Μιτοχόνδρια αστροκυττάρων σε τραυματισμό λευκής ύλης Μέρος 2

Οι ποικίλες φυσιολογικές λειτουργίες των αστροκυττάρων και οι τεράστιες συνδέσεις τους μεταξύ των αστροκυττάρων και άλλων τύπων κυττάρων, όταν τα αστροκύτταρα αντιδρούν μετά από προσβολή και πώς αλλάζουν οι αλληλεπιδράσεις τους με άλλα εγκεφαλικά κύτταρα, δηλώνουν τη σημασία αυτών των κυττάρων για την υγεία και τις ασθένειες.

Τα αστροκύτταρα είναι μη νευρωνικά κύτταρα στον εγκέφαλο των οποίων οι κύριες λειτουργίες περιλαμβάνουν την παροχή υποστήριξης, τη διατήρηση της υγείας και της λειτουργίας των νευρώνων, τη συμμετοχή στην ανταλλαγή ουσιών και τη ρύθμιση των νευρικών σημάτων. Σε πρόσφατες μελέτες, οι επιστήμονες ανακάλυψαν ότι τα αστροκύτταρα σχετίζονται επίσης στενά με τη μνήμη.

Η έρευνα δείχνει ότι τα αστροκύτταρα μπορούν να εκκρίνουν μια ουσία που ονομάζεται νευροτροφικός παράγοντας, ο οποίος μπορεί να προάγει την ανάπτυξη και τη σύνδεση των νευρώνων, βελτιώνοντας έτσι τη μνήμη και τις μαθησιακές ικανότητες. Επιπλέον, τα αστροκύτταρα μπορούν επίσης να αφαιρέσουν τα απόβλητα από τον εγκέφαλο, συμπεριλαμβανομένων των υπερβολικών νευροδιαβιβαστών, διασφαλίζοντας έτσι την κανονική λειτουργία των νευρώνων και ενισχύοντας τη μνήμη.

Επιπλέον, τα αστροκύτταρα συμμετέχουν επίσης στη ρύθμιση της ανοσολογικής απόκρισης και της νευροφλεγμονής του εγκεφάλου, προστατεύοντας τους νευρώνες από βλάβες, διατηρώντας την υγεία και τη ζωτικότητα του εγκεφάλου και βελτιώνοντας περαιτέρω τη μνήμη και τις μαθησιακές ικανότητες.

Συνοψίζοντας, τα αστροκύτταρα σχετίζονται στενά με τη μνήμη. Προστατεύουν την υγεία του εγκεφάλου και ενισχύουν τη μνήμη των ανθρώπων προάγοντας την ανάπτυξη και τη σύνδεση των νευρώνων, απομακρύνοντας τα απόβλητα και ρυθμίζοντας την ανοσολογική απόκριση και τη φλεγμονή. Ως εκ τούτου, θα πρέπει να δώσουμε μεγαλύτερη προσοχή στο ρόλο των αστροκυττάρων, να διατηρήσουμε έναν υγιεινό τρόπο ζωής, να διατηρήσουμε μια θετική στάση και να εκτελούμε εγκεφαλικές ασκήσεις έγκαιρα για να προωθήσουμε την κανονική λειτουργία των αστροκυττάρων, να βελτιώσουμε τη μνήμη και να μας επιτρέψουμε να έχουμε έναν καλύτερο υγιή, δραστήριο, και ευτυχισμένη ζωή. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη και το Cistanche deserticola μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη, επειδή το Cistanche deserticola έχει αντιοξειδωτικά, αντιφλεγμονώδη και αντιγηραντικά αποτελέσματα, τα οποία μπορούν να βοηθήσουν στη μείωση της οξείδωσης και των φλεγμονωδών αντιδράσεων στον εγκέφαλο, προστατεύοντας έτσι τον υγεία του νευρικού συστήματος. Επιπλέον, το Cistanche deserticola μπορεί επίσης να προωθήσει την ανάπτυξη και την επισκευή των νευρικών κυττάρων, ενισχύοντας έτσι τη συνδεσιμότητα και τη λειτουργία των νευρωνικών δικτύων. Αυτά τα αποτελέσματα μπορούν να βοηθήσουν στη βελτίωση της μνήμης, της ικανότητας μάθησης και της ταχύτητας σκέψης και μπορεί επίσης να αποτρέψουν την ανάπτυξη γνωστικής δυσλειτουργίας και νευροεκφυλιστικών ασθενειών.

