Η αιτία της χρόνιας νεφρικής νόσου (ΧΝΝ)- Αναιμία

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

ΜΕΡΟΣ Ⅰ: Η πρωτεϊνουρική χρόνια νεφρική νόσος σχετίζεται με αλλοιωμένη διάρκεια ζωής των ερυθρών αιμοσφαιρίων, παραμόρφωση και μεταβολισμό

Rosi Bissinger, Travis Nemkov & et al.

Η ανάπτυξη τηςαναιμίαείναι μια τυπική επιπλοκή των προχωρημένωνχρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ) και σχετίζεται με μειωμένη ποιότητα ζωής¹και αυξημένο κίνδυνο για καρδιαγγειακά επεισόδια²και νοσηλεία,³καθώς και γνωστική έκπτωση.⁴Η σοβαρότητα τουαναιμίαέχει θεωρηθεί ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας θνησιμότητας τόσο σε ΧΝΝ τόσο από αιμοκάθαρση όσο και σε μη εξαρτώμενη από αιμοκάθαρση (χρόνια νεφρική νόσος) ασθενείς.⁵Η παθοφυσιολογία της νεφρικής νόσου που σχετίζεταιαναιμίαείναι πολύπλοκο και περιλαμβάνει ανεπάρκεια σιδήρου και ερυθροποιητίνης (EPO) στο πλαίσιο της φλεγμονής χαμηλού βαθμού, η οποία, με τη σειρά της, θέτει σε κίνδυνο τη φυσιολογική ερυθροποίηση στη ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) ασθενείς.⁶Σε προχωρημένη ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος), η ανταπόκριση του ΕΡΟ είναι ανεπαρκώς χαμηλή σε σχέση με το βαθμόαναιμία.^7,8 Ο υψηλός επιπολασμός της ταυτόχρονης ανεπάρκειας σιδήρου στη ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) είναι συνέπεια διαταραγμένης ομοιόστασης σιδήρου.⁹ Ένας παραμελημένος μηχανισμός απώλειας σιδήρου στη ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) είναι η πρωτεϊνουρία, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε απώλειες δεσμευμένου με τρανσφερίνη σιδήρου στα ούρα (έως 0,3 mg/ημέρα) όταν η πρωτεϊνουρία φτάσει στο νεφρωσικό εύρος.¹⁰Ένας άλλος παράγοντας που θεωρείται ότι συμβάλλειαναιμίασε ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) patients is the shortened lifespan of red blood cells (RBCs), first described >πριν από 60 χρόνια.^6,11,12

Οφέλη από το Cistanche: θεραπεία νεφρικής νόσου και βελτίωση της νεφρικής λειτουργίας

