ΜΕΡΟΣ Ⅰ: Ανάλογο εποξυεικοσατριενοϊκού οξέος στοχευμένο στα νεφρά, EET-F01, μειώνει τη φλεγμονή, το οξειδωτικό στρες και τη νεφροτοξικότητα που προκαλείται από τη σισπλατίνη

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

John D. Imig, Md Abdul Hye Khan & et al.

1. Εισαγωγή

Η νεφρική νόσος σε ασθενείς με καρκίνο και επιζώντες έχει αναδειχθεί ως μείζον ζήτημα υγειονομικής περίθαλψης και συνεχίζει να κλιμακώνεται απότομα [1-3]. Οι νεότερες θεραπείες καρκίνου έχουν αυξήσει τα ποσοστά ίασης και τους χρόνους επιβίωσης, αλλά οι σχετιζόμενες με τη θεραπεία ανωμαλίες υγρών και ηλεκτρολυτών και η οξεία νεφρική βλάβη που εξελίσσεται σε χρόνια νεφρική νόσο είναι κοινά επακόλουθα [3-5]. Τα αντικαρκινικά φάρμακα, οι αναστολείς της κινάσης της τυροσίνης του υποδοχέα του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGFRI) και τα παράγωγα πλατίνας μπορούν επίσης να προκαλέσουν σοβαρή νεφρική βλάβη που υπονομεύει σημαντικά την αποτελεσματική και ασφαλή χρήση τους [3-5]. Υπάρχει σημαντική κλινική ανάγκη για νέες θεραπείες για την αποτελεσματική αντιμετώπιση και διακοπή της νεφρικής νόσου σε ασθενείς με καρκίνο. Αυτό το ζήτημα της υγειονομικής περίθαλψης οδήγησε στην ανάπτυξη, την εξέλιξη και την εμφάνιση μιας υποειδικότητας, της Onco Nephrology [5]. Οι τρέχουσες θεραπείες επιβραδύνουν μόνο την απώλεια της νεφρικής λειτουργίας ή δεν έχουν καθόλου όφελος [2,5,6]. Απαιτούνται επειγόντως νέες προσεγγίσεις. Η συνεχιζόμενη έρευνά μας επιτίθεται σε αυτήν την αναδυόμενη καρκινική αρένα και επικεντρωνόμαστε στην ανάπτυξη αναλόγων εποξυεικοσατριενοϊκού οξέος (EET) για την προστασία του νεφρού από την τοξικότητα που σχετίζεται με τη θεραπεία του καρκίνου.

δισκία βιοφλαβονοειδήκαικιστανάκιΓιανεφρική λειτουργία

Τα ανάλογα EET βασίζονται στο φαρμακοφορικό τμήμα των EETs και έχουν σχεδιαστεί με βελτιωμένη διαλυτότητα και αντοχή στην αυτοοξείδωση και τον μεταβολισμό από διαλυτή εποξειδική υδρολάση (sEH)[7,8]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι τα συνθετικά ανάλογα EET είναι προστατευτικά των νεφρών σε διάφορες παθολογικές καταστάσεις όπως η υπέρταση, τα φάρμακα που προκαλούνταινεφροτοξικότητα, και νεφρίτιδα λύκου [9-13]. Τα ανάλογα EET μειώνουν τη νεφρική βλάβη σε αυτές τις παθολογικές καταστάσεις μέσω αγγειοδιασταλτικών, διουρητικών, αντιφλεγμονωδών, αντιοξειδωτικών και αντι-αποπτωτικών δραστηριοτήτων[10-13]. Αυτές οι μελέτες κατέδειξαν ξεκάθαρα ότι μια προσέγγιση που βασίζεται στο EET καταπολεμά τη βλάβη των νεφρών σε παθολογικές καταστάσεις διαφορετικής αιτιολογίας. Πρόσφατα, έγιναν προσπάθειες για την ανάπτυξη αναλόγων EET που διαθέτουν τη μοναδική ιδιότητα να στοχεύουν το νεφρό. Μια νέα μορφή αναλόγου EET στοχευμένου στα νεφρά σχεδιάστηκε και συντέθηκε με σύζευξη του φαρμακοφόρου EET με φολικό οξύ (EET-F01). Στην παρούσα μελέτη, διερευνήσαμε την ικανότητα τουEET-F01για να στοχεύσετε το νεφρό σε σύγκριση με το ανάλογο EET, EET-A. Το EET-FO1 και το EET-A συγκρίθηκαν ως προς την ικανότητά τους να μειώνουν τη νεφρική βλάβη που προκαλείται από τη σισπλατίνη. Τέλος, αυτή η μελέτη περιέγραψε περαιτέρω τις προστατευτικές αντιφλεγμονώδεις και αντιοξειδωτικές δράσεις των νεφρώνEET-F01.

