Η επίδραση της τροπισετρόνης στο οξειδωτικό στρες, το SIRT1, το FOXO3a και το Claudin-1 στον νεφρικό ιστό διαβητικών αρουραίων που προκαλούνται από STZ

edmund.chen@wecistanche.com

Αφηρημένη

Το Tropisetron είναι ένας 5-ανταγωνιστής των υποδοχέων HT3 που ασκεί προστατευτική δράση έναντι του DN. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει τους πιθανούς μοριακούς μηχανισμούς που σχετίζονται με τις νενοπροστατευτικές επιδράσεις της τροπισετρόνης σε διαβητικούς αρουραίους που προκαλούνται από STZ. Τα ζώα υποδιαιρέθηκαν σε 5 ίσες ομάδες. ελέγχου, τροπισετρόνη, διαβήτη, τροπισετρόνη συν διαβήτη και γλιβενκλαμίδη συν διαβήτη (n=7). Για επαγωγή διαβήτη τύπου 1, χορηγήθηκε στα ζώα μία εφάπαξ ένεση STZ (55 mg/kg, ενδοπεριτοναϊκώς). Οι διαβητικοί αρουραίοι έλαβαν θεραπεία με τροπισετρόνη (3 mg/kg) και γλιβενκλαμίδη (1 mg/kg) για 2 εβδομάδες. Σύμφωνα με την ανάλυση που διενεργήθηκε, ο διαβήτης οδήγησε σενεφρών δυσλειτουργία (μείωση του ρυθμού σπειραματικής διήθησης και ουρίας και κρεατινίνης στα ούρα καθώς και αύξηση της ουρίας και της κρεατινίνης στο πλάσμα) και ανωμαλίες στο αντιοξειδωτικό αμυντικό σύστημα (μείωση του TAC και αύξηση του MDA), σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η οποία προλήφθηκε με την τροπισετρόνη θεραπευτική αγωγή. Η ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφής και η ανάλυση western blotting έδειξαν ότι η έκφραση του γονιδίου SIRT1 μειώθηκε ενώ η έκφραση των γονιδίων FOXO3a και NF-κB καθώς και οι αναλογίες φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολική πρωτεΐνη FOXO3a και το επίπεδο πρωτεΐνης claudin-1 αυξήθηκαν στονεφρόδιαβητικών αρουραίων σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Εδώ, τα αποτελέσματα αυτής της έρευνας έδειξαν ότι η θεραπεία με τροπισετρόνη ανέστρεψε αυτές τις αλλαγές. Εξάλλου, όλες αυτές οι αλλαγές συγκρίθηκαν με αυτές που παράγονται από τη γλιβενκλαμίδη ως θετικό μάρτυρα. Ως εκ τούτου, η τροπισετρόνη βελτιώθηκενεφρική βλάβηλόγω διαβητικής νεφροπάθειας πιθανώς με την καταστολή του οξειδωτικού στρες και την αλλαγή των επιπέδων SIRT1, FOXO3a και κλαουδίνης-1.

Λέξεις-κλειδιά:νεφρική βλάβη? νεφρική λειτουργία? νεφρική νόσο? νεφρό; ιστούς των νεφρών

Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗΝ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ

Εισαγωγή

Η διαβητική νεφροπάθεια (DN) είναι μια μικροαγγειακή νόσος που χαρακτηρίζεται από υπερβολική πρωτεϊνουρία με νοσηρότητα 25–40 τοις εκατό (Chen et al. 2011; Ritz et al. 2010). Μορφολογικές και λειτουργικές αλλοιώσεις συμπεριλαμβανομένης της σπειραματικής υπερτροφίας, της υπερβολικής συσσώρευσης εξωκυττάριας ουσίας και της σπειραματοσκλήρωσης και, τελικά, η απώλειανεφρική λειτουργίαστονεφρόσχετίζονται με υπεργλυκαιμία και, στη συνέχεια, διαταραχή του μεταβολισμού της γλυκόζης (Kanwar et al. 2008; Vikram et al. 2014). Ως εκ τούτου, έχει δοθεί ιδιαίτερη προσοχή στην αποτελεσματική διαχείριση ή θεραπεία που μπορεί να είναι απαραίτητη για την καταπολέμηση της νόσου στο αρχικό στάδιο. Τα συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι η παραγωγή δραστικών ειδών οξυγόνου (ROS) ως άμεσο πρόβλημα υπεργλυκαιμίας και στη συνέχεια η παραγωγή φλεγμονωδών κυτοκινών είναι σημαντικοί μηχανισμοί στην ανάπτυξη διαβητικών επιπλοκών (Beckman and Ames 1998; Giacco and Brownlee 2010; Jaimes et al. Kiritoshi et al. 2003). Είναι προφανές ότι η ανισορροπία μεταξύ της προοξειδωτικής και αντιοξειδωτικής αμυντικής ικανότητας οδηγεί σε συσσώρευση ελεύθερων ριζών που μπορεί να βλάψουν τα κυτταρικά μακρομόρια συμπεριλαμβανομένου του DNA καθώς και την τροποποίηση πρωτεϊνών και την υπεροξείδωση των λιπιδίων (Peluso and Raguzzini 2016).

Οι sirtuins θηλαστικών είναι μια οικογένεια αποακετυλασών που εξαρτώνται από NAD συν, συμπεριλαμβανομένων επτά μελών (SIRT1-7). Μεταξύ αυτών, το SIRT1, το πρώτο μέλος της οικογένειας, έχει μελετηθεί εκτενέστερα (Dong et al. 2014). Πρόσφατες μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι το SIRT1 παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού θανάτου/μακροζωίας καθώς και σε μια οξεία και χρόνια απόκριση στρες στα θηλαστικά μειώνοντας τη βλάβη του DNA, τη φλεγμονή και την απόπτωση (Hasegawa et al. 2013; Yun et al. 2012 ). Αρκετές μελέτες επισημαίνουν υψηλότερα επίπεδα μείωσης της δραστηριότητας του SIRT1 που προκαλείται από το ROS στους διαβητικούςνεφρά,τόσο in vivo όσο και in vitro (Akhtar and Siragy 2019; Du et al. 2016; Kumar et al. 2014; Papadimitriou et al. 2015; Park et al. 2016; Shi and Huang 2018).

