Μέθοδοι για τη δημιουργία και την αξιολόγηση μοντέλων ανθρώπινων νεφρικών παθήσεων Zebrafish Μέρος 2

Ιστολογική ανάλυση

Τα μεταλλαγμένα μπορεί να μην εμφανίζουν πάντα επαρκώς πληροφοριακές μορφολογικές αλλαγές. Η ιστολογική ανάλυση αυτών των εμβρύων ή οργάνων των ενηλίκων μπορεί να είναι απαραίτητη για να προσδιοριστεί η διαφορά μεταξύ των μεταλλαγμένων και των ζώων άγριου τύπου. Οι μέθοδοι ιστολογικής ανάλυσης τόσο για τις προνύμφες όσο και για τα ενήλικα ζέβρα είναι καλά καθιερωμένες και μπορούν να εκτελεστούν με τρόπο υψηλής απόδοσης (Sabaliauskas et al., 2006). Έμβρυα Zebrafish ή ιστός ενηλίκου μπορούν να ενσωματωθούν σε ρητίνη παραφίνης ή JB-4 ακολουθούμενη από τομή μικροτόμου για τη μελέτη της αρχιτεκτονικής των ιστών (Sullivan-Brown et al., 2011; Copper et al., 2018). Η κρυοτομή μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί με έμβρυα ζέβρα (Ferguson and Shive, 2019). Αυτές οι τομές ιστού χρησιμοποιούνται στη συνέχεια για χρώση ανοσοφθορισμού, ανοσοϊστοχημικές μελέτες ή χρώση Η&Ε. Η χρώση H&E των τμημάτων νεφρού ενηλίκων έδειξε ότι η κορυφαία πλευρά του εγγύς σωληνίσκου ήταν χρωματισμένη με σκούρο ροζ και είχε ευρύ αυλό, ενώ το άπω σωληνάριο είχε ανοιχτό ροζ χρώση με στενό αυλό, δηλώνοντας έτσι καθαρά το μοτίβο διαφορικής χρώσης μεταξύ των τμημάτων. McCampbell et al., 2015). Η τεχνική χρώσης περιοδικού οξέος-Schiff (PAS) που ανιχνεύει πολυσακχαρίτες στους ιστούς έχει συγγένεια με το επιθήλιο του ορίου βούρτσας του εγγύς σωληναρίου (McCampbell et al., 2015; McKee and Wingert, 2015). Ο άργυρος μεθεναμίνης λερώνει τις βασικές μεμβράνες και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για χρώση νεφρικών σωληναρίων και σπειραμάτων βασικής μεμβράνης (McCampbell et al., 2015). Ένα μοντέλο AKI zebrafish με προσβολή γενταμυκίνης έδειξε ισοπέδωση του επιθηλίου, απώλεια του περιγράμματος της κορυφαίας βούρτσας, σωληναριακή διάταση και συσσώρευση υπολειμμάτων στον αυλό, υπογραμμίζοντας έτσι τη χρησιμότητα της ιστολογίας στην ανάλυση μοντέλων ασθένειας zebrafish (Cianciolo Cosentino et al., 2013). .

Τα τελευταία χρόνια, η έρευνα για τη χρήση βλαστοκυττάρων και ένα κινεζικό φυτικό φάρμακο για τη θεραπεία των νεφρικών παθήσεων έχει κερδίσει μεγάλη προσοχή. Ο κύριος μηχανισμός των δύο θεραπειών είναι η προώθηση της αποκατάστασης των τραυματισμένων νεφρικών ιστών και η προστασία τουςυπόλοιπες νεφρικές λειτουργίες.

Το κινέζικο φυτικό φάρμακο, το cistanche, έχει χρησιμοποιηθεί στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική για τη θεραπεία διαφόρωνχρόνιες νεφρικές παθήσειςαπό τα αρχαία χρόνια. Έχει αναφερθεί ότι το κιστάνι έχει τη δυνατότητα να μειώσει τη φλεγμονή,μειώνουν την ίνωση των νεφρώνκαι προωθούν τη σύνθεση συστατικών εξωκυτταρικής μήτρας. Έχει αποκαλυφθεί ότι αυτές οι επιδράσεις οφείλονται στα βιοενεργά συστατικά του, συμπεριλαμβανομένων πολλών φαινολικών ουσιών, τριτερπενοειδών και κουμαρινών.

Από την άλλη πλευρά, η τεχνολογία των βλαστοκυττάρων έχει προκαλέσει επανάσταση στην ιατρική πρακτική. Η έρευνα έχει δείξει ότι τα βλαστοκύτταρα μπορούν να διαφοροποιηθούν σε διάφορους τύπους νεφρικών κυττάρων και να εκτελούν θεραπευτικές δραστηριότητες, συμπεριλαμβανομένης της προστασίας των υπολειπόμενων λειτουργικών νεφρικών ιστών, της επιβράδυνσης της ίνωσης των ιστών και της αποκατάστασης κατεστραμμένωννεφρικούς ιστούς.

Κάντε κλικ στο Πώς να πάρετε το Cistanche

Για περισσότερες πληροφορίες:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Τελικά, ο συνδυασμός της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής με τη σύγχρονη επιστήμη θα μπορούσε να είναι το κλειδί για τη θεραπεία διαφόρωννεφρικές παθήσεις. Αυτή η στρατηγική έγινε σταδιακά αποδεκτή από την ιατρική κοινότητα και μελέτες έχουν ήδη δείξει ότι η συνδυασμένη θεραπεία τουκιστανάκικαι η θεραπεία με βλαστοκύτταρα μπορεί να μειώσει σημαντικά το ποσοστό θνησιμότητας των νεφρικών παθήσεων.

Συμπερασματικά, η χρήση τουκιστανάκικαι η θεραπεία με βλαστοκύτταρα στη θεραπεία νεφρικών παθήσεων δείχνει μεγάλες δυνατότητες και απαιτεί περαιτέρω έρευνα. Η συνδυασμένη θεραπεία των δύο θεραπειών θα μπορούσε να προσφέρει μια βελτιωμένη θεραπευτική επιλογή για όσους αντιμετωπίζουν νεφρικές παθήσεις.

Προσδιορισμός ελαττωμάτων κατάτμησης προνέφρου

Ο πρόνεφρος είναι διαμορφωμένος σε διαφορετικά τμήματα που εκτελούν ξεχωριστές λειτουργίες. Ο μηχανισμός πίσω από αυτήν την κατάτμηση δεν είναι σαφώς κατανοητός, αν και πολλοί παράγοντες μεταγραφής έχουν αναγνωριστεί ως ρυθμιστές της τμηματοποίησης. Οι διαφορές στο τμηματικό μοτίβο μπορούν εύκολα να εντοπιστούν με ανάλυση WISH με ριβοανιχνευτές που επισημαίνουν συγκεκριμένα διαφορετικά τμήματα του πρόνεφρου. Η ακριβής θέση των τμημάτων του πρόνεφρου μπορεί να επισημανθεί με την εφαρμογή διπλού in situ υβριδισμού ειδικών για το τμήμα δεικτών και ενός αντιπληροφοριακού ριβοανιχνευτή που σημαδεύει τον σωμίτη (όπως smyhc1 και xirp2a). Οι πιο συνηθισμένοι δείκτες ειδικού τμήματος είναι slc20a1a για PCT, trpm7 για PST, slc12a1 για DE, stc1 για CS και slc12a3 για DL (Εικ. 2). Οι μεταλλάξεις στον ανθρώπινο HNF1b συνδέονται με νεφρικές ανωμαλίες όπως η νεφρική δυσπλασία, ο σπειραματοκυστικός νεφρός, η ολιγομεγανεφρονία και ο μονήρης λειτουργικός νεφρός (Lindner, 1999; Bingham et al., 2002; Bohn et al., 2003). Οι Naylor et al., (2013) ανέλυσαν την τμηματοποίηση του προνέφρου με το WISH σε έμβρυα ψαριών ζέβρα hnf1b knock-out χρησιμοποιώντας γονίδια δεικτών ειδικών για το τμήμα και διαπίστωσαν ότι απουσίαζαν δείκτες εγγύς και απομακρυσμένου σωληναρίου στα μεταλλαγμένα. Χρησιμοποιώντας παρόμοια πειράματα, διαπιστώθηκε ότι το γονίδιο 1 homeobox κενού παράγοντα μεταγραφής (emx1) προάγει την απώτερη όψιμη μοίρα και αναστέλλει την απώτερη πρώιμη μοίρα κατά τη διάρκεια της νεφρογένεσης (Morales et al., 2018). Οι Wingert et al., (2007) πραγματοποίησαν μια ανάλυση WISH εμβρύων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με RA και DEAB και διαπίστωσαν ότι η θεραπεία με DEAB είχε ως αποτέλεσμα την απώλεια των εγγύς τμημάτων και την επέκταση των περιφερικών τμημάτων, ενώ η εξωγενής θεραπεία RA ανέστρεψε αυτόν τον φαινότυπο. Επίσης, καθιέρωσαν μια σύνδεση μεταξύ του ουραίου παράγοντα μεταγραφής (cdx) και της ΡΑ στη ρύθμιση της θέσης και της τμηματοποίησης του νεφρώνα (Wingert et al., 2007). Έχουμε δείξει ότι ο τομέας EF-hand που περιέχει 2 (efhc2) knockdown έχει ως αποτέλεσμα την επέκταση των άπω πρώιμων τμημάτων και τη μείωση του CS και των απομακρυσμένων όψιμων τμημάτων. Η έκφραση του odf3, η οποία σηματοδοτεί πολλαπλά κοίλια κύτταρα προνεφρικών σωληναρίων, μειώθηκε επίσης στα μορφώματα efhc2 (Barrodia et al., 2018).

