Επιδράσεις του πολυσακχαρίτη Cistanche Deserticola στα ανοσοκύτταρα και τη δραστηριότητα της τελομεράσης σε γηρασμένα ποντίκια

Zhang Hongquan, Li Yuan, Song Yuanyuan (Ινστιτούτο Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)

Αφηρημένη: Στόχος Να μελετηθούν οι επιδράσεις του πολυσακχαρίτη του Cistanche deserticola (PCD) στην περιεκτικότητα σε μηλονοδιαλδεΰδη (MDA), στη δραστηριότητα της τελομεράσης και στην ανοσολογική λειτουργία στον ιστό ποντικών υποξείας γήρανσης. Μέθοδοι Το μοντέλο υποξείας γήρανσης των ποντικών προκλήθηκε από D-γαλακτόζη. Η περιεκτικότητα σε MDA ανιχνεύθηκε με χρωματομετρία θειοβαρβιτουρικού οξέος. Η δραστικότητα τελομεράσης ανιχνεύθηκε με PCR-ELISA. Η αντίδραση πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων μετρήθηκε με τη μέθοδο ΜΤΤ. Η φαγοκυτταρική λειτουργία των περιτοναϊκών μακροφάγων ποντικού μετρήθηκε με ουδέτερο κόκκινο τεστ. Η περιεκτικότητα σε IL-2 στον ορό προσδιορίστηκε με ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA). Αποτελέσματα Η περιεκτικότητα σε MDA στην καρδιά, το ήπαρ και τον εγκέφαλο της ομάδας μοντέλου αυξήθηκε σημαντικά, ενώ η δραστηριότητα της τελομεράσης, η αντίδραση πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων, η περιτοναϊκή φαγοκυττάρωση μακροφάγων και η περιεκτικότητα σε IL-2 στο περιφερικό αίμα μειώθηκαν σημαντικά. Μετά τη χορήγηση της PCD, η περιεκτικότητα σε MDA στην καρδιά, το ήπαρ και τον εγκέφαλο των ποντικών μειώθηκε σημαντικά και η δραστηριότητα της τελομεράσης στην καρδιά και τον εγκεφαλικό ιστό, η αντίδραση πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων, η περιτοναϊκή φαγοκυττάρωση μακροφάγων και η περιεκτικότητα σε IL-2 σε το περιφερικό αίμα αυξήθηκε σημαντικά. Συμπέρασμα Η PCD μπορεί να ανταγωνιστεί τις βλάβες από τις ελεύθερες ρίζες, να ενισχύσει τη δραστηριότητα της τελομεράσης στον καρδιακό και τον εγκεφαλικό ιστό και την ανοσοποιητική λειτουργία των γηρασμένων ποντικών και να βελτιώσει τη γήρανση που προκαλείται από τη D-γαλακτόζη.

Λέξεις κλειδιά: Cistanche deserticolaπολυσακχαρίτης; Μηλονοδιαλδεΰδη; Τελομεράση;Ανοσοποίηση; να είσαι γεροντικός

Συμπλήρωμα Cistanche κοντά μου— Βελτίωση της ανοσίας

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Ταξινόμηση Κινεζικής Βιβλιοθήκης Αρ.: R284 Document Code: A Article No.: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Το Cistanche deserticola είναι ένα αποξηραμένο σαρκώδες στέλεχος με φύλλα φωσφόρου του Cistanche deserticola, το οποίο έχει τη λειτουργία να τονώνει το συκώτι και τα νεφρά και να ωφελεί την ουσία και το qi [1]. Ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola είναι ένας ακατέργαστος πολυσακχαρίτης που διαχωρίζεται από το Cistanche deserticola, ο οποίος αφαιρείται από υδατοδιαλυτές μικρές μοριακές ακαθαρσίες, αποπρωτεϊνοποιείται με τη μέθοδο Sevag και υποβάλλεται σε επανειλημμένη επεξεργασία με νερό και αλκοόλ για να ληφθεί PCD [2]. Αυτό το πείραμα ξεκινά με τη θεωρία του ανοσοποιητικού και τη θεωρία των τελομερών της γήρανσης και υιοθετεί το μοντέλο ποντικιού γήρανσης D-γαλακτόζης για να παρατηρήσει την επίδραση της PCD στο περιεχόμενο της δραστηριότητας μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) και τελομεράσης στην καρδιά, το ήπαρ και τον εγκέφαλο και προκαταρκτικά να διερευνήσει ο μηχανισμός του.

