Συγκριτική μελέτη για τα χημικά συστατικά και τα περιεχόμενα του Cistanche Tubulosa (Guanhua Roucongrong) και των μεταποιημένων προϊόντων του

Περίληψη

Σκοπός:Να διερευνήσει τη διακύμανση (σχέδια αλλαγής) στην περιεκτικότητα σε χημικά συστατικά των μεταποιημένων προϊόντων τουCistanche tubulosa(Guanhua Roucongrong).
Μέθοδοι:Επιλέχθηκαν πέντε είδη τεμαχίων αφεψήματος, συμπεριλαμβανομένων ακατέργαστων φέτες, φέτες στον ατμό με κρασί, φέτες στον ατμό, φέτες επεξεργασμένες με ανάδευση με μαύρα φασόλια και φέτες επεξεργασμένες με χυμό μαύρου φασολιού. Καθιερώθηκε μια μέθοδος δακτυλικών αποτυπωμάτων HPLC και συνδυάστηκε με αξιολόγηση ομοιότητας, ανάλυση συμπλέγματος (CA) και ανάλυση κύριου συστατικού (PCA) για τη διαλογή και την επιβεβαίωση διαφορικών συστατικών μεταξύ του ακατέργαστου προϊόντος και των επεξεργασμένων προϊόντων. Χρησιμοποιήθηκαν χημειομετρικές μέθοδοι και HPLC για τον προσδιορισμό και τη σύγκριση των διαφορών στα περιεχόμενα των συνολικών φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, πολυσακχαριτών, ολικών φλαβονοειδών και τεσσάρων φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων μεταξύ των ακατέργαστων και επεξεργασμένων δειγμάτων.
Αποτελέσματα:Δακτυλικά αποτυπώματα HPLC τουCistanche tubulosa and its processed products were established. With Mark peak matching, 9 common peaks were assigned for raw slices, whereas 11 common peaks were assigned for the other four processed products. Peaks No. 2 and No. 7 were differential chromatographic peaks. By comparison with reference standards, four chromatographic peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Fingerprints of the processed products showed similar profiles with the same number of common peaks; similarity values were all >0,9. Χρησιμοποιώντας την εχινακοσίδη ως κορυφή αναφοράς, το RSD των σχετικών χρόνων διατήρησης των κοινών κορυφών μεταξύ διαφορετικών επεξεργασμένων προϊόντων κυμαινόταν από 0,11% έως 0,82%, ενώ το RSD των σχετικών περιοχών αιχμής κυμαινόταν από 15,46% έως 76,07%. Όταν η απόσταση μεταξύ των τάξεων ορίστηκε στο 10, η CA ταξινόμησε τις ακατέργαστες φέτες και τα επεξεργασμένα προϊόντα σε τρεις κατηγορίες. Το PCA έδειξε διαφορές στη σύνθεση μεταξύ ακατέργαστων και επεξεργασμένων δειγμάτων: οι 11 μεταβλητές κορυφής μειώθηκαν σε τρία κύρια συστατικά. διαφορετικά κύρια συστατικά συσχετίζονται με διαφορετικές χρωματογραφικές κορυφές. Με βάση τη μήτρα συστατικών και τη γραμμική στάθμιση, οι συνολικές βαθμολογίες έδειξαν ότι οι φέτες επεξεργασμένες με χυμό μαύρου φασολιού και οι φέτες με κίτρινο κρασί στον ατμό και οι φέτες με νερό στον ατμό κατατάχθηκαν υψηλότερα. Η περιεκτικότητα σε ακατέργαστα και επεξεργασμένα δείγματα ήταν η εξής: ολικοί φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες 3,80%–7,07%, ολικοί πολυσακχαρίτες 5,85%–6,70%, ολικά φλαβονοειδή 14,16%–24,26%. εχινακοσίδη 4,11%–5,99%, ακτεοσίδη 0,67%–1,34%, σιστανοσίδη Α 0,06%–0,36% και ισοακτεοσίδη 0,25%–1,66%. Υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των μεταποιημένων προϊόντων.
Σύναψη:Η καθιερωμένη μέθοδος δακτυλικών αποτυπωμάτων HPLC έχει ισχυρή εξειδίκευση, διακρίνει αποτελεσματικά τις ακατέργαστες φέτες από τα επεξεργασμένα προϊόντα τηςCistanche tubulosaκαι είναι κατάλληλο για ποιοτική και ποσοτική ανάλυση εχινακοσίδης, ακτεοσίδης, κιστανοζίτης Α και ισοακτεοσίδης στο ακατέργαστο φάρμακο και στα επεξεργασμένα προϊόντα. Το συγκριτικό προφίλ και οι αλλαγές περιεχομένου μεταξύ διαφορετικών δειγμάτων μπορούν να παρέχουν μια επιστημονική βάση για την αναγνώριση και τον ποιοτικό έλεγχοCistanche tubulosaκαι τα διάφορα μεταποιημένα προϊόντα της.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche tubulosa; επεξεργασία? χημικά συστατικά· δακτυλικό αποτύπωμα; υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC)

 

1 Εισαγωγή

Cistanche tubulosa(Schenk) Το Wight (Guanhua Roucongrong) είναι ένα πολυετές βότανο στα Orobanchaceae και αποτελεί επίσημα καταχωρισμένη πηγή Cistanches Herba στη Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας (εφεξής «Κινεζική Φαρμακοποιία»). Το φαρμακευτικό μέρος είναι ο αποξηραμένος σαρκώδης μίσχος με φολιδωτά φύλλα. Είναι ζεστό στη φύση, γλυκό και αλμυρό στη γεύση και εισέρχεται στους μεσημβρινούς των νεφρών και του παχέος εντέρου, με λειτουργίες τονωτικής του νεφρού yang, ωφελώντας την ουσία και το αίμα και την υγρασία των εντέρων για την ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα [1]. Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει πολλαπλές δραστηριότητες, όπως αντιγήρανση, ενίσχυση του ανοσοποιητικού, τονωτικές και αφροδισιακές επιδράσεις των νεφρών, καθαρτικές επιδράσεις και αντιυπερτασική δράση.

Cistanche tubulosaείναι πλούσιο σε φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδή και τα γλυκοσίδια τους, λιγνάνες, εστέρες ολιγοσακχαριτών, πολυόλες, πολυσακχαρίτες, φλαβονοειδή και άλλα συστατικά [2]. Μεταξύ αυτών, οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες είναι τα κύρια δραστικά συστατικά και οι πιο άφθονες ενώσεις. Είναι επίσης τα συστατικά δείκτη για τον προσδιορισμό του περιεχομένου στη φαρμακοποιία και παρουσιάζουν ποικίλες βιοδραστηριότητες όπως αντιοξειδωτικά αποτελέσματα, μεταβολική προαγωγή, βελτίωση της μάθησης και της μνήμης και ενίσχυση της σεξουαλικής λειτουργίας [3].