Το SIRT1 μπορεί να ασκήσει τη δράση του ρυθμίζοντας πολλές πρωτεΐνες, όπως οι μεταγραφικοί παράγοντες του πυρηνικού παράγοντα-kappaB (NF-κB) και της οικογένειας FOXO (Brunet et al. 2004· Langley et al. 2002· Motta et al. 2004· Yeung et al. 2004). Πρόσφατα, γνωστοποιήθηκε ότι το SIRT1 ρυθμίζει το μεταβολισμό της γλυκόζης συνεισφέροντας στα FOXO (Kobayashi et al. 2005). Το FOXO3a είναι μια υποομάδα της οικογένειας των μεταγραφικών παραγόντων FOXO που έχουν σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια του οξειδωτικού στρες (Accili και Arden 2004). Τροποποιήσεις του FOXO3a συμβαίνουν με φωσφορυλίωση και ακετυλίωση που μπορεί να εμφανιστούν ταυτόχρονα σε διάφορες συνθήκες. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, το SIRT1 μπορεί να αποακετυλοποιήσει το FOXO3a, αυξάνοντας έτσι το επίπεδο ουβικουιτίνης του και προστατεύοντας από στρεσογόνους παράγοντες (Wang et al. 2017a). Υπάρχουν λίγες πληροφορίες σχετικά με τον μηχανισμό των αλληλεπιδράσεων μεταξύ SIRT1 και FOXO κατά τη διάρκεια υπεργλυκαιμικών καταστάσεων (Yun et al. 2012). Ωστόσο, προτάθηκε ότι το SIRT1 ρυθμίζει τη δραστηριότητα του FOXO πιθανώς με την πυρηνική τους μετατόπιση (Brunet et al. 2004) και επίσης ελέγχει την ειδική για το γονίδιο μεταγραφή (Kobayashi et al. 2005). Επομένως, η μετατόπιση του FOXO3a από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα προκαλείται κυρίως από τη δραστηριότητα αποακετυλίωσης του SIRT1, ειδικά σε κατάσταση οξειδωτικού στρες (Yun et al. 2012).

Οι Wang et al. ανέφερε ότι η θεραπεία με υψηλή περιεκτικότητα σε γλυκόζη ρυθμίζει την έκφραση της πρωτεΐνης SIRT1 και FOXO3a στον άνθρωπονεφρόεπιθηλιακά κύτταρα (Wang et al. 2017b). Επιπλέον, το FOXO3a λειτουργεί ως θετικός ρυθμιστής της σηματοδότησης NF-κB, στον οποίο θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για να επηρεάσει τις στρατηγικές επιβίωσης των κυττάρων υπό συνθήκες στρες (Li et al. 2012). Ο Claudin-1 είναι ένας υποτιθέμενος δείκτης ειδικός για βρεγματικά επιθηλιακά κύτταρα (PEC) (Huby et al. 2009; Ohse et al. 2009; Rincon-Choles et al. 2006), ο οποίος σχετίζεται αρνητικά με την έκφραση SIRT1 και στα δύο εγγύς σωληνάρια και σπειραματική περιοχή. Φάνηκε ότι η καθοδική ρύθμιση του SIRT1 στον διαβήτη επιβεβαιώνεται από την ανοδική ρύθμιση της πρωτεΐνης σφιχτής σύνδεσης κλαουδίνη-1 στα ποδοκύτταρα που συμβάλλουν στην αλβουμινουρία (Gong et al. 2017; Hasegawa et al. 2013). Δεδομένου ότι το οξειδωτικό στρες, μια φλεγμονώδης κυτοκίνη και οι μοριακοί μεσολαβητές τους είναι κύρια θέματα στη βλαβερή επίδραση του διαβήτη, οι αντιοξειδωτικοί και αντιφλεγμονώδεις παράγοντες θα μπορούσαν να παρέχουν νέες θεραπείες κατά της DN (Elmarakby and Sullivan 2012).

Το Tropisetron είναι ένας πρόσφατα αναδυόμενος ανταγωνιστής του υποδοχέα 5-HT3, ο οποίος έχει αναγνωριστεί ως αντιεμετικό φάρμακο κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας (Barzegar-Fallah et al. 2015). Αρκετές αναφορές έχουν δείξει ότι η τροπισετρόνη μπορεί να προσφέρει αντιαποπτωτικά, αντιδιαβητικά, αντικαρκινικά, αντιλιπιδαιμικά, νευροπροστατευτικά και καρδιοπροστατευτικά αποτελέσματα που πιθανώς μεσολαβούνται μέσω αντιοξειδωτικών και αντιφλεγμονωδών μηχανισμών (Aminzadeh 2017; Asadi et al. 2016; Barzegar-Fallah et al. Barzegar-Fallah et al. 2014· Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019· Rashidi και Bazi 2020). Υπάρχουν ορισμένες μελέτες που αποδεικνύουν την αντιοξειδωτική δράση της τροπισετρόνης, τόσο in vitro όσο και in vivo, όπως η προστατευτική δράση της τροπισετρόνης στην επαγόμενη από υπεργλυκαιμία οξειδωτική διαταραχή στα κύτταρα PC12 (Aminzadeh 2017), τη βελτίωση της μιτοχονδριακής βλάβης με μείωση της νιτρεργικής τη δραστηριότητα του συστήματος στον εγκέφαλο (Haj Mirzaian et al. 2016) ή την άμβλυνση του οξειδωτικού στρες κατά της γήρανσης του εγκεφάλου σε ποντίκια (Mirshafa et al. 2020).

Πρόσφατα, οι Barzegar Fallah et al. αποκάλυψε ότι η τροπισετρόνη βελτιώνει τη γλυκόζη του αίματος και επίσηςνεφρική λειτουργίαόπως αποδεικνύεται από τη μείωση του αζώτου της ουρίας του αίματος (BUN), των επιπέδων κρεατινίνης ορού και της απέκκρισης λευκωματίνης στα ούρα. Επιπλέον, η περιεκτικότητα σε μηλονοδιαλδεΰδη (MDA), τα επίπεδα γλουταθειόνης (GSH), η υπεροξειδική δισμουτάση (SOD) και οι δραστηριότητες καταλάσης (CAT) ήταν βελτιώθηκε σε διαβητικά ζώα που έλαβαν θεραπεία με τροπισετρόνη (Barzegar-Fallah et al. 2015). Ωστόσο, δεν υπάρχουν άλλα ισχυρά στοιχεία σχετικά με τη ρύθμιση της DN από την τροπισετρόνη και τον μοριακό της μηχανισμό. Αυτή η μελέτη, επομένως, στοχεύει να αξιολογήσει, πρώτα: τις επιδράσεις της τροπισετρόνης σε μοριακούς μεσολαβητές, συμπεριλαμβανομένων των SIRT1, NF-κB και FOXO3a, καθώς και της κλαουδίνης-1, η οποία είναι μια πρωτεΐνη που εμπλέκεται σε σφιχτές επιθηλιακές συνδέσεις και παίζει κύριο ρόλο σενεφρώνδιαβητική νεφροπάθεια? Δεύτερον, να συγκρίνουμε την επίδραση της τροπισετρόνης με το τυπικό αντιδιαβητικό φάρμακο που κυκλοφορεί στο εμπόριο, τη γλιβενκλαμίδη, προκειμένου να βρεθεί ένας πιο ωφέλιμος και ασφαλής παράγοντας ως αντιδιαβητικό φάρμακο χρυσού προτύπου.

Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΗ ΝΕΦΡΙΚΗ/ΝΕΦΡΙΚΗ ΝΟΣΟ

Υλικά και μέθοδοιΑυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις Αρχές Εργαστηριακής Φροντίδας Ζώων στο Πανεπιστήμιο Ιατρικών Επιστημών της Ούρμιας. Η δεοντολογική έγκριση επιτεύχθηκε από την Οδηγία της ΕΕ 2010/63/ΕΕ για πειράματα σε ζώα σύμφωνα με τις οδηγίες της Επιτροπής Ιατρικής Δεοντολογίας, Υπουργείο Υγείας, Ιράν (IR.UMSU.REC.1397.291). Τριάντα πέντε αρσενικοί αρουραίοι Wistar (230-270 g βάρους, ηλικίας 3-4 μηνών) κατανεμήθηκαν σε 5 ομάδες (επτά επίμυες σε κάθε ομάδα): 1. Ομάδα ελέγχου: Οι αρουραίοι έλαβαν φυσιολογικό ορό ενδοπεριτοναϊκά για 2 εβδομάδες. 2. Ομάδα τροπισετρόνης: Οι αρουραίοι έλαβαν τροπισετρόνη ενδοπεριτοναϊκά για 2 εβδομάδες. 3. Ομάδα διαβήτη: Ο διαβήτης προκλήθηκε με ένεση στρεπτοζοτοκίνης (STZ) σε αρουραίους. 4. Τροπισετρόνη συν ομάδα διαβήτη: Οι αρουραίοι έλαβαν 3 mg/kg τροπισετρόνης (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) ενδοπεριτοναϊκά για 2 εβδομάδες μετά την πρόκληση διαβήτη. 5. Ομάδα γλιβενκλαμίδης συν διαβήτη: Οι αρουραίοι έλαβαν 1 mg/kg γλιβενκλαμίδης (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) ενδοπεριτοναϊκά για 2 εβδομάδες μετά την πρόκληση διαβήτη.

Πρόκληση διαβήτηΗ στρεπτοζοτοσίνη (50 mg/kg) εγχύθηκε ενδοπεριτοναϊκά σε μία δόση για να προκαλέσει διαβήτη σε αρουραίους. Με βάση αυτή τη μέθοδο, ο διαβήτης τύπου Ι προκλήθηκε στους αρουραίους 72 ώρες μετά την ένεση. Ο διαβήτης διαγνώστηκε και επιβεβαιώθηκε με τη δημιουργία ενός μικροτραυματισμού χρησιμοποιώντας μια νυστέρι στην ουρά των νηστικών αρουραίων και στη συνέχεια μια σταγόνα αίματος τοποθετήθηκε σε μια λωρίδα γλυκόμετρου. Στη συνέχεια, μετρήθηκε με γλυκόμετρο (Boehringer Mannheim Indianapolis, IN) και τα επίπεδα γλυκόζης στο αίμα πάνω από 300 mg/dl θεωρήθηκαν δείκτης πρόκλησης διαβήτη. Μετά από 2 εβδομάδες και 24 ώρες πριν από την αναισθησία, οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν σε μεταβολικά κλουβιά ένας προς έναν και συλλέχθηκαν τα ούρα. Στη συνέχεια, τα δείγματα ούρων φυγοκεντρήθηκαν αμέσως με τη διαφανή επιφάνεια των δειγμάτων να αποθηκεύεται στους -20 βαθμούς για ανάλυση ουρίας και κρεατινίνης. Στη συνέχεια, οι αρουραίοι ζυγίστηκαν και αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση μίγματος κεταμίνης (60 mg/kg) και ξυλαζίνης (4 mg/kg). Στη συνέχεια, η κοιλιακή κοιλότητα ανοίχτηκε. Το αίμα ελήφθη από την καρδιά με μια στενή σύριγγα και αναμίχθηκε με αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA) και φυγοκεντρήθηκε στα 4000 × g για 20 λεπτά. Στη συνέχεια, το παραγόμενο πλάσμα αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς για μετέπειτα μέτρηση της ουρίας, της κρεατινίνης και της συνολικής αντιοξειδωτικής ικανότητας (TAC). Και τα δυονεφράαπό τα ζώα αφαιρέθηκαν, πλύθηκαν με ψυχρό φυσιολογικό ορό και ζυγίστηκαν. Το αριστερόνεφρόΟι ιστοί ομογενοποιήθηκαν με Ultra Turrax (T10B, ΙΚΑ και Γερμανία) σε διάλυμα που περιέχει RNAase για να δοκιμαστούν τα επίπεδα έκφρασης των SIRT1, NF-κB και FOXO3a χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR σε πραγματικό χρόνο. σωστάνεφρόκαταψύχθηκε στους - 80 βαθμούς για μέτρηση MDA και ανάλυση western blot (ολικό και φωσφορυλιωμένο FOXO3a και claudin-1).

γλυκόζη αίματος νηστείαςΣτο τέλος του πρωτοκόλλου, μετά από ολονύκτια νηστεία (14 έως 18 ώρες), λήφθηκαν δείγματα αίματος από την άκρη της ουράς και στη συνέχεια μετρήθηκαν τα επίπεδα γλυκόζης χρησιμοποιώντας ψηφιακό γλυκόμετρο (Elegance, CT-X10, Frankenberg, Γερμανία).Ουρία και κρεατινίνη ούρων και πλάσματοςΓια το σκοπό αυτό, τα επίπεδα ουρίας και κρεατινίνης στα ούρα και στο πλάσμα θα μετρηθούν με οικονομικά κιτ ειδικά για τη μέτρηση της ουρίας και της κρεατινίνης (Biotechnical, Varginha, Minas Gerais, Βραζιλία).Ρυθμός σπειραματικής διήθησηςΟ ρυθμός σπειραματικής διήθησης (GFR) είναι ο καλύτερος συνολικός δείκτηςνεφρικές λειτουργίες, η οποία αξιολογήθηκε με υπολογισμό της κάθαρσης κρεατινίνης (GFR=[UCr × V]/SCr) και χρησιμοποιώντας τις συγκεντρώσεις κρεατινίνης στο πλάσμα και τα ούρα και τον ρυθμό ροής ή τον όγκο των ούρων.

