονομικότητας και της περιφερειακής οικογενειακής ομαδοποίησης, σημαντικές διαφορές στον επιπολασμό των υποομάδων ADTKD αναφέρονται στις εθνικές κοόρτες.2,15,20 Στη διεθνή κοόρτη ADTKD, το ADTKD-UMOD αντιπροσωπεύει τις περισσότερες

συχνός υποτύπος ADTKD με εκτιμώμενο επιπολασμό 37,1 τοις εκατό, ακολουθούμενος από ADTKD-MUC1 στο 35,1 τοις εκατό των οικογενειών που είναι αρνητικές στο UMOD και εκτιμώμενο συνολικό επιπολασμό 21.0 τοις εκατό . Αξίζει να σημειωθεί ότι μια συστηματική προσπάθεια ελέγχου για μεταλλάξεις σε HNF1B, REN, DNAJB11 και SEC61A1 βρίσκεται σε εξέλιξη στις 133 οικογένειες που είναι αρνητικές σε UMOD και MUC{15}}και για μεταλλάξεις στο MUC1 στις 141 οικογένειες που είναι UMOD -αρνητικό στο μητρώο.

Με βάση το μεγάλο μέγεθος του δείγματος, παρατηρήσαμε διακριτά χαρακτηριστικά στην κλινική παρουσίαση των ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1, με συνάφεια για την κλινική πρακτική και την παροχή συμβουλών ασθενών.Νεφρόνόσοςεμφανίζεται πιο σοβαρή σε ασθενείς με ADTKD-MUC1, με υψηλότερο επιπολασμό ESKD (58 τοις εκατό έναντι 44 τοις εκατό στο ADTKD-UMOD, P ¼ 0.{{10}}4), πρώιμη έναρξη της ESKD (36 έτη έναντι 46 ετών σε ADTKD-UMOD, P < 0,001)="" και="" μικρότερη="" διάμεση="" νεφρική="" επιβίωση="" (46="" έτη="" έναντι="" 54="" ετών="" σε="" adtkd-umod,="" p="" ¼="" 0,013).="" προηγούμενες="" μελέτες="" ανέφεραν="" μεγαλύτερη="" ηλικία="" σε="" eskd="" (μέσος="" όρος:="" 44,9="" έτη)="" σε="" ασθενείς="" με="" adtkd-muc1,8="" η="" οποία="" θα="" μπορούσε="" να="" εξηγηθεί="" από="" την="">

Εικόνα 6| Κλινική βαθμολογία UMOD και απόδοση στο μητρώο ADTKD Belgo-Swiss. (α) Κλινική βαθμολογία UMOD με βάση κλινικά, βιοχημικά, ιστολογικά και απεικονιστικά δεδομένα. Τα σημεία που αποδίδονται για συγκεκριμένα χαρακτηριστικά εμφανίζονται στα δεξιά. μετά από τακτική επεξεργασία, συμπεριλαμβανομένης της ιζήματος ούρων και της ανάλυσης ούρων καινεφρόimaging. interstitial fibrosis, tubular atrophy, thickening and lamellation of tubular basement membranes, tubular dilatation (microcysts), negative immunofluorescence for the compliment, and Igs. proteinuria >300 mg/dl, persistent hematuria (both eumorphic and dysmorphic) in repeated urinalysis. hemoglobin A1c >10 τοις εκατό ή επαναλαμβανόμενες μετρήσεις αρτηριακής πίεσης > 160/100 mm Hg και/ή αντίστοιχα κλινικά ευρήματα υπερτασικής καρδιοπάθειας και/ή νεφροπάθειας. Τουλάχιστον 1 κύστη σε οποιαδήποτε θέση διαγιγνώσκεται με υπερηχογράφημα, αξονική τομογραφία ή μαγνητική τομογραφία. Παράδειγμα: 35-ασθενής ετών, με έναρξη ουρικής αρθρίτιδας στα 32 έτη (þ1). ουρικό οξύ ορού 550 mmol/l (þ3); εκτιμώμενος ρυθμός σπειραματικής διήθησης 55 ml/min ανά 1,73 m2, ήπια ανάλυση ούρων και ίζημα,νεφράχωρίς κύστεις και κανονικό μέγεθος στην μαγνητική τομογραφία, χωρίς διαβήτη ή υπέρταση (þ2 γιαχρόνιοςνεφρόνόσος [ΧΝΝ] άγνωστης προέλευσης). και το οικογενειακό ιστορικό ΧΝΝ που τεκμηριώθηκε σε 3 γενιές (þ2) αποδίδει συνολική κλινική βαθμολογία UMOD 8 βαθμών. (β) Καμπύλη λειτουργικών χαρακτηριστικών δέκτη της κλινικής βαθμολογίας UMOD στο μητρώο Belgo-Swiss (n ¼ 211 ασθενείς με αυτοσωμικό κυρίαρχο σωληναριακό διάμεσονεφρόνόσος[ADTKD] με διαθέσιμα δεδομένα) έχουν ως εξής: περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC): {{0}}.72; 95 τοις εκατό διάστημα εμπιστοσύνης (CI): 0.66–0.79; P < 0,001;="" η="" τιμή="" αποκοπής="" των="" $5="" έχει="" ευαισθησία="" 98,1="" τοις="" εκατό="" και="" ειδικότητα="" 41,4="" τοις="" εκατό="" για="" μετάλλαξη="" umod.="" αρνητική="" προγνωστική="" αξία:="" 94,3="" τοις="" εκατό="" ;="" θετική="" προγνωστική="" αξία:="" 59,1="" τοις="" εκατό.="" (γ)="" το="" ιστόγραμμα="" της="" κλινικής="" βαθμολογίας="" umod="" προκύπτει="" σε="" ασθενείς="" που="" είναι="" θετικοί="" σε="" umod="" (n="" ¼="" 106)="" και="" umod-αρνητικοί="" (n="" ¼="" 105).="" η="" κόκκινη="" οριζόντια="" γραμμή="" υποδεικνύει="" την="" τιμή="" αποκοπής="" 5.των="" ιστορικά="" προσβεβλημένων="" ασθενών="" (κλινικά="" προσβεβλημένοι="" συγγενείς="" ασθενών="" με="" γενετική="" διάγνωση),="" ενώ="" συμπεριλάβαμε="" μόνο="" άτομα="" με="" τεκμηριωμένη="" γενετική="" διάγνωση.="" η="" ετερογένεια="" του="" adtkd-muc1="" όσον="" αφορά="" την="" εξέλιξη="" της="" χνν="" και/ή="" της="" νεφρικής="" νόσου="" είναι="" ενδιαφέρουσα="" και="" υποδηλώνει="" σημαντικά="" τροποποιητικά="">

