Μορφολογικές Αναλύσεις Έκφρασης Νεφρίνης σε Προοδευτική Σπειραματονεφροπάθεια

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Αφηρημένη:

Σε αυτή τη μελέτη, εστιάσαμε στη νεφρίνη, ένα από τα βασικά μόρια στο διάφραγμα της σχισμής των ποδοκυττάρων, καθώς αν και έχουν αναφερθεί αναφορές για την έκφρασή της σε ανθρώπους και αρουραίους, δεν έχει αναφερθεί η παρουσία τους σε κοινά μαρμοσετάκια. Διερευνήσαμε την έκφραση της νεφρίνης και τις αλλαγές στα σπειράματα, ανάλογα με την ανάπτυξη αυθόρμητης προοδευτικής σπειραματονεφροπάθειας σε κοινά μαρμοζωάρια. Αξιολογήθηκαν δεκαεννέα κοινά μαρμόζετ σε ηλικία δύο έως δέκα ετών. Ο νεφρός εξετάστηκε με μικροσκόπιο με αιματοξυλίνη και ηωσίνη και ανοσοϊστοχημική χρώση για νεφρίνη. Οι βλάβες ταξινομήθηκαν σε τρεις βαθμούς σύμφωνα με ένα σύστημα ταξινόμησης νεφρικής βλάβης που αναφέρθηκε προηγουμένως. Η θετική σε νεφρίνη περιοχή μετρήθηκε με μορφομετρική ανάλυση και υπολογίστηκε η θετική σε νεφρίνη αναλογία. Παρατηρήθηκε έκφραση νεφρίνης κατά μήκος του σπειραματικού τριχοειδούς βρόχου σε συνεχή γραμμικό μοτίβο σε βαθμούς νεφρικής βλάβης 0 έως 2 και είτε ασυνεχές γραμμικό ή χονδρόκοκκο μοτίβο στον βαθμό 3. Η έκφραση νεφρίνης έτεινε να μειώνεται σημαντικά ανάλογα με τον βαθμό των νεφρικών αλλοιώσεων . Η αλλαγή στην έκφραση της νεφρίνης έχει προταθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη των νεφρικών βλαβών.

Λέξεις-κλειδιά:νεφρίνη, μαρμοζέτα,σπειραματονεφροπάθεια, νεφρό, παθολογία

οφέλη από το κιστάνσι της ερήμουκαιΦυτό Cistancheείναι καλό γιανεφρό

Εισαγωγή

Η αυθόρμητη προοδευτική σπειραματονεφροπάθεια σε κοινές μαρμοσέτες (Callithrix jacchus) είναι γνωστό ότι εμφανίζεται συχνά από την ηλικία των δύο ετών, με τη σοβαρότητα της βλάβης να εξελίσσεται με την ηλικία. Προηγουμένως αναφέραμε πρωτογενείς και προοδευτικές βλάβες νεφροπάθειας σε κοινές μαρμοσέτες1. Οι πρωτογενείς σπειραματικές αλλαγές της νεφροπάθειας πρώιμου σταδίου χαρακτηρίζονται από εξάλειψη των διεργασιών του ποδοκυττάρου και μερική πάχυνση της σπειραματικής βασικής μεμβράνης, που θεωρείται ότι προκαλεί διαρροή πρωτεΐνης από τα σπειράματα και μπορεί να παρατηρηθεί με υπερμικροσκόπηση αλλά όχι με μικροσκοπία φωτός1-3. Επιπλέον, η ανοσοσφαιρίνη παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη της νεφροπάθειας1, 2. Το IgM εναποτίθεται στο μεσάγγιο στο πρώιμο στάδιο της σπειραματονεφροπάθειας και μετά την πρώτη εναπόθεση IgM, η περιοχή εναπόθεσης επεκτείνεται σε ολόκληρο το σπείραμα και τα IgA και IgG είναι κατατίθεται με πρόοδο2. Τα υαλικά εκμαγεία που υποδηλώνουν διαρροή πρωτεΐνης από τα σπειράματα μπορούν να παρατηρηθούν με μικροσκοπία φωτός με την εξέλιξη της σπειραματονεφροπάθειας4. Η πρωτεϊνουρία επιδεινώνει την εξέλιξη των σωληναρισιακών αλλοιώσεων σε κοινές μεμβράνες4, όπως στους ανθρώπους5, 6, και, σε μια πρόσφατη μελέτη των σπειραμάτων, η πρωτεϊνουρία θα μπορούσε να προκληθεί από διαταραχές του διαφράγματος της σχισμής, συνδέοντας έτσι τις γειτονικές διεργασίες του ποδιού (ποδίσκους) του ποδοκυττάρου. Το διάφραγμα της σχισμής είναι ένα σύμπλεγμα μεσοκυττάριας σύνδεσης που υπάρχει μεταξύ γειτονικών διεργασιών του ποδιού και έχουν εντοπιστεί ορισμένα μόρια που σχετίζονται με τον σχηματισμό του3. Η μείωση της έκφρασης αυτών των μορίων ή η δυσλειτουργία του διαφράγματος της σχισμής πιστεύεται ότι σχετίζεται με την εξέλιξη της πρωτεϊνουρίας3. Η νεφρίνη, ένα από τα βασικά μόρια που εκφράζονται στο διάφραγμα της σχισμής των ποδοκυττάρων, είναι μια γλυκοπρωτεΐνη που αποτελείται από 1241 αμινοξέα και είναι ένας πολύ γνωστός βιοδείκτης που χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση της διαταραχής των διαφραγμάτων σχισμής7–10. Τα μόρια που σχετίζονται με τα διαφράγματα σχισμής δεν έχουν μελετηθεί στη νεφροπάθεια των κοινών μαρμοσετών, αν και είναι γνωστό ότι η αλλοίωση των διεργασιών του ποδιού του ποδοκυττάρου και η εξέλιξη της πρωτεϊνουρίας συμβαίνουν σε αυτά. Επιπλέον, έχουν υπάρξει αναφορές για την έκφραση της νεφρίνης σε ανθρώπους και αρουραίους7–12, αλλά όχι σε μαρμόζους. Επομένως, διερευνήσαμε την έκφραση νεφρίνης στα σπειράματα και τις αλλαγές στην έκφραση της νεφρίνης, ανάλογα με την εξέλιξη της βλάβης, με ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις.

