Η επίδραση του οξειδωτικού στρες και της διασταυρούμενης συζήτησης ιντερλευκίνης-1 στη χρόνια φλεγμονή σε αρουραίους EAP και την παρέμβαση της ανεμώνης Tomentosa

 

 

Περίληψη

Στόχοι: Διερεύνηση του ρόλου του οξειδωτικού στρες και της αλληλεπίδρασης της ιντερλευκίνης-1 (IL-1) στη χρόνια φλεγμονή του προστάτη σε πειραματικούς αρουραίους με αυτοάνοση προστατίτιδα (EAP) και για να διευκρινιστεί ο μηχανισμός με τον οποίο η Anemone tomentosa θεραπεύει τους αρουραίους EAP. Μέθοδοι: Τριάντα αρουραίοι Wistar χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες (n=6 η καθεμία): κανονική, μοντέλο, χαμηλή δόση Anemone tomentosa, μεσαία δόση Anemone tomentosa και υψηλή δόση Anemone tomentosa. Μετά από φαρμακευτική παρέμβαση, χρησιμοποιήθηκε Western blotting για την ανίχνευση πρωτεϊνών TLR-4, IRAK1 και pNF-κB p65 στον ιστό του προστάτη. Η υπεροξειδική δισμουτάση του ορού (SOD), η υπεροξειδάση της γλουταθειόνης (GSH‑Px) και η μηλονοδιαλδεΰδη (MDA) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ανάλυσης. Οι φλεγμονώδεις κυτοκίνες, συμπεριλαμβανομένης της ιντερλευκίνης-1 και της ιντερλευκίνης-10, μετρήθηκαν με ELISA. Αποτελέσματα: Σε σύγκριση με την κανονική ομάδα, η έκφραση των πρωτεϊνών p65 TLR-4, IRAK1 και pNF-κB στον προστάτη της ομάδας μοντέλου ήταν σημαντικά αυξημένη (P <0,01). Τα επίπεδα SOD και GSH-Px στον ορό μειώθηκαν (P <0,01), ενώ τα επίπεδα MDA και ιντερλευκίνης-1 αυξήθηκαν (P <0,01). Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η παρέμβαση Anemone tomentosa μείωσε σημαντικά την έκφραση πρωτεΐνης TLR-4, IRAK1 και pNF-κB p65 στον προστάτη αρουραίων EAP (P <0,01). Τα SOD, GSH-Px και ιντερλευκίνη-10 ορού ρυθμίστηκαν σημαντικά προς τα πάνω (P <0,01 ή P <0,05), ενώ το MDA και η ιντερλευκίνη-1 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω (P <0,01 ή P <0,05). Η ιστολογία έδειξε ότι ο τραυματισμός του προστάτη αδένα και η φλεγμονώδης κυτταρική διήθηση βελτιώθηκαν μετά τη θεραπεία με Anemone tomentosa. Συμπέρασμα: Το IRAK1 μπορεί να είναι ένας βασικός κόμβος που μεσολαβεί στη διασταύρωση μεταξύ οξειδωτικού στρες και IL-1 κατά τη διάρκεια της φλεγμονής σε αρουραίους EAP. Ο αντιφλεγμονώδης μηχανισμός της Anemone tomentosa σε αρουραίους EAP μπορεί να περιλαμβάνει τη μείωση του οξειδωτικού στρες και της IL-1 με ρύθμιση της οδού σηματοδότησης TLR-4/IRAK1/NF-κB p65.

Συμπληρώματα Herb Cistanche

 

 

 

Κάντε κλικ για περισσότερες λεπτομέρειες

 

 

 

Λέξεις-κλειδιά

Χρόνια προστατίτιδα; πειραματική αυτοάνοση προστατίτιδα (EAP); οξειδωτικό στρες? ιντερλευκίνη-1 (IL-1); ΗΡΑΚ1; Μονοπάτι σηματοδότησης TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65. ΧΛΟΟΤΑΠΗΤΑΣ; GSH‑Px; MDA; ELISA; Western blot; Anemone tomentosa; Dahuocao (ιατρικό Zhuang); Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική; Βότανο TCM για προστατίτιδα. Κινεζική εθνομιατρική; αντιφλεγμονώδη? αντιοξειδωτική θεραπεία

 

 