Μηλονοδιαλδεΰδη και συνολική αντιοξειδωτική ικανότηταΤο MDA ως τελικό προϊόν της υπεροξείδωσης των λιπιδίων αξιολογήθηκε μέσω μιας αντίδρασης με θειοβαρβιτουρικό οξύ (Sigma-Aldrich, ΗΠΑ) στονεφρόδείγματα σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Esterbauer and Cheeseman 1990). Εν συντομία, 0.3–0,4 g τουνεφρικό ιστόομογενοποιήθηκε σε παγωμένο KCl (150 mM) και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στα 3000xg για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, 0,5 ml του υπερκειμένου συνδυάστηκαν με 3 ml φωσφορικού οξέος (1 τοις εκατό, ο/ο) και μετά από ανάμιξη με στροβιλισμό, 2 ml 6,7 g/l ΤΒΑ ενώθηκαν στα δείγματα. Τα δείγματα θερμάνθηκαν στους 100 βαθμούς για 45 λεπτά. Μετά από ψύξη σε πάγο, η-βουτανόλη (3 ml) συνδυάστηκε και τα προϊόντα φυγοκεντρήθηκαν περαιτέρω στα 3000xg για άλλα 10 λεπτά. Στη συνέχεια, η απορρόφηση των προϊόντων εξετάστηκε στα 532 nm μέσω φασματοφωτομετρίας. Το επίπεδο απορρόφησης συγκρίθηκε με την τυπική καμπύλη. Το TAC μετρήθηκε με ένα κιτ ολικής αντιοξειδωτικής κατάστασης Randox, στο οποίο ABTS 2,2′-αζινο-δις(3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικός εστέρας) επωάζεται με υπεροξειδάση και H2O2 με αποτέλεσμα το κατιόν ρίζας ABTS συν παραγωγή . Αυτό έχει ένα σταθερό μπλε-πράσινο χρώμα, το οποίο αξιολογείται χρησιμοποιώντας έναν αυτόματο αναλυτή 600-nm (Amini et al. 2020).

Το CISTANCHE ΘΑ ΒΕΛΤΙΩΣΕΙ ΤΟΝ ΝΕΦΡΟ/ΝΕΦΡΟ ΠΟΝΟ

Σχεδιασμός Primer και PCR σε πραγματικό χρόνοΤο RNA εκχυλίστηκε αρχικά από το σχετικό κιτ (GENALL) και το συμπυκνωμένο RNA αξιολογήθηκε ποιοτικά (ηλεκτροφόρηση) και ποσοτικά (νανο-σταγόνα) προκειμένου να εξασφαλιστεί η εκχύλιση και η εφαρμογή του RNA σε επόμενες μοριακές τεχνικές. Στη συνέχεια, το σχετικό cDNA συντέθηκε από όλα τα εκχυλισμένα δείγματα RNA. Οι εκκινητές των γονιδίων-στόχων και το γονίδιο αφυδρογονάσης της γλυκεραλδεΰδης (GAPDH) ως γονίδιο που διατηρεί το σπίτι εξετάστηκαν στη θέση NCBI χρησιμοποιώντας το λογισμικό Generunner (Συμπληρωματικός Πίνακας). Στη συνέχεια, η γονιδιακή έκφραση αναλύθηκε χρησιμοποιώντας τους συντιθέμενους εκκινητές με κιτ PCR, ακολουθούμενη από στατιστική ανάλυση των δεδομένων.

Western blotΗ μέθοδος Western blot χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των επιπέδων πρωτεΐνης FOXO3a (ολικό και φωσφορυλιωμένο) και κλαουδίνης-1 στονεφρό.Για την κατασκευή της γέλης ηλεκτροφόρησης χρησιμοποιούνται δύο πηκτώματα διαχωρισμού και στοίβαξης. Μετά την προετοιμασία της γέλης διάλυσης και την έκχυση της στο καλούπι, προστέθηκε μια γέλη στοίβαξης μετά από μία ώρα και μετά τη στοίβαξη. Τα δείγματα φορτώθηκαν σε φρεάτια φτιαγμένα με ειδική χτένα. Στη συνέχεια διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE. Μέσα σε μία ώρα, όλα τα φορτωμένα δείγματα μεταφέρθηκαν στη μεμβράνη PVDF. Στη συνέχεια, τα δείγματα αποκλείστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα αποβουτυρωμένου γάλακτος 5 τοις εκατό συμπεριλαμβανομένου του 0.1 τοις εκατό Tween 20 και στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς σε επωαστήρα αναδευτήρα. Στη συνέχεια οι μεμβράνες επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου. Τέλος, η βήτα-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο για την ανάλυση western blot. Στο τέλος, τα αποτελέσματα των στυπωμένων δειγμάτων, ανάλογα με το επίπεδο της πρωτεΐνης στόχου, αξιολογήθηκαν στο φιλμ ακτινογραφίας σε σκοτεινό δωμάτιο. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό των πρωτεϊνών-στόχων, τα αποτελέσματα σάρωσης φιλμ υπολογίστηκαν με ένα πυκνόμετρο σε σχέση με το επίπεδο ακτίνης. Τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται σε προσδιορισμούς στύπωσης Western φαίνονται στον Συμπληρωματικό Πίνακα (αριθμοί καταλόγου και εταιρείες).

Στατιστική ανάλυσηΤα αποτελέσματα παρουσιάστηκαν ως μέσος όρος ± SEM. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SPSS 16.0. Η σύγκριση μεταξύ των ομάδων υπολογίστηκε με τη δοκιμή ANOVA ακολουθούμενη από τη δοκιμασία post hoc του Tukey. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές στο P <>

Αποτελέσματα

Η τροπισετρόνη μείωσε τη γλυκόζη αίματος νηστείας (mg/dl), το βάρος των νεφρών (g) και τον δείκτη νεφρών (mg/g), ενώ αύξησε το σωματικό βάρος (g) στους διαβητικούς αρουραίους που προκλήθηκαν από STZΟμοίως με προηγούμενες μελέτες σε αυτήν την εργασία, οι διαβητικές ομάδες εμφάνισαν σοβαρή (P < {{0}}.001)="" υπεργλυκαιμία="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" η="" κατανάλωση="" τροπισετρόνης="" (p="">< 0.01)="" και="" γλιβενκλαμίδης="" (p="">< 0,05)="" για="" 2="" εβδομάδες="" μείωσαν="" σημαντικά="" τη="" γλυκόζη="" αίματος="" σε="" διαβητικές="" ομάδες="" που="" προκλήθηκαν="" από="" stz,="" αλλά="" ήταν="" ακόμα="" σημαντικά="" υψηλότερο="" από="" αυτό="" στην="" ομάδα="" ελέγχου="" (p=""><0,001 ).="" δεν="" υπήρχε="" σημαντική="" διαφορά="" στο="" σωματικό="" βάρος="" (bw)="" μεταξύ="" των="" ομάδων="" στην="" αρχή="" αυτής="" της="" μελέτης="" (τα="" δεδομένα="" δεν="" παρουσιάζονται).="" η="" πρόκληση="" διαβήτη="" από="" stz="" μειώθηκε="" σημαντικά="" (p="">< 0,001)="" τελικά="" (bw)="" σε="" διαβητικούς="">ΝεφρόΤο βάρος (KW) δεν ήταν σημαντικό μεταξύ των ομάδων στην αρχή. Ωστόσο, ήταν αυξημένο στην ομάδα των διαβητικών και μειώθηκε μετά από παρεμβάσεις.ΝεφρόΟ δείκτης (KW/BW) ήταν σημαντικά αυξημένος (P < {{0}}.001)="" στο="" σδ1="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" είναι="" ενδιαφέρον="" ότι="" μετά="" από="" 2="" εβδομάδες="" χορήγησης="" τροπισετρόνης="" και="" γλιβενκλαμίδης,="" διαμορφώθηκε="" το="" kw/bw="" (p=""><0,05) (πίνακας="">

