Το Fisetin εξασθενεί τις φλεγμονώδεις αντιδράσεις που προκαλούνται από λιποπολυσακχαρίτες στα μακροφάγα

Για περισσότερες πληροφορίες, επικοινωνήστεtina.xiang@wecistanche.com

Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει την αποτελεσματικότητα και την ασφάλεια των πολυφαινολών στην ανθρώπινη υγεία. Ωστόσο, η επαλήθευση της αποτελεσματικότητάς τους παραμένει ανεπαρκής. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να εξετάσει εάν η φισετίνη, ένα από τα φλαβονοειδή που υπάρχουν συνήθως στα φρούτα και τα λαχανικά, θα μπορούσε να καταστείλει που προκαλείται από λιποπολυσακχαρίτες (LPS-)φλεγμονώδηςαποκρίσεις στα μακροφάγα. Το LPS αύξησε την αφθονία του προφλεγμονώδους mRNA (MCP 1, IL-1 β και iNOS), αλλά κατεστάλη από τη φισετίνη. Η αύξηση του μονοξειδίου του αζώτου από το LPS, έναν παράγοντα οξειδωτικού στρες, μετριάστηκε από τη φισετίνη. Επιπλέον, μειώθηκε η ενισχυμένη με LPS φωσφορυλίωση της ενεργοποιημένης από μιτογόνο πρωτεϊνικής κινάσης (ERK και JNK). Τέλος, η φισετίνη εξασθένησε την έκφραση ή τη δραστηριότητα των uPA, uP AR, MMP-2 και MMP{-9, που είναι γνωστοί ως συνδεδεμένοι παράγοντες στρατολόγησης ή διήθησης μακροφάγων. Συμπερασματικά,φισετίνηείναι ένας πολλά υποσχόμενος θεραπευτικός παράγοντας για ασθένειες φλεγμονής που σχετίζονται με μακροφάγα, όπως η σήψη και η αθηροσκλήρωση.

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερες πληροφορίες.

1. Εισαγωγή

Η θεραπευτική χρήση φυσικών συστατικών έχει κερδίσει περισσότερη προσοχή τις τελευταίες 2 δεκαετίες. Με βάση τη μεγάλη τους αποτελεσματικότητα και τη χαμηλή τοξικότητά τους, το 40 τοις εκατό των εγκεκριμένων από την FDA θεραπευτικών παραγόντων είναι συστατικά με βάση τη φυσική βάση ή τα παράγωγά τους [1]. Η τοξικότητα που σχετίζεται με άλλα φάρμακα έχει αποτραπεί με επιτυχία από διαφορετικά φυσικά προϊόντα [2]. Επομένως, είναι πολύ σημαντικό και σημαντικό να διερευνηθούν περαιτέρω οι φυσικές ενώσεις που προέρχονται από φυτά.

Πολυφαινόλεςείναι οι δευτερογενείς μεταβολίτες των φυτών και υπάρχουν ευρέως σε τρόφιμα και ποτά φυτικής προέλευσης, φρούτα, λαχανικά, μπαχαρικά, τσάι και κρασί. Αν και δεν θεωρούνται βασικά μικροθρεπτικά συστατικά, διάφορα είδη βιβλιογραφίας καταδεικνύουν τις ευεργετικές τους επιδράσεις στην ανθρώπινη υγεία, ειδικά σε δίαιτες που σχετίζονται με την υψηλή κατανάλωση φρούτων και λαχανικών [3-5]. Πολυάριθμες μελέτες έχουν πραγματοποιηθεί εδώ και δεκαετίες για διερεύνηση φαρμακολογικών επιδράσεων των πολυφαινολών, υποδηλώνοντας οφέλη για την υγεία. Όλο και περισσότερα στοιχεία έχουν δείξει ότι μερικές πολυφαινόλες διαθέτουναντιφλεγμονώδηιδιότητες

[6-8].Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι πολλά είδη πολυφαινολών μπορούν να αναστέλλουν ρυθμιστικά ένζυμα ή μεταγραφικούς παράγοντες που εμπλέκονται στη φλεγμονή [9].