cistanche tcm

Υλικά και μέθοδοι

Των ζώων

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Κεντρικού Ιδρύματος Πειραματικών Ζώων (CIEA, Kawasaki, Ιαπωνία) και διεξήχθη αυστηρά σύμφωνα με τους Κανονισμούς για Πειραματισμούς σε Ζώα της CIEA με βάση τις Κατευθυντήριες γραμμές για την ορθή συμπεριφορά του Animal Experiments (Science Council of Japan, 2006). Δεκαεννέα κοινά μαρμόζετ (11 αρσενικά και 8 θηλυκά) από την CLEA Japan Inc. (Τόκιο, Ιαπωνία) αξιολογήθηκαν. Οι ηλικίες τους κυμαίνονταν από 2 έως 10 χρόνια τη στιγμή της νεκροψίας. Τα ζώα στεγάστηκαν σε κλουβιά σε δωμάτιο ζώων που διατηρήθηκε σε θερμοκρασία 26 ± 3 βαθμών και υγρασία 55 ± 20 τοις εκατό . Τροφοδοτήθηκαν με LCMS-1M (CLEA Japan Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) και νερό βρύσης. Τα ζώα θυσιάστηκαν ανθρώπινα υπό αναισθησία με πεντοβαρβιτάλη νάτριο λόγω διαφόρων αιτιών θανάτου (όπως σύνταξη, καμπυλότητα οσφυϊκών σπονδύλων, εξάρθρωση της κάτω γνάθου κ.λπ.). Δεν πραγματοποιήθηκε ανάλυση ούρων επειδή δεν ήταν δυνατή η δειγματοληψία ούρων.

Ιστοπαθολογία

ονεφράεγχύθηκαν με αλατούχο διάλυμα, ακολουθούμενο από 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη, και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη ουδέτερου ρυθμιστικού διαλύματος 10 τοις εκατό για μικροσκοπική εξέταση. Τα δείγματα ενσωματώθηκαν σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν σε πάχος 5 μm και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (ΗΕ). Οι βλάβες ταξινομήθηκαν ως σπειραματικές, σωληναριακές και διάμεσες βλάβες με βάση δημοσιευμένα κριτήρια1. Οι βαθμοί νεφροπάθειας χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες: βαθμού 1 (3 άνδρες και 1 γυναίκα), βαθμός 2 (3 άνδρες και 5 γυναίκες), βαθμός 3 (1 άνδρας και 3 γυναίκες) και βαθμός 4 (3 άνδρες) (Πίνακας 1).

