Εξαγωγή πολυσακχαριτών από Cistanche Tubulosa με υπερήχους: Βελτιστοποίηση διαδικασίας, απομόνωση κλασμάτων, δομικός χαρακτηρισμός και αποτελέσματα κατά της κόπωσης

 

Περίληψη:Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο τη βελτιστοποίηση της διαδικασίας εκχύλισης των πολυσακχαριτών Cistanche tubulosa (CP) και τη διερεύνηση των δομικών τους χαρακτηριστικών και των επιδράσεων κατά της κόπωσης. Καθοδηγούμενα από πειράματα μονού παράγοντα και βελτιστοποιημένα με τη χρήση μεθοδολογίας επιφάνειας απόκρισης, οι βέλτιστες συνθήκες ήταν η υπερήχων διάρκειας 20 λεπτών, μια αναλογία διαλύτη προς υλικό 20:1 και ισχύς υπερήχων 220 W, που αποδίδει 8,55% CP. Στη συνέχεια, η χρωματογραφία στήλης κυτταρίνης παρήγαγε ένα ουδέτερο κλάσμα (CPN) και τρία όξινα κλάσματα (CPA-1, CPA-2, CPA-3). Μεταξύ αυτών, η CPN έδειξε την υψηλότερη ανάκτηση (40,3%), την υψηλότερη περιεκτικότητα σε υδατάνθρακες (39,5%) και ισχυρή αντιοξειδωτική δράση συγκρίσιμη με την CPA-2. Ως εκ τούτου, το CPN επιλέχθηκε για εις βάθος χαρακτηρισμό. Οι δομικές αναλύσεις αποκάλυψαν χαρακτηριστικές λειτουργικές ομάδες πολυσακχαρίτη, υπεροχή γλυκόζης και μαννόζης και στοιχεία για δύο συστατικά με σημαντικά διαφορετικά μοριακά βάρη. In vivo, η CPN παρέτεινε σημαντικά τον χρόνο κολύμβησης που φέρουν βάρος σε ποντίκια, μείωσε το άζωτο και το γαλακτικό άλας της ουρίας του αίματος στον ορό και αύξησε το ηπατικό γλυκογόνο, επιβεβαιώνοντας τη δράση κατά της κόπωσης. Αυτά τα ευρήματα παρέχουν μια επιστημονική βάση για την ανάπτυξη πολυσακχαριτών Cistanche tubulosa σε λειτουργικά προϊόντα κατά της κούρασης και σχετικές εμπορικές εφαρμογές.

Λέξεις-κλειδιά: Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa; μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης. διαδικασία εξαγωγής? δομικός χαρακτηρισμός; κατά της κούρασης· νέα οφέλη για την CP σε λειτουργικά τρόφιμα και θρεπτικά συστατικά

 

Εισαγωγή

Cistanche tubulosa (Schenk) Wight,ένα πολύτιμο φαρμακευτικό και βρώσιμο ομόλογο φυτό γνωστό ως «τζινσενγκ της ερήμου», έχει μακρά ιστορία χρήσης στην Κίνα [1]. Τα κύρια βιοδραστικά συστατικά του περιλαμβάνουν πολυσακχαρίτες, φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες και ιριδοειδή. Μεταξύ αυτών, οι πολυσακχαρίτες επιδεικνύουν σημαντικές φυσιολογικές λειτουργίες, όπως ανοσοτροποποιητικές [2], αντιοξειδωτικές [3], κατά της κόπωσης [4] και υπογλυκαιμικές επιδράσεις [5], παρουσιάζοντας ευρείες προοπτικές εφαρμογής σε φαρμακευτικά προϊόντα, προϊόντα υγείας και λειτουργικά τρόφιμα [6]. Οι παραδοσιακές μέθοδοι εκχύλισης πολυσακχαριτών (π.χ. εμβάπτιση σε ζεστό νερό και αναρροή) συχνά υποφέρουν από μεγάλη διάρκεια, χαμηλή απόδοση, υψηλή κατανάλωση ενέργειας και πιθανή βλάβη στη δομή και τη δραστηριότητα των πολυσακχαριτών [7-9]. Πέρα από την εκχύλιση με ζεστό νερό [10] και την αναρροή [11], οι Teng et al. [12] συνέκρινε την εξαγωγή υπερήχων, μικροκυμάτων και συνδυασμένης εξαγωγής υπερήχων-μικροκυμάτων, βρίσκοντας ότι η συνεργιστική μέθοδος υπερήχων-μικροκυμάτων απέδωσε την καλύτερη απόδοση (11,00%), 1,28% υψηλότερη από την εκχύλιση με ζεστό νερό, ακολουθούμενη από μικροκύματα και υπερήχους μόνο.