Χρώση και απεικόνιση προνεφρικών βλεφαρίδων

Τα βλεφαρίδες είναι οργανίδια με βάση μικροσωληνίσκους που είναι είτε κινητά είτε μη. Οι ανθρώπινες διαταραχές που προκαλούνται λόγω ελαττωμάτων στη δομή και τη λειτουργία των βλεφαρίδων ονομάζονται βλεφαρίδες. Τα ελαττώματα στις βλεφαρίδες που υπάρχουν στους πρόνεφρους ζέβρα συχνά οδηγούν σε κατσάρωμα του σώματος, σχηματισμό κύστης και διαστολή των σωληναρίων (Sullivan-Brown et al., 2008). Τα πολυπυρηνωμένα κύτταρα που υπάρχουν σε προνέφρους zebrafish μπορούν να οπτικοποιηθούν με WISH ή υβριδισμό φθορισμού in situ (FISH) χρησιμοποιώντας αντιπληροφοριακούς ριβοανιχνευτές odf3b ή rfx2 (Liu et al., 2007; Barrodia et al., 2018). Τα βλεφαρίδες σε έμβρυα ψαριού ζέβρα μπορούν να χρωματιστούν χρησιμοποιώντας α-ακετυλιωμένη τουμπουλίνη και η g-τουμπουλίνη μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη σήμανση των βασικών σωμάτων (Jaffe et al., 2010; Zaghloul and Katsanis 2011). Η κίνηση των κινητών βλεφαρίδων μπορεί να καταγραφεί χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο με κάμερα υψηλής ταχύτητας χρησιμοποιώντας διαγονιδιακά ψάρια ζέβρα όπως το Tg(Foxj1a: GFP) (Tavares et al., 2017). Αναπτύχθηκε μια συνδυασμένη τεχνική ανάλυσης FISH και ανοσολογικού φθορισμού για τη σήμανση πολλαπλών κυττάρων, βλεφαρίδων και βασικών σωμάτων (Marra et al., 2017). Διαφορετικά μεταλλαγμένα ψάρια ζέβρα με ελαττώματα βλεφαρίδων όπως τα Locke, swt και curly εξετάστηκαν λεπτομερώς και διαπιστώθηκε ότι εμφάνιζαν μια σειρά ελαττωμάτων στην κίνηση των βλεφαρίδων (Sullivan-Brown et al., 2008). Η βλεφαροειδής κίνηση μειώθηκε στο μεταλλαγμένο Locke και οι βλεφαρίδες ήταν ακίνητες στο swt, ενώ οι κινήσεις των βλεφαρίδων στο σγουρό κυμαίνονταν από ακίνητες έως ακανόνιστες μετατοπίσεις. Η ανοσοχρώση με α-ακετυλιωμένη τουμπουλίνη έδειξε ότι το μήκος των βλεφαρίδων ήταν φυσιολογικό σε swt και σγουρά ενώ ο locke εμφάνιζε μικρότερες βλεφαρίδες (Sullivan-Brown et al., 2008). Οι μέθοδοι που περιγράφονται εδώ έχουν χρησιμοποιηθεί εκτενώς για τον εντοπισμό ελαττωμάτων βλεφαρίδων σε νεφρικές παθήσεις που περιλαμβάνουν βλεφαρίδες.

Αξιολόγηση της λειτουργίας του σπειράματος

Η κύρια λειτουργία του νεφρού είναι να φιλτράρει το αίμα και να απομακρύνει τα απόβλητα και τα υπερβολικά υγρά από το σώμα, ενώ αποτρέπει την απώλεια μακρομορίων στα ούρα. Το σπειράμα μπορεί να φιλτράρει μόρια 5 kDa αλλά δεν επιτρέπει την απέκκριση μεγαλύτερων μορίων όπως η αλβουμίνη ορού (Chang et al., 1976). Οι διαγνωστικές μέθοδοι που χρησιμοποιούνται συνήθως για την αξιολόγηση της νεφρικής δυσλειτουργίας στον άνθρωπο δεν μπορούν να εφαρμοστούν σε ζέβρα λόγω του μικρού τους μεγέθους. Ωστόσο, φθορίζουσες βαφές διαφορετικού μοριακού βάρους που μιμούνται τα μόρια που συναντά συνήθως ο ανθρώπινος νεφρός μπορούν να εγχυθούν σε ζέβρα και η αξιολόγηση της κάθαρσης ή της κατακράτησης τους μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως υποκατάστατο για τον προσδιορισμό της νεφρικής λειτουργίας (Christou-Savina et al., 2015 ). Έχει αποδειχθεί ότι η έγχυση 10 kDa φθορίζουσας δεξτράνης στην περικαρδιακή κοιλότητα των εμβρύων ψαριών zebra έχει ως αποτέλεσμα την απώλεια περίπου 85 τοις εκατό της χρωστικής μέσω έκκρισης από τα νεφρά εντός 24 ωρών μετά την ένεση (HPI) (Christou-Savina et al. , 2015). Οι βαφές υψηλότερου μοριακού βάρους όπως 70 kDa ή παραπάνω χρειάζονται έγχυση στο αγγειακό σύστημα και διατηρούνται σε έμβρυα άγριου τύπου. Ωστόσο, 70 kDa δεξτράνης θα μπορούσε να ανιχνευθεί στο εγγύς τοίχωμα του σωληναρίου όταν εγχυθεί στο αγγείο του μεταλλαγμένου ψαριού ζέβρα κυστίνωσης (ctn's), υποδεικνύοντας ότι η ακεραιότητα των σχισμών του φίλτρου σπειραμάτων διακυβεύεται σε cents-/- προνύμφες (Elmonem et al. . Οι Kramer-Zucker et al., (2005) έκαναν ένεση 500 kDa FITC-δεξτράνης στην κύρια φλέβα 84 hpf άγριου τύπου και μορφών εμβρύων zebrafish νεφρίνης και ποδοκίνης, και ανίχνευσαν τη χρωστική στους πρόνεφρους υποδεικνύοντας δυσλειτουργία αυτών των νεφρώνων.

Αξιολόγηση επαναρρόφησης μεταβολιτών

Ο διαμεμβρανικός ενδοκυτταρικός υποδοχέας megalin/LRP2, ο προσαρμογέας του απενεργοποιημένος2 (dab2) και ο συνυποδοχέας Dublin παίζουν κεντρικό ρόλο στη διαμεσολαβούμενη από την ενδοκυττάρωση κάθαρση των μεταβολιτών από το σπειραματικό διήθημα (Anzenberger, 2006). Η έγχυση 70 kDa φθορίζουσας δεξτράνης ή φθορισμού συζευγμένης με υποδοχέα πρωτεΐνης (RAP), μιας πρωτεΐνης που συνδέεται φυσικά με τη μεγαλίνη/LRP2 στην κυκλοφορία του αίματος των εμβρύων ψαριών ζέβρα, οδηγεί στην πρόσληψη αυτών των μορίων για επαναρρόφηση. Αυτό χρησιμεύει ως μια βολική μέθοδος για την αξιολόγηση της λειτουργίας επαναρρόφησης μεταβολιτών του νεφρού. Σε συμφωνία με τον κεντρικό τους ρόλο στην επαναρρόφηση των μεταβολιτών, η μείωση είτε της μεγαλίνης/LRP2 είτε του dab2 οδηγεί σε πλήρη αποτυχία της ενδοκυτταρικής πρόσληψης των ιχνηθετών με τη μεσολάβηση των υποδοχέων στα μορφώματα (Anzenberger, 2006).