Η ουρική αρθρίτιδα έχει περιγραφεί κλασικά σε ασθενείς με μεταλλάξεις UMOD. Πράγματι, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η ουρική αρθρίτιδα είναι εντυπωσιακά πιο διαδεδομένη και έχει σημαντικά νωρίτερα εμφάνιση στο ADTKD-UMOD από ότι στο ADTKD-MUC1. Ελαττωματική συγκέντρωση στα ούρα που οδηγεί σε πολυδιψία και πολυουρία έχει περιγραφεί σε ασθενείς με ADTKD-UMOD, πιθανότατα λόγω της μειωμένης δραστηριότητας του συμμεταφορέα Naþ-Kþ-2Cl με βάση το TAL.15,17 Συστολή όγκου πλάσματος και αντισταθμιστική υψηλότερη επαναρρόφηση Η δραστηριότητα του εγγύς σωληναρίου, συμπεριλαμβανομένης της ανοδικής ρύθμισης των μεταφορέων ουρικού άλατος που είναι συζευγμένοι με Naþ, πιθανότατα εξηγεί τον φαινότυπο υπερουριχαιμίας στο ADTKD-UMOD.25,26 Ένας παρόμοιος μηχανισμός φάνηκε στο

ηλικιωμένα ποντίκια Umod νοκ-άουτ που εμφάνισαν τη μειωμένη δραστηριότητα του συμμεταφορέα Naþ-Kþ-2Cl.26 Παρόλο που το ADTKD-MUC1 προέρχεται πιθανώς από το περιφερικό σωληνάριο, η ουρική αρθρίτιδα ήταν σημαντικά λιγότερο διαδεδομένη σε αυτή τη διαταραχή.

Εικόνα 7| Βαθμολογία UMOD που συγκρίνει αυτοσωμικό κυρίαρχο σωληναριστήριονεφρόνόσος (ADTKD)–UMOD έναντι ADTKD-MUC1 στο μητρώο ADTKD των ΗΠΑ. (α, αριστερό πλαίσιο) Η καμπύλη λειτουργικών χαρακτηριστικών δέκτη της κλινικής βαθμολογίας UMOD στο μητρώο των ΗΠΑ (n ¼ 205 ασθενείς με ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1 με διαθέσιμα δεδομένα) είναι η εξής: περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC): 0.69; 95 τοις εκατό διάστημα εμπιστοσύνης (CI): 0.62–0.77; P < 0.037.="" μια="" τιμή="" αποκοπής="" $8="" έχει="" ευαισθησία="" 48,8="" τοις="" εκατό="" και="" ειδικότητα="" 83,7="" τοις="" εκατό="" για="" μεταλλάξεις="" umod,="" ενώ="" μια="" τιμή="" αποκοπής="" 5="" $="" έχει="" ευαισθησία="" 97,6="" τοις="" εκατό="" και="" ειδικότητα="" 15,0="" τοις="" εκατό="" για="" μεταλλάξεις="" umod.="" .="" (α,="" δεξιός="" πίνακας)="" το="" ιστόγραμμα="" των="" αποτελεσμάτων="" κλινικής="" βαθμολογίας="" umod="" σε="" ασθενείς="" με="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 125)="" και="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 80).="" (β,="" αριστερό="" πλαίσιο)="" η="" καμπύλη="" λειτουργικών="" χαρακτηριστικών="" δέκτη="" του="" κλινικού="" δείκτη="" umod="" συμπεριλαμβανομένων="" των="" επιπέδων="" umod="" ούρων="" στο="" μητρώο="" των="" ηπα="" (n="" ¼="" 86="" ασθενείς="" με="" adtkd-umod="" και="" adtkd-muc1="" με="" διαθέσιμα="" δεδομένα="" umod="" ούρων)="" είναι="" ως="" ακολουθεί:="" auc:="" 0.89;="" 95="" τοις="" εκατό="" ci:="" 0.82–0.96;="" p="">< 0,001.="" η="" τιμή="" αποκοπής="" των="" $5="" έχει="" τον="" υψηλότερο="" δείκτη="" youden="" για="" διάκριση="" (0,684)="" και="" έχει="" ευαισθησία="" 94,1="" τοις="" εκατό="" και="" ειδικότητα="" 74,3="" τοις="" εκατό="" για="" μετάλλαξη="" umod.="" αρνητική="" προγνωστική="" αξία:="" 89,7="" τοις="" εκατό="" ;="" θετική="" προγνωστική="" αξία:="" 84,2="" τοις="" εκατό.="" (β,="" δεξιός="" πίνακας)="" ιστόγραμμα="" κλινικών="" þ="" αποτελεσμάτων="" umod="" ούρων="" σε="" ασθενείς="" με="" adtkd-umod="" (n="" ¼="" 51)="" και="" adtkd-muc1="" (n="" ¼="" 35).="" η="" κόκκινη="" οριζόντια="" γραμμή="" υποδεικνύει="" την="" τιμή="" αποκοπής="" 5.="" q,="">

Διερευνήσαμε 2 βασικά βιολογικά χαρακτηριστικά που περιγράφονται στο ADTKD-UMOD με πιθανή παθοφυσιολογική συνάφεια: εκτροπή στους μηχανισμούς εξαγωγής UMOD και επαγωγή στρες ER. Με βάση την παρατήρηση ότι το MUC1 εκφράζεται στο περιφερικόνεφρόσωληνάριο συμπεριλαμβανομένου του TAL όπου εντοπίζεται με το UMOD6 και στην παρατήρηση ότι το MUC1fs συσσωρεύεται σε άλλους ιστούς που εκφράζουν MUC (δέρμα, μαστός, πνεύμονας, κόλον) χωρίς να προκαλεί εξωνεφρικές εκδηλώσεις,7 θα μπορούσε κανείς να υποθέσει ότι το MUC1fs μπορεί να αλληλεπιδράσει με UMOD σε TAL. Ωστόσο, σε αντίθεση με το ADTKD-UMOD, δεν βρήκαμε διαφορά στο επίπεδο του UMOD στα ούρα μεταξύ των ασθενών με ADTKD-MUC1 και του φυσιολογικού πληθυσμού. Επιπλέον, ανάλυση του μεταλλάγματος MUC1-νεφρόΟι βιοψίες αποκάλυψαν μια φυσιολογική κατανομή του UMOD στα κύτταρα TAL, χωρίς στοιχεία για στρες ER (έκφραση GRP78), που είναι χαρακτηριστικό γνώρισμα του ADTKD-UMOD. Αυτά τα νέα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η επεξεργασία του UMOD δεν αλλάζει στο ADTKD-MUC1 και ότι το στρες ER δεν είναι το κύριο εύρημα στο ADTKD-MUC1. Στην ίδια γραμμή, μια πρόσφατη μελέτη βρήκε παγίδευση MUC1fs σε κυστίδια της πρώιμης εκκριτικής οδού σε μοντέλα ADTKD-MUC1.19