Cistanche tubulosaπροτιμά τις αλατούχες-αλκαλικές περιοχές και τις περιοχές της ερήμου Γκόμπι, παρασιτεί στις ρίζες τουTamarixspp., και διανέμεται κυρίως στην Εσωτερική Μογγολία, το Xinjiang και το Gansu στην Κίνα [4]. Οι άγριες και καλλιεργούμενες γεωαυθεντικές περιοχές περιλαμβάνουν την κομητεία Minfeng, το Yutian, το Pishan και το Moyu στην επαρχία Hotan, στο Xinjiang. Η επεξεργασία του αναπτύσσεται κυρίως σε κομμάτια αφεψήματος σε φέτες, ακατέργαστα φυτικά υλικά, εκχυλίσματα, προϊόντα υγείας και λειτουργικά τρόφιμα. Μεταξύ αυτών, τα εμπορικά κομμάτια αφέψημα παραμένουν mainstream. Ωστόσο, στην αγορά, διαφορετικά επεξεργασμένα προϊόντα -όπως ακατέργαστες φέτες, φέτες επεξεργασμένες με κρασί, φέτες αδρανοποιημένες με ένζυμα υψηλής θερμοκρασίας και φέτες στον ατμό νερού- αναμειγνύονται συχνά και είναι δύσκολο να διακριθούν.

Η επεξεργασία του Cistanches Herba έχει εξελιχθεί με την πάροδο του χρόνου, από αρχαίες καταγραφές όπως π.χTaiping Shenghui Fang, Ζενγκλέι Μπενκάο, καιPuji Fang[5–7] (π.χ., πλύσιμο με κρασί, ανακάτεμα με κρασί, μαγείρεμα στον ατμό/ψήσιμο με κρασί, μούλιασμα/ψήσιμο με κρασί, βράσιμο σε νερό, τριπλός ατμός και τηγάνισμα βουτύρου) σε σύγχρονες μεθόδους όπως η διαβροχή του κρασιού (στο ατμό), η απλή στον ατμό, η επεξεργασία σε τετράχρονο και το μαύρισμα στον ατμό. Διαφορετικές μέθοδοι επεξεργασίας μπορούν να επηρεάσουν το περιεχόμενο των ενεργών συστατικών, την ασφάλεια και τη βιολογική δραστηριότητα. Cai Hong et al. [9] διαπίστωσε ότι η αδρανοποίηση ενζύμου φρέσκου υλικού με ζεστό νερό 70 βαθμών για 6 λεπτά είχε ως αποτέλεσμα τα περιεχόμενα εχινακοσίδης και ακτεοσίδης να είναι 7,3 φορές και 6,5 φορές εκείνα της άμεσης ξήρανσης στον ήλιο, αντίστοιχα. Οι Tie Xiaoyan et al. [10] ανέφερε ότι η επεξεργασία στον ατμό βελτίωσε σημαντικά την ποιότητα των τεμαχίων αφεψήματος σε σύγκριση με τα φρέσκα υλικά. Οι Chen Weijun et al. [11] παρατήρησε ότι η περιεκτικότητα σε βεταΐνη μειώθηκε μετά την επεξεργασία του κρασιού, του αλατιού και του ατμού σε σύγκριση με τα φρέσκα προϊόντα. Οι Zhang Chao et al. [12] έδειξε ότι κατά το άτμισμα του κρασιού, με μεγαλύτερο χρόνο ατμού, ο εχινακοσίδης, η ακτεοσίδη, η κιστανοσίδη Α και η 2'-ακετυλακτεοσίδη μειώθηκαν σταδιακά, ενώ η ισοακτεοσίδη αυξήθηκε σημαντικά.

Η τρέχουσα έκδοση του 2025 της Κινεζικής Φαρμακοποιίας θέτει όρια μόνο για την εχινακοσίδη και την ακτεοσίδη σε ακατέργαστες φέτες και φέτες κρασιού στον ατμό, αλλά δεν προσδιορίζει στοιχεία σήμανσης για άλλα επεξεργασμένα προϊόντα και δεν διαθέτει αποτελεσματικές μεθόδους ελέγχου περιεχομένου. Ως εκ τούτου, η ανάλυση και η σύγκριση χαρακτηριστικών συστατικών και η διερεύνηση προτύπων αλλαγών στη σύνθεση είναι ιδιαίτερα σημαντικές για την ποιοτική αναγνώριση και τον ποσοτικό έλεγχο των ακατέργαστων και επεξεργασμένων προϊόντων.

Η λήψη δακτυλικών αποτυπωμάτων στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) είναι μια ολιστική αναπαράσταση χημικών συστατικών. Με πλεονεκτήματα ακεραιότητας, ειδικότητας και πλούσιων πληροφοριών, χρησιμοποιείται ευρέως στην αξιολόγηση ποιοτικού ελέγχου των ακατέργαστων φαρμάκων και παρασκευασμάτων, στην ευθυγράμμιση με τα διεθνή πρότυπα, στον προσδιορισμό της αυθεντικότητας, στην παρακολούθηση της διαδικασίας παραγωγής και στην έρευνα για φαρμακοδυναμικές ουσίες [13]. Με βάση το δακτυλικό αποτύπωμα HPLC, αυτή η μελέτη επέλεξε εχινακοσίδη, ακτεοσίδη, κιστανοζίτη Α και ισοακτεοσίδη ως δείκτες ποιότητας και χρησιμοποίησε ανάλυση ομοιότητας, CA και PCA σε συνδυασμό με προσδιορισμό περιεχομένου για σύγκριση χημικών συστατικών και μοτίβων αλλαγής περιεχομένου μεταξύ διαφορετικών επεξεργασμένων προϊόντων, παρέχοντας μια επιστημονική βάση για αναγνώριση και ποιοτικό έλεγχο.

 

2 Όργανα και υλικά

2.1 Όργανα

Σύστημα HPLC U3000 (Thermo Fisher); UPL-111-20R σύστημα υπερκαθαρού νερού (Sichuan Youpu); AB 265-S ηλεκτρονική ισορροπία (Mettler Toledo); KQ-5200DA εξαγωγέας/καθαριστής υπερήχων (Kunshan Ultrasonic); Ηλεκτρικός φούρνος ξήρανσης GZX-9240MBE (Shanghai Boxun); UV-2600 Φασματοφωτόμετρο UV–Vis (Shimadzu, Κίνα).