Μια πρόσφατη μελέτη που χρησιμοποιεί ένα τεστ αναπνοής μονοξειδίου του άνθρακα έδειξε ότι η διάρκεια ζωής των ερυθροκυττάρων μειώθηκε προοδευτικά από 120 ημέρες σε ασθενείς με ΧΝΝ σταδίου 1 (χρόνια νεφρική νόσος) έως 60 ημέρες σε ασθενείς με ΧΝΝ σταδίου 5 (χρόνια νεφρική νόσος).¹³ Συγκεκριμένα, η μετάγγιση αλλογενών ερυθρών αιμοσφαιρίων από υγιείς δότες σε ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) οι ασθενείς ακολουθήθηκαν από ταχεία κάθαρση των μεταγγισμένων ερυθρών αιμοσφαιρίων χωρίς ένδειξη αιμόλυσης.¹²Ένας εύλογος μηχανισμός για αυτήν την παρατήρηση μπορεί να είναι η διέγερση του κυτταρικού θανάτου που μοιάζει με απόπτωση σε ερυθρά αιμοσφαίρια, που υποδηλώνει ένα μοτίβο τραυματισμού στο οποίο η ακεραιότητα της κυτταρικής μεμβράνης δεν διακυβεύεται και το κυτταροπλασματικό περιεχόμενο παραμένει ανέπαφο.¹⁴Τα ερυθρά αιμοσφαίρια που υφίστανται κυτταρικό θάνατο εμφανίζουν διάφορες μορφολογικές αλλοιώσεις που προκύπτουν από κυτταροσκελετική βλάβη, όπως σχηματισμός επιφανειακών φυσαλίδων, απώλεια ελαστικότητας μεμβράνης και/ή κυτταρική αφυδάτωση.¹⁵Σε μοριακό επίπεδο, ο θάνατος των ερυθρών αιμοσφαιρίων σχετίζεται με ενδοκυτταρική συσσώρευση Ca2þ, μεταβολή της κυτταρικής ενεργειακής κατάστασης και διάσπαση της ασυμμετρίας των φωσφολιπιδίων, οδηγώντας τελικά σε εξωτερίκευση της φωσφατιδυλοσερίνης (PS) στην εξωτερική πλασματική μεμβράνη.^15,16Κατά συνέπεια, τα μακροφάγα και τα εξειδικευμένα δενδριτικά κύτταρα αναγνωρίζουν γρήγορα τα εξωτερικά ερυθρά αιμοσφαίρια, οδηγώντας σε φαγοκυττάρωση ερυθρόζης και τον καταβολισμό τους στον σπλήνα και στο ήπαρ.¹⁷Λόγω της συγχυτικής παθοφυσιολογίας τουΝεφρική Νόσος– συσχετίζεταιαναιμίασε ανθρώπους, δικαιολογούνται μελέτες σε ζώα για τον εντοπισμό των μηχανισμών που συμβάλλουν. Νεφροπάθεια που προκαλείται από δοξορουβικίνη (DIN) σε ποντίκια 129S1/SvImJ¹⁸και ποντίκια με επαγόμενη ανεπάρκεια ποδοκίνης (Nphs2Dipod)¹⁹είναι 2 μοντέλα που χαρακτηρίζονται από πρόκληση πρωτεϊνουρίας νεφρωσικού εύρους εντός ημερών, εξέλιξη σε νεφρική ανεπάρκεια μετά από 3 εβδομάδες και θάνατο σε 6 έως 7 εβδομάδες.^19–21Και τα δύο μοντέλα ποντικιών ανακεφαλαιώνουν αποτελεσματικά όλα τα στάδια της ανθρώπινης ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος). Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε εάν προοδευτική νεφρική ανεπάρκεια σε αυτά τα ποντίκια με πρωτεϊνουρικόΝεφρική Νόσοςεπηρεάζει τη διάρκεια ζωής των RBC και συμβάλλει στηναναιμία. Παράλληλα, εξετάσαμε τον φαινότυπο RBC στο αίμα που ελήφθη από ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) ασθενείς με πρωτεϊνουρία νεφρωσικού εύρους.

ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσος) καιαναιμία: CISTANCHE

ΜΕΘΟΔΟΙ

Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τα υλικά και τις μεθόδους παρέχονται στα Συμπληρωματικά Υλικά και Μέθοδοι.

Μελέτες ποντικιών

Πραγματοποιήθηκαν πειράματα σε 8-ποντίκια άγριου τύπου 129S1/SvImJ και των δύο φύλων ηλικίας μιας εβδομάδας (Charles River). Το DIN προκλήθηκε με μία μόνο ένεση δοξορουβικίνης (14,5 mg/g σωματικού βάρους), όπως περιγράφηκε προηγουμένως.^18,22Για τον έλεγχο της μυελοτοξικής επίδρασης της δοξορουβικίνης που δεν σχετίζεται με την ανάπτυξη νεφροπάθειας, ποντίκια C57BL/6 ανθεκτικά στη δοξορουβικίνη υποβλήθηκαν επίσης στο ίδιο πρωτόκολλο θεραπείας.²³ Επιπλέον, παρόμοια πειράματα διεξήχθησαν σε 8-ποντίκια εβδομάδων με επαγόμενη διαγραφή της ποδοκίνης (B6-Nphs2tm3.1Antc*Tg [Nphs1-rtTA*3G] 8Jhm*Tg[tetO -cre]1Jaw) ή ποντίκια Nphs2Dipod, τα οποία υποβλήθηκαν σε θεραπεία με δοξυκυκλίνη για 14 ημέρες.¹⁹Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τον Οδηγό Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Φροντίδα και τη Χρήση των Εργαστηριακών Ζώων και τον Γερμανικό Νόμο για την Ευημερία των Ζώων, με έγκριση από τις τοπικές αρχές (Regierungspräsidium Tübingen, αριθμοί έγκρισης M12/17 και M17/19G ). Ο πειραματικός σχεδιασμός των μελετών σε ποντίκια περιγράφεται στο Συμπληρωματικό Σχήμα S1.