Προηγούμενες αναφορές περιέγραφαν την ενδοκυτταρική συσσώρευση UMOD στονεφρόβιοψίες από ασθενείς με ADTKD-UMOD.1,2 Ωστόσο, αυτή η χρώση δεν είναι διαθέσιμη σε μεγάλο αριθμό ασθενών, αποτρέποντάς μας από το να κάνουμε εικασίες για την αξία της στη λήψη κλινικών αποφάσεων. Από την εμπειρία μας, το

Εικόνα 8| Διαγνωστικός αλγόριθμος για ύποπτουςαυτοσωμικό επικρατές σωληναριστήριονεφρόνόσος (ADTKD) με βάση την κλινική

UMOD-score και επίπεδα UMOD ούρων. προοδευτική απώλεια τουνεφρώνλειτουργία, ήπιο ίζημα ούρων, φυσιολογική έως ήπια λευκωματουρία ή/και πρωτεϊνουρία, κανονικού μεγέθουςνεφράστο υπερηχογράφημα και όχι κατανάλωση φαρμάκων που συνδέονται με σωληναρισιακή διάμεση νεφρίτιδα. αξιολογούνται με επικυρωμένες λεπτομέρειες. cΓια διαγνωστικούς αλγόριθμους που περιλαμβάνουν άλλα γονίδια ADTKD, ανατρέξτε στους Devuyst et al.αυτοσωμικό επικρατές πολυκυστικόνεφρόνόσος (μεγάλοι κυστικοί νεφροί), αυτοσωμικές επικρατούσες σπειραματοπάθειες (πρωτεϊνουρία ή/και αιματουρία), άλλες αιτίες σωληναρισμοειδώννεφρόνόσος(αυτοάνοση, σωληναρισιακή νεφρίτιδα και σύνδρομο ραγοειδίτιδας) συμπεριλαμβανομένων φαρμάκων και τοξινών (μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα, αριστολοχικό οξύ, αναστολείς καλσινευρίνης, λίθιο). ΧΝΝ,χρόνιοςνεφρόνόσος.

Η χρώση UMOD εξαρτάται από τον χειριστή, απαιτεί αυστηρούς θετικούς και αρνητικούς ελέγχους και μπορεί να εξαρτάται από την υποκείμενη μετάλλαξη UMOD. Επιπλέον, η διαθεσιμότητα τουνεφρόοι βιοψίες είναι περιορισμένες. Η αξιολόγηση των επιπέδων UMOD στα ούρα σε ασθενείς κατά τη στιγμή της διάγνωσης και κατά την εξέλιξη της νόσου μπορεί να προσφέρει ένα μη επεμβατικό διαγνωστικό εργαλείο και βιοδείκτη στο ADTKD-UMOD. Επειδή τα επίπεδα UMOD στα ούρα δείχνουν θετική συσχέτιση με το eGFR (για το eGFR<90 ml/min="" per="" 1.73="" m2)="" and="" tubular="" mass,23,24="" they="" need="" to="" be="" normalized="" for="" residual="" egfr="" and="" interpreted="" against="" matched="" controls.="" based="" on="" data="" from="" a="" large="" control="" cohort,="" we="" show="" here="" that="" urinary="" umod="" (in="" mg/g="" creatinine="" to="" account="" for="" urine="" concentration)="" normalized="" for="" egfr="" can="" be="" applied="" in="" the="" clinical="" setting="" of="">

Μια πρόσφατη μελέτη βασισμένη στην αλληλουχία των εξωμάτων ανέφερε μεταλλάξεις στο UMOD που αντιστοιχούν στο 3 τοις εκατό όλων των ασθενών με γενετικό εύρημα σε αυτήν την κοόρτη.13 Ωστόσο, σημαντικά εμπόδια στη διαγνωστική προσέγγιση των υποτύπων ADTKD εξακολουθούν να υφίστανται. Αυτά περιλαμβάνουν αλλά δεν περιορίζονται σε (i) περιορισμένη διαθεσιμότητα δοκιμών MUC1 λόγω τεχνικών προκλήσεων, (ii) έλλειψη

επικυρωμένος διαγνωστικός ή γενετικός αλγόριθμος λόγω μη εκτιμώμενων κλινικών διαφορών μεταξύ των υποτύπων ADTKD και (iii) που λείπουν βιοδείκτες ασθένειας λόγω μικρών και διάσπαρτων κοορτών ασθενειών. Για την καθημερινή πρακτική και τη σχέση κόστους-αποτελεσματικότητας, πρακτικά εργαλεία όπως τα συστήματα βαθμολόγησης είναι πολύ χρήσιμα για την καθοδήγηση των γενετικών δοκιμών.1 Το μητρώο Belgo-Swiss συνέβαλε καθοριστικά στην οριοθέτηση μιας κλινικής βαθμολογίας UMOD επειδή αποκάλυψε βασικά κλινικά χαρακτηριστικά που έκαναν διακρίσεις, συμπεριλαμβανομένου ενός θετικού οικογενειακού ιστορικού της ΧΝΝ και/ή της ουρικής αρθρίτιδας, η ηλικία κατά την παρουσίαση, ο επιπολασμός τηςνεφρόνόσος και εξέλιξη σε ESKD, και ιστορικό ουρικής αρθρίτιδας. Ενδιαφέροντος,νεφρώνοι κύστεις είναι λιγότερο συχνές σε ασθενείς με ADTKD-UMOD, κάτι που είναι σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες.8,15,20 Η οριοθετημένη κλινική βαθμολογία UMOD έδειξε εξαιρετικό NPV για μεταλλάξεις UMOD (περικοπή $5) στην Μητρώα Belgo-Swiss (NPV: 94,3%) και US (NPV: 91.0%). Καθώς το ADTKD-UMOD και το ADTKD-MUC1 παρουσιάζουν σημαντική κλινική επικάλυψη, δεν μας εξέπληξε το γεγονός ότι η κλινική βαθμολογία UMOD διαχωρίστηκε μέτρια μεταξύ αυτών των 2 οντοτήτων (AUC: 0,69). Ωστόσο, υψηλότερες τιμές βαθμολογίας UMOD έδειξαν μια σταθερή ειδικότητα για μεταλλάξεις UMOD (π.χ. αποκοπή $8: ειδικότητα 83,7 τοις εκατό και PPV 81,3 τοις εκατό για μια μετάλλαξη UMOD). Προσθήκη ούρων

Οι μετρήσεις UMOD, ένας παθοφυσιολογικός βιοδείκτης για το ADTKD-UMOD, αύξησαν σημαντικά τη διακριτική ισχύ της βαθμολογίας (AUC: 0.89) με PPV 84,2 τοις εκατό για μια μετάλλαξη UMOD (αποκοπή $5 μονάδες). Επειδή η εξέλιξη τουνεφρόνόσος και ο επιπολασμός και η έναρξη της ουρικής αρθρίτιδας φαίνεται να εξαρτώνται από την υποκείμενη γενετική διάγνωση, συνιστάται γενετική διάγνωση καθώς μπορεί να επηρεάσει τη διαχείριση ασθενών με ADTKD (π.χ. παρακολούθηση, προγραμματισμόςνεφρώνμεταμόσχευση και στρατηγικές πρόληψης της ουρικής αρθρίτιδας). Επιπλέον, στοχευμένες θεραπείες μπορεί να είναι προσιτές τουλάχιστον για το ADTKD-MUC1.

