Τα φλαβονοειδή από εναέριο τμήμα του Cistanche Βελτιώνουν τη Χρόνια Προστατίτιδα: Επικύρωση αρουραίου, Διαμόρφωση Κυτοκίνης και Μηχανισμοί PI3K–AKT–EGFR–MMP9

2.3.1 Ομαδοποίηση ζώων και επαγωγή μοντέλων

Μετά από μία εβδομάδα εγκλιματισμού, οι αρσενικοί αρουραίοι με SD χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες (n=6 ανά ομάδα): ομάδα που χειρουργήθηκε ψευδώς, ομάδα μοντέλου, ομάδα θετικών φαρμάκων (δισκία Qianliekang Pule'an) και ομάδα αλκοολούχου εκχυλίσματος αερίου Cistanche. Ακολουθώντας το "Προσχέδιο Προδιαγραφών για την Παρασκευή Ζωικών Μοντέλων Χρόνιας Προστατίτιδας" [20], 1% καραγενάνη σε φυσιολογικό ορό εγχύθηκε στα σπερματικά κυστίδια για να προκληθεί χρόνια προστατίτιδα στις ομάδες μοντέλου, θεραπείας και θετικών φαρμάκων. Η εικονική ομάδα έλαβε ίσο όγκο φυσιολογικού ορού. Η δοσολογία ξεκίνησε μετά από ανάκαμψη 3 ημερών.

 

 

συμπληρώματα εκχυλίσματος κιστάνς για χρόνια προστατίτιδα

Επικοινωνήστε μαζί μας αγοράστε τώρα

 

 

 

 

2.3.2 Χορήγηση φαρμάκου

Το εκχύλισμα εναέριου μέρους Cistanche χορηγήθηκε στα 63 mg/(kg·d). Το θετικό φάρμακο δόθηκε σε 1,05 g/(kg·d). Το όχημα ήταν 0,5% CMC-Na, και ο όγκος καθετήρα ήταν 1 mL ανά αρουραίο. Οι ομάδες εικονικών και μοντέλων έλαβαν ισοδύναμο όγκο οχήματος. Η χορήγηση γινόταν μία φορά την ημέρα σε καθορισμένο χρόνο για 28 συνεχόμενες ημέρες.

2.3.3 Σωματικό βάρος και δείκτης προστάτη

Το σωματικό βάρος καταγραφόταν εβδομαδιαία. Στις 24 ώρες μετά την τελευταία δόση, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν. οι προστάτες αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν για να υπολογιστεί ο δείκτης προστάτη.
Δείκτης προστάτη (%)=μάζα προστάτη (g) / μάζα σώματος (g) × 100%
Αποτελέσματα: Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων στο σωματικό βάρος ή στη μάζα του προστάτη. Η ομάδα μοντέλου εμφάνισε αυξημένο δείκτη προστάτη έναντι της εικονικής ομάδας (P <0,05). Τόσο η ομάδα με θετικό φάρμακο όσο και η ομάδα εκχυλίσματος Cistanche εμφάνισαν μειωμένους δείκτες προστάτη σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου (P <0,05), βλέπε Πίνακα 3.

Cistanche Εισαγωγή για τη χρόνια προστατίτιδα

 

2.3.4 Φλεγμονώδεις κυτοκίνες ορού με ELISA

Στις 24 ώρες μετά την τελευταία χορήγηση, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με υδατικό διάλυμα ουρεθάνης 20%. Το αίμα συλλέχθηκε από την κοιλιακή αορτή, φυγοκεντρήθηκε και ο ορός αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς. Ακολουθώντας τις οδηγίες του κιτ ELISA, προσδιορίστηκαν τα επίπεδα ορού DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA και TNF-.
Σε σύγκριση με την εικονική ομάδα, η ομάδα μοντέλου είχε αυξημένα DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA και TNF- (P <0,05, P <0,01). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η ομάδα εκχυλίσματος εναέριου τμήματος Cistanche έδειξε μειωμένα επίπεδα DHT, IFN-, IgG, IL-6, PSA και TNF- (P <0,05, P <0,01), υποδεικνύοντας ευνοϊκό θεραπευτικό αποτέλεσμα κατά της χρόνιας προστατίτιδας. βλέπε Εικόνα 4.

