Μια 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας της 2-(l-μενθοξυ)αιθανόλης σε νεφρό αρουραίων F344

Για περισσότερες πληροφορίες:emily.li@wecistanche.com

Takeshi Toyoda, Kohei Matsushita, Hirotoshi Akane, Tomomi Morikawa και Kumiko Ogawa

1 Division of Pathology, National Institute of Health Sciences, 3-25-26 Tonomachi, Kawasaki-Ku, Kawasaki 210-9501, Ιαπωνία

Αφηρημένη:

Η {{0}}(-Μενθοξυ)αιθανόλη έχει χρησιμοποιηθεί συχνά ως αρωματικός παράγοντας. Ωστόσο, τα δεδομένα σχετικά με την τοξικότητα της 2-(Ι-μενθοξυ)αιθανόλης παραμένουν περιορισμένα. Πραγματοποιήσαμε μια 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας της 2-(Ι-μενθοξυ)αιθανόλης σε αρσενικούς και θηλυκούς αρουραίους F344, με δόσεις 0,15 d. ή 250 mg/ke σωματικού βάρους (BWday χορηγούμενη από το στόμα μέσος όρος hw χρησιμοποιώντας αραβοσιτέλαιο ως όχημα Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές τοξικολογικές αλλαγές στη γενική κατάσταση, το σωματικό βάρος ή την πρόσληψη τροφής σε καμία ομάδα. Η αιματολογική αξιολόγηση έδειξε μειωμένη αιμοσφαιρίνη, αιματοκρίτη, μέσο σωματιδιακό όγκο και μέση σωματιδιακή αιμοσφαιρίνη και αυξημένο αριθμό αιμοπεταλίων σε η αρσενική ομάδα 250 mg/kg. Η βιοχημεία ορού αποκάλυψε αυξημένη ολική χοληστερόλη στην ομάδα 250 mg/kg αρσενικών και θηλυκών αρουραίων, μειωμένα τριγλυκερίδια στην ομάδα των θηλυκών 250 mg/kg και αυξημένη ολική πρωτεΐνη στην ομάδα αρσενικών 250 mg/kg, υποδεικνύοντας επιδράσεις στον μεταβολισμό των λιπιδίων και στη σύνθεση πρωτεϊνών Για τα βάρη οργάνων, το απόλυτο και το σχετικό βάρος του ήπατος και των επινεφριδίων αυξήθηκαν στην ομάδα των 250 mg/kg και των δύο φύλων και στην ομάδα των ανδρών 250 mg/kg, αντίστοιχα. Ιστοπαθολογική ανάλυση έδειξε χρόνια νεφροπάθεια στους άνδρες 15 mg/kg ή υψηλότερες ομάδες, με αυξημένη απόλυτη και σχετικήνεφρόβάρη, καθώς και αυξημένη κρεατινίνη ορού, στις ομάδες των ανδρών 60 και 250 mg/kg. Ωστόσο, ηωσινόφιλοι κόκκοι που περιέχουν μια,-σφαιρίνη εντοπίστηκαν σε εγγύς σωληνάρια, υποδηλώνοντας μια2-νεφροπάθεια σφαιρίνης ειδική για αρσενικούς αρουραίους και χωρίς τοξικολογική σημασία. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το επίπεδο μη παρατηρούμενης ανεπιθύμητης ενέργειας της 2-(-μενθοξυ)αιθανόλης ήταν 60 mg/kg ΣΒ/ημέρα και για τα δύο φύλα, (DOI; 10.1293tox2020-0091:J Toxicol Patho 1 2021;34:309-317)

Λέξεις-κλειδιά:2-(-μενθοξυ)αιθανόλη, 2-1-μενθοξυαιθανόλη,φαγητόπρόσθετος, αρωματικός παράγοντας, αρουραίος Fischer, μενθδ

Το Cistanche είναι καλό για τα νεφρά

Εισαγωγή

Η {{0}}(-Μενθοξυ)αιθανόλη(CAS No.38618-23-4)είναι ένα διαυγές και άχρωμο υγρό με χαρακτηριστική οσμή και χρησιμοποιείται ευρέως ως αρωματικός παράγοντας. Η Μικτή Επιτροπή Εμπειρογνωμόνων FAO/WHO για τα πρόσθετα τροφίμων (JECFA) αξιολόγησε τη 2-(1-μεθοξυ)αιθανόλη ως αρωματικό παράγοντα που κατηγοριοποιείται ως ουσία δομικά σχετιζόμενη με τη μενθόλη. Με βάση τη δομική κατηγορία των αρωματικών παραγόντων, η 2-(-μεθοξυ)αιθανόλη εκχωρήθηκε στην κατηγορία Ι. Στις Ηνωμένες Πολιτείες και την Ευρώπη, τα επίπεδα πρόσληψης της2-(Ι-μεθοξυ)αιθανόλης από τον άνθρωπο ήταν εκτιμάται ότι είναι 12 ug/άτομο/ημέρα και 0,01 ug/άτομο/ημέρα, αντίστοιχα, και τα δύο κάτω από το όριο της Τάξης Ι των 1.800 ug/άτομο/ημέρα. Με βάση αυτές τις εκτιμήσεις, θεωρείται ότι η 2-(1-μεθοξυ)αιθανόλη ενδέχεται να μην παρουσιάζει ανησυχίες για την ασφάλεια κατά τη συνήθη χρήση ως αρωματικός παράγοντας.

