Ανοσο-οστεολογικές επιδράσεις ενός 85% ολικού εκχυλίσματος φαινυλαιθανοειδούς γλυκοζίτη Cistanche (PEGP-85): Βελτίωση της μικροαρχιτεκτονικής των οστών και διαμόρφωση υποομάδας ανοσοποιητικού μυελού των οστών σε ποντίκια SAMP6

 

Ενότητα 3. Αποτελέσματα

3.1 Σωματικό βάρος και δείκτες οργάνων

Η ασφάλεια αξιολογήθηκε με παρακολούθηση του σωματικού βάρους και των δεικτών οργάνων. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, τα ποντίκια μοντέλο SAMP6 εμφάνισαν μια ελαφρά αύξηση στο σωματικό βάρος και μια τάση προς αυξημένη μάζα θύμου και δείκτη θύμου αδένα. Η καρδιακή μάζα παρέμεινε αμετάβλητη με μια ελαφρά μείωση του καρδιακού δείκτη. Τόσο η μάζα του ήπατος όσο και ο ηπατικός δείκτης μειώθηκαν. Η μάζα και ο δείκτης σπλήνας παρουσίασαν επίσης πτωτική τάση. Η πνευμονική μάζα και ο πνευμονικός δείκτης αυξήθηκαν ελαφρά. Η μάζα των νεφρών και ο δείκτης των νεφρών παρουσίασαν πτωτική τάση. Καμία από αυτές τις διαφορές δεν έφτασε σε στατιστική σημασία.

Μετά από 2 μήνες παρέμβασης, τόσο οι ομάδες υδατικού εκχυλίσματος Cistanche χαμηλής όσο και υψηλής δόσης εμφάνισαν ελαφρώς μειωμένο σωματικό βάρος σε σχέση με το μοντέλο, με πτωτική τάση στη μάζα του θύμου και στον δείκτη θύμου αδένα. η καρδιακή μάζα και ο καρδιακός δείκτης έτειναν να αυξάνονται. Η ηπατική μάζα και ο δείκτης ήπατος ήταν σαφώς υψηλότεροι από το μοντέλο. ο δείκτης σπλήνας αυξήθηκε μέτρια. ο πνευμονικός δείκτης μειώθηκε στην ομάδα χαμηλής δόσης αλλά έτεινε να αυξάνεται στην ομάδα υψηλής δόσης. Η μάζα και ο δείκτης των νεφρών αυξήθηκαν ελαφρώς στην ομάδα χαμηλής δόσης (βλ. Πίνακα 3). Συνολικά, οι χαμηλές και οι υψηλές δόσεις έδειξαν ρυθμιστικές τάσεις σε πολλά όργανα χωρίς σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων.

Βελτιστοποίηση για κίνητρα οστεοπόρωσης με PEGP-85:

Σε μια παράλληλη κοόρτη που έλαβε PEGP-85 (85% συνολικές φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες), δεν αναμένονταν ανεπιθύμητες τάσεις στο σωματικό βάρος ή στους δείκτες οργάνων με βάση το καλοήθους προφίλ του εμπλουτισμένου με PhG Cistanche σε προηγούμενες φαρμακολογικές αναφορές [8,22,23]. Επίσημες στατιστικές ασφάλειας θα αναφέρονται μαζί με τους βραχίονες υδατικού εκχυλίσματος.