2.3.5 Χρώση HE για ιστοπαθολογία προστάτη

Οι ιστοί του προστάτη στερεώθηκαν σε σταθεροποιητικό ιστού για περισσότερες από 24 ώρες, αφυδατώθηκαν, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη-ηωσίνη (ΗΕ). Κάτω από μικροσκόπιο φωτός, καταγράφηκε η αδενική μορφολογία, η διήθηση των στρωματικών φλεγμονωδών κυττάρων και η ινώδης υπερπλασία.
Μακροσκοπικά και ιστολογικά αποτελέσματα μετά από 28 ημέρες:

Sham ομάδα:οι προστάτες ήταν κατακόκκινοι, μαλακοί και ελαστικοί.

Ομάδα μοντέλων:οι προστάτες ήταν σκούρο κόκκινο, πιο σφριγηλό και λιγότερο ελαστικό.

Εκχύλισμα Cistanche και ομάδες θετικών φαρμάκων: αξιοσημείωτες βελτιώσεις σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου.
Η χρώση HE έδειξε:

Απάτη:άθικτοι αδένες χωρίς ατροφία. μονής στιβάδας επιθηλιακά κύτταρα ανέπαφα χωρίς υπερπλασία. καμία φλεγμονώδης διήθηση σε μεσοαδενικούς χώρους.

Μοντέλο: έντονη αδενική παραμόρφωση και ατροφία. επιθηλιακή απολέπιση και υπερπλασία. άφθονη διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων στο στρώμα.

Εκχύλισμα Cistanche και ομάδες θετικών φαρμάκων: βελτιωμένη αδενική μορφολογία, μειωμένη φλεγμονώδης διήθηση και αναστολή της υπερπλασίας του επιθηλίου. βλέπε Εικόνα 5.

2.3.6 Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SPSS 23.0 και εκφράστηκαν ως x ± s. Οι συγκρίσεις δύο ομάδων χρησιμοποίησαν το τεστ t. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

 

3 Συζήτηση

Η χρόνια προστατίτιδα είναι μια κοινή ουρογεννητική πάθηση με συχνότητα έως και 8% στους άνδρες κάτω των 50 ετών παγκοσμίως, που συχνά παρουσιάζεται με συμπτώματα του κατώτερου ουροποιητικού συστήματος και πυελικό πόνο [21]. Η παθογένειά του παραμένει ατελώς καθορισμένη. Οι προτεινόμενοι συνεισφέροντες περιλαμβάνουν κρυφή μικροβιακή λοίμωξη, αυτοάνοση, οξειδωτικό στρες και ενδοκρινική δυσλειτουργία. Η τρέχουσα κλινική διαχείριση βασίζεται κυρίως στη δυτική ιατρική, όπως αναστολείς υποδοχέων, ΜΣΑΦ και αντιβιοτικά κινολόνης [22]. Τα φλαβονοειδή από τα εναέρια μέρη του Cistanche παρουσιάζουν επίσης θεραπευτικά οφέλη για τη χρόνια προστατίτιδα. Σε αυτή τη μελέτη, η φαρμακολογία δικτύου χρησιμοποιήθηκε για τη διερεύνηση μηχανισμών δράσης κατά της χρόνιας προστατίτιδας των φλαβονοειδών του εναέριου μέρους από το Cistanche, ακολουθούμενη από επικύρωση από ζώα.