Η τροπισετρόνη βελτίωσε τη βιοχημική ανάλυση στους διαβητικούς αρουραίους που προκλήθηκαν από STZΌπως και σε προηγούμενες μελέτες, τα επίπεδα ουρίας στο πλάσμα και στα ούρα της διαβητικής ομάδας ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα της ομάδας ελέγχου (P < {{0}}.001)="" .="" στην="" ομάδα="" τροπισετρόνη="" συν="" διαβήτη,="" πλάσμα="" (p="">< 0.{{10}}01)="" και="" ούρα="" (p="">< {0.0="" 5)="" τα="" επίπεδα="" ουρίας="" μειώθηκαν="" σημαντικά="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνα="" στις="" ομάδες="" του="" διαβήτη.="" ωστόσο,="" η="" ουρία="" των="" ούρων="" ήταν="" ακόμα="" σημαντικά="" χαμηλότερη="" από="" αυτή="" στην="" ομάδα="" ελέγχου="" (p=""><0,01). δεν="" υπάρχει="" σημαντική="" διαφορά="" στα="" επίπεδα="" ουρίας="" στο="" πλάσμα="" μεταξύ="" της="" τροπισετρόνης="" συν="" διαβήτη="" και="" των="" ομάδων="" ελέγχου.="" τα="" επίπεδα="" κρεατινίνης="" στο="" πλάσμα="" (p=""><0,001) και="" στα="" ούρα="" (p=""><0,05) έδειξαν="" σημαντική="" αύξηση="" στους="" διαβητικούς="" αρουραίους="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνη="" της="" ομάδας="" ελέγχου.="" η="" χορήγηση="" τροπισετρόνης="" μείωσε="" σημαντικά="" τα="" επίπεδα="" κρεατινίνης="" στα="" ούρα="" και="" το="" πλάσμα="" (p=""><0,001) σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" των="" διαβητικών.="" στα="" διαβητικά="" ζώα,="" η="" κάθαρση="" κρεατινίνης,="" ως="" δείκτης="" του="" ρυθμού="" σπειραματικής="" διήθησης,="" ήταν="" σημαντικά="" χαμηλότερη="" από="" εκείνη="" στην="" ομάδα="" ελέγχου="" (p="">< 0,05).="" η="" θεραπεία="" με="" τροπισετρόνη="" αύξησε="" σημαντικά="" την="" κάθαρση="" κρεατινίνης="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνη="" στην="" ομάδα="" του="" διαβήτη="" (p="">< 0,001).="" τα="" ίδια="" αποτελέσματα="" λήφθηκαν="" στην="" ομάδα="" που="" υποβλήθηκε="" σε="" θεραπεία="" με="" γλιβενκλαμίδη.="" ωστόσο,="" η="" ουρία="" του="" πλάσματος="" είναι="" πολύ="" χαμηλότερη="" στην="" ομάδα="" που="" έλαβε="" τροπισετρόνη="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" της="" γλιβενκλαμίδης="" συν="" διαβήτη="" (p=""><0,01) (πίνακας="">

Η τροπισετρόνη αύξησε την περιεκτικότητα σε TAC στο πλάσμα και μείωσε τα επίπεδα MDA στους διαβητικούς αρουραίους που προκλήθηκαν από STZΤο επίπεδο MDA στις ομάδες ελέγχου, τροπισετρόνη, σακχαρώδη διαβήτη, τροπισετρόνη συν διαβήτη και γλιβενκλαμίδη συν διαβήτη ήταν 8,65 ± 1.01, 10.89 ± 1.6 35 ± 1.6 35.54 ± 0,54 ± 1. 7,1, 18,76 ± 3,6 και 16,89 ± 4,1 nmol/mg πρωτεΐνης, αντίστοιχα. Η μελέτη μας, μαζί με άλλες άλλες, έχουν δείξει το υψηλότερο επίπεδο MDA στην ομάδα του διαβήτη, η οποία έδειξε σημαντική αύξηση σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (P < 0.00="" 1).="" το="" επίπεδο="" mda="" στις="" ομάδες="" τροπισετρόνη="" συν="" διαβήτη="" και="" γλιβενκλαμίδη="" συν="" διαβήτη="" έδειξε="" σημαντική="" μείωση="" (p="">< {{30}}.01)="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" διαβήτη="" (εικ.="" 1α).="" τα="" επίπεδα="" tac="" στις="" ομάδες="" ελέγχου,="" τροπισετρόνη,="" διαβήτη,="" τροπισετρόνη="" συν="" διαβήτη="" και="" γλιβενκλαμίδη="" συν="" διαβήτη="" ήταν="" 0.65="" ±="" 0.{{4{42}}}}3,="" {{44}="" },76="" ±="" 0,06,="" 0,26="" ±="" 0,08,="" 0,45="" ±="" 0,06="" και="" 0,57="" ±="" 0,08="" nmol/ml,="" αντίστοιχα.="" τα="" επίπεδα="" tac="" μειώθηκαν="" στην="" ομάδα="" του="" διαβήτη="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνη="" της="" ομάδας="" ελέγχου="" (p="">< 0,001),="" όπως="" φαίνεται="" προηγουμένως.="" τόσο="" οι="" χορηγήσεις="" τροπισετρόνης="" όσο="" και="" γλιβενκλαμίδης="" αύξησαν="" σημαντικά="" (p="">< 0,01)="" τα="" επίπεδα="" tac="" στο="" πλάσμα="" σε="" διαβητικά="" ζώα="" σε="" σύγκριση="" με="" τη="" διαβητική="" ομάδα="" (εικ.="">

Η τροπισετρόνη αύξησε το SIRT1 και μείωσε τις εκφράσεις των γονιδίων FOXO3a και NF-κB Οι γονιδιακές εκφράσεις αξιολογήθηκαν με PCR σε πραγματικό χρόνο που παρείχε σημαντικές ενδείξεις για διαφορά μεταξύ των ομάδων. Συνεπώς, ο διαβήτης συσχετίστηκε με σημαντική μείωση (0.65 ± 0.08) στην έκφραση του γονιδίου SIRT1 (P < 0.01.="" )="" και="" σημαντική="" αύξηση="" (p="">< 0.001)="" σε="" foxo3a="" (1,98="" ±="" 0.08)="" και="" nf-κb="" (1,71)="" ±="" 0.14)="" γονιδιακή="" έκφραση="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" η="" θεραπεία="" με="" τροπισετρόνη="" αύξησε="" το="" sirt1="" (0.88="" ±="" 0.3)="" και="" μείωσε="" σημαντικά="" τα="" επίπεδα="" mrna="" foxo3a="" (1.53="" ±="" 0.08)="" (p=""><0.05) και="" nf-κb="" (1.27="" ±="" 0.03)="" (p=""><0.01) σε="" διαβητικούς="" αρουραίους="" (εικ.="" 2α–γ).="" παρόμοια="" αποτελέσματα="" δόθηκαν="" στα="" ζώα="" που="" υποβλήθηκαν="" σε="" θεραπεία="" με="" το="" πρότυπο="" φάρμακο,="">