Για την ανοσοϊστοχημεία, ένα μονοκλωνικό αντίσωμα κατά της εξωκυτταρικής περιοχής ανθρώπινης προέλευσηςνεφρίνη(1:1,000, Νεφρίνηg{{0}}, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA) χρησιμοποιήθηκε ως το κύριο αντίσωμα. Τα τμήματα 5-μm αποπαραφινώθηκαν, επανυδατώθηκαν, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 3 τοις εκατό υπεροξείδιο του υδρογόνου σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά και στη συνέχεια θερμάνθηκαν σε αυτόκλειστο στους 121 βαθμούς για 20 λεπτά σε διάλυμα ανάκτησης στόχου (pH 6,0, Dako, Glostrup, Δανία). Μετά την ψύξη, οι τομές επωάστηκαν με το πρωτεύον αντίσωμα στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα. Συζευγμένο με υπεροξειδάση πολυμερές IgG κατά ποντικού και κουνελιού (Histofine Simple Stain Rat MAX-PO(MULTI), Nichirei Bioscience Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) χρησιμοποιήθηκαν ως δευτερεύον αντίσωμα για τη μέθοδο που βασίζεται σε πολυμερές13. Οι τομές επωάστηκαν με το δευτερογενές πολυμερές αντίσωμα σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά και τα αντιδρώντα προϊόντα έγιναν ορατά χρησιμοποιώντας 3,3'-διαμινοβενζιδίνη ως χρωμογόνο. Έγινε αντιχρώση με αιματοξυλίνη. Για τον αρνητικό έλεγχο, το πρωτογενές αντίσωμα παραλείφθηκε.

Μορφολογική ανάλυση

Για μορφολογική ανάλυση, τα σπειράματα με το σπειραματικό χείλος υποβλήθηκαν για εξέταση και συλλήφθηκαν 16 έως 28 σπειράματα σε κάθε διαφάνεια (Πίνακας 1) χρησιμοποιώντας έναν σαρωτή ολόκληρης διαφάνειας (Aperio AT2, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL, USA) και ένα αντίστοιχο λογισμικό προβολής διαφανειών παθολογίας (Aperio ImageScope, Leica Microsystems Inc.) στην ίδια ανάλυση και μέγεθος εικόνας.Νεφρίνη-Οι θετικές και ολόκληρες σπειραματικές περιοχές υπολογίστηκαν με ένα λογισμικό ανάλυσης εικόνας (Image-Pro V10, Mediacybenetics Inc., Rockville MD, ΗΠΑ) σχεδιάζοντας μια περιοχή ενδιαφέροντος γύρω από το σπειράμα, σύμφωνα με προηγούμενη αναφορά14. Ολόκληρη η σπειραματική περιοχή ορίστηκε ως η περιοχή που μπορεί να διακριθεί από το λευκό φόντο. Τα χρωματικά όρια για τον υπολογισμόνεφρίνη-Οι θετικές περιοχές προσδιορίστηκαν σύμφωνα με κάθε κατάσταση χρώσης. Τα όρια για το κόκκινο, το πράσινο και το μπλε ήταν 37–67, 31–77 και 32–88, αντίστοιχα. Η θετική αναλογία νεφρίνης υπολογίστηκε διαιρώντας τις μετρήσεις τουνεφρίνη-θετική περιοχή πάνω από τη σπειραματική περιοχή. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Jonckheere (επίπεδο σημαντικότητας: 5 τοις εκατό, μονόπλευρη δοκιμή) για να αξιολογηθεί η τάση μεταξύ του βαθμού νεφροπάθειας και της έκφρασηςνεφρίνη.

κοστάνς

Αποτελέσματα

Οι παθολογικές βαθμολογίες και οι βαθμοί μεμονωμένων νεφρικών βλαβών φαίνονται στον Πίνακα 1. Όπως αναφέρθηκε στην πρώτη μας αναφορά1, ο βαθμός της βλάβης έτεινε να αυξάνεται με την ηλικία και δεν υπήρχε εμφανής διαφορά φύλου. Τα αποτελέσματα της ανοσοϊστοχημικής χρώσης τουνεφρίνηφαίνονται στο Σχ. 1, και τονεφρίνηΗ θετική αναλογία φαίνεται στο Σχ. 2 και στον Πίνακα 1. Μεταξύ των βαθμολογιών και βαθμών στον Πίνακα 1, ο βαθμός νεφρικής βλάβης, που προέρχεται από τη συνολική βαθμολογία κάθε νεφρικής βλάβης, και η βαθμολογία υαλώδους γύψου χρησιμοποιήθηκαν για σύγκριση μενεφρίνη-θετική αναλογία (Εικ. 2 και 3). Οι μεμονωμένες περιπτώσεις στον Πίνακα 1 παρουσιάζονται με αύξουσα σειρά βαθμού νεφρικής βλάβης. Παρατηρήθηκε έκφραση νεφρίνης μαζί με τον σπειραματικό τριχοειδές βρόχο σε συνεχές γραμμικό σχέδιο στους βαθμούς 0 έως 2 (Εικ. 1A-C) και ένα ασυνεχές γραμμικό ή χονδρόκοκκο μοτίβο στους βαθμούς 3 (Εικ. 1D). Στο δείγμα αρνητικού ελέγχου, καμία θετική αντίδραση γιανεφρίνηπαρατηρήθηκε σε οποιαδήποτε τοποθεσία.