Το UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS εντόπισε 44 φλαβονοειδή στο αλκοολούχο εκχύλισμα εναέριων μερών Cistanche. Ο έλεγχος βάσης δεδομένων απέδωσε 19 ενεργά συστατικά, 956 στόχους ασθενειών, 138 σύνθετους στόχους και 88 διασταυρούμενους στόχους. Πραγματοποιήθηκε μοριακή σύνδεση μεταξύ των κορυφαίων 10 στόχων κατάταξης PPI και των ενεργών συστατικών. Τα πέντε ζεύγη με την καλύτερη βαθμολογία ήταν σπινακετίνη-EGFR, liquiritigenin-MMP2, ononin (γλυκοσίδη maackiain)-MMP9, spinacetin-MMP9 και liquiritigenin-PTGS2. Η σπινακετίνη είναι μια κύρια φλαβόνη που σχετίζεται με ισοφλαβονοειδή με αντιοξειδωτική και αντιμολυσματική φαρμακολογία, ικανή να μετριάσει τη φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες και να μειώσει την απόπτωση [23]. Η λικουριτιγενίνη είναι ένα διυδροφλαβονοειδές που ρυθμίζει προς τα κάτω τις προφλεγμονώδεις κυτοκίνες για να ασκήσει αντιφλεγμονώδη δράση [24]. Η ονονίνη μπορεί να μειώσει τους κατάντη προφλεγμονώδεις μεσολαβητές σε ασθενείς ιστούς και δείχνει αντικαρκινικό δυναμικό [25]. Ο εμπλουτισμός KEGG ενέπλεξε την αντίσταση PI3K-AKT, EGFR αναστολέα κινάσης τυροσίνης και άλλες οδούς στη δράση κατά της χρόνιας προστατίτιδας των φλαβονοειδών του εναέριου μέρους Cistanche.

Ο EGFR είναι ένας διαμεμβρανικός υποδοχέας κρίσιμος για τη ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης και της ακεραιότητας του επιθηλίου [26]. Ο ενεργοποιημένος EGFR προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του προστάτη μέσω κατάντη οδών, συμπεριλαμβανομένου του PI3K–AKT. Ο ανώμαλος πολλαπλασιασμός μπορεί να προκαλέσει στρωματική και ινώδη υπερπλασία και ανώμαλη ανάπτυξη του προστάτη σε αρουραίους [27]. Το AKT1, μια ισομορφή AKT, είναι ζωτικής σημασίας για την ισορροπία πολλαπλασιασμού-απόπτωσης, το μεταβολισμό και τη γονιδιωματική σταθερότητα [28], με την ενεργοποίηση να εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την οδό PI3K-AKT. Όταν τα εξωκυττάρια ερεθίσματα δεσμεύονται στους υποδοχείς της μεμβράνης, η οδός ενεργοποιεί το AKT1 για να εκτελέσει τις λειτουργίες του [29]. Στην προστατίτιδα, η ενεργοποίηση του AKT1 προάγει την παραγωγή φλεγμονωδών κυτοκινών που διεγείρουν περαιτέρω τα τοπικά κύτταρα, προκαλώντας πόνο, οίδημα, βλάβη των ιστών και ίνωση. Η αναστολή της έκφρασης AKT1 μπορεί να μετριάσει τη χρόνια προστατίτιδα [30]. Η MMP9 είναι μια εξαρτώμενη από ψευδάργυρο ενδοπεπτιδάση που αποικοδομεί διάφορα συστατικά εξωκυτταρικής μήτρας [31]. Στη χρόνια προστατίτιδα, η υπερέκφραση της MMP9 διαταράσσει την αρχιτεκτονική των ιστών, θέτει σε κίνδυνο την ακεραιότητα του κελύφους και διευκολύνει τη μετανάστευση των φλεγμονωδών κυττάρων από τις περιαγγειακές περιοχές στις θέσεις της βλάβης, επεκτείνοντας τη φλεγμονή. Το MMP9 μπορεί να αλληλεπιδράσει με την οδό PI3K–AKT με πολλούς τρόπους και η ενεργοποίηση PI3K–AKT μπορεί να ρυθμίσει προς τα πάνω την έκφραση MMP9. Συμπεραίνουμε ότι τα φλαβονοειδή του εναέριου μέρους του Cistanche δρουν κατά της χρόνιας προστατίτιδας ρυθμίζοντας τα EGFR, AKT1 και MMP9 μέσω της οδού PI3K–AKT.

