Εντερική διαπερατότητα και κατάθλιψη σε ασθενείς με φλεγμονώδη νόσο του εντέρουⅠ
Dec 20, 2023
Περίληψη: Η κατάθλιψη είναι ένα παγκόσμιο πρόβλημα υγείας που απαιτεί έγκαιρη και ακριβή διάγνωση για να εξασφαλιστεί η γρήγορη πρόσβαση στην κατάλληλη θεραπεία. Η πρόσφατη προσοχή έχει επικεντρωθεί στην ανάλυση του άξονα εγκεφάλου-έντερου-μικροβίωσης μεταξύ πολλαπλών ψυχοπαθολογικών μονοπατιών. Ο εντερικός φραγμός παίζει βασικό ρόλο και οι δυσλειτουργίες που εμφανίζονται σε αυτό το επίπεδο έχουν επιπτώσεις στην ψυχική υγεία. Η παρούσα μελέτη στόχευε στη διερεύνηση του ρόλου των βιοδεικτών εντερικής διαπερατότητας, π.χ. καλπροτεκτίνης, ζονουλίνης, πρωτεΐνης που δεσμεύει λιποπολυσακχαρίτες (LBP) και εντερικής πρωτεΐνης δέσμευσης λιπαρών οξέων (I-FAB), στην κατάθλιψη σε ασθενείς με φλεγμονώδη νόσο του εντέρου (IBD). ).
Αυτή είναι η πρώτη μελέτη αυτού του είδους που πραγματοποιείται στη Ρουμανία, την Ανατολική Ευρώπη, με έμφαση σε ασθενείς με νόσο του Crohn και ελκώδη κολίτιδα. Οι συσχετίσεις που εντοπίστηκαν μεταξύ της κατάθλιψης και της καλπροτεκτίνης και της κατάθλιψης και της LBP έχουν τη δυνατότητα να ρίξουν φως στη διαδικασία ταχείας διάγνωσης της κατάθλιψης με τη βοήθεια βιοδεικτών. Δεδομένου ότι η κατάθλιψη συσχετίζεται με μείωση της ποιότητας ζωής των εσωτερικών ασθενών με ΙΦΝΕ, η ανάγκη πρόσβασης σε κατάλληλες θεραπείες πρέπει να είναι επείγουσα.
1. Εισαγωγή
Η κατάθλιψη είναι μια ατομική, επαγγελματική και κοινωνική αναπηρία που σχετίζεται με σωματικές νοσηρότητες [1,2] και με υψηλό κίνδυνο θνησιμότητας από αυτοκτονία [3]. Ωστόσο, η πρόσβαση σε ειδικούς, η σωστή διάγνωση και η αποτελεσματική θεραπεία είναι περιορισμένες [4]. Μια έγκαιρη και ακριβής διάγνωση [5,6], καθώς και μια εξατομικευμένη επιλογή θεραπείας [7], είναι απαραίτητα για τη μείωση της ταλαιπωρίας και της οικονομικής επιβάρυνσης της νόσου [3]. Σύμφωνα με τα διαγνωστικά κριτήρια στο Διαγνωστικό και Στατιστικό Εγχειρίδιο Ψυχικών Διαταραχών (DSM V) [8], η κατάθλιψη είναι μια συναισθηματική διαταραχή με μια ετερογενή ομάδα συμπτωμάτων. Για να διαγνωστεί, απαιτείται η παρουσία πέντε από τα εννέα ακόλουθα συμπτώματα: καταθλιπτική διάθεση, έλλειψη ευχαρίστησης, δυσκολία στον ύπνο και όρεξη, χαμηλά επίπεδα ενέργειας, γνωστικές αλλαγές, αισθήματα ενοχής και ενοχής και ιδέες αυτοκτονίας. Μέχρι στιγμής, η ακριβής Οι παθοφυσιολογικοί μηχανισμοί για να επωφεληθούν από την αποτελεσματική θεραπεία δεν είναι γνωστοί. Αρκετοί μηχανισμοί έχουν τεθεί υπό αμφισβήτηση, αλλά οι θεωρίες εξακολουθούν να αναπτύσσονται.