1.Υλικό και μέθοδοι

1.1 Ζώα, φάρμακα, αντιδραστήρια και όργανα

3-ποντίκια ICR μηνών, καθαρού βαθμού, 26-32g, μισό αρσενικό και μισό θηλυκό [Yangzhou University Experimental Animal Center, Experimental Animal Quality Certificate No.: SCXK (Su) 2002-0009] . Η θερμοκρασία δωματίου είναι 20~25 βαθμούς, ο φυσικός φωτισμός και το περιβάλλον είναι κατάλληλο για σίτιση για μία εβδομάδα πριν από το πείραμα. Το PCD παρέχεται από το Nanjing Wildlife Research Institute και διαλύεται σε απεσταγμένο νερό. D-γαλακτόζη (D-Gal, Shanghai Second Reagent Factory); Κιτ δοκιμής δραστηριότητας τελομεράσης (MB Company, ΗΠΑ). Κιτ ανίχνευσης MDA και κιτ ELISA IL-2 ποντικιού (Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute). Ενζυμικός δείκτης ELX800UV (BIO-TEK, ΗΠΑ); PT-MR3100D ομογενοποιητής ιστού (Polytron, Ελβετία); MODEL550 επιτραπέζιος φυγόκεντρος κατάψυξης (Eppendorf, Γερμανία); BP110S ηλεκτρονική ζυγαριά (Sartorius, Γερμανία).

Cistanche deserticola— Βελτίωση της ανοσίας

1.2 Ομαδοποίηση ζώων, προετοιμασία μοντέλων και χορήγηση

Το γερασμένο μοντέλο ποντικού ετοιμάστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο της βιβλιογραφίας [3]. 10 τοις εκατό D-Gal παρασκευάστηκε με νερό για ένεση και 10 mL · kg-1 εγχύθηκαν υποδόρια στο λαιμό και το πίσω μέρος των ποντικών μία φορά την ημέρα για 6 εβδομάδες. Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες: η κανονική ομάδα ελέγχου, η ομάδα ελέγχου μοντέλου, ομάδες PCD25, 50 και 100 mg · kg-1 (ομάδες PL, PM, PH), με 12 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου και την ομάδα χορήγησης PCD καθορίστηκαν σύμφωνα με το νόμο και χορηγήθηκαν PCD25, 50 και 100 mg · kg-1 με όγκο 20 mL · kg-1 με καθετηριασμό κάθε μέρα. Στα ποντίκια της κανονικής ομάδας ελέγχου εγχύθηκε ο ίδιος όγκος ενέσιμου νερού και δόθηκε ο ίδιος όγκος φυσιολογικού ορού με καθετήρα.

1.3 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε MDA και της δραστικότητας της τελομεράσης

24 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση, ο βολβός του ματιού αφαιρέθηκε και λήφθηκε αίμα, τα ποντίκια θανατώθηκαν, η καρδιά, το συκώτι και ο εγκέφαλος απομακρύνθηκαν γρήγορα και πραγματοποιήθηκε ομογενοποίηση φρέσκου ιστού σε χαμηλή θερμοκρασία, φυγοκέντρηση και λήφθηκε το υπερκείμενο. Η περιεκτικότητα σε MDA προσδιορίστηκε με χρωματομετρία θειοβαρβιτουρικού οξέος. Η δραστικότητα της τελομεράσης ανιχνεύθηκε με PCR-ELISA. Τα βήματα λειτουργίας πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες στο κιτ. Η τιμή Α μετρήθηκε στα 450 nm του δείκτη ενζύμου.

