Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Παραλλαγή γονιδίου MicroRNA-499a (rs3746444A/G) και ευαισθησία στη νεφρική νόσο τελικού σταδίου που σχετίζεται με τον διαβήτη τύπου 2

MANAL S. FAWZY, et al

Αφηρημένη

Η διαβητική νεφροπάθεια (ΔΝ) είναι ένας σημαντικός παράγοντας κινδύνου για το τελικό στάδιονεφρώννόσος(ESRD). Τα MicroRNA (miRNAs/miRs) και οι παραλλαγές τους μπορεί να εμπλέκονται στην υγεία και τις ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του DN. Η παρούσα μελέτη στόχευε στη διερεύνηση της συσχέτισης του γονιδίου miRNA-499a (MIR499A) A/G παραλλαγή περιοχής σπόρου (rs3746444) με ESRD που σχετίζεται με DN(τελικό στάδιονεφρώννόσος)ευαισθησία σε ασθενείς με σακχαρώδη διαβήτη και να προσδιοριστεί εάν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ των διαφορετικών γονότυπων και των εργαστηριακών και κλινικών δεδομένων των ασθενών. Μια πιλοτική μελέτη περιπτώσεων ελέγχου διεξήχθη σε 180 ενήλικες ασθενείς με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2. Συνολικά 90 ασθενείς με ESRD (τελικό στάδιονεφρώννόσος)Υπό τακτική αιμοκάθαρση θεωρήθηκαν τα περιστατικά και 90 διαβητικοί ασθενείς με αντιστοιχία ηλικίας, φύλου και εθνικότητας με φυσιολογική λευκωματουρία θεωρήθηκαν ως έλεγχοι. Ο προσδιορισμός γονότυπου MIR499A πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μιας ανάλυσης διάκρισης αλληλόμορφων TaqMan σε πραγματικό χρόνο. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η παραλλαγή MIR499A rs3746444*G προσέδιδε ευαισθησία στην ανάπτυξη ESRD υπό συν-κυρίαρχο [(αναλογία πιθανοτήτων (95 τοις εκατό διάστημα εμπιστοσύνης): 2,49 (1,41-3,89) και 2,41 (1,661 γραμμάρια) και 6,61 γρ. αντίστοιχα], κυρίαρχα μοντέλα [2,30 (1,18-3,90)] και αλληλόμορφα [1,82 (1,17-2,83)]. Διαφορετικοί γονότυποι της καθορισμένης παραλλαγής δεν εμφάνισαν σημαντικές συσχετίσεις με τα κλινικοεργαστηριακά δεδομένα των ασθενών που μελετήθηκαν ή τα κυκλοφορούντα miR 499a επίπεδα πλάσματος. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης πρότειναν ότι το MIR499A rs3746444 μπορεί να είναι μια παραλλαγή ευαισθησίας για ESRD που σχετίζεται με DN στον πληθυσμό της μελέτης. Ωστόσο, μελέτες μεγαλύτερου μεγέθους δείγματος με διαφορετικές εθνότητες δικαιολογούνται για την επαλήθευση αυτών των ευρημάτων.

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρώννόσος

Εισαγωγή

Τελικό στάδιο που σχετίζεται με τη διαβητική νεφροπάθεια (DN).νεφρώννόσος(ESRD) είναι μια αυξανόμενη ανησυχία για τη δημόσια υγεία παγκοσμίως (1). Τις τελευταίες τρεις δεκαετίες, το ESRD που σχετίζεται με το DN(τελικό στάδιονεφρώννόσος) has been identified as a major cause for dialysis in several countries, including Saudi Arabia, in which type 2 diabetes mellitus (T2DM) accounts for >33 τοις εκατό όλων των περιπτώσεων ESRD (1,2). Αρκετές ελπιδοφόρες μελέτες έχουν εντοπίσει γονίδια που σχετίζονται με την εμφάνιση και την εξέλιξη του DN, συμπεριλαμβανομένων γονιδίων που σχετίζονται με microRNAs (miRNAs/miRs) (3,4). Αυτή η οικογένεια μη κωδικοποιητικών RNA είναι εξαιρετικά διατηρημένη, ειδική για τον ιστό και μικρό μήκος (20-24 νουκλεοτίδια). Τα miRNA παίζουν βασικό ρόλο σε πολυάριθμες φυσιολογικές και παθολογικές καταστάσεις στα ανθρώπινα όργανα, συμπεριλαμβανομένου τουνεφρά. Για παράδειγμα, ανοδική ρύθμιση των miR‑192, miR‑194, miR‑204, miR‑215 και miR‑216 και μείωση της ρύθμισης των miR‑133a, miR‑133b, miR‑1d, miR‑291, miaR ‑122 και miR‑124a έχουν παρατηρηθεί στον άνθρωπονεφρά(5). Επίσης, το miR-192 έχει αναφερθεί ότι είναι 20 φορές υψηλότερο εκφρασμένο στο φλοιώδεςνεφρόιστό σε σύγκριση με το μυελικόνεφρόιστό, όπου εμπλέκεται στη ρύθμιση της μεταφοράς νατρίου· Επιπλέον, το miR-155 θα μπορούσε να καταστείλει την έκφραση του υποδοχέα της αγγειοτενσίνης II τύπου 1, ο οποίος θα μπορούσε να επηρεάσει την αρτηριακή πίεση (5,6). Με τη δέσμευση σε στόχους mRNA, τα miRNA έχουν την ικανότητα να προκαλούν μεταφραστική καταστολή, αποσταθεροποίηση του mRNA και/ή αποικοδόμηση (7). Η θερμοδυναμική των αλληλεπιδράσεων στόχου miRNA-mRNA μπορεί να επηρεαστεί από πολυμορφισμούς μονονουκλεοτιδίου (SNPs) που εμφανίζονται στο πρόδρομο-miRNA (pre-miRNA), με αποτέλεσμα τη δυσρύθμιση του γονιδίου στόχου και, στη συνέχεια, τις παραλλαγές φαινοτύπου ή την ευαισθησία σε ασθένειες (8). Το γονίδιο miRNA-499a (MIR499A) βρίσκεται στο γονίδιο του καρδιακού μυός του καρδιακού μυός της ανθρώπινης μυοσίνης βαριάς αλυσίδας 7B στο χρωμόσωμα 20q11.22 34990376-34990497 ( συν ) και αποτελείται από ένα μόνο εξόνιο που κωδικοποιεί ένα μεμονωμένο μεταγράφημα(MI). Έχει μήκος 122 ζεύγη βάσεων και αναφέρθηκε ότι είναι δείκτης τραυματισμού των καρδιομυοκυττάρων (9). Αν και ο αριθμός των μελετών που εστιάζουν στον ακριβή ρόλο του miR-499a στην παθογένεση και την ανάπτυξη της ESRD λόγω DN είναι περιορισμένος, το miR-499a έχει προταθεί ότι επηρεάζει διάφορες βιολογικές διεργασίες, όπως η κυτταρική γήρανση, η φλεγμονή, η απόπτωση και το ανοσοποιητικό απάντηση (10), που μπορεί να διαδραματίσει ρόλο στη βιογένεση ESRD (Πίνακας SI) (11-14). Επιπλέον, αναφέρθηκε προηγουμένως ότι η ανοδική ρύθμιση του miR-499a μπορεί να ρυθμίζει την αντίσταση στην ινσουλίνη, τη γλυκογένεση και να ρυθμίζει τη σηματοδότηση της ινσουλίνης με την αναστολή της φωσφατάσης και του ομόλογου τενσίνης (15).