Ασθενείς

Η μελέτη ασθενών διεξήχθη σε συμμόρφωση με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Tübingen (556/2018BO2). Ελήφθησαν δείγματα αίματος και ούρων λιθίου-ηπαρίνης από ασθενείς με πρωτεϊνουρία νεφρωσικού εύρους και διατηρημένο ρυθμό σπειραματικής διήθησης (GFR, στάδια 1-2, n ¼ 10) και ασθενείς με μειωμένο GFR (CKD (χρόνια νεφρική νόσος) στάδιο 3–5. n ¼ 15) στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Tübingen. Ως ομάδα ελέγχου, αίμα από υγιείς εθελοντές που ταιριάζουν με την ηλικία και το φύλο (n ¼ 25) χορηγήθηκε από την τράπεζα αίματος του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Tübingen. Όλα τα ανθρώπινα δείγματα συλλέχθηκαν μετά από ενημερωμένη συγκατάθεση. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών αναφέρονται στοΤραπέζι 1.

Πίνακας 1|Χαρακτηριστικά ασθενών με ΧΝΝ (χρόνια νεφρική νόσο) και υγιών αιμοδοτών

Αναλύσεις κυτταρομετρίας ροής

Διαφορετικές παράμετροι του θανάτου των ερυθρών κυττάρων προσδιορίστηκαν με συναδέλφους κυτταρομετρία.¹⁴ Για τον προσδιορισμό της διάρκειας ζωής των RBC in vivo, 25 ml χρωστικής 5,6-διοξεικής καρβοξυφθοροσκεΐνης ηλεκτριμιδυλεστέρα [5(6)-CFDA, SE] εγχύθηκαν σε συγκέντρωση 9,96 mM (διαλυτοποιημένο σε διμεθυλοσουλφοξείδιο) στην οπισθοτρογχική πλέγμα άγριου τύπου 129S1/SvImJ και ποντικών με ένεση δοξορουβικίνης, όπως περιγράφηκε προηγουμένως.24 Στα υποδεικνυόμενα χρονικά σημεία, λήφθηκε αίμα από το οπισθοτροχιακό πλέγμα των ποντικών και το ποσοστό των 5(6)-CFDA, SEþ κύτταρα ανιχνεύθηκαν με συναδέλφους κυτταρομετρική ανάλυση. Τέλος, τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό FlowJo (FlowJo LLC).

Παραμορφωσιμότητα RBC και εκτατομετρία ωσμωτικής κλίσης

Η παραμόρφωση των RBC μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον αναλυτή οπτικής περιστροφικής κυψέλης με υποβοήθηση λέιζερ (LORCA Max Sis; RR Mechatronics), ο οποίος έχει περιγραφεί λεπτομερώς αλλού.²⁵Οι αναλύσεις εκτατομετρίας οσμωτικής κλίσης (cosmos can) πραγματοποιήθηκαν επίσης χρησιμοποιώντας το LORCA Max Sis και μετρούν την παραμορφωσιμότητα υπό διάφορες οσμωτικές συνθήκες.²⁶

Ιστολογική εξέταση

Για τη χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη, οι σπλήνες και τα μηριαία οστά χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Όλες οι αντικειμενοφόρες πλάκες χρωματίστηκαν με το πρωτεύον αντίσωμα Ter119 (BD Pharmingen, αραίωση 1:500). Για χρώση με περιοδικό οξύ-Schiff, φέτες πάχους 2,5-mm τουνεφράχρωματίστηκαν με αντιδραστήριο περιοδικού οξέος-Schiff (Carl Roth) και αιματοξυλίνη (Abcam). Πραγματοποιήθηκε χρώση May-Grünwald-Giemsa (μέθοδος Pappenheim) για τον προσδιορισμό των αλλαγών σχήματος RBC, όπως περιγράφηκε προηγουμένως.²⁷ Η απομόνωση σπειραμάτων έγινε με τη χρήση προσέγγισης βιοτινυλίωσης και ταξινόμησης κυττάρων.¹⁹Για την ανίχνευση πρωτεΐνης της ποδοκίνης, εφαρμόστηκε ένα αντίσωμα από τη Sigma (Ρ0372).¹⁹Το Roti-Mount Fluor Care 4,6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (DAPI; Carl Roth) χρησιμοποιήθηκε για τη χρώση των πυρήνων.