Έτσι, οι δυσλειτουργίες στον άξονα υποθαλάμου-υπόφυσης, των νευροδιαβιβαστών, του πνευμονογαστρικού νεύρου, των μεταβολιτών λιπαρών οξέων βραχείας αλυσίδας, της τρυπτοφάνης, των φλεγμονωδών παραγόντων και του άξονα εγκεφάλου-έντερου-μικροβίωσης έχουν διερευνηθεί [9-12]. Έχει αποδειχθεί ότι όχι μόνο οι διαταραχές που σχετίζονται με το στρες επιφέρουν αλλαγές στη σύσταση του εντερικού μικροβίου μέσω του άξονα υποθαλάμου-υπόφυσης-επινεφριδίων, αλλά και το έντερο επηρεάζει
του κεντρικού νευρικού συστήματος μέσω της διέγερσης του πνευμονογαστρικού, της εντερικής διαπερατότητας και της απελευθέρωσης φλεγμονωδών και αντιφλεγμονωδών ενώσεων και αλλαγών στους κυκλοφορούντες παράγοντες στο αίμα [13]. Τις τελευταίες δύο δεκαετίες, η μελέτη της εμπλοκής του άξονα εγκεφάλου-έντερου-μικροβίωσης σε ψυχικές διαταραχές έχει αποκτήσει δυναμική [9,14]. Σε αυτό το πλαίσιο, ο ρόλος του leaky gutsyndrome έχει λάβει μεγαλύτερη προσοχή [15,16].
Ο εντερικός φραγμός έχει τον κύριο ρόλο στην πέψη και την απορρόφηση των θρεπτικών συστατικών· δευτερογενώς, ελέγχει αυστηρά τη μεταφορά αντιγόνων από τον αυλό στον υποβλεννογόνο και διατηρεί την ισορροπία μεταξύ της ανοχής και της ανοσολογικής απόκρισης που προκαλεί φλεγμονή. Η ακεραιότητα του εντερικού φραγμού μπορεί να επηρεαστεί από τη διατροφή, τη δυσβίωση της εντερικής μικροχλωρίδας ή από άλλους παράγοντες. Αυτά έχουν τη δυνατότητα να προκαλέσουν ανοσοενεργοποίηση με μετατόπιση μικροβιακών αντιγόνων και μεταβολιτών. Επί του παρόντος, η ζωνουλίνη ορού, η εντερική πρωτεΐνη που δεσμεύει λιπαρά οξέα (IFABP/FABP2) και η LBP, καθώς και η λευκωματίνη κοπράνων, η καλπροτεκτίνη και η ζωνουλίνη, έχουν αναλυθεί ως εντερική διαπερατότητα δείκτες [17]. Η καλπροτεκτίνη είναι μια πρωτεΐνη που δεσμεύει ασβέστιο και ψευδάργυρο, αρχικά απομονωμένα από λευκοκύτταρα· είναι χρήσιμη στη διαφοροποίηση της φλεγμονώδους νόσου του εντέρου από το σύνδρομο ευερέθιστου εντέρου. Παίζει σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια της φλεγμονής και θεωρείται πρωτεΐνη οξείας φάσης [18 ].