Η τροπισετρόνη μείωσε τις εκφράσεις πρωτεΐνης FOXO3a και κλαουδίνης-1Για την αξιολόγηση της έκφρασης της πρωτεΐνης FOXO3a (ολικό και φωσφορυλιωμένο) και κλαουδίνη- 1 μετά από θεραπεία με τροπισετρόνη και γλιβενκλαμίδη, χρησιμοποιήθηκε western blotting στηννεφρόδιαφορετικών ομάδων. Η ανάλυση δεδομένων παρουσιάζει σημαντική αύξηση στις αναλογίες φωσφορυλιωμένης FOXO3a/ολικής πρωτεΐνης FOXO3a (4,6 ± 0.17) και κλαουδίνης-1 (3.02 ± 0.16). ) τα επίπεδα πρωτεΐνης στην ομάδα των διαβητικών σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (P < 0.001).="" η="" χορήγηση="" τροπισετρόνης="" μείωσε="" σημαντικά="" τις="" αναλογίες="" φωσφορυλιωμένης="" foxo3a/ολικής="" πρωτεΐνης="" foxo3a="" (2,14="" ±="" 0,31)="" και="" κλαουδίνης-1="" (2,4="" ±="" 0,12)="" στα="">νεφρόδιαβητικών αρουραίων (P < {{0}}.01).="" η="" θεραπεία="" με="" γλιβενκλαμίδη="" μείωσε="" σημαντικά="" τόσο="" τις="" αναλογίες="" φωσφορυλιωμένης="" foxo3a/ολικής="" πρωτεΐνης="" foxo3a="" (2,57="" ±="" 0,5)="" (p="">< 0,001)="" όσο="" και="" την="" κλαουδίνη-1="" (2,2="" ±="" 0,11)="" (50.11)="" (p=""><0. )="" επίπεδα="" πρωτεΐνης="" στους="" διαβητικούς="" αρουραίους="" που="" προκαλούνται="" από="" stz="" (εικ.="">

Συζήτηση Τα ευρήματα της τρέχουσας μελέτης δίνονται στις ακόλουθες ενότητες: η εφάπαξ ένεση του επαγόμενου από STZ ΣΔ1 συσχετίστηκε με σοβαρή υπεργλυκαιμία, απώλεια βάρους καινεφρόδυσλειτουργία, η οποία εκδηλώνεται με μια αξιοσημείωτη αύξηση της κρεατινίνης και της ουρίας του πλάσματος και μια αξιοσημείωτη μείωση της κάθαρσης κρεατινίνης ως δείκτης του GFR σε σύγκριση με αυτήν στην ομάδα ελέγχου. Το STZ διέκοψε την οξειδωτική ισορροπία στονεφρόιστού που αποδείχθηκε αυξάνοντας το MDA και μειώνοντας την περιεκτικότητα σε TAC. Περαιτέρω μοριακή ανάλυση έδειξε ότι ο διαβήτης μείωσε το SIRT1 mRNA και αύξησε το NF-κB mRNA καθώς και τις αναλογίες φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολικής πρωτεΐνης FOXO3a και το επίπεδο πρωτεΐνης claudin-1 στονεφρόαρσενικών αρουραίων. Σημαντική βελτίωση της ουρίας, κρεατινίνης, κρεατινίνης

κάθαρση, καθώς και SIRT1 mRNA, NF-κB mRNA, φωσφορυλιωμένη αναλογία FOXO3a/ολική πρωτεΐνη FOXO3a και πρωτεΐνη κλαουδίνης-1, παρόμοια με εκείνα των ζώων ελέγχου, παρατηρήθηκαν στην ομάδα τροπισετρόνη συν διαβήτη. DN που χαρακτηρίζεται από πολλά χαρακτηριστικά όπως διαταραχή στονεφρώνδομική και λειτουργική ακεραιότητα, αύξηση σενεφρόμέγεθος, καθώς και η σπειραματική και σωληναριακή υπερτροφία, είναι η κύρια αιτία του τελικού σταδίουνεφρική νόσο(Singh et al. 2018; Yaribeygi et al. 2018). Η προοδευτική λευκωματουρία, η μειωμένη GFR και η αύξηση της αρτηριακής πίεσης είναι τα πιο έντονα λειτουργικά συμπτώματα που παρατηρούνται σε διαβητικούς ασθενείς (Alzahrani et al. 2020). Ο πρώτος δείκτης του DN είναι η λευκωματουρία που προκαλείται λόγω προοδευτικής σπειραματικής βλάβης ως κεντρικό χαρακτηριστικό στην έναρξηνεφρική βλάβη(Elsherbiny et al. 2018). Σε συμφωνία με τα ευρήματά μας, προηγούμενες μελέτες τόνισαν ότι η DN συνοδεύεται από αυξήσεις στην κρεατινίνη ορού και την ουρία που υποδηλώνουν δυσλειτουργία τουνεφρικό ιστό(Sharma et al. 2006; Tang et al. 2018).

Τα συσσωρευμένα στοιχεία υποδεικνύουν ότι η δημιουργία ελεύθερων ριζών λόγω υπεργλυκαιμίας είναι ένα βασικό συμβάν στην εμφάνιση και την εξέλιξη των διαβητικών μικροαγγειακών επιπλοκών συμπεριλαμβανομένου του DN. Η υπερβολική παραγωγή ROS συμβάλλει στην οξειδωτική βλάβη επηρεάζοντας μακρομόρια, κύτταρα και ιστούς και οδηγεί σε μη αναστρέψιμες προσβολές ή λειτουργικές διαταραχές (Kiritoshi et al. 2003).

Το MDA ως δείκτης υπεροξείδωσης των λιπιδίων πυροδοτείται από την επίθεση ελεύθερων ριζών στα ακόρεστα λιπαρά οξέα της μεμβράνης, τα οποία έχουν συμβάλει σε διαβητικές επιπλοκές (Pieme et al. 2017). Η συνολική αντιοξειδωτική κατάσταση υπολογίστηκε με το TAC που είναι ένας βιοδείκτης για τον προσδιορισμό του οξειδωτικού στρες σε πολλές παθολογικές καταστάσεις. Έτσι, οι διαταραχές MDA και TAC σε διαβητικούς ασθενείς αντανακλούν την παραγωγή ελεύθερων ριζών που προκαλούν κατάσταση οξειδωτικού στρες (Peluso and Raguzzini 2016). Με συνέπεια, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν αυξημένο MDA και μειωμένα επίπεδα TAC σε διαβητικούς αρουραίουςνεφρό. Λαμβάνοντας υπόψη αυτό το γεγονός, η εξασθένηση του οξειδωτικού στρες βελτίωσε τις διαβητικές επιπλοκές συμπεριλαμβανομένωννεφρική βλάβη(Alzahrani et al. 2020; Barzegar-Fallah et al. 2015).