Μια κοινή παραλλαγή (rs3746444), η οποία βρίσκεται εντός της περιοχής σπόρων miR-499a-3p AC(A/G)UCAC στη θέση 20:34.990.448 (GRCh38), έχει αναφερθεί ότι σχετίζεται με διάφορες ασθένειες, ιδιαίτερα στη Μέση Ανατολή πληθυσμού, όπως τα καρδιαγγειακά νοσήματα (9), τα αυτοάνοσα νοσήματα (16) και ο καρκίνος (17). Στην προηγούμενη μελέτη μας, εντοπίστηκε σημαντική απορρύθμιση των επιπέδων miR-499a στην κυκλοφορία στην τρέχουσα ESRD που σχετίζεται με το ΣΔ(τελικό στάδιονεφρώννόσος)κοόρτη (18). Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο να διερευνήσει τη συσχέτιση της παραλλαγής της περιοχής σπόρου MIR499A(A/G) (rs3746444) με την ευαισθησία ESRD που σχετίζεται με DN σε ασθενείς με ΣΔ2 και να καθορίσει εάν υπάρχει συσχέτιση μεταξύ των διαφορετικών γονότυπων και των ασθενών. κλινική-εργαστηριακά δεδομένα. Από όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που διερευνά την πιθανή συσχέτιση της καθορισμένης παραλλαγής με την ευαισθησία ESRD σε δείγμα ασθενών της Μέσης Ανατολής.

Υλικά και μέθοδοι

Πληθυσμός μελέτης.

Συνολικά 90 διαδοχικοί ασθενείς με ESRD που σχετίζεται με ΣΔ2(τελικό στάδιονεφρώννόσος)σε τακτική αιμοκάθαρση (τρεις φορές/εβδομάδα) στρατολογήθηκαν ως η ομάδα ασθενών της παρούσας μελέτης. Οι ασθενείς πήγαιναν στο Νεφρολογικό Κέντρο του Mohammed bin Saud Al-Kabeer για νεφρική αιμοκάθαρση στο κεντρικό νοσοκομείο Arar (Arar, Σαουδική Αραβία). Τα κριτήρια ένταξης/αποκλεισμού για την επιλογή της ομάδας ασθενών με ESRD έχουν περιγραφεί λεπτομερώς στην προηγούμενη εργασία μας για την ίδια ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)κοόρτη ασθενών (18). Ασθενείς που παρουσιάζουν οποιαδήποτε χρόνια νόσο, αυτοάνοσες διαταραχές, καρκίνους καινεφρώννόσοςεκτός από τη νεφροπάθεια που σχετίζεται με ΣΔ (διαγιγνώσκεται με βιοψία νεφρού σύμφωνα με τα τοπικά πρότυπα πρωτόκολλα που έχουν υιοθετηθεί από τα διεθνή πρότυπα για τη διάγνωση μη διαβητικώννεφρώννόσος) (19) εξαιρέθηκαν. Καθώς είναι πολύ πιθανό ότι, τελικά, ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών που θα διαγνωστούν έγκαιρα με διαβήτη θα αναπτύξουν ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος), ασθενείς με ΣΔ2 με αντίστοιχη διάρκεια διαβήτη και φυσιολογικής αλβουμινουρίας (αναλογία λευκωματίνης/κρεατινίνης ούρων,<30 µg/mg)="" (20,21)="" were="" considered="" as="" the="" control="" group.="" all="" biomedical="" research="" involving="" human="" participants="" conformed="" to="" the="" guidelines="" of="" the="" helsinki="" declaration.="" the="" protocol="" of="" the="" present="" study="" was="" approved="" by="" the="" research="" ethics="" committees="" of="" northern="" border="" university="" (approval="" no.="" 6/340/h),="" and="" written="" informed="" consent="" was="" obtained="" from="" all="">

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρώννόσος

Εργαστηριακή ανάλυση.

Συλλέχθηκαν φλεβικά δείγματα νηστείας σε απλούς σωλήνες κενού και αιθυλενοδιαμινοτετραοξικού οξέος πριν από την καθορισμένη δεύτερη συνεδρία αιμοκάθαρσης για ασθενείς με ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος). Ο ορός διαχωρίστηκε με φυγοκέντρηση για 12 λεπτά στα 1.300 xg σε θερμοκρασία δωματίου, αμέσως από τον προηγούμενο σωλήνα για βιοχημική ανάλυση χρησιμοποιώντας εμπορικά διαθέσιμα κιτ για τη γλυκόζη (αρ. κατ. 44044831190),νεφρόλειτουργικές δοκιμές [creati-nine (αριθ. κατ. 4810716190) και ουρίας (αρ. κατ. 4460715190)] και λιπιδικό προφίλ [ολική χοληστερόλη (αρ. κατ. 3039773190), τριακυλο-γλυκερόλη (αριθ. κατ. 372670L), HD270L (37270L) c (αρ. κατ. 7528566190) και LDL-c (αρ. κατ. 7005717190)] σε βιοχημικό αναλυτή Cobas Integra (όλα της Roche Diagnostics GmbH).