Η σύγκριση τωννεφρίνη-η θετική αναλογία προς τον βαθμό νεφρικής βλάβης φαίνεται στο σχήμα 2. Σε περιπτώσεις νεφρικής βλάβης βαθμού 0, η μέση ± τυπική απόκλιση (SD) τουνεφρίνηΗ θετική αναλογία ήταν 5,66 ± 1,18 τοις εκατό και οι μέγιστες, ελάχιστες και διάμεσες τιμές ήταν 6,84 τοις εκατό, 4,27 τοις εκατό και 5,76 τοις εκατό, αντίστοιχα. Στις περιπτώσεις βαθμού 1, ο μέσος όρος ± SD ήταν 3,99 ± 1,61 τοις εκατό και οι μέγιστες, ελάχιστες και διάμεσες τιμές ήταν 5,69 τοις εκατό , 1,19 τοις εκατό και 4,35 τοις εκατό, αντίστοιχα. Στις περιπτώσεις βαθμού 2, ο μέσος όρος ± SD ήταν 3,82 ± 2,25 τοις εκατό και οι μέγιστες, ελάχιστες και διάμεσες τιμές ήταν 6,71 τοις εκατό, 1,58 τοις εκατό και 3,49 τοις εκατό, αντίστοιχα. Στις περιπτώσεις βαθμού 3, ο μέσος όρος ± SD ήταν 2,52 ± 1.02 τοις εκατό και οι μέγιστες, ελάχιστες και διάμεσες τιμές ήταν 3,67 τοις εκατό , 2,17 τοις εκατό και 2,17 τοις εκατό, αντίστοιχα. Συλλογικά, οι μεμονωμένες διαφορές στην έκφραση της νεφρίνης ήταν μικρές σε περιπτώσεις βαθμού 0, αλλά μεγάλες σε περιπτώσεις βαθμού 1 ή υψηλότερου και ανιχνεύτηκε σποραδικά χαμηλή θετική έκφραση.ΝεφρίνηΗ έκφραση έτεινε να μειώνεται ανάλογα με τον βαθμό των νεφρικών βλαβών (Εικ. 2). Υπήρχε μια σημαντικά χαμηλότερη τάση μεταξύ του βαθμού νεφρικής βλάβης καινεφρίνη-θετική αναλογία σύμφωνα με το τεστ Jonckheere (ρ=0.0166). Η βαθμολογία υαλώδους γύψου σε σύγκριση με τον βαθμό νεφρικής βλάβης φαίνεται στο Σχήμα 3. Σε περιπτώσεις με βαθμολογία υαλώδους εκμαγείου 0, η μέση ± SD αναλογία θετικής νεφρίνης ήταν 5,40 ± 1,32 τοις εκατό, στη βαθμολογία 1 περιπτώσεις, ήταν 4,10 ± 1,70 τοις εκατό και στη βαθμολογία 2 των περιπτώσεων, ήταν 3,37 ± 1,98 τοις εκατό. Υπήρχε μια σημαντικά χαμηλότερη τάση μεταξύ της βαθμολογίας υαλώδους γύψου και της θετικής αναλογίας νεφρίνης σύμφωνα με το τεστ Jonckheere (p{19}}.0654).