Οι κανονικές τιμές είναι μεταξύ 10 και 50 ή 60 (ug/g). Τιμές πάνω από 200 (ug/g) μπορεί να υποδηλώνουν φλεγμονώδη νόσο και τιμές πάνω από 500–600 (ug/g) σίγουρα υποδηλώνουν την ύπαρξη εντερικής νόσου [19]. Η πρωτεΐνη που δεσμεύει τον λιποπολυσακχαρίτη (LBP) είναι ένα απαραίτητο συστατικό λιπιδίων της εξωτερικής μεμβράνης των Gram-αρνητικών βακτηρίων [20], που προκαλεί ενδοτοξαιμία [21]. Το LBPs που παράγεται από ηπατοκύτταρα, λιπώδη ιστό και εντερικά κύτταρα λειτουργεί ως πρωτεΐνη οξείας φάσης Ι και παίζει σημαντικό ρόλο στην ανοσολογική απόκριση [22]. Η LBP είναι παρούσα στον ορό σε συγκεντρώσεις 5–15 mg/mL και αυξάνεται 10 έως 50 φορές κατά τη διάρκεια της αντίδρασης οξείας φάσης. Η λειτουργία φραγμού διατηρείται από τη ζονουλίνη, γνωστή ως ο μόνος φυσιολογικός ρυθμιστής των στενών ενδοκυτταρικών συνδέσεων (TJs) [15,23, 24]. Η ζονουλίνη ανοίγει αναστρέψιμα το TJ, δρώντας στον ενεργοποιημένο από πρωτεάση υποδοχέα 2 που βρίσκεται στον ενδοκυτταρικό χώρο του συμπλέγματος σύνδεσης [25]. Η διάμεση τιμή της ζονουλίνης είναι 34 ng/mL [26].
Η εντερική πρωτεΐνη που δεσμεύει λιπαρά οξέα (I-FABP/FABP2) είναι μία από τις εννέα διαφορετικές FABP που έχουν αναγνωριστεί, οι οποίες ανήκουν σε μια υπεροικογένεια πρωτεϊνών που δεσμεύουν τα λιπίδια. Ο κύριος ρόλος είναι η ενδοκυτταρική μεταφορά και η ρύθμιση της απορρόφησης λιπαρών οξέων [27]. Όταν συμβεί βλάβη στον επιθηλιακό εντερικό φραγμό, το I-FABP απελευθερώνεται στην κυκλοφορία και η συγκέντρωσή του στο πλάσμα αυξάνεται [28]. Η τιμή κατωφλίου για το I-FAPB θεωρείται 2 ng/mL. Σε αυτό το πλαίσιο, στοχεύσαμε να διερευνήσουμε το ρόλο της κατάθλιψης βιοδεικτών εντερικής διαπερατότητας σε ασθενείς με φλεγμονώδη νόσο του εντέρου (IBD) με (i) εξέταση της σχέσης μεταξύ καλπροτεκτίνης, ζονουλίνης, LBP , IFABP/FABP2 και κατάθλιψη και με (ii) αξιολόγηση της επίδρασης της κατάθλιψης στην ποιότητα ζωής.
2. Υλικά και μέθοδοι
2.1. Ομάδα μελέτης
Η αρχική ομάδα περιελάμβανε 60 ασθενείς από τη Γαστρεντερολογική Κλινική του Κλινικού Νοσοκομείου Constanta County μεταξύ Απριλίου και Ιουνίου 2021. Τα κριτήρια συμπερίληψης ήταν διάγνωση IBD, ηλικία 18 ετών και άνω, γνώση ανάγνωσης και γραφής και συμφωνία συμμετοχής στη μελέτη. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν η άρνηση συναίνεσης, η σοβαρή κατάθλιψη ή άλλες σοβαρές ψυχικές διαταραχές για τις οποίες κατευθύνθηκαν στην εξειδικευμένη ψυχιατρική υπηρεσία. Μετά από ενημερωμένη συναίνεση, ένας ερευνητής επικοινώνησε τηλεφωνικά με τους ασθενείς για να εφαρμόσει ένα κοινωνικοδημογραφικό ερωτηματολόγιο για την κατάθλιψη και ένα ερωτηματολόγιο για την ποιότητα της ζωής.Στη μελέτη συμπεριλήφθηκαν 30 ασθενείς που πέρασαν από όλα τα στάδια της μελέτης.