Ο διαχωρισμός και ο καθαρισμός των πολυσακχαριτών στοχεύει στη λήψη υψηλής καθαρότητας, δομικά καθορισμένων και βιοδραστικών μονοουσιών ή ειδικών κλασμάτων από ακατέργαστους πολυσακχαρίτες που περιέχουν πρωτεΐνες, νουκλεϊκά οξέα, λιπίδια και άλλες ακαθαρσίες. Ο Ailadan Maimaitiaili [11] αποχρωματίστηκε και αποπρωτεϊνοποίησε τους ακατέργαστους πολυσακχαρίτες Cistanche με μακροπορώδη ρητίνη AB‑8 και στη συνέχεια τους διαχώρισε με DEAE‑650M κυτταρίνη χρησιμοποιώντας απιονισμένο νερό και βαθμίδα NaCl, λαμβάνοντας έναν ουδέτερο και πέντε όξινους πολυσακχαρίτες. in vitro, το ουδέτερο κλάσμα έδειξε ανώτερη αντιοξειδωτική δράση. Επί του παρόντος, οι μελέτες βιοδραστικότητας στους πολυσακχαρίτες Cistanche επικεντρώνονται κυρίως σε αντιοξειδωτικά, αντιφλεγμονώδη και αντιγηραντικά αποτελέσματα [13], ενώ οι έρευνες κατά της κούρασης είναι σχετικά σπάνιες.

Ως νεότερη τεχνική εξαγωγής φυσικού προϊόντος, η υποβοηθούμενη με υπερήχους εκχύλιση (ΗΑΕ) προσφέρει σύντομο χρόνο εκχύλισης, υψηλή απόδοση, λειτουργική απλότητα και καθόλου ή χαμηλή θέρμανση, αποφεύγοντας έτσι τη θερμική υποβάθμιση των ευαίσθητων στη θερμότητα εξαρτημάτων και βελτιώνοντας την απόδοση και την καθαρότητα. έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για φυτικούς πολυσακχαρίτες [14]. Ωστόσο, οι συνθήκες των ΗΑΕ για την εξαγωγή πολυσακχαριτών Cistanche tubulosa (CP) απαιτούν περαιτέρω βελτιστοποίηση για τη μεγιστοποίηση της αποτελεσματικότητας. Η μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης (RSM), μια αποτελεσματική προσέγγιση σχεδιασμού και βελτιστοποίησης που βασίζεται σε μαθηματική μοντελοποίηση, επιτρέπει τη συνολική ανάλυση πολλαπλών παραγόντων και τις αλληλεπιδράσεις τους για τον προσδιορισμό των βέλτιστων παραμέτρων.

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε το RSM για να βελτιστοποιήσουμε τη διαδικασία των ΗΑΕ για την CP, διαχωρίσαμε και προσδιορίσαμε τους προκύπτοντες ακατέργαστους πολυσακχαρίτες, συγκρίναμε τις in vitro αντιοξειδωτικές δράσεις των κλασμάτων και με βάση τα αποτελέσματα κατά της κόπωσης in vivo που αξιολογήθηκαν με την ισχυρότερη αντιοξειδωτική δράση. Στόχος είναι η παροχή επιστημονικής και τεχνικής υποστήριξης για τη χρήση προστιθέμενης αξίας των πόρων Cistanche tubulosa και η επιτάχυνση της μετάφρασης σε λειτουργικά προϊόντα για τη βιομηχανία ευεξίας.

Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa: Οφέλη

 

 

 

Λίστα πλεονεκτημάτων Cistanche

 

 

Λάβετε Υψηλούς Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa

 

 

1 Υλικά και μέθοδοι

1.1 Υλικά και όργανα

Cistanche tubulosa was purchased from the Urumqi dried fruit market; polysaccharides were prepared in-house at Xinjiang Agricultural University. Absolute ethanol, acetone, and ether were analytical grade (Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd.). DPPH was from Shanghai Ruji Biotechnology Development Co., Ltd. ABTS and shiitake polysaccharide (purity >Το 98%) ήταν από το Solarbio (Πεκίνο).

Κύριος εξοπλισμός: Μύλος XL‑02A (Yechang Machinery Co., Ltd.); Ψηφιακό λουτρό νερού σταθερής θερμοκρασίας HH‑S (Jiangsu Jintan Medical Instrument Factory). Φαρμακευτικός επεξεργαστής υπερήχων JBT/C‑YCL400T/3P(D) (Jining Jinbait Special Engineering Machinery Co., Ltd.); Μονάδα διήθησης κενού VP50 (Beijing Labtech); Περιστροφικός εξατμιστής RE‑52B (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory). Φυγόκεντρος 80-1 (Jintan Hengfeng Instrument Factory); Φασματοφωτόμετρο UV‑2550 (Shimadzu, Σαγκάη).