1.4 Προσδιορισμός της αντίδρασης πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων [4]

Βγάλτε τον σπλήνα του ποντικιού ασηπτικά στον εξαιρετικά καθαρό πάγκο εργασίας, προετοιμάστε το εναιώρημα κυττάρων σπλήνας ποντικιού και ρυθμίστε την κυτταρική πυκνότητα σε 1 × 109 · L-1, η κονκαναβαλίνη Α (ConA) καλλιεργήθηκε ως διεγέρτης in vitro για 48 ώρες, και η αντίδραση πολλαπλασιασμού κυττάρων μετρήθηκε με τη μέθοδο ΜΤΤ. Η τιμή του Α μετρήθηκε στο μήκος κύματος των 570 nm που μετρήθηκε από τον ενζυμικό συνδέτη και το αποτέλεσμα εκφράστηκε ως η μέση τιμή τριών μιγαδικών οπών Α.

1.5 Προσδιορισμός της φαγοκυτταρικής λειτουργίας των περιτοναϊκών μακροφάγων με την ουδέτερη κόκκινη μέθοδο

Cistanche αρσενικά οφέλη — Imαποδείξει την ασυλία

24 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση, τα ποντίκια αποκεφαλίστηκαν και θανατώθηκαν. Το περιτοναϊκό υγρό των ποντικών συλλέχθηκε άσηπτα και φυγοκεντρήθηκε σε 1000r · min-1, τα κύτταρα πλύθηκαν με διάλυμα Hanks τρεις φορές και το κυτταρικό εναιώρημα παρασκευάστηκε με διάλυμα καλλιέργειας 1640. Πάρτε 3 mL και βάλτε το σε ένα σκεύος καλλιέργειας, καλλιέργεια στους 37 βαθμούς και 5 τοις εκατό CO2 για 2 ώρες. Τα μακροφάγα προσκολλώνται στην επιφάνεια του δοχείου, φυσούν και απορροφούν με διάλυμα Hanks 4 μοιρών, συλλέγουν προσκολλημένα κύτταρα, υπολογίζουν στην πλάκα μέτρησης των κυττάρων αίματος και προσαρμόζουν την κυτταρική πυκνότητα σε 2 × 109 κύτταρα · L-1, καλλιεργημένα σε σε επωαστήρα 37 μοιρών για 2 ώρες, το υπερκείμενο και τα μη προσκολλημένα κύτταρα απορρίφθηκαν. Πάρτε προσκολλημένα μακροφάγα, προσθέστε 0,1 τοις εκατό ουδέτερο κόκκινο φυσιολογικό ορό, συνεχίστε την καλλιέργεια στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά, απορρίψτε το ουδέτερο κόκκινο, πλύνετε επανειλημμένα τα μακροφάγα με PBS στους 37 βαθμούς, αραιώστε με 50 τοις εκατό οξικό οξύ και 50 τοις εκατό αιθανόλη κατ' όγκο και μετρήστε η τιμή του Α.

1.6 Προσδιορισμός του επιπέδου IL-2 ορού

Πάρτε αίμα από τον βολβό του ματιού, φυγοκεντρήστε (3000r · min-1, 10min) για να διαχωριστεί ο ορός και προσδιορίστε την περιεκτικότητα σε IL-2 στον ορό με ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA). Η συγκεκριμένη λειτουργία είναι σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ. Το επίπεδο της IL-2 στον ορό των ποντικών σε κάθε ομάδα ανιχνεύεται στα 450 nm του ενζυμικού δείκτη.

1.7 Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SPSS11.0 και τα δεδομένα μέτρησης εκφράστηκαν με μέση ± τυπική απόκλιση (x ± s), χρησιμοποιώντας μονόδρομη ANOVA και ενδοομαδική t-test.