Εκτίμηση της διαστολής των σωληναρίων

Το προνεφρικό σωληνάριο είναι επενδεδυμένο από ένα μόνο στρώμα πολωμένων επιθηλιακών κυττάρων. Η μορφολογία του προνεφρικού σωληναρίου και το κτύπημα του που μετατρέπεται σε διακριτά τμήματα ελέγχεται από τον πολλαπλασιασμό διαφοροποιημένων επιθηλιακών κυττάρων κοντά στο άπω άκρο και τη μετανάστευση τους προς το σπείραμα. Αυτά τα γεγονότα με τη σειρά τους διέπονται από το υγρό που ρέει στον πρόνεφρο, παρέχοντας έτσι μια συσχέτιση μεταξύ της μορφολογίας και της λειτουργίας των οργάνων (Vasilyev et al., 2009). Τα κύτταρα στο εγγύς άκρο είναι περιελιγμένα και πιο στηλοειδή, ενώ τα κύτταρα στο απομακρυσμένο άκρο είναι κυβοειδή (Vasilyev et al., 2009). Μια μείωση στον ρυθμό σπειραματικής διήθησης, απόφραξη στο σωληνάριο ή ελαττώματα στην ανάπτυξη και την κινητικότητα των βλεφαρίδων αναστέλλουν αυτή τη συλλογική κυτταρική μετανάστευση από την οπίσθια προς την πρόσθια κατεύθυνση. Ωστόσο, τα κύτταρα στο περιφερικό άκρο συνεχίζουν να πολλαπλασιάζονται, προκαλώντας τη διαστολή των προνεφρικών σωληναρίων (Naylor και Davidson, 2017). Η διαστολή των σωληναρίων μπορεί να εκτιμηθεί είτε με άμεση παρατήρηση ολόκληρων εμβρύων στο μικροσκόπιο είτε μέσω ιστολογικής ανάλυσης. Τα οπτικά DIC μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την απεικόνιση και τον υπολογισμό της διαμέτρου του προνεφρικού σωληναρίου των εμβρύων ζέβρα. Οι Sullivan-Brown et al., (2008) συνέκριναν τη διαστολή των σωληναρίων σε μεταλλάκτες άγριου και σγουρού τύπου με ελαττώματα στις βλεφαρίδες και διαπίστωσαν ότι στον άγριο τύπο ο έσω σωληνάριος είχε μεγαλύτερη διάμετρο σε σύγκριση με τον οπίσθιο σωληνάριο και ότι η διάμετρος του τα μεσαία σωληνάρια μειώθηκαν με την πάροδο του χρόνου. Σε σγουρά μεταλλάγματα, η διάμετρος των έσω και οπίσθιων σωληναρίων ήταν παρόμοια με την άγριου τύπου σε 26-30 hpf, αλλά μια σταθερή αύξηση στη διάμετρο του έσω σωληναρίου παρατηρήθηκε σε αυτά τα μεταλλάγματα στους 48 hpf και μετά. Παρατηρήθηκε περαιτέρω ότι ο αριθμός των κυττάρων που περιβάλλουν το έσω σωληνάριο αυξήθηκε επίσης σε μεταλλαγμένα έμβρυα (Sullivan-Brown et al., 2008). Μεταλλάξεις στο γονίδιο του ανθρώπινου MNX1 (κινητικός νευρώνας και παγκρέατος homeobox 1) προκαλούν σύνδρομο Currarino, μια σπάνια συγγενή ασθένεια που χαρακτηρίζεται από ιερή αγένεση και ουρογεννητικές και νεφρικές ανωμαλίες όπως πεταλοειδής νεφρός, μονός νεφρός, υδρονέφρωση και στένωση του ορθού (Currarino 1981· Lee et al., 2018· Dworschak et al., 2021). Οι Ott et al., (2016) δημιούργησαν μορφώματα mnx2b σε φόντο Tg(-8cldnb.1:lynEGFP)zf106 για να απεικονίσουν επιθηλιακά κύτταρα σε αναπτυσσόμενους πρόνεφρους και διαπίστωσαν ότι τα μορφώματα εμφάνισαν διευρυμένες διαμέτρους εγγύς σωληναρίου σε σύγκριση με τα άγρια -πληκτρολογήστε σε 4 pdf. Περαιτέρω ανάλυση αποκάλυψε ότι αυτά τα μορφώματα είχαν αλλοιωμένη λειτουργία των νεφρών, αποδιοργανωμένες προνεφρικές βλεφαρίδες και παραμορφωμένες κορυφαίες μικρολάχνες (Ott et al., 2016). Μια τέτοια ανάλυση με χρήση ψαριών ζέβρα αναμφίβολα θα μας βοηθούσε να κατανοήσουμε τον υποκείμενο μηχανισμό των ανθρώπινων ασθενειών.

Εκτίμηση της πολικότητας των επιθηλιακών κυττάρων

Η πολικότητα των επιθηλιακών κυττάρων του προνεφρικού σωληνίσκου διατηρείται από σύμπλοκα πρωτεϊνών που διαχωρίζουν την κυτταρική μεμβράνη σε κορυφαία και βασεοπλάγια πεδία και οργανώνουν υποτομείς μεμβράνης για συγκεκριμένες λειτουργίες όπως έκκριση, διήθηση, απορρόφηση και αισθητηριακή διέγερση (Pieczynski and Margolis, 2011). Η εξάρθρωση αρκετών υποδοχέων, μεταφορέων και καναλιών έχει εντοπιστεί σε πολλές ασθένειες όπως Na συν K συν -ATPase, Na συν K συν 2Cl− συμμεταφορέας και EGFR σε PKD και H συν -ATPase στη νόσο του Dent (Wilson, 2011). . Η πολικότητα των επιθηλιακών κυττάρων μπορεί να ελεγχθεί με χρώση με ανοσοφθορισμό ολόκληρων εμβρύων χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα έναντι Na plus /K συν -ATPase, δείκτη στενής σύνδεσης ZO-1 ή αλκαλικής φωσφατάσης (AP) για τον εντοπισμό των ελαττωμάτων στην πόλωση του επιθήλιο σωληναρίων σε μεταλλαγμένα σε σύγκριση με έμβρυα άγριου τύπου. Το Na plus /K συν -ATPase είναι μια από τις πιο άφθονες πρωτεΐνες στα σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα που διατηρεί την ομοιόσταση νατρίου-καλίου και ρυθμίζει τις λειτουργίες άλλων μεταφορέων που υπάρχουν στα επιθηλιακά κύτταρα (Fernández και Malnic, 1998). Εντοπίζεται στη βασεοπλευρική πλασματική μεμβράνη και είναι σημαντικό για την πόλωση των επιθηλιακών κυττάρων και το σχηματισμό και τη διατήρηση σφιχτών συνδέσμων (Rajasekaran et al., 2001). Το ZO-1 και το AP χρησιμοποιούνται για τη σήμανση των κορυφαίων επιφανειών των προνεφρικών επιθηλιακών κυττάρων. Οι Drummond et al., (1998) ανέλυσαν μια ομάδα μεταλλαγμένων που είχαν ήπιο έως σοβαρό ελάττωμα στον πρόνεφρο. Έλεγξαν την πολικότητα των επιθηλιακών κυττάρων σε έμβρυα 2,5 pdf με χρώση ανοσοφθορισμού με μονοκλωνικό αντίσωμα υπομονάδας άλφα αντι-Να συν /Κ συν -ATPase (a6F) ακολουθούμενη από τομή ιστού. Αυτή η ανάλυση έδειξε ότι ο εντοπισμός Na plus /K συν -ATPase μεταβλήθηκε στις περισσότερες από τις μεταλλαγμένες γραμμές σε σύγκριση με την κανονική βασεοπλευρική έκφρασή του. Σε μεταλλάξεις διπλής φυσαλίδας (bb) και fleer (flr), η Na plus / K συν -ATPase εκφράστηκε στην κορυφαία επιφάνεια ενώ η βασεοπλευρική επιφάνεια παρουσίασε μειωμένη χρώση. Άλλα μεταλλαγμένα είχαν περισσότερη πλευρική χρώση, με μη χρωματισμένες κορυφαίες και βασοπλάγιες επιφάνειες (Drumond et al., 1998).

