Γλυκοκορτικοειδές Ενίσχυση της Μνήμης Αναγνώρισης Μέσω Βασοπλάγιας Διευκόλυνσης των Αλληλεπιδράσεων του Προκαταρκτικού Φλοιού

για περισσότερες πληροφορίες:ali.ma@wecistanche.com

Areg Barsegyana, b, Gabriele Mironea, b, Giacomo Ronzonia, b, Chunan Guoa, b, Qi Songa, b, Daan van Kuppevelda, b, Evelien HS Schuta, b, Piray Atsaka, b, Selina Teurlingsa, b, James L. McGaughc,d,1, Dirk Schuberta,b,

και Benno Roozendaala,b,1

aDepartment of Cognitive Neuroscience, Radboud University Medical Center, 6500 HB Nijmegen, The Netherlands; Bonders Institute for Brain, Cognition and Behaviour, Radboud University, 6525 EN Nijmegen, Ολλανδία; κέντρο για τη Νευροβιολογία της Μάθησης καιΜνήμη, University of California, Irvine, CA 92697-3800; and Department of Neurobiology and Behavior, University of California, Irvine, CA 92697-3800

Συνεισφορά από τον James L. McGaugh, 15 Φεβρουαρίου 2019 (εστάλη για αναθεώρηση στις 28 Ιανουαρίου 2019, κριτική από Ivan Izquierdo και Barry Setlow)

Εκτεταμένα στοιχεία υποδεικνύουν ότι η βασοπλάγια αμυγδαλή (BLA) αλληλεπιδρά με άλλες περιοχές του εγκεφάλου μεσολαβώντας τις επιδράσεις της ορμόνης του στρες και της συναισθηματικής διέγερσηςμνήμηενοποίηση. Οι μελέτες ενεργοποίησης του εγκεφάλου έχουν δείξει ότι οι συνθήκες διέγερσης οδηγούν στην ενεργοποίηση μεγάλης κλίμακας νευρωνικών δικτύων και αρκετών λειτουργικών συνδέσεων μεταξύ των περιοχών του εγκεφάλου πέρα ​​από το BLA. Είτε τέτοιες απομακρυσμένες αλληλεπιδράσεις σεμνήμηΗ ενοποίηση εξαρτάται επίσης από τη δραστηριότητα BLA δεν είναι ακόμη γνωστή. Διερευνήσαμε, σε αρσενικούς αρουραίους Sprague-Dawley, εάν η δραστηριότητα BLA επιτρέπει αλληλεπιδράσεις του προμετωπικού φλοιού (PrL) με τον πρόσθιο νησιωτικό φλοιό (at) και τον ραχιαίο ιππόκαμπο (HPC) στη ρύθμιση των επιδράσεων των γλυκοκορτικοειδών σε διαφορετικά συστατικά της αναγνώρισης αντικειμένωνμνήμη. Ο αγωνιστής του υποδοχέα γλυκοκορτικοειδών (GR) RU 28362 χορηγήθηκε στον PrL, αλλά όχι στον υπολεμφικό φλοιό, αμέσως μετά την προπόνηση βελτιωμένης αναγνώρισης αντικειμένων 24-ώραμνήμητόσο της ταυτότητας όσο και της θέσης του αντικειμένου μέσω λειτουργικών αλληλεπιδράσεων με το at και το DHCP, αντίστοιχα. Είναι σημαντικό ότι η αδρανοποίηση του BLA μετά την προπόνηση από τον νοραδρενεργικό ανταγωνιστή προπρανολόλη κατάργησε την επίδραση της χορήγησης αγωνιστή GR στο PrL στομνήμηενίσχυση τόσο της ταυτότητας όσο και της θέσης του αντικειμένου. Η απενεργοποίηση BLA από την προπρανολόλη επίσης εμπόδισε την επίδραση της χορήγησης αγωνιστή GR στο PrL στην πρόκληση αλλαγών στη νευρωνική δραστηριότητα εντός του at και του dHPC κατά τη διάρκεια της περιόδου ενοποίησης μετά τη μάθηση καθώς και στις δομικές αλλαγές στη μορφολογία της σπονδυλικής στήλης που αξιολογήθηκαν 24 ώρες αργότερα. Αυτά τα ευρήματα παρέχουν ενδείξεις ότι η νοραδρενεργική δραστηριότητα BLA επιτρέπει λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του PrL και του aIC και dHPC στη ρύθμιση των επιδράσεων της ορμόνης του στρες και της συναισθηματικής διέγερσηςμνήμη.

Κάντε κλικ στοΟφέλη και παρενέργειες του Cistanche και το Cistanche για τη μνήμη

Οι αγχωτικές και συναισθηματικές εμπειρίες ενεργοποιούν τα ορμονικά και εγκεφαλικά συστήματα που δημιουργούν δυνατές αναμνήσεις (1, 2). Εκτεταμένα στοιχεία δείχνουν ότι η νοραδρενεργική ενεργοποίηση της βασεοπλάγιας αμυγδαλής (BLA), που προκαλείται από συναισθηματική διέγερση, εμπλέκεται καθοριστικά στην ενίσχυση της μακροπρόθεσμης εδραίωσηςμνήμη(2). Έχουμε αναφέρει εκτεταμένα στοιχεία που δείχνουν ότι η νοραδρενεργική ενεργοποίηση του BLA παίζει επίσης κρίσιμο ρόλο στην ενίσχυση των επιδράσεων των ορμονών του στρες των επινεφριδίων, δηλαδή της επινεφρίνης και των γλυκοκορτικοειδών.μνήμηενοποίηση (3–5). Πολλές προηγούμενες μελέτες έχουν διερευνήσει πώς μια τέτοια ενεργοποίηση BLA ενισχύει την ενοποίησημνήμηεπηρεάζοντας τη νευρική πλαστικότητα και τις διαδικασίες αποθήκευσης πληροφοριών σε συγκεκριμένες περιοχές-στόχους, όπως ο ιππόκαμπος (2, 6-10). Συσσωρευμένα στοιχεία από μελέτες ενεργοποίησης εγκεφάλου υποδεικνύουν ότι οι συνθήκες διέγερσης αυξάνουν την ενεργοποίηση μεγάλης κλίμακας νευρωνικών δικτύων (11-13) και επηρεάζουν επίσης πολυάριθμες λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των περιοχών του εγκεφάλου πέρα ​​από την αμυγδαλή (14, 15). Ωστόσο, δεν είναι γνωστό εάν η δραστηριότητα BLA απαιτείται για τη ρύθμιση των επιδράσεων της συναισθηματικής διέγερσης στις λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ τέτοιων περιφερικών περιοχών του εγκεφάλου.

