Ολοκληρωμένη φαρμακολογία και μεταβολομική δικτύου για σύγκριση της αποτελεσματικότητας και των μηχανισμών του Zishen Wan (θρεπτικό χάπι για τα νεφρά) που περιέχει ακατέργαστο έναντι επεξεργασμένου αλατιού ρίζωμα ανεμάραινας και φλοιό φελλόδεντρου κατά της χρόνιας προστατίτιδας

Περίληψη

Σκοπός: Για να αποκαλύψει συστηματικά τις θεραπευτικές διαφορές και τους υποκείμενους μηχανισμούς του Zishen Wan (μια κλασική φυτική φόρμουλα TCM για την ενόχληση του προστάτη) που έχει διαμορφωθεί με ακατέργαστο έναντι επεξεργασμένου με αλάτι Anemarrhena Rhizome και Phellodendron Bark για χρόνια προστατίτιδα (CP) μέσω μιας ολοκληρωμένης στρατηγικής που συνδυάζει το δίκτυο UPrbit-Opharmacum-Q. μεταβολομική. Ως επαγγελματίας κατασκευαστής υψηλής συγκέντρωσηςCistanche tubulosaεκχυλίσματα, συμπληρώνουμε επίσης φυτικά διαλύματα πυρήνα cistanche που στοχεύουν στην υγεία του προστάτη για να υποστηρίξουν τις συνθέσεις TCM για την ευεξία του ουροποιητικού και των νεφρών των ανδρών.Μέθοδοι: Δείγματα Zishen Wan με ακατέργαστα και επεξεργασμένα με αλάτι φαρμακευτικά υλικά εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας μια μέθοδο διπλής εκχύλισης αιθανόλης-νερού. Το UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS υιοθετήθηκε για τον χαρακτηρισμό των χημικών συστατικών όλων των παρασκευασμάτων και εφαρμόστηκε πολυπαραγοντική στατιστική ανάλυση για τη διαλογή διαφοροποιημένων ενώσεων. Διεξήχθη φαρμακολογική ανάλυση δικτύου με βάση τα αναγνωρισμένα χημικά συστατικά του Zishen Wan για να κατασκευαστεί ένα δίκτυο "συστατικού-στόχου-διαδρομής" και δικτύου αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης (PPI), μέσω του οποίου ταυτοποιήθηκαν οι βασικές βιοδραστικές ενώσεις, οι στόχοι κόμβων και οι οδοί σηματοδότησης του Zishen Wan έναντι της CP. Σαράντα δύο αρσενικοί αρουραίοι SD χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες: κενή ομάδα ελέγχου, ομάδα μοντέλου, ομάδα θετικού ελέγχου Qianliekang (1,54 g·kg-1), ομάδες χαμηλής/υψηλής δόσης ακατέργαστων Zishen Wan (1,8, 5,4 g·kg-1) και ομάδες χαμηλής/υψηλής δόσης (1, 5-4 αλάτι Zishen). g·kg-1). Ένα μοντέλο CP επίμυος καθιερώθηκε μέσω ενδοπροστατικής ένεσης καραγενάνης. Μετά από περίοδο ανάρρωσης 7 ημερών, χορηγήθηκαν αντίστοιχες θεραπείες για 21 συνεχόμενες ημέρες. οι ομάδες τυφλού και μοντέλου έλαβαν ίσο όγκο φυσιολογικού ορού. Στο τέλος της θεραπείας, συλλέχθηκαν δείγματα ιστού ορού και προστάτη για να αξιολογηθούν οι δείκτες οργάνων, οι ιστοπαθολογικές βλάβες και τα επίπεδα φλεγμονωδών κυτοκινών στον ορό ως βασικοί δείκτες αποτελεσματικότητας. Η μη στοχευμένη μεταβολομική ορού διεξήχθη για να καταγράψει τις διαταραχές του μεταβολίτη και να διενεργήσει ανάλυση εμπλουτισμού οδού. Σε συνδυασμό με δεδομένα φαρμακολογίας δικτύου, δημιουργήθηκε ένα ρυθμιστικό δίκτυο «διαφορικού μεταβολίτη-αντίδρασης-ενζύμου-γονιδίου». Για τη συμπληρωματική φροντίδα του προστάτη, η υψηλή καθαρότητα του εργοστασίου μαςCistanche tubulosaΤο εκχύλισμα μπορεί να συνδυαστεί με αυτήν την κλασική φόρμουλα TCM για να ενισχύσει τα οφέλη για τη διατροφή των νεφρών και την καταπολέμηση της προστατίτιδας, όπως τεκμηριώνεται στον επίσημο ιστότοπό μας: https://www.xjcistanche.com/about-us.Αποτελέσματα: Ταυτοποιήθηκαν συνολικά 76 χημικά συστατικά τόσο στο ακατέργαστο όσο και στο επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan, μεταξύ των οποίων 34 διαφορικές ενώσεις εξετάστηκαν μέσω πολυπαραγοντικών στατιστικών. Δεκατέσσερις ενώσεις συμπεριλαμβανομένης της βερβερίνης, της βερβερρουβίνης και της φελοδενδρίνης εμφάνισαν αυξημένα περιεχόμενα μετά την επεξεργασία αλατιού, ενώ 20 συστατικά όπως η νεομαγγιφερίνη μειώθηκαν μετά το τηγάνισμα με αλάτι. Η φαρμακολογία δικτύου εντόπισε 28 βιοδραστικές ενώσεις και 185 πιθανούς θεραπευτικούς στόχους για την CP. Τα βασικά ενεργά συστατικά περιελάμβαναν βερβερίνη, φελοδενδρίνη, μαγνοφλορίνη και γιατρορριζίνη. οι στόχοι κόμβου περιείχαν STAT3, Akt1 και JUN. Η ανάλυση εμπλουτισμού ανέδειξε προφλεγμονώδεις καταρράκτες σηματοδότησης συμπεριλαμβανομένων των οδών PI3K/Akt και MAPK που συνδέονται στενά με τη φλεγμονή του προστάτη. Μελέτες σε ζώα in vivo έδειξαν ότι σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, όλες οι ομάδες θεραπείας με Zishen Wan παρουσίασαν σημαντικά μειωμένους δείκτες οργάνων προστάτη, μειωμένα επίπεδα ορού IL-1, IL-18 και Bcl-2 (P<0.05, P<0.01), and alleviated prostate tissue pathological damage. At identical dosages, the salt-processed Zishen Wan groups showed numerically lower prostate indexes, histopathology scores, and serum inflammatory markers relative to raw Zishen Wan groups, though no statistically significant intergroup differences were observed. Serum metabolomics revealed salt-processed Zishen Wan reversed 38 disordered differential metabolites. Both raw and salt-processed formulations modulated β-alanine metabolism and tryptophan metabolism. Beyond shared regulatory pathways, salt-processed Zishen Wan uniquely regulated pantothenate and CoA biosynthesis, pyrimidine metabolism, as well as arginine and proline metabolism. Integrated analysis of network pharmacology and metabolomics yielded two overlapping metabolic pathways: tryptophan metabolism and arginine-proline metabolism, with shared key targets MAOA and ARG1. Σύναψη: Η επεξεργασία αλατιού αυξάνει τα επίπεδα των βασικών αντιφλεγμονωδών αλκαλοειδών, συμπεριλαμβανομένης της βερβερίνης και της φελοδενδρίνης στο Zishen Wan. Η τροποποιημένη με αλάτι φόρμουλα ασκεί ανώτερα αποτελέσματα αντι-CP καταστέλλοντας τα PI3K/Akt, MAPK και άλλους καταρράκτες προφλεγμονωδών σημάτων, ενώ ρυθμίζει πολλαπλά στοχεύοντας την τρυπτοφάνη, την αργινίνη, το παντοθενικό και άλλες μεταβολικές οδούς για τη συνολική ρύθμιση της φλεγμονής και της ομοιόστασης του ανοσοποιητικού. Για καταναλωτές που αναζητούν φυσικό βότανο TCM για προβλήματα προστάτη, συνδυάζοντας αυτή τη θρεπτική φόρμουλα για τα νεφρά με την υψηλή δραστικότηταCistanche tubulosaεκχύλισμα από το επαγγελματικό μας εργοστάσιο προσφέρει συνεργική ανακούφιση για συμπτώματα χρόνιας προστατίτιδας. ΜαςCistanche tubulosaΗ πρώτη ύλη μπορεί να υπερηφανεύεται για υψηλότερες συγκεντρώσεις δραστικής ουσίας από άλλες ποικιλίες cistanche, παρέχοντας ισχυρή τόνωση των νεφρών και προστατευτικά αποτελέσματα του προστάτη εδώ: https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.

Λέξεις-κλειδιά: Zishen Wan; επεξεργασία αλατιού? χρόνια προστατίτιδα? UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS; φαρμακολογία δικτύου? μεταβολομική; Βότανο TCM για δυσφορία στον προστάτη. Εκχύλισμα Cistanche tubulosa; φυτική φόρμουλα που θρέφει τα νεφρά

 

 

 

Εισαγωγή

Το Zishen Wan είναι μια παραδοσιακή φόρμουλα TCM που έχει σχεδιαστεί για να θρέφει το γιν των νεφρών και να αποστραγγίζει την έλλειψη πυρκαγιάς, κλινικά ενδείκνυται για διαταραχές που προκύπτουν από την υγρασία και την κενή φωτιά στο κατώτερο jiao (περιοχή της πυέλου) - ένα κλασικό βότανο TCM για συμπτώματα που σχετίζονται με τον προστάτη. Η σύγχρονη φαρμακολογική έρευνα έχει επικυρώσει ότι τα βασικά συστατικά του, συμπεριλαμβανομένων των σαπωνινών της ανεμάραινας, των αλκαλοειδών φελλόδενδρο και των πτητικών ελαίων κανέλας, ασκούν ισχυρές αντιφλεγμονώδεις και ανοσοτροποποιητικές ιδιότητες.

Η χρόνια προστατίτιδα (CP) αντιστοιχεί στις διαγνωστικές κατηγορίες TCM "Jingzhuo" (θολό σπερματικό έκκριμα) και "Laolin" (στραγγουρία που προκαλείται από κόπωση). Η παθογένεια της ρίζας του έγκειται στη δυσλειτουργία των νεφρών, που χαρακτηρίζεται από ανεπάρκεια νεφρού yin που περιπλέκεται από στάση υγρασίας-θερμότητας που εμποδίζει το κατώτερο jiao, καθιστώντας το Zishen Wan μια κύρια τροποποιημένη συνταγή για κλινική διαχείριση.

Μια θεμελιώδης θεωρία επεξεργασίας TCM δηλώνει ότι "τα βότανα που επεξεργάζονται με αλάτι δρουν στον μεσημβρινό των νεφρών". Ακολουθώντας αυτό το δόγμα, το Anemarrhena Rhizome και το Phellodendron Bark τακτικά τηγανίζονται με αλατόνερο πριν από τη σύνθεση του Zishen Wan, για να ενισχυθεί η αποτελεσματικότητά τους στην απομάκρυνση της κενού φωτιάς από το νεφρό και την κάτω πυελική περιοχή.