Ανίχνευση πέτρας στα νεφρά

Οι πέτρες στα νεφρά είναι κρύσταλλοι από εναποτιθέμενα άλατα, μεταξύ των οποίων οι πέτρες ασβεστίου είναι οι πιο συνηθισμένοι (Evan, 2010). Αυτά αποτελούνται από οξαλικό ασβέστιο (CaOx) και φωσφορικό ασβέστιο (CaP) σε διαφορετικές αναλογίες. Οι πέτρες ασβεστίου μπορούν να αναμένονται σε μεταλλαγμένα ψάρια ζέβρα που έχουν αλλοιωμένη ομοιόσταση ασβεστίου. Οι ζωτικές βαφές όπως το κόκκινο Alizarin (κόκκινο φθορίζον) και το Calcein (πράσινο φθορίζον) μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ανίχνευση ιστών που περιέχουν ασβέστιο και πέτρες στα νεφρά σε προνύμφες ψαριών ζέβρα. Οι Elizondo et al., (2010) έδειξαν ότι 57 - 97 τοις εκατό των ομόζυγων μεταλλαγμένων εμβρύων trpm7 ανέπτυξαν πέτρες στα νεφρά σε 5 dpf, ενώ μόνο το 0-1.4 τοις εκατό των αδερφών άγριου τύπου ανέπτυξαν τέτοιες πέτρες. Η απεικόνιση ομόζυγων μεταλλαγμένων εμβρύων trpm7 με κόκκινη κηλίδα αλιζαρίνης σε διαφορετικά χρονικά σημεία έδειξε ότι τα 2-4 έμβρυα dpf δεν είχαν πέτρες και οι λίθοι παρατηρήθηκαν σε 5 dpf στον αυλό και όχι στο επιθήλιο του προνεφρικού σωληνίσκου (Elizondo al ., 2010).

Συμπεράσματα και προοπτικές

Η συχνότητα των νεφρικών παθήσεων αυξάνεται με ανησυχητικό ρυθμό παγκοσμίως. Υπάρχει επείγουσα ανάγκη να εντοπιστούν τα αίτια αυτών των ασθενειών και να αναπτυχθούν νέες μέθοδοι για τη διάγνωση και τη θεραπεία τους. Ο μετανεφρικός νεφρός των θηλαστικών είναι πολύπλοκος, καθιστώντας δύσκολη την κατανόηση της παθολογίας της νεφρικής νόσου. Ο πρόνεφρος στις προνύμφες του ψαριού ζέβρα είναι λειτουργικός και έχει μόνο δύο νεφρώνες εκατέρωθεν της νωτιαίας χορδής με ένα κοινό σπείραμα στο μπροστινό μέρος και μια κλοάκα στο οπίσθιο άκρο. Σε αυτήν την ανασκόπηση, έχουμε συζητήσει διάφορες μεθόδους που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη δημιουργία μοντέλων ανθρώπινων νεφρικών ασθενειών και πώς να αναλύσουμε τον φαινότυπο αυτών των μοντέλων ασθενειών σε μορφολογικό, κυτταρικό και μοριακό επίπεδο. Η επίπονη έρευνα από πολλές ομάδες έχει καθιερώσει αυτές τις μεθόδους δημιουργίας και ανάλυσης μοντέλων ασθενειών με την πάροδο των ετών. Αυτές οι προσπάθειες έχουν πλέον αποδείξει ότι τα έμβρυα και τα ενήλικα ψάρια ζέβρα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μοντέλα ανθρώπινης νεφρικής νόσου που μπορούν να ανακεφαλαιώσουν πιστά διάφορες πτυχές της νεφρικής δυσλειτουργίας που παρατηρούνται στους ανθρώπους. Αυτές οι προσπάθειες έχουν επίσης δημιουργήσει πολλά χρήσιμα εργαλεία και πόρους, συμπεριλαμβανομένων μεταλλαγμένων και διαγονιδιακών γραμμών. Αυτό προσφέρει μια ευκαιρία όχι μόνο να κατανοήσουμε τους μηχανισμούς της νεφρικής νόσου που χρησιμοποιούν zebrafish, αλλά να τους χρησιμοποιήσουμε για να ανακαλύψουμε νέα φάρμακα για τη θεραπεία νεφρικών παθήσεων. Ο διαβήτης συμβάλλει σημαντικά στις επιπλοκές που σχετίζονται με τα νεφρά στον άνθρωπο. Το Zebrafish προσφέρει μια ευκαιρία όπου μπορεί επίσης να μελετηθεί η νεφρική δυσλειτουργία που σχετίζεται με τον διαβήτη (Jör gens et al., 2012). Έτσι, τα ψάρια ζέβρα έχουν μια εξαιρετική βάση ως μοντέλο ασθενειών και προσφέρουν τεράστιες δυνατότητες να βρουν νέες λύσεις σε ανθρώπινες ασθένειες.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τον Tarique Anwar και τη Supriya Borah για τις συζητήσεις και τα σχόλιά τους. Ο SF είναι αποδέκτης του DBT (DBT/2015/ILS/361) και ο UR είναι αποδέκτης της υποτροφίας DST-Inspire. Η έρευνα στο εργαστήριο RKS υποστηρίζεται από το SERB-EMR (EMR/2016/003780) και ενδοσχολικούς πόρους από το ILS, το οποίο είναι ένα αυτόνομο ινστιτούτο του DBT, της κυβέρνησης της Ινδίας.

Συνεισφορά συγγραφέα

Ο SF συνέλαβε και έγραψε το πρώτο χειρόγραφο. Ο ΟΗΕ και η RKS συζήτησαν και τροποποίησαν το χειρόγραφο.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. AMSTERDAM A, BURGESS S, GOLLING G, CHEN W, SUN Z, TOWNSEND K, FARRINGTON S, HALDI M, HOPKINS N (1999). Μια μεγάλης κλίμακας οθόνη μεταλλαξογένεσης εισαγωγής σε ζέβρα. Genes Dev 13: 2713–2724.

2.ANZENBERGER U (2006). Διευκρίνιση των διεργασιών ενδοκυτταρικής μεταφοράς που εξαρτώνται από μεγαλίνη/LRP2- στην προνύμφη zebrafish pronephros. J Cell Sci 119: 2127–2137.

3.BARRODIA P, PATRA C, SWAIN RK (2018). Η περιοχή χεριού EF που περιέχει 2 (Efhc2) είναι ζωτικής σημασίας για την απομακρυσμένη κατάτμηση του προνέφρου σε ζέβρα. Cell Biosci 8: 53.

4.BEGEMANN G, SCHILLING TF, RAUCH GJ, GEISLER R, INGHAM PW (2001). Η μετάλλαξη χωρίς λαιμό zebrafish αποκαλύπτει μια απαίτηση για raldh2 σε μεσοδερματικά σήματα που διαμορφώνουν τον οπίσθιο εγκέφαλο. Ανάπτυξη 128: 3081–3094.

5. BIKBOV B, PURCELL CA, LEVEY AS, SMITH M, ABDOLI A, ABEBE M, ADEBAYO OM, AFARIDEH M, AGARWAL SK, AGUDELO-BOTERO M, et al., (2020). Παγκόσμια, περιφερειακή και εθνική επιβάρυνση της χρόνιας νεφρικής νόσου, 1990–2017: μια συστηματική ανάλυση για τη μελέτη του παγκόσμιου φορτίου της νόσου 2017. Lancet 395: 709–733.

6.BILL BR, PETZOLD AM, CLARK KJ, SCHIMMENTI LA, EKKER SC (2009). Ένα αστάρι για χρήση μορφολίνης σε ζέβρα. Ζέβραψαρο 6: 69–77.

7. BINGHAM C, ELLARD S, COLE TRP, JONES KE, ALLEN LIS, GOODSHIP JA, GOODSHIP THJ, BAKALINOVA-PUGH D, RUSSELL GI, WOOLF AS, NICHOLLS AJ, HATTERSLEY AT (2002). Μοναχικοί λειτουργικοί νεφροί και διάφορες δυσπλασίες του γεννητικού συστήματος που σχετίζονται με μεταλλάξεις του πυρηνικού παράγοντα-1β του ηπατοκυττάρου. Kidney Int 61: 1243–1251.

8.BOCH J, BONAS U (2010). Xanthomonas AvrBs3 Family-Type III Effectors: Discovery and Function. Annu Rev Phytopathol 48: 419–436.

9.BOHN S, THOMAS H, TURAN G, ELLARD S, BINGHAM C, HATTERSLEY AT, RYFFEL GU (2003). Διακεκριμένες μοριακές και μορφογενετικές ιδιότητες μεταλλάξεων στο ανθρώπινο γονίδιο HNF1b που οδηγούν σε ελαττωματική ανάπτυξη των νεφρών. J Am Soc Nephrol 14: 2033–2041.