2.2 Φάρμακα και Αντιδραστήρια

ΦρέσκοCistanche tubulosa(Αριθ. παρτίδας. 20241008) παρασχέθηκε από την Xinjiang Congrongtang Biotechnology Co., Ltd. και πιστοποιήθηκε από τον ερευνητή Wang Guoping (Ινστιτούτο Materia Medica Αυτόνομης Περιφέρειας Xinjiang Uygur) ως σαρκώδες στέλεχοςCistanche tubulosa(Schenk) Wight (Orobanchaceae).

Ουσίες αναφοράς: άνυδρη D-γλυκόζη (Αριθμός παρτίδας. 361810, 100,00%, Shenzhen Jinhui Biotechnology Co., Ltd.); εχινακοσίδη (Αριθ. παρτίδας. 111670-201907), ρουτίνη (Αριθμός παρτίδας. 100080-202012), ακτεοσίδη (Αριθ. παρτίδας. 11530-202315), κιστανοσίδη Α (αριθ. παρτίδας. 313512) και ισοακτεοσίδη (αριθμός παρτίδας. 313413), με καθαρότητα ανάλυσης HPLC μεγαλύτερη από ή ίση με 91,2%, 6%, 97%, 92%. 98,09%, αντίστοιχα, από τα Εθνικά Ινστιτούτα Ελέγχου Τροφίμων και Φαρμάκων (Κίνα).(Σημείωση: μία γραμμή καθαρότητας περικόπτεται στο παρεχόμενο κείμενο· το παραπάνω ακολουθεί το αναγνώσιμο τμήμα.)

Οίνος κίτρινου ρυζιού (ημίξηρος τύπου, αλκοόλη 16%, Zhejiang Guyuelongshan Shaoxing Wine Co., Ltd.); μεθανόλη και ακετονιτρίλιο (ποιότητας HPLC, Fisher Scientific, ΗΠΑ). Άλλα αντιδραστήρια ήταν αναλυτικής ποιότητας.

3 Μέθοδοι και Αποτελέσματα

3.1 Παρασκευή ακατέργαστων φετών και επεξεργασμένων προϊόντων τηςCistanche tubulosa

Οι ακόλουθες μέθοδοι χρησιμοποιήθηκαν για την παρασκευή ακατέργαστων φετών και επεξεργασμένων προϊόντων, η καθεμία σε 6 παρτίδες.

Ακατέργαστες φέτες:ΦρέσκοCistancheκόπηκε σε φέτες 3 mm και στέγνωσε στους 60 βαθμούς.

Μέθοδος στον ατμό:Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία [14], 20 g καθαρών φετών αναμίχθηκαν με 6 mL απεσταγμένου νερού σε ένα σφραγισμένο δοχείο, υγράνθηκαν για 4 ώρες [12], βράστηκαν στον ατμό πάνω από νερό για 12 ώρες, ψύχθηκαν και ξηράνθηκαν στους 60 βαθμούς.

Μέθοδος επεξεργασίας κρασιού:Παρασκευάζεται σύμφωνα με τη μέθοδο του ψησίματος ή του κρασιού στον ατμό (Γενικός Κανόνας 0213, Κινεζική Φαρμακοποιία).

Επεξεργασία ανάδευσης με μαύρα φασόλια:Παρασκευάζεται σύμφωνα μεΚινεζική Materia Medica(Zhonghua Bencao) υπό τον Cistanches Herba. μαύρα φασόλια προστέθηκαν σε 1 κιλό ανά 10 κιλάCistancheυλικό.

Επεξεργασία χυμού μαύρου φασολιού:Οι φέτες αναμίχθηκαν με χυμό μαύρου φασολιού και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με την παραπάνω μέθοδο στον ατμό. η δοσολογία του μαύρου φασολιού ήταν η ίδια όπως παραπάνω.

3.2 Προσδιορισμός ειδών επιθεώρησης

Η υγρασία προσδιορίστηκε με ξήρανση σε φούρνο (Γενικός Κανόνας 0832, Κινεζική Φαρμακοποιία). συνολική τέφρα σύμφωνα με τον γενικό κανόνα 2302. αλκοολοδιαλυτά εκχυλίσματα με τη μέθοδο ψυχρής διαβροχής σύμφωνα με τον Γενικό Κανόνα 2201. Τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 1.

 

3.3 Συγκριτική Ανάλυση Δακτυλικών Αποτυπωμάτων HPLC τουCistanche tubulosaκαι τα μεταποιημένα προϊόντα της

3.3.1 Χρωματογραφικές συνθήκες

Στήλη Waters Xterra RP18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm). Κινητή φάση: ακετονιτρίλιο (Α)–0,1% μυρμηκικό οξύ (Β) με βαθμιδωτή έκλουση: 0–12 λεπτά, 14% Α → 17% Α; 12–30 λεπτά, 17% A → 19% A; 30–35 λεπτά, 19% A → 14% A; 35–50 λεπτά, 14% Α. Ρυθμός ροής: 1,0 mL·min-1. Θερμοκρασία στήλης: 30 βαθμοί. Μήκος κύματος ανίχνευσης: 330 nm. Όγκος ένεσης: 10 µL.

3.3.2 Προετοιμασία Διαλύσεων

Λύσεις αναφοράς:Οι ουσίες αναφοράς εχινακοσίδη, ακτεοσίδη, κιστανοσίδη Α και ισοακτεοσίδη ζυγίστηκαν με ακρίβεια και διαλύθηκαν σε μεθανόλη 50% σε ογκομετρικές φιάλες των 10 mL για να ληφθούν διαλύματα 1,1301, 0,2294, 0,2255 και 0,2109 mg·m αντίστοιχα. φιλτράρεται για να ληφθούν τελικά διαλύματα.

Δείγματα λύσεων:0,5 g σκόνης 80 mesh ακατέργαστων και επεξεργασμένων δειγμάτων ζυγίστηκε με ακρίβεια, εκχυλίστηκε με μεθανόλη 50% σε ογκομετρική φιάλη 25 mL, υποβλήθηκε σε υπερήχους (200 W, 40 kHz) για 40 λεπτά, ψύχθηκε, αναμίχθηκε, αφέθηκε σε ηρεμία και διηθήθηκε μέσω μεμβράνης 0,22 μm· χρησιμοποιήθηκε το διήθημα.

3.3.3 Επικύρωση μεθόδου (δακτυλικό αποτύπωμα)

3.3.3.1 Ακρίβεια

Το ίδιο διάλυμα δείγματος εγχύθηκε έξι διαδοχικές φορές. Χρησιμοποιώντας την εχινακοσίδη ως κορυφή αναφοράς, το RSD των σχετικών χρόνων συγκράτησης των κοινών κορυφών ήταν<0.48% and the RSD of relative peak areas was <2.86%, indicating good instrumental precision.