Συζήτηση

Μια μείωση στη νεφρίνη συσχετίστηκε με την εξέλιξη των νεφρικών βλαβών κατά την ανάπτυξη σπειραματονεφροπάθειας μαρμόζετ. Το αντίσωμα κατά της νεφρίνης που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη αναγνώρισε την εξωκυτταρική περιοχή στη Ν-τελική πλευρά. Αυτή η εξωκυτταρική περιοχή αλληλεπιδρά με τα μόρια NEPH1 και σχηματίζει μια δομή που μοιάζει με φερμουάρ μέσα στο διάφραγμα σχισμής15. Ο εντοπισμός της νεφρίνης στα φυσιολογικά σπειράματα είναι κατά μήκος του σπειραματικού τριχοειδούς βρόχου και το σχέδιο χρώσης είναι ένα γραμμικό σχέδιο συνεχών λεπτών κόκκων τόσο σε αρουραίους όσο και σε ανθρώπους11, 12, 16-18. Η χρώση που πραγματοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη είναι κατάλληλη. κάτι που επιβεβαιώνεται από την παρατήρηση ότι τα τοιχώματα των τριχοειδών που έρχονται σε επαφή με τη μεσαγγειακή περιοχή δεν χρωματίστηκαν, ενώ αυτά που έρχονται σε επαφή με τα ποδοκύτταρα. Κάτω από μη φυσιολογικές συνθήκες, όπως το νεφρωσικό σύνδρομο στον άνθρωπο ή η νεφρωσική αμινονουκλεοσίδη πουρομυκίνης σε αρουραίους, το μοτίβο χρώσης νεφρίνης στα σπειράματα είναι ασυνεχές και χονδρόκοκκο και η ένταση της ανοσοϊστοχημικής χρώσης είναι ασθενέστερη από ό,τι στην κανονική μελέτη σπειράματα11, 176. , το μοτίβο έκφρασης νεφρίνης στους βαθμούς 0 έως 2 ήταν φυσιολογικό. Ωστόσο, το σχέδιο χρώσης στους βαθμούς 3 ήταν συγκρίσιμο με αυτό των μη φυσιολογικών συνθηκών. Σε μια προηγούμενη έρευνα έκφρασης σπειραματικής νεφρίνης σε αρουραίους Crl: CD(SD) με νόσο ελάχιστης αλλαγής, η έκφραση νεφρίνης ήταν ανέπαφη, αν και οι διεργασίες του ποδιού του ποδοκυττάρου έδειξαν εξάλειψη σε ηλεκτρονική μικροσκοπία χωρίς εμφανείς μορφολογικές αλλαγές που παρατηρήθηκαν σε μικροσκόπιο φωτός18. Στην κοινή νεφρική νόσο των αρουραίων, τη χρόνια προοδευτική νεφροπάθεια (CPN), έχει αποδειχθεί ότι η λευκωματουρία συνοδευόμενη από CPN πρώιμου σταδίου μπορεί να οδηγήσει σε λιγότερες αλλαγές στη σπειραματική διαπερατότητα από την αδυναμία επαναρρόφησης της λευκωματίνης από τα εγγύς σωληνάρια19. Στους ανθρώπους, έχουν γίνει κάποιες έρευνες σχετικά με τη μείωση της έκφρασης της νεφρίνης υπό μικρές αλλαγές10 ή υπό άλλες νεφρικές παθήσεις14, 16. Από την άλλη πλευρά, έχει υπάρξει αναφορά για άθικτη έκφραση νεφρίνης σε νεφρίτιδα ελάχιστης αλλαγής20. Η παρουσία ή η απουσία μιας αλλαγής στην έκφραση της νεφρίνης στη νεφρωτική νόσο ελάχιστης αλλαγής εξακολουθεί να συζητείται. Στην πραγματικότητα, ήταν δύσκολο να επιβεβαιωθεί η αύξηση ή η μείωση της αντίδρασης αντισωμάτων της νεφρίνης με οπτική παρατήρηση στη νεφροπάθεια μαρμόζετ, αλλά ήταν δυνατό να ανιχνευθεί η αλλαγή σε ολόκληρο το νεφρό με ανάλυση εικόνας. Η έρευνά μας υποδηλώνει ότι η ανωμαλία των διαφραγμάτων σχισμής του σπειράματος μπορεί να εμπλέκεται στην εξέλιξη της νεφροπάθειας σε κοινές μαρμοσέτες λόγω μείωσης της νεφρίνης. Ο μετασχηματισμός του προτύπου θετικής χρώσης της νεφρίνης, από γραμμικό στο κοκκώδες σχέδιο, έχει αναφερθεί σε μοντέλο νεφρωτικής νόσου σε ζώα αρουραίων κατά την ανάπτυξη της βλάβης11, 16, 21. Μια συσχέτιση μεταξύ ανωμαλιών της μεμβράνης της σχισμής και πρωτεϊνουρίας έχει έχουν αναφερθεί συχνά22, 23; Ως εκ τούτου, έχει υποτεθεί ότι η πρωτεϊνουρία μπορεί να προκαλείται από δυσλειτουργία του διαφράγματος σχισμής. Στη μελέτη μας για τη νεφροπάθεια μαρμοσετών, η πρόοδος της διαπερατότητας της σπειραματικής πρωτεΐνης λόγω δυσλειτουργίας του διαφράγματος σχισμής μπορεί να συνέβη επειδή τα μορφολογικά χαρακτηριστικά των υαλοειδών εκμαγείων παρατηρήθηκαν μόνο στις περιπτώσεις χωρίς σωληναρισιακές αλλοιώσεις. Σε αυτή τη μελέτη, δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ της βαθμολογίας των μορφολογικών αλλαγών των υαλοειδών εκμαγείων και της μείωσης της έκφρασης νεφρίνης. Ωστόσο, η έκφραση της νεφρίνης τείνει να μειώνεται ανάλογα με τη βαθμολογία υαλώδους εκμαγείου, η οποία είναι ένας δείκτης διαρροής πρωτεΐνης από το σπείραμα.