10.CANTAGREL V, SILHAVY JL, BIELAS SL, SWISTUN D, MARSH SE, BERTRAND JY, AUDOLLENT S, ATTIÉ-BITACH T, HOLDEN KR, DOBYNS WB, et al., (2008). Οι μεταλλάξεις στο γονίδιο Cilia ARL13B οδηγούν στην κλασική μορφή του συνδρόμου Joubert. Am J Hum Genet 83: 170–179.

11.CAO Y, SEMANCHIK N, LEE SH, SOMLO S, BARBANO PE, COIFMAN R, SUN Z (2009). Η οθόνη χημικού τροποποιητή προσδιορίζει τους αναστολείς HDAC ως καταστολείς των μοντέλων PKD. Proc Natl Acad Sci 106: 21819–21824.

12. CARNEY EF (2020). Ο αντίκτυπος της χρόνιας νεφρικής νόσου στην παγκόσμια υγεία. Nat Rev Nephrol 16: 251–251.

13. CHAMBERS BE, WINGERT RA (2016). Νεφρικοί πρόγονοι: Ρόλος στη νεφρική νόσο και την αναγέννηση. World J Stem Cells 8: 367–375.

14. CHANG RLS, DEEN WM, ROBERTSON CR, BENNETT CM, GLASSOCK RJ, BRENNER BM, TROY JL, UEKI IF, RASMUSSEN B (1976). Διαπερατότητα του σπειραματικού τριχοειδούς τοιχώματος. Μελέτες πειραματικής σπειραματονεφρίτιδας σε επίμυ χρησιμοποιώντας ουδέτερη δεξτράνη. J Clin Invest 57: 1272–1286.

15. CHRISTOU-SAVINA S, BEALES PL, OSBORN DPS (2015). Αξιολόγηση της λειτουργίας του νεφρού Zebrafish χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία φθορισμού κάθαρσης. J Vis Exp 96: e52540.

16.CIANCIOLO COSENTINO C, ROMAN BL, DRUMMOND IA, HUKRIEDE NA (2010). Ενδοφλέβιες μικροενέσεις προνυμφών Zebrafish για τη μελέτη της οξείας νεφρικής βλάβης. J Vis Exp 42: e2079.

17.CIANCIOLO COSENTINO C, SKRYPNYK NI, BRILLI LL, CHIBA T, NOVITSKAYA T, WOODS C, WEST J, KOROTCHENKO VN, MCDERMOTT L, DAY BW, DAVID SON AJ, HARRIS RC, DE CAESTHENKO (DE CAESTHENKO). Ο αναστολέας δεακετυλάσης ιστόνης ενισχύει την ανάκτηση μετά από AKI. J Am Soc Nephrol 24: 943–953.

18. COPPER JE, BUDGEON LR, FOUTZ CA, VAN ROSSUM DB, VANSELOW DJ, HUBLEY MJ, CLARK DP, MANDRELL DT, CHENG KC (2018). Συγκριτική ανάλυση τεχνικών στερέωσης και ενσωμάτωσης για βελτιστοποιημένη ιστολογική προετοιμασία ζέβρα.

19. Comp Biochem Physiol Part C Toxicol Pharmacol 208: 38–46. CREWS DC, BELLO AK, SAADI G (2019). Επιβάρυνση, πρόσβαση και ανισότητες στη νεφρική νόσο. Rev Nefrol Dial y Traspl 39: 1–11.

20.CURADO S, STAINIER DYR, ANDERSON RM (2008). Αφαίρεση κυττάρων/ιστών με τη μεσολάβηση νιτρορεδουκτάσης σε ζέβρα: μια χωρικά και χρονικά ελεγχόμενη μέθοδος αφαίρεσης με εφαρμογές σε μελέτες ανάπτυξης και αναγέννησης. Nat Protoc 3: 948–954.

21.CURRARINO G, COLN D, VOTTELER T (1981). Τριάδα ανορθικών, ιερών και προιερών ανωμαλιών. Am J Roentgenol 137: 395–398.

22.DESGRANGE A, CEREGHINI S (2015). Μοτίβο νεφρώνων: Μαθήματα από Μελέτες Ξενόπου, Ζέβρα και Ποντίκι. Κύτταρα 4: 483-499.

23.DIEP CQ, MA D, DEO RC, HOLM TM, NAYLOR RW, ARORA N, WINGERT RA, BOLLIG F, DJORDJEVIC G, LICHMAN B, ZHU H, IKENAGA T, ONO F, ENGLERT C, COWAN CA, HUKRIEDANA, HANDIN RI, DAVIDSON AJ (2011). Προσδιορισμός ενήλικων προγόνων νεφρώνων ικανών για αναγέννηση νεφρών σε ζέβρα. Nature 470: 95–100.

24.DIEP CQ, PENG Z, UKAH TK, KELLY PM, DAIGLE R V., DAVIDSON AJ (2015). Ανάπτυξη του μεσόνεφρου ζέβρα. γένεση 53: 257-269.

25. DRUMMOND I (2003). Φτιάχνοντας ένα νεφρό ζέβρα: μια ιστορία δύο σωλήνων. Trends Cell Biol 13: 357-365.

26.DRUMMOND IA, MAJUMDAR A, HENTSCHEL H, ELGER M, SOLNICA-KREZEL L, SCHIER AF, NEUHAUSS SCF, STEMPLE DL, ZWARTKRUIS F, RANGINI Z, DRIEVER W, FISHMAN MC (199). Πρώιμη ανάπτυξη του πρόνεφρου ψαριού ζέβρα και ανάλυση μεταλλάξεων που επηρεάζουν την προνεφρική λειτουργία. Ανάπτυξη 125: 4655–4667.

27.DWORSCHAK GC, REUTTER HM, LUDWIG M (2021). Σύνδρομο Currarino: μια ολοκληρωμένη γενετική ανασκόπηση μιας σπάνιας συγγενούς διαταραχής. Orphanet J Rare Dis 16: 167.

28. EISEN JS, SMITH JC (2008). Έλεγχος πειραμάτων μορφολίνης: μην σταματήσετε να κάνετε αντινοηματικά. Ανάπτυξη 135: 1735–1743.

29.EL-BROLOSY MA, STAINIER DYR (2017). Γενετική αντιστάθμιση: Ένα φαινόμενο σε αναζήτηση μηχανισμών Εκδ. C Moens. PLOS Genet 13: e1006780.

30.ELIZONDO MR, BUDI EH, PARICHY DM (2010). Η ρύθμιση Trpm7 της in vivo Κατιονικής Ομοιόστασης και της νεφρικής λειτουργίας περιλαμβάνει Stanniocalcin 1 και Fgf23. Endocrinology 151: 5700–5709.

31.ELMONEM M, BERLINGERIO S, VAN DEN HEUVEL L, DE WITTE P, LOWE M, LEVTCHENKO E (2018). Γενετικές νεφρικές παθήσεις: Ο αναδυόμενος ρόλος των μοντέλων ψαριών Zebra. Κύτταρα 7: 130.

32. ELMONEM MA, KHALIL R, KHODAPARAST L, KHODAPARAST L, ARCOLINO FO, MORGAN J, PASTORE A, TYLZANOWSKI P, NY A, LOWE M, DE WITTE PA, BAELDE HJ, VAN DEN HEUVELCH LP170, LEVT. Το μεταλλαγμένο ψάρι ζέβρα κυστίνωσης (ctn's) παρουσιάζει προνεφρική σπειραματική και σωληναριακή δυσλειτουργία. Sci Rep 7: 42583.

33.ENE-IORDACHE B, PERICO N, BIKBOV B, CARMINATI S, REMUZZI A, PERNA A, ISLAM N, BRAVO RF, ALECKOVIC-HALILOVIC M, ZOU H, et al., (2016). Χρόνια νεφρική νόσος και καρδιαγγειακός κίνδυνος σε έξι περιοχές του κόσμου (ISN-KDDC): μια συγχρονική μελέτη. Lancet Glob Heal 4: e307–e319.

34. ΕΥΑΝ ΑΠ (2010). Φυσιοπαθολογία και αιτιολογία σχηματισμού λίθων στο νεφρό και το ουροποιητικό σύστημα. Pediatr Nephrol 25: 831–841.

35. FERGUSON JL, SHIVE HR (2019). Διαδοχικός Ανοσοφθορισμός και Ανοσοϊστοχημεία σε Κρυοτομή Έμβρυα Ζέβρα. J Vis Exp 147: e59344.

36.FERNÁNDEZ R, MALNIC G (1998). H συν ATPase και Cl − Αλληλεπίδραση στη ρύθμιση του pH των κυττάρων MDCK. J Membr Biol 163: 137–145.