Ζώα: Πενήντα αρσενικά ποντίκια Kunming SPF, σωματικού βάρους 20,00±2,00 g, ηλικίας 3–4 εβδομάδων, που αγοράστηκαν από το Κέντρο Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (άδεια SYXK‑Xin 2024-0001).

 

Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa: Οφέλη

 

 

1.2 Μέθοδοι

1.2.1 Διαδικασία εκχύλισης πολυσακχαριτών

Οι φέτες Cistanche κονιοποιήθηκαν και πέρασαν από κόσκινο 50 mesh. Η σκόνη τοποθετήθηκε σε φιάλη με στρογγυλό πυθμένα, αναμίχθηκε με 8 όγκους αιθανόλης 80%, θερμάνθηκε υπό κάθετο ψυκτήρα στους 90 βαθμούς για 2 ώρες και διηθήθηκε. Το υπόλειμμα ξηράνθηκε στον αέρα. Προστέθηκε απεσταγμένο νερό στο ξηρό υπόλειμμα και εκχυλίστηκε υπό υπερήχους. το εκχύλισμα διηθήθηκε, το διήθημα συγκρατήθηκε και το υπόλειμμα εκχυλίστηκε εκ νέου μία φορά. Τα δύο διηθήματα συνδυάστηκαν και συμπυκνώθηκαν στο ένα τέταρτο του αρχικού όγκου. Τρεις όγκοι απόλυτης αιθανόλης προστέθηκαν στο συμπύκνωμα, αφέθηκαν σε ηρεμία στους 4 βαθμούς για 12 ώρες και διηθήθηκαν υπό κενό για να συλλεχθεί το ίζημα. Το ίζημα πλύθηκε διαδοχικά με απόλυτη αιθανόλη, ακετόνη και αιθέρα, ξηράνθηκε και ζυγίστηκε για να ληφθεί ακατέργαστο CP.

 

Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa: Οφέλη

 

1.2.2 Πειράματα ενός παράγοντα

1.2.2.1 Επίδραση της αναλογίας διαλύτη προς υλικό στην απόδοση CP

Παρασκευάστηκαν πέντε μερίδες σκόνης Cistanche (4 g η καθεμία). Ο χρόνος εκχύλισης και η ισχύς υπερήχων καθορίστηκαν στα 20 λεπτά και 175 W. Οι αναλογίες διαλύτη προς υλικό 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 και 30:1 (mL:g) δοκιμάστηκαν για τις επιδράσεις τους στην απόδοση CP. Κάθε πείραμα πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν.

 

1.2.2.2 Επίδραση της ισχύος υπερήχων στην απόδοση CP

Πέντε μερίδες σκόνης (4 g το καθένα) εκχυλίστηκαν με τη βέλτιστη αναλογία διαλύτη προς υλικό που προσδιορίστηκε στο 1.2.2.1, με χρόνο εκχύλισης καθορισμένο στα 20 λεπτά. Δοκιμάστηκαν επίπεδα ισχύος υπερήχων 125, 150, 175, 200 και 225 W. Πραγματοποιήθηκαν τριπλά πειράματα.

 

1.2.2.3 Επίδραση του χρόνου υπερήχων στην απόδοση CP

Πέντε μερίδες σκόνης (4 g το καθένα) εκχυλίστηκαν με τη βέλτιστη αναλογία διαλύτη προς υλικό (από 1.2.2.1) και βέλτιστη υπερηχητική ισχύ (από 1.2.2.2). Δοκιμάστηκαν χρόνοι υπερήχων 10, 15, 20, 25 και 30 λεπτών. Κάθε συνθήκη εκτελέστηκε εις τριπλούν.

 

1.2.3 Μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης (RSM)

Με βάση τα αποτελέσματα ενός παράγοντα, χρησιμοποιήθηκε ένας σχεδιασμός Box–Behnken με την απόδοση CP ως απόκριση και τον χρόνο υπερήχων, την αναλογία διαλύτη προς υλικό και την ισχύ υπερήχων ως παράγοντες. Η βελτιστοποίηση RSM πραγματοποιήθηκε στο Design-Expert 8 με σχεδιασμό τριών παραγόντων, τριών επιπέδων (βλ. Πίνακα 1). Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

 

Πολυσακχαρίτες Cistanche tubulosa: Οφέλη

 

1.2.4 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε πολυσακχαρίτες

Η περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες μετρήθηκε με τη χρωματομετρική μέθοδο θειικού οξέος-ανθρόνης [15]. Ανθρόνη (20 g) διαλύθηκε σε πυκνό θειικό οξύ και συμπληρώθηκε στα 100 mL για να παρασκευαστεί ένα διάλυμα 0,2 g/mL. Μια κατάλληλη ποσότητα CP διαλύθηκε και αραιώθηκε στα 100 mL. Ένα κλάσμα του 1 mL αναμίχθηκε με 5 mL 0,2 g/mL ανθρονο-θειικού οξέος, στροβιλίστηκε, αφέθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά, θερμάνθηκε σε λουτρό νερού 90 μοιρών για 15 λεπτά, ψύχθηκε και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 585 nm. Η γλυκόζη χρησιμοποιήθηκε για την προετοιμασία μιας τυπικής καμπύλης: Y=0.0081X + 0.0176 (R²=0.9991). Η απορρόφηση του δείγματος αντικαταστάθηκε στην καμπύλη για τον υπολογισμό της περιεκτικότητας σε πολυσακχαρίτες.