As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD.:>2,000 mg/kg σωματικού βάρους [BW)1. Παρά τη χρήση της 2-(1-μενθοξυ)αιθανόλης ως αρωματικού παράγοντα. είναι διαθέσιμα περιορισμένα δεδομένα σχετικά με την τοξικότητα επαναλαμβανόμενων δόσεων αυτής της ένωσης. Το εργαστήριό μας έχει διερευνήσει την τοξικότητα πολλών προσθέτων τροφίμων, συμπεριλαμβανομένων αντιπροσωπευτικών αρωματικών παραγόντων από κάθε κατηγορία, σε μοντέλα τρωκτικών2-7. Για να διευκρινίσουμε το τοξικολογικό προφίλ και να καθορίσουμε ένα επίπεδο μη παρατηρούμενης δυσμενούς επίδρασης (NOAEL), πραγματοποιήσαμε μια 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας της 2-(1-αιθοξυ)αιθανόλης, η οποία ήταν χορηγείται από του στόματος σε αρουραίους F344 με καθετήρα.

Υλικά και μέθοδοι

Δοκιμαστική χημική ουσία

2-(Ι-Μενθοξυ)αιθανόλη (Αρ. παρτίδας 510002, καθαρότητα 99,9 τοις εκατό ) που παράγεται από την Takasago Int. Corp. (Τόκιο, Ιαπωνία) παρασχέθηκε από το Τμήμα Προτύπων και Αξιολόγησης, Τμήμα Ασφάλειας Τροφίμων, Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας, Ja-pan, με την υποστήριξη της Ιαπωνικής Ένωσης Γεύσεων & Αρωματικών Υλικών (Τόκιο, Ιαπωνία). Παρόλο που η υπό δοκιμή ουσία παρασχέθηκε ως μείγμα οπτικών ισομερών (Αρ. CAS 38618-23-4), επιβεβαιώθηκε ως το 1-εναντιομερές(Αρ. CAS 75443-64-0) ​​από τον κατασκευαστή. Από του στόματος καθετήρας με αραβοσιτέλαιο (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Ιαπωνία) ως φορέας επιλέχθηκε ως οδός χορήγησης λόγω της αδιαλυτότητας στο νερό και της πτητικότητας της 2-({1-μενθοξυ)αιθανόλης. Διαλύματα 2-(1-μενθοξυ)αιθανόλης παρασκευάζονταν καθημερινά, αμέσως πριν από τη χορήγηση. Μετά από αποθήκευση για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, οι υπολειμματικές αναλογίες 2-(-μενθοξυ)αιθανόλης σε Διάλυμα 4, 40 και 400 mg/mL επιβεβαιώθηκαν ως 96,8 τοις εκατό , 99,8 τοις εκατό και 96,5 τοις εκατό, αντίστοιχα, με αέρια χρωματογραφία (Japan Inspection Association of Food and Food Industry Environment, Τόκιο, Ιαπωνία).

πειραματόζωα

Συνολικά, 40 αρσενικοί και 40 θηλυκοί αρουραίοι χωρίς παθογόνα (F344/DuCrlCrlj, 5-εβδομάδων) αγοράστηκαν από την Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Ιαπωνία) και χρησιμοποιήθηκαν μετά τον εγκλιματισμό για μία εβδομάδα. Κατά τη διάρκεια της μελέτης, τα ζώα στεγάστηκαν σε κλουβιά από πολυανθρακικό με μαλακό στρώμα, διατηρήθηκαν σε δωμάτιο με σύστημα φραγμού για τον έλεγχο του κύκλου φωτός/σκότους (12 ώρες), αερισμού (ρυθμός ανταλλαγής αέρα 18 φορές/ώρα), θερμοκρασία (24 ±1 βαθμός), και σχετική υγρασία (55±5 τοις εκατό). Τα κλουβιά και τα κλινοσκεπάσματα αντικαταστάθηκαν δύο φορές την εβδομάδα. Κάθε ζώο είχε δωρεάν πρόσβαση στο νερό της βρύσης και μια βασική δίαιτα (CRF-1· Oriental Yeast, Τόκιο, Ιαπωνία). Στην αρχή του πειράματος, τα ζώα κατανεμήθηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες των 10 αρσενικών και θηλυκών αρουραίων η καθεμία, με βάση το σωματικό βάρος που μετρήθηκε αμέσως πριν από την έναρξη της θεραπείας με τη δοκιμαστική ουσία.