Κάντε κλικ στο Γνωρίζω για να βελτιώσετε τη βραχυπρόθεσμη μνήμη

Πράγματι, η γονιδιακή τους έκφραση και οι μεταγραφικές αλλαγές δείχνουν αλλαγές στη χωρική θέση, τον τύπο του τραυματισμού, την ασθένεια, το φύλο και την ηλικία [73], γνωστές συλλογικά ως «αντιδραστικότητα αστροκυττάρων» (Εικ. 2). Η αντιδραστικότητα των αστροκυττάρων είναι το άθροισμα του φάσματος των αλλαγών στη μοριακή έκφραση, τη λειτουργία, την υπερτροφία και τον πολλαπλασιασμό σε απόκριση σε τραυματισμό του ΚΝΣ. Τα αντιδραστικά αστροκύτταρα είναι μορφολογικά διαφορετικά από τα ηρεμιστικά γαστροκύτταρα και χαρακτηρίζονται από μεγαλύτερους μακρύτερους και διακλαδισμένους κλάδους [74-77].

Οι αλλαγές στη λειτουργία των ιναστροκυττάρων μπορεί να είναι απώλεια λειτουργίας ή κέρδος λειτουργίας, κάτι που μπορεί να είναι ευεργετικό για τον εγκεφαλικό ιστό, αν και αυτές οι αλλαγές δεν είναι μια απάντηση «όλα ή καμία» [78, 79]. ROS) και η παραγωγή χημειοκίνης [80-83], μαζί με εξασθενημένο Ca2+ [84], γλουταμινικό [85-87] και συναπτική ομοιόσταση [88-90], οδηγούν σε μια ποικιλία κλινικών συνεπειών, που κυμαίνονται από νευροεκφυλιστικές ασθένειες , επιληψία, εγκεφαλικό επεισόδιο και γνωστική έκπτωση [91].

Τα ωφέλιμα αστροκύτταρα απελευθερώνουν πληθώρα παραγόντων για να προσαρμόσουν αναπτυξιακά τις συνάψεις, επιδιορθώνοντας και επανασυνδέοντάς τις μετά από τραυματισμό, βοηθώντας τη μικρογλοία να καθαρίσει τα κυτταρικά υπολείμματα, ρυθμίζοντας τα αποθέματα γλυκογόνου για τη διατήρηση του σχηματισμού μνήμης και βοηθώντας την επιβίωση των νευρώνων κατά τη διάρκεια της γλυκόζης [92-95].

Ένας πιο αμφιλεγόμενος ρόλος των αστροκυττάρων προκύπτει από τον ρόλο τους στο σχηματισμό εσοχής, όπου περιορίζουν τα όρια του τραυματισμού και θωρακίζουν την περιοχή του ημιόνυλου [96-98] ως προστατευτικά κύτταρα, ενώ μπορεί να γίνουν επιβλαβή σχηματίζοντας ένα φράγμα και αποτρέποντας την αναγέννηση των νευραξόνων στην περιοχή του τραυματισμού. καλά [99-102].

Επειδή η απόκριση των αστροκυττάρων στον τραυματισμό ρυθμίζει στενά τη λειτουργία του εγκεφάλου, διαμορφώνει την έκταση του τραυματισμού και προωθεί ή εμποδίζει την αποκατάσταση, η ενέργεια για τη διατήρηση των αστροκυττάρων είναι ζωτικής σημασίας για την απόδοσή τους. Τα αστροκύτταρα βασίζονται σε μεγάλο βαθμό στη γλυκόλυση για την παραγωγή ενέργειας. Ωστόσο, καταναλώνουν περίπου το 20% του οξυγόνου του εγκεφάλου κατά τη διάρκεια της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης για την παραγωγή τριφωσφορικής αδενοσίνης (ATP) [103] στα αστροκυτταρικά μιτοχόνδρια.