 

1.2.5 Υπολογισμός της απόδοσης πολυσακχαρίτη

Η απόδοση πολυσακχαρίτη υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τυπικό τύπο (μάζα πολυσακχαρίτη που λαμβάνεται σε σχέση με τη μάζα της πρώτης ύλης), χρησιμοποιώντας τη μετρούμενη περιεκτικότητα πολυσακχαρίτη.

 

1.2.6 Καθαρισμός πολυσακχαριτών

Crude CP extract was prepared under the optimized conditions. Following Wang et al. [16], Sevag reagent (chloroform:n‑butanol = 4:1, v/v) was used for deproteinization with vigorous shaking for 10 min, followed by centrifugation; the supernatant was collected and the process repeated three times. Eight volumes of 95% ethanol were added to the filtrate and left at 4 °C for 24 h. After centrifugation (8000 r/min, 10 min), the precipitate was collected and freeze‑dried to obtain crude CP. A 10 mg/mL solution was prepared by dissolving 100 mg crude CP in 10 mL distilled water, centrifuged at 7000 r/min for 10 min to remove insolubles, and filtered through a 0.45 μm membrane. The solution was loaded onto a DEAE‑52 cellulose column and eluted stepwise with distilled water and 0.1, 0.3, and 0.5 mol/L NaCl. Eluates were monitored by anthrone–sulfuric acid assay; fractions with absorbance >1,0 συνενώθηκαν, συμπυκνώθηκαν, υποβλήθηκαν σε διαπίδυση, λυοφιλοποιήθηκαν και ζυγίστηκαν για να ληφθούν διαφορετικά κλάσματα πολυσακχαρίτη. Η απόδοση (Y) υπολογίστηκε ως:
Y = (C × V × D) / (m × P)
όπου C είναι η συγκέντρωση πολυσακχαρίτη (mg/mL) του καθαρισμένου διαλύματος στόχου, V είναι ο όγκος (mL), D είναι παράγοντας αραίωσης, m είναι η μάζα του ακατέργαστου CP (g) και P είναι η περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτη του ακατέργαστου CP.

 

1.2.7 Σύγκριση αντιοξειδωτικών δράσεων των κλασμάτων

1.2.7.1 Καθαρισμός ριζών DPPH

Ακολουθώντας τους Jiang et al. [17] με τροποποιήσεις, παρασκευάστηκε πρόσφατα ένα διάλυμα εργασίας DPPH 0,2 mmol/L. Διαλύματα κλασμάτων στα 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 και 1,0 mg/mL (1 mL έκαστο) αναμίχθηκαν το καθένα με 2 mL DPPH, στροβιλίστηκαν και επωάστηκαν στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 517 nm (Ai). Κάθε δοκιμή τριπλασιάστηκε και η βιταμίνη C (Vc) σε ταιριαστές συγκεντρώσεις χρησίμευσε ως θετικός έλεγχος. Ο ρυθμός σάρωσης σχεδιάστηκε σε συνάρτηση με τη συγκέντρωση και υπολογίστηκε από:
Καθαρισμός DPPH (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
όπου το Ai είναι A(2 mL DPPH + 1 mL δείγμα/Vc), το Aj είναι A(2 mL αιθανόλης + 1 mL δείγμα/Vc) και το A0 είναι A(1 mL νερό + 2 mL DPPH).

 

1.2.7.2 Καθαρισμός ριζών ABTS

Ακολουθώντας τους Xu et al. [18] με τροποποιήσεις, 1 mL δείγματος στα 0,2-1,0 mg/mL αναμείχθηκε με 4 mL διαλύματος ABTS, στροβιλίστηκε και επωάστηκε στο σκοτάδι για 6 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 734 nm, εις τριπλούν. Το Vc σε ταιριαστές συγκεντρώσεις ήταν θετικός έλεγχος. Ο ρυθμός σάρωσης σχεδιάστηκε σε συνάρτηση με τη συγκέντρωση και υπολογίστηκε από:
ABTS scavenging (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
όπου το Ai είναι A(1 mL δείγμα/Vc + 4 mL ABTS), το Aj είναι A(1 mL δείγμα/Vc + 4 mL νερό) και το A0 είναι A(1 mL νερό + 4 mL ABTS).