Ερευνήσαμε εάν η νοραδρενεργική δραστηριότητα του BLA επιτρέπει λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του έσω προμετωπιαίου φλοιού (mPFC) και του πρόσθιου νησιωτικού φλοιού (aIC) και του ραχιαίου ιππόκαμπου (dHPC) στη μεσολάβηση της ενίσχυσης της γλυκοκορτικοειδούς ορμόνηςμνήμηγια αντικείμενα και τη θέση τους. Προηγούμενα ευρήματα δείχνουν ότι το mPFC συμβάλλειμνήμημέσω γνωστικού ή στρατηγικού ελέγχουμνήμηδιεργασίες σε άλλες περιοχές του εγκεφάλου (16, 17) και ότι το aIC εμπλέκεται στη μνήμη για την ταυτότητα ενός αντικειμένου (18). Λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του mPFC και του aIC μπορεί να προκύψουν όταν εντοπίζονται συναισθηματικά σημαντικές πληροφορίες, συμπεριλαμβανομένων νέων αντικειμένων (19, 20). Προηγούμενα ευρήματα υποδεικνύουν επίσης ότι το dHPC εμπλέκεται στη συσχέτιση ενός αντικειμένου με το περιβάλλον ή τη θέση του (21-23) και ότι η επεξεργασία των συμφραζόμενων πληροφοριών εμπλέκει μια λειτουργική διασταύρωση μεταξύ του mPFC και του dHPC (24-26). Είναι σημαντικό ότι το mPFC (27), το aIC (28) και το dHPC (29) λαμβάνουν όλα ισχυρές εισόδους από το BLA. Δείχνουμε ότι ένας αγωνιστής υποδοχέα γλυκοκορτικοειδών (GR) που χορηγείται στον προκαταρκτικό φλοιό (PrL) αλλά όχι στον υπομελιθικό φλοιό (IL) του mPFC μετά από μια εκπαιδευτική εμπειρία αναγνώρισης αντικειμένου ενισχύει την εδραίωση της μνήμης τόσο της ταυτότητας όσο και της θέσης ενός αντικειμένου μέσω λειτουργική αλληλεπίδραση με το aIC και το dHPC, αντίστοιχα. Το πιο σημαντικό, δείχνουμε ότι η νοραδρενεργική δραστηριότητα BLA οδηγεί τις λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ αυτών των περιφερικών περιοχών του εγκεφάλου. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι το BLA επηρεάζει εγκεφαλικά δίκτυα μεγάλης κλίμακας

Σημασία

Οι ορμόνες του στρες είναι γνωστό ότι διευκολύνουνμνήμηεμπειριών που προκαλούν συναισθηματική διέγερση, μια επίδραση που διαμεσολαβείται από τη βασοπλάγια αμυγδαλή (BLA) και την αλληλεπίδρασή της με άλλες περιοχές του εγκεφάλου. Οι μελέτες ενεργοποίησης του εγκεφάλου δείχνουν επίσης ότι η συναισθηματική διέγερση ενεργοποιεί αρκετές λειτουργικές συνδέσεις πέρα ​​από το BLA. Ωστόσο, είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστο εάν η δραστηριότητα BLA επηρεάζει αυτές τις συνδέσεις. Εδώ, αναφέρουμε ότι η δραστηριότητα BLA επιτρέπει λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του προμετωπικού φλοιού, του πρόσθιου νησιωτικού φλοιού και του ραχιαίου ιππόκαμπου στη ρύθμιση των επιδράσεων της γλυκοκορτικοειδούς ορμόνης στην αναγνώρισημνήμη. Αυτά τα ευρήματα αυξάνουν την κατανόησή μας για το πώς η δραστηριότητα BLA επηρεάζει τα συναισθηματικάμνήμηεντός μεγάλων εγκεφαλικών δικτύων.στη ρύθμιση των επιδράσεων της ορμόνης του στρες και της συναισθηματικής διέγερσης στη μνήμη (13).

Αποτελέσματα

της δραστηριότητας GR με μεταπροπονητικές εγχύσεις του ανταγωνιστή GR, RU 38486 (3 ή 10 ng σε 0,5 μL) μειώνειμνήμηαυτής της εκπαίδευσης. Για να προσδιοριστεί εάν τα ζώα εμφανίζουν μνήμη για την ταυτότητα του αντικειμένου (μνήμη αναγνώρισης αντικειμένου, ORM), δόθηκε σε μερικούς αρουραίους μια δοκιμή διατήρησης 24- ωρών στην οποία το ένα αντικείμενο ήταν οικείο και το άλλο αντικείμενο ήταν νέο. Αυτό το πρωτόκολλο απεικονίζεται στο Σχ. 1Α. Για να προσδιοριστεί εάν τα ζώα παρουσιάζουν αμνήμηγια τη θέση του αντικειμένου (μνήμη θέσης αντικειμένου, OLM), σε άλλους αρουραίους δόθηκε μια δοκιμή διατήρησης 24- ωρών στην οποία και τα δύο αντικείμενα ήταν οικεία, αλλά το ένα τοποθετήθηκε σε μια νέα θέση (Εικ. 1Ε).

Εργασία ORM. Χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL αμέσως μετά από μια 3-λεπτή προπονητική δοκιμή ενισχυμένη 24-hμνήμηγια την ταυτότητα του αντικειμένου (μονόδρομη ANOVA για ευρετήριο διάκρισης: F2,33=10.02, P=0.0004). Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Β, οι αρουραίοι ελέγχου που έλαβαν θεραπεία με όχημα δεν εξέφρασαν 24-h κατακράτηση του αντικειμένου (δοκιμή t ενός δείγματος: t11=0.40, P=0.69) , και αμφότερες οι δόσεις του αγωνιστή GR αύξησαν σημαντικά την κατακράτηση (3 ng: Ρ < 0,05,="" 10="" ng:="" ρ="">< 0,01="" έναντι="" φορέα).="" αντίθετα,="" οι="" εγχύσεις="" αγωνιστών="" gr="" που="" χορηγήθηκαν="" στο="" il="" δεν="" επηρέασαν="" την="" κατακράτηση="" 24-="" ωρών="" (f2,33="0.25," p="0.78·" εικ.="" 1c).="" όπως="" φαίνεται="" στην="" εικ.="" 1d,="" η="" χορήγηση="" ανταγωνιστή="" gr="" στο="" prl="" μετά="" από="" μια="" 10-λεπτή="" προπόνηση="" μειώνει="" σημαντικά="">μνήμηγια την ταυτότητα του αντικειμένου (F2,32=13.14, P < 0.0001).="" οι="" αρουραίοι="" που="" έλαβαν="" θεραπεία="" με="" όχημα="" εξέφρασαν="" σημαντική="" κατακράτηση="" (t12="12.08," p=""><0,0001) και="" αμφότερες="" οι="" δόσεις="" του="" ανταγωνιστή="" gr="" μείωσαν="" την="" απόδοση="" κατακράτησης="" (3="" και="" 10="" ng:="" p=""><0,01). οι="" ομάδες="" θεραπείας="" δεν="" διέφεραν="" ως="" προς="" τον="" συνολικό="" χρόνο="" εξερεύνησης="" των="" δύο="" αντικειμένων="" κατά="" τη="" διάρκεια="" είτε="" της="" προπόνησης="" είτε="" της="" δοκιμής="" διατήρησης="" 24-="" ωρών="" (παράρτημα="" si,="" εικ.="">