οφέλη από το cistancheΓιανεφρό

2. Αποτελέσματα

2.1. EET-F01Στοχεύει τον νεφρικό ιστό

Οι χημικές δομές για EET-A και EET-FO1 παρέχονται στο σχήμα 1. Καθαρότητα για EET-A καιEET-F01 was >95 τοις εκατό όπως προσδιορίζεται από το NMR. Στην οξεία μελέτη σε ζώα, ίσες δόσεις κατά βάρος EET-A καιEET-F01χορηγήθηκαν ενδοφλεβίως για 6 ώρες και ακολούθησε συλλογή πλάσματος και νεφρικού ιστού. Δείξαμε ένα 5-πλάσιο υψηλότερο επίπεδο πλάσματοςEET-F01σε σύγκριση με το EET-A μετά από 6-h συνεχόμενη χορήγηση (Εικόνα 1). Είναι ενδιαφέρον ότι δείξαμε επίσης ότι μετά από 6-ωρη συνεχή χορήγηση το περιεχόμενο των νεφρών του EET-A ήταν σχεδόν μη ανιχνεύσιμο σε σύγκριση μεEET-F01περιεχόμενο στο νεφρό (Εικόνα 1). Αυτά τα στοιχεία το αποδεικνύουνEET-F01στοχεύει στο νεφρό.

Σχήμα 1. Σύγκριση πλάσματος και νεφρού EET-F01 και EET-A μετά από ενδοφλέβια χορήγηση για 6 ώρες.Πάνω πάνελ: Χημικές δομές για EET-A καιEET-F01. Αριστερό πλαίσιο: Συγκέντρωση EET-FO1 και EET-A στο πλάσμα. Δεξί πλαίσιο: Επίπεδα νεφρών τουEET-F01και ΕΕΤ-Α. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος±SEM, n=3/ομάδα.