Το Tropisetron, ως 5-ανταγωνιστής της HT3 με αντιοξειδωτικές και αντιφλεγμονώδεις δράσεις, εμφανίζει προστατευτικά αποτελέσματα σε αρκετές παθολογικές καταστάσεις όπως ο διαβήτης (Barzegar-Fallah et al. 2015; Rashidi and Bazi 2020). Η νεφροπροστατευτική δράση της τροπισετρόνης περιγράφηκε προηγουμένως σε πειράματα σε ζώα. Σύμφωνα με αυτήν την άποψη, η τροπισετρόνη βελτίωσε το DN με τρόπο ανεξάρτητο από τον υποδοχέα HT3 {5- αποτρέποντας την αύξηση της γλυκόζης στο αίμα,νεφρώνΕπίπεδα MDA, CAT, SOD, Gpx και TNF- και μειωμένη απέκκριση κυτοκίνης στα ούρα και λευκωματουρία (Barzegar-Fallah et al. 2015).

Σύμφωνα με αυτό το ζήτημα, στην τρέχουσα έρευνα, παρέχονται τα στοιχεία που δείχνουν ότι η τροπισετρόνη ρυθμίζει την κατάσταση της υπεργλυκαιμίας, της απώλειας βάρους και του οξειδωτικού στρες, η οποία εκδηλώνεται με τη μείωση του MDA και την αύξηση της περιεκτικότητας σε TAC και τη βελτίωσηνεφρόδυσλειτουργία (σημαντική μείωση της ουρίας και της κρεατινίνης του πλάσματος). Η γλιβενκλαμίδη εφαρμόστηκε ως τυπικό φάρμακο σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες (Amini et al. 2020). Είναι ενδιαφέρον ότι δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στις αναφερόμενες παραμέτρους στις ομάδες που χορηγήθηκαν με γλιβενκλαμίδη και στις ομάδες που χορηγήθηκαν με τροπισετρόνηνεφρότων διαβητικών αρουραίων. Ωστόσο, οι ακριβείς μηχανισμοί πίσω από την προστατευτική δράση της τροπισετρόνης στο DN είναι ακόμα άγνωστοι. Από όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που καταδεικνύει ότι η τροπισετρόνη αύξησε την έκφραση του γονιδίου SIRT1 και μείωσε τις αναλογίες φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολικής πρωτεΐνης FOXO3a, τα επίπεδα NF-κB και κλαουδίνης- 1 στονεφρότων διαβητικών ζώων.

Το SIRT1 είναι μια πρωτεϊνική δεακετυλάση κατηγορίας ΙΙΙ που εμπλέκεται στην επιβίωση των κυττάρων κάτω από στρεσογόνες συνθήκες ενεργοποιώντας πολλές βασικές πρωτεΐνες. Είναι ένας ουσιαστικός παράγοντας για τη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης σε απόκριση στη δημιουργία ROS όπως οι παράγοντες μεταγραφής NF-κB και foxo (Brunet et al. 2004, Sengupta et al. 2011). Μεταξύ της οικογένειας foxo, το FOXO3a θεωρείται ότι διαδραματίζει σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια του οξειδωτικού στρες ρυθμίζοντας προς τα πάνω πολλά αντιοξειδωτικά, συμπεριλαμβανομένων των SOD και CAT

(Hasegawa et al. 2008; Kops et al. 2002). Συγκεκριμένα, η αδρανοποίηση του FOXO3a έχει συσχετιστεί με τη μείωση της ρύθμισης του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από CAT κατά τη διάρκεια καταστάσεων υπεργλυκαιμίας (Wang et al. 2017b). Το SIRT1 διαχειρίζεται την ενεργοποίηση του FOXO3a με αποακετυλίωση και ρυθμίζει την κυτταρική απόκριση στο οξειδωτικό στρες άμεσα ή έμμεσα (Hori et al. 2013). Δηλώθηκε ότι υπάρχει λειτουργική συσχέτιση μεταξύ της ρύθμισης SIRT1 και FOXO3 του αντιοξειδωτικού αμυντικού συστήματος που διαμεσολαβείται από MnSOD (Tanaka et al. 2009; Zhang et al. 2015). Κατά συνέπεια, οι Zhang et al. (2015) απέδειξε ότι η ικαριίνη προστάτευσε την οξεία πνευμονική βλάβη που προκαλείται από εντερική ισχαιμία/μεσολαβούμενη από επαναιμάτωση μονοπάτι σηματοδότησης SIRT1/FOXO3 με ανοδική ρύθμιση της έκφρασης MnSOD. Προηγούμενες αναφορές υπονοούσαν επίσης ότι η ανοδική ρύθμιση του SIRT1 ανακουφίζει τη νεφροπάθεια που προκαλείται από σισπλατίνη,νεφρώνισχαιμικός τραυματισμός/επαναιμάτωση και διαβητική νεφροπάθεια (Funk and Schnellmann 2013; Gu et al. 2016; Kim et al. 2011). Συγκεκριμένα, η προκαλούμενη από τον διαβήτη μειωμένη ρύθμιση του SIRT1 που οδηγεί τις παθοφυσιολογικές αλλοιώσεις οδηγεί σενεφρώντοξικότητα (Wang et al. 2017b). Hasegawa et al. (2013) απέδειξε ότι η μειωμένη SIRT1 στα εγγύς σωληνάρια πυροδότησε την έναρξη της DN και είχε ως αποτέλεσμα λευκωματουρία. Παράλληλα, τα αποτελέσματα αυτής της έρευνας που εντοπίστηκαν μειώθηκαννεφρώνΈκφραση γονιδίου SIRT1 στη διαβητική ομάδα. Επομένως, η ενεργοποίηση του SIRT1 προκάλεσε την αντίσταση τουνεφρώνσωληναριακά κύτταρα σε κυτταρικό στρες (Kume et al. 2013). Συνολικά, οι ενεργοποιητές SIRT1 έχουν κερδίσει αξιοσημείωτη προσοχή ως ενδιαφέροντες υποψήφιοι για θεραπεία διαβήτη (Song et al. 2018)

Επιπλέον, η παρούσα έρευνα έδειξε επίσης έντονη φλεγμονώδη απόκριση σε διαβητικούςνεφράόπως αποδεικνύεται από την ανύψωση NF-κB. Είναι ένας ουσιαστικός ρυθμιστικός παράγοντας που συνδέεται με την ανοσολογική απόκριση και τη φλεγμονή (Hayden and Ghosh 2012). Σε συμφωνία με τα ευρήματα αυτής της έρευνας, αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει ότι η ενεργοποίηση του NF-κB και η πυρηνική του μετατόπιση αυξάνεται τόσο σε πειραματικό όσο και σε ανθρώπινο DN (Alzahrani et al. 2020; Kuhad and Chopra 2009). Επιπλέον, η αύξηση του SIRT1 συμβάλλει στην αδρανοποίηση του NF-κΒ για τη διάσωση των ποδοκυττάρων από τραυματισμό στο διαβητικόνεφρό(Liu et al. 2014). Είναι ενδιαφέρον ότι η υπερέκφραση SIRT1 εξασθενεί μια έκφραση πρωτεΐνης σε σφιχτές επιθηλιακές συνδέσεις, συγκεκριμένα, κλαουδίνη-1, σε υπεργλυκαιμικούς αρουραίους, η οποία συσχετίζεται με το επίπεδο πρωτεϊνουρίας. Η ενεργοποιημένη κλαδίνη-1 στα ποδοκύτταρα επιδεινώνει τη λειτουργία του σπειραματικού φραγμού μέσω της μείωσης της έκφρασης συναπτοποδίνης ή ποδοκίνης με αποτέλεσμα λευκωματουρία (Hasegawa et al. 2013). Αυτά τα ευρήματα εγκρίθηκαν επίσης στους νεφρούς των διαβητικών αρουραίων.