Τζίνσενγκ της ερήμου-Imαποδείξει την ασυλία

2.Αποτελέσματα

2.1 Η επίδραση της PCD στην περιεκτικότητα σε MDA στην καρδιά, τον εγκέφαλο και το συκώτι γηρασμένων ποντικών

Ήταν σημαντικά υψηλότερο από αυτό της κανονικής ομάδας ελέγχου (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 Επίδραση της PCD στη δραστηριότητα της τελομεράσης σε ιστούς καρδιάς, εγκεφάλου και ήπατος γηρασμένων ποντικών

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (Πίνακας 2). 2.3 Οι επιδράσεις της PCD στην αντίδραση πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων, στην περιτοναϊκή φαγοκυττάρωση μακροφάγων και στην περιεκτικότητα σε IL{5}} ορού σε ηλικιωμένους ποντικούς ήταν σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες της φυσιολογικής ομάδας ελέγχου (Ρ<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.Συζήτηση

Ο ακριβής μηχανισμός γήρανσης είναι ακόμα ασαφής. Με τα χρόνια, μελετητές στο εσωτερικό και στο εξωτερικό έχουν διατυπώσει δεκάδες θεωρίες γήρανσης, όπως η θεωρία των ελεύθερων ριζών. Το μοριακό οξυγόνο είναι απαραίτητο για την επιβίωση των οργανισμών και τα θρεπτικά συστατικά στους οργανισμούς απελευθερώνουν ενέργεια μέσω της οξείδωσης. Η οξειδωτική κατάσταση των κυττάρων παίζει σημαντικό ρόλο στη γήρανση, την εμφάνιση όγκων και την ανάπτυξη. Ωστόσο, οι ελεύθερες ρίζες θα σχηματιστούν σε ορισμένες διαδικασίες οξείδωσης και η γήρανση σχετίζεται στενά με μη φυσιολογικές αντιδράσεις ελεύθερων ριζών. Όταν οι ελεύθερες ρίζες συσσωρεύονται πάρα πολύ στο σώμα, θα προκαλέσει την υπεροξείδωση των ακόρεστων λιπαρών οξέων στο σώμα, ειδικά στη βιολογική μεμβράνη, με αποτέλεσμα αλλαγές στη δομή της κυτταρικής μεμβράνης, βλάβη στη λειτουργία της μεμβράνης και παραγωγή MDA. και λιποφουσκίνη (LPF) [5].

Το MDA είναι ένας εξαιρετικά δραστικός παράγοντας διασύνδεσης. Μπορεί να διασταυρωθεί ομοιοπολικά με πρωτεΐνες, ένζυμα και ελεύθερα αμινοξέα στα νουκλεϊκά οξέα για να σχηματίσει βάσεις Schiff. Λόγω των ανώμαλων δεσμών του, δεν μπορεί να αφομοιωθεί με υδρολάση μετά την κατάποση από λυσοσώματα και μπορεί να συγκεντρωθεί στα κύτταρα για να σχηματίσει λιποφουσκίνη, η οποία μπορεί να δηλητηριάσει τα κύτταρα, να εμποδίσει τη μετάδοση ουσιών και μηνυμάτων στα κύτταρα και να οδηγήσει σε πυρηνική επιτάχυνση κυτταρική γήρανση και θάνατο.

Ως εκ τούτου, το MDA μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αξιόπιστος δείκτης γήρανσης οργάνων και κυττάρων. Η θεωρία των τελομερών πιστεύει ότι το μήκος του χρωμοσώματος (τελομερούς) στην κορυφή του χρωμοσώματος σχετίζεται στενά με τη γήρανση και τη διάρκεια ζωής. Το μήκος του τελομερούς είναι περίπου 2 έως 15 kb. Λόγω του προβλήματος της τελικής αντιγραφής, το DNA του τελομερούς θα χάνει 50 έως 200 bp κάθε φορά που αντιγράφεται το DNA. Με την αύξηση του αριθμού των κυτταρικών διαιρέσεων, το DNA των τελομερών θα μειωθεί σταδιακά. Όταν βραχυνθεί σε ένα ορισμένο όριο, δεν θα διατηρήσει τη σταθερότητα της χρώσης και το κύτταρο θα χάσει την ικανότητα διαίρεσης και πολλαπλασιασμού και θα πεθάνει από τη γήρανση. Αυτή η βράχυνση είναι σημάδι γήρανσης [6]. Το κύτταρο εισέρχεται στο στάδιο της πολλαπλασιαστικής αποτυχίας και το κύτταρο συνεχίζει να επιβιώνει αλλά δεν μπορεί να διαιρεθεί και να πολλαπλασιαστεί [7]. Ως εκ τούτου, τα τελομερή είναι επίσης γνωστά ως το «βιολογικό ρολόι» των κυττάρων και η γήρανση των κυττάρων καθορίζει τη γήρανση ολόκληρου του σώματος. Η έρευνα του Bryma διαπίστωσε ότι το μήκος του τελομερούς σχετίζεται με τη δραστηριότητα της τελομεράσης. Όσο υψηλότερη είναι η δραστηριότητα της τελομεράσης, όσο μεγαλύτερο είναι το τελομερές, τόσο καλύτερη είναι η σταθερότητα και η ακεραιότητα των χρωμοσωμάτων, τόσο περισσότεροι χρόνοι κυτταρικής διαίρεσης και μεγαλύτερη η διάρκεια ζωής.