Σχεδιασμός μελέτης

Σε μια προκαταρκτική {0}}ημερήσια μελέτη αξιολόγησης2-(1-μενθοξυ)αιθανόλης που χορηγήθηκε σε δόσεις 0.200.400 και 800 mg/kg ΣΒ/ημέρα, Το απόλυτο και το σχετικό βάρος του ήπατος αυξήθηκαν σημαντικά σε όλες τις ομάδες και των δύο φύλων που έλαβαν θεραπεία (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, επιλέξαμε 2-δόσεις (-μενθοξυ)αιθανόλης 0,15,60 και 250 mg/kg ΣΒ/ημέρα για χορήγηση τόσο σε αρσενικούς όσο και σε θηλυκούς αρουραίους στην παρούσα 13- μελέτη τοξικότητας εβδομάδας.

Οι γενικές συνθήκες και η θνησιμότητα αξιολογούνταν καθημερινά. Τα σωματικά βάρη, καθώς και οι ποσότητες της παρεχόμενης και της υπολειπόμενης δίαιτας, μετρήθηκαν μία φορά την εβδομάδα κατά τη διάρκεια της πειραματικής περιόδου. Όλοι οι αρουραίοι έμειναν νηστικοί όλη τη νύχτα μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας και συλλέχθηκαν δείγματα αίματος για αιματολογία και βιοχημεία ορού από την κοιλιακή αορτή υπό βαθιά αναισθησία με εισπνοή χρησιμοποιώντας ισοφλουράνιο. Ο σχεδιασμός της μελέτης ήταν σύμφωνος με τις Κατευθυντήριες γραμμές για τον χαρακτηρισμό για πρόσθετα τροφίμων και την αναθεώρηση των προτύπων για τη χρήση των πρόσθετων τροφίμων της Ιαπωνίας (1996) και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης των Ζώων του Εθνικού Ινστιτούτου Επιστημών Υγείας της Ιαπωνίας.

Αιματολογία και βιοχημεία ορού

Οι ακόλουθες αιματολογικές παράμετροι αναλύθηκαν με τη χρήση αυτόματων αιματολογικών αναλυτών ProCyte Dx (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, ΗΠΑ): αριθμός λευκών αιμοσφαιρίων (WBC), αριθμός ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC), συγκέντρωση αιμοσφαιρίνης (HGB), αιματοκρίτης (HCT). ), μέσος σωματιδιακός όγκος (MCV), μέση σωματιδιακή αιμοσφαιρίνη (MCH),

μέση συγκέντρωση σωματιδιακής αιμοσφαιρίνης (MCHC), αριθμός αιμοπεταλίων (PLT) και διαφορικά λευκοκύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ουδετερόφιλων (Neut), λεμφοκυττάρων (Λέμφος), μονοκυττάρων (Μονο), ηωσινόφιλων (Ηωσινό) και βασεόφιλων (Baso). Πραγματοποιήθηκε βιοχημική ανάλυση ορού από την Oriental Yeast για τις ακόλουθες παραμέτρους: ολική πρωτεΐνη (TP), λευκωματίνη (Alb), αναλογία λευκωματίνης/σφαιρίνης (A/G), ολική χολερυθρίνη (Bil). γλυκόζη, ολική χοληστερόλη (T-Chol), τριγλυκερίδια (TG), άζωτο ουρίας (BUN), κρεατινίνη (Cre), ασβέστιο (Ca), ανόργανος φώσφορος-rus (IP), νάτριο (Na), κάλιο (K), χλώριο (Cl), as-partate αμινοτρανσφεράση (AST), αμινοτρανσφεράση αλανίνης (ALT), αλκαλική φωσφατάση (ALP) και γ-γλουταμυλ trans-πεπτιδάση (y-GTP).

