Οι ολικοί γλυκοζίτες του Cistanche Deserticola προάγουν την αποκατάσταση της νευρολογικής λειτουργίας προκαλώντας νευροαγγειακή αναγέννηση μέσω της οδού Nrf- 2/Keap-1 σε αρουραίους MCAO/R-Ⅰ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Τα εγκεφαλικά θεωρούνται η κύρια αιτία θανάτου και αναπηρίας στον κόσμο. Σχεδόν το 87% όλων των περιπτώσεων εγκεφαλικού προκαλούνται από ισχαιμικό εγκεφαλικό. Επί του παρόντος, ο πιο αποτελεσματικός παράγοντας και το μόνο εγκεκριμένο από την FDA φάρμακο που χρησιμοποιείται γιαθεραπεία ισχαιμικού εγκεφαλικούείναι ενεργοποιητής ανασυνδυασμένου πλασμινογόνου ιστού. Ωστόσο, ένας μεγάλος αριθμός ασθενών με εγκεφαλικό αποτυγχάνει να ανταποκριθεί σε αυτό το φάρμακο, λόγω του στενού θεραπευτικού του χρονικού περιθωρίου και του σοβαρού κινδύνου αιμορραγικών επιπλοκών. Μια σημαντική πρόκληση της θρομβολυτικής θεραπείας είναι ο τραυματισμός ισχαιμίας/επαναιμάτωσης (I/R), που θεωρείται κύρια αιτία εγκεφαλικής βλάβης και καταστροφής της λειτουργίας. Η επαναιμάτωση μετά από εγκεφαλική ισχαιμία αυξάνει τον κίνδυνο εγκεφαλικής αιμορραγίας ενώ οδηγεί σε νευροαγγειακή βλάβη και παράγει υπερβολικά αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) που βλάπτουν τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό. Αρκετές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι η διαταραχή του BBB είναι μια κύρια αιτία της παθογένεσης του ισχαιμικού εγκεφαλικού.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΤΗ ΘΕΡΑΠΕΙΑ ΙΣΧΑΙΜΙΚΟ ΕΓΕΦΑΛΕΙΟ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Το BBB αποτελείται κυρίως από ενδοθηλιακά κύτταρα, περικύτταρα, αστροκύτταρα, νευρώνες και τις βασικές μεμβράνες. Τα βασικά συστατικά του BBB είναι εγκεφαλικά μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα που ενώνονται με σφιχτές συνδέσεις, περιορίζοντας έτσι τα εξωγενή μόρια στον εγκέφαλο. Οι παθολογικές αλλοιώσεις των σφιχτών συνδέσμων-ιδιαίτερα η ocludin, claudin-5 και zonula occludens-1 (ZO-1)- επηρεάζουν σημαντικά τη λειτουργία BBB κατά τη διάρκεια ενός ισχαιμικού εγκεφαλικού, ιδιαίτερα τη διαπερατότητα του φραγμού. Κατά τις περιόδους I/R, το υπερβολικό ROS είναι ένας από τους κύριους παράγοντες που οδηγεί στην άμεση βλάβη των νευρώνων του εγκεφάλου. Η υπερπαραγωγή ROS οδηγεί σε υποβάθμιση ορισμένων συνδέσμων και διαταραχή του BBB, που έχει ως αποτέλεσμα εξωγενή μόρια να εισέρχονται στον εγκέφαλο μέσω του BBB, οδηγώντας σε επιδείνωση της εγκεφαλικής βλάβης. Ως εκ τούτου, η προστασία του BBB από αντιοξειδωτικά έχει θεωρηθεί ως ένας πιθανός τρόπος για την πρόληψη τραυματισμού επαναιμάτωσης.

Εκτός από τη διάσπαση του BBB, το I/R μπορεί να οδηγήσει σε νευροαγγειακή βλάβη και νευρωνικό θάνατο. Κατά τη διάρκεια ενός εγκεφαλικού, αυξημένος θάνατος νευρωνικών κυττάρων μπορεί να προκύψει από οξειδωτικό στρες και πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι το ROS επιδεινώνει τη σοβαρότητα του εγκεφαλικού και τη νευρολογική βλάβη. Αν και οι κλινικές δοκιμές δεν έχουν λάβει ικανοποιητικά αποτελέσματα, η νευροπροστασία εξακολουθεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη θεραπεία του οξέος ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου. Έτσι, η εύρεση αποτελεσματικών φαρμάκων νευροπροστασίας για τη θεραπεία των εγκεφαλικών είναι ένα όφελος για τους ασθενείς με εγκεφαλικό επεισόδιο.