2.2. Ερωτηματολόγια που χρησιμοποιούνται
Το Ερωτηματολόγιο Υγείας του Ασθενούς-9 (PHQ-9) [29] εφαρμόστηκε στους συμμετέχοντες για να αξιολογηθεί το επίπεδο κατάθλιψης από το οποίο επηρεάστηκαν. Αυτό το τυπικό ερωτηματολόγιο περιέχει εννέα στοιχεία στα οποία πρέπει να απαντηθούν με βάση τα συμπτώματα που είχε ο ασθενής τις τελευταίες 14 ημέρες. Οι βαθμολογίες ταξινομούνται ως εξής: 1–4 ελάχιστη κατάθλιψη, 5–9 ήπια κατάθλιψη, 10–14 μέτρια κατάθλιψη, 15–19 μέτρια κατάθλιψη και 20–27 σοβαρή κατάθλιψη Παρομοίως, εφαρμόσαμε ένα ερωτηματολόγιο για την ποιότητα ζωής (EQ{{ 14}}Δ) [30,31] για τη συλλογή δεδομένων σχετικά με την ποιότητα ζωής. Τα στοιχεία που περιλαμβάνονται σε αυτό το εργαλείο είναι η κινητικότητα του ασθενούς, η αυτοφροντίδα, η ενασχόληση με συνήθεις δραστηριότητες, ο πόνος ή η δυσφορία και το άγχος ή η κατάθλιψη που βιώνει. Τα στοιχεία απαντώνται σε κλίμακα πέντε επιπέδων.
2.3. Συλλογή δειγμάτων και Εργαστηριακή Ανάλυση
Ορολογικά δείγματα για ζονουλίνη, IFABP/FABP2, LBP και δείγματα κοπράνων για καλπροτεκτίνη συλλέχθηκαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο για τη συλλογή και τη μεταφορά δυνητικά μολυσματικών βιολογικών δειγμάτων. Τα δείγματα ορού συλλέχθηκαν με φλεβική παρακέντηση, νηστεία και στο vacutainer με ένα πανί ενεργοποιητή. Δείγματα κοπράνων συλλέχθηκαν από αυθόρμητα εκπεμπόμενα κόπρανα σε δοχεία χωρίς μέσο φορέα. Ο ορός δοκιμάστηκε για ζονουλίνη με MyBioSource Kit, Inc. (San Diego, CA, USA). και IFABP/FABP2 και LBPwith Wuhan Fine Biotech Co., Ltd. Kit (Wuhan, Κίνα). Τα δείγματα δοκιμάστηκαν για καλπροτεκτίνη με το κιτ EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG. Όλες οι δοκιμές διεξήχθησαν με σχετιζόμενη με το ένζυμο ανοσοπροσροφητικό τεστ (ELISA) σε ADALTIS Analyzer GEN-4 και Victor X4 σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή του κιτ.
Το εύρος των φυσιολογικών τιμών ορίστηκε από τον κατασκευαστή του κιτ μόνο για την καλπροτεκτίνη ως εξής: Μικρότερο ή ίσο με 50.0 mcg/g ως κανονικό, 50.1– 120,0 mcg/g ως οριακή τιμή και μεγαλύτερη ή ίση με 120,1 mcg/g ως θετική για εντερική νόσο. Για τη ζονουλίνη, ο κατασκευαστής του κιτ αντίδρασης δεν καθόρισε κανένα χαμηλότερο όριο ανίχνευσης. Το κατώτερο όριο ανίχνευσης για το κιτ IFABP/FABP2 ήταν 0,156 ng/mL, 3,125 ng/mL για LBP και 3,125 ng/mL για την καλπροτεκτίνη. Για ζονουλίνη, I-FABP/FABP2 και LBS/LBP, ο κατασκευαστής του κιτ δεν κοινοποίησε μια σειρά από φυσιολογικές τιμές και χρησιμοποιήθηκαν τιμές που χρησιμοποιήθηκαν από άλλους συγγραφείς στις μελέτες τους. Ο ορός εξήχθη από κάθε δείγμα αίματος με φυγοκέντρηση στα 3000 × g για 30 λεπτά χρησιμοποιώντας φυγόκεντρο Thermo Scientific SL16R.