Βάρη οργάνων και ιστοπαθολογική εκτίμηση

Πραγματοποιήθηκε πλήρης νεκροψία για όλα τα ζώα. και ο εγκέφαλος, ο θύμος, οι πνεύμονες, η καρδιά, ο σπλήνας,συκώτι, επινεφρίδιοςαδένες,νεφρά, οι όρχεις και οι ωοθήκες ζυγίστηκαν. Αυτά τα όργανα, καθώς και ιστοί από το νωτιαίο μυελό, το τρίδυμο νεύρο, την υπόφυση, τη ρινική κοιλότητα, τους σιελογόνους αδένες, τη γλώσσα, τον οισοφάγο, την τραχεία, την αορτή, τον θυρεοειδή αδένα, τον παραθυρεοειδή αδένα, το πάγκρεας, το στομάχι, το λεπτό και παχύ έντερο, το υπογνάθιο και το μεσεντέριο Οι λεμφαδένες, ο κόλπος, η μήτρα, η ουροδόχος κύστη, ο προστάτης, οι σπερματοδόχοι, η επιδιδυμίδα, το μηριαίο οστό και το στέρνο με μυελό των οστών, σπόνδυλους, σκελετικούς μύες, ισχιακό νεύρο, δέρμα και μαστικό αδένα, στερεώθηκαν σε 10 τοις εκατό φορμαλίνη με ουδέτερη ρύθμιση. Στη συνέχεια, παρασκευάστηκαν τομές ενσωματωμένες σε παραφίνη και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστοπαθολογική εξέταση. Οι όρχεις και τα μάτια με Harderian αδένες στερεώθηκαν στο σταθεροποιητικό Bouin και στο διάλυμα Davidson, αντίστοιχα. Οι ιστοί των οστών, συμπεριλαμβανομένης της ρινικής κοιλότητας, των σπονδύλων, του στέρνου και του μηριαίου οστού, απασβεστώθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μείγμα 10 τοις εκατό μυρμηκικού οξέος και 10 τοις εκατό ρυθμισμένης φορμαλίνης για έως και 2 εβδομάδες. Πραγματοποιήθηκε ιστοπαθολογική αξιολόγηση για όλους τους ιστούς που ελήφθησαν από ζώα στην ομάδα ελέγχου και η ομάδα χορηγούσε την υψηλότερη δόση εκτός εάν παρατηρήθηκαν αλλοιώσεις που σχετίζονται με τη θεραπεία.

Ανοσοϊστοχημεία για ,-σφαιρίνη

Σε αρσενικούς αρουραίους, η συσσώρευση α.σφαιρίνης στο νεφρό εξετάστηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση τμημάτων ενσωματωμένων σε παραφίνη. Για την ανάκτηση αντιγόνου, οι τομές που ελήφθησαν από 5 αρουραίους σε κάθε ομάδα επωάστηκαν με πρωτεϊνάση Κ(DAKO, Glostrup, Δανία) για 1 λεπτό σε θερμοκρασία δωματίου. Όλες οι τομές βυθίστηκαν σε διάλυμα 3 τοις εκατό Η, Ο./μεθανόλης για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου για απενεργοποίηση της ενδογενούς δραστικότητας υπεροξειδάσης. Μετά τον αποκλεισμό μη ειδικών αντιδράσεων με 10 τοις εκατό φυσιολογικό ορό κουνελιού, οι τομές επωάστηκαν με ένα πρωτεύον αντίσωμα για -σφαιρίνη (αραιωμένο 1:400, αντίσωμα κατά αρουραίου, αντίσωμα σφαιρίνης, R&D Systems, Minneapolis, MN, ΗΠΑ) όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς s Η οπτικοποίηση της δέσμευσης αντισώματος πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ Vecta-Stain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) και 3,3'-διαμινοβενζιδίνη. Όλες οι τομές αντιχρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη.

Στατιστική ανάλυση

Οι διακυμάνσεις στις τιμές δεδομένων για το σωματικό βάρος κατά τη διάρκεια της πειραματικής περιόδου, καθώς και για την αιματολογία, τη βιοχημεία ορού και τα βάρη οργάνων, αξιολογήθηκαν ως προς την ομοιογένεια χρησιμοποιώντας το τεστ Bartlett. Η μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης και η δοκιμή Kruskal-Wallis, αντίστοιχα, χρησιμοποιήθηκαν για ομοιογενή και ετερογενή δεδομένα. Για τον προσδιορισμό των στατιστικά σημαντικών διαφορών, χρησιμοποιήθηκε η δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Dunnett για τη σύγκριση των ομάδων ελέγχου και θεραπείας. Οι συγκρίσεις των ιστοπαθολογικών περιπτώσεων και των βαθμών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή ακριβούς πιθανότητας Fisher και τη δοκιμή U/ του Mann-W Whitney, αντίστοιχα. τιμές P του<0.05 were="" considered="" statistically="">

Αποτελέσματα

Παράμετροι εν ζωή, αιματολογία και βιοχημεία ορού Δεν σημειώθηκαν σημαντικά κλινικά σημεία καθ' όλη την πειραματική περίοδο και όλα τα ζώα επέζησαν μέχρι την προγραμματισμένη νεκροψία. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο σωματικό βάρος και την ημερήσια πρόσληψη τροφής σε αρσενικούς και θηλυκούς αρουραίους (Εικ. 1Α και Β).