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) λαμβάνει μέτρα για να παρέμβει ενάντια στην εσωτερική ανισορροπία του σώματος. Λόγω της πολύπλοκης παθογένεσης των ισχαιμικών εγκεφαλικών επεισοδίων, η πολυπαραγοντική επίδραση της TCM και των ενεργών συστατικών της διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη θεραπεία των εγκεφαλικών επεισοδίων.CistancheΤο deserticola YC Ma, διαδεδομένο σε άνυδρες ή ημίξηρες περιοχές σε όλη τη Μογγολία και τη Βορειοδυτική Κίνα, είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο βότανο TCM για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών όπως η λήθη και η κατάθλιψη για περισσότερα από 1,000 χρόνια στην Κίνα. Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες έδειξαν ότι τα ακατέργαστα εκχυλίσματα από C. deserticola έδειξαν πολλαπλές φαρμακολογικές δραστηριότητες, όπως π.χ.ενίσχυση της λειτουργίας μάθησης και μνήμης, νευροπροστασίας, ανοσίας, αντιοξειδωτικών, αντιγηραντικών και αντικαταθλιπτικών επιδράσεων. Η χημική ανάλυση του C. deserticola έδειξε ότι τα κύρια συστατικά του περιλαμβάνουνφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδής γλυκοσίδες, πολυσακχαρίτες και ολιγοσακχαρίτες. Ωστόσο, τα ενεργά συστατικά του C. deserticola για την προστασία του εγκεφάλου δεν είναι πολύ σαφή.

Η νευροπροστατευτική ιδιότητα του C. deserticola υποδηλώνει τις θεραπευτικές του δυνατότητες σε γνωστικές ασθένειες όπως το εγκεφαλικό και η κατάθλιψη, καθώς και η νόσος του Αλτσχάιμερ. Ωστόσο, η έρευνα για την επίδραση του C. deserticola στα εγκεφαλικά, συμπεριλαμβανομένων των ενεργών συστατικών και των μηχανισμών δράσης του, είναι πολύ περιορισμένη. Στην τρέχουσα εργασία, διερευνήσαμε την προστατευτική επίδραση τριών εκχυλισμάτων από το C. deserticola, των ολικών γλυκοσιδών (TGs, φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και άλλων γλυκοσιδίων), πολυσακχαριτών (PSs) και ολιγοσακχαριτών (OSs) σε εγκεφαλικές βλάβες I/R. Τα ευρήματά μας μπορεί να συμβάλουν στην ακριβή κλινική εφαρμογή του C. deserticola και να παρέχουν έναν υποψήφιο παράγοντα γιαθεραπεία ισχαιμικού εγκεφαλικού.