Η διατροφή επηρεάζει διαφορετικά στάδια φλεγμονής και επιδεικνύει σημαντική επίδραση σε αρκετές φλεγμονώδεις ασθένειες[10,11]. Η φλεγμονή παίζει βασικό ρόλο στην ανάπτυξη ασθενειών όπως ο διαβήτης, το άσθμα, οι καρδιαγγειακές παθήσεις και ο καρκίνος [12]. Επομένως, ο έλεγχος της φλεγμονής μπορεί να αποτρέψει αυτές τις ασθένειες. Δεδομένου ότι τα μακροφάγα είναι κύριοι μεσολαβητές της φλεγμονής, έχουν ποικίλες λειτουργίες στην ομοιόσταση και τη φλεγμονή των ιστών. Έτσι, οι παράγοντες που ρυθμίζουν αποτελεσματικά τις λειτουργίες τους έχουν μεγάλη κλινική αξία αφού η ανώμαλη ενεργοποίηση των μακροφάγων μπορεί να προκαλέσει επιζήμιες ανοσοαποκρίσεις. Η τρέχουσα ερευνητική τάση δείχνει ξεκάθαρα ότι τα φυσικά προϊόντα είναι μία από τις πιο σημαντικές πηγές νέων φαρμάκων [13].

Μία πολυφαινόλη, η ισετίνη (3,3',4',7-τετραϋδροξυφλαβόνη), περιέχεται πλούσια σε φράουλα, μήλο, ντομάτα, κρεμμύδι, πορτοκάλι, ροδάκινο, σταφύλι, ακτινίδιο, λωτό, τσάι και κρασί [14] . Μέχρι στιγμής, η φισετίνη έχει αναφέρει ισχυρά αντιφλεγμονώδη [15-17],

αντιοξειδωτικές [18], αντινεοπλασματικές[19,20, αντιαγγειογενετικές [21], αντιδιαβητικές [22], νευροπροστατευτικές [23] και καρδιοπροστατευτικές επιδράσεις [24] τόσο σε κυτταροκαλλιέργεια όσο και σε ζωικά μοντέλα που σχετίζονται με ανθρώπινες ασθένειες. Αν και η φισετίνη έχει πολλές φυσιολογικές επιδράσεις, η επίδρασή της στα μακροφάγα δεν έχει αναφερθεί πολύ.

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήσαμε τις ευεργετικές επιδράσεις της φισετίνης στη φλεγμονώδη απόκριση των μακροφάγων που ενεργοποιούνται απόλιποπολυσακχαρίτης(LPS).

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Απομόνωση Μακροφάγων Μόνιμων Περιτοναϊκών Μακροφάγων.

Τα ποντίκια BALB/c ελήφθησαν από το Ινστιτούτο Ιατρικής Επιστήμης του Πανεπιστημίου του Τόκιο και διατηρήθηκαν στο Κέντρο Ζωικών Πόρων του Πανεπιστημίου της Οκαγιάμα. Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν για να συμμορφώνονται με τις οδηγίες του NIH (Οδηγός για τη φροντίδα και τη χρήση των εργαστηριακών ζώων). Το πειραματικό πρωτόκολλο εγκρίθηκε από τις Επιτροπές Αναθεώρησης Δεοντολογίας για Πειραματισμούς σε Ζώα της Μεταπτυχιακής Σχολής Ιατρικής, Οδοντιατρικής και Φαρμακευτικών Επιστημών του Πανεπιστημίου της Οκαγιάμα (OKU-2018449). Όλα τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε μια εγκατάσταση φραγμού και τρέφονταν με κανονική εργαστηριακή δίαιτα. Αρσενικά και θηλυκά ποντίκια BALB/c, ηλικίας 16±4 εβδομάδων αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνιο και υπέστησαν ευθανασία μέσω εξάρθρωσης του τραχήλου της μήτρας. Τα μακροφάγα συλλέχθηκαν μέσω περιτοναϊκής πλύσης χρησιμοποιώντας αλατούχο διάλυμα (5 mL). Το διάλυμα περιτοναϊκής πλύσης φυγοκεντρήθηκε στις 1500 rpm για 5 λεπτά. Το ίζημα αιωρήθηκε σε λίγο DMEM (SIGMA, Αρ. Κατ. D6046). Τα ερυθρά αιμοσφαίρια λύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα διάλυμα χλωριούχου αμμωνίου. Ο αριθμός των μακροφάγων υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα αιμοκυτταρόμετρο, στη συνέχεια επαναιωρήθηκε σε DMEM που περιέχει απενεργοποιημένο με θερμότητα FBS (10 τοις εκατό vv), πενικιλλίνη (10 U/mL) και στρεπτομυκίνη (10 mg/mL) και τοποθετήθηκαν σε 6-φρεάτιο πλάκες (Corning Incorporated, Αρ. Κατ. 3516) [25,26].