Τα όρια αυτής της μελέτης περιλαμβάνουν τον αναδρομικό σχεδιασμό κοόρτης «πραγματικής ζωής» διαδοχικά στρατολογημένων ασθενών, με εγγενείς δυσκολίες όπως περιορισμένη πρόσβαση σε πλήρεις κλινικές πληροφορίες, έλλειψη δειγμάτων DNA για περαιτέρω γενετικό έλεγχο και έλλειψη αυστηρών κριτηρίων ένταξης και αποκλεισμού. Εμείς

περιελάμβανε όλες τις γενετικά επιλυμένες περιπτώσεις μιας δεδομένης οικογένειας, εισάγοντας δυνητικά τον κίνδυνο για μεροληψία επιλογής. Ωστόσο, εκτιμούμε ότι αυτός αντιπροσωπεύει έναν αμελητέο κίνδυνο καθώς γενικά μόνο 1 έως 2 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν ανά οικογένεια και υπάρχει σημαντική ενδοοικογενειακή κλινική μεταβλητότητα στην ADTKD.8,20 ΕπειδήνεφρόΟι βιοψίες σπάνια πραγματοποιούνται σε αυτές τις ασθένειες και δίνουν μη ειδικά ευρήματα (π.χ. διάμεση ίνωση, σωληναριακή ατροφία), δεν συμπεριλάβαμε ιστοπαθολογικές πληροφορίες στην ανάλυση. Μια έρευνα των ιστοπαθολογικών αποτελεσμάτων από το μητρώο του Βελγίου-Ελβετίας έδειξε ότι η διάμεση ίνωση με σωληναριακή ατροφία (στο w60 τοις εκατό των διαθέσιμων αναφορών παθολογίας) και η διάμεση νεφρίτιδα (στο w40 τοις εκατό των διαθέσιμων αναφορών παθολογίας) ήταν τα κυρίαρχα ιστολογικά ευρήματα σε ασθενείς με ADTKD-UM και εκείνοι που ήταν UMOD- αρνητικοί. Μια πιο λεπτομερής ιστολογική περιγραφή των βιοψιών που πραγματοποιήθηκαν σε ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1 δικαιολογεί μια ειδική ανάλυση.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι συστηματικός έλεγχος για μεταλλάξεις UMOD και στα 10 κωδικοποιητικά εξόνια έχει πραγματοποιηθεί μόνο σε ένα υποσύνολο ασθενών με ADTKD. Με βάση προηγούμενες οθόνες και αλληλουχία ολόκληρων εξωμάτων, εκτιμούμε ότι πολύ λίγες μεταλλάξεις UMOD εκτός των εξονίων 3 και 4 μπορεί να έχουν χαθεί στο ADTKD-UMOD.13,15 Επιπλέον, μεγάλες διαγραφές ή εισαγωγές στο UMOD δεν ανιχνεύονται με άμεση αλληλούχιση μεθόδους. Με τη διαθεσιμότητα των δοκιμών γονιδιακού πάνελ και των προσεγγίσεων προσδιορισμού αλληλουχίας επόμενης γενιάς, η χρησιμότητα μιας κλινικής βαθμολογίας στην κατεύθυνση της στοχευμένης γονιδιακής δοκιμής πιθανότατα θα μειωθεί. Ωστόσο, στο τρέχον στάδιο, οι μεταλλάξεις MUC1 χάνονται από την αλληλουχία επόμενης γενιάς και η διαθεσιμότητα εξειδικευμένων δοκιμών είναι περιορισμένη. Από όσο γνωρίζουμε, ο γενετικός έλεγχος κλινικού βαθμού για MUC1 εκτελείται μόνο από το Broad Institute. Για αυτούς τους λόγους, εκτιμούμε ότι τα απλά κλινικά και βιοχημικά εργαλεία για την εκτίμηση των πιθανοτήτων προ-δοκιμών έχουν επιπτώσεις στη διαγνωστική επεξεργασία και δυνητικά μειώνουν το κόστος που σχετίζεται με τον αδικαιολόγητο προσδιορισμό γονότυπου.

Συμπερασματικά, αυτή η μεγάλη διεθνής αναδρομική μελέτη κοόρτης παρέχει μια λεπτομερή ανάλυση φαινοτύπου ασθενών με ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των 2 πιο κοινών υποτύπων ADTKD είναι η υπερουριχαιμία και η πρώιμη ουρική αρθρίτιδα στο ADTKD-UMOD και μια ετερογενής, αλλά γενικά πιο σοβαρήνεφρόνόσοςστο ADTKD-MUC1. Η κλινική βαθμολογία UMOD είναι ένα ευαίσθητο και, σε συνδυασμό με τα επίπεδα UMOD στα ούρα, δυνητικά ειδικό εργαλείο για την επιλογή ασθενών για γενετικό έλεγχο UMOD. Αυτά τα αποτελέσματα θα βοηθήσουν τους κλινικούς γιατρούς να βελτιώσουν τα διαγνωστικά ποσοστά, την κλινική διαχείριση και την παροχή συμβουλών ασθενών στην ADTKD.

ΜΕΘΟΔΟΙ

International ADTKD Cohort

Η International ADTKD Cohort αποτελείται από ασθενείς από το μητρώο ADTKD του Βελγίου-Ελβετίας και το μητρώο ADTKD των ΗΠΑ. Τα κριτήρια ένταξης ήταν αυτά που ορίστηκαν από τοΝεφρό Νόσος: Βελτίωση της συναίνεσης των παγκόσμιων αποτελεσμάτων2 και περιελάμβανε τα ακόλουθα σε οποιονδήποτε συνδυασμό: οικογενειακό ιστορικό συμβατό με την αυτοσωματική επικρατούσα κληρονομικότητα της ΧΝΝ με χαρακτηριστικά ADTKD, συμπεριλαμβανομένης της προοδευτικής απώλειαςνεφρόλειτουργία, ήπιο ίζημα ούρων, απουσία έως ήπια λευκωματουρία και/ή πρωτεϊνουρία, νεφροί κανονικού ή μικρού μεγέθους στον υπέρηχο. και/ή (σε απουσία θετικού οικογενειακού ιστορικού ΧΝΝ) ιστορικό πρώιμης έναρξης υπερουριχαιμία και/ή ουρική αρθρίτιδα και/ή παρουσία διάμεσης ίνωσης και/ή σωληναριακής ατροφίας σενεφρόbiopsy. Exclusion criteria included the following: a different genetic diagnosis (non-ADTKD), the presence of enlarged cystic kidneys, proteinuria (>1 g/24 h) και/ή σταθερή αιματουρία, μακροχρόνιος ή μη ελεγχόμενος σακχαρώδης διαβήτης ή αρτηριακή υπέρταση και η κατανάλωση φαρμάκων που συνδέονται με τη σωληναρισιακή διάμεση νεφρίτιδα. Μόνο οι ασθενείς που ελέγχθηκαν για μεταλλάξεις του UMOD και/ή του MUC1 συμπεριλήφθηκαν στην κοόρτη. Ανώνυμα δημογραφικά στοιχεία και κλινικές και γενετικές πληροφορίες καταγράφηκαν σε μια βάση δεδομένων. Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από το θεσμικό συμβούλιο αναθεώρησης της Ιατρικής Σχολής του Wake Forest, την Ιατρική Σχολή του Université Catholique de Louvain (UCL) και το Έβδομο Πρόγραμμα Πλαίσιο της Ευρωπαϊκής Κοινότητας «Ευρωπαϊκή Κοινοπραξία για Έρευνα Υψηλής Παραγωγής σε ΣπάνιεςΝεφρόΑσθένειες(EURenOmics).