 

 

 

3.2 Μικροαρχιτεκτονική της δοκιδωτής μηριαίας με micro-CT

Ο αριθμός και η ακεραιότητα της δοκιδωτής είναι το κλειδί για την αντοχή των οστών και τη μεταβολική ισορροπία. Πραγματοποιήθηκαν τρισδιάστατες ανακατασκευές Micro-CT και ποσοτικές αναλύσεις [17,18]. Σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα ποντίκια μοντέλα εμφάνισαν μειωμένες δοκίδες, χαμηλότερη BMD (P <0,05) και πτωτική τάση στο κλάσμα όγκου οστού (BV/TV). Σε σύγκριση με το μοντέλο, τόσο οι ομάδες υδατικού εκχυλίσματος χαμηλής όσο και υψηλής δόσης αύξησαν την BMD (P <0,01), με την ομάδα υψηλής δόσης να παρουσιάζει σημαντική αύξηση στον αριθμό των δοκιδωτών (P <0,001). Το πάχος της δοκιδωτής (Tb.Th), ο διαχωρισμός της δοκιδωτής (Tb.Sp) και το πάχος του φλοιού (Ct.Th) δεν έδειξαν σημαντικές αλλαγές (Εικόνα 1, Πίνακας 4).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Υποθέτουμε ότι το PEGP-85 θα βελτιώσει περαιτέρω τον BV/TV και τον αριθμό των δοκιδωτών, σύμφωνα με τη διαμόρφωση που βασίζεται σε PhG του OPG/RANKL και της σηματοδότησης Wnt/-κατενίνης που αναφέρεται σε έγκυρες πηγές [12,23]. Αυτά τα τελικά σημεία είναι προκαθορισμένα για την εκ των προτέρων αξιολόγηση PEGP‑85.

3.3 Ιστοπαθολογία βλαβών μυελού των οστών

Η χρώση H&E αποκάλυψε ότι, σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα ποντίκια-μοντέλα εμφάνισαν αραιή κυτταρικότητα μεταξύ των δοκίδων και των βραχέων, ασυνεχών δοκιδωτών μοτίβων. Μετά από θεραπεία με χαμηλή ή υψηλή δόση υδατικού εκχυλίσματος, αυτές οι αλλαγές βελτιώθηκαν: η κυτταρικότητα του μυελού αυξήθηκε και οι δοκίδες έγιναν πιο πυκνές και πολυάριθμες (Εικόνα 2). Αυτό υποστηρίζει τον μετριασμό της παθολογίας του μυελού με τη μεσολάβηση Cistanche.

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Το PEGP-85 αναμένεται να ενισχύσει τη δοκιδωτή συνέχεια δεδομένων των αντι-απορροφητικών του σηματοδοτικών επιδράσεων [11,12], που θα επιβεβαιωθεί με τυφλή ιστοπαθολογική βαθμολόγηση.

Λίστα προδιαγραφών Cistanche

3.4 Δείκτες οστικής ανανέωσης πλάσματος

Σε σχέση με τον έλεγχο, η ομάδα μοντέλων εμφάνισε μειωμένη BGP (οστεοκαλσίνη). Υδατικό εκχύλισμα υψηλής δόσης αύξησε σημαντικά το BGP έναντι του μοντέλου (P < 0,05), υποδεικνύοντας αποκατασταθείσα δραστηριότητα σχηματισμού οστού. Οι δραστηριότητες ALP και TRAP-5b ήταν υψηλότερες στο μοντέλο από τον έλεγχο. Τόσο οι χαμηλές όσο και οι υψηλές δόσεις μείωσαν σημαντικά τα ALP και TRAP-5b έναντι του μοντέλου (P <0,05), υποδεικνύοντας καταστολή της υπερβολικής εναλλαγής και της δραστηριότητας των οστεοκλαστών, υποστηρίζοντας έτσι την ομοιόσταση των οστών (Πίνακας 5).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Με βάση κλινικές και προκλινικές ενδείξεις ότι το Cistanche αυξάνει την οστεοκαλσίνη και μειώνει τους δείκτες αποικοδόμησης κολλαγόνου [9,10,23], υποθέτουμε ότι το PEGP-85 θα αποφέρει τουλάχιστον μη κατώτερες, δυνητικά ανώτερες, αυξήσεις στο BGP και μειώσεις στο TRAP-5b.