37. FOREMAN KJ, MARQUEZ N, DOLGERT A, FUKUTAKI K, FULLMAN N, McGaughey M, PLETCHER MA, SMITH AE, TANG K, YUAN CW, et al., (2018). Πρόβλεψη προσδόκιμου ζωής, χαμένων ετών ζωής και θνησιμότητας για όλες τις αιτίες και αιτίες για 250 αιτίες θανάτου: αναφορά και εναλλακτικά σενάρια για την περίοδο 2016–40 για 195 χώρες και εδάφη. Lancet 392: 2052–2090. 38.GELDSETZER P, MANNE-GOEHLER J, THEILMANN M, DAVIES JI, AWASTHI A, VOLLMER S, JAACKS LM, BÄRNIGHAUSEN T, ATUN R (2018). Διαβήτης και υπέρταση στην Ινδία. JAMA Intern Med 178: 363.

39.HANKE N, STAGGS L, SCHRODER P, LITTERAL J, FLEIG S, KAUFELD J, PAULI C, HALLER H, SCHIFFER M (2013). "Zebrafishing" για νέα γονίδια που σχετίζονται με το φράγμα της σπειραματικής διήθησης. Biomed Res Int 2013: 1–12.

40. HELLMAN NE, LIU Y, MERKEL E, AUSTIN C, LE CORRE S, BEIER DR, SUN Z, SHARMAN, YODER BK, DRUMMOND IA(2010). Ο μεταγραφικός παράγοντας zebrafish foxj1a ρυθμίζει τη λειτουργία των βλεφαρίδων ως απόκριση στον τραυματισμό και το τέντωμα του επιθηλίου. Proc Natl Acad Sci USA 107: 18499–18504.

41.HENTSCHELDM,PARKKM,CILENTIL,ZERVOSAS,DRUMMONDI,BONVENTRE J V. (2005). Οξεία νεφρική ανεπάρκεια σε ζέβρα: ένα νέο σύστημα για τη μελέτη μιας πολύπλοκης ασθένειας. Am J Physiol Physiol 288: F923–F929.

42. HILL NR, FATOBA ST, OKE JL, HIRST JA, O'CALLAGHAN CA, LASSERSON DS, HOBBSFDR(2016).Global PrevalenceofChronicKidneyDisease–ASystematic Review and Meta-Analysis Ed. G Remuzzi. PLoS One 11: e0158765.

43. HOWE K, CLARK MD, TORROJA CF, TORRANCE J, BERTHELOT C, MUFFATO M, COLLINS JE, HUMPHREY S, MCLAREN K, MATTHEWS L, et al., (2013). Η αλληλουχία του γονιδιώματος αναφοράς της ζέβρας και η σχέση της με το ανθρώπινο γονιδίωμα. Nature 496: 498–503.

44. JAFFE KM, THIBERGE SY, BISHER ME, BURDINE RD (2010). Απεικονίζοντας την Κιλιά σε Ζέβραψαρο. Στο Methods in Cell Biology (Επιμ. Cassimeris L, Tran P). Τόμος 97. Academic Press, σελ. 415-435.

45. JAIN S (2014). Ανάπτυξη νεφρών και σχετικές ανωμαλίες. In Pathobiology of Human Disease Elsevier, σελ. 2701–2715.

46. ​​JHA V, GARCIA-GARCIA G, ISEKI K, LI Z, NAICKER S, PLATTNER B, SARAN R, WANG AYM, YANG CW (2013). Χρόνια νεφρική νόσος: Παγκόσμια διάσταση και προοπτικές. Lancet 382: 260–272.

47.JOBST-SCHWAN T, HOOGSTRATEN CA, KOLVENBACH CM, SCHMIDT JM, KOLB A, EDDY K, SCHNEIDER R, ASHRAF S, WIDMEIER E, MAJMUNDAR AJ, HILDEBRANDT F (2019). Η θεραπεία με κορτικοστεροειδή επιδεινώνει το νεφρωσικό σύνδρομο σε ένα μοντέλο ψαριού ζέβρα με νοκ-άουτ magi2a. Kidney Int 95: 1079–1090.

48.JOHNSON CS, HOLZEMER NF, WINGERT RA (2011). Laser Ablation του Zebrafish Pronephros για τη μελέτη της αναγέννησης του νεφρικού επιθηλίου. J Vis Exp 54: 2845.

49.JÖRGENS K, HILEBRANDS JL, HAMMES HP, KROLL J (2012). Zebrafish: Ένα μοντέλο για την κατανόηση των διαβητικών επιπλοκών. Exp Clin Endocrinol Diabetes 120: 186–187.

50.KAMEI CN, LIU Y, DRUMMOND IA (2015). Αναγέννηση νεφρού σε ενήλικα ζέβρα από τραυματισμό που προκαλείται από γενταμικίνη. J Vis Exp 102: e51912.

51.KAUFMAN CK, WHITE RM, ZON L (2009). Χημικός γενετικός έλεγχος στο έμβρυο zebrafish. Nat Protoc 4: 1422–1432.

52.KAWASUMI M, NGHIEM P (2007). Χημική Γενετική: Αποσαφηνίζοντας Βιολογικά Συστήματα με Μικρομοριακές Ενώσεις. J Invest Dermatol 127: 1577–1584.

53.KIM BH, ZHANG GJ (2020). Δημιουργία σταθερών γραμμών ζέβρα ψαριών νοκ-άουτ διαγράφοντας μεγάλα χρωμοσωμικά θραύσματα χρησιμοποιώντας πολλαπλά gRNA. G3 Genes, Genomes, Genet 10: 1029-1037.

54.KRAMER-ZUCKER AG (2005). Η ροή υγρού που καθοδηγείται από βλεφαρίδες στον πρόνεφρο, τον εγκέφαλο και το κυστίδιο του Kupffer απαιτείται για την κανονική οργανογένεση. Ανάπτυξη 132: 1907–1921.

55.KRAMER-ZUCKER AG, WIESSNER S, JENSEN AM, DRUMMOND IA (2005). Η οργάνωση της συσκευής προνεφρικής διήθησης στα ψάρια ζέβρα απαιτεί Nephrin, Podocin και την πρωτεΐνη του τομέα FERM Mosaic eyes. Dev Biol 285: 316–329.

56. KRISHNAMURTHY VG (1976). Κυτταροφυσιολογία Σωμάτων του Stannius. Int Rev Cytol 46: 177–249.

57. KROEGER PT, DRUMMOND BE, MICELI R, MCKERNAN M, GERLACH GF, MARRA AN, FOX A, MCCAMPBELL KK, LESHCHINER I, RODRIGUEZ-MARI A, BREMILLER R, THUMMEL R, DAVIDSTLESS, AJELTHINGER, J. RA (2017). Το μεταλλαγμένο zeppelin στα νεφρά zebrafish αποκαλύπτει ότι το brca2/fancd1 είναι απαραίτητο για την ανάπτυξη του προνέφρου. Dev Biol 428: 148–163.

58. LAWSON ND, WOLFE SA (2011). Μπροστινές και αντίστροφες γενετικές προσεγγίσεις για την ανάλυση της ανάπτυξης των σπονδυλωτών στο ζέβρα. Dev Cell 21: 48–64.

59. LEE S, KIM EJ, CHO SI, PARK H, SEO SH, SEONG MW, PARK SS, JUNG SE, LEE SC, PARK KW, KIM HY (2018). Το φάσμα των παθογόνων παραλλαγών MNX1 και τα σχετικά κλινικά χαρακτηριστικά σε Κορεάτες ασθενείς με σύνδρομο Currarino. Ann Lab Med 38: 242–248.

60. LEVEY AS, ASTOR BC, STEVENS LA, CORESH J (2010). Χρόνια νεφρική νόσος, διαβήτης και υπέρταση: Τι σημαίνει ένα όνομα; Kidney Int 78: 19–22.

61.LINDNER TH, NJOLSTAD PR, HORIKAWA Y, BOSTAD L, BELL GI, SOVIK O (1999). Ένα νέο σύνδρομο σακχαρώδους διαβήτη, νεφρικής δυσλειτουργίας και δυσπλασίας των γεννητικών οργάνων που σχετίζεται με μερική διαγραφή του τομέα ψευδο-POU του ηπατοκυτταρικού πυρηνικού παράγοντα-1βήτα. Hum Mol Genet 8: 2001–2008.

62. LIU K, PETREE C, REQUENA T, VARSHNEY P, VARSHNEY GK (2019). Επέκταση της εργαλειοθήκης CRISPR στο Zebrafish για τη μελέτη της ανάπτυξης και των ασθενειών. Front Cell Dev Biol 7: 13.