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Χημικά και Αντιδραστήρια

Οι μίσχοι του Cistanche deserticola αγοράστηκαν από το Alasan, Εσωτερική Μογγολία, και αναγνωρίστηκαν από έναν από τους συγγραφείς (P.-F. Tu). Τα TG, τα PS και τα OS παρασκευάστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως. Η ποσοτική ανάλυση των TG πραγματοποιήθηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) όπως περιγράφηκε προηγουμένως, και το χρωματογράφημά της φαίνεται στο Σχήμα 1. Τα κύρια συστατικά των TGs είναι ο εχινακοσίδης, ο τουμπουλοσίδης Α, ο ακτεοσίδης, ο ισοακτεοσίδης και ο 2'-ακετυλακτεοσίδης. Η περιεκτικότητά τους είναι 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g και 12,045 mg/g, αντίστοιχα. Τα περιεχόμενα PSs και OSs είναι 69,42% και 65,24%, αντίστοιχα, όπως προσδιορίζονται με HPLC και την ανάλυση φαινόλης-θειικού οξέος, αντίστοιχα.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΑΝΤΙΜΕΤΩΠΙΣΗ ΙΣΧΑΙΜΙΚΟΥ ΕΓΕΦΑΛΕΙΟΥ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Οι τυπικές αναφορές εχινακοσίδης (Α0282), τουμπουλοσίδης Α (Α0942), ακτεοσίδης (Α0280), ισοακτεοσίδης (Α0281) και 2'-ακετυλολακτεοσίδης (Α0943) αγοράστηκαν από την Chengdu Must Biotechnology. Η καθαρότητα όλων των προτύπων είναι μεγαλύτερη από 98%. Τα κιτ Nissl Stain H&E αγοράστηκαν από την Boster. Το Edaravone (T0407-1) ​​αγοράστηκε από την Target Mol (Σαγκάη, Κίνα). Αγοράστηκε το Rabbit anti-rat MAP-2 (ab32454), το Nrf-2 (ab31163), το PDGFRb (ab32570), το Keap-1 (ab66620) και το CD31 κατά ποντικιού (ab24590) από την Abcam Inc. Τα Rabbit anti-rat Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) και Occludin (BS72035) αγοράστηκαν από την Bioworld Technology. Η Cell Signaling Technology Inc. (Βοστώνη, MA, Η.Π.Α.) ήταν η πηγή της συναψίνης αντι-ποντικιού κουνελιού-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T). Το GAPDH (HRP-60004) αγοράστηκε από την Proteintech Group, Inc. Τα δευτερεύοντα αντισώματα παρασχέθηκαν από την Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Πεκίνο, Κίνα). Το Hoechst 33258 ελήφθη από την Beyotime.

Των ζώων

Οι αρουραίοι Sprague-Dawley (αρσενικοί, βάρους 250-300 g) ελήφθησαν από τη Vital River Laboratory Animal Technology και στεγάστηκαν σε ένα κλιματιζόμενο δωμάτιο που διατηρήθηκε σε κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών. Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ARRIVE για την έρευνα σε ζώα και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Κέντρου Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου.

Πειραματικά Πρωτόκολλα Ζώων

Οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε MCAO/R, όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Wang et al., 2018). Εν συντομία, η αριστερή κοινή καρωτιδική αρτηρία (CCA), η εξωτερική καρωτίδα (ECA) και η εσωτερική καρωτίδα (ICA) εκτέθηκαν και ένα ράμμα με μονόινα νήματα 3-0 εισήχθη από το ECA στο ICA μέχρι να φτάσει στη μέση εγκεφαλική αρτηρία (MCA). Μετά από 1,5 ώρα απόφραξης MCA, προσομοιώθηκε η επαναιμάτωση αφαιρώντας το νήμα. Κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης, η θερμοκρασία του σώματος όλων των αρουραίων διατηρήθηκε στους 37,0 βαθμούς. Φάρμακο

Διαχείριση

Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS έκδοση 22.0 όπως περιγράφεται: κανονική ομάδα (NOR); ομάδα μοντέλων (MOD); ομάδα edaravone (θετικό φάρμακο, 6 mL/kg, EDI); Ομάδα TGs (280 mg/kg, TGs); Ομάδα PSs (280 mg/kg, PSs) και ομάδα OSs (280 mg/kg, OSs). Τα TGs, PS και OSs χορηγήθηκαν μία φορά την ημέρα μετά από MCAO/R για 14 ημέρες. Οι ομάδες NOR και MOD υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό. Οι αριθμοί των ζώων φαίνονται στον Πίνακα 1.

Μέτρηση βάρους και τροποποιημένες βαθμολογίες νευρολογικού ελλείμματος (mNSS)

Το σωματικό βάρος παρακολουθήθηκε τη 14η ημέρα χρησιμοποιώντας μια ψηφιακή ζυγαριά ADVENTURE™ (OHAUS, New Jersey, ΗΠΑ). Το mNSS αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον FJ Wang (Wang et al., 2018), με μικρές αναθεωρήσεις.

2, 3, 5-Χρώση με χλωριούχο τριφαινυλτετραζόλιο (TTC)

Ο όγκος του εμφράγματος μετρήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Εν συντομία, οι εγκέφαλοι τεμαχίστηκαν σε επτά στεφανιαία τετράγωνα σε ίση απόσταση (2 mm). Αυτές οι τομές χρωματίστηκαν με 2% TTC στους 37 βαθμούς για 15 λεπτά. Όγκος εμφράγματος (%)=(ομόπλευρος όγκος ισχαιμικού ημισφαιρίου −όγκος ετερόπλευρου ισχαιμικού ημισφαιρίου)/όγκος ετερόπλευρου ισχαιμικού ημισφαιρίου × 100.