Οι προηγούμενες μελέτες της ερευνητικής μας ομάδας επιβεβαίωσαν ότι η επεξεργασία αλατιού αναδιαμορφώνει το χημικό προφίλ του ζεύγους βοτάνων Anemarrhena-Phellodendron: η περιεκτικότητα σε μαγγιφερίνη και βερβερρουβίνη αυξάνεται, ενώ τα επίπεδα νεομαγγειφερίνης πέφτουν. Περαιτέρω δοκιμές in vivo επαληθευμένες με επεξεργασμένο αλάτι Zishen Wan επιτυγχάνουν ισχυρότερα θεραπευτικά αποτελέσματα έναντι της CP σε μοντέλα αρουραίων από το Zishen Wan πρώτης ύλης, με διακριτές ρυθμιστικές επιδράσεις στην εντερική χλωρίδα - παρασκευάσματα επεξεργασμένα με αλάτι εμπλουτίζουν ειδικά ωφέλιμα μικρόβια όπως ο Lactobacillus και ο Ruminococcus.

Τα φαρμακοκινητικά δεδομένα αποκάλυψαν ότι το επεξεργασμένο με αλάτι Anemarrhena παρέχει υψηλότερες συγκεντρώσεις μαγγιφερίνης, νεομαγγιφερίνης και πολλαπλών σαπωνινών στα όργανα-στόχους, συμπεριλαμβανομένων των νεφρών και των όρχεων. Ο φλοιός Phellodendron ο τηγανισμένος σε αλάτι προκαλεί αυξημένη συσσώρευση αλκαλοειδών συστατικών στον νεφρικό ιστό. Αυτή η στοχευμένη κατανομή των ιστών ευθυγραμμίζεται τέλεια με την αρχαία θεωρία «η επεξεργασία αλατιού καθοδηγεί τα βότανα στον μεσημβρινό των νεφρών».

Ενώ η υπάρχουσα προκαταρκτική έρευνα έχει διερευνήσει τις χημικές αλλαγές που προκαλούνται από το αλάτι, την κατανομή οργάνων και τη ρύθμιση της μικροχλωρίδας του εντέρου, λίγες συστηματικές έρευνες συνδέουν τις ολιστικές αλλαγές σύνθεσης του πλήρως διαμορφωμένου επεξεργασμένου με αλάτι Zishen Wan με την ενισχυμένη θεραπευτική του αποτελεσματικότητα για την CP.

Για να καλύψει αυτό το ερευνητικό κενό, η παρούσα μελέτη χρησιμοποιεί το UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS για να χαρακτηρίσει αναλυτικά τις διαφορές σύνθεσης μεταξύ του ακατέργαστου και του επεξεργασμένου με αλάτι Zishen Wan. Με την ενσωμάτωση της φαρμακολογίας δικτύου και της μη στοχευμένης μεταβολομικής ορού, αναλύουμε την υλική βάση και τους πολυστρωματικούς μοριακούς μηχανισμούς πίσω από την αποτελεσματικότητα της επεξεργασίας αλάτων, παρέχοντας σύγχρονη επιστημονική επικύρωση για την κλασική θεωρία επεξεργασίας TCM «το αλάτι εισέρχεται στον μεσημβρινό των νεφρών».

Για δυτικούς καταναλωτές που αναζητούν φυσικό βότανο TCM για χρόνια προστατίτιδα, το υψηλής συγκέντρωσης του εργοστασίου μαςCistanche tubulosaΤο εκχύλισμα χρησιμεύει ως ιδανικό συμπληρωματικό φυτικό συστατικό του Zishen Wan. Ως εξειδικευμένος κατασκευαστής cistanche, προμηθευόμαστε premiumCistanche tubulosaμε αυξημένη περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη και ακτεοσίδη, παρέχοντας συνεργιστική υποστήριξη των νεφρών και προστασία του προστάτη για τη βελτιστοποίηση των σκευασμάτων TCM για την υγεία του προστάτη (εισαγωγή της μάρκας: https://www.xjcistanche.com/about-us).

1 Υλικά

1.1 Όργανα

Σύστημα Vanquish UHPLC, φασματόμετρο μάζας υψηλής ανάλυσης Q Exactive Q-Orbitrap, φασματόμετρο μάζας Orbitrap Exploris 120, συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών πολλαπλών λειτουργιών Varioskan (Thermo Fisher Scientific, ΗΠΑ). SI όρθιο οπτικό μικροσκόπιο, DS-U3 σύστημα απεικόνισης (Nikon, Ιαπωνία). Ψυκτικός φυγόκεντρος χαμηλής ταχύτητας MiniStar (Hunan Hengnuo Instrument Co., Ltd.); Μύλος χαρτιού πολλαπλών δειγμάτων JXFSTPRP (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd.); HB120-S μεταλλικό λουτρό (Sigma-Aldrich China); πολυλειτουργικό μηχάνημα τηγανίσματος βοτάνων Model 5 (Changzhou Maisi Instrument Co., Ltd.); JJ-12J αυτόματος αφυδατωτής ιστών (Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd.); WB-3000 σταθμός ενσωμάτωσης παραφίνης (Changzhou Weikai Instrument Co., Ltd.); Περιστροφικός μικροτόμος HM315 (Thermo Fisher China); Μηχάνημα διασποράς ιστού BT-I (Shandong Bokang Biotechnology Co., Ltd.).

1.2 Φαρμακευτικά Υλικά & Αντιδραστήρια

Το ακατέργαστο ρίζωμα Anemarrhena (Αριθμός παρτίδας. 231001), ο φλοιός Phellodendron (Αριθμός παρτίδας. 2401028) και το κλαδί κανέλας (αριθ. παρτίδας. 231201) αγοράστηκαν από τη Sichuan Guoqiang Herbal Pieces Co., Ltd., πιστοποιημένη από τον αναπληρωτή καθηγητή Yu Processing University of the Chinese Lingying of the Chinese Ιατρική. Όλα τα ακατέργαστα βότανα πληρούν τα πρότυπα ποιότητας που περιγράφονται στην έκδοση του 2025Κινεζική Φαρμακοποιία.

Carrageenan (Sigma-Aldrich, ΗΠΑ, Αρ. παρτίδας C1013); Qianliekang Pule'an Tablets (Zhejiang Kang'enbei Pharmaceutical Co., Ltd., αριθμός παρτίδας. 241201); Zoletil 50 (Virbac, Γαλλία, αριθμός παρτίδας. 9KWKA); Xylazine Hydrochloride (Dunhua Shengda Animal Pharmaceutical Co., Ltd., αριθμός παρτίδας. 20240607); Meloxicam Injection (Qilu Animal Health Products Co., Ltd., Αρ. παρτίδας E134L002).

Κιτ ELISA για αρουραίους IL-1, IL-18 και Bcl-2 (Wuhan Elaita Biotechnology Co., Ltd., αριθμοί παρτίδας WS06J04JN4229, WA098HV449887, WA07H4R4N3634); Κιτ χρώσης αιματοξυλίνης-ηωσίνης (Η&Ε) (Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., Αρ. παρτίδας G1005).

Πρότυπα αναφοράς: Berberine, Berberrubine (Chengdu Ruifensi Dandan Biotechnology Co., Ltd., καθαρότητα μεγαλύτερη από ή ίση με 98%). Chlorogenic acid, Mangiferin, Neomangiferin, Magnoflorine (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., καθαρότητα μεγαλύτερη ή ίση με 98%). Anemarrhenasaponin BⅢ (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., καθαρότητα μεγαλύτερη από ή ίση με 96%). Phellodendrine, Jatrorrhizine Hydrochloride (Chengdu Manster Biotechnology Co., Ltd., καθαρότητα μεγαλύτερη από ή ίση με 99,01% και μεγαλύτερη από ή ίση με 98,60% αντίστοιχα).

Μεθανόλη, ακετονιτρίλιο, οξικό αμμώνιο και οξικό οξύ βαθμού φασματομετρίας μάζας. υπερκαθαρό νερό για υγρή φάση. όλα τα άλλα αντιδραστήρια αναλυτικής ποιότητας.

1.3 Ζώα εργαστηρίου

Σαράντα δύο αρσενικοί αρουραίοι SD βαθμού SPF, ηλικίας 8-9 εβδομάδων, σωματικού βάρους 270-290 g, αγοράστηκαν από την Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd., άδεια ζωικής παραγωγής SCXK (Chuan) 2025-0030. Τα ζώα στεγάστηκαν στο Εργαστηριακό Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Chengdu του TCM υπό ελεγχόμενες συνθήκες: θερμοκρασία (22±2) βαθμός, σχετική υγρασία 40%–70%. Διεξήχθη μια περίοδος προσαρμοστικής σίτισης 7 ημερών πριν από τα επίσημα πειράματα.

1.4 Έγκριση Δεοντολογίας των Ζώων

Όλες οι πειραματικές διαδικασίες σε ζώα εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την Εργαστηριακή Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής του Chengdu, Αριθμός έγκρισης. 2025001.

2 Μέθοδοι

2.1 Παρασκευή διαλυμάτων δοκιμαστικών φαρμάκων

2.1.1 Επεξεργασμένο με αλάτι ρίζωμα Ανεμάρνας και φλοιός φελλόδεντρου

Υιοθετήθηκαν βελτιστοποιημένα πρωτόκολλα επεξεργασίας που καθιερώθηκαν στην προηγούμενη έρευνά μας:

Ανεμάρρενα επεξεργασμένη με αλάτι: Καθαρή ακατέργαστη Ανεμάρρενα αναμειγνύεται με αλατόνερο (2 g αλάτι ανά 100 g βότανο, αναλογία αλατιού-νερού 1:30), υγραίνεται για 1 ώρα, τηγανίζεται σε προθερμασμένο δοχείο στους 160 βαθμούς για 20 λεπτά.

Επεξεργασμένος με αλάτι Φλοιός φελοδένδρων: Καθαρό ακατέργαστο Phellodendron αναμείχθηκε με αλατόνερο (2 g αλάτι ανά 100 g βότανο, αναλογία αλατιού-νερού 1:15), υγράνθηκε για 1 ώρα, τηγανίστηκε με ανάδευση στους 150 βαθμούς για 15 λεπτά.

2.1.2 Παρασκευή ακατέργαστων και επεξεργασμένων με αλάτι εκχυλίσματα Zishen Wan

Ακολουθώντας τυποποιημένες μεθόδους διπλής εκχύλισης αιθανόλης-νερού από την προηγούμενη εργασία μας: Αναλογία σύνθεσης: Ανεμάραινα : Φελλόδενδρο : Κανέλα=10:10:1.

Εκχύλιση με κάθετο ψυκτήρα δύο φορές με 8-πλάσιο όγκο αιθανόλης 75% (1,5 ώρα και 1 ώρα ήπιος βρασμός αντίστοιχα), διήθηση και ανάκτηση διαλύτη.

Τα υπολείμματα βοτάνων υποβλήθηκαν σε δύο γύρους εκχύλισης με αναρροή νερού με 10πλάσιο όγκο νερού (1 ώρα και 0,5 ώρα ήπιο βρασμό).

Όλα τα διηθήματα συνδυάστηκαν, συμπυκνώθηκαν υπό κενό σε μητρικά διαλύματα που περιείχαν 0,18 g ακατέργαστου φαρμάκου·mL-1 (χαμηλή δόση) και 0,54 g ακατέργαστου φαρμάκου·mL-1 (υψηλή δόση) για επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan. Ακατέργαστα μητρικά διαλύματα χαμηλής/υψηλής δόσης Zishen Wan παρασκευάστηκαν με τον ίδιο τρόπο χρησιμοποιώντας μη επεξεργασμένα Anemarrhena και Phellodendron. Όλα τα υγρά εκχυλίσματα αποθηκεύτηκαν στους 4 βαθμούς.