63.LIU Y, LUO D, LEI Y, HU W, ZHAO H, CHENG CHK (2014). Μια εξαιρετικά αποτελεσματική προσέγγιση με τη μεσολάβηση TALEN για στοχευμένη γονιδιακή διαταραχή σε Xenopus tropicalis και zebrafish. Μέθοδοι 69: 58–66.

64. LIU Y, PATHAK N, KRAMER-ZUCKER A, DRUMMOND IA (2007). Η σηματοδότηση εγκοπής ελέγχει τη διαφοροποίηση των επιθηλίων μεταφοράς και των πολυπυρηνικών κυττάρων στο πρόνεφρο ζέβρα. Ανάπτυξη 134: 1111–1122.

65. LUNT SC, HAYNES T, PERKINS BD (2009). Οι μεταλλάκτες ενδομαστιγικής μεταφοράς zebrafish ift57, ift88 και ift172 διαταράσσουν τις βλεφαρίδες αλλά δεν επηρεάζουν τη σηματοδότηση του σκαντζόχοιρου. Dev Dyn 238: 1744–1759.

66. MANGOS S, LAM P y., ZHAO A, LIU Y, MUDUMANA S, VASILYEV A, LIU A, DRUMMOND IA (2010). Τα γονίδια ADPKD pkd1a/b και pkd2 ρυθμίζουν τον σχηματισμό εξωκυτταρικής μήτρας. Dis Model Mech 3: 354–365.

67.MARRA AN, ULRICH M, WHITE A, SPRINGER M, WINGERT RA (2017). Οπτικοποίηση πολλαπλών κυττάρων στο Zebrafish μέσω ενός συνδυασμένου πρωτοκόλλου Φθορίζοντος In Situ Υβριδισμού και Ανοσοφθορισμού Πλήρους Όρους. J Vis Exp 129: 56261.

68. MCCAMPBELL KK, SPRINGER KN, WINGERT RA (2015). Άτλας Κυτταρικής Δυναμικής κατά την Αναγέννηση Νεφρού Ενήλικου Zebrafish. Stem Cells Int 2015: 1–19.

69.MCKEE RA, WINGERT RA (2015). Νεφρική παθολογία Zebrafish: Αναδυόμενα μοντέλα οξείας νεφρικής βλάβης. Curr Pathobiol Rep 3: 171–181.

70.MINGEOT-LECLERCQ MP, TULKENS PM (1999). Αμινογλυκοσίδες: Νεφροτοξικότητα. Antimicrob Agents Chemother 43(5): 1003-1012.

71. MORALES EE, HANDA N, DRUMMOND BE, CHAMBERS JM, MARRA AN, ADDI EGO A, WINGERT RA (2018). Το ομογενές emx1 απαιτείται για την ανάπτυξη του περιφερικού τμήματος του νεφρώνα σε ζέβρα. Sci Rep 8: 18038.

72.MULLINS MC, HAMMERSCHMIDT M, HAFFTER P, NÜSSLEIN-VOLHARD C (1994). Μεταλλαξιγένεση μεγάλης κλίμακας στο ζέβρα: σε αναζήτηση γονιδίων που ελέγχουν την ανάπτυξη σε σπονδυλωτό. Curr Biol 4: 189–202.

73. NAYLOR RW, CHANG H-HG, QUBISI S, DAVIDSON AJ (2018). Ένας νέος μηχανισμός σχηματισμού αδένων σε ζέβρα που περιλαμβάνει διαδιαφοροποίηση νεφρικών επιθηλιακών κυττάρων και εξώθηση ζωντανών κυττάρων. Elife 7: e38911.

74. NAYLOR RW, DAVIDSON AJ (2017). Σχηματισμός προνεφρικών σωληναρίων σε ζέβρα: μορφογένεση και μετανάστευση. Pediatr Nephrol 32: 211–216.

75.NAYLOR RW, PRZEPIORSKI A, REN Q, YU J, DAVIDSON AJ (2013). Το HNF1 biIs Απαραίτητο για Τμηματοποίηση Νεφρώνων κατά τη Νεφρογένεση. J Am Soc Nephrol 24: 77–87.

76.OTT E, WENDIK B, SRIVASTAVA M, PACHO F, TÖCHTERLE S, SALVENMOSER W, MEYER D (2016). Η μορφογένεση των προνεφρικών σωληναρίων στο ζέβρα εξαρτάται από την καταστολή του irx1b με τη μεσολάβηση Mnx εντός του ενδιάμεσου μεσόδερμου. Dev Biol 411: 101–114.

77.OUTTANDY P, RUSSELL C, KLETA R, BOCKENHAUER D (2019). Το Zebrafish ως πρότυπο για τη λειτουργία και την ασθένεια των νεφρών. Pediatr Nephrol 34: 751–762.

78.PALMYRE A, LEE J, RYKLIN G, CAMARATA T, SELIG MK, DUCHEMIN AL, NOWAK P, ARNAOUT MA, DRUMMOND IA, VASILYEV A (2014). Η συλλογική επιθηλιακή μετανάστευση οδηγεί την αποκατάσταση των νεφρών μετά από οξύ τραυματισμό Εκδ. AJ Kabla. PLoS One 9: e101304.

79.PATTON EE, ZON LI (2001). Η τέχνη και ο σχεδιασμός των γενετικών οθονών: zebrafish. Nat Rev Genet 2: 956–966.

80.PIECZYNSKI J, MARGOLIS B (2011). Συμπλέγματα πρωτεϊνών που ελέγχουν την πολικότητα του νεφρικού επιθηλίου. Am J Physiol Physiol 300: F589–F601.

81.POUREETEZADI SJ, WINGERT RA (2016). Μικρό ψάρι, μεγάλο ψάρι: ζέβρα ως πρότυπο για νεφρική νόσο. Kidney Int 89: 1204–1210.

82.RAJAPURKAR MM, JOHN GT, KIRPALANI AL, ABRAHAM G, AGARWAL SK, ALMEIDA AF, GANG S, GUPTA A, MODI G, PAHARI D, PISHARODY R, PRAKASH J, RAMAN A, RANA DS, SASHARHO SAKHUJA V, TATAPUDI RR, JHA V (2012). Τι γνωρίζουμε για τη χρόνια νεφρική νόσο στην Ινδία: πρώτη αναφορά του ινδικού μητρώου ΧΝΝ. BMC Nephrol 13: 10.

83.RAJASEKARAN SA, PALMER LG, MOON SY, PERALTA SOLER A, APODACA GL, HARPER JF, ZHENG Y, RAJASEKARAN AK (2001). Η δραστηριότητα Na,K-ATPase Απαιτείται για Σχηματισμό Σφιχτών Ενώσεων, Δεσμοσωμάτων και Επαγωγή Πολικότητας σε Επιθηλιακά Κύτταρα Εκδ. G Guidotti. ΜοΙ Biol Cell 12: 3717-3732.

84. ROBERTS RJ, ELLIS AE (2012). Η Ανατομία και η Φυσιολογία των Τηλεοστών. Στο Fish Pathol Fourth Ed (Ed. Roberts RJ) Wiley, σελ. 17–61.

85.ROBU ME, LARSON JD, NASEVICIUS A, BEIRAGHI S, BRENNER C, FARBER SA, EKKER SC (2007). p53 Ενεργοποίηση από την Knockdown Technologies Εκδ. M Mullins. PLoS Genet 3: e78.

86.ROSSI A, KONTARAKIS Z, GERRI C, NOLTE H, HÖLPER S, KRÜGER M, STAINIER DYR (2015). Η γενετική αντιστάθμιση προκαλείται από επιβλαβείς μεταλλάξεις αλλά όχι από γονιδιακές καταστροφές. Nature 524: 230–233.

87.SABALIAUSKAS NA, FOUTZ CA, MEST JR, BUDGEON LR, SIDOR AT, GERSHENSON JA, JOSHI SB, CHENG KC (2006). Ιστολογία zebrafish υψηλής απόδοσης. Μέθοδοι 39: 246–254.

88. SERTORI R, TRENGOVE M, BASHEER F, WARD AC, LIONGUE C (2016). Επεξεργασία γονιδιώματος σε zebrafish: μια πρακτική επισκόπηση. Brief Funct Genomics 15: 322–330.

89. SHAH AN, DAVEY CF, WHITE BIRCH AC, MILLER AC, MOENS CB (2016). Ταχεία αντίστροφη γενετική εξέταση με χρήση CRISPR σε Zebrafish. Zebrafish 13: 152–153.