Υγρή χρωματογραφία εξαιρετικά υψηλής απόδοσης μεταβολομική φασματομετρία μάζας από ερυθρά αιμοσφαίρια ποντικού

Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν όπως δημοσιεύτηκαν προηγουμένως.²⁸Εν συντομία, η αναλυτική πλατφόρμα χρησιμοποιεί ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας εξαιρετικά υψηλής απόδοσης Vanquish (Thermo Fisher Scientific) συνδεδεμένο διαδικτυακά με ένα φασματόμετρο μάζας Q Exactive (Thermo Fisher Scientific).

Το Cistanche αντιμετωπίζει τη νεφρική νόσο που προκαλείται από αναιμία

Στατιστικές αναλύσεις

Τα δεδομένα παρέχονται ως αριθμητικοί μέσοι όροι SEM ή ως διάμεσοι με διατεταρτημόριο εύρος (25ο-75ο εκατοστημόριο) με n που αντιπροσωπεύει τον αριθμό των χρησιμοποιημένων ζώων ή των ασθενών που περιλαμβάνονται, αντίστοιχα. Τα δεδομένα δοκιμάστηκαν για κανονικότητα με τη δοκιμή Kolmogorov-Smirnov, τη δοκιμή D'Agostino και τη δοκιμή Shapiro-Wilk. Οι διακυμάνσεις αναλύθηκαν με τη δοκιμή Bartlett για ίσες διακυμάνσεις. Μετά τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης Tukey ή Dunn, η μη ζευγαρωμένη δοκιμή Student t-test ή η δοκιμή Mann-Whitney U πραγματοποιήθηκε από το GraphPad Prism 8 (GraphPad Software). P < 0.05="" με="" 2-="" ουρά="" δοκιμή="" θεωρήθηκε="" στατιστικά="" σημαντική.="" πρόσθετα="" γραφήματα="" σχεδιάστηκαν="" μέσω="" του="" graphpad="" prism="">

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Η πειραματική πρωτεϊνουρική νεφρική νόσος προκαλείαναιμίασε ποντίκια Μετά την επαγωγή, ποντίκια 129S1/SvImJ με ποντίκια DIN και Nphs2Dipod ανέπτυξαν πρωτεϊνουρία νεφρωσικού εύρους (Εικόνα 1α και Συμπληρωματικό Σχήμα S2C) και προοδευτική νεφρική ανεπάρκεια που χαρακτηρίζεται από υψηλά επίπεδα ουρίας στο πλάσμα από την ημέρα 20 και μετά (Εικόνα 1b και Suppure SS). Κατά τη διάρκεια των πρώτων 10 ημερών, τα ποντίκια παρουσίασαν αύξηση σωματικού βάρους με ασκίτη (Εικόνα 1c και Συμπληρωματικό Σχήμα S2E), που αντικατοπτρίζει την κατακράτηση νατρίου που προκαλείται από την απέκκριση πρωτεασών σερίνης ή πρωτεϊνουρία.¹⁸Μετά από αυθόρμητη αντιστροφή της κατακράτησης νατρίου, αυτά τα ποντίκια έχασαν σταθερά βάρος. Σε ποντίκια με DIN και σε ποντίκια Nphs2Dipod, εικόνες μικροσκοπίου φωτός, που καταγράφηκαν μετά από 10 ημέρες, αποκάλυψαν τυπικές ιστομορφολογικές αλλαγές συμβατές με εστιακή τμηματική σπειραματική σκλήρυνση (Εικόνα 1δ και Συμπληρωματικό Σχήμα S2B). Αυτά απουσίαζαν σε ποντικούς C57BL/6 στους οποίους έγινε ένεση δοξορουβικίνης (Εικόνα 1δ). Η θεραπεία με δοξορουβικίνη προκάλεσε έντονη μείωση της αιμοσφαιρίνης, του αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων και του αιματοκρίτη (Εικόνα 1e–g) από την ημέρα 10 και μετά σε ποντίκια 129S1/SvImJ και C57BL/6, τα οποία στα τελευταία κανονικοποιήθηκαν στις ημέρες 20 και 30. Αντίθετα, στις ημέρες 20 και 30, τα ποντίκια με ένεση δοξορουβικίνη 129S1/SvImJ και ποντίκια με έλλειψη ποδοκίνης ανέπτυξαν προοδευτικήαναιμία, που χαρακτηρίζεται από μειωμένο μέσο σωματιδιακό όγκο (Εικόνα 1h) και μειωμένη αιμοσφαιρίνη (Συμπληρωματικό Σχήμα S2F), υποδηλώνοντας ότιαναιμίασχετίζεται με προοδευτική νεφρική ανεπάρκεια και όχι με θεραπεία με δοξορουβικίνη.