2.2. Συνθήκες κυτταροκαλλιέργειας.

Μετά από ολονύκτια ασιτία στον ορό, τα μακροφάγα επωάστηκαν με επιλεγμένες συγκεντρώσεις φισετίνης (10, 30 και 100 μΜ). ΣΙΓΜΑ, Κατ. F4043) ή όχημα για 3 ώρες και επωάστηκε παρουσία ή απουσία LPS (10 ng/mL, SIGMA, Αρ. Κατ. L4391) για κατάλληλο χρόνο. Στη συνέχεια, το μέσο και τα κύτταρα συλλέχθηκαν. Το μέσο χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμασία μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ) και ζυμογραφία ζελατίνης. Τα κυτταρολύματα χρησιμοποιήθηκαν για ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qPCR) και στύπωμα western.

2.3. Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο.

Τα mRNA εκχυλίστηκαν από μακροφάγα χρησιμοποιώντας RNeasy Mini Kits (QIAGEN, Cat. No. 74104). Η αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ σύνθεσης cDNA iScript (Bio-Rad, Αρ. Κατ. 1708891). Η qPCR πραγματοποιήθηκε με σύστημα ABI Step One Real-Time PCR (Applied Biosystems, QuantStudio 3) χρησιμοποιώντας ένα Fast SYBR Green Real-time PCRMixture (Applied Biosystems, Cat. No.4385612)[27). Εκκινητές για μονοκυτταρική χημειοτακτική πρωτεΐνη 1 (MCP-1) (Takara Bio Inc, Αρ. Κατ. MA066003), ιντερλευκίνη 1 βήτα (IL-1) (Takara Bio Inc., Αρ. Κατ. MA025939), επαγώγιμη συνθάση μονοξειδίου του αζώτου (iNOS) (Takara Bio Inc, Αρ. Κατ. MA083369), μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας-(MMP-)2 (Takara Bio Inc., Αρ. Κατ. MA127110), MMP-9(Takara Bio Inc. ., Αρ. Κατ. MA031311), και 18S ριβοσωμικό RNA (18S) (Takara Bio Inc., Αρ. Κατ. ΜΑ050364) ήταν εμπορικά διαθέσιμα. Κάθε δείγμα κανονικοποιήθηκε σε τιμές για έκφραση mRNA 18S (μέθοδος AACT) [27].

2.4. Δοκιμασία μονοξειδίου του αζώτου.

Τα μεμονωμένα υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας συλλέχθηκαν και φυγοκεντρήθηκαν 10 λεπτά στους 14, 000rpm στους 4 βαθμούς. Στη συνέχεια, το υπερκείμενο χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμασία μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ). Ο προσδιορισμός ΝΟ διεξήχθη όπως περιγράφεται στα εμπορικά διαθέσιμα κιτ (BioAssay Systems, Αρ. Κατ. D2NO-100). Το κιτ δοκιμασίας μονοξειδίου του αζώτου BioAssay Systems'QuantiChrom είναι μια χρωματομετρική ανάλυση για τον προσδιορισμό της παραγωγής ΝΟ μετά από αναγωγή νιτρικών σε νιτρώδη χρησιμοποιώντας τη βελτιωμένη μέθοδο Griess.