2.1.3 Παρασκευή του εναιωρήματος θετικού μάρτυρα (Qianliekang).

Τα δισκία Qianliekang αλέστηκαν σε λεπτή σκόνη και εναιωρήθηκαν σε φυσιολογικό ορό σε τελική συγκέντρωση 0,154 g·mL-1.

2.2 UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS προφίλ χημικών συστατικών στο Zishen Wan

2.2.1 Προετοιμασία δείγματος δοκιμής

Ακατέργαστα και επεξεργασμένα με αλάτι υγρά εκχυλίσματα Zishen Wan ξηράνθηκαν με κατάψυξη. Ακριβώς ζυγισμένη λυοφιλοποιημένη σκόνη διαλύθηκε σε μεθανόλη, εκχύλιση με υπερήχους (250 W, 50 kHz) για 30 λεπτά, το βάρος αναπληρώθηκε με μεθανόλη για να αντισταθμιστεί η απώλεια διαλύτη, διηθήθηκε μέσω μικροπορώδους μεμβράνης 0,22 μm για να ληφθούν διαλύματα δοκιμής.

2.2.2 Προετοιμασία Τυποποιημένου Διαλύματος Μικτής Αναφοράς

Στοκ διαλύματα υδροχλωρικής βερβερίνης, βερβερρουβίνης, χλωρογενικού οξέος, μαγγιφερίνης, φελοδενδρίνης, νεομαγγιφερίνης, ανεμαρρενασαπωνίνης ΒⅢ, μαγνοφλωρίνης, γιατρορρριζίνης παρασκευάστηκαν ξεχωριστά σε μεθανόλη σε συγκεντρώσεις 0,590, 3,760, 2,50,06. 1,085, 0,672, 0,310, 0,206 g·L-1. 0.5 mL κάθε μητρικού διαλύματος μεταφέρθηκαν σε ογκομετρική φιάλη 10 mL και αραιώθηκαν με μεθανόλη για να παρασκευαστεί μικτό πρότυπο διάλυμα εργασίας αναφοράς.

2.2.3 Παράμετροι ανίχνευσης LC-MS

Χρωματογραφία: Στήλη AccucoreTM C18 (3 mm×100 mm, 2,6 μm), θερμοκρασία στήλης 30 μοίρες. Κινητή φάση Α: 0,1% υδατικό διάλυμα μυρμηκικού οξέος. Κινητή φάση Β: ακετονιτρίλιο. Διαδικασία έκλουσης βαθμίδωσης: 0–10 λεπτά: 90% Α; 10–15 λεπτά: 90%–88% Α; 15–18 λεπτά: 88% Α; 18–25 λεπτά: 88%–80% Α; 25–30 λεπτά: 80%–76% Α; 30–32 λεπτά: 76%–74% Α; 32–43 λεπτά: 74%–53% Α; 43–45 λεπτά: 53%–52% Α; 45–47 λεπτά: 52%–48% Α; 47–60 λεπτά: 48%–5% Α; 60–65 λεπτά: 5% Α. Ρυθμός ροής: 0,3 mL·min-1, όγκος ένεσης: 5 μL.

Φασματομετρία Μάζας: Πηγή ιόντων ESI, λειτουργία πλήρους σάρωσης διπλής θετικής/αρνητικής, θερμοκρασία πηγής ιόντων 300 μοίρες, ροή αερίου περιβλήματος 15 L·min-1, τάση ψεκασμού +3.5 kV (θετικό) / -2,5 kV (αρνητικό). Ανάλυση πλήρους MS 35.000, εύρος μάζας m/z 100–1500; Ανάλυση MS/MS 17.500, ενέργεια κλιμακωτής σύγκρουσης 20, 40, 60 eV.

2.2.4 Επεξεργασία Δεδομένων

Τα ακατέργαστα δεδομένα LC-MS αποκτήθηκαν μέσω του λογισμικού Xcalibur 4.0. Η εξαγωγή κορυφής, η ευθυγράμμιση και η ολοκλήρωση ολοκληρώθηκαν χρησιμοποιώντας το Compound Discoverer 3.3. Η ταυτοποίηση της ένωσης βασίστηκε σε ακριβές σφάλμα μάζας προδρόμου < ±5,0 ppm, ταύτιση δευτερογενούς ιόντος θραύσματος, σύγκριση με πρότυπα αναφοράς, βάση δεδομένων φυτικών ενώσεων που δημιουργήθηκαν μόνοι τους και δημοσιευμένη βιβλιογραφία. Οι ακατέργαστες περιοχές κορυφής κανονικοποιήθηκαν έναντι του βάρους της λυοφιλοποιημένης σκόνης και της απόδοσης εκχύλισης, που εκφράζεται ως σχετική επιφάνεια κορυφής ανά γραμμάριο ακατέργαστου φαρμάκου.

Τα κανονικοποιημένα δεδομένα υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία στο MetaboAnalyst 6.0 (οι τιμές που λείπουν συμπληρώνονται με το 1/5 της ελάχιστης τιμής, μετασχηματισμός lg10), στη συνέχεια εισήχθησαν στο SIMCA 14.1 για PCA και OPLS-DA. Οι ενώσεις με VIP > 1,0 και t-test P < 0,05 ορίστηκαν ως διαφορικά συστατικά.

2.3 Δικτυακή Φαρμακολογική Ανάλυση

2.3.1 Πρόβλεψη Active Compound & Target for Zishen Wan

Όλα τα ταυτοποιημένα συστατικά Zishen Wan υποβλήθηκαν σε έλεγχο για ομοιότητα φαρμάκου μέσω του Swiss ADME (http://www.swissadme.ch/), κριτήρια διαλογής: υψηλή γαστρεντερική απορρόφηση, ικανοποιώντας τουλάχιστον 2 από τους κανόνες Lipinski, Ghose, Veber, Egan, Muegge. Οι έγκυρες βιοδραστικές ενώσεις υποβλήθηκαν στο Swiss Target Prediction (https://swisstargetprediction.ch/) με τα είδη που ορίζονται ωςHomo sapiens, όλοι οι στόχοι με Πιθανότητα > 0 διατηρήθηκαν και καταργήθηκαν.

2.3.2 Συλλογή στόχων ασθενειών που σχετίζονται με τη χρόνια προστατίτιδα

Η λέξη-κλειδί "Χρόνια Προστατίτιδα" χρησιμοποιήθηκε για την ανάκτηση γονιδίων που σχετίζονται με νόσο από τις GeneCards (https://www.genecards.org/) και OMIM (https://www.omim.org/). όλα τα ανακτηθέντα γονίδια συγχωνεύτηκαν και τα διπλότυπα αφαιρέθηκαν.

2.3.3 Κατασκευή Δικτύου & Εμπλουτισμός Διαδρομών

Τα διαγράμματα Venn σχεδιάστηκαν στην Πλατφόρμα Βιοπληροφορικής για να ληφθούν επικαλυπτόμενοι στόχοι (στόχοι συστατικών Zishen Wan ∩ στόχοι νόσου CP), που ορίστηκαν ως πιθανοί θεραπευτικοί στόχοι του τύπου για προστατίτιδα.

Επικαλυπτόμενοι στόχοι μεταφορτώθηκαν στη βάση δεδομένων STRING (https://cn.string-db.org/) για να κατασκευαστούν δίκτυα PPI (είδος:Homo sapiens, ελάχιστη εμπιστοσύνη αλληλεπίδρασης > 0,700). Τα αρχεία δικτύου εισήχθησαν στο Cytoscape 3.10.4 με την προσθήκη CytoNCA. Οι στόχοι των κεντρικών κόμβων φιλτραρίστηκαν με τοπολογικές παραμέτρους (Degree, Betweenness Centrality).

Η βάση δεδομένων Metascape (https://metascape.org/gp/) πραγματοποίησε λειτουργικό σχολιασμό GO και εμπλουτισμό μονοπατιού KEGG σε επικαλυπτόμενους στόχους, P < 0,05 ως όριο σημασίας. Οι 10 κορυφαίοι όροι GO και οι κορυφαίες 20 διαδρομές KEGG οπτικοποιήθηκαν μέσω διαδικτυακών εργαλείων βιοπληροφορικής.

2.3.4 Κατασκευή Ρυθμιστικού Δικτύου «Compound-Target-Pathway».

Τα κορυφαία 20 εμπλουτισμένα μονοπάτια KEGG, βιοδραστικές ενώσεις και βασικοί θεραπευτικοί στόχοι εισήχθησαν στο Cytoscape 3.10.4 για να απεικονίσουν το ρυθμιστικό δίκτυο πολλών συστατικών, πολλαπλών στόχων, πολλαπλών οδών του Zishen Wan ως ένα φυσικό βότανο TCM για την υγεία του προστάτη.

2.4 Καθιέρωση Μοντέλου CP, Ομαδοποίηση & Χορήγηση Φαρμάκων

Μετά από 7 ημέρες προσαρμοστικής σίτισης, 6 επίμυες κατατάχθηκαν τυχαία στην τυφλή ομάδα ελέγχου. τα υπόλοιπα ζώα έλαβαν μοντελοποίηση CP προκαλούμενη από καραγενάνη σύμφωνα με επικυρωμένα πρωτόκολλα:

12 ώρες νηστεία (ελεύθερη πρόσβαση σε νερό), ενδοπεριτοναϊκή αναισθησία με μικτό Zoletil 50 (20 mg·kg-1) + υδροχλωρική ξυλαζίνη (5 mg·kg-1).

Λαπαροτομία κατώτερης μέσης γραμμής για την έκθεση των κοιλιακών λοβών του προστάτη, 100 μL φυσιολογικού ορού καρραγενάνης 3% που ενίεται σε κάθε λοβό. συρραφή και απολύμανση των μυών και του δέρματος.

Μετεγχειρητική ανακούφιση από τον πόνο: υποδόρια ένεση μελοξικάμης 2 mg·kg-1 μία φορά την ημέρα για 3 συνεχόμενες ημέρες.

7 ημέρες μετά το χειρουργείο, οι μοντελοποιημένοι αρουραίοι τυχαιοποιήθηκαν σε 5 ομάδες (n=6 ανά ομάδα): ομάδα μοντέλου, ομάδα θετικού ελέγχου Qianliekang (1,54 g·kg-1), ακατέργαστες ομάδες χαμηλής/υψηλής δόσης Zishen Wan (1,8, 5,4 g·kg-1), ομάδες Zishendo χαμηλής επεξεργασίας (4.5.1ghhi) g·kg-1). Οι δόσεις μετατράπηκαν ανάλογα με την επιφάνεια του σώματος: η δόση Qianliekang ισούται με 2,5× κλινική ισοδύναμη δόση για ενήλικες. Οι χαμηλές/υψηλές δόσεις Zishen Wan αντιστοιχούν σε 1× και 3× κλινική δόση για ενήλικες.