 

1.2.8 Δομική ανάλυση κλασμάτων πολυσακχαρίτη

1.2.8.1 Φασματοσκοπία υπέρυθρων μετασχηματισμού Fourier (FTIR)

Ακολουθώντας τους Zhang WenChao et al. [19] με τροποποιήσεις, 2 mg προκατεργασμένου πολυσακχαρίτη αναμίχθηκαν με 200 mg ξηρού KBr, αλέστηκαν και συμπιέστηκαν σε σφαιρίδια. Συλλέχθηκαν φάσματα από 400-4000 cm-1 σε ανάλυση 4 cm-1 με 32 σαρώσεις.

 

1.2.8.2 Προσδιορισμός μοριακού βάρους

Μετά από τον Zhang Jiayuan [20] με τροποποιήσεις, 5 mg δείγματος διαλύθηκαν σε 0,05 mol/L NaCl σε 5 mg/mL, φυγοκεντρήθηκαν και διηθήθηκαν μέσω μεμβράνης 0,22 μm. Το μοριακό βάρος προσδιορίστηκε με HPGPC με δύο υδατοδιαλυτές στήλες SEC που βασίζονται σε πολυμερή (8 mm × 300 mm) σε σειρά, ανιχνευτής: Waters RI; κινητή φάση: 0,05 Μ NaCl; ροή: 0,50 mL/min; θερμοκρασία στήλης: 40 βαθμοί ; ένεση: 30 μL. Οι καμπύλες βαθμονόμησης ήταν:
Lg Mp–RT: y=−0,1359x + 9.4523 (R²=0.9974)
Lg Mw–RT: y=−0,1375x + 9.5035 (R²=0.9976)
Lg Mn–RT: y=−0,1368x + 9.4749 (R²=0.9971)
Τα μοριακά βάρη υπολογίστηκαν ανάλογα.

 

1.2.8.3 Σύνθεση μονοσακχαρίτη

Ακολουθώντας τους Naxin S et al. [21], τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία και αναλύθηκαν με χρωματογραφία ιόντων/HPLC. Πρότυπα (5 mg ραμνόζης, αραβινόζης, γαλακτόζης, γλυκόζης, ξυλόζης, μαννόζης, γαλακτουρονικού οξέος, γλυκουρονικού οξέος, HCI γλυκοζαμίνης, HCl γαλακτοζαμίνης, 10 mg φουκόζης) διαλύθηκαν και έγιναν στα 10 mL, και στη συνέχεια αραιώθηκαν σε μια σειρά. Η χρωματογραφία χρησιμοποίησε σύστημα Thermo U3000 με στήλη Agilent ZORBAX Eclipse XDB‑C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm). κινητή φάση: ρυθμιστικό ακετονιτρίλιο:φωσφορικό (12 g/L KH2PO4, pH ρυθμισμένο στο 6,8 με 2 Μ NaOH)=17:83 (v/v), ισοκρατικό; ροή 0,8 mL/min; στήλη 30 μοίρες ; ανίχνευση 250 nm; ένεση 10 μL.

 

1.2.9 Πειράματα κατά της κόπωσης κλασμάτων πολυσακχαρίτη

1.2.9.1 Ομαδοποίηση και χορήγηση ζώων

Έγκριση δεοντολογίας Όχι. 2023048. Μετά από 3 ημέρες εγκλιματισμού, 50 ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν σε πέντε ομάδες (n=10): τυφλό δείγμα αναφοράς. θετικός έλεγχος (πολυσακχαρίτης shiitake 300 mg/kg). κλάσμα χαμηλής δόσης (150 mg/kg); κλάσμα μεσαίας δόσης (300 mg/kg); κλάσμα υψηλής δόσης (600 mg/kg). Τα κλάσματα και οι έλεγχοι χορηγήθηκαν με καθετήρα για 15 ημέρες. τα ποντίκια είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό.

 

1.2.9.2 Δοκιμή κολύμβησης με βάρος

Πέντε ώρες μετά τον τελευταίο καθετήρα, ένα βάρος μολύβδου ίσο με το 7% του σωματικού βάρους προσαρτήθηκε σε κάθε ουρά ποντικού. Τα ποντίκια κολύμπησαν σε δεξαμενή βάθους 60 cm σε 30±2 μοίρες. Ως εξαντλητικός χρόνος κολύμβησης καταγράφηκε ο χρόνος από τη βύθιση μέχρι τη στιγμή που το κεφάλι παρέμεινε βυθισμένο για 10 δευτερόλεπτα χωρίς να βγει ξανά στην επιφάνεια.