2.5. Western Blotting.

Πρωτεΐνες ολόκληρων κυττάρων εκχυλίστηκαν από μακροφάγα χρησιμοποιώντας ένα ρυθμιστικό λύσης (Cell Signaling, Cat. Νο. 9803). Κάθε δείγμα εφαρμόστηκε σε 10 τοις εκατό SDS-PAGE και μεταφέρθηκε σε μια μεμβράνη φθοριούχου πολυβινυλιδενίου, ανοσοστυπωμένη με πρωτογενή αντισώματα (η φωσφορυλίωση της εξωκυτταρικής κινάσης που ρυθμίζεται με σήμα (p-ERK), Cell Signaling, Αρ. Κατ. 9101, η φωσφορυλίωση του C-Jun Ν-τερματική κινάση (ρ-JINK), Cell Signaling, Αρ. Κατ. 9251, ο ενεργοποιητής πλασμινογόνου ουροκινάσης (uPA), Abcam, Αρ. Κατ.

ab20789, ο ενεργοποιητής πλασμινογόνου ουροκινάσης και υποδοχέας (uPAR); R&D, Cat.No.AF534, and -actin; Sigma Cat. Α5441)[28]. Στη συνέχεια, οι μεμβράνες επωάστηκαν με κατάλληλα δευτερεύοντα αντισώματα και τα ανοσοσύμπλεγμα οπτικοποιήθηκαν στη χημειοφωταύγεια (Merck Millipore, αρ. κατ. WBLUF0100, αρ. κατ. WBLUC0100) και προσδιορίστηκαν ποσοτικά χρησιμοποιώντας ένα General Electric Imager (GE Healthcare, LAS4000 mini).[2]

2.6. Ζυμογραφία ζελατίνης.

Τα υπερκείμενα κυτταροκαλλιέργειας αναλύθηκαν υπό μη αναγωγικές συνθήκες με SDS-PAGE (10 τοις εκατό wt/vol) πολυμερισμένο παρουσία ζελατίνης (0.1 τοις εκατό wt/wt) για να αξιολογηθούν οι δραστηριότητες της MMP{ {4}}. Τα πηκτώματα πλύθηκαν με Triton Χ-100 (2,5 τοις εκατό vol/vo) για 60 λεπτά και απεσταγμένο νερό για 15 λεπτά δύο φορές. Τα πηκτώματα στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 37 βαθμούς Cin 50 mM ρυθμιστικό Tris που περιείχε χλωριούχο ασβέστιο (5 mM) pH8.0. Μετά την επώαση, τα πηκτώματα χρωματίστηκαν με Coomassie Brilliant Blue R-250(Bio-Rad, Αρ. Κατ.{101} {18}})για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, και στη συνέχεια ακολούθησε αποχρωματισμός με Coomassie Brilliant Blue R-250 Διάλυμα Destination (Bio-Rad, Cat. Αρ.161-0438) μέχρι να εμφανιστούν καθαρές ζώνες. Οι εικόνες πηκτής ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια συσκευή απεικόνισης General Electric (GE Healthcare, LAS 4000 mini). οι μη χρωματισμένες, ημιδιαφανείς χωνευμένες περιοχές αντιπροσώπευαν περιοχές δραστηριότητας MMP [30].

2.7. Στατιστική.

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Sigma Plot v14.0(Systat Software Inc, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± τυπική τιμή τιμής του μέσου όρου. Η στατιστική σημασία μεταξύ πολλαπλών ομάδων αξιολογήθηκε με μονόδρομη ή αμφίδρομη ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από Holm-Sidak post hoc test ή Student-Newman-Keuls post hoc. pvalue<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Αποτελέσματα

3.1. Φλεγμονώδεις μεσολαβητές εξασθενημένοι με Fisetin σε μακροφάγα που διεγείρονται με LPS.