3.3.3.2 Επαναληψιμότητα

Παρασκευάστηκαν έξι παράλληλα διαλύματα δείγματος από την ίδια παρτίδα (ακατέργαστη φέτα S1). Χρησιμοποιώντας την εχινακοσίδη ως κορυφή αναφοράς, το RSD των σχετικών χρόνων κατακράτησης ήταν<0.07% and the RSD of relative peak areas was <2.77%, indicating good method repeatability.

3.3.3.3 Σταθερότητα

Το ίδιο διάλυμα δείγματος αναλύθηκε στις 0, 3, 6, 9, 12 και 24 ώρες. Χρησιμοποιώντας την εχινακοσίδη ως κορυφή αναφοράς, το RSD των σχετικών χρόνων κατακράτησης ήταν<0.11% and the RSD of relative peak areas was <2.33%, indicating stability within 24 h.

3.3.4 Καθιέρωση δακτυλικών αποτυπωμάτων

Τριάντα παρτίδες απόCistanche tubulosaκαι αναλύθηκαν τα μεταποιημένα προϊόντα. Χρησιμοποιήθηκε το «Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of Traditional Chinese Medicine» (έκδοση 2012). Ως δακτυλικά αποτυπώματα αναφοράς χρησιμοποιήθηκαν η ακατέργαστη φέτα S1 και η φέτα κίτρινου κρασιού στον ατμό J1. Η μέση μέθοδος και ένα πλάτος χρονικού παραθύρου 0,1 λεπτών εφαρμόστηκαν για διόρθωση πολλαπλών σημείων και αντιστοίχιση κορυφής σήμανσης για τη δημιουργία δακτυλικών αποτυπωμάτων (Εικόνες 1-2) και λήφθηκαν επικαλυπτόμενα χρωματογραφήματα με μικτά πρότυπα αναφοράς (Εικόνα 3).

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα τέσσερα επεξεργασμένα προϊόντα είχαν προφίλ δακτυλικών αποτυπωμάτων παρόμοια με αυτά των ακατέργαστων φετών. Οι ωμές φέτες είχαν 9 κοινές κορυφές, ενώ οι φέτες με κρασί στον ατμό, στον ατμό, επεξεργασμένες με ανάδευση με μαύρα φασόλια και οι επεξεργασμένες με χυμό μαύρου φασολιού είχαν 11 κοινές κορυφές. Εννέα κοινές κορυφές μοιράστηκαν και οι δύο. Οι κορυφές No. 2 και No. 7 ήταν χαρακτηριστικές κορυφές που ξεχώριζαν τις ακατέργαστες φέτες από τα επεξεργασμένα προϊόντα. Τα προφίλ δακτυλικών αποτυπωμάτων μεταξύ των τεσσάρων επεξεργασμένων προϊόντων ήταν παρόμοια και δεν αντικατοπτρίζουν σαφώς τις διαφορές μεταξύ τους.

3.3.5 Ανάλυση ομοιότητας

Using J1 as the reference fingerprint, similarity analysis was performed for different processed products (Table 2). Similarities were all >0,9, που υποδεικνύει παρόμοια χαρακτηριστικά δακτυλικών αποτυπωμάτων μεταξύ διαφορετικών επεξεργασμένων προϊόντων.

3.3.6 Προσδιορισμός κοινών κορυφών

Συγκρίνοντας τους χρόνους κατακράτησης με μικτά πρότυπα αναφοράς και το χρωματογράφημα ακατέργαστης φέτας, εντοπίστηκαν τέσσερις χρωματογραφικές κορυφές: Κορυφή 4, εχινακοσίδη. Κορυφή 9, κιστανοσίδη Α; Κορυφή 10, ακτεοσίδη; Κορυφή 11, ισοακτεοζίτης (Εικόνα 2). Με την κορυφή 4 (εχινακοσίδη) ως κορυφή αναφοράς, οι τιμές RSD των σχετικών χρόνων διατήρησης των κοινών κορυφών μεταξύ των διαφορετικών παρτίδων των τεσσάρων επεξεργασμένων προϊόντων κυμαίνονταν από 0,11% έως 0,82%, και οι τιμές RSD των σχετικών περιοχών κορυφής κυμαίνονταν από 15,46% έως 76,07%.

3.3.7 Ανάλυση συστάδων

Το SPSS 27.0 χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση συστάδων ακατέργαστων φετών και επεξεργασμένων προϊόντων. Εφαρμόστηκε σύνδεση μεταξύ ομάδων και χρησιμοποιήθηκε τετραγωνισμένη Ευκλείδεια απόσταση (Εικόνα 4). Όταν η διαταξική απόσταση ήταν<5, water-steamed slices and wine-steamed slices clustered together. When the inter-class distance was 10, raw slices and the four processed products were classified into three categories: raw materials (S1–S6) as one category; black-bean-juice-processed slices (H1–H6) as one category; and wine-steamed slices (J1–J6) together with water-steamed slices (Q1–Q6) and stir-processed-with-black-beans slices (C1–C6) as one category. When the inter-class distance was between 15 and 25, black-bean-juice-processed slices formed a separate cluster from the other samples.

3.3.8 Ανάλυση κύριας συνιστώσας

Μετά την τυποποίηση των περιοχών αιχμής, πραγματοποιήθηκε PCA χρησιμοποιώντας SPSS 27.0. Η τιμή KMO ήταν 0,679 και η σημασία του τεστ Bartlett ήταν<0.001, indicating suitability for PCA. With eigenvalues >1, εξήχθησαν τρία κύρια συστατικά με ιδιοτιμές 6,815, 1,987 και 1,105. Τα ποσοστά συμβολής διακύμανσης ήταν 61,954%, 18,063% και 10,047%, αντίστοιχα, με σωρευτικό ποσοστό συνεισφοράς διακύμανσης 90,064% (Πίνακας 3). Αυτό δείχνει ότι το πρώτο κύριο στοιχείο είναι ο πιο σημαντικός δείκτης για τη συνολική βαθμολογία.