Αν και οι νευρώνες των μιτοχονδρίων έχουν μελετηθεί εκτενώς, οι συγκεκριμένοι ρόλοι της ιναστρογλοιακής λειτουργίας των μιτοχονδρίων των αστροκυττάρων και της ανταπόκρισης σε τραυματισμό μόλις αρχίζουν να διερευνώνται. Μέρος αυτής της καθυστέρησης στην εκτίμηση του ρόλου των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων αποδίδεται σε μια εσφαλμένη αντίληψη ότι οι διεργασίες των αστροκυττάρων είναι πολύ μικρές για να φιλοξενήσουν μιτοχόνδρια.

Τα αστροκύτταρα διαθέτουν σχεδόν τόσα μιτοχόνδρια με τους νευρώνες [104] και πρόσφατες μελέτες έχουν παράσχει συσσωρευμένες in vivo και invitro ενδείξεις ότι τα μιτοχόνδρια βρίσκονται ακόμη και σε απομακρυσμένες διεργασίες αστροκυττάρων, προκαλώντας περαιτέρω ενδιαφέρον για τη μιτοχονδριακή λειτουργία των αστροκυττάρων [105-111]. Ένας άλλος λόγος για αυτό το αυξημένο ενδιαφέρον βασίζεται σε προκαταρκτικές μελέτες που έχουν δείξει ότι τα μιτοχονδριακά αστροκύτταρα διαδραματίζουν μοναδικούς ρόλους ως απάντηση στην ισχαιμία.

Τα αστροκύτταρα έχουν αποδειχθεί με συνέπεια ότι είναι ανθεκτικά στην ισχαιμία και η κατανομή και οι συγκεκριμένες εργασίες των μιτοχονδριακών αστροκυττάρων αποτελούν τη βάση αυτής της προσαρμοστικότητας σε ένα περιβάλλον χωρίς οξυγόνο ή γλυκόζη. Αυτή η ανασκόπηση θα εισαγάγει πρώτα τη διαφορετική δομή και λειτουργία των αστροκυττάρων για να περιγράψει τη βιοενεργειακή ευελιξία που απαιτείται από τα αστροκύτταρα που βρίσκονται σε διαφορετικές τοποθεσίες.

Δεύτερον, θα περιγράψουμε τον μεσοκυτταρικό τομέα των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων για να καθορίσουμε τους ρόλους τους στην υποστήριξη και ρύθμιση των αλληλεπιδράσεων αστροκυττάρων-νευρώνων και αστροκυττάρων-εγκεφαλικών αγγείων και στην επιβίωση έναντι της ισχαιμίας.

Τέλος, θα ανασκοπήσουμε τη βιβλιογραφία που τεκμηριώνει την ετερογένεια των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων και τον τρόπο με τον οποίο οι υποπληθυσμοί των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων προσαρμόζονται για να αλληλεπιδρούν με άλλα γλοία και να ρυθμίζουν τη λειτουργία του άξονα στη λευκή ουσία. Συνολικά, αυτή η ανασκόπηση θα αξιολογήσει την αξία των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων ως θεραπευτικού στόχου για τον μετριασμό της οξείας και χρόνιας βλάβης στο ΚΝΣ.

Μιτοχονδριακή Δυναμική Αστροκυττάρων

Η έκταση των διαφορετικών δομικών και λειτουργικών πτυχών των αστροκυττάρων αναμένεται να επηρεάσει τη θέση, το μέγεθος και τον αριθμό των μιτοχονδρίων στα αστροκύτταρα. Επομένως, τα μιτοχόνδρια είναι στρατηγικά διασκορπισμένα μέσα στα αστροκύτταρα για να ανιχνεύσουν την κατανάλωση ενέργειας και τη σηματοδότηση Ca2+.

Για παράδειγμα, η αυξημένη συναπτική δραστηριότητα καθοδηγεί τα μιτοχόνδρια στις τερματικές λεπτότερες διακλαδώσεις [112] και τα ακινητοποιεί για να διαμορφώσουν κύματα Ca2+ και να ρυθμίσουν τις διακυμάνσεις Ca2+ [105,113] για να ρυθμίσουν τη γλοιοδιαβίβαση [72, 110] . Τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι τα αστροκυτταρικά μιτοχόνδρια ακινητοποιούνται κοντά σε μεταφορείς και συνάψεις γλουταμικού ως απόκριση στην πρόσληψη γλουταμινικού [108] και κυρίως λόγω του αυξημένου ενδοκυτταρικού Ca2+ μέσω της αναστροφής του εναλλάκτη Na+/Ca{11}} [114-116].