Τα δεδομένα αιματολογίας και βιοχημείας ορού φαίνονται στους Πίνακες I και 2, αντίστοιχα. Οι αιματολογικές αναλύσεις αποκάλυψαν σημαντικά μειωμένα HGB, HCT, MCV και MCH και αυξημένη PLT σε αρσενικούς αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκαν 250 mg/kg BW/ay 2-(1-μενθοξυ)αιθανόλη (Πίνακας 1). Στη βιοχημεία ορού, σημαντικές αυξήσεις στην TP, T-Chol και Ca και μειώσεις στο Bil και ALP σημειώθηκαν σε άνδρες της ομάδας των 250 mg/kg (Πίνακας 2). Σημαντική αύξηση του Cre και μείωση του A/G σημειώθηκε στους άνδρες των ομάδων 60 και 250 mg/kg. Στις γυναίκες, σημαντική αύξηση του Ca και μείωση της ALP καταγράφηκε στις ομάδες των 60 και 250 mg/kg, ενώ αυξημένη T-Chol και μειωμένη A/G, Bil, TG.AST και ALT ανιχνεύθηκαν στα 250 mg/kg. ομάδα κιλών.

Αν και παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση της TG και μείωση του Cl στους άνδρες στους οποίους χορηγήθηκαν 60 mg/kg, η έλλειψη οποιασδήποτε σχέσης δόσης υποδηλώνει ότι αυτές οι διαφορές δεν συσχετίστηκαν με την έκθεση στην ελεγχόμενη ουσία.

Βάρη οργάνων

Τα δεδομένα για το βάρος των οργάνων συνοψίζονται στον Πίνακα 3. Το απόλυτο και το σχετικό βάρος του ήπατος αυξήθηκαν σημαντικά και στα δύο φύλα της ομάδας των 250 mg/kg (Πίνακας 3). Σημαντική αύξηση στο σχετικό βάρος του ήπατος παρατηρήθηκε στους άνδρες της ομάδας των 60 mg/kg, στους άνδρες, απόλυτη και σχετικήνεφρόΤα βάρη αυξήθηκαν σημαντικά στις ομάδες των 60 και 250 mg/kg. Στην ομάδα των ανδρών 250 mg/kg, σημειώθηκαν σημαντικές αυξήσεις στο απόλυτο και σχετικό βάρος των επινεφριδίων και στο σχετικό βάρος της σπλήνας και των όρχεων.

Ιστοπαθολογία και ανοσοϊστοχημεία

Τα δεδομένα για ιστοπαθολογικά και ανοσοϊστοχημικά ευρήματα συνοψίζονται στους Πίνακες 4 και 5, αντίστοιχα. Τα ιστοπαθολογικά ευρήματα αποκάλυψαν ότι η συχνότητα συσσώρευσης ηωσινόφιλων κοκκίων (Εικ.2Α-Δ), βασεόφιλων σωληναρίων και υαλώδους γύψου, καθώς και εστιακής διάμεσης φλεγμονής στονεφρό, αυξήθηκαν σημαντικά σε όλες τις ομάδες θεραπείας με άνδρες σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Πίνακας 4). Με βάση τις ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις, οι αρσενικοί αρουραίοι που έλαβαν τη δοκιμαστική ουσία παρουσίασαν αύξηση στην ανοσοαντιδραστικότητα .σφαιρίνης στα επιθηλιακά κύτταρα των εγγύς σωληναρίων, επιδεικνύοντας μια σαφή εξάρτηση από τη δόση (Εικ. 2Ε-Η) (Πίνακας 5).

Στη νεκροψία, ένας αρσενικός αρουραίος στην ομάδα των 250 mg/kg έδειξε σοβαρή διεύρυνση του δεξιούνεφρόλόγω ενός ιστολογικά χαρακτηριστικού νεφροβλαστώματος. Αν και το νεφροβλάστωμα είναι ασυνήθιστο στα περισσότερα στελέχη αρουραίων9, αυτή η περίπτωση θεωρήθηκε τυχαία, καθώς κανένα άλλο ζώο δεν παρουσίασε παρόμοιες βλάβες. Επιπλέον, σε μελέτες καρκινογένεσης από το στόμα, η συχνότητα αυθόρμητου νεφροβλαστώματος σε αρσενικούς αρουραίους F344/DuCrlCrlj φέρεται να κυμαινόταν μεταξύ 0-2.0 τοις εκατό 10. Αν και αρκετές βλάβες εντοπίστηκαν σποραδικά σε άλλα όργανα, καμία σημαντική θεραπεία- εξαρτώμενες αλλαγές στη συχνότητα εμφάνισης αυτών των βλαβών ήταν εμφανείς.