Μητρώο Belgo-Swiss ADTKD. Το μητρώο ADTKD Belgo-Swiss περιλαμβάνει ασθενείς που παραπέμπονται στο UCLouvain και στο Πανεπιστήμιο της Ζυρίχης (UZH) από κλινικούς εταίρους κυρίως από την Ευρώπη (Συμπληρωματικό Παράρτημα S1). Το 2019, το μητρώο περιλάμβανε 275 ασθενείς που είχαν εγγραφεί από το 2003. Τα κλινικά δεδομένα περιελάμβαναν οικογενειακή γενεαλογία, έναρξη και εξέλιξηνεφρόμείωση της λειτουργίας, την εμφάνιση υπερουριχαιμίας και/ή ουρικής αρθρίτιδας (η ηλικία εμφάνισης της ουρικής αρθρίτιδας ορίστηκε ως η ηλικία του ασθενούς στο πρώτο επεισόδιο ουρικής αρθρίτιδας) και κλασματική απέκκριση ουρικού οξέος, απεικονιστικά και ιστοπαθολογικά δεδομένα (όπου υπάρχουν) και πληροφορίες σχετικά με το ενδεχόμενο εξωνεφρική εκδηλώσεις (π.χ. παγκρεατικά ένζυμα, δοκιμασίες ηπατικής λειτουργίας). Το ESKD ορίστηκε ως eGFR<10 ml/min="" or="" the="" initiation="" of="">νεφρώνθεραπεία υποκατάστασης (αιμοκάθαρση ή μεταμόσχευση νεφρού).

Μητρώο ADTKD των ΗΠΑ. Το μητρώο ADTKD των Η.Π.Α. περιλαμβάνει οικογένειες με διάμεσο σωληνάριονεφρόνόσοςαναφέρθηκε στο Wake Forest School of Medicine το 1999 (Συμπληρωματικό Παράρτημα S1). Οι πληροφορίες που συλλέχθηκαν περιελάμβαναν δημογραφικά στοιχεία, γενεαλογικό, ηλικία ESKD, εργαστηριακές τιμές και αποτελέσματα υπερήχων.

Γενετικό τεστ

Ελήφθη ενημερωμένη γραπτή συγκατάθεση από όλους τους ασθενείς. Το γονιδιωματικό DNA απομονώθηκε από λευκοκύτταρα περιφερικού αίματος χρησιμοποιώντας τυπικές διαδικασίες και το DNA αποθηκεύτηκε στους 4 C.

Ο άμεσος προσδιορισμός της αλληλουχίας των εξονίων UMOD διεξήχθη αρχικά με την αλληλούχιση Sanger, όπως περιγράφηκε προηγουμένως.27 Πιο πρόσφατα, το γονίδιο UMOD αναλύεται με μαζικά παράλληλη αλληλούχιση χρησιμοποιώντας ένα πάνελ γονιδίου σωληναρίσματος που σχεδιάστηκε από το πακέτο εργασίας tauopathies του European Consortium EURenOmics.28,29 Mutational Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε στα εξόνια 3 και 4 για όλους τους εγγεγραμμένους ασθενείς και και στα 10 κωδικοποιητικά εξόνια για ένα υποσύνολο ασθενών.

Ο προσδιορισμός γονότυπου MUC1 πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση προσδιορισμού αλληλουχίας MUC1 VNTR σε συνδυασμό με μια δοκιμασία επέκτασης ανιχνευτή βασισμένη σε φασματομετρία, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Η δοκιμή 7,30 MUC1 παρασχέθηκε από το Broad Institute of MIT και το Harvard 30 και την First Faculty of Medicine, Charles University.7 Η αρίθμηση νουκλεοτιδίων αντανακλά την αρίθμηση cDNA με þ1 που αντιστοιχεί στο Α του κωδικονίου έναρξης μετάφρασης ATG στην αλληλουχία αναφοράς (NM_003361.3). Το λογισμικό Alamut Visual (Interactive Biosoftware, Rouen, Γαλλία, www.interactivebiosoftware.com) χρησιμοποιήθηκε για να βοηθήσει στον προσδιορισμό της παθογένειας της παραλλαγής. Οι προσδιορισμένες παραλλαγές ελέγχθηκαν διαδοχικά σε συναφείς βάσεις δεδομένων, όπως η Clinvar (Εθνικό Κέντρο Βιοτεχνολογίας Πληροφοριών, Bethesda, MD; HTTPS:// www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/), Βάση δεδομένων για μεταλλάξεις ανθρώπινου γονιδίου (Ινστιτούτο Ιατρικής Γενετικής στο Cardiff, Cardiff, UK· http://www. hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php), VarSome (Saphetor, Lausanne, Switzerland; https://varsome.com/) και τοπικές βάσεις δεδομένων για αξιολογήσει για προηγούμενη δημοσίευση.

Οι παραλλαγές θεωρήθηκαν ότι προκαλούν ασθένειες με βάση προηγούμενες αναφορές, ανάλυση διαχωρισμού οικογένειας ή αλγόριθμους πρόβλεψης (Sorting Intolerant from Tolerant [SIFT], Align GVD, mutation taster, και Polymorphism Phenotyping v2 [PolyPhen-2]) για παθογένεια .

Οι παραλλαγές ταξινομήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες που δημοσιεύθηκαν από το Αμερικανικό Κολλέγιο Ιατρικής Γενετικής το 2015.31 Οι παραλλαγές που μας ενδιαφέρουν επαληθεύτηκαν με την αλληλουχία Sanger.