Όλες οι θεραπείες χορηγήθηκαν ενδογαστρικά σε 10 mL·kg-1 σωματικού βάρους μία φορά την ημέρα για 21 ημέρες. Οι ομάδες τυφλού και μοντέλου έλαβαν ίσου όγκου φυσιολογικό ορό. Η εγκυρότητα του μοντέλου επαληθεύτηκε μέσω της τελικής ιστοπαθολογικής βαθμολόγησης και της ανίχνευσης φλεγμονωδών βιοδεικτών ορού.

2.5 Συλλογή δειγμάτων & Προεπεξεργασία

Μετά από 21 ημέρες θεραπείας, οι αρουραίοι νήστεψαν για 12 ώρες (δωρεάν πρόσβαση στο νερό), το σωματικό βάρος καταγράφηκε πριν από την αναισθησία. Το αίμα συλλέχθηκε μέσω παρακέντησης κοιλιακής αορτής, αφέθηκε σε ηρεμία σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, φυγοκεντρήθηκε σε 3500 r·min-1 (ακτίνα φυγόκεντρου 9,5 cm) στους 4 βαθμούς για 15 λεπτά. Τα υπερκείμενα ορού μοιράστηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς.

Οι αρουραίοι ανατέμθηκαν αμέσως μετά τη συλλογή αίματος. Τα αμφίπλευρα επινεφρίδια, οι σπλήνες και οι προστάτες συλλέχθηκαν, ξεπλύθηκαν με φυσιολογικό ορό, ξηράνθηκαν με διηθητικό χαρτί και ζυγίστηκαν με ακρίβεια για τον υπολογισμό του δείκτη οργάνων. Οι κοιλιακοί λοβοί του προστάτη στερεώθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για ενσωμάτωση παραφίνης και χρώση Η&Ε.

2.6 Φαρμακοδυναμική αξιολόγηση του Zishen Wan έναντι αλλοιώσεων CP

2.6.1 Υπολογισμός δεικτών οργάνων

Δείκτης οργάνων (mg·g-1)=βάρος υγρού οργάνου (mg) / τελικό βάρος σώματος αρουραίου (g), υπολογισμένο για τον προστάτη, τα επινεφρίδια και τη σπλήνα.

2.6.2 Ιστοπαθολογική Παρατήρηση Προστατικού ιστού με χρώση H&E

Οι ιστοί του προστάτη που ήταν ενσωματωμένοι σε παραφίνη κόπηκαν σε φέτες, χρωματίστηκαν με Η&Ε και παρατηρήθηκαν σε μικροσκόπιο φωτός για ιστολογικές βλάβες. Η ημιποσοτική παθολογική βαθμολόγηση πραγματοποιήθηκε με βάση τρεις δείκτες: διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων, αδενική δομική καταστροφή, διάμεση ίνωση.

Πίνακας 1 Παθολογικά κριτήρια βαθμολόγησης για χρόνια προστατίτιδα

Βαθμολογία (πόντους)	Βαθμός διήθησης φλεγμονωδών κυττάρων	Αδενική δομική αλλοίωση	Βαθμός διάμεσης ίνωσης
0	Καμία ή εξαιρετικά μικρή διάσπαρτη διείσδυση	Η αδενική δομή είναι φυσιολογική, χωρίς ατροφία. τα επιθηλιακά κύτταρα είναι τακτοποιημένα	Χωρίς διάμεση διεύρυνση
1	Ήπια, διάσπαρτη διήθηση	Ήπια ατροφία αδένων. καθόλου ή εξαιρετικά μικρή καταστροφή αδένων. Τα κυλινδρικά επιθηλιακά κύτταρα παρουσιάζουν ήπια υπερπλασία και διαταραγμένη διάταξη	Ήπια διάμεση ίνωση, ήπια διεύρυνση
2	Μέτρια, διάχυτη διήθηση	Μέτρια ατροφία αδένων. ένας μικρός αριθμός αδένων καταστρέφεται. Τα κυλινδρικά επιθηλιακά κύτταρα παρουσιάζουν εμφανή υπερπλασία και διαταραγμένη διάταξη	Μέτρια διάμεση ίνωση, μέτρια διεύρυνση, οι αδένες διαχωρίζονται
3	Σοβαρή, διάχυτη πυκνή διήθηση	Σοβαρή μορφολογική παραμόρφωση, σοβαρή ατροφία ή καταστροφή αδένων. εκτεταμένη υπερπλασία/καταστροφή των επιθηλιακών κυττάρων της κυψελίδας	Εκτεταμένη διάμεση ίνωση, σοβαρή διεύρυνση, οι αδένες είναι ευρέως διαχωρισμένοι, συμπιεσμένοι και παραμορφωμένοι

2.6.3 Ποσοτικοποίηση ELISA ορού IL-1 , IL-18 και Bcl-2

Τα κατεψυγμένα δείγματα ορού αποψύχθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ELISA. Οι τιμές απορρόφησης στα 450 nm μετρήθηκαν μέσω συσκευής ανάγνωσης μικροπλακών, εφαρμόστηκαν τυπικές καμπύλες για τον υπολογισμό των συγκεντρώσεων στον ορό των IL-1, IL-18 και Bcl-2.

2.7 Μη στοχευμένη Μεταβολομική Ανάλυση ορού

2.7.1 Προεπεξεργασία δείγματος ορού

Δείγματα ορού από τυφλή ομάδα, ομάδα μοντέλου, ακατέργαστη ομάδα Zishen Wan υψηλής δόσης και ομάδα Zishen Wan επεξεργασμένη με υψηλή δόση άλατος αποψύχθηκαν αργά. 50 μL ορού αναμίχθηκαν με 200 μL προψυγμένου διαλύτη εκχύλισης (μεθανόλη: ακετονιτρίλιο=1:1), στροβιλισμός σε ανάπαυση για 750 λεπτά 5 λεπτά πριν το φιλτράρισμα. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου (QC) παρασκευάστηκαν με συγκέντρωση ίσων όγκων όλων των εκχυλισμάτων δειγμάτων για την παρακολούθηση της σταθερότητας του οργάνου.

2.7.2 Συνθήκες ανίχνευσης LC-MS

Χρωματογραφία: Waters ACQUITY UPLC BEH Στήλη αμιδίου (2,1 mm×50 mm, 1,7 μm), θερμοκρασία στήλης 30 μοίρες . Κινητή φάση Α: υδατικό διάλυμα που περιέχει 25 mmol·L-1 οξικό αμμώνιο + 25 mmol·L-1 νερό αμμωνίας (pH=9.75). Κινητή φάση Β: ακετονιτρίλιο. Έκλουση βαθμίδωσης: 0–0,25 λεπτά: 95% Β; 0,25–3,5 λεπτά: 95%–65% Β; 3,5–4 λεπτά: 65%–40% Β; 4–4,5 λεπτά: 40% Β; 4,5–4,55 λεπτά: 40%–95% Β; 4,55–6 λεπτά: 95% Β. Ρυθμός ροής: 0,5 mL·min-1, όγκος ένεσης: 2 μL.

Φασματομετρία Μάζας: Λειτουργία διπλού θετικού/αρνητικού ιόντος ESI, θερμοκρασία πηγής ιόντων 300 μοίρες, αέριο περιβλήματος 50 Arb, βοηθητικό αέριο 15 Arb, τάση ψεκασμού +3.8 kV / -3,4 kV. Πλήρης ανάλυση MS 60.000; Ανάλυση MS/MS 15.000, κλιμακωτή ενέργεια σύγκρουσης 20, 30, 40 eV.

2.7.3 Μεταβολομική Επεξεργασία Δεδομένων

Τα ακατέργαστα δεδομένα υποβλήθηκαν σε αναγνώριση κορυφών, ευθυγράμμιση, ολοκλήρωση και ταυτοποίηση ένωσης, αφαίρεση θορύβου μέσω φιλτραρίσματος σχετικής τυπικής απόκλισης και κανονικοποίησης με συνολική ένταση ρεύματος ιόντων. Πραγματοποιήθηκε προεπεξεργασία (πλήρωση τιμής που λείπει, μετασχηματισμός lg10) στο MetaboAnalyst 6.0, ακολουθούμενη από μοντελοποίηση PCA και OPLS-DA στο SIMCA 14.1. Μεταβολίτες με VIP > 1,0 και t-test P < 0,05 ταξινομήθηκαν ως διαφορικοί μεταβολίτες. Ο εμπλουτισμός της οδού KEGG πραγματοποιήθηκε σε όλους τους διαφορικούς μεταβολίτες.

2.8 Ολοκληρωτική Ανάλυση Δικτυακής Φαρμακολογίας & Μεταβολομικής

Τα διαγράμματα Venn χαρτογράφησαν επικαλυπτόμενες οδούς KEGG εμπλουτισμένες από σύνολα δεδομένων φαρμακολογίας δικτύου και μεταβολομικής ορού. Διαφορικοί μεταβολίτες και κοινόχρηστοι θεραπευτικοί στόχοι εισήχθησαν στο πρόσθετο Cytoscape Metscape για να κατασκευαστεί ένα αλληλεπιδραστικό δίκτυο "διαφορικού μεταβολίτη-αντίδρασης-ενζύμου-γονιδίου", εντοπίζοντας επικαλυπτόμενα γονίδια κόμβου μεταξύ των δύο στρωμάτων omics.

2.9 Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα δεδομένα μετρήσεων εκφράστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση (x̄±s). Για στατιστικούς υπολογισμούς χρησιμοποιήθηκε το λογισμικό SPSS 25.0. Πρώτα πραγματοποιήθηκαν δοκιμές κανονικότητας και ομοιογένειας διακύμανσης. Για κανονικά κατανεμημένα δεδομένα, εφαρμόστηκε μονόδρομη ANOVA για σύγκριση πολλών ομάδων. Δοκιμή LSD για σύγκριση κατά ζεύγη με ίση διακύμανση, δοκιμή Τ3 Dunnett για άνιση διακύμανση. Τα μη φυσιολογικά δεδομένα αναλύθηκαν μέσω της δοκιμής κατάταξης αθροίσματος H Kruskal-Wallis. Το P < 0,05 ορίστηκε ως στατιστικά σημαντική διαφορά.

3 Αποτελέσματα

3.1 Χημικός προσδιορισμός προφίλ και διαφορικά συστατικά του ακατέργαστου έναντι του επεξεργασμένου με αλάτι Zishen Wan

Η ποιοτική και ημιποσοτική ανάλυση χρωματογραφημάτων ολικών ιόντων από διπλά εκχυλίσματα αιθανόλης-νερού εντόπισε 76 χημικά συστατικά και στα δύο σκευάσματα, κυρίως αλκαλοειδή (φελοδενδρίνη, βερβερίνη), ξανθόνες (mangiferin, neomangiferin), σαπωνίνες Ⅲ σαπωνίνες και σαπωνίνες κινναμαλδεΰδη. Δεν δημιουργήθηκαν νέες ενώσεις ούτε εξαλείφθηκαν τα αρχικά συστατικά μετά την επεξεργασία του άλατος, ωστόσο παρατηρήθηκαν δραματικές μετατοπίσεις στη συγκέντρωση.