 

1.2.9.3 Ουρικό άζωτο αίματος (BUN)

Μετά την κολύμβηση, το αίμα συλλέχθηκε μέσω του κόγχου κόλπου σε ηπαρινισμένους σωλήνες και φυγοκεντρήθηκε στις 3000 r/min για 10 λεπτά. Το BUN μετρήθηκε αυστηρά ανά οδηγίες κιτ.

 

1.2.9.4 Γαλακτικό αίμα

Ο ορός (20 μL) υποβλήθηκε σε επεξεργασία ανά οδηγίες κιτ. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 530 nm (μήκος διαδρομής 1 cm) με διπλά απεσταγμένο νερό ως μηδέν, και υπολογίστηκε η συγκέντρωση γαλακτικού.

 

1.2.9.5 Ηπατικό γλυκογόνο

Αμέσως μετά τη συλλογή αίματος, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Τα συκώτια αποκόπηκαν, ξεπλύθηκαν με φυσιολογικό ορό, ξηράνθηκαν με στυπώματα και 80 mg ιστού τοποθετήθηκαν σε ένα σωλήνα με 3 όγκους αλκαλίου (ρΗ 8,0). Τα δείγματα βράστηκαν για 20 λεπτά, ψύχθηκαν και το γλυκογόνο προσδιορίστηκε ποσοτικά ανά οδηγίες κιτ.

 

1.2.10 Ανάλυση δεδομένων

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS 17.1 και αναφέρθηκαν ως μέσος όρος ± SD (X±S). Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA με δοκιμή ομοιογένειας διακύμανσης. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό. Οι εικόνες προετοιμάστηκαν στο Origin 2021 και στο GraphPad Prism 9.

Εμπορική μετάφραση και τα κυριότερα σημεία εφαρμογής

Τοποθέτηση νέων πλεονεκτημάτων: Ο βελτιστοποιημένος ουδέτερος πολυσακχαρίτης Cistanche (CPN) επέδειξε διπλά αντιοξειδωτικά και αντι-κοπιαστικά αποτελέσματα-παρατεταμένη αντοχή, μειωμένο BUN και γαλακτικό και αυξημένους ισχυρισμούς υποστήριξης του ηπατικού γλυκογόνου όπως "υποστηρίζει την αντοχή", "βοηθά στη μείωση της κόπωσης που προκαλείται από την άσκηση" και "αντιοξειδωτική υποστήριξη".

Μορφές προϊόντων: Έτοιμα προς ανάμιξη ροφήματα αντοχής, σφηνάκια τζελ, λειτουργικά κόμμεα και κάψουλες. Συνδυάστε το CPN με ηλεκτρολύτες, βιταμίνες Β και υδατάνθρακες χαμηλού GI για αθλητικά σκευάσματα. ή με τους παραδοσιακούς φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες Cistanche για συνεργιστικές SKU «ενέργειας + ανάκτησης».

Οδηγίες επεξεργασίας: Οι συνθήκες των ΗΑΕ (20 λεπτά, αναλογία διαλύτη 20:1, 220 W) είναι κλιμακωτές και ενεργειακά αποδοτικές. Η κλασμάτωση DEAE-52 αποδίδει ένα ουδέτερο κλάσμα μολύβδου (CPN) με υψηλότερη περιεκτικότητα και δραστηριότητα σε υδατάνθρακες, επιτρέποντας συνεπή τυποποίηση (π.χ. μεγαλύτερο ή ίσο με 39% υδατάνθρακες, δακτυλικό αποτύπωμα HPGPC με διτροπικό Mw).

Συμμόρφωση και τεκμηρίωση: Χρησιμοποιήστε τα παρόντα in vivo αποτελέσματα για να τεκμηριώσετε τους ισχυρισμούς δομής/λειτουργίας. επεκτείνεται με πιλοτικές δοκιμές σε ανθρώπους που μετρούν το χρόνο μέχρι την εξάντληση, την κινητική του γαλακτικού οξέος και την αντιληπτή προσπάθεια. Εφαρμόστε τις δηλώσεις εκχύλισης και διαλύτη με καθαρή ετικέτα.

Ποιοτικός έλεγχος: Υιοθετήστε τις ζώνες δεικτών FTIR, τις αναλογίες μονοσακχαριτών (κυρίως γλυκόζη/μαννόζη) και το προφίλ μοριακού βάρους HPGPC ως κριτήρια απελευθέρωσης. Αντιοξειδωτικές δοκιμασίες (DPPH/ABTS) ως έλεγχοι δραστηριότητας κατά τη διαδικασία.