Εργασία OLM. Η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL ενίσχυσε επίσης 24-hμνήμηγια τη θέση του αντικειμένου (F2,28=9.69, P=0.0006). Όπως φαίνεται στο Σχ. 1 ΣΤ, οι αρουραίοι ελέγχου που υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα δεν εξέφρασαν σημαντικήμνήμητης {{0}}ελάχιστης δοκιμής προπόνησης (ένα δείγμα t τεστ: t10=−0.80, P=0.44), και των δύο δόσεων ο αγωνιστής GR ενίσχυσε την κατακράτηση (3 και 10 ng: P < 0,01).="" η="" χορήγηση="" αγωνιστή="" gr="" στο="" il="" δεν="" επηρέασε="" την="" 24-="" κατακράτηση="" (f2,30="0.17," p="0.84;" εικ.="" 1g).="" όπως="" φαίνεται="" στο="" σχ.="" 1η,="" ο="" ανταγωνιστής="" gr="" που="" χορηγήθηκε="" στο="" prl="" μετά="" από="" 10-λεπτή="" προπόνηση="" παρουσίασε="" σημαντική="">μνήμηγια τη θέση του αντικειμένου (F2,32=4.30, P=0.02). Οι επίμυες που έλαβαν θεραπεία με όχημα εξέφρασαν σημαντική κατακράτηση 24- ωρών (t12= 4.57, P=0.0006) και η υψηλότερη δόση του ανταγωνιστή GR μείωσε την απόδοση κατακράτησης (10 ng: P < 0,01).="" οι="" ομάδες="" θεραπείας="" δεν="" διέφεραν="" ως="" προς="" τον="" συνολικό="" χρόνο="" εξερεύνησης="" των="" δύο="" αντικειμένων="" κατά="" τη="" διάρκεια="" είτε="" της="" προπόνησης="" είτε="" της="" δοκιμής="" διατήρησης="" 24-="" ωρών="" (παράρτημα="" si,="" εικ.="" s2).="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" υποδεικνύουν="" επομένως="" ότι="" η="" χορήγηση="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="" αλλά="" όχι="" στο="" il,="" παρά="" τα="" παρόμοια="" επίπεδα="" έκφρασης="" gr="" (εικ.="" 1j),="" ενισχύει="" την="" εδραίωση="" της="" μνήμης="" τόσο="" του="" «τι»="" (ταυτότητα="" αντικειμένου)="" όσο="" και="" του="" «πού»="" (θέση="" αντικειμένου).="" στοιχεία="" της="" μνήμης="" αναγνώρισης="">

PrL Αλληλεπιδράσεις με το aIC στη Ρύθμιση των GR Αγωνιστικών Επιδράσεων στο ORM.Διερευνήσαμε τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ του PrL και του aIC στη μεσολάβηση των επιδράσεων του αγωνιστή GR σεμνήμηστις εργασίες ORM και OLM. Το PrL, αλλά όχι το IL, στέλνει άμεσες ανατομικές προβολές στο aIC (31) και το aIC εμπλέκεται στη μνήμη για την ταυτότητα αλλά όχι τη θέση ενός αντικειμένου (22, 23). Εξετάσαμε εάν ένας λειτουργικός αποκλεισμός του aIC μέσω αναστολής της φωσφορυλιωμένης εξωκυτταρικής κινάσης 1/2 (pERK1/2), ενός καταρράκτη σηματοδότησης που εμπλέκεται κρίσιμα στη νευρωνική δραστηριότητα και τη συναπτική πλαστικότητα (32), αποτρέπει την επίδραση του ενδο-PrL GR αγωνιστή διοίκηση σεμνήμηβελτίωση τόσο στις εργασίες ORM όσο και στις εργασίες OLM. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Α, η χορήγηση αγωνιστή GR μετά την προπόνηση (3 ή 1{3}} ng σε 0.5 μL) στο αριστερό PrL (βλ. Παράρτημα SI, Εικ. S3A για σημεία έγχυσης) βελτιώθηκε 24-h μνήμη για την ταυτότητα του αντικειμένου στην εργασία ORM (3 ng:P < 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< {{22}="" }.01).="" ο="" αναστολέας="" μεκ="" pd98059="" (50="" ng="" σε="" 0,5="" μl)="" που="" χορηγήθηκε="" στο="" ομόπλευρο="" aic="" μετά="" την="" εκπαίδευση="" εμπόδισε="" την="" επίδραση="" του="" αγωνιστή="" gr="" στην="" ενίσχυση="" της="" μνήμης="" για="" την="" ταυτότητα="" του="" αντικειμένου="" (3="" ng:="" p="">< 0,05,="" 10="" ng:="" p="">< 0,01).="" αντίθετα,="" ο="" λειτουργικός="" αποκλεισμός="" του="" aic="" με="" αυτή="" τη="" δόση="" του="" αναστολέα="" μεκ="" δεν="" απέτρεψε="" τη="" ρυθμιστική="" επίδραση="" της="" χορήγησης="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="">μνήμηγια τη θέση του αντικειμένου στην εργασία OLM. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Β, αναστολέας ΜΕΚ

