Κάψουλες με βάση το Cistanche ανακουφίζουν τη χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα σε αρουραίους ρυθμίζοντας τη μικροχλωρίδα του εντέρου, τους μεταβολίτες του ορού και την οδό σηματοδότησης SPHK1/S1P1/PI3K/Akt

3.5 Μεταβολωμική Ανάλυση ορού CBC σε αρουραίους EAP

3.5.1 Πολυπαραγοντική Στατιστική Ανάλυση της Μεταβολομικής των Κοπράνων

Η ανάλυση κύριου συστατικού (PCA) αποκάλυψε σαφείς διαχωρισμούς ομάδων υπό τρόπο θετικού ιόντος μεταξύ τωνομάδες φυσιολογικών, μοντέλων και υψηλών δόσεων CBC, με τοΗ ομάδα CBC συγκεντρώνεται πιο κοντά στην κανονική ομάδακαι πιο μακριά από την ομάδα μοντέλων. Σε λειτουργία αρνητικού ιόντος, παρατηρήθηκε μερική επικάλυψη μεταξύ της κανονικής και της ομάδας μοντέλου, ενώ τα δείγματα που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με CBC εξακολουθούσαν να παρουσιάζουν καλή διάκριση (Εικόνα 5).

Η ανάλυση διάκρισης μερικών ελαχίστων τετραγώνων (PLS-DA) επιβεβαίωσε μια ισχυρή επίδραση ταξινόμησης και στις τρεις ομάδες και στους δύο τρόπους ιονισμού. ΟΔοκιμή μετάθεσης 200 χρόνωνεπικύρωσε την αξιοπιστία του μοντέλου, με αΤέμνισμα Q² κάτω από 0,05, υποδεικνύοντας ότι δεν υπάρχει υπερβολική προσαρμογή. Πτωτική τάση σεΤιμές R² και Q²κατά μήκος του άξονα Χ επιβεβαίωσε περαιτέρω τη σταθερότητα του μοντέλου (Εικόνα 6).

ΤΣΑΓΙ ΦΟΡΜΟΥΛΑ ΜΕ ΒΑΣΗ ΚΙΣΤΑΝΣΙ

Αγοράστε τώρα

 

 

 

 

 

3.5.2 Προσδιορισμός διαφορικών μεταβολιτών που επηρεάζονται από το CBC

Διαφορικοί μεταβολίτες ορού διηθήθηκαν με βάσηVIP > 1από το PLS-DA,αλλαγή πτυχής Μεγαλύτερη ή ίση με 1, καιp < 0,05. Μετά τον αποκλεισμό των εξωγενών ενώσεων,10 σημαντικοί ενδογενείς μεταβολίτεςταυτοποιήθηκαν (Πίνακας 9).

 

3.5.3 Ανάλυση εμπλουτισμού διαδρομής KEGG

Η ανάλυση εμπλουτισμού KEGG των διαφορικών μεταβολιτών έδειξε ότιΗ θεραπεία με CBC μπορεί να τροποποιήσει βασικές μεταβολικές οδούςεμπλέκονται στη χρόνια προστατίτιδα. Οι εμπλουτισμένες διαδρομές περιελάμβαναν:

Σφιγγολιπιδικός μεταβολισμός

Μεταβολισμός ρετινόλης

Μεταβολισμός γλυκίνης, σερίνης και θρεονίνης

Μεταβολισμός γλυκεροφωσφολιπιδίων

Μεταβολισμός αραχιδονικού οξέος(Εικόνα 7)

Αυτά τα μονοπάτια είναι γνωστό ότι παίζουν σημαντικό ρόλορύθμιση του ανοσοποιητικού, οξειδωτικό στρες και φλεγμονή.

3.5.4 Συσχέτιση μεταξύ διαφορικών μεταβολιτών και εντερικής μικροχλωρίδας

Η ανάλυση συσχέτισης Spearman διεξήχθη μεταξύ των 10 διαφορικών μεταβολιτών και των σημαντικά αλλαγμένων βακτηριακών ταξινομήσεων. Οι αξιοσημείωτες συσχετίσεις περιλαμβάνουν:

PA(6-κετο-PGF1 /i-20:0): συσχετίζεται θετικά μεLactobacillusκαιΡομπούτσια ιλεάλης, αρνητικά μεNeglectibacter timonensis

SM[d16:2/20:4-2OH]: συσχετίζεται θετικά μεParaprevotella claraκαιΡομπούτσια ιλεάλης

ΥΓ[18:1/20:0]: συσχετίζεται θετικά μεΡομπούτσια ιλεάλης, αρνητικά μεOscillospiraceae

lysoPA(0:0/18:0): συσχετίζεται αρνητικά μεLactobacillusκαιΡομπούτσια ιλεάλης, θετικά μεNeglectibacter timonensis