 

Συγγραφείς και αναφορές συγγραφέων (επίσημη πηγή)

DUAN Jihua1, HAN Haixia2,+, ZHAO Wenyan3, JIA Mingxi2, SUN Jingjing2, ZHOU Jixiang2, SONG Suqin4, ZHU Dongliang3*, BAO Xiaowei2*
(1. Κέντρο Ε&Α Τροφίμων Xinjiang Sikai (Co., Ltd.), Changji, Xinjiang 831100; 2. College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China. 830052;

Αναφορές
[1] ZHAO Hongting, XIN Guoxiong, GUO Yuan. Η ερευνητική πρόοδος του Cistanchis sinensis, ενός παραδοσιακού κινέζικου φαρμάκου με την ίδια πηγή τροφής και φαρμάκων. Chinese Herbal Medicine, 2025, 56(09): 3316–3329.
[2] YANG MH, CHEN RH, ZHOU X, et al. Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τις φαρμακολογικές επιδράσεις και τον μηχανισμό των πολυσακχαριτών. Starch-Stärke, 2024, 76(9–10): 2300168.
[3] MU S, YANG WJ, HUANG G L. Αντιοξειδωτικές δραστηριότητες και μηχανισμοί πολυσακχαριτών. Chem Biol Drug Des, 2021, 97(3): 628–632.
[4] ZHANG SS, LIU B, YAN GY, et al. Χημικές ιδιότητες και δράση κατά της κόπωσης του πολυσακχαρίτη. J Food Biochem, 2022, 46(1): e14015.
[5] FU Y, WANG LW, JIANG GCA, et al. Αντιδιαβητική δράση πολυσακχαριτών από var. Li. Foods, 2022, 11(10): 1464.
[6] CHEN Changmao, GAZANG Zhaxi, WANG Jie, et al. Πρόοδος έρευνας για τα δραστικά συστατικά και τον φαρμακολογικό μηχανισμό του Cistanchiakis. Chinese Herbal Medicine, 2025, 56(12): 4464–4477.
[7] WANG Wenli, ZHANG Jinling, WEI Yaning, et al. Πρόοδος εκχύλισης, καθαρισμού και βιοδραστικότητας φυσικών πολυσακχαριτών. Food Industry Science and Technology, 2022, 43(22): 470–480.
[8] GONG P, WANG SY, LIU M, et al. Μέθοδοι εκχύλισης, χημικοί χαρακτηρισμοί και βιολογικές δραστηριότητες πολυσακχαριτών μανιταριών: Μια μίνι ανασκόπηση. Carbohydr Res, 2020, 494: 108037.
[9] CHEN X, LIU YB, DENG Y, et al. Πρωτογενής μελέτη για την επίδραση των μεθόδων εκχύλισης στις ιδιότητες και τις δραστηριότητες των πολυσακχαριτών. Molecules, 2025, 30(1): 148.
[10] JIANG Huabin, LIU Lisha, ZHANG Qing, et al. Ταυτόχρονος διαχωρισμός και καθαρισμός σωληνοειδών φαινυλαιθανοειδών γλυκοζιτών και πολυσακχαριτών Cistanche με τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης. Επιστήμη και Τεχνολογία Τροφίμων, 2019, 44(07): 229–234.
[11] ΜΑΪΜΑΪΤΙΑΙΛΗ Αϊλαντάν. Μελέτη για την εκχύλιση, το διαχωρισμό και τον καθαρισμό πολυσακχαριτών από το Herba Cistanche και την in vitro ανοσολογική τους δράση. Urumqi: Ιατρικό Πανεπιστήμιο Xinjiang, 2021.
[12] TENG Liping, MU Long, LUO Feng, et al. Μέθοδος για την εκχύλιση ακατέργαστων πολυσακχαριτών από το Cistanche tubulosa και η επίδρασή της στον καθαρισμό της ρίζας διφαινυλίου. Guizhou Agricultural Sciences, 2011, 39(01): 66–68.
[13] BAI Dongwen. Επιδράσεις εκχυλισμάτων λουλουδιών Pedicularis και Cistanche στον ιππόκαμπο και τη μικροχλωρίδα του εντέρου υπό υποξία μεγάλου υψομέτρου. Urumqi: Xinjiang Agricultural University, 2023.
[14] JING YS, ZHANG SL, LI MS, et al. Εκχύλιση, δομή και βιοδραστηριότητες πολυσακχαριτών. Foods, 2022, 11(14): 2126.
[15] GUO Xiaolei, ZHU Sichao, ZHAI Xufeng, et al. Σύγκριση μεθόδων θειικής ανθρόνης και θειικής φαινόλης για τον προσδιορισμό των πολυσακχαριτών Ganoderma. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2010, 28(09): 2000–2002.
[16] WANG Senzheng, SUN Yongfang, ZHOU Ye, et al. Βελτιστοποίηση της εκχύλισης, του δομικού χαρακτηρισμού και των επιδράσεων στη λειτουργική δυσκοιλιότητα του πολυσακχαρίτη Wen Curcuma. Έρευνα και Ανάπτυξη Φυσικών Προϊόντων: 1–17.