Στην προηγούμενη έρευνά μας, παρατηρήθηκε εξάλειψη των διεργασιών του ποδιού στο πρώιμο στάδιο της νεφροπάθειας μαρμοσετών και η προσβεβλημένη περιοχή απόφυσης του ποδιού επεκτάθηκε ανάλογα με τον βαθμό 1 της νεφρικής βλάβης. Ο Πίνακας 2 δείχνει τη σχέση μεταξύ του ρυθμού μείωσης της νεφρίνης σε αυτή τη μελέτη και των ευρημάτων της ηλεκτρονικής μικροσκοπίας για κάθε βαθμό νεφρικής βλάβης από μια προηγούμενη μελέτη. Η εξάλειψη θεωρείται ότι οφείλεται σε διάσπαση του κυτταροσκελετού της ακτίνης των διεργασιών του ποδιού24. Η νεφρίνη αποφωσφορυλιώνεται όταν κατασκευάζεται η μεμβράνη της σχισμής και συνδέεται με την ακτίνη μέσω του CD2AP και της ποδοκίνης25, 26. Όταν τραυματίζεται ένα διάφραγμα της σχισμής, τα μόρια της νεφρίνης συγκεντρώνονται, προκαλώντας φωσφορυλίωση νεφρίνης, πολυμερισμό ακτίνης και εξάλειψη της διαδικασίας των ποδιών26. Η φωσφορυλίωση της νεφρίνης εμφανίζεται επίσης γρήγορα μετά την επαγωγή της εξάλειψης της διαδικασίας του ποδιού στο μοντέλο θειικής πρωταμίνης σε ποντίκια27. Η νεφρίνη είναι μια σπειραματική πρωτεΐνη προσκόλλησης που σχετίζεται με την ωρίμανση, τη διαφοροποίηση, το σχηματισμό διεργασιών και τη σηματοδότηση των ποδοκυττάρων24. Η έρευνά μας έδειξε ότι υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της μείωσης της έκφρασης της νεφρίνης, όπως προσδιορίζεται από την ανοσοϊστοχημεία, και της εξέλιξης βαθμού νεφρικής βλάβης, υποδηλώνοντας μια επέκταση της εξάλειψης των διεργασιών του ποδιού του ποδοκυττάρου. Ωστόσο, δεν είναι σαφές εάν οι ανωμαλίες στο πρωτεϊνικό σύμπλεγμα του διαφράγματος της σχισμής προκαλούν βλάβη στις διεργασίες του ποδιού του ποδοκυττάρου ή εάν η βλάβη των ποδοκυττάρων προκαλεί αλλαγές στα διαφράγματα της σχισμής και μείωση της νεφρίνης. Δεδομένου ότι η νεφρίνη εμπλέκεται επίσης στη διαφοροποίηση των ποδοκυττάρων, πιστεύεται ότι αυτή η σχέση θα αποσαφηνιστεί περαιτέρω με δεδομένα σχετικά με την αναγέννηση και τη διαφοροποίηση των ποδοκυττάρων.

Συμπερασματικά, τα αποτελέσματά μας παρέχουν πληροφορίες γιανεφρίνηέκφραση σε προοδευτική σπειραματονεφροπάθεια σε κοινές μαρμοζέτες. Η μορφολογική ανάλυση αποκάλυψε χαμηλότερη τάσηνεφρίνηέκφραση σε ποδοκύτταρα σε προοδευτική σπειραματονεφροπάθεια των κοινών μαρμοζώνων και η μεταβολή τουνεφρίνηΗ έκφραση προτάθηκε ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη των νεφρικών βλαβών.

Αποκάλυψη πιθανών συγκρούσεων συμφερόντων:

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν σύγκρουση συμφερόντων.