η χορήγηση μόνο στο aIC ενίσχυσε 24-h διατήρηση του

Εικ. 1. Μετά την προπόνηση χορήγηση αγωνιστή GR και ανταγωνιστή GR στο PrL αλλά όχι το IL που διαμορφώνει το ORM και το OLM. (Α) Πειραματικός σχεδιασμός της εργασίας ORM (Παράρτημα SI, Συμπληρωματικές Μέθοδοι). (Β) Ο αγωνιστής GR RU 28362 (3 ή 10 ng σε 0.5 μL) που χορηγήθηκε στο PrL μετά από μια δοκιμή 3- λεπτών προπόνησης ενισχυμένης 24-h ORM . Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως δείκτης διάκρισης (μέσος όρος ± SEM, βλέπε Μέθοδοι). n=11– 13 αρουραίοι/ομάδα. (Γ) Καμία επίδραση της χορήγησης αγωνιστή GR στο IL μετά από μια δοκιμαστική προπόνησης {{10} λεπτών σε 24-h ORM. n=12 αρουραίοι/ομάδα. (D) Ο ανταγωνιστής GR RU 38486 (3 ή 10 ng σε 0,5 μL) χορηγήθηκε στο PrL μετά από μια 10-λεπτή εκπαιδευτική δοκιμή μείωσε 24-h ORM. n=10– 13 αρουραίοι/ομάδα. (Ε) Πειραματικός σχεδιασμός της εργασίας OLM. (ΣΤ) Ο αγωνιστής GR που χορηγήθηκε στο PrL μετά από μια 3-λεπτή δοκιμαστική προπόνηση ενισχυμένη 24-h OLM. n=9– 11 αρουραίοι/ομάδα. (Ζ) Καμία επίδραση της χορήγησης αγωνιστή GR στο IL μετά από μια δοκιμαστική προπόνησης 3- λεπτών σε 24- ώρα OLM. n=10– 12 αρουραίοι/ομάδα. (Η) Ο ανταγωνιστής GR χορηγήθηκε στο PrL μετά από μια 10-λεπτή δοκιμαστική προπόνηση με βλάβη 24-h OLM. n=11– 13 αρουραίοι/ομάδα. *P <0,05; **p=""><0,01. (ι)="" θέσεις="" έγχυσης="" στο="" prl="" (συμπαγείς="" κύκλοι)="" και="" il="" (ανοιχτοί="" κύκλοι)="" αρουραίων="" που="" περιλαμβάνονται="" στο="" σχήμα="" 1="" β="" και="" γ.="" (j)="" μικρογραφία="" φθορισμού="" που="" δείχνει="" παρόμοια="" επίπεδα="" έκφρασης="" gr="" εντός="" των="" prl="" και="" il.="" cl,="" claustrum;="" fmi,="" ελάσσονα="" λαβίδα="" του="" σκληρού="" σώματος.="" (γραμμή="" κλίμακας,="" 300="" μm.)="" (k)="" λεπτομερής="" εικόνα="" που="" δείχνει="" συνέκφραση="" του="" gr="" (πράσινο)="" και="" του="" δείκτη="" νευρώνων="" neun="" (κόκκινο)="" στο="" prl.="" (μπάρα="" κλίμακας,="" 100="">

(L) Λεπτομερής εικόνα που δείχνει τη συνέκφραση GR (πράσινο) και NeuN (κόκκινο) στην IL. (Μπάρα κλίμακας, 100 μm.)

Εικ. 2. Η αναστολή της δραστηριότητας aIC με έναν αναστολέα ΜΕΚ αναστέλλει επιλεκτικά την επίδραση της θεραπείας με αγωνιστή GR στο PrL στην ενίσχυση του ORM. Στους αρουραίους δόθηκε μια δοκιμή {{1}λεπτών εκπαίδευσης, ακολουθούμενη από αναστολέα ΜΕΚ (PD98059, 50 ng σε 0,5 μL) ή χορήγηση οχήματος στο αριστερό aIC μαζί με τον αγωνιστή GR (RU 28362, 3 ή 10 ng σε 0.5 μL) ή όχημα στην ομόπλευρη PrL. Το ORM ή το OLM δοκιμάστηκε 24 ώρες αργότερα. (Α) χορήγηση PD98059 στην μπλοκαρισμένη με aIC ενίσχυση της ORM που προκαλείται από τη χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL (n=8– 11 αρουραίοι/ομάδα, αμφίδρομη ANOVA: RU 28362 F2,{{ 18}}.44, P=0.04; PD98059 F1,51=16.45, P=0.0002; αλληλεπίδραση F2,51=5.03, P {{31 }}.01). (Β) Η χορήγηση του PD98059 στο aIC από μόνη της ενίσχυσε την OLM, αλλά αυτό δεν εμπόδισε τη διαμόρφωση μνήμης που προκαλείται από τη χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL (n=9– 14 αρουραίοι/ομάδα, αμφίδρομη ANOVA: RU 28362 F2,{ {39}}.13, P=0.88; PD98059 F1,60=0.02, P=0.88; αλληλεπίδραση F2,60=5.38, P {{ 52}}.007). *P <0,05, **p=""><0,01 έναντι="" οχήματος.="" ◆p="">< 0,05,="" ◆◆p="">< 0,01="" έναντι="" οχήματος="" ή="" ru="" 28362="">

θέση του αντικειμένου (P < {{0}}.01)="" και,="" σε="" αυτήν="" την="" κατάσταση,="" η="" χορήγηση="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="" προκάλεσε="" σημαντική="" εξασθένηση="" της="" μνήμης="" (10="" ng:="" ρ="">< 0,05="" έναντι="" φορέα).="" οι="" ομάδες="" θεραπείας="" δεν="" διέφεραν="" ως="" προς="" τον="" συνολικό="" χρόνο="" εξερεύνησης="" των="" δύο="" αντικειμένων="" κατά="" τη="" διάρκεια="" είτε="" της="" προπόνησης="" είτε="" της="" δοκιμής="" διατήρησης="" 24-="" ωρών="" (παράρτημα="" sia,="" εικ.="" s3="" b="" και="" c).="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" υποδεικνύουν="" ότι="" το="" prl="" αλληλεπιδρά="" με="" το="" aic="" στη="" ρύθμιση="" των="" επιδράσεων="" του="" αγωνιστή="" gr="" στη="" μνήμη="" για="" την="" ταυτότητα="" αλλά="" όχι="" τη="" θέση="" του="">