Μετρήσεις επιπέδων UMOD στα ούρα

Χρησιμοποιήθηκε μια επικυρωμένη μέθοδος ανοσοπροσροφητικής συνδεδεμένης με ένζυμα για τη μέτρηση των επιπέδων UMOD στα ούρα (δεύτερο πρωινό δείγμα ούρων) από 86 ασθενείς με ADTKD.21 Η κρεατινίνη ούρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναλυτή Synchron DXC800 (Beckman Coulter, Fullerton, CA) . Τα δείγματα αναφοράς (n ¼ 2717) ελήφθησαν από την Cohort Lausannoise, μια πληθυσμιακή μελέτη που περιελάμβανε 6000 άτομα ηλικίας 35 έως 75 ετών από την πόλη της Λωζάνης της Ελβετίας. 22 eGFR υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το ChronicΝεφρόΝόσοςΕξίσωση Συνεργασίας Επιδημιολογίας. Ελήφθη ενημερωμένη συγκατάθεση από όλα τα συμμετέχοντα άτομα.

Κατασκευές έκφρασης UMOD

cDNA ανθρώπινου UMOD άγριου τύπου κλωνοποιήθηκε σε pcDNA 3.1 (þ) (Thermo Fisher Scientic, Waltham, MA) και μια ετικέτα αιμοσυγκολλητίνης εισήχθη μετά το πεπτίδιο οδηγό μεταξύ T26 και S27 στην πρωτεϊνική αλληλουχία.32 Η μετάλλαξη C150PS και L28 Οι ισομορφές ελήφθησαν με μεταλλαξογένεση χρησιμοποιώντας το κιτ μεταλλαξογένεσης QuikChange Lightning (Agilent, Santa Clara, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα Primer σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό QuikChange Primer Design Program (Agilent). Εκκινητές που χρησιμοποιούνται για μετάλλαξη C150S: προς τα εμπρός (50 /30 ) gatggcactgtgagtcctccccgggctcctg, αντίστροφα (50 /30 ) caggagcccggggaggactcacagtgccac και για μετάλλαξη L248P: προς τα εμπρός (50 /30) cccgaggtcgtgtgcccgagtcgtgt

Συνθήκες κυτταροκαλλιέργειας

Τα κύτταρα HEK293 αναπτύχθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό, 200 U/ml πενικιλλίνη, 200 mg/ml στρεπτομυκίνη και 2 mmol/l γλουταμίνη στους 37 C, 5 τοις εκατό CO2.

Τα κύτταρα HEK293 επιμολύνθηκαν χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher Scientific) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και αναλύθηκαν 24 ώρες μετά τη διαμόλυνση.

Western blot

Τα κύτταρα λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης οκτυλογλυκοζίτη (50 mmol/l Tris-HCl, ρΗ 7,4, 150 mmol/l NaCl, 60 mmol/l οκτυλ bD-γλυκοπυρανοσίδη, 10 mmol/l NaF, 0,5 mmol/l νατρίου ορθοβαναδικό, 1 mmol/l γλυκεροφωσφορικό και κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης [Sigma-Aldrich, St. Louis, MO]) για 1 ώρα στους 4 C και ακολούθησε 10 λεπτά φυγοκέντρησης στους 17,000g. Τα διαλυτά κλάσματα προσδιορίστηκαν ποσοτικά με την ανάλυση Bio-Rad Protein (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Πειράματα Western blot διεξήχθησαν όπως περιγράφεται στους Schaeffer et al.32 Τα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αντισώμα αντι-ΗΑ.11 Epitope Tag καθαρισμένο σε ποντίκι (αραίωση 1:1000; 901502; BioLegend, San Diego, CA) και μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού -b-ακτίνη (αραίωση 1:20.000, Α2228, Sigma-Aldrich).

Ανοσοφθορισμός

Νεφρόβιοψίες. Πραγματοποιήθηκε ανοσοανίχνευση UMOD και GRP78 σε πάχος 5-mmνεφρότομές που ελήφθησαν από δείγματα νεφρεκτομής ασθενών με ADTKD-UMOD (γυναίκα, 41 ετών, ESKD, άνδρας, 42 ετών, ESKD) και ADTKD-MUC1 (γυναίκα, 60 ετών, ESKD, άνδρας, 47 ετών παλιά, ΕΣΚΔ). Οι αντικειμενοφόρες πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε σειρά διαβαθμισμένης αιθανόλης. Η ανάκτηση αντιγόνου διεξήχθη για 10 λεπτά με κιτρικό ρυθμιστικό (pH 6,0) στους 98 C. Μετά από 20 λεπτά σε διάλυμα αποκλεισμού, οι αντικειμενοφόρες πλάκες επωάστηκαν όλη τη νύχτα με πρωτεύον αντίσωμα GRP78 (1:300, ab21685, Abcam, Cambridge, UK), ακολουθούμενη από επώαση με αντίσωμα αντι-κουνελιού συζευγμένο Alexa-Fluor555-για 45 λεπτά (1:200; Invitrogen, Thermo Fisher Scientific). Οι αντικειμενοφόρες πλάκες ανιχνεύθηκαν με πρωτεύον αντίσωμα προβάτου αντι-UMOD (1:800; K90071C; Meridian Life Science Inc., Memphis, TN), ακολουθούμενο από συζευγμένο AlexaFluor488- αντι-πρόβατο γαϊδουριού (1:200; Invitrogen). Τα καλύμματα τοποθετήθηκαν με αντιδραστήριο κατά της εξάλειψης χρυσού Prolong με 40,6-διαμιδινο-2- φαινυλινδόλη (Invitrogen) και αναλύθηκαν με μικροσκόπιο Zeiss LSM 510 Meta Confocal (Carl Zeiss, Jena, Γερμανία) με φακούς υψηλού αριθμητικού διαφράγματος ( Σχέδιο-Νεόφλουαρ 20/0.5). Η χρήση αυτών των δειγμάτων έχει εγκριθεί από το Université Catholique de Louvain Ethical Review Board.33

Κύτταρα HEK293. Τα κύτταρα που αναπτύχθηκαν σε καλυπτρίδα στερεώθηκαν σε 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη για 15 λεπτά, διαπερατήθηκαν 10 λεπτά με 0,5 τοις εκατό Triton και μπλοκαρίστηκαν για 30 λεπτά με 10 τοις εκατό ορό γαϊδάρου. Τα κύτταρα επισημάνθηκαν για 1 ώρα, 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με ένα καθαρισμένο από ποντικό αντίσωμα αντι-ΗΑ.11 Epitope Tag (αραίωση 1:500; 901502; BioLegend) και μια πολυκλωνική αντι-καλρετικουλίνη κουνελιού (αραίωση 1:500, Sigma; C466; -Aldrich) ακολουθούμενη από επώαση για 1 ώρα με τα κατάλληλα συζευγμένα με AlexaFluor δευτερογενή αντισώματα (αραίωση 1:500, Thermo Fisher Scientific). Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 40,6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη και τοποθετήθηκαν χρησιμοποιώντας μέσο στερέωσης φθορισμού (Dako; Agilent). Όλες οι φωτογραφίες τραβήχτηκαν με ένα ομοεστιακό μικροσκόπιο περιστρεφόμενου δίσκου UltraVIEW ERS (UltraVIEW ERS-Imaging Suite Software; Zeiss 63X/1.4; PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Boston, MA). Όλες οι εικόνες εισήχθησαν στο Photoshop CS (Adobe Systems, Mountain View, CA) και προσαρμόστηκαν για φωτεινότητα και αντίθεση.