Αναγνώριση:

Οι συγγραφείς θα ήθελαν να ευχαριστήσουν τον κ. Takayoshi Ito για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια που παρείχαν. Οι συγγραφείς ευχαριστούν επίσης την κα Kanae Tamatsukuri και τον κ. James Harada για τη γλωσσική επιμέλεια του χειρογράφου.

sistanch

βιβλιογραφικές αναφορές
1. Yamada N, Sato J, Kanno T, Wako Y, and Tsuchitani M. Μορφολογική μελέτη της προοδευτικής σπειραματονεφροπάθειας σε κοινές μαρμοσέτες (Callithrix jacchus). Toxicol Pathol. 41: 1106–1115. 2013.
2. Yamada N, Hashimoto N, Kamiie J, Doi T, Sato J, Inoue T, Shirota K, and Tsuchitani M. Σχέση μεταξύ εναπόθεσης ανοσοσφαιρίνης και πρώιμων βλαβών προοδευτικής σπειραματονεφροπάθειας σε νεαρά κοινά μαρμοζέτα. Vet Pathol. 55: 173–176. 2018.
3. Cara-Fuentes G, Clapp WL, Johnson RJ και Garin EH. Παθογένεια πρωτεϊνουρίας σε ιδιοπαθή νόσο ελάχιστης μεταβολής: μοριακοί μηχανισμοί. Pediatr Nephrol. 31: 2179–2189. 2016.
4. Isobe K, Adachi K, Hayashi S, Ito T, Miyoshi A, Kato A, και Suzuki M. Αυθόρμητες σπειραματικές και σωληναρισιακές βλάβες σε κοινές μαρμοσέτες (Callithrix jacchus). Vet Pathol. 49: 839–845. 2012.
5. Eddy AA. Πρωτεϊνουρία και διάμεση κάκωση. Μεταμόσχευση Nephrol Dial. 19: 277–281. 2004.
6. Hingorani S, Gooley T, Pao E, Sandmaier B, and McDonald G. Κυτοκίνες ούρων μετά από HCT: στοιχεία για νεφρική φλεγμονή στην παθογένεση της πρωτεϊνουρίας καινεφρόνόσος. Μεταμόσχευση μυελού των οστών. 49: 403–409. 2014.
7. Kestilä M, Lenkkeri U, Männikkö M, Lamerdin J, McCready P, Putaala H, Ruotsalainen V, Morita T, Nissinen M, Herva R, Kashtan CE, Peltonen L, Holmberg C, Olsen
A, και Tryggvason K. Το θέσιμα κλωνοποιημένο γονίδιο για μια νέα σπειραματική πρωτεΐνη--νεφρίνη-- μεταλλάσσεται στο συγγενές νεφρωσικό σύνδρομο. ΜοΙ Cell. 1: 575–582. 1998.
8. Langham RG, Kelly DJ, Cox AJ, Thomson NM, Holthöfer H, Zaoui P, Pinel N, Cordonnier DJ και Gilbert RE. Πρωτεϊνουρία και έκφραση της πρωτεΐνης του διαφράγματος της σχισμής των ποδοκυττάρων, της νεφρίνης, στη διαβητική νεφροπάθεια: επιδράσεις της αναστολής του μετατρεπτικού ενζύμου της αγγειοτενσίνης. Διαβητολογία. 45: 572–1576. 2002.
9. Welsh GI, και Saleem MA. Μόριο υπογραφής νεφρίνης του σπειραματικού ποδοκυττάρου; J Pathol. 220: 328–337. 2010.
10. van de Lest NA, Zandbergen M, IJpelaar DHT, Wolterbeek R, Bruijn JA, Bajema IM και Scharpfenecker M. Η απώλεια νεφρίνης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την πρόβλεψη της ύφεσης και της μακροχρόνιας νεφρικής έκβασης σε ασθενείς με νόσο ελάχιστης αλλαγής.ΝεφρόInt Rep. 3: 168–177. 2017.
11. Kawachi Η, Koike Η, Kurihara Η, Yaoita E, Orikasa Μ, Shia ΜΑ, Sakai T, Yamamoto T, Salant DJ και Shimizu F. Κλωνοποίηση νεφρίνης αρουραίου: έκφραση σε αναπτυσσόμενα σπειράματα και σε πρωτεϊνουρικές καταστάσεις.ΝεφρόInt. 57: 1949–1961. 2000.
12. Luimula P, Ahola H, Wang SX, Solin ML, Aaltonen P, Tikkanen I, Kerjaschki D και Holthöfer H. Nephrin σε πειραματική σπειραματική νόσο.ΝεφρόInt. 58: 1461–1468. 2000.