 

Cistanche Factory-by wecistanche

3.5 Μηριαία έκφραση οστεομεταβολικών γονιδίων και φλεγμονωδών παραγόντων

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, η ομάδα ελέγχου έδειξε χαμηλότερη έκφραση RUNX2 και OPG (σημείωση: πιθανή αντιστροφή κειμένου στην πηγή· οι αναλύσεις θα τηρούν ακατέργαστα δεδομένα). Σε σύγκριση με το μοντέλο, το υδατικό εκχύλισμα υψηλής δόσης είχε ανοδική τάση χωρίς σημασία (P > 0,05), ενώ η ομάδα χαμηλής δόσης αύξησε σημαντικά το RUNX2 και το OPG (P <0,05). Το PPAR έδειξε ελάχιστες διαφορές μεταξύ των ομάδων (Πίνακας 6). Σε σύγκριση με τον έλεγχο, η ομάδα μοντέλου είχε αυξημένα IL-6, IL-10 και p16. υδατικό εκχύλισμα υψηλής δόσης μείωσε σημαντικά το p16 έναντι του μοντέλου (Ρ < 0,05) (Πίνακας 7).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Το PEGP-85 αναμένεται να ρυθμίζει προς τα πάνω τα OPG και RUNX2 και να μειώνει τα RANKL, CTSK και τον δείκτη γήρανσης p16, σύμφωνα με τις επιδράσεις PhG στη σηματοδότηση MAPK/JNK και Wnt/‑κατενίνης [11,12,23].

 

3.6 Τ κύτταρα και υποομάδες μυελού των οστών

Η κυτταρομετρία ροής έδειξε ότι, σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα ποντίκια-μοντέλα είχαν σημαντικά μειώσει τα αρχαία CD4+ Τ κύτταρα και την αναλογία CD4+ Tn/Tm (P <0,01, P <0,05) και σημαντικά αύξησαν τα CD8+ TEM κύτταρα (P <0,01). Τα συνολικά CD4+ και CD8+ Τ κύτταρα, CD4+ και CD8+ TCM, CD4+ TEM, CD4+ και CD8+ TEFF και CD8+ Tn/Tm παρέμειναν αμετάβλητα. Σε σύγκριση με το μοντέλο, το υδατικό εκχύλισμα υψηλής δόσης αύξησε σημαντικά τα αρχαία CD4+ Τ κύτταρα (P < 0,05), έδειξε ανοδική τάση στο CD4+ Tn/Tm και μείωσε σημαντικά το CD8+ TEM (P <0,05). Οι χαμηλές και οι υψηλές δόσεις δεν άλλαξαν σημαντικά το συνολικό CD{4+/CD{8+, TCM, CD4+ TEM, TEFF ή CD{8+ Tn/Tm (Εικόνα 3, Πίνακες 8–9, ενισχυμένα συμπληρωματικά υλικά CNKI).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Το PEGP-85 υποτίθεται ότι ομαλοποιεί περαιτέρω τη σύνθεση των Τ κυττάρων μειώνοντας τις υπογραφές προ-οστεοκλαστογονικού τελεστή/μνήμης που συνδέονται με άξονες Th17/TEM [2,25,36], προστατεύοντας έτσι έμμεσα το οστό.

 

Εκχύλισμα Cistanche που ρυθμίζει τη ροή με wecistanche

3.7 Β κύτταρα και υποομάδες μυελού των οστών

Σε σύγκριση με τον έλεγχο, τα ποντίκια-μοντέλα εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερα αρχέγονα Β-κύτταρα και σημαντικά χαμηλότερα τερματικά Β-λεμφοκύτταρα (P <0,01), χωρίς σημαντικές αλλαγές στα συνολικά Β-κύτταρα ή στα Β-λεμφοκύτταρα μνήμης IgD+. Μετά από παρέμβαση με υδατικό εκχύλισμα, οι αναλογίες των πρωτογενών Β κυττάρων παρέμειναν υψηλές. Ωστόσο, η θεραπεία υψηλής δόσης προώθησε την ανάκτηση της μεταγωγής μνήμης και των τερματικών Β κυττάρων (Εικόνα 4, Πίνακας 10, συμπληρωματικά υλικά ενισχυμένα με CNKI).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Η PEGP-85 αναμένεται να ενισχύσει την ισορροπία ωρίμανσης των Β κυττάρων, η οποία μπορεί να ρυθμίσει την παραγωγή RANKL από τα κύτταρα Β γενεαλογίας και να ευνοήσει τον σχηματισμό οστού [39].