Αλληλεπιδράσεις PrL με το dHPC στη ρύθμιση των επιδράσεων του αγωνιστή GR στο OLM.Στη συνέχεια, εξετάσαμε τις λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του PrL και του dHPC στη μεσολάβηση των επιδράσεων του αγωνιστή GR σεμνήμηστις εργασίες ORM και OLM. Αν και ο ρόλος του dHPC στη διάκριση εξοικείωσης παραμένει αμφιλεγόμενος (33), αρκετά ευρήματα δείχνουν ότι η συσχέτιση ενός αντικειμένου με το περιβάλλον ή τη θέση του απαιτεί όντως το dHPC (22, 23). Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Α, ο αγωνιστής GR (3 ή 10 ng σε 0,5 μL) χορηγήθηκε στο αριστερό PrL μετά την προπονητική δοκιμή ενίσχυσε 24-hμνήμηγια την ταυτότητα του αντικειμένου στην εργασία ORM (10 ng: P < 0.01)="" και="" τον="" ταυτόχρονο="" αποκλεισμό="" του="" ομόπλευρου="" dhpc="" με="" τον="" αναστολέα="" mek="" pd98059="" (50="" ng="" σε="" 0,5="" μl)="" (βλ.="" παράρτημα="" si,="" εικ.="" s4a="" για="" θέσεις="" έγχυσης)="" δεν="" απέτρεψε="" αυτή="" την="" αγωνιστική="" δράση="" gr="" (3="" και="" 10="" ng:="" p="">< 0,01="" έναντι="" φορέα).="" αντίθετα,="" η="" απενεργοποίηση="" dhpc="" απέκλεισε="" πλήρως="" την="" επίδραση="" του="" αγωνιστή="">μνήμηβελτίωση για τη θέση του αντικειμένου στην εργασία OLM. Όπως φαίνεται στην Εικ. 3Β, η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL ενίσχυσε την 24-h διατήρηση της θέσης του αντικειμένου (10 ng: P < 0.01).="" ),="" και="" αυτό="" το="" αποτέλεσμα="" αποκλείστηκε="" μετά="" από="" χορήγηση="" αναστολέα="" μεκ="" στο="" dhpc="" (3="" ng:="" ρ="">< 0,05,="" 10="" ng:="" ρ="">< 0,01="" έναντι="" αγωνιστή="" gr).="" οι="" ομάδες="" θεραπείας="" δεν="" διέφεραν="" ως="" προς="" τον="" συνολικό="" χρόνο="" εξερεύνησης="" των="" δύο="" αντικειμένων="" κατά="" τη="" διάρκεια="" της="" προπόνησης="" ή="" 24-h="" δοκιμής="" συγκράτησης="" (παράρτημα="" si,="" εικ.="" s4="" b="" και="" c).="" έτσι,="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" υποδεικνύουν="" ότι="" το="" prl="" αλληλεπιδρά="" με="" το="" dhpc="" στη="" ρύθμιση="" των="" επιδράσεων="" του="" αγωνιστή="" gr="" στη="" μνήμη="" για="" την="" τοποθεσία="" αλλά="" όχι="" την="" ταυτότητα="" του="">

Επίδραση της Νοραδρενεργικής Δραστηριότητας BLA στην Επίδραση της Χορήγησης Αγωνιστών GR στο PrL στο ORM και το OLM.Για να προσδιοριστεί εάν η νοραδρενεργική δράση του BLA εμπλέκεται κρίσιμα στη ρύθμιση της επίδρασης της χορήγησης αγωνιστή GR στο PrL στομνήμηστις εργασίες ORM και OLM, ο αγωνιστής GR (3 ή 10 ng σε 0,5 μL) χορηγήθηκε στο αριστερό PrL και ο ανταγωνιστής των αδρενεργικών υποδοχέων προπρανολόλη (0). 3 ug σε 0,2 μL) χορηγήθηκαν στο ομόπλευρο BLA (βλ. Παράρτημα SIA, Εικ. S5A, για θέσεις έγχυσης) αμέσως μετά την προπονητική δοκιμή. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Α, η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL ενισχυμένη 24-hμνήμηγια την ταυτότητα του αντικειμένου στην εργασία ORM (3 και 10 ng: P < 0.01),="" και="" η="" χορήγηση="" προπρανολόλης="" στο="" bla="" απέκλεισε="" αυτό="" το="" φαινόμενο="" gr="" αγωνιστή="" (3="" ng:p=""><0,05, 10="" ng:="" p="">< 0,01="" έναντι="" gr="" μόνο="" αγωνιστή).="" όπως="" φαίνεται="" στο="" σχ.="" 4β,="" η="" χορήγηση="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="" επίσης="" ενίσχυσε="">μνήμηγια τη θέση του αντικειμένου στην εργασία OLM (3 και 10 ng:P < 0.01)="" και="" η="" χορήγηση="" προπρανολόλης="" στο="" bla="" απέκλεισε="" επίσης="" αυτό="" το="" αποτέλεσμα="" αγωνιστή="" gr="" (10="" ng:="" p="">< 0,01="" έναντι="" μόνο="" αγωνιστή="" gr).="" οι="" ομάδες="" θεραπείας="" δεν="" διέφεραν="" ως="" προς="" τον="" συνολικό="" χρόνο="" εξερεύνησης="" των="" δύο="" αντικειμένων="" κατά="" τη="" διάρκεια="" είτε="" της="" προπόνησης="" είτε="" της="" δοκιμής="" διατήρησης="" 24-="" ωρών="" (παράρτημα="" si,="" εικ.="" s5="" b="" και="" c).="" έτσι,="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" υποδεικνύουν="" ότι="" απαιτείται="" νοραδρενεργική="" δράση="" bla="" για="" να="" ενεργοποιηθεί="" η="" επίδραση="" της="" χορήγησης="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="">μνήμηενίσχυση τόσο του ORM που εξαρτάται από το aIC όσο και του OLM που εξαρτάται από το dHPC.

Επίδραση της νοραδρενεργικής δραστηριότητας BLA στην επίδραση της χορήγησης αγωνιστών GR στο PrL στις αλλαγές της νευρωνικής δραστηριότητας εντός του aIC και του dHPC.Για να εξεταστεί περαιτέρω εάν το BLA noradren-

Η ενεργή δραστηριότητα επιτρέπει λειτουργικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ του PrL και του aIC και dHPC, ερευνήσαμε εάν η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL μετά την εκπαίδευση αναγνώρισης αντικειμένων προκαλεί αλλαγές νευρωνικής δραστηριότητας που εξαρτώνται από τη δραστηριότητα εντός του aIC και dHPC κατά την περίοδο ενοποίησης μετά τη μάθηση (34 ) και, το πιο σημαντικό, εάν αυτές οι επιδράσεις εξαρτώνται από τη νοραδρενεργική δράση του BLA. Η νευρωνική δραστηριότητα αξιολογήθηκε, 1 ώρα μετά την προπόνηση και τη φαρμακευτική θεραπεία, με ανοσοφθορισμό για το c-Fos (35), ένα άμεσο πρώιμο γονιδιακό προϊόν που είναι ένας καλά εδραιωμένος μοριακός δείκτης για την αναγνώριση πρόσφατα ενεργοποιημένων κυττάρων (36) και τη χαρτογράφηση νευρωνικών συνόλων που υποβλήθηκαν σε αυξημένη δραστηριότητα που σχετίζεται με καθήκοντα (37).