Ουρεϊδοϊσοβουτυρικό οξύ: συσχετίζεται αρνητικά μεParaprevotella clara

16(R)-HETEκαι(2R,3R)-2-αμινοοκταδεκανο-1,3-διόλη: συσχετίζεται θετικά μεNeglectibacter timonensis

Σφιγγοσίνη: συσχετίζεται αρνητικά μεΡομπούτσια ιλεάλης, θετικά μεNeglectibacter timonensis

lysoPA (18:0/0:0)καιΡετινοϋλο-γλυκουρονίδιο: συσχετίζεται αρνητικά μεBifidobacterium animalisκαιΡομπούτσια ιλεάλης(Εικόνα 8)

Αυτοί οι συσχετισμοί υποδηλώνουνμια ισχυρή σύνδεση μεταξύ των μεταβολικών αλλαγών που προκαλούνται από το CBC και της ρύθμισης της μικροχλωρίδας του εντέρου.

 

3.6 Ρύθμιση της διαδρομής SPHK1/S1P1/PI3K/Akt από την ΚΤΚ

Η ανάλυση Western blot έδειξε ότιΟι εκφράσεις πρωτεΐνης SPHK1 και S1P1 ήταν σημαντικά αυξημένες στην ομάδα μοντέλουσε σύγκριση με την κανονική ομάδα. CBC (υψηλή δόση) σημαντικάμειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης SPHK1 και S1P1. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στην έκφραση SPHK2 μεταξύ των ομάδων (Εικόνα 9, Πίνακας 10).

Επιπλέον,PI3K και Ακττα επίπεδα έκφρασης μειώθηκαν σημαντικά στην ομάδα του μοντέλου, ενώρ-ΡΙ3Κ και ρ-Ακττα επίπεδα αυξήθηκαν σημαντικά, υποδεικνύοντας την ενεργοποίηση της οδού. Θεραπεία CBCαποκατέστησε τα επίπεδα PI3K και Aktκαιανέστειλε τη φωσφορυλίωση τους, μειώνοντας τηνΑναλογίες p-Akt/Akt και p-PI3K/PI3K.

Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότιΤο CBC αναστέλλει την οδό σηματοδότησης SPHK1/S1P1/PI3K/Akt, συμβάλλοντας στην αντιφλεγμονώδη δράση του.

4. Συζήτηση

Η χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα (CNP) ευθύνεται για πάνω απόΤο 90% όλων των διαγνώσεων προστατίτιδαςκαι σχετίζεται με σύνθετη αιτιολογία, συμπεριλαμβανομένωνπαθογόνος μικροβιακή λοίμωξη, οξειδωτικό στρες, ανοσολογική απορρύθμιση και αυτοάνοσες αποκρίσεις [20–21].

Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότιφλεγμονή και αυτοάνοσηείναι κεντρικά στην παθογένεση του CNP [22-24]. Οπειραματικό μοντέλο αυτοάνοσης προστατίτιδας (EAP) αρουραίου, που μιμείται το ανθρώπινο CNP στην ιστοπαθολογία και στην ανοσολογική απόκριση, επιλέχθηκε [25].

Σε προηγούμενες μελέτες φαρμακοχημείας ορού μας, βρέθηκαν συστατικά CBCμεγαλύτερη αφθονία στα κόπρανα παρά στον ορό, υπονοώνταςεντερική αλληλεπίδραση ως κύρια οδός δράσης(βλ. Βελτιωμένο Υλικό Δημοσίευσης CNKI).

Το CBC βελτιώνει την παθολογία του προστάτη και τους φλεγμονώδεις δείκτες

Η χρώση HE έδειξε ότι το CBC ανακούφισεδιήθηση λεμφοκυττάρων, αποκαταστάθηκεκυλινδρική δομή, και αυξήθηκεαδενικές εκκρίσεις. ΚΤΚ σημαντικάμειωμένος αριθμός λευκοκυττάρωνσε ομογενοποιήματα προστάτη και αποκαταστάθηκεπυκνότητα σώματος λεκιθίνης-και οι δύο βασικοί διαγνωστικοί δείκτες CNP [26-28]. Η φλεγμονή οδηγεί σε επιθηλιακή βλάβη και μειωμένη έκκριση λεκιθίνης, ενώ τα ενεργοποιημένα μακροφάγα καταπίνουν σώματα λεκιθίνης [29]. Το CBC ανέστρεψε αποτελεσματικά αυτές τις παθολογικές αλλαγές.