Δεδομένου ότι τα ενεργοποιημένα μακροφάγα παράγουν προφλεγμονώδεις κυτοκίνες και φλεγμονώδεις μεσολαβητές όπως το ΝΟ[8], εξετάσαμε τις επιδράσεις της φισετίνης στους φλεγμονώδεις μεσολαβητές σε μακροφάγα που διεγείρονται με LPS. Πρώτον, για να μελετήσουμε εάν η φισετίνη ασκεί το αντιφλεγμονώδες αποτέλεσμα σε μεταγραφικό επίπεδο, προσδιορίσαμε τα επίπεδα έκφρασης του mRNA A φλεγμονωδών γονιδίων όπως MCP-1, IL-1 και iNOS (Εικόνα 1(α) ). Όπως ήταν αναμενόμενο, οι εκφράσεις αυτών των φλεγμονωδών γονιδίων κατεστάλησαν από τη φισετίνη με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Στη συνέχεια, για να επιβεβαιώσουμε εάν η φισετίνη καταστέλλει τη φλεγμονώδη απόκριση στα μακροφάγα, αξιολογήσαμε την ικανότητά της να καταστέλλει την παραγωγή ΝΟ σε μακροφάγους που έχουν υποστεί αγωγή με LPS (Εικόνα 1(β)). Όπως ήταν αναμενόμενο, η φισετίνη μείωσε την παραγωγή ΝΟ με δοσοεξαρτώμενο τρόπο.

3.2. Φισετίνη Μειωμένη Μιτογόνο-Ενεργοποιημένη Πρωτεϊνική Κινάση σε Μακροφάγους Διεγερμένους με LPS.

Εφόσον η φισετίνη αναφέρθηκε ότι αναστέλλει τις οδούς της ενεργοποιημένης από μιτογόνο πρωτεΐνης κινάσης (MAPK) σε διάφορους κυτταρικούς τύπους [31, 32], εξετάσαμε τις επιδράσεις της φισετίνης στα MAPK σε μακροφάγα. Πρώτον, παρατηρήθηκε ενεργοποίηση MAPKs που επάγεται από LPS σε μακροφάγους (Εικόνα 2(α)). Η αύξηση του p-ERK από το LPS κορυφώθηκε στα 15 λεπτά μετά τη διέγερση, ενώ η αύξηση του p-JNK από το LPS κορυφώθηκε στα 30 λεπτά. Έτσι, στα επόμενα πειράματα, τα μακροφάγα διεγέρθηκαν με LPS για 30 λεπτά. Η ταυτόχρονη θεραπεία με φισετίνη μείωσε σημαντικά την επαγόμενη από το LPS ενίσχυση του p-ERK και του p-JNK (Εικόνες 2(β) και 2(γ)).

3.3. Η φισετίνη μείωσε το uPA και το uPAR σε μακροφάγους που διεγείρονται με LPS.

Η ενεργοποίηση των μακροφάγων σχετίζεται στενά με την διεισδυτικότητα των κυττάρων. Επιπλέον, το uPA και το uPAR στα μακροφάγα συμβάλλουν στη διήθηση των κυττάρων. Έτσι, διερευνήθηκε η επίδραση της φισετίνης στην έκφραση του uPA και του uPAR. Το LPS προκάλεσε την αφθονία πρωτεΐνης του uPA (Εικόνα 3(α)) και του uPAR (Εικόνα 3(β)). Η ταυτόχρονη θεραπεία με φισετίνη μείωσε την αύξηση του uPA(Εικόνα 3(α)) και του uPAR κατά LPS (Εικόνα 3(β)).

3.4. Το Fisetin μείωσε το MMP-2 και το MMP-9 σε μακροφάγους που διεγείρονται με LPS.

Επιπλέον, για να αποσαφηνιστεί η επίδραση του fise-tin στα MMPs, εξετάσαμε τις εκφράσεις MMP-2 και MMP-9, τους μεταγενέστερους μεσολαβητές του uPA/uPAR. Όσον αφορά το επίπεδο mRNA, το LPS αύξησε σημαντικά την έκφραση mRNA των MMP-2 και MMP-9, σε σύγκριση με τη θεραπεία με όχημα (Εικόνα 4(α)). Η φισετίνη μείωσε την ενίσχυση αυτών των γονιδιακών εκφράσεων του MMP-2 ή του MMP9 που προκαλείται από το LPS με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικόνα 4(α)). Επιπλέον, οι πρωτεϊνικές δραστηριότητες της ΜΜΡ{10}} αξιολογήθηκαν με ζυμογραφία (Εικόνα 4(β)). Οι πρωτεϊνικές δραστηριότητες της MMP-9(92kDa) αυξήθηκαν με διέγερση LPS, η οποία μειώθηκε από τη φισετίνη (Εικόνα 4(β)).