Γονοτυπισμός για MIR499A (rs3746444). Το γονιδιωματικό DNA εξήχθη από πλήρες αίμα χρησιμοποιώντας κιτ Wizard Genomic DNA Purification (αρ. κατ. A1120; Promega Corporation) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, ακολουθούμενη από αξιολόγηση συγκέντρωσης DNA και καθαρότητας χρησιμοποιώντας το φασματοφωτόμετρο NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies; Thermo Fisher Scientific, Inc.) και ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης (2 τοις εκατό) για την αξιολόγηση της ακεραιότητας του DNA. Στη συνέχεια, τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους ‑20˚C μέχρι τη στιγμή του προσδιορισμού του γονότυπου. Μια δοκιμασία πολυμορφισμού MIR499A (rs3746444, αναγνωριστικό προσδιορισμού: C_2142612_30) ​​διεξήχθη χρησιμοποιώντας PCR σε πραγματικό χρόνο διάκρισης αλληλόμορφων TaqMan με τα μέτρα ποιότητας όπως περιγράφηκαν προηγουμένως (16). Εν συντομία, η PCR εκτελέστηκε σε όγκο αντίδρασης 25 μl που περιείχε gDNA (20 ng) αραιωμένο σε 11,25 μl με νερό χωρίς νουκλεάσες, 12,5 μl TaqMan Universal PCR Master Mix (2Χ) και 1,25 μl 20 x TaqMan SN τον ίδιο προμηθευτή. Δείγματα ενζύμου χωρίς πρότυπο και μη πολυμεράσης ελέγχονταν κάθε φορά με τα δείγματα της μελέτης ως αρνητικούς μάρτυρες. Ο προσδιορισμός του γονότυπου πραγματοποιήθηκε με τρόπο τυφλό ως προς την κατάσταση περίπτωσης/μάρτυρα. Η ενίσχυση PCR πραγματοποιήθηκε σε σύστημα StepOne Real-Time PCR (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.), χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες συνθήκες: Αρχική διατήρηση δύο φάσεων (2 λεπτά στους 50˚C και 10 λεπτά στους 95˚C) , ακολουθούμενη από PCR δύο σταδίων 40 κύκλων (μετουσίωσης για 15 δευτερόλεπτα στους 95˚C και ανόπτηση/επέκταση για 1 λεπτό στους 60˚C). Η αλληλική διάκριση προσδιορίστηκε αναλύοντας τα αρχεία δεδομένων φθορισμού από κάθε εκτέλεση χρησιμοποιώντας λογισμικό αυτόματης κλήσης αλληλόμορφων (SDS έκδοση 1.3.1; Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.; Εικ. S1). Το συνολικό ποσοστό κλήσης γονότυπου ήταν 100 τοις εκατό.

Στατιστική ανάλυση.

Το μέγεθος δείγματος και οι υπολογισμοί ισχύος με χρήση του λογισμικού G power-3 (http://www.gpower.hhu.de/) έδειξαν ότι, με τον καθορισμένο σχεδιασμό της μελέτης, επιτρεπόμενα ποσοστά σφάλματος, σφάλμα=0.05, ένα μέσο αποτέλεσμα μέγεθος=0.5, και ένα μέγεθος δείγματος 90/ομάδα, μπορεί να αποδώσει 91 τοις εκατό ισχύ της μελέτης. Η κατανομή των δεδομένων και η ομοιογένεια της διακύμανσης αξιολογήθηκαν με τη δοκιμή Shapiro-Wilk και τη δοκιμή Levene, αντίστοιχα. Τα συνεχή δεδομένα εκφράζονται ως η μέση ± τυπική απόκλιση και οι κατηγορικές μεταβλητές παρουσιάζονται ως μετρήσεις συχνότητας. Τα δεδομένα συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή χ2, ενώ οι δοκιμές t-test Student, μονόδρομης ANOVA ή Kruskal-Wallis εφαρμόστηκαν για τη σύγκριση συνεχών μεταβλητών. Η απόκλιση της παρατηρούμενης κατανομής γονότυπου από την ισορροπία Hardy-Weinberg αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα χ2 καλής προσαρμογής χρησιμοποιώντας την Online Encyclopedia for Genetic Epidemiology (http://www.oege.org/). Για τα διαφορετικά γενετικά μοντέλα υπολογίστηκαν προσαρμοσμένες αναλογίες πιθανοτήτων για συγκεκριμένο γονότυπο (ORs) και 95 τοις εκατό διαστήματα εμπιστοσύνης (CIs). Οι μεταβλητές της μελέτης, όπως η ηλικία, το φύλο, ο αριθμός των συνεδριών αιμοκάθαρσης, η παρουσία υπέρτασης και η διάρκεια της νόσου, προσαρμόστηκαν. Π<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="" difference.="" spss="" version="" 23="" (ibm="" corp.)="" was="" used="" for="" the="" statistical="">

Παραλλαγή MIR499A (rs3746444) σε ανάλυση πυριτίου.