Η πρόσδεση των μιτοχονδρίων κοντά σε μεταφορείς γλουταμικού προτείνεται για τη διευκόλυνση του μεταβολισμού του γλουταμικού και της παραγωγής ATP για την κάλυψη της αυξημένης ενέργειας ενώ ρυθμίζονται οι ιοντικές αλλαγές που προκαλούνται από την πρόσληψη γλουταμικού [117].

Αναμενόμενα, μια αναντιστοιχία της μιτοχονδριακής κατανομής εντός των αστροκυττάρων διακόπτει το συγχρονισμό και το μεταβολισμό νευρώνων-αστροκυττάρων, απειλώντας τη νευρωνική ζωτικότητα [118]. Είναι πλέον καλά αποδεδειγμένο ότι ο αριθμός των αστροκυττάρων παραμένει σταθερός μετά την ισχαιμία. Ως εκ τούτου, η αναντιστοιχία στην κατανομή και τη δυναμική των μιτοχονδρίων αστροκυττάρων στη σύνδεση αστροκυττάρων-νευρώνων φαίνεται να προκαλεί τον μη αναστρέψιμο τραυματισμό.

Η επικρατούσα ιδέα ήταν ότι η κατάρρευση του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης οδηγεί σε θάνατο αστροκυττάρων [119]. Ωστόσο, τα αστροκύτταρα επιδεικνύουν ανθεκτικότητα στην ισχαιμία παρά τη βαθιά αποπόλωση της μιτοχονδριακής μεμβράνης.

Για παράδειγμα, τα αστροκύτταρα διατήρησαν το δυναμικό της μιτοχονδριακής μεμβράνης τους για 2 ώρες μετά την εφαρμογή του φθοριοκιτρικού (FC), ενός μερικώς ανταγωνιστικού μιτοχονδριακού αναστολέα [120, 121]. Ακόμη και μετά από παρατεταμένες εφαρμογές FC, οι οποίες τελικά εξάντλησαν το μιτοχονδριακό δυναμικό, υπήρξε ελάχιστος τραυματισμός αστροκυττάρων ή θάνατος [120]. Ομοίως, πειράματα in vitro με χρήση στέρησης οξυγόνου-γλυκόζης (OGD) αποπόλωσης του δυναμικού της αστρομιτοχονδριακής μεμβράνης χωρίς επακόλουθο κυτταρικό θάνατο [122].

Τα μοντέλα in vivo που χρησιμοποιούν απόφραξη της μέσης εγκεφαλικής αρτηρίας (MCAO) επιβεβαίωσαν περαιτέρω ότι ο ενεργειακός μεταβολισμός των αστροκυττάρων είναι μειωμένος μετά από ισχαιμία, αλλά δεν οδήγησε σε θάνατο αστροκυττάρων ή συσχετίζεται με την περιοχή του εμφράγματος [123] (Μη δημοσιευμένα δεδομένα Baltan Εικ. 2).

Από την άλλη πλευρά, οι νευρώνες εμφανίζουν τεράστιο κυτταρικό θάνατο όταν εκτίθενται σε OGD (60 λεπτά) [124, 125] και όταν οι νευρώνες συγκαλλιεργούνται με αστροκύτταρα που έχουν υποστεί αγωγή με FC, ένας ενισχυμένος αμφίδρομος τραυματισμός προκαλείται λόγω της δυσλειτουργίας των μιτοχονδρίων των αστροκυττάρων, της επακόλουθης αντιστροφής του γλουταμικού μεταφορείς και η προκύπτουσα διεγερτική τοξικότητα [126, 127].