Όλοι οι οροί που ελήφθησαν διατηρήθηκαν κατεψυγμένοι στους -200 ◦C μέχρι να πραγματοποιηθούν οι αναλύσεις. Για τα IFABP/FABP2 και LBP, τα δείγματα αραιώθηκαν στο 1/2 με ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης δείγματος πριν από τη δοκιμή. Τα δείγματα κοπράνων διατηρήθηκαν στους -20 ◦C μέχρι την ημέρα της εξέτασης. Η εξαγωγή δείγματος κοπράνων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα εκχύλισης 980 iu μαζί με 20 mg κοπράνων, αναδεύτηκε για 30 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στα 2000 × g για 10 λεπτά χρησιμοποιώντας τη φυγόκεντρο Thermo Scientific SL16R. Η αραίωση των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε στη συνέχεια με 980 iu ρυθμιστικού διαλύματος δείγματος και 20 iu υπερκειμένου εκχύλισης.
Για τους τέσσερις δείκτες, χρησιμοποιήθηκαν μικροπλάκες με 96 φρεάτια επικαλυμμένα με αντισώματα σύλληψης: αντισώματα κατά της καλπροτεκτίνης, αντισώματα αντι-IFABP/FABP2, αντισώματα κατά της LBP ή αντισώματα αντιζονουλίνης. Οι αρχές της δοκιμής ήταν η ίδια βασισμένη σε ενζυμική τεχνολογία ανοσολογικών δοκιμών (ELISA). Πρότυπα δείγματα, δείγματα δοκιμής και αντισώματα ανίχνευσης συζευγμένα με βιοτίνη προστέθηκαν αργότερα στα φρεάτια. Τα υποστρώματα TMB (3,30,5,50-τετραμεθυλβενζιδίνη) χρησιμοποιήθηκαν για την οπτικοποίηση της ενζυμικής αντίδρασηςHRP (υπεροξειδάση χρένου). Το HRP κατέλυσε το TMB για να παράγει ένα μπλε προϊόν που άλλαξε σε κίτρινο μετά την προσθήκη ενός διαλύματος οξέος.
Η πυκνότητα της κίτρινης κηλίδας ήταν ανάλογη με την ποσότητα του δείγματος που συλλέχθηκε στο τρυβλίο. Η ένταση χρώματος μετρήθηκε στα 450 nm στον αναγνώστη μικροπλάκας και στη συνέχεια υπολογίστηκε η συγκέντρωση στόχος.
2.4. Στατιστική ανάλυση
Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό στατιστικών στοιχείων IBM SPSS έκδοση 23 (Armonk, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ: IBM Corp.). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως διάμεσος και IQR (διατεταρτημόριοεύρος P75–P25) για συνεχείς μεταβλητές σε περίπτωση λοξών κατανομών ή ως ποσοστά για κατηγορικές μεταβλητές.
Εφόσον η δοκιμή κανονικότητας Shapiro–Wilk έδειξε, στην περίπτωση των συνεχών μεταβλητών που αναλύθηκαν, στατιστικές τιμές της δοκιμής των οποίων η πιθανότητα (p) ήταν χαμηλότερη από το επίπεδο σημαντικότητας {{0}}.05, η συνθήκη του η κανονικότητα δεν τηρήθηκε, εκτός από τις μεταβλητές LBP και PHQ 9, για τις οποίες p >=0.05. Θεωρήσαμε ότι η ανπαραμετρική προσέγγιση στη μελέτη της συσχέτισης μεταξύ των εν λόγω μεταβλητών, με την παρουσίαση του συντελεστή συσχέτισης rho του Spearman (ρ) και της πιθανότητας (p) που σχετίζεται με αυτόν, ήταν πιο κατάλληλη. Το επίπεδο σημαντικότητας ορίστηκε στο 0,05.