Παραλλαγή MIR499A (rs3746444) σε ανάλυση πυριτίου. Η γονιδιακή δομική και λειτουργική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων Ensembl Genomic (ensembl.org) και το miRBase.org. Η πρόβλεψη στόχου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας DIANA‑micro T‑CDS v5.0 (http://diana.imis.athena innovation.gr/DianaTools/index.php?r=microT_ CDS/index), miRBase (http://www.mirbase.org/) και αλγόριθμος DIANA‑TarBase v7.0 (http://diana.imis.athena‑innovation.gr/DianaTools/index.php ?r=tarbase/index) βάσεις δεδομένων; και η ομαδοποίηση σχολιασμών και η ανάλυση εμπλουτισμού διαδρομής πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας miRPath v3.{10}} (http://www.microrna.gr/miRPathv3) και όλα ήταν εκτενώς λεπτομερή στις προηγούμενες μελέτες μας (8,12). Οι προβλεπόμενοι στόχοι miR-499a συγκρίθηκαν με την παρουσία και των δύο αλληλίων A και G χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα miR2Go (http://compbio.uthsc.edu/miR2GO) σε ένα μεσαίο ιεραρχικό επίπεδο φιλτραρίσματος (P<>

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά του πληθυσμού της μελέτης.

Τα βασικά χαρακτηριστικά των υποκειμένων της μελέτης συνοψίζονται στον Πίνακα I. Η μέση ηλικία των ασθενών με ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)ήταν 46,6±12,3 έτη για τους άνδρες και 47,0±14,7 έτη για τις γυναίκες. Η μέση διάρκεια της αιμοκάθαρσης ήταν συγκρίσιμη και για τα δύο φύλα στους συμμετέχοντες στη μελέτη. Δεν υπήρχαν διαφορές ανάλογα με το φύλο στα κλινικά και βιοχημικά χαρακτηριστικά των συμμετεχόντων, εκτός από αυτές που σχετίζονται με τις παραμέτρους του προφίλ λιπιδίων, οι οποίες ήταν χειρότερες στις γυναίκες ασθενείς σε σύγκριση με αυτές στους άνδρες (Πίνακας I).

Παραλλαγή MIR499A (rs3746444) στον πληθυσμό της μελέτης.

Στον πληθυσμό της μελέτης, οι συχνότητες γονότυπου του MIR499A (rs3746444) SNP ακολουθούσαν την ισορροπία Hardy-Weinberg (P=0.149 στους ελέγχους και P=0.398 εσωτερικούς ασθενείς). Οι δευτερεύουσες συχνότητες αλληλόμορφων για το rs3746444*G ήταν 0.28 και 0.42 σε μάρτυρες και ασθενείς με ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος), αντίστοιχα. Μια σημαντική διαφορά στους γονότυπους MIR499A παρατηρήθηκε μεταξύ των ομάδων μελέτης. Η συχνότητα του γονότυπου GG ήταν 11,1 τοις εκατό στους μάρτυρες, σε σύγκριση με 20 τοις εκατό στους ασθενείς με ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)(Ρ=0.030). Η μεταφορά του αλληλόμορφου rs3746444*G προσέφερε σχεδόν 2 φορές αύξηση στην ευαισθησία στην ανάπτυξη ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος), με OR (95 τοις εκατό CI) 1,82 (1,17-2,83) στο μοντέλο αλληλικής γενετικής συσχέτισης. Κατά συνέπεια, τα ομόζυγα/ετερόζυγα άτομα (rs3746444*GG/AG) είχαν περισσότερες πιθανότητες να αναπτύξουν ESRD στα μοντέλα σύγκρισης ομόζυγων/ετερόζυγων και κυρίαρχων [GG vs. AA: OR=2.41, 95 τοις εκατό CI: 1,68‑6. ; AG έναντι AA: OR=2.49, 95 τοις εκατό CI: 1,41-3,89; (AG συν GG) έναντι AA: OR=2.30, 95 τοις εκατό CI: 1,18-3,90; Πίνακας II].

Παραλλαγή MIR499A (rs3746444) και κλινικοεργαστηριακά χαρακτηριστικά ασθενών με ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος). Κατά τη διερεύνηση της συσχέτισης μεταξύ διαφορετικών γονότυπων της καθορισμένης παραλλαγής και των κλινικών και βιοχημικών χαρακτηριστικών της ομάδας ασθενών, δεν καταδείχθηκαν σημαντικές συσχετίσεις, όπως καταδεικνύεται στον Πίνακα III.

Επίδραση του MIR499A (rs3746444) στη δομή και τη λειτουργία των γονιδίων.

Παρόλο που το miR-499a σχηματίζει έναν δευτερεύοντα βρόχο φουρκέτας με συμπληρωματικές αλληλουχίες στη δομή του (Εικ. S2), προβλέφθηκε ότι διαφορετικά γονίδια θα στοχεύονταν και από τις δύο ώριμες μορφές που συντέθηκαν από κάθε βραχίονα. Συνολικά 1.890 γονίδια είχαν προβλεφθεί να επηρεαστούν από το miR-499a (919 γονίδια από 3p, 810 από 5p και 161 γονίδια και από τα δύο), όπως αναφέρθηκε προηγουμένως (8). Τα πιο σημαντικά μονοπάτια της Εγκυκλοπαίδειας Γονιδίων και Γονιδιωμάτων του Κιότο (KEGG) που σχετίζονται με στόχους miR-499a που μπορεί να εμπλέκονται στην εξέλιξη της DN σε ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)συνοψίζονται στον Πίνακα IV.

Η παρουσία του rs3746444 SNP εντός της περιοχής σπόρων του κλώνου miR‑499a επιβατών μπορεί να οδηγήσει σε διακοπή των στόχων και στη δημιουργία διαφορετικού συνόλου γονιδίων (8,16). Επίσης, μπορεί να συντομεύσει τη δομή του στελέχους-βρόχου. επηρεάζοντας έτσι την επεξεργασία ολόκληρου του miRNA.

Η προηγούμενη μελέτη μας ανέφερε δυσρύθμιση των κυκλοφορικών επιπέδων του miR-499a στην ίδια ομάδα ασθενών (18). Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη επικεντρώθηκε στον προσδιορισμό του κατά πόσον αυτά τα επίπεδα κυκλοφορίας εμφάνιζαν σημαντικές παραλλαγές μεταξύ διαφορετικών γονότυπων του ίδιου γονιδίου. Τα ευρήματα, ωστόσο, δεν αποκάλυψαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των διαφορετικών γονότυπων του MIR499A (rs3746444) και των κυκλοφορούντων επιπέδων πλάσματος miR-499a που ανιχνεύθηκαν προηγουμένως χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Livak (22) (P=0.173; Εικ. 1) .