Παρόμοιος ευρέως διαδεδομένος νευρωνικός θάνατος παρατηρείται όταν η αλυσίδα μεταφοράς ηλεκτρονίων αστροκυττάρων στοχεύεται ειδικά [128]. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με τις συμβατικές παρατηρήσεις ότι όταν τα αστροκύτταρα (χωρίς θεραπεία, συνθήκες ελέγχου) συγκαλλιεργούνται με νευρώνες, οι νευρώνες γίνονται ανθεκτικοί επειδή τα μιτοχόνδρια των αστροκυττάρων μετατοπίζονται από αερόβιο μεταβολισμό στη γλυκόλυση για να ξεκινήσουν τη μεταφορά γαλακτικού αστροκυττάρου-νευρώνα και το γαλακτικό στους νευρώνες για να εξασθενίσει την απώλεια νευρώνων [3,49, 122, 129].

Αυτό το σύστημα υποστήριξης περιορίζεται από το περιεχόμενο αποθήκευσης γλυκογόνου αστροκυττάρων και μπορεί να εξαντληθεί εάν η γλυκόζη δεν παρέχεται έγκαιρα [9, 10, 93, 129]. Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι πρώτον, η μεταβολική σύζευξη της τριμερούς σύναψης εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την απόδοση των μιτοχονδρίων των αστροκυττάρων. Δεύτερον, προτείνουν ότι η ανθεκτικότητα των αστροκυττάρων στην ισχαιμία υποστηρίζεται εν μέρει από την παροχή ενέργειας που προέρχεται από τα μιτοχόνδρια.

Σημειώστε ότι ορισμένα in vitro ευρήματα είναι δύσκολο να επεκταθούν σε συνθήκες in vivo επειδή τα αστροκύτταρα και η καλλιέργεια των μιτοχονδρίων τους μπορεί να παρουσιάζουν ανόμοιες λειτουργίες λόγω της έλλειψης ενός πολυστρωματικού δικτύου χωρίς τριμερείς συνάψεις και/ή γονιδιακές αλλοιώσεις και έκφραση υποδοχέα.

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι τα μιτοχόνδρια δεν περιορίζονται σε σώματα αστροκυττάρων, αλλά υπάρχουν επίσης στους καλύτερους κλάδους και στα άκρα πόδια, που παραδοσιακά θεωρούνταν ότι ήταν πολύ μικρού διαμετρήματος για να φιλοξενήσουν αυτά τα οργανίδια (Εικ. 3). Τα μιτοχόνδρια μπορούν να σχηματίσουν ένα σύνθετο διασυνδεδεμένο δίκτυο συγκεντρωτικών συγκροτημάτων για να διαλυθούν σε μια ενιαία μεμονωμένη δομή [105, 109, 130, 131].

Χρησιμοποιώντας μια ποικιλία μιτοφθορισμού ποντικιών (CFP, GFP) με έναν επαγόμενο ανταποκριτή, ένας ετερογενής πληθυσμός διασυνδεδεμένων μιτοχονδριακών δικτυωμάτων έχει αποδειχθεί ότι καταλαμβάνει ένα σημαντικό μέρος των εξειδικευμένων δομών άκρων ποδιών (Εικ. 1, 3). Ενώ ένα πυκνό πλέγμα επιμήκων μιτοχονδρίων είναι τυπικό για κυτταρικά σώματα, τα λεπτότερα και βραχύτερα μιτοχόνδρια που κυμαίνονται από 0.2 έως 0.6 μm σε μήκος πλήθουν τους απομακρυσμένους κλάδους και τα άκρα πόδια [106-108, 110, 132 ].

Επειδή τα μιτοχόνδρια είναι εξαιρετικά δυναμικά οργανίδια με την ικανότητα να αλλάζουν γρήγορα τη δυναμική τους ως απάντηση στις μεταβολικές απαιτήσεις, μπαίνουν και βγαίνουν από το πλέγμα τους και αλλάζουν θέση μεταξύ του σώματος του κυττάρου και των κλάδων μέσα στα αστροκύτταρα. Πράγματι, οι σχετικοί ρυθμοί σχάσης και σύντηξης υπαγορεύουν το σχήμα, το μέγεθος και την κατανομή των μιτοχονδρίων.