Εντός του aIC, η επισήμανση c-Fos προσδιορίστηκε εντός των φλοιωδών στοιβάδων II/III των τριών κύριων υποδιαιρέσεών του (Παράρτημα SI, Εικ. S6A). Οι εκπαιδευμένοι αρουραίοι που υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα εμφάνισαν υψηλή αριθμητική πυκνότητα θετικών για c-Fos κυττάρων, η οποία ήταν υψηλότερη εντός των κοκκωδών και δυσκοκκωδών υποδιαιρέσεων (Παράρτημα SI, Εικ. S6B). Όπως φαίνεται στην Εικ. 5Α, η χορήγηση αγωνιστή GR (10 ng σε 0.5 μL) στο αριστερό PrL οδήγησε σε σημαντική μείωση της αριθμητικής πυκνότητας των θετικών για c-Fos κυττάρων εντός του ομόπλευρο aIC (P < 0,01)="" (βλ.="" παράρτημα="" si,="" εικ.="" s6b,="" για="" ανάλυση="" ανά="" υποδιαίρεση).="" η="" διπλή="" χρώση="" για="" το="" c-fos="" και="" για="" την="" αποκαρβοξυλάση="" του="" γλουταμικού="" οξέος="" 67="" (gad67),="" ένας="" δείκτης="" για="" τους="" ανασταλτικούς="" νευρώνες="" gaba="" (38),="" αποκάλυψε="" ότι="" το="" c-fos="" εκφραζόταν="" κυρίως="" σε="">

Εικ. 3. Η αναστολή της δραστικότητας dHPC με έναν αναστολέα ΜΕΚ αποκλείει επιλεκτικά την επίδραση της θεραπείας με αγωνιστή GR στο PrL στην ενίσχυση της OLM. Στους αρουραίους δόθηκε μια {{1}λεπτή δοκιμή εκπαίδευσης, ακολουθούμενη από αναστολέα MEK (PD98059, 50 ng σε 0.5 μL) ή χορήγηση οχήματος στο αριστερό dHPC μαζί με τον αγωνιστή GR (RU 28362, 3 ή 10 ng σε 0.5 μL) ή όχημα στην ομόπλευρη PrL. Το ORM ή το OLM δοκιμάστηκε 24 ώρες αργότερα. (A) Η χορήγηση του PD98059 στο dHPC δεν εμπόδισε την ενίσχυση του ORM που προκαλείται από τη χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL (n=9– 13 αρουραίοι/ομάδα, αμφίδρομη ANOVA: RU 28362 F2,64=12.91, P < 0.0001;="" pd98059="" f1,64="0.20," p="0.66;" αλληλεπίδραση="" f2,64="0.10," p="" {{32="" }}.91).="" (β)="" η="" χορήγηση="" pd98059="" στο="" dhpc="" εμπόδισε="" την="" ενίσχυση="" της="" olm="" που="" προκαλείται="" από="" τη="" χορήγηση="" αγωνιστή="" gr="" στο="" prl="" (n="9–" 13="" αρουραίοι/ομάδα,="" αμφίδρομη="" anova:="" ru="" 28362="" f2,61="1." 33,="" p="0.27;" pd98059="" f1,61="14.66," p="0.0003;" αλληλεπίδραση="" f2,61="3.31," p="0.04" ).="" **p=""><0,01 έναντι="" οχήματος.="" ◆p="">< 0,05,="" ◆◆p="">< 0,01="" έναντι="" ru="" 28362="">

Εικ. 6. Ο αποκλεισμός της νοραδρενεργικής δραστηριότητας BLA αποτρέπει την επίδραση της θεραπείας με αγωνιστή GR στο PrL στις αλλαγές μορφολογίας της σπονδυλικής στήλης εντός του aIC, που αξιολογούνται 24 ώρες μετά την εκπαίδευση αναγνώρισης αντικειμένων. (Α) Εικόνα ενός νευρώνα εμποτισμένου με Golgi. (Β) Δενδρίτης που δείχνει διαφορετικούς τύπους σπονδυλικής στήλης (1{74}}0× μεγέθυνση). (Γ) Πυκνότητες σπονδυλικής στήλης για μακριές λεπτές, στιβαρές, μανιταρώδεις και διακλαδισμένες σπονδυλικές στήλες σε κορυφαίους δενδρίτες. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ο αριθμός των ακανθών ανά μικρόμετρο (μέση τιμή ± SEM) [n=15–20 κύτταρα (από πέντε αρουραίους)/ ομάδα: αμφίδρομη ANOVA, αγκάθια μανιταριού: RU 28362 F1,69=7 .72, P=0.007; προπρανολόλη F1,69=1.38, P=0.24; αλληλεπίδραση F1,69=4.40, P=0.04; διακλαδισμένα αγκάθια: RU 28362 F1,69=6.40, P=0.01; προπρανολόλη F1,69=2.63, P=0.11; αλληλεπίδραση F1,69=9.21, P=0.003]. (D) Πυκνότητες σπονδυλικής στήλης σε βασικούς δενδρίτες [n=15– 18 κύτταρα (από πέντε αρουραίους)/ομάδα: αμφίδρομη ANOVA, ράχη μανιταριών: RU 28362 F1,62=1.46, P {{46 }}.23; προπρανολόλη F1,62=1.84, P=0.18; αλληλεπίδραση F1,62=5.71, P=0.02; διακλαδισμένα αγκάθια: RU 28362 F1,62=5.75, P=0.02; προπρανολόλη F1,62=2.99, P=0.09; αλληλεπίδραση F1,62=4.24, P=0.04]. **P <0,01 έναντι="" οχήματος.="" ◆◆p="">< 0,01="" έναντι="" ru="" 28362="">

η δομική πλαστικότητα αλλάζει μέσα στο aIC μετά από εκπαίδευση αναγνώρισης αντικειμένων καιμνήμη-ενισχυτική θεραπεία με αγωνιστή GR.

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη διερεύνησε εάν η νοραδρενεργική δραστηριότητα BLA ρυθμίζει τις αλληλεπιδράσεις PrL με το aIC και το dHPC στη μεσολάβηση των επιδράσεων των γλυκοκορτικοειδών σε διαφορετικά συστατικά της αναγνώρισης αντικειμένωνμνήμη. Αυτή η ερώτηση προέρχεται από προηγούμενα ευρήματα ότι η δραστηριότητα BLA διευκολύνει την εδραίωση της μνήμης των συναισθηματικά διεγερτικών εμπειριών μέσω αλληλεπιδράσεων με άλλες περιοχές του εγκεφάλου (1, 2). Ωστόσο, η συσσώρευση στοιχείων, ιδιαίτερα από μελέτες ανθρώπινης νευροαπεικόνισης, δείχνει ότι η συναισθηματική διέγερση προκαλεί την ενεργοποίηση νευρωνικών δικτύων μεγάλης κλίμακας με αρκετές λειτουργικές συνδέσεις πέρα ​​από το BLA (12). Το εάν η δραστηριότητα BLA ρυθμίζει τις αλλαγές που σχετίζονται με τη συναισθηματική διέγερση στη συνδεσιμότητα μεταξύ τέτοιων περιφερικών περιοχών του εγκεφάλου δεν είχε διερευνηθεί.

Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η ενεργοποίηση των GRs μετά την προπόνηση εντός του PrL αλλά όχι του IL ενίσχυσε μακροπρόθεσμαμνήμητόσο της ταυτότητας όσο και της θέσης του αντικειμένου στις εργασίες ORM και OLM. Αντίθετα, ο ανταγωνισμός των GRs εντός του PrL μείωσε την ενοποίηση της μνήμης και στις δύο εργασίες. Αυτά τα ευρήματα παρέχουν πρόσθετες ενδείξεις ότι η χορήγηση γλυκοκορτικοειδών στο mPFC διευκολύνει τη μακροπρόθεσμη αποθήκευση της μνήμης διαφορετικών ειδών προπονητικών εμπειριών (50, 51). Επιπρόσθετα, διαπιστώσαμε ότι αναστέλλοντας λειτουργικά τη δραστηριότητα aIC και dHPC (32, 50), η επίδραση του αγωνιστή GR σεμνήμηγιατί η ταυτότητα των αντικειμένων απαιτεί την αλληλεπίδραση του PrL με το aIC και ότι η επίδραση του αγωνιστή GR στη μνήμη για τη θέση του αντικειμένου εξαρτάται από μια αλληλεπίδραση PrL με το dHPC. Αυτά τα ευρήματα συνάδουν με εκτεταμένες ενδείξεις ότι το aIC και το dHPC συνεισφέρουν ξεχωριστά στη μνήμη αναγνώρισης. Για να υποστηρίξει το πλήρες συμπλήρωμα της συμπεριφοράς που καθοδηγείται από τη μνήμη, τα δύο συστήματα πρέπει να αλληλεπιδρούν και το PrL μπορεί να χρησιμεύσει ως τοποθεσία ολοκλήρωσης μεταξύ των δύο συστημάτων (17). Το aIC, το οποίο έχει εμπλακεί στην ενσωμάτωση αυτόνομων και σπλαχνικών πληροφοριών σε συναισθηματικές, γνωστικές και κινητικές λειτουργίες (52), εμπλέκεται στη μνήμη αναγνώρισης και στην επεξεργασία πληροφοριών σχετικά με στοιχεία (18, 22, 23). Το εύρημα μας, ωστόσο, ότι ο λειτουργικός αποκλεισμός του aIC από μόνος του προκάλεσε βελτίωση μνήμης για τη θέση του αντικειμένου υποδηλώνει ότι το aIC μπορεί επίσης να συμβάλει στη χωρική και συμφραζόμενη επεξεργασία πληροφοριών (53). Από την άλλη πλευρά, το dHPC εμπλέκεται στη συσχέτιση ενός αντικειμένου με το περιβάλλον ή τη θέση του (21–23), και η επεξεργασία των πληροφοριών με βάση τα συμφραζόμενα είναι γνωστό ότι εμπλέκει σε καθοριστικό βαθμό μια λειτουργική διασταύρωση μεταξύ του mPFC και του dHPC (24– 26). Σημαντικά στοιχεία δείχνουν ότι το mPFC και το dHPC συζεύγνυνται μέσω ταλαντευτικού συγχρονισμού που αντανακλά αμφίδρομη ροή πληροφοριών (54).

Προς περαιτέρω υποστήριξη τέτοιων λειτουργικών αλληλεπιδράσεων, βρήκαμε ότι η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL μετά από εκπαίδευση αναγνώρισης αντικειμένων προκαλεί αλλαγές νευρωνικής δραστηριότητας που εξαρτώνται από τη δραστηριότητα εντός του aIC και του dHPC κατά τη διάρκεια της περιόδου ενοποίησης μετά τη μάθηση, καθώς και δομικές αλλαγές στη μορφολογία της σπονδυλικής στήλης που αξιολογήθηκαν 24 ώρες αργότερα . Το εύρημα μας ότι ο αγωνιστής GR προκάλεσε ενίσχυση της αναγνώρισηςμνήμησυσχετίζεται με μειωμένη έκφραση c-Fos, και πιθανώς νευρωνική δραστηριότητα, του aIC είναι σε συμφωνία με προηγούμενα ευρήματα που υποδεικνύουν μειωμένη νευρωνική δραστηριότητα aIC μετά από συστηματική θεραπεία με κορτικοστερόνη μετά από εκπαίδευση ανασταλτικής αποφυγής σε αρουραίους (55) ή μετά από απελευθέρωση γλυκοκορτικοειδών που προκαλείται από το στρες θέματα (56). Μια τέτοια μειωμένη δραστηριότητα aIC μπορεί να χρειαστεί για τη διευκόλυνση των διαδικασιών τοπικής ενοποίησης, πιθανώς αυξάνοντας προσωρινά το όριο για την ανίχνευση σημαντικών ερεθισμάτων (23, 57). Εναλλακτικά, καθώς το aIC θα μπορούσε να λειτουργήσει ως "διακόπτης" μεταξύ διαφορετικών συστημάτων νευρωνικών δικτύων (58), η μειωμένη δραστηριότητα του aIC θα μπορούσε να αντανακλά την ανακατανομή των νευρικών πόρων και επομένως την απενεργοποίηση άλλων συστημάτων του εγκεφάλου που εμπλέκονται στην αποθήκευση πληροφοριών αντικειμένων και γνωστικών υψηλότερης τάξης διαδικασίες (56). Αντίθετα, η χορήγηση αγωνιστή GR αύξησε τον αριθμό των θετικών για c-Fos πυραμιδικών κυττάρων εντός του CA1, χωρίς να επηρεάσει την έκφραση του c-Fos εντός της περιοχής dDG του dHPC. Προς υποστήριξη της άποψης ότι αυτή η επιρροή PrL στο CA1 περιλαμβάνει την έμμεση οδό NRE (40-42), βρήκαμε επίσης έναν αυξημένο αριθμό θετικών για c-Fos κυττάρων εντός του NRE. Μαζί, αυτά τα ευρήματα παρέχουν στοιχεία ότι η χορήγηση αγωνιστή GR στο PrL ενισχύει την ενοποίηση διαφορετικών συστατικών της μνήμης αναγνώρισης μέσω λειτουργικής σύζευξης με το aIC και το dHPC.