Ο πίνακας συνιστωσών έδειξε ότι στην πρώτη κύρια συνιστώσα, οι απόλυτοι συντελεστές των μεταβλητών του εμβαδού κορυφής για τις κορυφές 2–9 και τις κορυφές 11 ήταν σχετικά μεγάλοι, υποδηλώνοντας ισχυρή επιρροή στο F1. Η δεύτερη κύρια συνιστώσα συσχετίστηκε με τις πληροφορίες των κορυφών 1 και 10 και η τρίτη κύρια συνιστώσα συσχετίστηκε με την κορυφή 1. Η μήτρα συνιστωσών φαίνεται στον Πίνακα 4. Το διάγραμμα διάτρησης και το διάγραμμα φόρτωσης φαίνονται στα Σχήματα 5 και 6. Χρησιμοποιώντας τις βαθμολογίες των τριών κύριων συστατικών και τα ποσοστά συνεισφοράς διακύμανσής τους ως βάρη για τη γραμμική στάθμιση, υπολογίστηκαν οι συνολικές βαθμολογίες (Πίνακας 5), υποδεικνύοντας ότι οι φέτες επεξεργασμένες με μαύρο φασόλι, οι φέτες με νερό στον ατμό και υψηλότερες φέτες κρασιού στον ατμό.

 

3.4 Προσδιορισμός πολλαπλών συστατικών με HPLC σεCistanche tubulosaκαι τα μεταποιημένα προϊόντα της

3.4.1 Χρωματογραφικές συνθήκες και ειδικότητα

Οι χρωματογραφικές συνθήκες ήταν οι ίδιες με αυτές που χρησιμοποιήθηκαν για τη λήψη δακτυλικών αποτυπωμάτων. Διαλύματα δειγμάτων, διαλύματα αναφοράς και αρνητικά τυφλά διαλύματα (κίτρινο κρασί ρυζιού, καθαρό νερό, χυμός μαύρου φασολιού) εγχύθηκαν το καθένα (10 μL). Οι χρόνοι συγκράτησης συγκρίθηκαν. Τα αρνητικά τυφλά διαλύματα δεν έδειξαν παρεμβολή με εχινακοσίδη, κιστανοζίτη Α, ακτεοσίδη και ισοακτεοσίδη.[το κείμενο λείπει στην πηγή]

3.4.2 Γραμμικότητα

Διαλύματα αναφοράς εχινακοσίδης, ακτεοσίδης, κιστανοσίδης Α και ισοακτεοσίδης σε συγκεντρώσεις 1,1301, 0,2294, 0,2255 και 0,2109 mg·mL-1 μεταφέρθηκαν με ακρίβεια στα 1, 2, 4, 8, 16,10, και εγχύθηκαν με σιφώνιο στα 1, 2, 4, 8, 16,10, μL. Διεξήχθη γραμμική παλινδρόμηση με την περιοχή κορυφής XXX έναντι της εγχυόμενης συγκέντρωσης ΥΥΥ (mg·mL-1). Οι γραμμικές εξισώσεις και τα εύρη φαίνονται στον Πίνακα 6.

3.4.3 Ακρίβεια

Το ίδιο διάλυμα δείγματος εγχύθηκε έξι διαδοχικές φορές. Οι τιμές RSD των περιεχομένων για τις τέσσερις αναλυόμενες ουσίες (εχινακοσίδη, κιστανοσίδη Α, ακτεοσίδη, ισοακτεοσίδη) ήταν 0,23%, 2,71%, 0,53% και 2,08%, αντίστοιχα (Πίνακας 7), όλες<3%, indicating good instrumental precision.

3.4.4 Επαναληψιμότητα

Παρασκευάστηκαν έξι παράλληλα διαλύματα δείγματος από την ίδια παρτίδα (ακατέργαστη φέτα S1). Οι τιμές RSD των περιεχομένων για τις τέσσερις αναλυόμενες ουσίες ήταν 0,22%, 2,46%, 0,50% και 2,46%, αντίστοιχα (Πίνακας 7), όλες<3%, indicating good repeatability.

3.4.5 Σταθερότητα (εντός ημέρας)

Το ίδιο διάλυμα δείγματος αναλύθηκε στις 0, 3, 6, 9, 12 και 24 ώρες. Οι τιμές RSD των περιεχομένων για τις τέσσερις αναλυόμενες ουσίες ήταν 0,80%, 1,62%, 1,72% και 1,49%, αντίστοιχα (Πίνακας 7), όλες<2.0%, indicating stability within 24 h.

3.4.6 Σταθερότητα (ενδιάμεσο)

Το ίδιο διάλυμα δείγματος αναλύθηκε για πέντε διαδοχικές ημέρες. Οι τιμές RSD των περιεχομένων για τις τέσσερις αναλυόμενες ουσίες για πέντε ημέρες ήταν 2,80%, 2,53%, 3,53% και 2,88%, αντίστοιχα (Πίνακας 7), υποδεικνύοντας σταθερότητα εντός πέντε ημερών.

3.4.7 Ανάκτηση

Μια κατάλληλη ποσότηταCistanche tubulosaΤο δείγμα ζυγίστηκε και τα πρότυπα αναφοράς εχινακοσίδης, ακτεοσίδης, κιστανοζίτης Α και ισοακτεοσίδης αυξήθηκαν σε αναλογία 1:1. Παρασκευάστηκαν και αναλύθηκαν έξι παράλληλα διαλύματα δείγματος (ένεση 10 μL). Οι μέσες ανακτήσεις ήταν 99,29%, 98,75%, 99,45% και 96,13% (n=6), με τιμές RSD 2,51%, 0,38%, 1,71% και 0,49% αντίστοιχα.

3.4.8 Αποτελέσματα προσδιορισμού

Για κάθε δείγμα, ζυγίστηκαν με ακρίβεια 0,5 g σκόνης. 10 μL εγχύθηκαν για τον προσδιορισμό και τον υπολογισμό των εκατοστιαίων περιεχομένων των τεσσάρων συστατικών. Τα αποτελέσματα φαίνονται στα Σχήματα 7-10.

 

3.5 Προσδιορισμός Ολικών Φαινυλαιθανοειδών Γλυκοζιδίων, Ολικών Πολυσακχαριτών και Ολικών Φλαβονοειδών

3.5.1 Προσδιορισμός Ολικών Φαινυλαιθανοειδών Γλυκοζιδίων

3.5.1.1 Παρασκευή Διαλύματος Αναφοράς

Μια κατάλληλη ποσότητα ουσίας αναφοράς εχινακοσίδης ζυγίστηκε με ακρίβεια και διαλύθηκε σε μεθανόλη σε ογκομετρική φιάλη 10 mL για να ληφθεί ένα διάλυμα με συγκέντρωση 0,32 mg·mL-1. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία [15], 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 και 1,2 mL του διαλύματος αναφοράς μεταφέρθηκαν με πιπέτα, αραιώθηκαν στα 10 mL με μεθανόλη και η απορρόφηση (Α) μετρήθηκε στα 333 nm. Η προσαρμοσμένη τυπική εξίσωση καμπύλης ήταν Y{=24.7596X+0.0147Y=24.7596X + 0.0147Y=24.7596X+0.0147, R2=0.9995R^2=0.9995R2=0.9995, με γραμμικό εύρος 0,0029-0,0,0359 mg.