4. Συζήτηση

Βρήκαμε μια σημαντική επίδραση της φισετίνης κατά της φλεγμονής στα μακροφάγα. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι η φισετίνη εξασθένησε την επαγωγή φλεγμονωδών συστατικών όπως τα MCP-1, IL-1, iNOS και NO, που προκαλούνται από το LPS σε μακροφάγα. Επιπλέον, η φισετίνη κατέστειλε την ενεργοποίηση της MAPK και μείωσε την επαγόμενη από το LPS αύξηση της έκφρασης uPA και uPAR. Επιπλέον, η φισετίνη μείωσε την αύξηση της αφθονίας του mRNA των MMP-2 και MMP-9 και τη δραστηριότητα του MMP-9.

Στη σήψη που προκαλείται από gram-αρνητική λοίμωξη, το LPS αναγνωρίζεται συνήθως ως ο αιτιολογικός παράγοντας της σήψης. Σε πολλές μελέτες, το LPS έχει χρησιμοποιηθεί ως μοντέλο σήψης καθώς και φλεγμονής. Επιπλέον, η χρόνια φλεγμονή προκαλεί πρώιμο καρκίνο με την ενεργοποίηση των φλεγμονωδών κυττάρων και την ακατάλληλη παραγωγή ενός προφλεγμονώδους μεσολαβητή όπως το iNOS και μεταγραφικών παραγόντων όπως ο πυρηνικός μεταγραφικός παράγοντας κάπα Β (NF-xB)[33]. Επιπλέον, έχει επίσης αναφερθεί ότι το οξειδωτικό στρες μειώνεται με την εξασθένιση της έκφρασης του iNOS [34]. Η μελέτη μας έδειξε ότι η φισετίνη μπορεί να είναι αποτελεσματική στην πρόληψη και τη θεραπεία της σήψης και του σηπτικού σοκ, λόγω της κατασταλτικής επίδρασης στην αφθονία του mRNA των προφλεγμονωδών γονιδίων και στην παραγωγή ΝΟ. Σε αυτή τη μελέτη, η φισετίνη κατέστειλε την παραγωγή ΝΟ μειώνοντας την έκφραση του mRNA του προφλεγμονώδους γονιδίου (iNOS). Ως εκ τούτου, ήταν πιθανό ότι η φισετίνη μείωσε το οξειδωτικό στρες. Κατά συνέπεια, αυτά τα αποτελέσματα υποστήριξαν τις αντιφλεγμονώδεις, αντιογκογόνες και αντιοξειδωτικές επιδράσεις της φισετίνης.

Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι το LPS προκάλεσε τη φωσφορυλίωση των MAPKs, συμπεριλαμβανομένων των ERK και JNK [35]. Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι η φισετίνη αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή των ανθρώπινων τραχηλικών κυττάρων μειώνοντας την έκφραση της uPA μέσω της καταστολής της MAPK[36]. -φάγους, λίγες αναφορές είναι διαθέσιμες σχετικά με την επίδραση της φισετίνης στην έκφραση και τη δραστηριότητα των uPA και uPAR. Η μελέτη μας έδειξε για πρώτη φορά ότι η φισετίνη κατέστειλε την έκφραση του uPA και του uPAR που προκαλείται από το LPS μέσω της καταστολής της σηματοδότησης MAPK σε μακροφάγα, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως σε καρκινικά κύτταρα.