2.2. EET-F01Προστατεύει από τη σισπλατίνηΝεφροτοξικότητα

Σε ένα ξεχωριστό σύνολο πειραμάτων, ομάδες αρουραίων υποβλήθηκαν σε προκαταρκτική θεραπείαEET-F01και EET-A για δύο ημέρες πριν από την επαγωγή νεφροπάθειας σισπλατίνης και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε περαιτέρω αγωγή με τις υπό εξέταση ενώσεις για άλλες 5 ημέρες. Οι νεφρικές προστατευτικές δράσεις τουEET-F01και EET-A προσδιορίστηκαν από τα επίπεδα BUN, το περιεχόμενο NAG στα ούρα και τα επίπεδα KIM-1 στα ούρα.EET-F01ήταν εξίσου αποτελεσματική με την EET-A στη μείωση των BUN, NAG, KIM-1 και νεφρικής ιστολογικής βλάβης πέντε ημέρες μετά την επαγωγή της σισπλατίνηςνεφροτοξικότητα(Σχήμα 2). Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε ιστολογική εξέταση για την περαιτέρω αξιολόγηση της νεφροτοξικότητας της σισπλατίνης. Η χορήγηση σισπλατίνης οδήγησε σε σωληναριακό τραυματισμό που εκδηλώνεται με κενοτοπία και απολέπιση των νεφρικών επιθηλιακών κυττάρων μαζί με σοβαρό σχηματισμό ενδοσωληναρίου πρωτεϊνικού γύψου τόσο στις φλοιώδεις όσο και στις μυελικές περιοχές του νεφρού. ΕΕΤ-Α καιEET-F01η θεραπεία προστατεύει το νεφρό από τη σισπλατίνηνεφροτοξικότητασε αρουραίους (Εικόνα 2).EET-F01ήταν αποτελεσματικό στα 20 mg/kg/ημέρα και σε 10-πλάσια χαμηλότερη δόση 2 mg/kg/ημέρα παρά το σχεδόν 2× μεγαλύτερο μοριακό του βάρος λόγω του φυλλικού οξέος σε σύγκριση με την EET-A. Αυτά τα στοιχεία το αποδεικνύουν ξεκάθαραEET-F01στοχεύει το νεφρό και διευκολύνει μια χαμηλότερη, αλλά ακόμα αποτελεσματική δόση. Έτσι, έχουμε αναπτύξει ένα ανάλογο EET στοχευμένο στα νεφρά,EET-F01, που δείχνει εξαιρετικές δυνατότητες ως θεραπευτικό για νεφρικές παθήσεις.

οφέλη cistanche deserticola

Εικόνα 2. Η νεφρική βλάβη που προκαλείται από τη σισπλατίνη μειώνεται από τις θεραπείες EET-F01 και EET-A.Αριστερό πλαίσιο: άζωτο ουρίας αίματος (BUN), μεσαίο πλαίσιο: Ν-ακετυλ- -(D)-γλυκοζαμινιδάση ούρων (NAG), δεξιό πλαίσιο: μόριο νεφρικής βλάβης-1 (KIM-1) σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε σισπλατίνη στους οποίους χορηγήθηκε φορέας, EET-FO1 ή EET-A. Κάτω πάνελ: Αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες της χρώσης Periodic acid-Schiff (PAS) που απεικονίζουν κενώδες και απολέπιση των νεφρικών επιθηλιακών κυττάρων μαζί με σοβαρό ενδοσωληνοειδές πρωτεϊνικό χυτό σωληναριακό γύψο στις νεφρικές τομές διαφορετικών πειραματικών ομάδων.*p.<0.05 vs.="" control-vehicle="" group;t=""><0.05 vs.="" cisplatin-vehicle="" group.data="" expressed="" as="" mean="" ±sem,="" n="">

2.3. Το EET-F01 και το EET-A μειώνουν τη νεφρική φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες σε σισπλατίνηΝεφροτοξικότητα

Τα επίπεδα έκφρασης νεφρικής IL-6 και TNFo mRNA αποκάλυψαν 4 έως 5-πλάσια αύξηση στην επαγόμενη από σισπλατίνηνεφροτοξικότητα. EET-F01και η θεραπεία EET-A μείωσε τα νεφρικά φλεγμονώδη γονίδια IL-6 και TNF κατά 30-50 τοις εκατό στη σισπλατίνηνεφροτοξικότητα(Εικόνα 3). Αυξημένη νεφρική έκφραση των γονιδίων οξειδωτικών δεικτών NADPH υπομονάδων οξειδάσης p47phox, p67phox, gp91phox και NOX4 παρατηρείται σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε σισπλατίνη. Τα επίπεδα TBARS νεφρικού ιστού αυξήθηκαν κατά τη διάρκεια που προκλήθηκε από σισπλατίνηνεφροτοξικότητα. Αυτές οι επαγόμενες από τη σισπλατίνη αυξήσεις στο οξειδωτικό στρες μετριάστηκαν60-100 τοις εκατό απόEET-F01και θεραπεία EET-A (Εικόνες 4 και 5). Αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι στοχεύουν τα νεφράEET-F01είναι εξίσου αποτελεσματικό με το EET-A στη μείωση της φλεγμονής και του οξειδωτικού στρες στη σισπλατίνηνεφροτοξικότητα.