Μιτοχονδριακές πρωτεΐνες διαμόρφωσης, όπως Mitofusion-1, (MFN-1), mitofusion-2 (MFN-2) και οπτική ατροφία-1 (OPA{{5 }}) συγχωνεύουν την εξωτερική και την εσωτερική μεμβράνη των μιτοχονδρίων κατά τη σύντηξη, ενώ η αντιδραστική πρωτεΐνη δυναμίνης-1(Drp-1) και η πρωτεΐνη σχάσης-1 (Fis1) μεσολαβούν στη σχάση. Η σύντηξη και η σχάση επιτρέπουν την ανταλλαγή μιτοχονδριακών συστατικών όπως το μιτοχονδριακό DNA (mtDNA), τα λιπίδια και τις πρωτεΐνες.

Η σχάση επιτρέπει αρχιτεκτονικά την είσοδο σε περιορισμένες τοποθεσίες υψηλής δραστηριότητας, όπως απομακρυσμένους λεπτούς κλάδους αστροκυττάρων. Τα μικρότερα μιτοχόνδρια με υψηλότερη αναλογία επιφάνειας προς όγκο είναι πιο αποτελεσματικά και παράγουν περισσότερο ATP ως απόκριση στην αυξημένη δραστηριότητα [133]. Σύμφωνα με αυτή την ιδέα, η νευρωνική δραστηριότητα ρυθμίζει τη μιτοχονδριακή σχάση για να ενισχύσει το σχηματισμό μικρότερων μιτοχονδρίων, τα οποία μπορούν να κατευθυνθούν σε νευρωνικές ράχες και φιλοπόδια.

Στη συνέχεια, η εξάντληση της Drp-1 μειώνει τα μικρά ασυναπτικά τερματικά της μιτοχονδριακής κατανομής, υπογραμμίζοντας τη σημασία της ισορροπίας μεταξύ σχάσης και σύντηξης για τα μιτοχόνδρια για την ανάληψη της κατάλληλης δομής για τη θέση και τη λειτουργία.

Φυσικά, όταν αυτή η ακριβής ισορροπία διαταράσσεται, η έλλειψη μιτοχονδριακής παρουσίας σε σημεία ανάγκης μπορεί να υποστηρίξει παθολογικά αποτελέσματα.

Επιπλέον, η αυξημένη δραστηριότητα Drp-1 που οδηγεί σε εκτεταμένη διάσπαση οδηγεί σε εκπόλωση της μιτοχονδριακής μεμβράνης, απελευθέρωση κυτοχρώματος c και αυξημένη παραγωγή ελεύθερων ριζών που προκαλεί μιτοχονδριακή δυσλειτουργία.

Η διακίνηση μιτοχονδρίων είναι μια άλλη πτυχή της μιτοχονδριακής δυναμικής που υποστηρίζεται κυρίως από τα Miro1/2 και TRAK που προσαρτούν αναστρέψιμα τα μιτοχόνδρια στην κινεσίνη και τη δινεΐνη για να διευκολύνουν την πρόσθια και την ανάδρομη κινητικότητα, αντίστοιχα.

Παρόμοια με ό,τι έχει αναφερθεί στους νευρώνες, περίπου το 15-30% των μιτοχονδρίων των αστροκυττάρων είναι κινητά, ενώ τα υπόλοιπα είναι στάσιμα. Ο αποκλεισμός της νευρωνικής δραστηριότητας με τετροδοτοξίνη αυξάνει τη μιτοχονδριακή δραστηριότητα, ενώ η ηλεκτρική ή η γλουταμινική εφαρμογή αναστέλλει τις διεργασίες των μιτοχονδριακών κινήσεων στα αστροκύτταρα εμπλουτισμένες σε μεταφορείς γλουταμικού και κλάδους που αποτελούν μέρος της τριμερούς σύναψης.

Ως εκ τούτου, τα αστροκύτταρα αντιλαμβάνονται και ανταποκρίνονται στη νευρωνική δραστηριότητα τροποποιώντας τη μιτοχονδριακή δυναμική τους. Επομένως, δεν προκαλεί έκπληξη το γεγονός ότι η μιτοχονδριακή δυναμική των αστροκυττάρων υφίσταται σημαντικές τροποποιήσεις και παίζει κρίσιμο ρόλο σε διάφορες παθολογικές διεργασίες (βλ. παρακάτω).

For more information:1950477648nn@gmail.com