Για την επικύρωση της αποτελεσματικότητας, οι ενέσεις σπερματικών κυστιδίων που προκλήθηκαν από καραγενάνη καθιέρωσαν το μοντέλο, ακολουθούμενες από θεραπεία. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η ομάδα Cistanche εμφάνισε μειωμένη DHT ορού, IFN-, IgG, IL-6, PSA και TNF- . βελτιωμένη αδενική μορφολογία. και μειωμένη διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων.

Συνοψίζοντας, τα φλαβονοειδή από τα εναέρια μέρη του Cistanche δρουν κατά της χρόνιας προστατίτιδας μέσω μηχανισμών πολλαπλών συστατικών, πολλαπλών στόχων και πολλαπλών οδών, που πιθανώς ρυθμίζουν τα EGFR, AKT1 και MMP9 μέσω της σηματοδότησης PI3K–AKT. Η παρούσα εργασία επαλήθευσε την αποτελεσματικότητα αυτών των φλαβονοειδών και προκαταρκτικά διευκρίνισε ενεργά συστατικά και μηχανισμούς, παρέχοντας μια αναφορά για την αποσαφήνιση της φαρμακοδυναμικής υλικής βάσης και του μηχανισμού δράσης των εναέριων μερών του Cistanche.

 

Αναφορές

[1] Gao Xueyan, Wang Wenquan, Wei Shengli, et al. Πρόοδοι στις φαρμακολογικές δραστηριότητες του Cistanche και των δραστικών συστατικών του [J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2009, 34(21): 2695–2700.
[2] Zhang Minjian, Chang Degui, Bin Bin, et al. Ολοκληρωμένη κινεζική και δυτική ιατρική οδηγία για τη διάγνωση και τη θεραπεία της χρόνιας προστατίτιδας [J]. Chinese Journal of Andrology, 2023, 37(1): 3–17.
[3] Zhang Lu, Cui Jie, Wang Wenquan, et al. Πρόοδοι σε χημικά συστατικά και φαρμακολογικές επιδράσεις των εναέριων τμημάτων του γένους Cistanche [J]. Chinese Medicinal Materials, 2018, 41(6): 1501–1505.
[4] Li Hongli. Study on antioxidant and anti-CNP activities of water-soluble components from aerial parts of Cistanche [D]. Beijing: Beijing University of Chinese Medicine, 2016.
[5] Zhang Lin, Zhao Zihan, Yu Bingli, et al. Επιδράσεις των εναέριων τμημάτων του Cistanche στη χρόνια προστατίτιδα σε αρουραίους [J]. Chinese Traditional Patent Medicine, 2019, 41(6): 1407–1410.
[6]–[19] (Αναφορές αναλυτικής μεθοδολογίας για UPLC/ESI/Orbitrap/Q-TOF και αναγνώριση φλαβονοειδών· ίδια αρίθμηση και στοιχεία περιοδικού με την πηγή, προσαρμοσμένα για συνέπεια.)
[20] Κινεζική Ένωση Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής, Επαγγελματική Επιτροπή Πειραματικής Φαρμακολογίας της Κινεζικής Ιατρικής. Σχέδιο προδιαγραφών για την παρασκευή ζωικών μοντέλων χρόνιας προστατίτιδας [J]. China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2018, 24(19): 10–14.
[21]–[31] Αντιστοιχούν στην αναφερόμενη βιβλιογραφία για την επιδημιολογία, τη θεραπεία και τους μοριακούς στόχους (EGFR, AKT1, MMP9) όπως στη λίστα πηγών.