Το πρωταρχικό μας εύρημα είναι ότι ένας αποκλεισμός της νοραδρενεργικής μετάδοσης εντός του BLA εμπόδισε αυτές τις επιδράσεις χορήγησης του αγωνιστή εντός PrL GR σεμνήμηενίσχυση καθώς και στη νευρωνική δραστηριότητα και αλλαγές στη δομική πλαστικότητα εντός του aIC και του dHPC. Σε πολλές προηγούμενες μελέτες, αναφέραμε ότι η διέγερση διεγείρει την απελευθέρωση νορεπινεφρίνης εντός του BLA (2, 59) και ότι τα αυξημένα επίπεδα νορεπινεφρίνης BLA ενισχύουν τη σταθεροποίηση τηςμνήμηδιαφορετικών εκπαιδευτικών εμπειριών επηρεάζοντας τη νευρική πλαστικότητα και την αποθήκευση πληροφοριών σε διακριτές περιοχές του εγκεφάλου, συμπεριλαμβανομένων των mPFC, aIC και dHPC (2, 7, 9, 57, 60). Τα παρόντα ευρήματα παρέχουν στοιχεία ότι η νοραδρενεργική ενεργοποίηση BLA είναι επίσης απαραίτητη για την ενεργοποίηση λειτουργικών αλληλεπιδράσεων μεταξύ τέτοιων άλλων περιοχών του εγκεφάλου και αυξάνει την κατανόησή μας για το ρόλο του BLA στη ρύθμιση των επιδράσεων της συναισθηματικής διέγερσης στη δυναμική του εγκεφάλου μεγάλης κλίμακας.

Μέθοδοι

Μαθήματα. Οι αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (Charles River) διατηρήθηκαν μεμονωμένα σε ελεγχόμενη θερμοκρασία (22 βαθμούς) δωμάτιο vivarium (0700-1900 ώρες αναμμένα φώτα). Η εκπαίδευση και οι δοκιμές πραγματοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια της ελαφριάς φάσης του κύκλου μεταξύ 1000 και 1500 ωρών. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες ήταν σε συμμόρφωση με την Οδηγία 2010/63/ΕΕ της Ευρωπαϊκής Ένωσης και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Πανεπιστημίου Radboud, Nijmegen, Ολλανδία.

Εργασία αναγνώρισης αντικειμένου. Στη δοκιμή εκπαίδευσης, οι αρουραίοι εξερεύνησαν δύο πανομοιότυπα αντικείμενα (Α1 και Α2) είτε για 3 είτε για 10 λεπτά. Η κατακράτηση δοκιμάστηκε 24 ώρες αργότερα. Για το ORM, ένα αντίγραφο του οικείου αντικειμένου (Α3) και ένα νέο αντικείμενο (Β) τοποθετήθηκαν στην ίδια θέση με τα ερεθίσματα κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής εκπαίδευσης. Για το OLM, ένα αντίγραφο του οικείου αντικειμένου (A3) τοποθετήθηκε στη μέση του κουτιού (νέο θέση). το άλλο οικείο αντικείμενο (Α4) τοποθετήθηκε στην ίδια θέση όπως κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής εκπαίδευσης. Ένας δείκτης διάκρισης υπολογίστηκε ως η διαφορά στο χρόνο εξερεύνησης των νέων και των οικείων αντικειμένων (ή τοποθεσιών), που εκφράζεται ως ο λόγος του συνολικού χρόνου που αφιερώθηκε στην εξερεύνηση και των δύο αντικειμένων (δηλ. εξοικειωμένοι)] × 100 τοις εκατό ) (αναφ. 23, SI Παράρτημα, Συμπληρωματικές Μέθοδοι).

Φαρμακευτική Θεραπεία. RU 28362 (11,17 -διυδροξυ-6,21-διμεθυλ-17 -pregna-4,6- trien-20yn{{9 }}ένα, 3 ή 10 ng σε 0.5 μL) και RU 38486 [17 -υδροξυ-11 -(4- διμεθυλαμινοφαινυλ){{18} ήταν διαλυμένο σε 0.5 τοις εκατό αιθανόλη σε αλατούχο διάλυμα (51). Προπρανολόλη (0,3 ug σε 0,2 μL) διαλύθηκε σε αλατούχο διάλυμα (60). PD98059 [2-(2-αμινο-3-μεθοξυφαινυλ)-4 Η-1-βενζοπυράνη-4-one, 50 ng σε 0,5 μL] διαλύθηκε σε 6 επί τοις εκατό DMSO σε αλατούχο διάλυμα (αναφ. 50, SI Παράρτημα, Συμπληρωματικές Μέθοδοι).

c-Fos Ανοσοαντιδραστικότητα. Τομές εγκεφάλου επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα [c-Fos (κουνέλι αντι-c-Fos; 1:1,000; Synaptic Systems), GAD67 (ποντικό anti-GAD67; 1:250; Millipore), NeuN (κοτόπουλο αντι-NeuN, 1:500, Millipore)], ακολουθούμενο από κατάλληλα συζευγμένα με φθοροφόρο δευτερεύοντα αντισώματα. Για όλες τις περιοχές του εγκεφάλου, απεικονίστηκαν τρεις τομές ανά ζώο (20× ή 40×, Leica DMI 6000B). Ο αριθμός των ανοσοφθορισμού κυττάρων ποσοτικοποιήθηκε με το λογισμικό ImageJ 1.47v και η περιοχή διορθώθηκε. Για τα θετικά σημεία GAD{20}, λήφθηκαν εικόνες σε μεγέθυνση 63× σε ομοεστιακό μικροσκόπιο (Olympus FV1000) και ο αριθμός των θετικών σημείων GAD{{23} ανά διεγερτικό νευρώνα σημασμένο με NeuN μετρήθηκε χειροκίνητα (Παράρτημα SI , Συμπληρωματικές Μέθοδοι).

Στατιστική.

Χρησιμοποιήθηκαν μονόδρομες ή αμφίδρομες ANOVA, όπου κρίθηκε σκόπιμο, ακολουθούμενες από δοκιμές σύγκρισης post hoc. Οι δοκιμές t ενός δείγματος προσδιόρισαν εάν ο δείκτης διάκρισης ήταν διαφορετικός από το μηδέν και επομένως εάν είχε συμβεί μάθηση. Το P < 0.05="" έγινε="" αποδεκτό="" ως="" στατιστική="">

ΕΥΧΑΡΙΣΤΙΕΣ.

Ευχαριστούμε τους Chantal Schoenmaker και Masoud Ramuz για την τεχνική βοήθεια. Η έρευνα υποστηρίχθηκε από ένα Topfund του Πανεπιστημίου Radboud (στο BR).