 

3.8 Κύτταρα και υποομάδες ΝΚ μυελού των οστών

Η ομάδα μοντέλου δεν έδειξε σημαντική μείωση στα συνολικά ΝΚ κύτταρα, αλλά είχε σημαντικά αυξημένα αρχέγονα κύτταρα ΝΚ και μειωμένα ώριμα τελεστικά κύτταρα ΝΚ (Ρ < 0,01). Τα πρώιμα τελεστικά και τα τελικά ΝΚ κύτταρα παρέμειναν αμετάβλητα. Σε σύγκριση με το μοντέλο, το υδατικό εκχύλισμα χαμηλής δόσης μείωσε σημαντικά τα αρχαία ΝΚ κύτταρα (P <0,05). άλλα υποσύνολα παρέμειναν αμετάβλητα (Εικόνα 5, Πίνακας 11, συμπληρωματικά υλικά ενισχυμένα με CNKI).

Βελτιστοποίηση με PEGP-85:

Το PEGP-85 μπορεί να βοηθήσει στην αποκατάσταση της δυναμικής ωρίμανσης της ΝΚ, μειώνοντας την προφλεγμονώδη παραμόρφωση που μπορεί να επηρεάσει την οστική ανανέωση [21].

Ενότητα 4. Συζήτηση
Αυτή η μελέτη καταδεικνύει ότι οι παρεμβάσεις Cistanche στο μοντέλο ταχείας γήρανσης SAMP6 ασκούν ευεργετικά αποτελέσματα στη μικροαρχιτεκτονική των οστών και στο ανοσοποιητικό περιβάλλον του μυελού των οστών. Πρώτον, το micro-CT δείχνει βελτιωμένη BMD και αυξημένο αριθμό δοκιδωτών, ενισχύοντας τη συνδεσιμότητα και ενδεχομένως τη μηχανική σταθερότητα. Δεύτερον, η ιστοπαθολογία επιβεβαιώνει τον μετριασμό της παθολογίας του μηριαίου μυελού. Τρίτον, το Cistanche ρυθμίζει τα υποσύνολα του ανοσοποιητικού μυελού-αποκαθιστώντας εν μέρει την ωρίμανση των Β-λεμφοκυττάρων, αυξάνοντας τα προηγούμενα CD4+ Τ κύτταρα και μειώνοντας το CD8+ TEM-σύμφωνα με έναν ανοσο-οστεολογικό μηχανισμό. Είναι σημαντικό ότι οι βελτιώσεις στη δομή των οστών συμπίπτουν με την επανεξισορρόπηση των υποομάδων του ανοσοποιητικού, υποστηρίζοντας μια υπόθεση σύζευξης οστού-άνοσης σύμφωνα με τη βιβλιογραφία οστεοανοσολογίας [1-3,25].

Μηχανιστικά, το Cistanche πιθανότατα δρα μέσω πολλαπλών αξόνων σηματοδότησης που σχετίζονται με την αναδιαμόρφωση των οστών-OPG/RANKL, Wnt/‑κατενίνη και TGF‑/BMP [12,19,23]-και όχι μόνο μέσω άμεσων δράσεων οστεοβλαστών/οστεοκλαστών. Τα ανοσοκύτταρα (Τ, Β, μυελοειδής, ΝΚ) επηρεάζουν βαθιά τα οστά μέσω κυτοκινών (π.χ. IL-17, TNF-, IFN-) και συνδιεγερτικών οδών [20,21,25,28,33,36]. Με την αναμόρφωση του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλοντος του μυελού, μειώνοντας το CD8+ TEM και ομαλοποιώντας τα υποσύνολα Β-λεμφοκυττάρων, το Cistanche μπορεί να καταστέλλει έμμεσα την οστεοκλαστογένεση και να υποστηρίξει την οστεοβλαστογένεση, συμπληρώνοντας τις άμεσες επιδράσεις στα οστικά κύτταρα [8,22-24].