Εικόνα 1|Νεφρική λειτουργία και εμφανής αναιμία σε ποντίκια 129S1/SvImJ με ένεση δοξορουβικίνης.(α–δ) Τα ποντίκια 129S1/SvImJ στα οποία έγινε ένεση δοξορουβικίνης ανέπτυξαν (α) υψηλή πρωτεϊνουρία, (β) προοδευτική αύξηση της συγκέντρωσης της ουρίας στο πλάσμα, (γ) παροδική αύξηση σωματικού βάρους και (δ) τυπικές ιστομορφολογικές αλλαγές ενδεικτικές εστιακής τμηματικής σπειραματικής σκλήρυνσης την ημέρα 10 (χρώση με περιοδικό οξύ-Schiff, ράβδος ¼ 10 mm). (ε–η) Επιπλέον, αυτά τα ποντίκια αναπτύχθηκαναναιμίααντανακλάται από (ε) μειωμένο επίπεδο αιμοσφαιρίνης, (στ) χαμηλότερο αριθμό ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC), (ζ) μειωμένα επίπεδα αιματοκρίτη και (η) μειωμένο μέσο σωματιδιακό όγκο. (α–δ) Τα ποντίκια C57BL/6 στα οποία έγινε ένεση δοξορουβικίνης δεν εμφάνισαν σημάδια νεφρικής βλάβης και (π.χ.)αναιμίατην ημέρα 10 κανονικοποιήθηκε τις ημέρες 20 και 30. Εμφανίζονται τα αριθμητικά μέσα SEM. *P < 0,05,="" **p="">< 0,01,="">< 0.001,and="" ****p="" <="" 0.0001="" indicate="" signifificant="" difference="" between="" healthy="" 129s1/svimj="" and="" doxorubicin-injected="" 129s1/svimj="" mice;="" #p=""><0.05, ##p="" <="" 0.01,="" ###p="" <="" 0.001,="" and="" ####p="" <="" 0.0001="" indicate="" signifificant="" difference="" to="" the="" baseline="" of="" doxorubicin-injected="" 129s1/svimj="" mice;="" and="" §p="" <="" 0.05,="" §§p="" <="" 0.01,="" §§§p="" <="" 0.001,="" and="" §§§§p="" <="" 0.0001="" indicate="" signifificant="" difference="" between="" doxorubicin-injected="" 129s1/svimj="" and="" doxorubicin-injected="" c57bl/6="" mice.="" crea,="">

Η αναιμία στην πειραματική πρωτεϊνουρική νεφρική νόσο δεν προκαλείται από διαταραγμένη ερυθροποίηση