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρώννόσος

Συζήτηση

Τα SNPs έχουν αναφερθεί ότι είναι ο πιο κοινός τύπος γενετικής παραλλαγής που σχετίζεται με την ποικιλομορφία του πληθυσμού, την ευαισθησία σε ασθένειες και τις ατομικές θεραπευτικές αποκρίσεις (23). Τα SNP μπορεί να επηρεάσουν την έκφραση και/ή την ωρίμανση του miRNA στο επίπεδο της μεταγραφής του πρωτεύοντος μεταγράφου, της μετα-μεταγραφικής επεξεργασίας των πρωτογενών μεταγραφών ή των προ-miRNA ή επηρεάζοντας τις αλληλεπιδράσεις miRNA-mRNA (24).

Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι η μεταφορά του αλληλόμορφου rs3746444*G προσέδωσε ευαισθησία στο ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)in patients with DM compared with non‑carriers under the allelic, co‑dominant, and dominant genetic association models. Results of our previous study demonstrated that the rs3746444 polymorphism results in an A>Αναντιστοιχία G στην περιοχή του προδρόμου του μίσχου miR-499a (βρίσκεται απέναντι από την ώριμη αλληλουχία), που επηρεάζει την περιοχή του ώριμου σπόρου miR-499a-3p που εμπλέκεται στη σωστή δέσμευση miRNA-mRNA, με επακόλουθη διακοπή και δημιουργία αρκετών στόχων (8). Οι φορείς των γονοτύπων ομοζυγωτών (AA ή GG) παράγουν δύο ώριμες μορφές, miR-499a-5p και miR-499a-3p*A ή *G, αντίστοιχα, με το καθένα να έχει το ειδικό του πλαίσιο γονιδίων-στόχων. Συγκριτικά, οι ετερόζυγοι (AG) φορείς παράγουν τρεις ώριμες μορφές, miR-499a-5p, ‑3p*A και ‑3p*G, με τρία υποσύνολα γονιδίων-στόχων. Οι αναλύσεις σε πυρίτιο της παρούσας μελέτης αποκάλυψαν ότι η παρουσία αυτών των διαφορετικών αλληλόμορφων μπορεί να διαταράξει και να δημιουργήσει 667 και 744 γονιδιακούς στόχους, αντίστοιχα. Μεταξύ των επικυρωμένων γονιδιακών στόχων που έχουν διερευνηθεί είναι η πυρηνική πρωτεΐνη 4, η πρωτεΐνη-1 που αλληλεπιδρά με πυρηνικούς υποδοχείς, η πρωτεΐνη 14 που μοιάζει με Bcl-2, ο συνδέτης χημειοκίνης (μοτίβο C-C) 8 και η περιοχή καθορισμού του φύλου Y-πλαίσιο 4 (20) . Από όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που διερευνά την παραλλαγή MIR499A rs3746444 για ευαισθησία σε ESRD σε ασθενείς με ΣΔ σε δείγμα του πληθυσμού της Μέσης Ανατολής. Σε συμφωνία με τα ευρήματα της παρούσας μελέτης, οι Misra et al (25) ανέφεραν ότι ο ετερόζυγος και ο ομόζυγος γονότυπος του MIR-499A rs3746444 προσέφεραν κίνδυνο για ανάπτυξη ESRD, ο οποίος προκλήθηκε από άλλες διαταραχές εκτός από το DN και μπορεί να σχετίζεται με σχεδόν 3 φορές αυξημένος κίνδυνος για οξεία απόρριψη αλλομοσχεύματος σε πληθυσμό της Βόρειας Ινδίας (25).

Δεδομένου ότι τα SNP στα προ-miRNA μπορεί να αλλάξουν την επεξεργασία ή/και την έκφραση του miRNA, κατά την ανάλυση της συσχέτισης του πολυμορφισμού του MIR499A με τα επίπεδα πλάσματος που κυκλοφορεί miR-499a και τα διαφορετικά κλινικοεργαστηριακά χαρακτηριστικά ασθενών, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές συσχετίσεις, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Υποτίθεται ότι η παρουσία μιας παραλλαγής miR-499a μπορεί να επηρεάσει τη θερμοδυναμική των αλληλεπιδράσεων RNA-RNA και τη συγγένεια αυτού του miRNA παρεμβαίνοντας στη βέλτιστη δέσμευση με τα mRNA-στόχους, με αποτέλεσμα τη δυσρύθμιση των γονιδίων-στόχων που μεσολαβούν στην ευαισθησία της νόσου σε ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)χωρίς να επηρεάζεται η σχετική έκφραση ή/και ο φαινότυπος της νόσου (22). Οι αναλύσεις in silico της παρούσας μελέτης αποκάλυψαν μερικές από τις κορυφαίες σημαντικές οδούς KEGG που περιλαμβάνουν στόχους miR-499a που μπορεί να εμπλέκονται στην εξέλιξη της DN σε ESRD (26-32). Για παράδειγμα, η οδός (TGF-1) ενοχοποιήθηκε στην αιτιολογία της DN (26,28). Η οδός TGF-1 ενεργοποιεί βασικές οδούς σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένης της οδού PI3K/AKT που μεσολαβεί στη φωσφορυλίωση και την αδρανοποίηση του μεταγραφικού FOXO, οδηγώντας σε οξειδωτικό στρες, επέκταση των μεσαγγειακών κυττάρων και συσσώρευση πρωτεϊνών εξωκυτταρικής μήτρας, βασικών συστατικών του χρόνιου DN.νεφρόασθένεια (26). Η αυξητική ρύθμιση της δραστηριότητας της τυροσινικής κινάσης του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (ErbB) είναι σημαντική για τη μεσολάβηση αρκετών επιπλοκών του διαβήτη, συμπεριλαμβανομένων των παθολογιών των νεφρών, της καρδιακής ίνωσης και της αγγειακής δυσλειτουργίας (29). Επιπλέον, ο ρόλος της οδού TNF στην εξέλιξη της DN σε διαβητικά ποντίκια και μοντέλα αρουραίων ήταν προφανής. Για παράδειγμα, η χρήση μιας διαλυτής πρωτεΐνης σύντηξης υποδοχέα-2 TNF έχει αναφερθεί ότι βελτιώνει το πρώιμο στάδιο της DN στο μοντέλο DM του ποντικού KK-Ay (30). Επίσης, ο αναστολέας TNFR-Fc TNF είχε βρεθεί ότι μετριάζει τη νεφρική υπερτροφία χωρίς να επηρεάζει το μεταβολικό προφίλ σε αρουραίους με επαγόμενο διαβήτη (31). Το mTOR έχει εμπλακεί στη διατήρηση της λειτουργίας των σπειραματικών ποδοκυττάρων. Η αυξημένη δραστηριότητα συνέβαλε σε σπειραματική υπερτροφία και υπερδιήθηση που σχετίζεται με προοδευτική DN (32).