Συζήτηση

Μέχρι σήμερα, 24 ευνοϊκοί παράγοντες, συμπεριλαμβανομένης της 2-(-μενθοξυ)αιθανόλης, έχουν αξιολογηθεί από την JECFA ως ουσίες που σχετίζονται δομικά με τη μενθόλη και όλοι αναφέρονται ως "καμία ανησυχία για την ασφάλεια" στα τρέχοντα εκτιμώμενα επίπεδα πρόσληψης. Η 2-(1-Μενθοξυ)αιθανόλη ταξινομείται σε μια υποομάδα αλεικυκλικών αλκοολών ή αιθέρων και θεωρείται ότι είναι κυρίως συζευγμένη με γλυκουρονικό οξύ, ακολουθούμενη από απέκκριση στα ούρα!. Αν και οι τιμές LD. από του στόματος αυτών των ουσιών σε τρωκτικά είναι σχετικά υψηλές, τα δεδομένα από μελέτες τοξικότητας επαναλαμβανόμενων δόσεων παραμένουν περιορισμένα. Μια 13-εβδομαδιαία μελέτη τοξικότητας επαναλαμβανόμενης δόσης αποκάλυψε ότι η καρβοξυλική μενθυλοπυρρολιδόνη (Αριθ. CAS 68127-22-0), μια ένωση που σχετίζεται δομικά με τη μενθόλη, μπορεί να συσχετιστεί με αυξημένη σχετική ηπατική καινεφρόβάρη σε αρσενικούς και θηλυκούς αρουραίους Wistar. Συσσώρευση .-σφαιρίνης στα εγγύς σωληνάρια αρσενικών αρουραίων παρατηρήθηκε επίσης σε δόση 1,1 ll mg/kg ΣΒ/ημέρα και το NOAEL προσδιορίστηκε ως 109 mg/kg ΣΒ/ημέρα.

Στην παρούσα 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας της 2-(1-μενθοξυ)αιθανόλης, δεν παρατηρήθηκαν τοξικολογικές αλλαγές στη γενική κατάσταση, το σωματικό βάρος και την πρόσληψη τροφής. Μετά από αιματολογική αξιολόγηση, παρατηρήσαμε μείωση του HGB (96,6 τοις εκατό στις μέσες τιμές ελέγχου), του HCT (96,3 τοις εκατό ), του MCV (98,4 τοις εκατό ) και του MCH (98,2 τοις εκατό ) και μια αύξηση του PLT (1l1 τοις εκατό) στους άνδρες Ομάδα 250 mg/kg, οι οποίες θεωρήθηκαν τοξικολογικές επιδράσεις της θεραπείας με 2-({1-μενθοξυ)αιθανόλη Τόσο απόλυτες (115 τοις εκατό και στα δύο φύλα) όσο και σχετικές (119 τοις εκατό στους άνδρες και 111 τοις εκατό στις γυναίκες ) τα βάρη του ήπατος αυξήθηκαν σημαντικά και στα δύο φύλα στις ομάδες των 250 mg/kg. Αν και δεν υπήρχαν ιστοπαθολογικές αλλαγές στο ήπαρ, αυξήθηκαν τα επίπεδα T-Chol ορού (l10 τοις εκατό στους άνδρες και 121 τοις εκατό στις γυναίκες) και TP (105 τοις εκατό στους άνδρες) και μια μείωση στην TG (60,1 τοις εκατό στις γυναίκες) στους 250 Οι ομάδες mg/kg υποδεικνύουν τοξικές αλλαγές που σχετίζονται με το μεταβολισμό των λιπιδίων και τη σύνθεση πρωτεϊνών στο ήπαρ. Μειωμένη HGB και MCH και αυξημένη PLT, T-Chol και TP στους άνδρες και μειωμένη TG και αυξημένο απόλυτο και σχετικό βάρος του ήπατος και στα δύο φύλα εντοπίστηκαν επίσης, με στατιστική σημασία στην προκαταρκτική μελέτη 28-ημέρας (δεδομένα δεν παρουσιάζονται ), επιβεβαιώνοντας ότι αυτές οι τροποποιημένες αιματολογικές και βιοχημικές παράμετροι του ορού, καθώς και τα βάρη του ήπατος, δεν ήταν τυχαία, αλλά σχετιζόμενα με την ελεγχόμενη ουσία. Αντίθετα, η σημαντική αύξηση των σχετικών βαρών του ήπατος που ανιχνεύθηκε στην ομάδα των 60 mg/kg των ανδρών στην παρούσα μελέτη δεν συνοδεύτηκε από αύξηση στο απόλυτο βάρος ή αλλαγές στις σχετικές βιοχημικές παραμέτρους, υποδηλώνοντας ότι αυτή η αύξηση ήταν προσαρμοστική αλλαγή.