Συμπλήρωμα Cistanche κοντά μου — Βελτιώστε την ανοσία

Το ανοσοποιητικό σύστημα, ως πλήρες και αυτόνομο σύστημα, παίζει σημαντικό ρόλο στη διατήρηση και προσαρμογή των δραστηριοτήτων της ζωής και η μείωση της ανοσοποιητικής λειτουργίας είναι το πιο σημαντικό χαρακτηριστικό της γήρανσης. Η δυσλειτουργία του ανοσοποιητικού μπορεί να επιταχύνει τη γήρανση του σώματος[8]. Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος έδειξαν ότιΗ PCD θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά την περιεκτικότητα σε MDA στην καρδιά, τον εγκέφαλο και τους ιστούς του ήπατος, να αυξήσει τη δραστηριότητα της τελομεράσης σε ιστούς της καρδιάς και του εγκεφάλου γερασμένων μοντέλων ποντικών, καθώς και την αντίδραση πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων, την περιτοναϊκή φαγοκυττάρωση μακροφάγων και το περιεχόμενο της IL{0 }} στο περιφερικό αίμα γηρασμένων ποντικών. Μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η PCD έχει καλό ρόλο στον ανταγωνισμό της βλάβης από τις ελεύθερες ρίζες, μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων, να βελτιώσει τη μη ειδική κυτταρική ανοσία και τη λειτουργία ανοσορύθμισης του σώματος και να παίζει ρόλο στην καθυστέρηση της γήρανσης του σώματος.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

[1] MAZG.Different of Processed Cistanche sinensis G.Beck and Herba Cistanche by HPLCF ingerprints[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF, LINAP, ZHANGHQ,etal.Thee effect of polysaccgrides of Cistanche deserticola YCMa on spleen deficiency syndromerats [ J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY, BIANRL, CHENX.Methodoldgy of Pharmacological Experiments)[ M] .Vol3.Beijing:People's Medical Publishing House, 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, etal. Επίδραση της εκχύλισης cynomorium coccineum στη λειτουργία ανοσίας και στον μεταβολισμό των ελεύθερων ριζών των ποντικών [J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ, WANGZL, XUESH. Πρόοδος στις μελέτες του μηχανισμού γήρανσης[ J] .Chin J Control Endem Dis=, 2008, 23(1):35-37.

[6] YANGJ, ZHANXH, SUNY, etal. Επίδραση του αφέψημα σιτζουνζιδίνης στην περιεκτικότητα σε μηλονοδιαλδεΰδη και στη δραστηριότητα της τελομεράσης σε ιστούς καρδιάς, ήπατος και εγκεφάλου γήρανσης μοκέτας που προκαλείται από D-γαλακτόζη [ J] .ChinJ Integr Tradit Chin West Med{2}}, 2005, (6):531-533.

[7] ZHANGXH, ZHANGJN. Τελομεράση, τελομεράση, γήρανση και καρκίνος[ J] .IntJGenetics=, 2007, 30(1):69-71.

[8] SONGSX, LVZJ. Πρόοδος έρευνας για τη γήρανση των Τ,Β κυττάρων και τον μοριακό του μηχανισμό [J] .JCell MolI mmunol, 2002, 18(3):306-308.