Συγκεκριμένα, τα προαναφερθέντα μονοπάτια στοχεύτηκαν σε πολυάριθμες πειραματικές έρευνες για την επικύρωση της θεραπευτικής τους επίπτωσης στο DN (29,30,33,34). Οι Ziyadeh et al (33) ανέφεραν μια βελτίωση στους ρυθμούς σπειραματικής διήθησης που προκαλείται από το μονοκλωνικό αντίσωμα κατά του TGF σε διαβητικούς ποντικούς db/db (33). Επιπλέον, η μακροχρόνια θεραπεία διαβητικών αρουραίων που προκαλούνται από στρεπτοζοτοκίνη με AG825, έναν ειδικό αναστολέα του υποδοχέα της πρωτεϊνικής κινάσης της τυροσίνης ErbB-2, αναφέρθηκε ότι διορθώνει σημαντικά την υπεραντιδραστικότητα της διαχυμένης μεσεντέριας αγγειακής κλίνης και τη νορεπινεφρική ανταπόκριση της νορεπινεφρίνης. καρβαχόλη (29). Η αναστολή του TNF- με τη διαλυτή πρωτεΐνη σύντηξης του υποδοχέα TNF (TNFR)2, την ετανερσέπτη, βελτίωσε την εξέλιξη του πρώιμου σταδίου της DN σε ένα διαβητικό μοντέλο που δημιουργήθηκε στο ποντίκι KK-A(y), κυρίως μέσω της αναστολής του αντιφλεγμονώδους δράση της νεφρικής οδού TNF--TNFR2 (30). Επιπλέον, η ραπαμυκίνη, η πρώτη αναφερόμενη ένωση που αναστέλλει το mTOR, αναστέλλει την επαγόμενη από τη γλυκόζη φωσφορυλίωση της κινάσης p70S6 και του υποστρώματος της, της ριβοσωμικής πρωτεΐνης S6, σε μεσαγγειακά κύτταρα, μετριάζοντας τις μορφολογικές και λειτουργικές διαταραχές των διαβητικώννεφράσε μοντέλο ποντικιού T2DM (34).

Σε συμφωνία με τα ευρήματα της παρούσας μελέτης, οι Ciccacci et al (35) αποκάλυψαν τη συμμετοχή του miR-499a στην ευαισθησία στο DN σε μια ιταλική κοόρτη με ΣΔ2 (35). Τα αποτελέσματα της προαναφερθείσας μελέτης αποκάλυψαν ότι αυτή η συσχέτιση οφειλόταν στην επίδραση του miR-499a σε δύο αποπτωτικούς παίκτες, την καλσινευρίνη και την πρωτεΐνη που σχετίζεται με τη δυναμίνη, με την οποία η δυσρύθμιση του miR-499a προκάλεσε μιτοχονδριακή δυσλειτουργία και κυτταρική απόπτωση, η οποία μπορεί να συνέβαλε στην εμφάνιση ασθένειας (33). Συγκεκριμένα, οι τελευταίες διεργασίες έχουν εμπλακεί στο DN (36,37), το οποίο μπορεί εν μέρει να υποστηρίζει τη συσχέτιση της παραλλαγής miR-499a με το ESRD(τελικό στάδιονεφρώννόσος)ευαισθησία στην παρούσα κοόρτη. Ωστόσο, ένας αυξανόμενος αριθμός μελετών που περιλαμβάνουν μεγαλύτερες ανεξάρτητες κοόρτες με διαφορετικές εθνότητες απαιτείται για να επιβεβαιωθούν τα ευρήματα της παρούσας μελέτης

Συμπερασματικά, από όσο γνωρίζουμε, η παρούσα μελέτη ήταν η πρώτη που πρότεινε τον αντίκτυπο της παραλλαγής περιοχής σπόρων MIR499A A/G (rs3746444) στο ESRD που σχετίζεται με DN(τελικό στάδιονεφρώννόσος)ευαισθησία. Μπορεί να συμπεριληφθεί στη λίστα των γονιδίων μοριακής ευαισθησίας που μπορεί να υποστηρίξουν τη διαστρωμάτωση κινδύνου για τον ασθενή και την εφαρμογή πρώιμων προληπτικών μετρήσεων. Ωστόσο, αξίζει να σημειωθεί ότι η επίπτωση άλλων πιθανών παραγόντων σύγχυσης δεν μπορούσε να αποκλειστεί οριστικά, όπως η έκθεση σε διαφορετικούς περιβαλλοντικούς παράγοντες (όπως ο τύπος θεραπείας ή η διατροφή) και οι πρόσθετοι γενετικοί παράγοντες. Περαιτέρω μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος και μακροπρόθεσμες μελέτες αντιγραφής παρακολούθησης, ιδιαίτερα σε πληθυσμούς με διαφορετικές εθνότητες, δικαιολογούνται. Απαιτούνται επίσης λειτουργικές μελέτες για την επικύρωση του ρόλου του miR-499a στην αιτιολογία ESRD που σχετίζεται με DN.