3.5.1.2 Παρασκευή δείγματος διαλύματος

100 mg σκόνης δείγματος (που πέρασε από κόσκινο 100 mesh) ζυγίστηκαν με ακρίβεια, εκχυλίστηκαν με υπερήχους με μεθανόλη για 30 λεπτά (200 W, 40 kHz), αραιώθηκαν στα 10 mL και διηθήθηκαν μέσω μεμβράνης 0,22 μm. Κατόπιν 0,2 mL διηθήματος αραιώθηκε περαιτέρω σε 10 mL με μεθανόλη και αναμίχθηκε για ανάλυση.

3.5.1.3 Προσδιορισμός

Για κάθε δείγμα, χρησιμοποιήθηκαν 100 mg σκόνης για την παρασκευή του διαλύματος δείγματος. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 333 nm και υπολογίστηκε η εκατοστιαία περιεκτικότητα σε ολικούς φαινυλαιθανοειδείς γλυκοζίτες (Πίνακας 9).

Εξίσωση (1):
Περιεχόμενο (%) =C×V×Dm×100%= \\dfrac{C \\times V \\times D}{m} \\times 100\\%=mC×V×D​×100%
όπου CCC είναι η συγκέντρωση της αναλυόμενης ουσίας στο διάλυμα του δείγματος, VVV είναι ο όγκος αραίωσης, DDD είναι ο συντελεστής αραίωσης και mmm είναι η μάζα του δείγματος (mg).

3.5.2 Προσδιορισμός Ολικών Πολυσακχαριτών

3.5.2.1 Παρασκευή Διαλύματος Αναφοράς

Μια κατάλληλη ποσότητα άνυδρης ουσίας αναφοράς D-γλυκόζης ζυγίστηκε με ακρίβεια, διαλύθηκε σε καθαρό νερό και αραιώθηκε σε 10 mL για να ληφθεί ένα διάλυμα 0,190 mg·mL-1. Μετά από ανάμιξη και διήθηση (0,22 μm), 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 και 1,0 mL μεταφέρθηκαν με πιπέτα. Η ανάπτυξη χρώματος πραγματοποιήθηκε με τη μέθοδο ανθρόνη-θειικό οξύ [16]. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 625 nm. Η προσαρμοσμένη τυπική εξίσωση καμπύλης ήταν Y{=35.1316X−0,0079Y=35.1316X - 0.0079Y=35.1316X−0,0079, R2=0.9957R^2=0.9957R2=0.9957, με γραμμικό εύρος 0,0038–0,0,01 mg³-0,019 mg¼-0,010 L.

3.5.2.2 Παρασκευή δείγματος διαλύματος

40 mg σκόνης δείγματος ζυγίστηκαν με ακρίβεια, διαλύθηκαν με υπερήχους σε καθαρό νερό για 30 λεπτά (200 W, 40 kHz), αραιώθηκαν στα 10 mL και διηθήθηκαν μέσω μεμβράνης 0,22 μm.

3.5.2.3 Προσδιορισμός

Για κάθε δείγμα, χρησιμοποιήθηκαν 40 mg για την παρασκευή του διαλύματος δείγματος. Στη συνέχεια 0,1 mL διηθήματος μεταφέρθηκε με πιπέτα και συμπληρώθηκε με καθαρό νερό στα 2,00 mL. Μετά την ανάπτυξη χρώματος με τη μέθοδο ανθρόνης-θειικού οξέος, μετρήθηκε η απορρόφηση και υπολογίστηκε η εκατοστιαία περιεκτικότητα σε ολικούς πολυσακχαρίτες (Πίνακας 8).

3.5.3 Προσδιορισμός Ολικών Φλαβονοειδών

3.5.3.1 Παρασκευή Διαλύματος Αναφοράς

Μια κατάλληλη ποσότητα ουσίας αναφοράς ρουτίνης ζυγίστηκε με ακρίβεια, διαλύθηκε σε 70% αιθανόλη και αραιώθηκε στα 25 mL. διηθήθηκε μέσω μεμβράνης 0,22 μm. Στη συνέχεια μεταφέρθηκαν με πιπέτα 0,5, 1,0, 2,0, 3,0 και 4,0 mL. Η ανάπτυξη χρώματος πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο νιτρώδους νατρίου-νιτρικού αργιλίου-υδροξειδίου του νατρίου [17]. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 510 nm. Η προσαρμοσμένη τυπική εξίσωση καμπύλης ήταν Y=11.5699X+0.0684Y=11.5699X + 0.0684Y=11.5699X+0.0684, R2=0.9989R^2=0.9989R2=0.9989, με γραμμικό εύρος 0,0097–0,0,0738 mg.

3.5.3.2 Παρασκευή δείγματος διαλύματος

50 mg σκόνης ζυγίστηκαν με ακρίβεια, διαλύθηκαν με υπερήχους σε 70% αιθανόλη για 30 λεπτά (200 W, 40 kHz), αραιώθηκαν στα 10 mL και διηθήθηκαν μέσω μεμβράνης 0,22 μm.

3.5.3.3 Προσδιορισμός

Για κάθε δείγμα, χρησιμοποιήθηκαν 50 mg για την παρασκευή του διαλύματος δείγματος. Στη συνέχεια 0,5 mL διηθήματος μεταφέρθηκαν σε ογκομετρική φιάλη 10 mL και προστέθηκαν έγχρωμα αντιδραστήρια με τη σειρά όπως παραπάνω. Το καθαρισμένο νερό χρησίμευε ως το κενό. Μετρήθηκε η απορρόφηση και υπολογίστηκε η εκατοστιαία περιεκτικότητα σε ολικά φλαβονοειδή (Πίνακας 8).

 

4 Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, τα δακτυλικά αποτυπώματα HPLC τουCistanche tubulosa and its various processed products were established. Peak matching across different batches confirmed 9 common peaks in raw slices and 11 common peaks in processed products. By comparison with reference standards, four common peaks were identified as echinacoside, cistanoside A, acteoside, and isoacteoside. Similarity analysis showed that similarity values among four processed products were all >0,9 και τα συνολικά προφίλ δακτυλικών αποτυπωμάτων ήταν παρόμοια, υποδεικνύοντας ότι οι τύποι των συστατικών τους ήταν κοντά. Ωστόσο, οι μεγάλες διαφορές στο RSD των σχετικών περιοχών κορυφής υποδηλώνουν αξιοσημείωτες διαφορές στα περιεχόμενα των συστατικών.