[17] JIANG Zhixuan, CAI Zifu, DONG Sisi, et al. Χημική τροποποίηση πολυσακχαριτών φραγκόσυκου και ανάλυση αντιοξειδωτικών και υπογλυκαιμικών δράσεων. Επιστήμη και Τεχνολογία Βιομηχανίας Τροφίμων: 1–20. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025020006.
[18] XU Qing, YANG Jiang, LI Anding. Σύγκριση των κύριων λειτουργικών συστατικών και των αντιοξειδωτικών δράσεων των φρούτων του πάθους διαφορετικής προέλευσης. Modern Food Science and Technology, 2023, 39(08): 94–102.
[19] ZHANG CW, ZOU YF, ZOU Y, et al. Εκχύλιση πολυσακχαρίτη με τη βοήθεια υπερήχων από Paeoniae Radix alba: βελτιστοποίηση εκχύλισης, δομικός χαρακτηρισμός και αντιοξειδωτικός μηχανισμός in vitro. Int J Biol Macromol, 2024, 268: 131816.
[20] ZHANG Jiayuan. Απομόνωση και καθαρισμός πολυσακχαριτών τσουκνίδας, δομική ταυτοποίηση και υπογλυκαιμική δράση. Xi'an: Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας Shaanxi, 2021.
[21] SUN NX, ZHAO YN, YIN M Y. Εκχύλιση, καθαρισμός, δομή και βιοδραστηριότητες πολυσακχαριτών από maitake: Μια ανασκόπηση. J Food Meas Charact, 2023, 17(6): 6200–6213.
[22] WAN Yue, QI Jiying, ZENG Hong, et al. Βελτιστοποίηση της υποβοηθούμενης από υπερήχους εκχύλισης πολυσακχαριτών shiitake με μεθοδολογία επιφάνειας απόκρισης. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(01): 79–85.
[23] LI Li, ZHANG Sai, HE Qiang, et al. Εφαρμογή μεθοδολογίας επιφάνειας απόκρισης στον πειραματικό σχεδιασμό και βελτιστοποίηση. Εργαστηριακή Έρευνα και Εξερεύνηση, 2015, 34(08): 41–45.
[24] MA Qvhuan, SHI Xiaofeng, SHEN Wei, et al. Βελτιστοποίηση της εκχύλισης πολυσακχαρίτη με βελόνα κέδρου με ανάλυση επιφάνειας απόκρισης. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 33(03): 1106–1110.
[25] ZHAO Jinsong, PENG Jingjing, ZHANG Liang, et al. Συγκριτική μελέτη για τη βελτίωση των μη γεύσεων στο baijiu χρησιμοποιώντας διαφορετικούς ενεργούς άνθρακες. China Brewing, 2025, 44(09): 179–186.
[26] WU Huiqiong, WU Hailian, XIAO Nan, et al. Γαλακτώματα συλλογής πτητικού λαδιού Mosla chinensis που σταθεροποιούνται συνεργιστικά από σύνθετα σωματίδια νανοκρυσταλλικής κυτταρίνης/αμύλου καλαμποκιού. Επιστήμη και Τεχνολογία Βιομηχανίας Τροφίμων: 1–27. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025060255.
[27] WU Shuang. Επίδραση του φουκοϊδάνης στη σταθερότητα των γαλακτωμάτων Pickering που βασίζονται σε πρωτεΐνες. Dalian: Dalian Polytechnic University, 2022.
[28] LIN Ying, ZHENG Meixia, CHEN Changmei, et al. Εκχύλιση δύο φάσεων πολυσακχαριτών μαύρου τσαγιού γιασεμιού με τη βοήθεια υπερήχων και αντιοξειδωτική δράση. Chemistry and Bioengineering, 2025, 42(09): 35–42.
[29] WANG Yihan, XIE Qingyun, TENG Jianwen, et al. Επιδράσεις απομόνωσης και καθαρισμού στη δομή του πολυσακχαρίτη Tremella και στη δράση μείωσης των λιπιδίων in vitro. Food Industry Technology, 2025, 46(05): 81–90.
[30] BAN Shidong, ZONG Chunyang, WANG Xiaodan, et al. Βελτιστοποίηση της ζύμωσης Lactobacillus plantarum του Polygonatum για ενίσχυση της απόδοσης πολυσακχαρίτη και της in vitro πρεβιοτικής δραστηριότητας. Επιστήμη και Τεχνολογία Βιομηχανίας Τροφίμων: 1–18. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025030047.
[31] MO Yunfeng, CHEN Zixuan, PENG Junying, et al. Επιδράσεις των διαδικασιών ξήρανσης στις ιδιότητες της σκόνης κολοκύθας και στην αντιοξειδωτική ικανότητα. Επιστήμη και Τεχνολογία Βιομηχανίας Τροφίμων: 1–19. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025040072.