Οι MMPs είναι μια οικογένεια πρωτεασών των οποίων η έκφραση σχετίζεται με ορισμένες διαδικασίες, όπως η ανάπτυξη, η φυσιολογία και η παθολογία. Κοινώς, η MMP-9 έχει αναγνωριστεί ως δείκτης διαφόρων φλεγμονωδών ασθενειών, όπως η αθηροσκλήρωση, η αρθρίτιδα και ο συστηματικός ερυθηματώδης λύκος [37]. Επιπλέον, το MMP-9 συσχετίστηκε στενά με τη μετεγκατάσταση κυττάρων [38,39]. Πολλές μελέτες έχουν αναφέρει ιδιαίτερα ότι η MMP-2 και η MMP-9 εμπλέκονται στην αθηρογένεση και παίζουν σημαντικό ρόλο στη σταθεροποίηση των αθηρωματικών πλακών 40-42]. Σε αυτό το σημείο, τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν ότι οι αναστολείς του MMP-9 μπορεί να προσφέρει υπόσχεση ως θεραπευτική προσέγγιση για τη σταθεροποίηση των ευάλωτων πλακών. Επιπλέον, πρόσφατες έρευνες έχουν δείξει ότι η επούλωση τραυμάτων στο δέρμα επηρεάζεται από την υπερβολική ενεργοποίηση της MMP-9 [43]. Ως εκ τούτου, προτάθηκε ότι η φισετίνη έχει επίσης δυνατότητες ως θεραπευτική προσέγγιση για την επούλωση του δέρματος. Θα απαιτηθούν μελλοντικές μελέτες για να αποσαφηνιστούν οι λεπτομέρειες σχετικά με τους μοριακούς μηχανισμούς.

Μια πρόσφατη τάση στη φαρμακοβιομηχανία είναι η ανακάλυψη στρατηγικών για την ανάπτυξη του ίδιου του φυσικού φυτού ως το νέο φάρμακο. Πράγματι, δύο πρόσφατες μελέτες σε ζώα έδειξαν ότι η επαγόμενη από LPS οξεία πνευμονική φλεγμονή και η επαγόμενη από κολλαγόνο αρθρίτιδα βελτιώθηκαν με τη θεραπεία με φισετίνη |32,44. Μια άλλη ex vivo μελέτη έδειξε επίσης ότι η φισετίνη ήταν ικανή να μειώσει την επαγόμενη από το LPS απελευθέρωση κυτοκίνης από λευκοκύτταρα ασθενών με χρόνια αποφρακτική πνευμονοπάθεια ή διαβήτη τύπου 2[45]. Πολλά ανοσοκατασταλτικά φάρμακα έχουν αναπτυχθεί για την άμβλυνση των φλεγμονωδών και αυτοάνοσων ασθενειών[46-50]. Ωστόσο, οι περισσότερες ενώσεις παρουσιάζουν σημαντικές παρενέργειες. Δεδομένου ότι οι πολυφαινόλες υπάρχουν συνήθως στα διαιτητικά φρούτα και λαχανικά, πιθανώς μπορεί να είναι ασφαλέστεροι ανοσοκατασταλτικοί παράγοντες [51, 52]. Τα φρούτα και τα λαχανικά περιέχουν ένα ευρύ φάσμα φυτοχημικών ουσιών, συμπεριλαμβανομένων των σεσκιτερπενικών λακτόνων, τερπενοειδή, πολυσακχαρίτες και φαινολικές ενώσεις. Τα αποτελέσματά μας, που καταδεικνύουν τις αντιφλεγμονώδεις, αντικαρκινογόνες και αντιοξειδωτικές επιδράσεις της φισετίνης, υποδεικνύουν έντονα ότι μπορεί να αναπτυχθεί ως νέο φάρμακο. Αν και η φισετίνη είναι ένας πολλά υποσχόμενος υποψήφιος για ανοσοθεραπεία, η δυνατότητα των φυσικών προϊόντων που περιέχουν φισετίνη ως θεραπευτικού παράγοντα για μια συγκεκριμένη ασθένεια πρέπει να επαληθευτεί περαιτέρω στο κλινικό περιβάλλον.

5. Συμπεράσματα

Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι η φισετίνη μείωσε τις αυξήσεις τουφλεγμονώδηςγονίδια (MCP-1, IL-1b και iNOS), την παραγωγή ΝΟ και τη φωσφορυλίωση των MAPK, uPA, uPAR και MMPs, που προκαλείται από LPS σε μακροφάγους. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η φισετίνη μπορεί να είναι ένας θεραπευτικός παράγοντας για αρκετές ασθένειες που σχετίζονται με τα μακροφάγα.