Δημιουργία και επικύρωση της βαθμολογίας UMOD ADTKD

Η σταθμισμένη βαθμολογία UMOD βασίστηκε σε κριτήρια ADTKD, συγκεκριμένα κλινικά χαρακτηριστικά της ADTKD-UMOD (δηλαδή, πρώιμη έναρξη ουρικής αρθρίτιδας και υπερουριχαιμία) και παραμέτρους που σχετίζονται αρνητικά με την ADTKD (δηλαδή, παρέχουν μια εναλλακτική εξήγηση για ΧΝΝ: πρωτεϊνουρία και/ή αιματουρία, διαβήτης και/ή ανεξέλεγκτη υπέρταση, νεφρικές κύστεις και/ή μεγέθυνσηνεφρά).2,15,20 Για τη στάθμιση των στοιχείων της βαθμολογίας χρησιμοποιήσαμε ακέραιες τιμές μεταξύ 1 και þ3. Δόθηκε βαθμολογία þ2 για τα γενικά κριτήρια ADTKD, 2 þ1 ή þ3 για τα ειδικά κλινικά και εργαστηριακά ευρήματα του UMOD και 1 για κάθε αρνητικά συσχετιζόμενο στοιχείο. Η βαθμολογία δοκιμάστηκε για πρώτη φορά στο μητρώο ADTKD Belgo-Swiss και επικυρώθηκε στο μητρώο ADTKD των ΗΠΑ. Για να διακρίνουμε το ADTKD-UMOD από το ADTKD-MUC1, ορίσαμε ένα φυσιολογικό εύρος UMOD ούρων [(mg/g κρεατινίνης)/eGFR] χρησιμοποιώντας 2717 δείγματα ούρων από τον γενικό πληθυσμό. Με βάση την παθοφυσιολογία του ADTKD-UMOD, σε προηγούμενες αναφορές,34 καθώς και στα ευρήματά μας (Εικόνα 5α), εκχωρήσαμε, αντίστοιχα, þ1 και þ3 βαθμούς για τις τιμές UMOD ούρων μεταξύ της διάμεσης και 25ης εκατοστημόριου και κάτω από το 25ο εκατοστημόριο του φυσιολογικά επίπεδα UMOD στα ούρα. Ομοίως, εκχωρήσαμε, αντίστοιχα, 1 και 3 βαθμούς για τις τιμές UMOD στα ούρα μεταξύ της διάμεσης και της 75ης εκατοστιαίας θέσης και πάνω από την 75η εκατοστιαία θέση των φυσιολογικών επιπέδων UMOD στα ούρα. Η σύλληψη της βαθμολογίας βασίστηκε στην προηγουμένως δημοσιευμένη βαθμολογία πυρηνικού παράγοντα ηπατοκυττάρων 1b.35

Στατιστική ανάλυση

Οι ποσοτικές παράμετροι παρουσιάζονται ως διάμεσοι και το IQR (25ο, 75ο εκατοστημόριο) (για μεταβλητές κλίμακας) ή το μέσο SD (για συνεχείς μεταβλητές), και οι ποιοτικές παράμετροι παρουσιάζονται ως κλάσματα με ποσοστά. Οι κατηγορικές μεταβλητές συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ c2. Οι συνεχείς μεταβλητές συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Mann-Whitney U ή το μη ζευγαρωμένο t-test. Η ανάλυση της δοκιμής διακύμανσης με τη δοκιμασία πολλαπλής σύγκρισης του Tukey χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των επιπέδων UMOD στα ούρα. Οι καμπύλες Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν για να εμφανίσουν επιβίωση χωρίς ESKD και χωρίς ουρική αρθρίτιδα. Οι ασθενείς που δεν είχαν φτάσει σε ESKD ή εμφάνισαν ουρική αρθρίτιδα στο τέλος της μελέτης (το αποτέλεσμα ενδιαφέροντος δεν εμφανίστηκε κατά τη διάρκεια του χρόνου παρακολούθησης) θεωρήθηκαν λογοκριμένα άτομα. Ο χρόνος λογοκρισίας ορίστηκε ως η ηλικία κατά την τελευταία παρακολούθηση. Για τη σύγκριση των καμπυλών επιβίωσης χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ log-rank. Η απόδοση της βαθμολογίας UMOD αξιολογήθηκε με τον υπολογισμό της AUC της χαρακτηριστικής καμπύλης λειτουργίας δέκτη. Ο δείκτης Youden χρησιμοποιήθηκε για τον καθορισμό του βέλτιστου διακριτικού σημείου αποκοπής για τη βαθμολογία UMOD. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SPSS Statistics (IBM Corp., Armonk, NY). Το P < 0.05="" θεωρήθηκε="" στατιστικά="" σημαντικό,="" χρησιμοποιήθηκαν="" 2-δοκιμές="">

ΑΠΟΚΑΛΥΨΗ

Όλοι οι συγγραφείς δεν δήλωσαν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