90. SHAO W, ZHONG D, JIANG H, HAN Y, YIN Y, LI R, QIAN X, CHEN D, JING L (2020). Μια νέα αμινογλυκοσίδη γενταμυκίνη δείχνει χαμηλή νεφροτοξικότητα και ωτοτοξικότητα σε έμβρυα ζέβρα. J Appl Toxicol 41:1063-1075.

91.SHARMA KR, HECKLER K, STOLL SJ, HILEBRANDS JL, KYNAST K, HERPEL E, PORUBSKY S, ELGER M, HADASCHIK B, BIEBACK K, HAMMES HP, NAWROTH PP, KROLL J (2016). Το ELMO1 προστατεύει τη νεφρική δομή και την υπερδιήθηση στην ανάπτυξη των νεφρών και σε διαβητικές συνθήκες. Sci Rep 6: 37172.

92.SMYTH IM, CULLEN-MCEWEN LA, CARUANA G, BLACK MJ, BERTRAM JF (2017). Ανάπτυξη του νεφρού. Στο Fetal and Neonatal Physiology Elsevier, σελ. 953-964.ε4.

93. SULLIVAN-BROWN J, BISHER ME, BURDINE RD (2011). Ενσωμάτωση, σειριακή τομή και χρώση εμβρύων ψαριού ζέβρα χρησιμοποιώντας ρητίνη JB-4. Nat Protoc 6: 46–55.

94.SULLIVAN-BROWN J, SCHOTTENFELD J, OKABE N, HOSTETTER CL, SERLUCA FC, THIBERGE SY, BURDINE RD (2008). Οι μεταλλάξεις του ψαριού Zebra που επηρεάζουν την κινητικότητα των βλεφαρίδων μοιράζονται παρόμοιους κυστικούς φαινοτύπους και υποδηλώνουν έναν μηχανισμό σχηματισμού κύστεων που διαφέρει από τα μορφώματα pkd2. Dev Biol 314: 261–275.

95. SUMMERTON J (1999). Μορφολινο αντιπληροφοριακά ολιγομερή: η περίπτωση ενός δομικού τύπου ανεξάρτητου από RNase H. Biochim Biophys Acta - Gene Struct Expr 1489: 141–158.

96.SUN, Z. AMSTERDAM, A. PAZOUR, GJ COLE, DG MILLER SM (2004). Μια γενετική εξέταση σε ζέβρα προσδιορίζει τα γονίδια των βλεφαρίδων ως την κύρια αιτία του κυστικού νεφρού. Ανάπτυξη 131: 4085–4093.

97.TAHARA T, OGAWA K, TANIGUCHI K (1993). Οντογένεση του Προνέφρου και του Μεσόνεφρου στον Νοτιοαφρικανικό Νυχτερινό Βάτραχο, Xenopus laevis Daudin, με Ειδική Αναφορά στην Εμφάνιση και την Κίνηση των Ανοσοθετικών Κυττάρων στη Ρενίνη. Exp Anim 42: 601–610.

98. TALLAFUSS A, GIBSON D, MORCOS P, LI Y, SEREDICK S, EISEN J, WASHBOURNE P (2012). Ενεργοποίηση και απενεργοποίηση της γονιδιακής λειτουργίας με χρήση νοητικών και αντιπληροφοριακών φωτομορφολίνων σε ζέβρα. Ανάπτυξη 139: 1691–1699.

99.TAVARES B, JACINTO R, SAMPAIO P, PESTANA S, PINTO A, VAZ A, ROXO-ROSA M, GARDNER R, LOPES T, SCHILLING B, HENRY I, SAÚDE L, LOPES SS (2017). Η σηματοδότηση Notch/Her12 διαμορφώνει, την αναλογία κινούμενων/ακίνητων βλεφαρίδων κατάντη του Foxj1a σε οργανωτή αριστερά-δεξιά ζέβρα. Elife 6: e25165.

100.THOMAS R, KANSO A, SEDOR JR (2008). Η Χρόνια Νεφρική Νόσος και οι Επιπλοκές της. Prim Care - Clin Off Pract 35: 329–344.

101.VARMA PP (2015). Επιπολασμός της χρόνιας νεφρικής νόσου στην Ινδία - Πού οδεύουμε; Indian J Nephrol 25: 133–135.

102.VARSHNEY GK, BURGESS SM (2014). Μεταλλαξιγένεση και φαινοτυπικοί πόροι σε ζέβρα για τη μελέτη της ανάπτυξης και των ανθρώπινων ασθενειών. Brief Funct Genomics 13: 82–94.

103.VARSHNEY GK, CARRINGTON B, PEI W, BISHOP K, CHEN Z, FAN C, XU L, JONES M, LAFAVE MC, LEDIN J, SOOD R, BURGESS SM (2016). Μια ροή εργασιών λειτουργικής γονιδιωματικής υψηλής απόδοσης που βασίζεται σε στοχευμένη μεταλλαξογένεση με τη μεσολάβηση CRISPR/Cas9-σε ζέβρα. Nat Protoc 11: 2357–2375.

104.VARUGHESE S, ABRAHAM G (2018). Χρόνια Νεφρική Νόσος στην Ινδία. Clin J Am Soc Nephrol 13: 802–804.

105.VASILYEV A, LIU Y, MUDUMANA S, MANGOS S, LAM PY, MAJUMDAR A, ZHAO J, POON KL, KONDRYCHYN I, KORZH V, DRUMMOND IA (2009). Η συλλογική μετανάστευση κυττάρων οδηγεί τη μορφογένεση του νεφρού του νεφρού Εκδ. DL Stemple. PLoS Biol 7: e1000009.

106.VERLANDER JW (1998). Φυσιολογική νεφρική λειτουργία και μεταβολές της νεφρικής λειτουργίας σε καταστάσεις νεφροτοξικότητας Φυσιολογική υπερδομή του νεφρού και του κατώτερου ουροποιητικού συστήματος. Toxicol Pathol 26: 1–17.

107.WILSON PD (2011). Αρικοβασική πολικότητα στο επιθήλιο πολυκυστικής νεφρικής νόσου. Biochim Biophys Acta - Mol Basis Dis 1812: 1239–1248.

108.WINGERT RA, DAVIDSON AJ (2011). Η νεφρογένεση του Zebrafish περιλαμβάνει δυναμικές χωροχρονικές αλλαγές έκφρασης στους νεφρικούς προγονούς και βασικά σήματα από το ρετινοϊκό οξύ και το irx3b. Dev Dyn 240: 2011–2027.

109.WINGERT RA, SELLECK R, YU J, SONG HD, CHEN Z, SONG A, ZHOU Y, THISSE B, THISSE C, MCMAHON AP, DAVIDSON AJ (2007). Τα γονίδια cdx και το ρετινοϊκό οξύ ελέγχουν την τοποθέτηση και την τμηματοποίηση του πρόνεφρου ψαριού ζέβρα. PLoS Genet 3: 1922–1938.

110.YAKULOV TA, TODKAR AP, SLANCHEV K, WIEGEL J, BONA A, GROSS M, SCHOLZ A, HESS I, WURDITSCH A, GRAHAMMER F, et al., (2018). Το CXCL12 και το MYC ελέγχουν τον ενεργειακό μεταβολισμό για να υποστηρίξουν προσαρμοστικές αποκρίσεις μετά από νεφρική βλάβη. Nat Commun 9: 1–15.

111.YAMAGUCHI T, HAMPSON SJ, REIF GA, HEDGE AM, WALLACE DP (2006). Το ασβέστιο αποκαθιστά έναν φυσιολογικό φαινότυπο πολλαπλασιασμού στα επιθηλιακά κύτταρα της ανθρώπινης πολυκυστικής νόσου των νεφρών. J Am Soc Nephrol 17: 178–187.

112.ZAGHLOUL NA, KATSANIS N (2011). Δοκιμασίες Ζέβρα Ψαριών Κολοπαθειών. Στο Methods in Cell Biology (Ed. Detrich HW, Westerfield Μ, Ζον L. I). Τομ. 105. Academic Press, σσ. 257-272.

113.ZHAO C, MALICKI J (2007). γενετικά ελαττώματα των προνεφρικών βλεφαρίδων σε ζέβρα. Mech Dev 124: 605–616.

114.ZHOU W, DAI J, ATTANASIO M, HILDEBRANDT F (2010). Η νεφροκυστίνη-3 απαιτείται για τη λειτουργία των βλεφαρίδων σε έμβρυα ζέβρα. Am J Physiol Physiol 299: F55–F62.

115.ZHOU W, HILDEBRANDT F (2012). Επαγώγιμος τραυματισμός των ποδοκυττάρων και πρωτεϊνουρία σε διαγονιδιακό ζέβρα. J Am Soc Nephrol 23: 1039–1047.

Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501