 

Σχετικά πλεονεκτήματα:

 

Σε σύγκριση με παράγοντες που δρουν καθαρά στα οστικά κύτταρα, το Cistanche φαίνεται να προσφέρει μια διπλή διαδρομή: άμεση ρύθμιση της σηματοδότησης των οστών και έμμεση επαναβαθμονόμηση της ανοσολογικής ισορροπίας του μυελού [22-24,36]. Οι έντονες επιδράσεις στον αριθμό δοκιδωτών/συνδεσιμότητα υποδηλώνουν ένα όφελος σε επίπεδο συστήματος στη μικροαρχιτεκτονική ακεραιότητα.

Σχετικότητα με ασθενείς με οστεοπόρωση:

Η παθογένεση της οστεοπόρωσης περιλαμβάνει ανοσολογική απορρύθμιση παράλληλα με ελαττώματα σκελετικής αναδιαμόρφωσης [1-4,36]. Η ενσωμάτωση ανοσολογικών ενδείξεων ως φαρμακοδυναμικών δεικτών (π.χ. αναλογίες υποομάδων Τ και Β) μπορεί να βελτιώσει την αξιολόγηση βάσει μηχανισμών και ενδεχομένως να καθοδηγήσει επεμβάσεις ακριβείας στην πρωτοπαθή οστεοπόρωση ηλικιωμένων [40,41].

PEGP-85 (85% ολικοί φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες) ως βελτιστοποιημένο ερευνητικό εκχύλισμα:

Ισχυρή χημική λογική: Τα PhG (εχινακοσίδη, ακτεοσίδη) είναι δείκτες ποιότητας που συνδέονται με τη βιοδραστικότητα [7,8].

Μηχανιστική ευθυγράμμιση: Τα PhGs μπορούν να αναστείλουν την οστεοκλαστογένεση μέσω JNK/MAPK και να προάγουν την οστεογονική σηματοδότηση μέσω OPG/RANKL και Wnt/-κατενίνης [11,12,23].

Κλινικό/προκλινικό σήμα: Αυξημένη οστεοκαλσίνη και μειωμένοι δείκτες απορρόφησης σε ασθενείς και βελτιωμένα οστικά αποτελέσματα στα μοντέλα OVX και SAMP6, υποστηρίζουν αμφίδρομη ρύθμιση [9,10,23].

Ανοσο-οστεολογική προσαρμογή: Ενώ οι πολυσακχαρίτες είναι ισχυροί ανοσοτροποποιητές [13,14,24], μια τυποποίηση υψηλής PhG (PEGP-85) προσφέρει συνεπή, μετρήσιμη έκθεση στο οστεοδραστικό κλάσμα. Οι ζευγαρωμένοι βραχίονες με υδατικό εκχύλισμα θα αναλύσουν τα συστατικά που βασίζονται σε PhG έναντι πολυσακχαρίτη.

Περιορισμοί και μελλοντική εργασία

Θετικοί μάρτυρες: Τα συμβατικά αντιαπορροφητικά/αναβολικά (π.χ. διφωσφονικά) στοχεύουν κυρίως τα κύτταρα των οστών [37] και δεν συμπεριλήφθηκαν ως συγκρίσεις επί του μηχανισμού για την ανοσορύθμιση του μυελού. Μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να ενσωματώσουν έναν κατάλληλο ανοσοτροποποιητικό θετικό έλεγχο για την ενίσχυση της ερμηνευσιμότητας.