13. Janardhan KS, Jensen H, Clayton NP και Herbert RA. Ανοσοϊστοχημεία σε διερευνητική και τοξικολογική παθολογία. Toxicol Pathol. 46: 488–510. 2018.
14. Koop K, Eikmans M, Baelde HJ, Kawachi H, De Heer E, Paul LC και Bruijn JA. Έκφραση μορίων που σχετίζονται με ποδοκύτταρα σε επίκτητο άνθρωπονεφρόασθένειες. J Am Soc Nephrol. 14: 2063–2071. 2003.
15. Gerke P, Huber TB, Sellin L, Benzing T, and Walz G. Ομοδιμερισμός και ετεροδιμερισμός των πρωτεϊνών σπειραματικών ποδοκυττάρων νεφρίνη και NEPH1. J Am Soc Nephrol. 14: 918–926. 2003.
16. Doublier S, Ruotsalainen V, Salvidio G, Lupia E, Biancone L, Conaldi PG, Reponen P, Tryggvason K και Camussi G. Η ανακατανομή της νεφρίνης στα ποδοκύτταρα είναι ένας πιθανός μηχανισμός πρωτεϊνουρίας σε ασθενείς με πρωτοπαθές επίκτητο νεφρωσικό σύνδρομο. Am J Pathol. 158: 1723–1731. 2001.
17. Kawakami H, Kamiie J, Yasuno K, Kobayashi R, Aihara N, and Shirota K. Δυναμική της απόλυτης ποσότητας νεφρίνης σε ένα μεμονωμένο ποδοκύτταρο σε αρουραίους νεφρωσης με αμινονουκλεοσίδη πουρομυκίνης υπολογίστηκε με προσέγγιση ποσοτικής σπειραματικής πρωτεϊνικής με επιλεγμένο τρόπο παρακολούθησης αντίδρασης. Μεταμόσχευση Nephrol Dial. 27: 1324–1330. 2012.
18. Yasuno K, Honda K, Hakamata S, Kai K, and Mori K. Νόσος ελάχιστης αλλαγής τουνεφρόσε έναν νεαρό αρουραίο Sprague Dawley. J Toxicol Pathol. 31: 55–59. 2018.
19. Obert LA, and Frazier KS. Ενδονεφρική συμμετοχή του συστήματος ρενίνης-αγγειοτενσίνης στην παθογένεση της χρόνιας προοδευτικής νεφροπάθειας-γεφυρώνοντας το ενημερωτικό χάσμα μεταξύ των κλάδων. Toxicol Pathol. 47: 799–816. 2019.
20. Patrakka J, Ruotsalainen V, Ketola I, Holmberg C, Heikinheimo M, Tryggvason K, and Jalanko H. Έκφραση της νεφρίνης στην παιδιατρικήνεφρόασθένειες. J Am Soc Nephrol. 12: 289–296. 2001.
21. Saran AM, Yuan H, Takeuchi E, McLaughlin M και Salant DJ. Το συμπλήρωμα μεσολαβεί στην ανακατανομή της νεφρίνης και στη διάσταση της ακτίνης σε πειραματική μεμβρανώδη νεφροπάθεια.ΝεφρόInt. 64: 2072–2078. 2003.
22. Gagliardini E, Benigni A, Tomasoni S, Abbate M, Kalluri R, and Remuzzi G. Στοχευμένη προς τα κάτω ρύθμιση της εξωκυτταρικής νεφρίνης στην ανθρώπινη IgA νεφροπάθεια. Am J Nephrol. 23: 277–286. 2003.
23. Wakamatsu A, Fukusumi Y, Hasegawa E, Tomita M, Watanabe T, Narita I, and Kawachi H. Role of calcineurin (CN) inνεφρόσπειραματικό ποδοκύτταρο: Ο αναστολέας CN βελτίωσε την πρωτεϊνουρία αναστέλλοντας την ανακατανομή του CN στο διάφραγμα της σχισμής. Physiol Rep. 4: e12679. 2016.
24. Garg P. A review of podocyte biology. Am J Nephrol. 47(Suppl 1): 3–13. 2018.
25. Ichimura K, Kurihara Η, and Sakai T. Οργάνωση ινών ακτίνης των διεργασιών του ποδιού σε ποδοκύτταρα αρουραίου. J Histochem Cytochem. 51: 1589–1600. 2003.
26. Ronco P. Proteinuria: είναι όλα στο πόδι; J Clin Invest. 117: 2079–2082. 2007.
27. Verma R, Kovari I, Soofi A, Nihalani D, Patrie K, and Holzman LB. Η εμπλοκή του εξωτομέα νεφρίνης έχει ως αποτέλεσμα ενεργοποίηση κινάσης Src, φωσφορυλίωση νεφρίνης, στρατολόγηση Nck και πολυμερισμό ακτίνης. J Clin Invest. 116: 1346–1359. 2006.