ΚΤΚ επίσηςμειωμένες προφλεγμονώδεις κυτοκίνες(TNF- , IL-1 , IL-6, IL-8, IL-2, iNOS) καιαυξημένο αντιφλεγμονώδες IL-10, υποστηρίζοντας την ισχυρή αντιφλεγμονώδη δράση του.

 

Το CBC ρυθμίζει τη δυσβίωση της μικροβιακής εντέρου

Το CNP είναι στενά συνδεδεμένο μεανισορροπία της μικροχλωρίδας του εντέρου, που μπορεί να μειώσειλιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας (SCFAs)και θέτουν σε κίνδυνο τον εντερικό φραγμό, επιτρέπονταςΜετατόπιση LPSκαι πυροδότηση φλεγμονής του προστάτη μέσωΜοριακά μοτίβα που σχετίζονται με τα μικροβιακά (MAMPs) [30].

Οι μελέτες δείχνουν ότιΠολυφαινόλες Cistancheνα βελτιώσει την ανισορροπία των μικροβίων και να ρυθμίσει τα βασικά ταξινομικά χαρακτηριστικά που εμπλέκονται σεφλεγμονώδης νόσος του εντέρου (IBD)[31]. Σε αυτή τη μελέτη,Lactobacillus και Bifidobacterium animalisεξαντλήθηκαν σε αρουραίους EAP αλλά ανάκτησαν μετά από θεραπεία με CBC. Αυτά τα προβιοτικά είναι γνωστό ότι ανακουφίζουν τη φλεγμονή του ουρογεννητικού συστήματος [32-33]. Αντίθετα,Veillonella, συχνά εμπλουτισμένο σε αυτοάνοσες καταστάσεις [34], αυξήθηκε σε αρουραίους EAP και μειώθηκε μετά τη χορήγηση CBC. Ομοίως,Prevotellaceae, που σχετίζεται με τον καρκίνο του προστάτη [35], εμπλουτίστηκε στην ομάδα EAP και μειώθηκε από το CBC.

 

Το CBC διαμορφώνει βασικές μεταβολικές οδούς

Αποκαλύφθηκε η μεταβολομικήανύψωση σφιγγοσίνηςσε αρουραίους EAP, σημαντικά μειωμένη από CBC, υποδηλώνοντας συμμετοχή σεμεταβολισμός των σφιγγολιπιδίων. Τα σφιγγολιπίδια είναι βασικά δομικά και σηματοδοτικά μόρια που εμπλέκονται σεκυτταρική ανάπτυξη, απόπτωση και ανοσολογική ρύθμιση [36].

Σφιγγοσίνη-1-φωσφορική (S1P), συντίθεται απόSPHK1/2, είναι ένας ισχυρός μεσολαβητής λιπιδίων που συνδέεται μεΥποδοχείς S1P (S1PRs)για τη ρύθμιση της εμπορίας κυττάρων του ανοσοποιητικού και εμπλέκεται σεφλεγμονώδεις και αυτοάνοσες ασθένειες[37-39]. Ο διαμορφωτής S1PRFTY720 (φιγκολιμόδη)έχει αποδειχθεί ότι μειώνει τη φλεγμονή και τη βλάβη των ιστών σε μοντέλα EAP [40].

Το S1P ενεργοποιεί επίσης διαδρομές κατάντη όπωςΠΙ3Κ/Ακτ, που σχετίζονται με χρόνια φλεγμονή. Στη μελέτη μας, CBCμειωμένη ρύθμιση SPHK1 και S1P1, και αναστέλλεταιPI3K και φωσφορυλίωση Akt, υποδηλώνοντας μια ρυθμιστική επίδραση σε αυτόν τον κρίσιμο άξονα.

 

Σύναψη

Αυτή η μελέτη, ενσωμάτωσηΑλληλουχία μικροχλωρίδας του εντέρου και μη στοχευμένη μεταβολομική, το αποδεικνύειΚάψουλες με βάση το Cistanche (CBC)αποτελεσματικά:

Βελτιώνωβλάβη του ιστού του προστάτη

Καταστέλλωφλεγμονώδεις κυτοκίνες

Επαναφέρωευεργετική χλωρίδα του εντέρου

Ρυθμίζωμεταβολισμός των σφιγγολιπιδίων

ΑναστέλλωΣηματοδότηση SPHK1/S1P1/PI3K/Akt

Αυτά τα ευρήματα παρέχουνπειστικές αποδείξειςγια τις δυνατότητες της ΚΤΚ ως αβοτανοθεραπεία πολλαπλών στόχων για χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα, και προσφέρετε αεπιστημονική βάση για την διευρυμένη κλινική εφαρμογή του.