Τα διαγράμματα βαθμολογίας PCA έδειξαν πλήρη διαχωρισμό μεταξύ των συστάδων δειγμάτων ακατέργαστων και επεξεργασμένων με αλάτι, επιβεβαιώνοντας ότι η επεξεργασία αλατιού αναδιαμορφώνει δραστικά τη χημική σύνθεση των βοτάνων. Τα μοντέλα OPLS-DA πέτυχαν ισχυρή προγνωστική απόδοση (R²Y > 0,9, Q² > 0,9), με τεστ Q² δοκιμής 200 μεταθέσεων < 0, επαληθεύοντας την αξιόπιστη σταθερότητα του μοντέλου.

Ελέγχθηκαν 34 διαφορικές ενώσεις (VIP > 1,0, P < 0,05): 14 ενώσεις συμπεριλαμβανομένης της ανεμαρρενασαπωνίνης ΒⅢ, της βερβερίνης, της βερβερρουβίνης και της φελοδενδρίνης ρυθμίστηκαν σημαντικά μετά το τηγάνισμα με αλάτι. 20 συστατικά όπως η ανεμαρρενασαπωνίνη Ⅱ και η νεομαγγιφερίνη μειώθηκαν σημαντικά. Τα πλήρη στοιχεία της ένωσης είναι διαθέσιμα σε συμπληρωματικά δημοσιευμένα υλικά.

3.2 Δικτυακή Φαρμακολογική Πρόβλεψη των Μηχανισμών Anti-CP του Zishen Wan

3.2.1 Έλεγχος βιοδραστικών ενώσεων, στόχων συστατικών και στόχων νόσου CP

Το φιλτράρισμα ομοειδούς φαρμάκου των 76 ταυτοποιημένων συστατικών έδωσε 28 βιοδραστικές ενώσεις για το Zishen Wan. Η πρόβλεψη στόχου δημιούργησε 590 μη διπλότυπους πιθανούς πρωτεϊνικούς στόχους αυτών των δραστικών συστατικών. Συνολικά 1.425 γονίδια που σχετίζονται με νόσο και συνδέονται με τη χρόνια προστατίτιδα ανακτήθηκαν από τις βάσεις δεδομένων GeneCards και OMIM. Τα πλήρη σύνολα δεδομένων παρατίθενται στον Συμπληρωματικό Πίνακα 2.

3.2.2 Έλεγχος Δικτύου PPI & βασικού θεραπευτικού στόχου για CP

Η διασταύρωση Venn των στόχων συστατικών και στόχων νόσου CP παρήγαγε 185 κοινούς θεραπευτικούς στόχους. Το δίκτυο PPI που κατασκευάστηκε μέσω του STRING αναλύθηκε με τοπολογικούς αλγόριθμους CytoNCA. 57 στόχοι κεντρικού κόμβου φιλτράρθηκαν με διάμεση κατώφλια βαθμού, Κεντρικότητας μεταξύ, Κεντρικότητας εγγύτητας, Κεντρικότητας ιδιοδιανύσματος και τοπικής μέσης συνδεσιμότητας. Οι 10 κορυφαίοι στόχοι που ταξινομούνται κατά τιμή πτυχίου: STAT3, SRC, Akt1, HSP90AA1, EGFR, CTNNB1, TNF, PIK3CA, ESR1, ΙΟΥΝ. Η οπτικοποίηση δικτύου PPI περιλαμβάνεται σε συμπληρωματικό υλικό.

3.2.3 GO Functional Annotation & KEGG Pathway Εμπλουτισμός Θεραπευτικών Στόχων

Η ανάλυση εμπλουτισμού Metascape 185 επικαλυπτόμενων στόχων απέδωσε 2.540 σημαντικά εμπλουτισμένες εγγραφές GO:

Βιολογική διαδικασία (2.212 όροι): Οι κυρίαρχες λειτουργίες περιλαμβάνουν μεταγωγή σήματος υποδοχέα κυτταρικής επιφάνειας, ρύθμιση της κυτταρικής μετανάστευσης, ορμονική απόκριση, διαμόρφωση καταρράκτη MAPK.

Κυτταρικό συστατικό (110 όροι): Εμπλουτισμένο σε σύμπλοκα υποδοχέων, μεμβρανικές σχεδίες, εστιακές συμφύσεις.

Μοριακή λειτουργία (218 όροι): Επικεντρώθηκε στη δραστηριότητα της πρωτεϊνικής κινάσης και στην ικανότητα δέσμευσης κινάσης.

Ο εμπλουτισμός του μονοπατιού KEGG δημιούργησε 196 σημαντικούς καταρράκτες σηματοδότησης, κυρίως σηματοδότηση PI3K/Akt, σηματοδότηση MAPK, λιπιδική αθηροσκλήρωση, καρκίνο του προστάτη και μονοπάτια ενδοκρινικής αντίστασης - όλα συνδέονται στενά με την φλεγμονώδη εξέλιξη και τις πολλαπλασιαστικές βλάβες της χρόνιας προστατίτιδας. Τα πλήρη αποτελέσματα εμπλουτισμού παρέχονται σε συμπληρωματικά συνημμένα.

 

Πίνακας 2 Πιθανά ενεργά συστατικά του Zishenwan

Οχι.	Χημική ένωση	Χημικός τύπος	Αλλαγή τάσης	Οχι.	Χημική ένωση	Χημικός τύπος	Αλλαγή τάσης
1	Κουπρεσαλδεΰδη	C₁₀H₁₀O₃	↑	15	Magnoflorine*	C20H23NO4	↑
2	Φερουλικό οξύ	C₁₀H₁₀O₄	↑	16	Φελοδενδρίνη*	C20H23NO4	↑¹)
3	Irigenin	C₁₃H₁₀O₅	↓²)	17	Ομπακουνόνη	C₂₆H₃₂O₈	↑
4	Λιγνίνη	C₁₅H₁₀O₇	↑	18	Βαλίν	C5H11NO2	↑
5	Επικατεχίνη	C₁₅H₁₄O₆	↑	19	Προλίνη	C5H9NO2	↓
6	Αψισικό οξύ	C₁₅H₂₀O₄	↓	20	5-Υδροξυμεθυλοφουρφουράλη	C₆H₆O₃	↑¹)
7	2'-Ο-Μεθυλισολυκιριτιγενίνη	C₁₆H₁₄O₄	↑¹)	21	4-Υδροξυβενζαλδεΰδη	C₇H₆O₂	↑²)
8	Ισολιγιριτιγενίνη	C₁₆H₁₄O₅	↑	22	4-Υδροξυβενζοϊκό οξύ	C₇H₆O₃	↑²)
9	Liquiritigenin B	C₁₆H₁₈O₃	↑	23	Ακετοφαινόνη	C₈H₈O	↓²)
10	Φερουλοϋλτυραμίνη	C18H19NO4	↓	24	3-Ισοπροπυλγλουταρικό οξύ	C₉H₁₆O₄	↑
11	Τριϋδροξυοκταδεκενοϊκό οξύ	C₁₈H₃₄O₅	↓	25	Αζελαϊκό οξύ	C₉H₁₆O₄	↑
12	Βερβερρουμπίνη*	C19H15NO4	↑²)	26	Fraxin	C₉H₆O₄	↑
13	Berberine*	C20H17NO4	↑¹)	27	Τρανς-κινναμαλδεΰδη	C₉H₈O	↓
14	Jatrorrhizine*	C20H19NO4	↑¹)	28	Καφεϊκό οξύ	C₉H₈O₄	↓²)

*Σημείωση: ↑. Αυξημένη ρύθμιση? ↓. ρυθμίζεται προς τα κάτω. σε σύγκριση με την ομάδα ακατέργαστων προϊόντων, 1)P<0.05, ²)P<0.01; . Αυτό το συστατικό επιβεβαιώθηκε με σύγκριση με το πρότυπο αναφοράς.

3.2.4 Κατασκευή Ρυθμιστικού Δικτύου «Compound-Target-Pathway».

Τα κορυφαία 20 εμπλουτισμένα μονοπάτια KEGG, οι βασικές βιοδραστικές ενώσεις και οι στόχοι κόμβων ενσωματώθηκαν σε ένα οπτικοποιημένο ρυθμιστικό δίκτυο πολλαπλών επιπέδων στο Cytoscape. Η βερβερίνη, η φελοδενδρίνη, η μαγνοφλωρίνη, η γιατρορρριζίνη εμφάνισαν τις υψηλότερες τιμές βαθμού κόμβου, παράλληλα με τη σηματοδότηση του καρκίνου, τις φλεγμονώδεις οδούς PI3K/Akt και MAPK. Τα διαγράμματα δικτύου είναι διαθέσιμα σε συμπληρωματικό υλικό.

3.3 Φαρμακοδυναμικές επιδράσεις του ακατέργαστου έναντι του επεξεργασμένου με αλάτι Zishen Wan σε μοντέλα αρουραίων CP

3.3.1 Επιπτώσεις στους δείκτες οργάνων των αρουραίων CP

Σε σύγκριση με την κενή ομάδα ελέγχου, η ομάδα μοντέλου έδειξε σημαντικά αυξημένους δείκτες προστάτη, επινεφριδίων και σπλήνας (P<0.05, P<0.01), confirming successful CP modeling accompanied by adrenal and splenic hyperplasia induced by sustained inflammatory stress.

Σε σχέση με την ομάδα μοντέλου, ο θετικός έλεγχος Qianliekang και όλες οι ομάδες θεραπείας Zishen Wan πέτυχαν σημαντικά μειωμένους δείκτες οργάνων προστάτη (Ρ<0.05, P<0.01). Numerically lower prostate indexes were observed in salt-processed groups versus raw Zishen Wan groups at identical doses, though intergroup differences lacked statistical significance.

Το επεξεργασμένο με αλάτι υψηλής δόσης Zishen Wan μείωσε σημαντικά τους δείκτες των επινεφριδίων (P<0.01) and spleen indexes (P<0.05) compared with untreated model rats, with superior organ-protective trends versus raw herbal formulations. Data are summarized in Supplementary Table 3.

3.3.2 Ιστοπαθολογικές αλλαγές στον ιστό του προστάτη αρουραίου

Οι κενοί αρουραίοι ελέγχου εμφάνισαν ανέπαφη αρχιτεκτονική του αδένα του προστάτη: κανονική μορφολογία ακμής, ευθυγραμμισμένα επιθηλιακά κύτταρα, ελάχιστη διάμεση φλεγμονώδης διήθηση. Οι προστάτες της ομάδας μοντέλου εμφάνισαν σοβαρή ατροφία αδένα, επιθηλιακή υπερπλασία και απολέπιση, διευρυμένους διάμεσους χώρους με διάχυτη μαζική διήθηση ανοσοκυττάρων, παράλληλα με δραστικά αυξημένες παθολογικές βαθμολογίες (Ρ<0.01), validating severe CP lesions.

Η ομάδα Qianliekang εμφάνισε δραματικά μειωμένη φλεγμονώδη διήθηση και αποκατέστησε την αδενική δομή, με σημαντικά χαμηλότερες παθολογικές βαθμολογίες (P<0.01). Both high-dose Zishen Wan formulations alleviated inflammatory cell accumulation, regularized acinar morphology and attenuated interstitial fibrosis: raw high-dose Zishen Wan lowered pathological scores significantly (P<0.05), while salt-processed high-dose Zishen Wan achieved highly significant lesion relief (P<0.01). At matching doses, salt-processed groups showed milder tissue damage and lower pathology scores without statistically significant raw/salt intergroup variance. Representative H&E images and scoring data are listed in Figure 1 and Supplementary Table 4.