Σημαντικά αυξημένο απόλυτο (120 τοις εκατό) και σχετικό (118 τοις εκατό) βάρος των επινεφριδίων στην ομάδα των 250 mg/kg των ανδρών θεωρήθηκε ότι συσχετίστηκε με τη δοκιμαστική ουσία. Επιπλέον, το αυξημένο απόλυτο και σχετικό βάρος των επινεφριδίων και στα δύο φύλα έδειξε μια σαφή εξάρτηση από τη δόση στην προκαταρκτική μελέτη της ημέρας (τα δεδομένα δεν φαίνονται), υποδεικνύοντας τη συσχέτιση με την ελεγχόμενη χημική θεραπεία. Αν και η υπερτροφία των επινεφριδίων θα μπορούσε να προκληθεί από το στρες, δεν υπήρξαν ευρήματα που να υποδηλώνουν άγχος, όπως μειωμένη αύξηση σωματικού βάρους ή ατροφία του θύμου αδένα και άλλων λεμφοειδών οργάνων, τόσο στην παρούσα όσο και στην προκαταρκτική μελέτη. Δεδομένου ότι μπορεί να μην υπάρχουν ιστοπαθολογικές αλλαγές στα επινεφρίδια ακόμη και με μειωμένη παραγωγή γλυκοκορτικοειδών σε περιπτώσεις αναστολής των σχετιζόμενων με τη στεροειδογένεση ενζύμων2, η πιθανότητα το αυξημένο βάρος των επινεφριδίων να είναι τοξικό εύρημα δεν μπορεί να αποκλειστεί. Αντίθετα, τα αυξημένα σχετικά βάρη της σπλήνας και των όρχεων στην ομάδα των ανδρών 250 mg/kg, που δεν παρατηρήθηκαν στην προκαταρκτική μελέτη, θεωρήθηκαν τοξικολογικά ασήμαντα λόγω απουσίας ιστοπαθολογικών αλλοιώσεων ή σημαντικά αυξημένων απόλυτων βαρών. Ομοίως, η βιοχημεία ορού αποκάλυψε μείωση στο A/G και αύξηση του Ca και στα δύο φύλα, το οποίο θεωρήθηκε ότι δεν είχε καμία τοξικολογική σημασία, δεδομένου ότι δεν ανιχνεύθηκαν ανωμαλίες σε σχετικές παραμέτρους. Επιπλέον, τα μειωμένα επίπεδα Bil και ALP και στα δύο φύλα και η μειωμένη AST και ALT στις γυναίκες ήταν σε αντίθεση με τις αναμενόμενες τοξικές επιδράσεις και θεωρήθηκαν μη σημαντικές.

Η χρόνια νεφροπάθεια που χαρακτηρίζεται από βασεόφιλα σωληνάρια, υαλώδη γύψο και εστιακή διάμεση φλεγμονή παρατηρήθηκε με στατιστική σημασία σε άνδρες όλων των ομάδων που έλαβαν θεραπεία. Επιπλέον, αυξημένη Cre ορού και απόλυτη και σχετικήνεφρόανιχνεύθηκαν βάρη στις ομάδες ανδρών 60 και 250 mg/kg. Αυτές οι αλλαγές δεν παρατηρήθηκαν σε γυναίκες ομάδες θεραπείας. Σε αυτές τις περιπτώσεις, ο βαθμός συσσώρευσης ηωσινόφιλων κοκκίων στα εγγύς σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα αυξήθηκε με προφανή δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Αυτοί οι κόκκοι επιβεβαιώθηκαν ως 2ουγλοβουλίνη με ανοσοϊστοχημεία, υποδεικνύοντας την εμφάνιση νεφροπάθειας χ-σφαιρίνης. -Οι σφαιρίνες που συνδέονται με ορισμένες χημικές ουσίες, όπως το d-λιμονένιο, συσσωρεύονται στα λυσοσώματα και παρατηρούνται στα εγγύς σωληνάρια ως ηωσινόφιλα ή υαλικά κοκκία9. Αυτή η συσσώρευση μπορεί να βλάψει τα επιθηλιακά κύτταρα, οδηγώντας σε χρόνια προοδευτική νεφροπάθεια και επακόλουθο σχηματισμό όγκου. Έτσι, αν και το NOAEL για 2-(1-men-thoxy)αιθανόλη σχετίζεται με ., νεφροπάθεια σφαιρίνης σε αρσενικούς αρουραίουςνεφράδεν εντοπίστηκε, αυτός ο τύπος νεφροπάθειας φέρεται να είναι ειδικός για αρσενικούς αρουραίους και επομένως δεν σχετίζεται με την αξιολόγηση κινδύνου στον άνθρωπο. Ένας αυξημένος κίνδυνος νεφρικής ανεπάρκειας που προκαλείται μέσω μηχανισμών που σχετίζονται με τη συσσώρευση ,-σφαιρίνης είναι εξαιρετικά απίθανος, καθώς αυτή η πρωτεΐνη απουσιάζει στον άνθρωπο4. Ως εκ τούτου, κρίθηκε εύλογο να αποκλειστούν από τον προσδιορισμό του NOAEL οι αλλαγές που σχετίζονται με τη χρόνια νεφροπάθεια που παρατηρήθηκαν σε άνδρες.

Συμπερασματικά, η παρούσα 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας έδειξε ότι η θεραπεία με 250 mg/kg ΣΒ/ημέρα με 2-(/-μενθοξυ)αιθανόλη προκάλεσε τοξικές αλλαγές στην αιματολογία, τη βιοχημεία ορού και το βάρος των οργάνων σε άνδρες και θηλυκούς αρουραίους F344. Με βάση τα παρατηρούμενα αποτελέσματα, το NOAEL της 2-(1-μενθοξυαιθανόλης αξιολογήθηκε ως 60 mg/kg ΣΒ/ημέρα και για τα δύο φύλα.