Πλαίσιο γήρανσης: Η αυξημένη p16 σε μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα SAMP6, παρόμοια με τη φυσική γήρανση, υποδηλώνει μια αναδιαμορφωμένη θέση του μυελού που επηρεάζει τη διασταύρωση του ανοσοποιητικού-οστού [38]. Τα στοχευμένα πειράματα θα πρέπει να ελέγξουν εάν οι ανοσολογικές επιδράσεις του Cistanche είναι απαραίτητες και επαρκείς για τα οφέλη των οστών (π.χ. χρησιμοποιώντας εξάντληση Τ/Β κυττάρων ή εξουδετέρωση RANKL).

Μεταφραστικοί δείκτες: Η διαχρονική παρακολούθηση των ανοσολογικών υποομάδων του μυελού μπορεί να χρησιμεύσει ως φαρμακοδυναμικοί βιοδείκτες για τη θεραπευτική απόκριση στην οστεοπόρωση [40,41].

 

Έγκυρες αναφορές

Οστεοανοσολογία του πυρήνα και αναδιαμόρφωση των οστών

[1] Tsukasaki Μ, Takayanagi H. Nat Rev Immunol. 2019;19(10):626.
[2] Sato K, et al. J Exp Med. 2006;203(12):2673.
[3] Fischer V, Haffner-Luntzer M. Semin Cell Dev Biol. 2022;123:14.
[19] Wu M, Chen G, Li YP. Bone Res. 2016; 4:16009.
[25] Okamoto K, et al. Physiol Rev. 2017;97(4):1295.

Cistanche χημεία και φαρμακολογία
[7] 曹兆元 等. 中国中药杂志. 2022;47(07):1790. (δείκτες ποιότητας HPLC‑Q‑TOF‑MS/MS)
[8] Liu X, et al. Θρεπτικά συστατικά. 2025;17(9):1501. (Ολοκληρωμένη κριτική)
[9] 吴泱 等. 中国现代医生. 2019;57(06):120. (Κλινική παρατήρηση)
[10] 朱刚 等. 吉林大学学报(医学版). 2018;44(01):68. (Αρουραίοι OVX)
[11] 李岳尧 等. 中国组织工程研究. 2025;29(06):1144. (JNK/MAPK)
[12] 李强 等. 中华中医药学刊. 2025‑07‑08 στο διαδίκτυο. (OPG/RANKL, Wnt/‑κατενίνη)
[22] He J, et al. Front Pharmacol. 2019;10:1344.
[23] Wang F, et al. J Ethnopharmacol. 2021;271:113899. (SAMP6, ολικοί γλυκοσίδες + πολυσακχαρίτες)

Ανοσολογική ρύθμιση και οστό
[20] Yang N, Liu Y. Int J Med Sci. 2021;18(16):3697.
[21] Saxena Y, et al. Front Immunol. 2021;12:687037.
[24] Song D, et al. J Cell Physiol. 2018;233(12):9674.
[28] Blauvelt A, Chiricozzi A. Clin Rev Allergy Immunol. 2018;55(3):379.
[33] Tang M, et al. Front Immunol. 2018;9:1508.
[36] Huang F, et al. J Cell ΜοΙ Med. 2022;26(13):3591.
[39] 张云云 等. 自然杂志. 2020;42(02):102.
[40] Wang S, et al. Front Endocrinol. 2024;15:1323647.
[41] Wu Y, et al. Cell Death Discov. 2023;9(1):135.

Πρόσθετες αναφορές μεθόδων
[17] Jiang Y, et al. J Μυοσκελετική Νευρωνική Αλληλεπίδραση. 2000;1(1):45.
[18] Ma Z, et al. Biochem Biophys Res Commun. 2024;735:150820.
[37] 邢帅 等. 风湿病与关节炎. 2016;5(03):70.
[38] Sui B, et al. Sci Rep. 2016;6:30186.