Nissl και H&E Staining

Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν βαθιά και ολόκληρος ο εγκέφαλος αφαιρέθηκε ταχέως από το κρανίο και στερεώθηκε χρησιμοποιώντας 4% παραφορμαλδεΰδη ενσωματωμένη σε κερί παραφίνης και τεμαχίστηκε σε φέτες πάχους 7 μm. Οι τομές χρωματίστηκαν με Nissl και H&E. Σε αυτή τη μελέτη, έξι τυχαία πεδία 200 × 200 μm καταγράφηκαν σε κάθε δείγμα ιστού με μικροσκόπιο φωτός. Ο αριθμός των σωμάτων της Nissl μετρήθηκε με την έκδοση λογισμικού IPP 6.0.

Evans Blue Assay

Οι αρουραίοι ενέθηκαν με 2% ΕΒ μετά από MCAO/R. Δύο ώρες αργότερα, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν και ολόκληρος ο εγκέφαλος αφαιρέθηκε γρήγορα και ομογενοποιήθηκε σε ακετόνη. Τα υπερκείμενα αναλύθηκαν στα 620 nm με συσκευή ανάγνωσης απορρόφησης 800 TS.

Μέτρηση των Δραστηριοτήτων της Καταλάσης (CAT), της Δισμουτάσης του Υπεροξειδίου (SOD), της Μαλονοδιαλδεΰδης (MDA) και της Υπεροξειδάσης της Γλουταθειόνης (GSH-Px)

Όλα τα δείγματα ορού φυγοκεντρήθηκαν στις 4,000 × rpm για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς και στη συνέχεια αναλύθηκαν για να ανιχνευθούν οι δραστηριότητες των MDA, CAT, SOD και GSH-Px ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Ανάλυση Western Blotting

Οι ιστοί του εγκεφάλου (100 mg) που συλλέχθηκαν από κάθε αρουραίο ομογενοποιήθηκαν και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA και στη συνέχεια αναλύθηκαν για να ανιχνευθεί η συγκέντρωση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας κιτ BCA. Οι ολικές πρωτεΐνες ιστού φορτώθηκαν σε πηκτώματα 10% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Η μεμβράνη μπλοκαρίστηκε χρησιμοποιώντας 5% αποβουτυρωμένο γάλα, στη συνέχεια επωάστηκε όλη τη νύχτα με πρωτογενή αντισώματα στους 4 βαθμούς. Η μεμβράνη στη συνέχεια επωάστηκε με ένα δευτερεύον αντίσωμα. Η ανάλυση κηλίδας Western αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα ψηφιακής απεικόνισης Kodak.

Ανάλυση ανοσοφθορισμού

Πραγματοποιήθηκε χρώση ανοσοφθορισμού για CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, ocludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 και Keap-1. Τα πρωτογενή αντισώματα κατά Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO{-1, claudin5, ocludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 και Keap-1 αραιώθηκαν σε 1 :200 και 1:100, αντίστοιχα. Τα δευτερεύοντα αντισώματα Alexa Flur 488 IgG ποντικού κατά κουνελιού και ροδαμίνης (TRITC) κατσίκας κατά κουνελιού IgG αραιώθηκαν και τα δύο σε 1:200. Οι πυρήνες χρωματίστηκαν με Hoechst 33258. Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας Vectra® Polaris™ Automated Quantitative Pathology Imaging System (PerkinElmer, ΗΠΑ). Η έκφραση πρωτεΐνης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό IPP έκδοση 6.0. Στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα περιγράφηκαν ως μέσος όρος ± SD. Το λογισμικό SPSS έκδοση 22.0 πραγματοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση. Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA κατά τη σύγκριση διαφορετικών ομάδων. P < 0.05 θεωρήθηκε η στατιστική διαφορά.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΑΝΤΙΙΣΧΑΙΜΙΚΗ ΝΟΣΟΣ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Οι TGs αυξάνουν το σωματικό βάρος και μειώνουν τις βλάβες στον εγκέφαλο σε αρουραίους MCAO/R