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρώννόσος

Βιβλιογραφικές αναφορές:

1. Sattar A, Argyropoulos C, Weissfeld L, Younas N, Fried L, Kellum JA και Unruh M: Θνησιμότητα για όλες τις αιτίες και την αιτία που σχετίζεται με τον διαβήτη σε επικρατούντες ασθενείς αιμοκάθαρσης. BMC Nephrol 13: 130, 2012.
2. Al-Sayyari AA και Shaheen FA: Χρόνια τελικού σταδίουνεφρόασθένεια στη Σαουδική Αραβία. Ένα σκηνικό που αλλάζει γρήγορα. Saudi Med J 32: 339-346, 2011.
3. Mooyaart AL: Γενετικές συσχετίσεις στη διαβητική νεφροπάθεια. Clin Exp Nephrol 18: 197-200, 2014.
4. Lu Z, Liu N και Wang F: Επιγενετικές ρυθμίσεις στη διαβητική νεφροπάθεια. J Diabetes Res 2017: 7805058, 2017.
5. Schena FP, Serino G και Sallustio F: MicroRNAs inνεφρόασθένειες: νέοι πολλά υποσχόμενοι βιοδείκτες για διάγνωση και παρακολούθηση. Nephrol Dial Transplant 29: 755-763, 2014.
6. Felekkis K, Touvana E, Stefanou Ch, and Deltas C: MicroRNAs: Μια πρόσφατα περιγραφείσα κατηγορία κωδικοποιημένων μορίων που παίζουν ρόλο στην υγεία και τις ασθένειες. Ιπποκράτεια 14: 236-240, 2010.
7. Mashayekhi S, Saeidi Saedi H, Salehi Z, Soltanipur S και Mirzajani E: Επιδράσεις των πολυμορφισμών miR-27a, miR-196a2 και miR-146a στον κίνδυνο καρκίνου του μαστού. Br J Biomed Sci 75: 76-81, 2018.

8. Toraih EA, Hussein MH, Al Ageeli E, Riad E, Abdallah NB, Helal GM και Fawzy MS: Δομή και λειτουργικός αντίκτυπος της παραλλαγής περιοχής σπόρου στην οικογένεια γονιδίων MIR-499 στο βρογχικό άσθμα. Respir Res 18: 169, 2017.

9. Fawzy MS, Toraih EA, Hamed EO, Hussein MH και Ismail HM: Συσχέτιση της έκφρασης MIR-499a και της παραλλαγής περιοχής σπόρου (rs3746444) με καρδιαγγειακή νόσο σε Αιγύπτιους ασθενείς. Acta Cardiol 73: 131-140, 2018.

10. Wang WJ, Cai GY και Chen XM: Κυτταρική γήρανση, εκκριτικός φαινότυπος που σχετίζεται με τη γήρανση και χρόνιανεφρόνόσος. Oncotarget 8: 64520-64533, 2017.
11. Sluijter JP, van Mil A, van Vliet P, Metz CH, Liu J, Doevendans PA και Goumans MJ: Τα MicroRNA-1 και ‑499 ρυθμίζουν τη διαφοροποίηση και τον πολλαπλασιασμό σε προγονικά κύτταρα καρδιομυοκυττάρων που προέρχονται από τον άνθρωπο. Arterioscler Thromb Vasc Biol 30: 859‑868, 2010.
12. Ling TY, Wang XL, Chai Q, Lau TW, Koestler CM, Park SJ, Daly RC, Greason KL, Jen J, Wu LQ, et al: Ρύθμιση του καναλιού SK3 από τον δυνητικό ρόλο του microRNA-499 στην κολπική μαρμαρυγή . Heart Rhythm 10: 1001-1009, 2013.
13. Xu Z, Han Y, Liu J, Jiang F, Hu H, Wang Y, Liu Q, Gong Y και Li X: MiR-135b-5p και MiR-499a-3p προάγουν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση στην αθηροσκλήρωση απευθείας στόχευση MEF2C. Sci Rep 5: 12276, 2015.
14. Gene Ontology Consortium: The Gene Ontology Resource: Enriching a GOLD mine. Nucleic Acids Res 49: D325-D334, 2021.
15. Wang L, Zhang N, Pan HP, Wang Z και Cao ZY: Το MiR‑499‑5p συμβάλλει στην ηπατική αντίσταση στην ινσουλίνη καταστέλλοντας το PTEN. Cell Physiol Biochem 36: 2357-2365, 2015.
16. Toraih EA, Ismail NM, Toraih AA, Hussein MH και Fawzy MS: Πρόδρομος miR‑499a Παραλλαγή αλλά όχι miR‑196a2 σχετίζεται με την ευαισθησία στη ρευματοειδή αρθρίτιδα σε έναν αιγυπτιακό πληθυσμό. Mol Diagn Ther 20: 279-295, 2016.
17. Toraih EA, Fawz MS, Elgazzaz MG, Hussein MH, Shehata RH και Daoud HG: Συνδυασμένες αναλύσεις γονότυπου των πρόδρομων παραλλαγών miRNA196a2 και 499a με ευαισθησία στον καρκίνο του ήπατος και του νεφρού μια προκαταρκτική μελέτη. Asian Pac J Cancer Prev 17: 3369-3375, 2016.

18. Fawzy MS, Abu AlSel BT, Al Ageeli E, Al-Qahtani SA, Abdel-Daim MM και Toraih EA: Μακρά μη κωδικοποιητικά προφίλ έκφρασης RNA MALAT1 και microRNA-499a σε διαβητικούς ασθενείς με ESRD που υποβάλλονται σε διασταυρούμενη αιμοκάθαρση: ανάλυση τομής. Arch Physiol Biochem 126: 172-182, 2020.

19. Ghani AA, Al Waheeb S, Al Sahow A, and Hussain N: Βιοψία νεφρού σε ασθενείς με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2: Ενδείξεις και φύση των βλαβών. Ann Saudi Med 29: 450-453, 2009.