 

Πίνακας 3 Επίδραση του Zishenwan στον δείκτη οργάνων αρουραίων CP πριν και μετά την επεξεργασία άλατος του Anemarrhenae Rhizoma (AR) και του Phellodendri Chinensis Cortex (PCC) (x̄±s, n=6, mg·g-1)

 

Ομάδα	Δοσολογία / g·kg-1	Δείκτης προστάτη	Δείκτης επινεφριδίων	Δείκτης σπλήνας
Κενή ομάδα	-	1.96±0.09	0.14±0.04	1.67±0.13
Ομάδα μοντέλων	-	2.66±0.11²)	0.28±0.02²)	1.95±0.17¹)
Ομάδα Qianliekang	1.54	2.08±0.06⁴)	0.19±0.02⁴)	2.00±0.09
Ακατέργαστη ομάδα Zishenwan υψηλής δόσης	5.4	2.14±0.13⁴)	0.21±0.05	1.77±0.09
Ομάδα Zishenwan επεξεργασμένη με υψηλές δόσεις αλατιού	5.4	2.11±0.08⁴)	0.18±0.05³)	1.67±0.12³)
Ακατέργαστη ομάδα Zishenwan χαμηλής δόσης	1.8	2.42±0.16³)	0.22±0.06	1.81±0.20
Ομάδα Zishenwan επεξεργασμένη με αλάτι χαμηλής δόσης	1.8	2.39±0.19³)	0.22±0.04	1.82±0.18

Σημείωση: Σε σύγκριση με την κενή ομάδα, ¹)Σ<0.05, ²)P<0.01; compared with the model group, ³)P<0.05, ⁴)P<0.01 (the same applies to Table 4 and Table 5).

3.3.3 Διαμόρφωση των επιπέδων ορού IL-1 , IL-18 και Bcl-2

Οι συγκεντρώσεις στον ορό IL-1, IL-18 και Bcl-2 ήταν αξιοσημείωτα αυξημένες στην ομάδα μοντέλου σε σχέση με τους τυφλούς αρουραίους (Ρ<0.01). Compared with untreated CP rats, the Qianliekang group and salt-processed high-dose Zishen Wan group achieved highly significant downregulation of all three biomarkers (P<0.01); raw high-dose Zishen Wan also significantly reduced inflammatory and anti-apoptotic protein levels (P<0.05, P<0.01). Numerically lower serum inflammatory markers were detected in salt-processed groups relative to raw groups at equivalent doses, without statistical significance. Full ELISA data are presented in Supplementary Table 5.

 

Πίνακας 5 Επίδραση του Zishenwan στα επίπεδα ορού των IL-1 , IL-18 και Bcl-2 σε αρουραίους CP πριν και μετά την επεξεργασία άλατος AR και PCC (x̄±s, n=6)

Ομάδα	Δοσολογία / g·kg-1	IL-1 / ng·L-1	IL-18 / ng·L-1	Bcl-2 / ug·L-1
Κενή ομάδα	-	66.96±16.51	33.28±10.98	0.20±0.05
Ομάδα μοντέλων	-	120.60±11.06²)	56.65±6.62²)	0.43±0.07²)
Ομάδα Qianliekang	1.54	89.20±7.28⁴)	39.12±4.31⁴)	0.26±0.06⁴)
Ακατέργαστη ομάδα Zishenwan υψηλής δόσης	5.4	93.60±15.29³)	43.28±6.91³)	0.28±0.06⁴)
Ομάδα Zishenwan επεξεργασμένη με υψηλές δόσεις αλατιού	5.4	88.48±11.81⁴)	37.22±5.21⁴)	0.27±0.05⁴)
Ακατέργαστη ομάδα Zishenwan χαμηλής δόσης	1.8	103.50±15.79	47.17±9.62	0.33±0.09
Ομάδα Zishenwan επεξεργασμένη με αλάτι χαμηλής δόσης	1.8	98.03±14.06	46.66±6.32	0.32±0.06

3.4 Μεταβολικά ορού Διευκρίνιση του Συνεργιστικού Μηχανισμού Αποτελεσματικότητας Επεξεργασίας Αλατιού

3.4.1 Πολυμεταβλητή Στατιστική Μοντελοποίηση

Τα διαγράμματα PCA δεν αποκάλυψαν ακραία δείγματα, με αυστηρή ομαδοποίηση δειγμάτων QC για επικύρωση σταθερής απόδοσης ανίχνευσης LC-MS. Ο σαφής διαχωρισμός μεταξύ των ομάδων τυφλού και μοντέλου επιβεβαίωσε σοβαρή διαταραχή της μεταβολικής ομοιόστασης του ορού που προκαλείται από αλλοιώσεις CP. Οι επεξεργασμένες με αλάτι και οι ακατέργαστες ομάδες Zishen Wan επικαλύπτονταν εν μέρει αλλά παρέμειναν σαφώς διαχωρισμένες από το σύμπλεγμα παθολογικού μοντέλου. Τα μοντέλα OPLS-DA πέτυχαν ισχυρή επεξηγηματική και προγνωστική ισχύ (R²Y > 0,6, Q² > 0,6), με δοκιμή μετάθεσης Q² τομής < 0, επαληθεύοντας την αξιόπιστη απόδοση ταξινόμησης. Πολυμεταβλητά οικόπεδα επισυνάπτονται σε συμπληρωματικά υλικά.

3.4.2 Αναγνώριση διαφορικών μεταβολιτών ορού

Οι διαφορικοί μεταβολίτες εξετάστηκαν μέσω OPLS-DA VIP > 1,0 και t-test P <0,05:

Blank vs Model: 215 διαφορικοί μεταβολίτες

Επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan vs Model: 212 διαφορικοί μεταβολίτες

Raw Zishen Wan vs Model: 158 διαφορικοί μεταβολίτες

Επεξεργασμένο με αλάτι vs Raw Zishen Wan: 117 διαφορικοί μεταβολίτες

Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan ανέστρεψε τα μη φυσιολογικά επίπεδα 38 διαταραγμένων μεταβολιτών του πυρήνα, συμπεριλαμβανομένων 23 κοινών μεταβολιτών που κανονικοποιήθηκαν τόσο από ακατέργαστα σκευάσματα όσο και με επεξεργασμένα με αλάτι, συν 15 μοναδικά ρυθμισμένους μεταβολίτες αποκλειστικά για το Zishen Wan επεξεργασμένο με αλάτι. Πλήρεις κατάλογοι μεταβολιτών παρέχονται σε συμπληρωματικά υλικά.

3.4.3 Ανάλυση εμπλουτισμού μεταβολικής οδού KEGG

Η ανάλυση εμπλουτισμού όλων των διαφορικών μεταβολιτών εντόπισε 14 βασικούς μεταβολικούς καταρράκτες που αποκαταστάθηκαν με την παρέμβαση Zishen Wan, με επίκεντρο τον μεταβολισμό της -αλανίνης και της ινδόλης οξικού οξέος.

Blank vs Model: Οι διαταραγμένες οδοί περιλαμβάνουν μεταβολισμό πυριμιδίνης, μεταβολισμό -αλανίνης, βιοσύνθεση παντοθενικού και CoA.

Raw Zishen Wan vs Model: Τα αποκατεστημένα μονοπάτια περιλαμβάνουν μεταβολισμό ιστιδίνης, μεταβολισμό -αλανίνης, μεταβολισμό τρυπτοφάνης, μεταβολισμό ταυρίνης και υποταυρίνης, μεταβολισμό αραχιδονικού οξέος.

Επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan vs Model: Οκτώ εμπλουτισμένα ρυθμιστικά μονοπάτια: μεταβολισμός πυριμιδίνης, βιοσύνθεση παντοθενικού και CoA, μεταβολισμός -αλανίνης, μεταβολισμός ιστιδίνης, μεταβολισμός ταυρίνης και υποταυρίνης, μεταβολισμός τρυπτοφάνης.

Επεξεργασμένο με αλάτι έναντι Raw Zishen Wan: Διαφορικές οδοί με επίκεντρο τον μεταβολισμό της τρυπτοφάνης, της -αλανίνης, της ιστιδίνης, της ταυρίνης.

Διαδρομές με τιμή πρόσκρουσης διαδρομής > 0,1 ενσωματώθηκαν σε διαγράμματα φυσαλίδων μήτρας για διαισθητική σύγκριση:

-Μεταβολισμός αλανίνης: Κοινή βασική οδός που ρυθμίζεται σε όλες τις συγκρίσεις μεταξύ ομάδων.

Βιοσύνθεση παντοθενικού & CoA, μεταβολισμός πυριμιδίνης: Μοναδικές ρυθμιστικές οδοί που ενεργοποιούνται μόνο από το Zishen Wan που έχει υποστεί επεξεργασία με αλάτι.

Μεταβολισμός αργινίνης και προλίνης: Αποκλειστικός μεταβολικός καταρράκτης που διαμορφώνεται από σκευάσματα επεξεργασμένα με αλάτι.

Τρυπτοφάνη, ιστιδίνη, μεταβολισμός ταυρίνης: Ρυθμίζεται τόσο από το ακατέργαστο όσο και από το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan με ισχυρότερο ρυθμιστικό μέγεθος σε ομάδες επεξεργασμένες με αλάτι. Όλα τα δεδομένα εμπλουτισμού διαδρομής συνοψίζονται στον Συμπληρωματικό Πίνακα 6 και σε συμπληρωματικό οπτικό υλικό.

 

Πίνακας 6 Βασικοί διαφορικοί μεταβολίτες ορού σε αρουραίους CP μετά από παρέμβαση με διαφορετικά σκευάσματα Zishenwan

 

Οχι.	Μεταβολίτης	Χημικός τύπος	Αναγνωριστικό HMDB	B/A	C/B	D/B	D/C
1	-Αλανίνη	C3H7NO2	HMDB0000056	↓	↑¹)	↑²)	↑¹)
2	Ινδολεοξικό οξύ	C10H9NO2	HMDB0000197	↓	↑	↑²)	↑
3	Τρυπτοφάνη	C₁₁H₁₂N₂O₂	HMDB0030396	↓	↑¹)	↑²)	↑¹)
4	Γουανιδινοοξικό οξύ	C₃H₇N₃O₂	HMDB0000128	↓	↑	↑¹)	↑
5	Ουρακίλης	C₄H₄N₂O₂	HMDB0000300	↓²)	↑²)	↑²)	↑
6	5,6-Διυδροουρακίλη	C₄H₆N₂O₂	HMDB0000076	↓¹)	↑	↑²)	↑
7	Ασπαρτικό οξύ	C4H7NO4	HMDB0000191	↓	↑¹)	↑¹)	↑¹)
8	Αργινίνη	C₆H₁₄N₄O₂	HMDB0000517	↓	↑	↑²)	↑
9	Παντοθενικό οξύ	C9H17NO5	HMDB0000210	↓	↑	↑¹)	↑²)
10	Ουροκανικό οξύ	C₁₀H₁₂N₂O₃	HMDB0000684	↑	↓¹)	↓¹)	↓
11	Ουροκινικό οξύ	C10H7NO3	HMDB0000715	↑¹)	↓¹)	↓¹)	↓
12	Παλμιτικό οξύ	C₁₆H₃₂O₂	HMDB0000220	↑¹)	↓	↓²)	↓
13	Ουρικό οξύ	C₅H₄N₄O₃	HMDB0000289	↑²)	↓	↓	↓²)
14	Προλίνη	C5H9NO2	HMDB0000162	↑	↓	↓²)	↓

Σημείωση: ↑. Αυξημένη ρύθμιση? ↓. ρυθμίζεται προς τα κάτω. Α. Κενή ομάδα. Β. Ομάδα μοντέλων. Γ. Ομάδα Raw Zishenwan. Δ. Ομάδα Zishenwan επεξεργασμένη με αλάτι. διομαδική σύγκριση 1)Σελ<0.05, ²)P<0.01.