Εικόνα 3. Η νεφρική φλεγμονή στη νεφροτοξικότητα της σισπλατίνης μειώνεται από τις θεραπείες EET-F01 και EET-A.Ανάλυση RT-PCR για εκφράσεις mRNA του IL-6(αριστερό πλαίσιο) και του TNF (δεξιό πλαίσιο).*p<0.05 vs.="" control-vehicle="" group;=""><0.05 vs.="" cisplatin-vehicle="" group.="" data="" expressed="" as="" mean±sem,="" n="">

2.4. Το EET-A δεν ενισχύει την ανάπτυξη του όγκου

Η χρήση αναλόγων EET μπορεί να προάγει τη μετάσταση καρκίνου όταν χορηγείται για μεγάλες χρονικές περιόδους [14,15]. Αν και η τρέχουσα θεραπευτική προσέγγιση θα χορηγούσε ανάλογα EET για σύντομο χρονικό διάστημα για την πρόληψη της επαγόμενης από τη σισπλατίνηνεφροτοξικότητα, αξιολογήσαμε τις μακροπρόθεσμες επιδράσεις της EET-A στην ανάπτυξη όγκου μιας ανθρώπινης κυτταρικής σειράς καρκίνου του μαστού, MBA-MB-231, σε αθυμικά ποντίκια. Ο όγκος και το βάρος του όγκου αυξήθηκαν με τον ίδιο ρυθμό σε ποντίκια που έλαβαν φορέα ή EET-A σε μια περίοδο τριών εβδομάδων (Εικόνα 6). Η ιστολογική αξιολόγηση των όγκων απέτυχε να καταδείξει οποιεσδήποτε αλλαγές στην κυτταρική υπερπλασία ή πολλαπλασιασμό σε ποντικούς που έλαβαν EET-A. Αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι η EET-A δεν ενισχύει την ανάπτυξη του όγκου.

Σχήμα 4. Το νεφρικό οξειδωτικό στρες στη νεφροτοξικότητα της σισπλατίνης μειώνεται από τις θεραπείες EET-F01 και EET-A.Ανάλυση RT-PCR για εκφράσεις mRNA του (a)p47phox, (b)p67phox, (c)gp91phox, (d) NOX4.*p<0.05 vs.control-vehicle=""><0.05 vs.="" cisplatin-vehicle="" group.="" data="" expressed="" as="" mean="" ±="" sem,="" n="">	Εικόνα 5. Οι δραστικές ουσίες του θειοβαρβιτουρικού οξέος νεφρού (TBARS) στη νεφροτοξικότητα της σισπλατίνης μειώνονται με θεραπείες EET-F01 και EET-A.*p<0.05 vs.control-vehicle=""><0.05 vs.="" cisplatin-vehicle="" group.="" data="" expressed="" as="" mean="" ±="" sem,="" n="">

Εικόνα 6. Η ανάπτυξη όγκου μιας ανθρώπινης κυτταρικής σειράς καρκίνου του μαστού, MBA-MB-231, σε αθυμικά ποντίκια δεν μεταβάλλεται από τη θεραπεία EET-A.Αριστερό πλαίσιο: όγκος όγκου, Δεξί πλαίσιο: βάρος όγκου σε ποντίκια MBA-MB-231 που φέρουν όγκο που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με όχημα (μάρτυρας) ή EET-A. Κάτω πλαίσιο: Αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες της χρώσης Periodic acid-Schiff (PAS) που απεικονίζουν παρόμοια υπερπλασία όγκου και πολλαπλασιασμό σε όγκους ανθρώπινου μαστού. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος± SEM, n=5 ποντικοί και n=10 όγκοι/ομάδα.

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΜΕΡΟΣ Ⅱ

cistanche στα χίντι