Και τα δύο μοντέλα αναιμικών ποντικών εμφάνισαν σημαντική αύξηση στο ποσοστό των κυκλοφορούντων δικτυοερυθροκυττάρων (Εικόνα 2α και Συμπληρωματικό Σχήμα S3C). Οι συγκεντρώσεις EPO στο πλάσμα αυξήθηκαν δραματικά την ημέρα 10 σε 129S1/SvImJ με DIN και υγιή ποντίκια C57BL/6 αλλά κανονικοποιήθηκαν ξανά τις ημέρες 20 και 30 (Εικόνα 2β). Σε ποντικούς με έλλειψη ποδοκίνης, οι συγκεντρώσεις EPO στο πλάσμα αυξήθηκαν την ημέρα 10 και παρέμειναν αυξημένες τις ημέρες 20 και 30 (Συμπληρωματικό Σχήμα S2H). Σε ιστολογικές αναλύσεις από μυελό των οστών και σπλήνα, ο αριθμός των ερυθροειδών πρόδρομων κυττάρων σε σύγκριση με τους μυελοειδείς προδρόμους αυξήθηκε την ημέρα 30 (Εικόνα 2d–g), υποδεικνύοντας διεγερμένη ερυθροποίηση σε αναιμικά ποντίκια 129S1/SvImJ με DIN.

Εικόνα 2|Η ερυθροποίηση διεγείρεται σε ποντίκια 129S1/SvImJ με ένεση δοξορουβικίνης με αναιμία. (a) Αναιμίασε ποντίκια 129S1/SvImJ στα οποία έγινε ένεση δοξορουβικίνης, εμφανίστηκε παρά τον αυξημένο αριθμό δικτυοερυθροκυττάρων στις ημέρες 2{{30}} και 30. (β) Η συγκέντρωση της ερυθροποιητίνης στο πλάσμα ήταν πολύ αυξημένη την ημέρα 10 σε ποντικούς 129S1/SvImJ και C57BL/6 στους οποίους έγινε ένεση δοξορουβικίνης, αλλά κανονικοποιήθηκε ξανά τις ημέρες 20 και 30. (γ–ε) Ποσοτικοποίηση των απόλυτων αριθμών (γ) μυελοειδών και (δ) ερυθροειδών κυττάρων στον μυελό των οστών. Η (ε) αναλογία μυελοειδών προς ερυθροειδών κυττάρων σε υγιή ποντίκια 129S1/SvImJ με ένεση δοξορουβικίνης στο μυελό των οστών έδειξε υψηλότερο αριθμό πρόδρομων κυττάρων ερυθροειδούς σε ποντίκια 129S1/SvImJ στα οποία έγινε ένεση δοξορουβικίνη την ημέρα 3{{5{5 }}}}. (f,g) Η ιστολογία (f) σπλήνας και (g) μυελού των οστών έδειξε αύξηση στα πρόδρομα κύτταρα ερυθροειδών, που παρατηρήθηκε ακόμη και σε χαμηλότερες μεγεθύνσεις, σε ποντίκια 129S1/SvImJ με ένεση δοξορουβικίνης (δεξιά πλαίσια) σε σύγκριση με υγιή ποντίκια (αριστερά πλαίσια ) την ημέρα 30. (f,g) Ter119 ανοσοϊστοχημεία (κάτω πάνελ) υποστήριξε τα ευρήματα αιματοξυλίνης και ηωσίνης (Η&Ε). Το Ter119 είναι θετικό στους πρόδρομους ερυθροειδείς (πυρηνωμένα κύτταρα) και στα ερυθρά αιμοσφαίρια (μη πυρηνικά κύτταρα). Μπάρα ¼ 100 mm; ένθετα ¼ 25 mm. Τα αριθμητικά μέσα SEM εμφανίζονται. *P <0,05, **p=""><0,01 και="" ***p=""><0,001 υποδεικνύουν="" σημαντική="" διαφορά="" μεταξύ="" υγιών="" ποντικών="" 129s1/svimj="" και="" 129s1/svimj="" με="" ένεση="" δοξορουβικίνης.="" το="" ##p=""><0,01 και="" το="" ####p=""><0,0001 υποδεικνύουν="" σημαντική="" διαφορά="" ως="" προς="" την="" αρχική="" τιμή="" των="" ποντικών="" 129s1/svimj="" που="" έλαβαν="" ένεση="" με="" δοξορουβικίνη.="" και="" §ρ="">< 0,05,="" §§ρ="">< 0,01="" και="" §§§§ρ="">< 0,0001="" υποδεικνύουν="" σημαντική="" διαφορά="" μεταξύ="" ποντικών="" 129s1/svimj="" με="" ένεση="" δοξορουβικίνης="" και="" c57bl/6="" με="" ένεση="">