20. Nah EH, Cho S, Kim S και Cho HI: Σύγκριση της αναλογίας λευκωματίνης ούρων προς κρεατινίνη (ACR) μεταξύ της δοκιμασίας ταινιών ACR και της ποσοτικής δοκιμής στον προδιαβήτη και τον διαβήτη. Ann Lab Med 37: 28-33, 2017.
21. Fawzy MS και Beladi FIA: Συσχέτιση της έκφρασης της κυκλοφορούσας βιταμίνης D, VDBP και υποδοχέα βιταμίνης D με τη σοβαρότητα της διαβητικής νεφροπάθειας σε μια ομάδα ασθενών με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 2 της Σαουδικής Αραβίας. Clin Lab 64: 1623-1633, 2018.
22. Livak KJ και Schmittgen TD: Ανάλυση δεδομένων σχετικής γονιδιακής έκφρασης χρησιμοποιώντας ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο και τη μέθοδο 2(‑Δέλτα Δέλτα C(T)). Methods 25: 402-408, 2001.
23. Shastry BS: SNPs: Επίδραση στη λειτουργία και τον φαινότυπο των γονιδίων. Methods Mol Biol 578: 3-22, 2009.
24. Hoffman AE, Zheng T, Yi C, Leaderer D, Weidhaas J, Slack F, Zhang Y, Paranjape T και Zhu Y: MicroRNA miR‑196a‑2 και καρκίνος του μαστού: Μελέτη γενετικής και επιγενετικής συσχέτισης και λειτουργική ανάλυση. Cancer Res 69: 5970-5977, 2009.
25. Misra MK, Pandey SK, Kapoor R, Sharma RK και Agrawal S: Γενετικές παραλλαγές γονιδίων που σχετίζονται με MicroRNA στην ευαισθησία και την πρόγνωση του τελικού σταδίουνεφρώννόσοςκαι έκβαση νεφρικού αλλομοσχεύματος στους βόρειους Ινδιάνους. Pharmacogenet Genomics 24: 442-450, 2014.
26. Kato M, Yuan H, Xu ZG, Lanting L, Li SL, Wang M, Hu MC, Reddy MA, and Natarajan R: Ρόλος της μεσαγγειακής κυτταρικής δυσλειτουργίας με τη μεσολάβηση του Akt/FoxO3a TGF-beta1: Ένας νέος μηχανισμός που σχετίζεται σε διαβητικούςνεφρόνόσος. J Am Soc Nephrol 17: 3325-3335, 2006.
27. Qin G, Zhou Y, Guo F, Ren L, Wu L, Zhang Y, Ma X και Wang Q: Η υπερέκφραση του FoxO1 βελτιώνει τη δυσλειτουργία των μεσαγγειακών κυττάρων σε αρσενικούς διαβητικούς αρουραίους. ΜοΙ Endocrinol 29: 1080-1091, 2015.
28. Chang AS, Hathaway CK, Smithies O και Kakoki M: Μετασχηματιστικός αυξητικός παράγοντας-1 και διαβητική νεφροπάθεια. Am J Physiol Renal Physiol 310: F689‑F696, 2016.
29. Akhtar S, Yousif MH, Dhaunsi GS, Sarkhouh F, Chandrasekhar B, Attur S και Benter IF: Η ενεργοποίηση του ErbB2 και η κατάντη σηματοδότηση μέσω Rho κινασών και ERK1/2 συμβάλλει στην επαγόμενη από διαβήτη αγγειακή δυσλειτουργία. PLoS One 8: e67813, 2013.

30. Omote K, Gohda T, Murakoshi M, Sasaki Y, Kazuno S, Fujimura T, Ishizaka M, Sonoda Y και Tomino Y: Ρόλος της οδού TNF στην εξέλιξη της διαβητικής νεφροπάθειας σε ποντικούς KK-A(y). Am J Physiol Renal Physiol 306: F1335‑F1347, 2014.

31. Al-Lamki RS και Mayadas TN: Υποδοχείς TNF: Μονοπάτια σηματοδότησης και συμβολή στη νεφρική δυσλειτουργία.ΝεφρόInt 87: 281-296, 2015.
32. Gödel M, Hartleben B, Herbach N, Liu S, Zschiedrich S, Lu S, Debreczeni‑Mór A, Lindenmeyer MT, Rastaldi MP, Hartleben G, et al: Role of mTOR in podocyte function and diabetic nephropathy in human and ποντίκια . J Clin Invest 121: 2197-2209, 2011.

33. Ziyadeh FN, Hoffman BB, Han DC, Iglesias-De La Cruz MC, Hong SW, Isono M, Chen S, McGowan TA and Sharma K: Μακροπρόθεσμη πρόληψη της νεφρικής ανεπάρκειας, υπερβολικής έκφρασης γονιδίου μήτρας και σπειραματικής μεσαγγείου επέκταση με θεραπεία με μονοκλωνικό αντίσωμα αντιμετασχηματιστικού αυξητικού παράγοντα-βήτα σε διαβητικούς ποντικούς db/db. Proc Natl Acad Sci USA 97: 8015-8020, 2000.

34. Mori H, Inoki K, Masutani K, Wakabayashi Y, Komai K, Nakagawa R, Guan KL και Yoshimura A: Η οδός mTOR ενεργοποιείται σε μεγάλο βαθμό στη διαβητική νεφροπάθεια και η ραπαμυκίνη έχει ισχυρό θεραπευτικό δυναμικό. Biochem Biophys Res Commun 384: 471-475, 2009.
35. Ciccacci C, Latini A, Greco C, Politi C, D'Amato C, Lauro D, Novelli G, Borgiani P και Spallone V: Συσχέτιση μεταξύ πολυμορφισμού MIR499A και διαβητικής νευροπάθειας στον διαβήτη τύπου 2. J Επιπλοκές διαβήτη 32: 11-17, 2018.
36. Forbes JM and Thorburn DR: Μιτοχονδριακή δυσλειτουργία σε διαβητικούςνεφρόνόσος. Nat Rev Nephrol 14: 291-312, 2018.
37. Flemming NB, Gallo LA και Forbes JM: Μιτοχονδριακή δυσλειτουργία και σηματοδότηση σε διαβητικούςνεφρόασθένεια: Οξειδωτικό στρες και όχι μόνο. Semin Nephrol 38: 101-110, 2018.