ΕΥΧΑΡΙΣΤΙΕΣ

Η EO υποστηρίζεται από το Fonds National de la Recherche Luxembourg (επιχορήγηση 6903109), το Πανεπιστημιακό Πρόγραμμα Προτεραιότητας Έρευνας "Integrative Human Physiology, ZIHP" του Πανεπιστημίου της Ζυρίχης και ένα Early Postdoc Mobility-Stipendium του Ελβετικού Εθνικού Ιδρύματος Επιστημών (P2ZHP{ {3}}). Η LR υποστηρίζεται από την Ιταλική Νεφρολογική Εταιρεία (SIN) στο πλαίσιο του προγράμματος "Adotta un Progetto di Ricerca", Telethon-Italy (επιχορήγηση GGP14263) και το Υπουργείο Υγείας της Ιταλίας (επιχορήγηση RF-2010-2319394). Το KK και το AJB υποστηρίζονται από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας-Εθνικό Ινστιτούτο Διαβήτη και Πεπτικού καιΝεφρόΑσθένειες(επιχορήγηση R21 DK106584). Οι M, KH και SK υποστηρίχθηκαν από το Υπουργείο Υγείας της Τσεχικής Δημοκρατίας (επιχορήγηση NV17-29786A), το Υπουργείο Παιδείας της Τσεχικής Δημοκρατίας (επιχορήγηση LTAUSA19068) και από το Πανεπιστήμιο του Καρόλου στην Πράγα (ιδρυματικά προγράμματα UNCE/MED/007 και PROGRES-Q26/LF1). Ευχαριστούν το Εθνικό Κέντρο Ιατρικής Γονιδιωματικής (χορήγηση LM2015091) για τη βοήθεια με τον προσδιορισμό αλληλουχίας UMOD και MUC1. Το OD υποστηρίζεται από το Έβδομο Πρόγραμμα Πλαίσιο της Ευρωπαϊκής Κοινότητας (επιχορήγηση 305608), το Ευρωπαϊκό Δίκτυο Αναφοράς για Σπάνιες Νεφρικές Νόσους (έργο 739532), το Εθνικό Κέντρο Ικανότητας του Ελβετικού Εθνικού Ιδρύματος Επιστημών στον Έρευνα Ελέγχου Νεφρού της Ομοιόστασης και την Ελβετική Εθνική Επιστήμη Ίδρυμα (επιχορήγηση 310030-189044). Το OD και το OB υποστηρίχθηκαν από το Ίδρυμα Gebert-Rüf για έρευνα σχετικά με το ADTKD-UMOD. Το JAS υποστηρίζεται από την Kidney Research UK και τις Northern CountiesΝεφρόΤαμείο Έρευνας. Το RT χρηματοδοτείται από το Instituto de Salud Carlos III: Redes Temáticas de Investigación Cooperativa Red de Investigación Renal (επιχορήγηση RD16/0009) και το Fondo de Investigación Sanitarias Fondo Europeo de Desarollo Regional (επιχορήγηση PI15/01820 PI15/018203, Το JM υποστηρίζεται από το Fonds de la Recherche Scientique–Communauté Française de Belgique. Το DGF υποστηρίχθηκε από το Ελβετικό Εθνικό Κέντρο Ικανότητας στην Έρευνα TransCure, το Ελβετικό Εθνικό Κέντρο Ικανότητας στον Έρευνα Ελέγχου Νεφρού της Ομοιόστασης και το Ελβετικό Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών (επιχορηγήσεις 31003A_152829 και 33IC30_166785/ 1). Ο γενετικός έλεγχος για το MUC1 υποστηρίζεται από το Slim Initiative for Genomic Medicine in the Americas, μια συνεργασία του Ινστιτούτου Broad με το Ίδρυμα Carlos Slim.

Ευχαριστούμε όλους τους ασθενείς και τις οικογένειες που συμμετείχαν. Το Cohort Lausannoise αναγνωρίζεται για την παροχή δειγμάτων ούρων αναφοράς και πληροφοριών eGFR. Είμαστε ευγνώμονες στη Maegan Harden και την ομάδα της στην Πλατφόρμα Broad Genomics για τη βοήθεια ειδικών με γενετικές εξετάσεις για MUC1.

Μέρη αυτών των δεδομένων παρουσιάστηκαν ως αφίσα κατά τη διάρκεια της Αμερικανικής Εταιρείας Νεφρολογίας του 2017ΝεφρόΕβδομάδα (31 Οκτωβρίου – 5 Νοεμβρίου 2017, Νέα Ορλεάνη, Λουιζιάνα).

ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ

Συμπληρωματικό αρχείο (PDF)

Παράρτημα S1. Παραπέμποντες Ιατροί.

Εικόνα S1. Το L284P uromodulin παρουσιάζει ελάττωμα εμπορίας.

Εικόνα S2. Ελευθερία από ESKD και ουρική αρθρίτιδα στο ADTKD-UMOD σύμφωνα με μεταλλάξεις μη κυστεΐνης έναντι κυστεΐνης.

Εικόνα S3. Συσχέτιση μεταξύ της ουρομοδουλίνης και της σπειραματικής διήθησης στον γενικό πληθυσμό.

Εικόνα S4. Επεξεργασία ουρομοντουλίνης σε ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1.

Εικόνα S5. Σχεδιασμός και διάγραμμα ροής του μητρώου ADTKD Belgo-Swiss. Εικόνα S6. Κλινικά χαρακτηριστικά UMOD-θετικών και UMOD-αρνητικών ασθενών στο μητρώο ADTKD Belgo-Swiss.

Πίνακας S1. Κατάλογος των 106 μεταλλάξεων UMOD στα μητρώα ADTKD του Belgo-Swiss και των ΗΠΑ.

Πίνακας S2. Βαθμολογίες συχνότητας αλληλόμορφων και παθογένειας για νέες παραλλαγές UMOD.

Πίνακας S3. Κλινικά χαρακτηριστικά ασθενών με ADTKD στο μητρώο ADTKD των ΗΠΑ σύμφωνα με τη γενετική διάγνωση.

Πίνακας S4. Συντεταγμένες της καμπύλης χαρακτηριστικών λειτουργίας δέκτη (ROC) της κλινικής βαθμολογίας UMOD στο μητρώο ADTKD του Βελγίου-Ελβετίας (θετικοί σε UMOD και αρνητικοί σε UMOD ασθενείς) (n ¼ 211 ασθενείς με διαθέσιμα δεδομένα).

Πίνακας S5. Συντεταγμένες της καμπύλης χαρακτηριστικών λειτουργίας δέκτη (ROC) της βαθμολογίας UMOD στο μητρώο ADTKD των ΗΠΑ (ασθενείς με ADTKD-UMOD και ADTKD-MUC1) χωρίς και με ουρομοντουλίνη (n ¼ 205 και n ¼ 86 με ουρομοδουλίνη).

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Devuyst O, Olinger E, Weber S, et al.Autosomal dominant tubulointerstitialΝεφρική Νόσος, Nat Rey Dis Primers.2019:5:60.

2. Eckardt KU, Alper SL, Antignac C, et al. Αυτοσωμική κυρίαρχη σωληναρισιακή διάμεση νεφρική νόσος: διάγνωση, ταξινόμηση και διαχείριση — μια συναινετική αναφορά KDIGO. Kidney Int.2015;88:676-683.

3. Hart TC, Gorry MC, Hart PS, et al. Οι μεταλλάξεις του γονιδίου UMOD είναι υπεύθυνες για τη μυελική κυστική νεφρική νόσο 2 και την οικογενή νεανική υπερουριχαιμική νεφροπάθεια. J Med Genet.2002;39:882-892.

4. Devuyst O. Olinger E, Rampoldi L Uromodulin: από τη φυσιολογία στις σπάνιες και πολύπλοκες νεφρικές διαταραχές. Nat Rev Nephrol.2017;13:525-544.

5. Kirby Α, Gnirke Α, Jaffe DB, et αϊ. Οι μεταλλάξεις που προκαλούν μυελική κυστική νεφρική νόσο τύπου 1 βρίσκονται σε ένα μεγάλο VNTR στο MUC1 που χάνεται από μαζικά παράλληλη αλληλουχία. Nat Genet.2013;45:299-303.

6. Knaup KX, HackenbeckT, Popp B, et al.Διαλληλική έκφραση της βλεννίνης-1 στο 21. Youhanna S, Weber J, Beaujean V, et al. Προσδιορισμός της uromodulin στην αυτοσωματική επικρατούσα σωληναρισιακή διάμεση νεφρική νόσο: επιπτώσεις για μη γενετική αναγνώριση ασθένειας.J Am Soc Nephrol.2018292298-2309.