Όφελος απόCistanche: θεραπεία νεφρικής νόσου και βελτίωση της νεφρικής λειτουργίας

Η μειωμένη διάρκεια ζωής των RBC είναι η κύρια αιτία αναιμίας στην πειραματική πρωτεϊνουρική νεφρική νόσο

Η εξωτερίκευση του PS στο εξωτερικό φύλλο της πλασματικής μεμβράνης RBC είναι δείκτης κυτταρικού θανάτου και προαγωγέας της ερυθροφαγοκυττάρωσης.¹⁴Ο θάνατος των κυττάρων RBC ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας αναλύσεις ταξινόμησης κυττάρων ενεργοποιημένης με φθορισμό της επιφάνειας PS που δεσμεύεται με φθορίζουσα αννεξίνη V.¹⁴ In freshly drawn blood, the percentage of PS-exposing cells was >{{0}}διπλάσια αύξηση την ημέρα 20 σε ποντίκια με DIN (4,16 τοις εκατό & 0.86 τοις εκατό ) σε σύγκριση με υγιή ποντίκια (1.{{7). }} τοις εκατό & 0.11 τοις εκατό ) (Εικόνα 3α). Ομοίως, τα ποντίκια Nphs2Dipod παρουσίασαν κατά προσέγγιση 2-πλάσια αύξηση στην έκθεση σε PS (1,27 τοις εκατό & 0,20 τοις εκατό ) σε σύγκριση με υγιή ποντίκια (0,58 τοις εκατό & 0,05 τοις εκατό ) την ημέρα 30 (Συμπληρωματικό Σχήμα S3A). Είναι γνωστό ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια αποβάλλονται από την κυκλοφορία από μακροφάγα που κατοικούν στον σπλήνα.17 Αυτή η παρατήρηση μπορεί, επομένως, να εξηγήσει την υψηλότερη αναλογία σπλήνα/σωματικό βάρος των ποντικών Nphs2Dipod (Συμπληρωματικό Σχήμα S2G), όπου τα διπλάσια RBC αποικοδομούνται σε σύγκριση με υγιή C57BL/6 ποντίκια. Καθώς η πρωτεϊνουρία νεφρωσικού εύρους οδηγεί σε δυσπρωτεϊναιμία29, διερευνήσαμε περαιτέρω εάν ο ενισχυμένος θάνατος των ερυθρών κυττάρων μπορεί να διεγείρεται από ένα συστατικό στο πλάσμα ποντικών με DIN. Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 3β, η έκθεση σε PS στις ημέρες 10 και 20 ήταν διπλάσια μετά την επώαση (30 λεπτά στους 37^OΓ) υγιών ερυθρών αιμοσφαιρίων στο πλάσμα ποντικών 129S1/SvImJ που ενέθηκαν με δοξορουβικίνη σε σύγκριση με την επώαση στο πλάσμα υγιών ποντικών. Εισροή Ca2þ στα ερυθρά αιμοσφαίρια, με τη μεσολάβηση τάσεων και ανεξάρτητων μη εκλεκτικών κατιόντων καναλιών,^30,31είναι ένας από τους βασικούς ρυθμιστές του θανάτου των ερυθρών κυττάρων. Σε RBC που συλλέχθηκαν τις ημέρες 20 και 30 από ποντίκια 129S1/SvImJ με DIN, οι ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις Ca2þ αυξήθηκαν (Εικόνα 3γ). αυτό το φαινόμενο ανακεφαλαιώθηκε σε ποντικούς Nphs2Dipod την ημέρα 20 (Συμπληρωματικό Σχήμα S3B). Και στα δύο μοντέλα ποντικών, υπήρξε σημαντική αρνητική συσχέτιση του ποσοστού των θετικών σε PS RBCs, με τη σοβαρότητα τηςαναιμίααντανακλάται από τα επίπεδα αιμοσφαιρίνης (Εικόνα 3δ και Συμπληρωματικό Σχήμα S3D). Επιπλέον, υπήρξε σημαντική συσχέτιση με τη νεφρική βλάβη που αντανακλάται από τη συγκέντρωση ουρίας στο πλάσμα (Εικόνα 3ε και Συμπληρωματικό Σχήμα S3E) και σε μικρότερο βαθμό με την πρωτεϊνουρία (Εικόνα 3στ και Συμπληρωματικό Σχήμα S3F). Για να αντισταθμιστεί η απώλεια RBC σεαναιμία, ο σχηματισμός νέων RBC διεγέρθηκε και στα δύο ποντίκια, όπως υποδεικνύεται από το αυξημένο ποσοστό των κυκλοφορούντων δικτυοερυθροκυττάρων, και συσχετίστηκε σημαντικά με το μέγεθος των RBC που εκθέτουν το PS (Εικόνα 3g και Συμπληρωματικό Σχήμα S3G).