Σε σύγκριση με τις ακατέργαστες φέτες, τα τέσσερα επεξεργασμένα προϊόντα εμφάνισαν δύο επιπλέον κορυφές (Κορυφές 2 και 7), υποδεικνύοντας ότι τα χημικά συστατικά άλλαξαν μετά την επεξεργασία με κρασί στον ατμό, νερό στον ατμό ή επεξεργασία με μαύρο φασόλι. Αυτές οι νεοδημιουργούμενες κορυφές θεωρείται ότι σχηματίζονται κατά την επεξεργασία. Ο χαρακτηρισμός των συστατικών τους θα εξεταστεί σε επόμενες μελέτες.

Τα αποτελέσματα της ΑΠ έδειξαν ότι όταν η απόσταση μεταξύ των τάξεων ήταν<5, wine-steamed and water-steamed slices clustered together, suggesting similar chemical composition and content. At an inter-class distance of 10, raw slices could be separated from black-bean-juice-processed slices, stir-processed-with-black-beans slices, and wine/water-steamed slices. At inter-class distances of 15–25, differences between black-bean-juice-processed slices and other samples became more prominent. PCA results indicated that three principal components had substantial influence on comprehensive evaluation.

Οι διαφορετικές μέθοδοι επεξεργασίας επηρέασαν άμεσα τα επίπεδα των διαφόρων συστατικών. Με βάση τον χημειομετρικό προσδιορισμό, οι συνολικοί γλυκοζίτες φαινυλαιθανοειδών ταξινομήθηκαν ως: επεξεργασμένος με χυμό μαύρου φασολιού > ακατέργαστες φέτες > στον ατμό με νερό > στον ατμό με κρασί > επεξεργασμένος με ανάδευση με μαύρα φασόλια. Οι συνολικοί πολυσακχαρίτες ταξινομούνται ως: ατμισμένος σε νερό > βρασμένος στον ατμό κρασιού > επεξεργασμένος με ανάδευση με μαύρα φασόλια > επεξεργασμένος με χυμό μαύρου φασολιού > ακατέργαστες φέτες. Τα συνολικά φλαβονοειδή ταξινομούνται ως: επεξεργασμένος σε χυμό μαύρων φασολιών > βρασμένος στον ατμό με νερό > επεξεργασμένος με ανάδευση με μαύρα φασόλια > στον ατμό με κρασί > ωμές φέτες. Σε σύγκριση με τις ακατέργαστες φέτες, η επεξεργασία του χυμού από μαύρα φασόλια αύξησε τους συνολικούς φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ενώ άλλες μέθοδοι επεξεργασίας το μείωσαν. Και οι τέσσερις μέθοδοι επεξεργασίας αύξησαν σημαντικά τους συνολικούς πολυσακχαρίτες και τα συνολικά φλαβονοειδή. Μεταξύ των δύο μεθόδων μαύρου φασολιού, η επεξεργασία του χυμού μαύρου φασολιού παρήγαγε μεγαλύτερες αυξήσεις στους συνολικούς φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες και τα συνολικά φλαβονοειδή από την επεξεργασία με ανάδευση με μαύρα φασόλια, με στατιστικές διαφορές.

 

Πίνακας 8. Αποτελέσματα προσδιορισμού των ολικών φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών, των ολικών πολυσακχαριτών και των ολικών φλαβονοειδών σεCistanche tubulosaκαι τα μεταποιημένα προϊόντα της

Επεξεργασμένο προϊόν (τεμάχια αφέψημα)	Ολικοί γλυκοζίτες φαινυλαιθανοειδών (%)	Ολικοί πολυσακχαρίτες (%)	Ολικά φλαβονοειδή (%)
Ακατέργαστες φέτες	6.81 ± 0.06	5.85 ± 0.10	14.16 ± 0.24
Φέτες κρασιού στον ατμό	5.10 ± 0.05***	6.61 ± 0.05***	20.84 ± 0.33***
Φέτες στον ατμό	5.23 ± 0.05***	6.70 ± 0.15***	21.59 ± 0.37***
Ανακατεύουμε με φέτες μαύρων φασολιών	3.80 ± 0.02***	6.56 ± 0.09***	21.02 ± 0.35***
Επεξεργασμένες φέτες μαύρου-φασολιού-χυμού	7.07 ± 0.09****	6.09 ± 0.03****	24.26 ± 0.18****

Σημειώσεις: Σε σύγκριση με ακατέργαστες φέτες: *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001; σε σύγκριση με φέτες επεξεργασμένες με ανάδευση με μαύρα φασόλια: *P <0,05, **P <0,01, ***P <0,001.

Η εχινακοσίδη, η ακτεοσίδη, η κιστανοσίδη Α και η ισοακτεοσίδη είναι βασικοί φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες που συμβάλλουν στις τονωτικές και ωφέλιμες ιδιότητες των νεφρώνCistanche tubulosa. Η σύγκριση HPLC αυτών των τεσσάρων συστατικών έδειξε ότι οι διαφορές στην περιοχή κορυφής μεταξύ των κοινών κορυφών θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως βάση για τη διάκριση διαφορετικών επεξεργασμένων προϊόντων. Σε σύγκριση με τις ακατέργαστες φέτες, η εχινακοσίδη, η κιστανοσίδη Α και η ισοακτεοσίδη αυξήθηκαν σε διάφορους βαθμούς στα επεξεργασμένα προϊόντα, με πιο έντονες αυξήσεις στα προϊόντα με χυμό μαύρου φασολιού. Το Acteoside μειώθηκε σε τρία επεξεργασμένα προϊόντα, αλλά αυξήθηκε στα προϊόντα που επεξεργάστηκαν με ανάδευση με μαύρα φασόλια. Αυτό μπορεί να σχετίζεται με την εγγενή σταθερότητα του ακτεοζίτη: ως φαινυλαιθανοειδές διγλυκοσίδιο με καφεοϋλικό τμήμα, μπορεί να υποστεί διάσπαση εστερικού δεσμού υπό αλλαγές στη θερμοκρασία θέρμανσης, το χρόνο και το pH για να δημιουργήσει καφεϊκό οξύ και να ισομεριστεί μερικώς σε ισοακτεοσίδη. Η παρατηρούμενη μείωση στην ακτεοσίδη και η αύξηση της ισοακτεοσίδης στα τέσσερα επεξεργασμένα προϊόντα μπορεί να συσχετιστεί με τον ατμό σε υψηλή θερμοκρασία, σύμφωνα με τα πρότυπα που αναφέρθηκαν για την επεξεργασία Rehmanniae Radix [18].