Φυσικό Βοτανικό Φάρμακο για την Ανακούφιση από τη Δυσκοιλιότητα-Σκιστάνο
Το Cistanche είναι ένα γένος παρασιτικών φυτών που ανήκει στην οικογένεια Orobanchaceae. Αυτά τα φυτά είναι γνωστά για τις φαρμακευτικές τους ιδιότητες και χρησιμοποιούνται στην Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική (TCM) εδώ και αιώνες. Τα είδη Cistanche απαντώνται κυρίως σε άνυδρες και ερημικές περιοχές της Κίνας, της Μογγολίας και σε άλλα μέρη της Κεντρικής Ασίας. Τα φυτά Cistanche χαρακτηρίζονται από τους σαρκώδεις, κιτρινωπούς μίσχους τους και εκτιμώνται ιδιαίτερα για τα πιθανά οφέλη για την υγεία τους. Στο TCM, το Cistanche πιστεύεται ότι έχει τονωτικές ιδιότητες και χρησιμοποιείται συνήθως για τη θρέψη των νεφρών, την ενίσχυση της ζωτικότητας και την υποστήριξη της σεξουαλικής λειτουργίας. Χρησιμοποιείται επίσης για την αντιμετώπιση ζητημάτων που σχετίζονται με τη γήρανση, την κούραση και τη γενική ευεξία. Ενώ το Cistanche έχει μακρά ιστορία χρήσης στην παραδοσιακή ιατρική, η επιστημονική έρευνα για την αποτελεσματικότητα και την ασφάλειά του είναι συνεχής και περιορισμένη. Ωστόσο, είναι γνωστό ότι περιέχει διάφορες βιοδραστικές ενώσεις όπως φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδή, λιγνάνες και πολυσακχαρίτες, οι οποίες μπορεί να συμβάλλουν στις φαρμακευτικές του επιδράσεις.
Wecistanche'sσκόνη cistanche, δισκία cistanche, κάψουλες cistanche, και άλλα προϊόντα αναπτύσσονται χρησιμοποιώνταςέρημοςκιστανάκιως πρώτες ύλες, που όλες έχουν καλή επίδραση στην ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα. Ο συγκεκριμένος μηχανισμός είναι ο εξής: Το Cistanche πιστεύεται ότι έχει πιθανά οφέλη για την ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα με βάση την παραδοσιακή χρήση του και ορισμένες ενώσεις που περιέχει. Ενώ η επιστημονική έρευνα ειδικά για την επίδραση του Cistanche στη δυσκοιλιότητα είναι περιορισμένη, πιστεύεται ότι έχει πολλαπλούς μηχανισμούς που μπορεί να συμβάλλουν στη δυνατότητά του να ανακουφίσει τη δυσκοιλιότητα. Υπακτικό αποτέλεσμα:Cistancheέχει χρησιμοποιηθεί από καιρό στην Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική ως θεραπεία για τη δυσκοιλιότητα. Πιστεύεται ότι έχει ένα ήπιο καθαρτικό αποτέλεσμα, το οποίο μπορεί να βοηθήσει στην προώθηση των κινήσεων του εντέρου και να προκαλέσει δυσκοιλιότητα. Αυτή η επίδραση μπορεί να αποδοθεί σε διάφορες ενώσεις του Cistanche, όπως φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες και πολυσακχαρίτες. Ενυδάτωση των εντέρων: Με βάση την παραδοσιακή χρήση, το Cistanche θεωρείται ότι έχει ενυδατικές ιδιότητες, στοχεύοντας συγκεκριμένα στα έντερα. Η προώθηση της ενυδάτωσης και της λίπανσης των εντέρων μπορεί να βοηθήσει να μαλακώσουν τα εργαλεία και να διευκολύνουν τη διέλευση, ανακουφίζοντας έτσι τη δυσκοιλιότητα. Αντιφλεγμονώδες αποτέλεσμα: Η δυσκοιλιότητα μπορεί μερικές φορές να σχετίζεται με φλεγμονή στο πεπτικό σύστημα. Το Cistanche περιέχει ορισμένες ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και λιγνάνων, που πιστεύεται ότι έχουν αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες. Μειώνοντας τη φλεγμονή στα έντερα, μπορεί να βοηθήσει στη βελτίωση της κανονικότητας των κινήσεων του εντέρου και στην ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα.