Εικόνα 3|Τα ποντίκια με νεφροπάθεια που προκαλείται από τη δοξορουβικίνη αναπτύσσουν ενισχυμένο θάνατο ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC) που προκαλείται από αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα ασβεστίου.(α) Η εξωτερίκευση της φωσφατιδυλοσερίνης (PS), που αντανακλά τον θάνατο των RBC, ενισχύθηκε τις ημέρες 20 και 30 μετά την πρόκληση νεφροπάθειας που προκαλείται από τη δοξορουβικίνη. (β) Η επώαση υγιών ερυθρών αιμοσφαιρίων στο πλάσμα που ελήφθη τις ημέρες 10 και 20 από αυτά τα ποντίκια οδήγησε σε εξωτερίκευση του PS. (γ) Η εξωτερίκευση του PS συνοδεύτηκε από ενισχυμένα επίπεδα ενδοκυτταρικού ασβεστίου των ερυθρών αιμοσφαιρίων που ελήφθησαν τις ημέρες 20 και 3{{3{0}} μετά την επαγωγή. (δ–ζ) Το (δ) ποσοστό των ερυθρών αιμοσφαιρίων που εκθέτουν PS συσχετίστηκε με τα επίπεδα αιμοσφαιρίνης, τη νεφρική βλάβη που υποδεικνύεται από (ε) συγκέντρωση ουρίας στο πλάσμα και (στ) πρωτεϊνουρία, καθώς και με (ζ) σχηματισμό δικτυοερυθροκυττάρων. (δ–ζ) Τα δεδομένα περιλαμβάνουν κάθε χρονικό σημείο (0, 10, 20 και 30 ημέρες) κάθε υγιούς ποντικιού 129S1/SvImJ και 129S1/SvImJ με νεφροπάθεια που προκαλείται από τη δοξορουβικίνη. Τα αριθμητικά μέσα SEM εμφανίζονται. **P <0,01, ***p=""><0,001 και="" ****p=""><0,0001 δείχνουν="" σημαντική="" διαφορά="" μεταξύ="" υγιών="" ποντικών="" 129s1/svimj="" και="" 129s1/svimj="" με="" ένεση="" δοξορουβικίνης="" (in.).="" το="" #p=""><0,05, ##p=""><0,01 και="" ####p=""><0,0001 υποδεικνύουν="" σημαντική="" διαφορά="" σε="" σχέση="" με="" την="" αρχική="" τιμή="" των="" ποντικών="" 129s1/svimj="" που="" έλαβαν="" ένεση="" με="" δοξορουβικίνη.="" και="" §§§§ρ="">< 0,0001="" υποδεικνύουν="" σημαντική="" διαφορά="" μεταξύ="" ποντικών="" c57bl/6="" στα="" οποία="" χορηγήθηκε="" ένεση="" δοξορουβικίνης="" 129s1/svimj="" και="" ποντικών="" με="" ένεση="" δοξορουβικίνης.="" crea,="" κρεατινίνη;="" mfi,="" μέση="" ένταση="">

Όφελος απόCistanche: θεραπεία νεφρικής νόσου και βελτίωση της νεφρικής λειτουργίας

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΤΟ ΜΕΡΟΣ Ⅱ