Η εχινακοσίδη αυξήθηκε μετά τον ατμό κρασιού/νερού και την επεξεργασία μαύρων φασολιών σε αυτή τη μελέτη, κάτι που είναι αντίθετο με τους Zhang Chao et al. [12]. Συγκρίνοντας την επεξεργασία με ανάδευση με τα μαύρα φασόλια και την επεξεργασία του χυμού από μαύρα φασόλια, η τελευταία έδειξε σημαντικά υψηλότερη περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη και κιστανοζίτη Α και μια πιο έντονη τάση μετατροπής από ακτεοσίδη σε ισοακτεοσίδη. Συνολικά, αυτή η μελέτη αποκαλύπτει αλλαγές στη σύνθεση και το περιεχόμενο μετά από διάφορες μεθόδους επεξεργασίας και επαληθεύει την αλλαγή μεταξύ ακτεοσίδης και ισοακτεοσίδης. Τα δακτυλικά αποτυπώματα HPLC παρέχουν μια επιστημονική μέθοδο για τον εντοπισμό ακατέργαστων φετών και επεξεργασμένων προϊόντων και προσφέρουν μια αναφορά για τη θέσπιση προτύπων ποιοτικού ελέγχου και για ποιοτικές και ποσοτικές αναλύσεις.

 

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

Συνεισφορές Συγγραφέων

XU Xiaoqin: υποστήριξη έργου, σχεδιασμός μελέτης, πειραματικός προσδιορισμός και συγγραφή χειρογράφων.
QING Degang: συνολικός συντονισμός και συλλογή φαρμακευτικών υλικών.
ZHANG Juan και ZHAO Peng'an: προσδιορισμός συστατικών και ανάλυση δεδομένων.
WANG Guoping: έλεγχος ταυτότητας φαρμακευτικών υλικών.

 

Εργοστάσιο δειγμάτων Cistanche:

https://www.xjcistanche.com/about-us

 

 

Αναφορές

[1] Επιτροπή Φαρμακοποιίας του Υπουργείου Υγείας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας.Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας[Μ]. Πεκίνο: Chemical Industry Press, 2025.
[2] Jia Xiaoguang, Ni Hui, Zhang Juan, et al. Κατάσταση έρευνας και βιομηχανικής ανάπτυξηςCistanche tubulosa [J]. Εφημερίδα του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang, 2012, 35(7): 876–880.
[3] Liu Yuewen. Πρόοδος της έρευνας για τις φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες σεCistanche tubulosa [J]. Σύγχρονα Αγροτικά Μηχανήματα, 2020(11): 60–62.
[4] Tu Pengfei. Επανεξέταση των φυτικών κειμενικών στοιχείων για το Cistanches Herba [J].China Journal of Chinese Materia Medica, 2022, 47(20): 5670–5679.
[5] Ζου Σου, Τενγκ Σούο, Λιου Τσουν.Puji Fang[Μ]. Πεκίνο: People's Medical Publishing House, 1959.
[6] Wang Huaiyin.Taiping Shenghui Fang[Μ]. Πεκίνο: People's Medical Publishing House, 1959.
[7] Τανγκ Σενγουέι.Chongxiu Zhenghe Jingshi Zhenglei Beiyong Bencao[Μ]. Πεκίνο: People's Medical Publishing House, 1957.
[8] Zhang Yong, Wu Huan. Ιστορική εξέλιξη των μεθόδων επεξεργασίας για το Cistanches Herba [J].China Journal of Chinese Materia Medica, 1992, 17(4): 213–214.
[9] Cai Hong, Bao Zhong, Jiang Yong. Τεχνολογία επεξεργασίας για φρέσκοCistanche tubulosa [J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2007, 32(13): 1289–1291.
[10] Tie Xiaoyan, Feng Yinping, Ma Dongni. Επίδραση της επεξεργασίας στον ατμό στην περιοχή προέλευσης στην ποιότητα των Cistanches Herba της ερήμου [J].Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine, 2021, 40(2): 54–56.
[11] Chen Weijun, Jia Cuiyu, Li Lianjiang. Επιδράσεις διαφορετικών μεθόδων επεξεργασίας στην περιεκτικότητα σε βεταΐνη στο XinjiangCistanche tubulosa [J]. Αγροτική Ιατρική Αποκατάστασης, 2009, 31(5): 400–402.
[12] Zhang Chao, Hua Yue, Lian Jing, et al. Μελέτη σχετικά με τη διακύμανση του περιεχομένου των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών κατά την επεξεργασία του Cistanches Herba [J].Κινεζική Εφημερίδα Πληροφοριών για την Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική, 2022, 29(4): 92–97.
[13] Wu Chunxing, Yang Yang, Meng Mei, et al. Κατάσταση έρευνας και ανάλυση τάσεων του δακτυλικού αποτυπώματος TCM την τελευταία δεκαετία [J].Περιοδικό του Πανεπιστημίου Minzu της Κίνας (Έκδοση Φυσικών Επιστημών), 2024, 33(4): 63–72.
[14] Jiang Yong, Bao Zhong, Sun Yongqiang. Μελέτη για την τεχνολογία επεξεργασίας φετών Cistanches Herba [J].Κινεζική Φαρμακευτική Εφημερίδα, 2011, 46(14): 1074–1076.
[15] Zhang Leihong, Du Niansheng, Wang Qing. Προσδιορισμός φαινυλαιθανοειδών γλυκοζιτών σε κάψουλες ολικού γλυκοσιδίου Cistanches Herba με φασματοφωτομετρία UV [J].Εφημερίδα του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang, 2002, 25(4): 407–408.
[16] Ailadan·Maimaiti Aili, Yang Ting, Yuan Jie. Διαδικασία εκχύλισης και in vitro αντιοξειδωτική δράση πολυσακχαριτών από υπολείμματα τουCistanche tubulosa [J]. Τρίμηνο Chemical and Biochemical Engineering(μεταφρασμένο όνομα περιοδικού με βάση τα κινέζικα), 2020, 37(2): 36–41.
[17] Λούο Γιαν. Βελτιστοποίηση της διαδικασίας εκχύλισης ολικών φλαβονοειδών απόCistanche tubulosa[ΡΕ]. Shihezi: Πανεπιστήμιο Shihezi, 2015.
[18] Shan Guoshun, Zhao Qimiao, Li Rui, et al. Δυναμική μελέτη της περιεκτικότητας σε ακτεοσίδη κατά την επεξεργασία τουRehmannia glutinosa [J]. Παραδοσιακή Ιατρική Ασίας-Ειρηνικού, 2019, 15(3): 37–39.