 

3.5 Ολοκληρωμένη Δικτυακή Φαρμακολογία & Ανάλυση Μεταβολωμικής

Η σύγκριση του Venn 196 οδών KEGG από τη φαρμακολογία δικτύου και 8 μεταβολικών οδών ειδικά για την επεξεργασία άλατος εντόπισε δύο αλληλοεπικαλυπτόμενους πυρήνες: μεταβολισμό τρυπτοφάνης και μεταβολισμό αργινίνης-προλίνης.

Διαφορικοί μεταβολίτες από τις ομάδες Zishen Wan με Model vs Salt-επεξεργασμένες ομάδες Zishen Wan και Raw vs Salt-επεξεργασμένες ομάδες Zishen Wan εισήχθησαν στο Metscape για την κατασκευή δικτύων "μεταβολίτη-αντίδραση-ένζυμο-γονίδιο", αναγνωρίζοντας κοινά γονίδια κόμβου σύμφωνα με θεραπευτικούς στόχους φαρμακολογίας δικτύου:

Δίκτυο (Model vs Salt-επεξεργασμένο Zishen Wan):

Μεταβολισμός τρυπτοφάνης: MAOA, COMT

Μεταβολισμός αργινίνης & προλίνης: ARG1

Μεταβολισμός τυροσίνης: COMT

De novo σύνθεση λιπαρών οξέων: FASN

Δίκτυο (Ακατέργαστο εναντίον επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan): Επανεμπλουτισμός των μονοπατιών σύνθεσης τρυπτοφάνης, τυροσίνης και λιπαρών οξέων, καθώς και νέοι καταρράκτες: μεταβολισμός πουρίνης (MPO, XDH), κύκλος τρικαρβοξυλικού οξέος (IDH1).

Ο μεταβολισμός της τρυπτοφάνης εμφανίστηκε ως η μόνη κοινή οδός υψηλής επίδρασης (Επίπτωση > 0,1) και στα δύο ολοκληρωμένα δίκτυα omics, υποδεικνύοντας τον κεντρικό του ρόλο στην ενισχυμένη αποτελεσματικότητα κατά της προστατίτιδας στην επεξεργασία άλατος. Μια χαρτογράφηση υποδικτύου των ρυθμιστικών αλληλεπιδράσεων του μεταβολισμού της τρυπτοφάνης αποκάλυψε διαφωνία μεταξύ MAOA, COMT και πολλαπλών ισομορφών CYP450 (CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2D6, CYP3A4, CYP19A1). Ολόκληρα διαδραστικά διαγράμματα δικτύου επισυνάπτονται σε συμπληρωματικό υλικό.

 

4 Συζήτηση

4.1 Η επεξεργασία αλατιού αλλάζει τα φυτικά χημικά προφίλ για τη δημιουργία βάσης υλικού προστασίας του προστάτη

Η επιβεβαιωμένη επεξεργασία άλατος με το χημικό προφίλ LC-MS προκαλεί σημαντικές αλλαγές συγκέντρωσης βασικών βιοδραστικών ενώσεων στο Zishen Wan, με εμφανή αύξηση της βερβερίνης, της βερβερρουβίνης και της φελοδενδρίνης. Η υπάρχουσα έρευνα δείχνει ότι η βερβερρουμπίνη ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του νεφρικού μεταφορέα OCT2 για να ενισχύσει τη στοχευμένη στους νεφρούς συσσώρευση αλκαλοειδών φαλλοδένδρων, χρησιμεύοντας ως βασική ένωση δείκτη που υποστηρίζει τη θεωρία TCM "οδηγός βοτάνων επεξεργασμένων με αλάτι στον μεσημβρινό των νεφρών".

 

 

Cistanche tubulosaεκχύλισμα

Επισκεφθείτε την Καταχώριση για περισσότερες λεπτομέρειες

 

Υποστήριξη της Wecistanche-Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη συνεργασία
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

Η βερβερίνη και η φελοδενδρίνη είναι καλά τεκμηριωμένο φυσικό βότανο TCM για τη φλεγμονή του προστάτη: καταστέλλουν τους καταρράκτες PI3K/Akt/mTOR, NF-κB και MAPK που συνδέονται με φλεγμονή που προκαλείται από CP, διάμεση ίνωση και πυελικό πόνο. Τα φαρμακοκινητικά δεδομένα επιβεβαιώνουν περαιτέρω ότι η επεξεργασία αλατιού αυξάνει την κατανομή αυτών των αλκαλοειδών στον νεφρικό ιστό, θέτοντας μια άμεση υλική βάση για την ανώτερη αποτελεσματικότητα κατά της προστατίτιδας του επεξεργασμένου με αλάτι Zishen Wan.

Για τους καταναλωτές που αναζητούν αυτόνομη ή συμπληρωματική υποστήριξη προστάτη, η υψηλή συγκέντρωση του εργοστασίου μαςCistanche tubulosaτο εκχύλισμα συμπληρώνει τέλεια αυτή τη φόρμουλα. Σε αντίθεση με το συνηθισμένο κιστανάκι της ερήμου, το δικό μαςCistanche tubulosaεκχύλισμαπεριέχει σημαντικά υψηλότερα επίπεδα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (εχινακοσίδη, ακτεοσίδη), παρέχοντας ισχυρά θρεπτικά για τα νεφρά, αντιφλεγμονώδη και προστατευτικά αποτελέσματα του ουροποιητικού συστήματος για να ενισχύσει τα θεραπευτικά οφέλη του Zishen Wan για άνδρες με χρόνια δυσφορία στον προστάτη. Η πλήρης εισαγωγή μας στην παραγωγή και την Ε&Α: https://www.xjcistanche.com/about-us; αναλυτικός οδηγός υγείας του προστάτη cistanche: https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.

 

4.2 Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan έχει ανώτερες αντιφλεγμονώδεις και φαρμακοδυναμικές επιδράσεις επανόρθωσης ιστών

Οι IL-1 και IL-18 είναι τελικές τελεστικές κυτοκίνες που απελευθερώνονται από ενεργοποιημένα φλεγμονώδη NLRP3, οδηγώντας σε επίμονη φλεγμονώδη διήθηση στη χρόνια προστατίτιδα. Η υπερέκφραση του Bcl-2 αναστέλλει την απόπτωση των φλεγμονωδών ανοσοκυττάρων, διαιωνίζοντας παρατεταμένες φλεγμονώδεις βλάβες της πυέλου.

Τα in vivo φαρμακοδυναμικά δεδομένα που επαληθεύτηκαν τόσο το ακατέργαστο όσο και το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan μειώνουν αποτελεσματικά τη μεγέθυνση του προστάτη, αναστρέφουν τη βλάβη του αδενικού ιστού και καταστέλλουν τον προφλεγμονώδη ορό IL-1 , IL-18 και το αντι-αποπτωτικό Bcl-2. Τα σκευάσματα επεξεργασμένα με αλάτι εμφάνιζαν σταθερά αριθμητικά ανώτερες θεραπευτικές τάσεις σε όλους τους δείκτες αποτελεσματικότητας, επιβεβαιώνοντας ότι το τηγάνισμα με αλάτι ενισχύει την αντιφλεγμονώδη ικανότητα της φόρμουλας για συμπτώματα CP.

4.3 Η επεξεργασία αλατιού ενισχύει την αποκατάσταση της μεταβολικής ομοιόστασης μέσω μοναδικών ενεργειακών και ανοσολογικών μεταβολικών οδών

Η μεταβολομική του ορού απέδειξε τόσο το ακατέργαστο όσο και το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan αποκαθιστά τον διαταραγμένο μεταβολισμό -αλανίνης, αυξάνοντας τα επίπεδα αλανίνης και ασπαρτικού ορού για την ενίσχυση της αντιοξειδωτικής άμυνας και της πρωτεϊνικής σύνθεσης των ιστών για την αποκατάσταση της βλάβης του προστάτη - με ισχυρότερα αποτελέσματα ομαλοποίησης που παρατηρούνται σε ομάδες που επεξεργάζονται με αλάτι.

Μοναδικά, το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan αναστρέφει τις διαταραχές στη βιοσύνθεση παντοθενικού-CoA και στον μεταβολισμό της πυριμιδίνης. -η αλανίνη και το παντοθενικό οξύ δρουν ως κρίσιμοι πρόδρομοι για τη σύνθεση CoA, μια διαδικασία που ρυθμίζεται θετικά από τη σηματοδότηση PI3K/Akt. Το CoA λειτουργεί ως βασικός συμπαράγοντας για τον μεταβολισμό της κυτταρικής ενέργειας και τις αντιφλεγμονώδεις αντιδράσεις ακετυλίωσης. Τα αυξημένα επίπεδα παντοθενικού ορού, 5,6-διυδροουρακίλης και -αλανίνης σε ομάδες επεξεργασίας με άλατα υποδεικνύουν ότι το τροποποιημένο με αλάτι Zishen Wan ενεργοποιεί το PI3K/Akt για να διευκολύνει την παραγωγή CoA, αποκαθιστώντας την κυτταρική ενεργειακή ισορροπία του προστάτη και μετριάζοντας τον φλεγμονώδη τραυματισμό.

4.4 Ολοκληρωμένα Omics αποκαλύπτουν τους βασικούς ανοσο-μεταβολικούς μηχανισμούς της συνέργειας επεξεργασίας αλατιού

4.4.1 Μεταβολισμός τρυπτοφάνης: Κεντρικός Ανοσορυθμιστικός Καταρράκτης

Ο μεταβολισμός της τρυπτοφάνης διέπει την ανοσολογική ομοιόσταση και τη φλεγμονώδη απόκριση. Ο μεταβολίτης του ινδόλη οξικό οξύ δρα ως συνδέτης AhR για να ασκεί ισχυρή αντιφλεγμονώδη δράση. Η ολοκληρωμένη ανάλυση εντόπισε τα ένζυμα CYP450 (CYP1A1, CYP1B1) ως βασικούς μεσολαβητές που μετατρέπουν την τρυπτοφάνη σε αγωνιστές AhR για την εξισορρόπηση των αναλογιών των ανοσοκυττάρων Th17/Treg και την καταστολή της φλεγμονής.

Αντίθετα, η περίσσεια κυνουρενίνης ενεργοποιεί τη σηματοδότηση AhR-STAT3 για να επάγει προφλεγμονώδη IL-6, ενώ επίσης διεγείρει το PI3K/Akt για να ενεργοποιήσει την ενεργοποίηση του φλεγμονώδους του NLRP3 και την απελευθέρωση IL-1. Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan ρυθμίζει προς τα πάνω την τρυπτοφάνη και το οξικό οξύ ινδόλης στον ορό, ενώ μειώνει τα επίπεδα κυνουρενίνης, διαμορφώνει τους στόχους CYP450, STAT3 και άλλους κεντρικούς στόχους για να μπλοκάρει τους προφλεγμονώδεις καταρράκτες AhR/STAT3 και PI3K/Akt και να εξισορροπεί την ανοσολογική λειτουργία σε βλάβες CP.