Μετά από 14 ημέρες θεραπείας με TGs, PSs, Oss και EDI, αξιολογήθηκαν τα σωματικά βάρη, τα νευρολογικά ελλείμματα και οι όγκοι εμφράγματος των I/R αρουραίων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα σωματικά βάρη στην ομάδα MOD μειώθηκαν πολύ, ενώ τα μειωμένα βάρη στις ομάδες TG, PS και EDI αυξήθηκαν (Εικόνα 2Α). Οι βαθμολογίες νευρολογικού ελλείμματος μειώθηκαν σημαντικά από το EDI και τα TGs (Εικόνα 2Β). Οι φέτες του εγκεφάλου στους αρουραίους της ομάδας NOR ήταν βαθύ κόκκινο και δεν υπήρχαν έμφραγμα, ενώ οι αρουραίοι της ομάδας MOD εμφάνισαν μεγάλο ομόπλευρο εγκεφαλικό έμφραγμα. Μετά τη θεραπεία με TGs, οι όγκοι του εμφράγματος μειώθηκαν σημαντικά (Εικόνες 2C, D). Η θεραπεία PS και OSs δεν έδειξε εμφανή επίδραση στους παραπάνω δείκτες. Τα παραπάνω δεδομένα έδειξαν ότι τα TGs μπορούσαν να ανακουφίσουν σημαντικά την εγκεφαλική βλάβη που προκαλείται από I/R, αλλά τα PS και OS δεν μπορούσαν.

Οι TGs Βελτιώνουν την Ιστοπαθολογική Βλάβη σε αρουραίους MCAO/R

Για να προσδιοριστούν ορισμένες από τις επιδράσεις της θεραπείας TGs, PSs και OSs στην ιστοπαθολογική βλάβη, έγινε χρώση H&E για να αποκαλυφθούν παθολογική βλάβη. Οι ιστομορφολογικές δομές των εγκεφάλων στην ομάδα NOR τακτοποιήθηκαν τακτικά. Οι μορφολογικές αλλαγές στις ομάδες TGs ήταν μικρότερες από αυτές στην ομάδα MOD. Ωστόσο, οι ομάδες θεραπείας με PS και OSs δεν έδειξαν σημαντική βελτίωση των αλλαγών της μορφολογίας (Εικόνα 3).

Τα TG εξασθενούν τον νευρωνικό τραυματισμό μετά από αρουραίους που προκαλούνται από I/R

Η χρώση Nissl έδειξε τις ιστοπαθολογικές αλλαγές των νευρώνων στον ημισφαίριο της ισχαιμικής περιοχής. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, οι φυσιολογικοί νευρώνες είχαν καθαρό πυρήνα και ανέπαφη δομή. Στην ομάδα MOD, οι νευρώνες είχαν διευρυμένους μεσοκυττάριους χώρους. Τα κορμιά του nissl εξαφανίστηκαν, συρρικνώθηκαν και βάφτηκαν βαθιά. Ωστόσο, αυτές οι αλλαγές σπάνια παρατηρήθηκαν στις ομάδες EDI, TGs και PS. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα TG και τα PS θα μπορούσαν να είναι σημαντικάμετριάζουν την ισχαιμία/επαγόμενη από επαναιμάτωση νευρωνική βλάβη.

Τα TG εξασθενούν τη διαταραχή του BBB μετά από αρουραίους που έλαβαν I/R

Η δοκιμασία μπλε Evans είναι μια κλασική μέθοδος για την έρευνα της αλλαγής της διαπερατότητας BBB. Τα αποτελέσματα του πειράματος έδειξαν ότι αυξημένο μπλε του Evans παρατηρήθηκε στην ομάδα MOD, ενώ υπήρχε σημαντικά μειωμένο μπλε του Evans στους αρουραίους TGs και που έλαβαν EDI. Επιπλέον, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων θεραπείας PS και OSs (Εικόνα 5). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα TGs θα μπορούσαν να μετριάσουν σημαντικά τη διαταραχή του BBB.