Εδώ, αποδείχθηκε για πρώτη φορά ότι υπό διαβητικές συνθήκες, η χορήγηση τροπισετρόνης οδήγησε σε ενισχυμένη έκφραση του γονιδίου SIRT1 και ταυτόχρονα μείωσε τις αναλογίες φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολικής πρωτεΐνης FOXO3a, NF-κB και κλαουδίνης-1. Ως εκ τούτου, είναι πολύ λογικό ότι αυτή η ενεργοποίηση στο SIRT1 και η επακόλουθη μείωση των αναλογιών φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/συνολικής πρωτεΐνης FOXO3a, NF-κB και κλαουδίνης-1 μπορεί εν μέρει να ευθύνονται για τη βελτίωση της διαβητικόςνεφρική λειτουργία. Οι ερευνητές ανέφεραν ότι οι προστατευτικές επιδράσεις της τροπισετρόνης στο DN φαίνεται να είναι 5-ανεξάρτητες από τον υποδοχέα HT3, καθώς η γρανισετρόνη, ένας άλλος εκλεκτικός αναστολέας των υποδοχέων 5-HT3, απέτυχε να προστατεύσει το DN. Δηλώθηκε ότι οι αντιοξειδωτικοί και αντιφλεγμονώδεις μηχανισμοί της τροπισετρόνης μπορεί να έχουν κρίσιμο ρόλονεφρικό ιστόπροστασία στον διαβήτη (Barzegar-Fallah et al. 2015). Πρόσφατα, το εργαστήριό μας παρατήρησε ότι η θεραπεία με τροπισετρόνη αύξησε την έκκριση ινσουλίνης και μείωσε τα επίπεδα γλυκόζης στο αίμα αυξάνοντας την έκφραση του γονιδίου GLUT2 καθώς και την οδό UCP2/ZnT8 (Naderi et al. 2020). Η τροπισετρόνη ως αναστολέας του 5-υποδοχέα HT3 αύξησε την απελευθέρωση ινσουλίνης από την παγκρεατική ινσουλινοπαραγωγική σειρά βήτα κυττάρων που οδήγησε σε υπογλυκαιμία (Heimes et al. 2009). Ως εκ τούτου, φαίνεται ότι η ρύθμιση της απελευθέρωσης ινσουλίνης και στη συνέχεια η ομοιόσταση της γλυκόζης μπορεί να περιλαμβάνει αντιοξειδωτικές και αντιφλεγμονώδεις αποκρίσεις που συμβάλλουν στηννεφρόΠΡΟΣΤΑΣΙΑ.

Σύμφωνα με τα παρόντα ευρήματα, η τροπισετρόνη ανέστρεψε την οξειδωτική βλάβη αυξάνοντας την έκφραση του γονιδίου SIRT1 στη γήρανση σε ποντίκια (Mirshafa et al. 2020). Επιπλέον, η εξασθένηση της ηπατικής βλάβης, των επιπέδων πρωτεΐνης TNF- και IL-6 παρατηρήθηκαν στο ήπαρ διαβητικών αρουραίων μετά από συν-θεραπεία με τροπισετρόνη (Amini et al. 2020· Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019). Επίσης, στην παρούσα έρευνα, η τροπισετρόνη έδειξε παρόμοια ανταπόκριση σε ένα τυπικό φάρμακο, τη γλιβενκλαμίδη. Αντίστοιχα, η έκθεση σε γλιβενκλαμίδη αύξησε το SIRT1 και μείωσε τις αναλογίες φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολικής πρωτεΐνης FOXO3a, NF-κB και κλαδίνης-1 στους διαβητικούςνεφράστην τρέχουσα μελέτη. Η γλιβενκλαμίδη είναι ένα καθιερωμένο φάρμακο που έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη θεραπεία διαβητικών ασθενών αναστέλλοντας τα ευαίσθητα στο ATP κανάλια K plus. Δεδομένου ότι υπήρξαν ορισμένα αντιφατικά αποτελέσματα σχετικά με την επίδραση γλιβενκλαμίδης στο DN (Akbar et al. 2013; Elmalí et al. 2004; Nakamura et al. 2000), πιθανώς λόγω της δόσης ή της διάρκειας της θεραπείας, αυτό το γεγονός παρείχε το κίνητρο για την εισαγωγή νέο φάρμακο για διαβητικούς ασθενείς ως ασφαλής και αποτελεσματικός παράγοντας με λιγότερες παρενέργειες

Συνολικά, η τροπισετρόνη βελτιώνεται αποτελεσματικάνεφρική λειτουργίαστο DN πιθανώς αλλάζοντας την έκφραση του SIRT1, των αναλογιών φωσφορυλιωμένης πρωτεΐνης FOXO3a/ολικής FOXO3a, NF-κB και κλαουδίνης-1. Αυτή η μελέτη είχε ορισμένους περιορισμούς στην υποστήριξη αυτού του θέματος. Για παράδειγμα, μορφολογικές μελέτες θα πρέπει να προσπαθήσουν να παράσχουν περαιτέρω στοιχεία για την επικύρωση της παρούσας έρευνας. Επίσης, οι ερευνητές δεν χρησιμοποίησαν αναστολείς μορίων για να επικυρώσουν τον ακριβή μηχανισμό της οδού σηματοδότησης.

συμπέρασμα

Συμπερασματικά, τα ευρήματα αυτής της μελέτης έδειξαν τη νεφροπροστατευτική δράση της τροπισετρόνης στον ΣΔ1 που προκαλείται από STZ. Τα αξιοσημείωτα ευρήματα αυτής της έρευνας έδειξαν ότι η νεφροπροστατευτική δράση της τροπισετρόνης πιθανώς περιλάμβανε αλλαγές στην έκφραση των SIRT1, FOXO3a, NF-κB και κλαουδίνης-1. Αυτά τα δεδομένα θα μπορούσαν να είναι ενθαρρυντικά για περαιτέρω έρευνα σε αυτόν τον τομέα.