βιβλιογραφικές αναφορές

1 JEFF. ΠΟΥ Σειρά πρόσθετων τροφίμων: 60. Αξιολόγηση ασφάλειας ορισμένων πρόσθετων τροφίμων. 579–593. 2009.

2. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Toyoda T και Ogawa K. Αξιολόγηση υποχρόνιας τοξικότητας 5-ισοθειοκυανικού εξενυλίου, μιας ίδιας φύσης αρωματικής ουσίας από την Wasabia japonica, σε αρουραίους F344/DuCrj. Food Chem Toxicol. 122: 80–86. 2018. [Medline] [CrossRef]

3. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T και Ogawa K. Μια μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας 13- εβδομάδων της ακετάλης προπυλενογλυκόλης βανιλίνης σε αρουραίους F344. Food Chem Toxicol. 132: 110643. 2019. [Medline] [CrossRef]

4. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T, Takahashi M, Inoue K και Ogawa K. Μια 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας της 2-αιθυλβουτανάλης σε αρουραίους F344. Regul Toxicol Pharmacol. 100: 118–126. 2018. [Medline] [CrossRef]

5. Toyoda T, Cho YM, Matsushita K, Tachibana S, Senuma M, Akagi J και Ogawa K. Μια 13-εβδομαδιαία μελέτη υποχρόνιας τοξικότητας του οξικού εξυλεστέρα σε αρουραίους με SD. J Toxicol Pathol. 32: 205–212. 2019. [Medline] [CrossRef]

6. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Tatebe C, Sato K και Ogawa Κ. Αξιολόγηση υποχρόνιας τοξικότητας του μεθυλαιθέρα ισοευγενόλης σε αρουραίους F344/DuCrj με χορήγηση από του στόματος 13-εβδομάδων. Regul Toxicol Pharmacol. 102: 34–39. 2019. [Medline] [CrossRef]

7. Ide T, Mizuta Y, Akagi J, Masumoto N, Sugimoto N, Sato K, Ogawa K και Cho YM. Μια 90-ημερήσια μελέτη τοξικότητας επαναλαμβανόμενης δόσης από του στόματος τεσσάρων στερεοϊσομερών του 2,4-διμεθυλ- 4-φαινυλοτετραϋδροφουρανίου, μιας συνθετικής αρωματικής ουσίας, σε αρουραίους F344. Regul Toxicol Pharmacol. 114: 104664. 2020. [Medline] [CrossRef]

8. Furukawa S, Nagaike M, and Ozaki K. Βάσεις δεδομένων για τεχνικές πτυχές της ανοσοϊστοχημείας. J Toxicol Pathol. 30: 79–107. 2017. [Medline] [CrossRef]

9. Seely JC, Hard GC και Blankenship B. Kidney. Στο: Boor man's Pathology of the Rat, 2nd ed. AW Suttie (επιμ.). Aca demic Press, Λονδίνο. 125–166. 2018.

10. Takanobu K, Aiso S, Umeda Y, Senoh H, Saito M, Katagiri T, Ikawa N, Ishikawa H, Mine T, Take M, Haresaku M, Matsumoto M, and Fukushima S. [Δεδομένα φόντου αυθόρμητων όγκων στο F344 /DuCrlCrlj αρουραίοι]. Sangyo Eiseigaku Zasshi. 57: 85–96. 2015 (στα Ιαπωνικά). [Medline] [CrossRef]

11. ΤΖΕΦ. Σειρά Τεχνικής Έκθεσης ΠΟΥ: 891. Αξιολόγηση ορισμένων προσθέτων τροφίμων (Πενήντα πρώτη έκθεση της κοινής επιτροπής εμπειρογνωμόνων FAO/ΠΟΥ για τα πρόσθετα τροφίμων). 111–118. 2000.

12. Wallig MA. Ενδοκρινικό σύστημα. Στο: Fundamentals of Toxicologic Pathology, 3rd ed. MA Wallig, WM Haschek, CG Rousseaux, B Bolon και BW Mahler (επιμ.). Academic Press, Λονδίνο. 565–624. 2018.

13. Swenberg JA. Νεφροπάθεια 2u-σφαιρίνης: μια ανασκόπηση των κυτταρικών και μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται και των συνεπειών τους για την αξιολόγηση του ανθρώπινου κινδύνου. Περιβαλλοντική Προοπτική Υγείας. 101 (Παράρτημα 6): 39–44. 1993. [Medline] [CrossRef]

14. Greaves P. Ουροποιητικό. Στο: Histopathology of Preclinical Toxicity Studies, 4th ed. Academic Press, Λονδίνο. 537–614. 2012.