4.4.2 Μεταβολισμός αργινίνης-προλίνης: Μεσολαβεί στην επιδιόρθωση των ιστών και κατά της ίνωσης

Ο μεταβολισμός αργινίνης-προλίνης συντονίζει την εξάλειψη της φλεγμονής και την αναγέννηση των ιστών. Η αργινίνη δρα ως πρόδρομος για τη σύνθεση νιτρικού οξειδίου, κρεατίνης και πολυαμίνης. Η γουανιδινοοξική εστέρα χρησιμεύει ως βασικό ενδιάμεσο για την παραγωγή κρεατίνης, η οποία ασκεί προστατευτικά αποτελέσματα των ιστών κατά τη διάρκεια φλεγμονώδους βλάβης. Ο κοινός στόχος πλήμνης ARG1 καταλύει τη σύνθεση πολυαμίνης για να επιταχύνει την επιδιόρθωση του ιστού του προστάτη.

Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan αυξάνει την αργινίνη και το γουανιδινοοξικό ορό ρυθμίζοντας προς τα πάνω τη δραστηριότητα του ARG1 για την ενίσχυση της σύνθεσης κρεατίνης και πολυαμίνης για προστασία του αδένα, ενώ μειώνει τις συγκεντρώσεις προλίνης στον ορό για την αναστολή της υπερβολικής εναπόθεσης κολλαγόνου και την αργή εξέλιξη της διάμεσης ίνωσης στην CP.

4.4.3 Συμπληρωματικοί αντιφλεγμονώδεις μεταβολικοί καταρράκτες μοναδικοί σε επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan

Η διαφορική σύγκριση μεταβολιτών μεταξύ ομάδων ακατέργαστων και επεξεργασμένων με αλάτι αποκάλυψε πρόσθετες ρυθμιστικές οδούς, συμπεριλαμβανομένης της de novo σύνθεσης λιπαρών οξέων και του μεταβολισμού πουρίνης:

Σύνθεση λιπαρών οξέων: Το παλμιτικό, το τελικό προϊόν αυτής της οδού, ενεργοποιεί τη σηματοδότηση MAPK των μακροφάγων για να πυροδοτήσει την απελευθέρωση φλεγμονώδους NLRP3 των IL-1 μεσολαβητών πόνου. Ο βασικός στόχος της φαρμακολογίας δικτύου JUN (MAPK κατάντη μεταγραφικός παράγοντας) και το FASN (ένζυμο περιορισμού του ρυθμού διαδρομής) ελέγχουν από κοινού τη βιοσύνθεση του παλμιτικού. Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan μειώνει τα επίπεδα παλμιτικού ορού συν-καταστέλλοντας το JUN και το FASN, εμποδίζοντας τη φλεγμονώδη ενεργοποίηση του MAPK/NLRP3 για την ανακούφιση της πυελικής φλεγμονής και του πόνου.

Μεταβολισμός πουρίνης: Το αυξημένο ουρικό οξύ του ορού σε CP αντανακλά φλεγμονώδη οξειδωτική βλάβη. Το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan ρυθμίζει προς τα κάτω το XDH και το MPO για να μειώσει τη δημιουργία ουρικού οξέος και αντιδραστικών ειδών οξυγόνου, ανακουφίζοντας τον οξειδωτικό ιστό που προκαλείται από ουδετερόφιλα στον προστάτη.

4.5 Περιορισμοί Έρευνας & Μελλοντικές Κατευθύνσεις

Ενώ το επεξεργασμένο με αλάτι Zishen Wan ξεπερνούσε σταθερά τα ακατέργαστα σκευάσματα σε όλους τους φαρμακοδυναμικούς δείκτες, οι αριθμητικές διαφορές μεταξύ ομάδων δεν έφτασαν σε στατιστική σημασία, πιθανότατα να αποδοθούν σε μεμονωμένες βιολογικές παραλλαγές και περιορισμένο μέγεθος δείγματος. Ωστόσο, η σταθερή τάση θεραπευτικής υπεροχής ευθυγραμμίζεται με τις αυξημένες συγκεντρώσεις ενεργών αλκαλοειδών και την ευρύτερη ρυθμιστική ικανότητα της μεταβολικής οδού που παρατηρείται σε δείγματα επεξεργασμένα με αλάτι.

Συνοπτικά, η επεξεργασία αλατιού ρυθμίζει προς τα πάνω τα βασικά αντιφλεγμονώδη αλκαλοειδή στο Zishen Wan, επιτρέποντας τη συνεργική καταστολή πολλαπλών συστατικών των οδών προφλεγμονώδους σηματοδότησης PI3K/Akt και MAPK, παράλληλα με τη διαμόρφωση πολλαπλών στόχων της τρυπτοφάνης, της αργινίνης, του παντοθενικού και των λιπαρών οξέων, οι αντιφλεγμονώδεις και συν-ρυθμιστικοί καταρράκτες του μεταβολισμού των λιπαρών οξέων. αποτελεσματικότητα αποκατάστασης ιστών κατά της χρόνιας προστατίτιδας.

Αυτή η μελέτη καθιερώνει προκαταρκτικά μοριακά στοιχεία για την κλασική θεωρία TCM «η επεξεργασία αλατιού καθοδηγεί τα βότανα στον μεσημβρινό των νεφρών». Ωστόσο, οι στόχοι κεντρικού κόμβου και τα μονοπάτια σηματοδότησης που προσδιορίζονται μέσω της πρόβλεψης omics απαιτούν άμεση επικύρωση πρωτεΐνης μέσω δοκιμών Western blot. Οι in vivo φαρμακοκινητικές μετατοπίσεις των φυτικών συστατικών πριν και μετά την επεξεργασία του αλατιού παραμένουν αχαρακτήριστες. Η έρευνα παρακολούθησης θα διεξαγάγει επαλήθευση του επιπέδου πρωτεΐνης των προβλεπόμενων βασικών στόχων σε συνδυασμό με φυτική φαρμακοκινητική ανάλυση για να αποσαφηνιστεί περαιτέρω η πλήρης επιστημονική χροιά της συνεργιστικής αποτελεσματικότητας της επεξεργασίας αλατιού για την υγεία των νεφρών και του προστάτη.

Για παρασκευαστές δυτικής επωνυμίας που αναπτύσσουν φυσικό βότανο TCM για συμπληρώματα χρόνιας προστατίτιδας, συνδυάζοντας το επεξεργασμένο με αλάτι φυτικό εκχύλισμα Zishen Wan με το υψηλής δραστικότητας μαςCistanche tubulosaΤο εκχύλισμα προσφέρει διπλά οφέλη για τη διατροφή των νεφρών και την καταπολέμηση της προστατίτιδας, δημιουργώντας διαφοροποιημένα προϊόντα ευεξίας για άνδρες, προσαρμοσμένα στη ζήτηση των καταναλωτών της Ευρώπης και της Αμερικής για φυτικές λύσεις υποστήριξης προστάτη.

 

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά οικονομικά συμφέροντα.

 

Αναφορές

[1] Zhang CL, Fan LH, Fan SM. Πρόοδος της έρευνας για το χάπι Zishen[J]. Pharm Clin Chin Mater Med, 2019, 10(Z2):59-64. [2] Wang WJ, Yang ZM, Li A. Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τα χημικά συστατικά, τις φαρμακολογικές επιδράσεις του Anemarrhenae Rhizoma και την προγνωστική ανάλυση των δεικτών ποιότητάς του[J]. China J Chin Mater Med, 2025, 50(4):934-945. [3] Li JQ, Zhang Q, Chen YT. Πρόοδοι στις φαρμακολογικές επιδράσεις της απομεθυλενοβερβερίνης[J]. Chin Pharmacol Bull, 2025, 41(1):7-12. [4] Zhou JH, Ding ZH, Song PR. Αντιφλεγμονώδες αποτέλεσμα και μηχανισμοί της κινναμαλδεΰδης: Ανασκόπηση [J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2026, doi:10.13412/j.cnki.zyyl.20250929.009. [5] Su M, Tan FX, Lv J. Μελέτη επί της υλικής βάσης του Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis Cortex κατά της φλεγμονής με βάση τη φαρμακολογία δικτύου, τη μοριακή σύνδεση και την πειραματική επαλήθευση[J]. Nat Prod Res Dev, 2022, 34(4):687-698. [6] Li SL, Lu GG, Zhao YB. Πρόοδος της έρευνας στη θεραπεία της χρόνιας προστατίτιδας / συνδρόμου χρόνιου πυελικού πόνου με την παραδοσιακή κινεζική ιατρική[J]. China J Chin Mater Med, 2024, 49(10):2648-2653. [7] Fan SM, Yang YX, Zhang CL. Αλλαγές στο δακτυλικό αποτύπωμα HPLC και στα συστατικά πολλαπλών δεικτών του ζεύγους βοτάνων Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri chinensis πριν και μετά την επεξεργασία με αλάτι[J]. Chin Tradit Pat Med, 2023, 45(3):820-828. [8] Zhang CL, Fan SM, Li X. Συγκριτική μελέτη για τις επιδράσεις διαφορετικών χαπιών Zishen που αποτελούνται από ωμό ή αλατισμένο Anemarrhenae Rhizoma και Phellodendri Chinensis Cortex στη χρόνια προστατίτιδα και την εντερική χλωρίδα[J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2021, 37(1):34-40. [9] Su XN. Υλική βάση και φαρμακοκινητική μελέτη Anemarrhenae Rhizoma[D] που έχει υποστεί επεξεργασία με αλάτι. Nanjing: Nanjing University of Chinese Medicine, 2020. [10] Zhang F, Meng L, Li PP. Διαφορές απορρόφησης μεταξύ του ακατέργαστου και του επεξεργασμένου με θαλασσινό νερό Phellodendron chinense σε νεφρό αρουραίων[J]. Chin Tradit Pat Med, 2020, 42(11):2954-2959. [11] Fan SM, Zhang CL, Wang JQ. Επίδραση της συμβατότητας των φαρμάκων δίστιχου φλοιού Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis στον μεταβολισμό των γλυκολιπιδίων σε διαβητικούς αρουραίους τύπου 2 πριν και μετά την επεξεργασία με αλάτι[J]. Chin J Exp Tradit Med Form, 2021, 27(3):22-29. [12] Xiong Y, Cheng SY, Zhang DD. Μηχανισμός των καψουλών Jingangteng στη βελτίωση της χρόνιας μη βακτηριακής προστατίτιδας με βάση τη μικροχλωρίδα του εντέρου και τη μεταβολομική[J]. China J Chin Mater Med, 2025, 50(19):5521-5533. [13] Ge XT. Μελέτη για τον μηχανισμό επεξεργασίας του «επεξεργασμένου με αλάτι Phellodendri Chinensis Cortex που εισέρχεται στα νεφρά» με βάση την τεχνολογία «κυτταρικής πρόσληψης-αλιείας συνδέτη»[D]. Shenyang: Πανεπιστήμιο Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής Liaoning, 2025.