Τα TG προάγουν την αγγειογένεση σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με Ε/Κ

Πιο πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η αγγειογένεση παίζει κρίσιμο ρόλο στη νευρολογική λειτουργική αποκατάσταση και στα προγνωστικά αποτελέσματα μετά από οξύ ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο (Yuen et al., 2015). Για την αξιολόγηση των επιδράσεων των TGs, PSs και OSs στην αγγειογένεση, χρησιμοποιήθηκαν τα CD31 και a-SMA για τον ποσοτικό προσδιορισμό των τριχοειδών αριθμών. Η χρώση με ανοσοφθορισμό έδειξε ότι η ομάδα MOD προκάλεσε μια αξιοσημείωτη μείωση στις εκφράσεις του CD31 (Εικόνες 6Α, Β) και a-SMA (Εικόνες 6C, D) στο ημισχαιμικές περιοχές των αρουραίων I/R, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς αρουραίους . Αυτό το αποτέλεσμα απέδειξε ότι το I/R θα μπορούσε να προκαλέσει αγγειακή βλάβη στον ημισφαίριο του φλοιού των ισχαιμικών ημισφαιρίων. Ωστόσο, η θεραπεία TGs και EDI αύξησε αξιοσημείωτα την πυκνότητα των τριχοειδών, την αγγειογένεση και την αρτηριογένεση, όπως υποδεικνύεται από τις αυξημένες εκφράσεις των CD31 και a-SMA. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα TGs θα μπορούσαν να προάγουν την αγγειογένεση στον ισχαιμικό ημισφαίριο αρουραίων I/R, αλλά τα PS και OS δεν μπορούσαν.

Τα TG Αυξάνουν την Έκφραση των Πρωτεϊνών Σφιχτής Σύνδεσης σε Αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με Ε/Κ

Η διαταραχή του BBB μπορεί να αυξήσει την περιεκτικότητα σε νερό του εγκεφάλου και το πρήξιμο των ιστών, οδηγώντας σε εγκεφαλική βλάβη. Οι πρωτεΐνες σφιχτής σύνδεσης είναι σημαντικά δομικά συστατικά του BBB. Για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με TG, PS και OSs μετά το εγκεφαλικό μπορεί να επηρεάσει την ακεραιότητα του BBB, οι εκφράσεις των ZO-1, claudin-5 και ocludin πραγματοποιήθηκαν με ανάλυση ανοσοφθορισμού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι εκφράσεις του claudin-5, του ocludin και του ZO-1 ήταν εμφανώς μειωμένες στην ομάδα MOD. Ωστόσο, αυξήθηκαν σημαντικά μετά από 14 ημέρες από τη χορήγησή του. Οι ομάδες PS και OSs δεν έδειξαν σημαντικές αλλαγές σε αυτές τις πρωτεϊνικές εκφράσεις (Εικόνα 7). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι τα TGs μπορούν να ρυθμίσουν τις εκφράσεις της πρωτεΐνης σφιχτής σύνδεσης και πιθανώς να διατηρήσουν την ακεραιότητα BBB μετά από τραυματισμό I/R.

Τα TG αυξάνουν την κάλυψη των περικυττάρων στα τριχοειδή αγγεία σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί από Ε/Κ

Η κάλυψη των περικυττάρων στα τριχοειδή αγγεία παίζει κρίσιμο ρόλο στη διατήρηση της ακεραιότητας του BBB. Έτσι, δοκιμάσαμε εάν η κάλυψη των περικυττάρων θα μπορούσε να αυξηθεί με θεραπεία TG, PS και OS. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης έντασης ανοσοφθορισμού έδειξαν ότι τόσο οι εκφράσεις PDGFRb όσο και CD31 μειώθηκαν δραματικά στην ομάδα MOD. Η χορήγηση TG στους αρουραίους I/R ανέκτησε σημαντικά ή ακόμη και αύξησε τις εντάσεις έκφρασης των PDGFRb και CD31, αλλά δεν παρατηρήθηκε διαφορά στις ομάδες θεραπείας με PSs και OSs (Εικόνα 8). Έτσι, η θεραπεία των TGs θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά την κάλυψη των περικυττάρων. Αυτά τα ευρήματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω ότι τα TG μπορούν να διατηρήσουν την ακεραιότητα του BBB μετά το I/R.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΠΡΟΛΗΨΗ ΙΣΧΑΙΜΙΚΟΥ ΕΓΕΦΑΛΕΙΟΥ PHGS75% ECH 30% ACT 12%