Χρόνια προστατίτιδα (ΧΠ)είναι ένα από τα πιο κοινά νοσήματα στην ουρολογία και την ανδρολογία. Στην Κίνα, ο αναφερόμενος επιπολασμός της CP κυμαίνεται από 6,0% έως 32,9% [1]. Κλινικά χαρακτηρίζεται κυρίως από χρόνιο πυελικό άλγος και μπορεί να συνοδεύεται από ποικίλου βαθμού ουροποιητικά συμπτώματα και σεξουαλική δυσλειτουργία, επηρεάζοντας σοβαρά την ποιότητα ζωής των ασθενών. Σύμφωνα με ερευνητικές αναφορές [2], η παθογένεση της CP μπορεί να σχετίζεται με λοίμωξη από παθογόνο, οξειδωτικό στρες, παλινδρόμηση ούρων, αλλαγές στα επίπεδα ορμονών φύλου, νευροενδοκρινική ανισορροπία και ανοσοφλεγμονώδεις αποκρίσεις. Οι τρέχουσες μελέτες δείχνουν ότι στη φλεγμονώδη κατάσταση του προστάτη, παράγεται μεγάλη ποσότητα δραστικών ειδών οξυγόνου (ROS). ένα μικροπεριβάλλον υψηλού ROS προκαλεί οξειδωτικό στρες και συμμετέχει στην εμφάνιση και ανάπτυξη της CP [3]. Οι κυτοκίνες είναι ρυθμιστικά πρωτεϊνικά πολυπεπτίδια που παίζουν σημαντικό ρόλο στην εμφάνιση και ανάπτυξη της CP. η σοβαρότητα της νόσου συσχετίζεται με το επίπεδο της ιντερλευκίνης-1 (IL-1) στις εκκρίσεις του προστάτη [4], παρέχοντας μια πιθανή θεραπευτική προσέγγιση. Δεδομένης της πολύπλοκης παθοφυσιολογίας, οι σύγχρονες ιατρικές θεραπείες για την CP έχουν ορισμένους περιορισμούς [5]. Τα τελευταία χρόνια, η Παραδοσιακή Κινεζική Ιατρική (TCM) έχει δείξει ευνοϊκή αποτελεσματικότητα στη θεραπεία της ΚΠ, στην ανακούφιση του πόνου και των συμπτωμάτων του ουροποιητικού και επιδεικνύοντας χαρακτηριστικά πλεονεκτήματα.

Από την άποψη του TCM, η αιτιολογία και η παθογένεια αυτής της νόσου περιλαμβάνουν νεφρική ανεπάρκεια, υγρασία και στάση αίματος [6]. Το εθνοϊατρικό βότανο Zhuang Dahuocao (Anemone tomentosa; πικάντικο, ελαφρώς πικρό, ουδέτερο στην ιδιότητά του) έχει τις λειτουργίες καθαρισμού της θερμότητας και διώχνοντας την υγρασία, προάγοντας τη διούρηση για την ανακούφιση από τη στραγγουρία, τονωτικό τσι και την ενίσχυση των νεφρών [7]. Κλινικές παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι το Dahuocao μπορεί να βελτιώσει τα συμπτώματα CP [8] και να ρυθμίσει την έκκριση φλεγμονωδών κυτοκίνης σε αρουραίους μοντέλου CP [9]. Ο μηχανισμός του μπορεί να σχετίζεται με το μονοπάτι microRNA-146a/υποδοχέα τύπου Toll-4 (TLR-4)/πυρηνικού παράγοντα μεταγραφής-κB (NF-κB) που προέρχεται από τα προστατικά σώματα αμυλάκειας [10]. Με βάση αυτό, η παρούσα μελέτη παρατήρησε τον ρόλο της διασταυρούμενης αλληλεπίδρασης μεταξύ οξειδωτικού στρες και IL-1 στη χρόνια φλεγμονή του προστάτη στο πειραματικό μοντέλο αυτοάνοσης προστατίτιδας (EAP) σε αρουραίους και διερεύνησε την επίδραση παρέμβασης του αφεψήματος Dahuocao.

Υλικά

1.1 Πειραματόζωα

Τριάντα αρσενικοί αρουραίοι Wistar αγοράστηκαν από την Changsha Tianqin Biotechnology Co., Ltd. (αρ. άδειας: SCXK2019-0013), ηλικίας 8 εβδομάδων, σωματικό βάρος 200 ± 17 g. Αρ. έγκρισης δεοντολογίας των ζώων: DW20220926‑202, Πανεπιστήμιο Κινεζικής Ιατρικής Guangxi. Τα ζώα στεγάστηκαν στο Key Laboratory of Molecular Biology for Prevention and Treatment στο TCM, Guangxi.

 

1.2 Κύρια όργανα και αντιδραστήρια

Συσκευή ηλεκτροφόρησης (Beijing Liuyi, DYCZ‑24DN), ποσοτικοποιητής νουκλεϊκού οξέος/πρωτεΐνης (Denovix DS-11), σύστημα ημίξηρη μεταφορά (ATTO WSE-4040, AE6675L). Ολοκληρώστε το ανοσοενισχυτικό του Freund (Sigma-Aldrich, F5881). TLR-4 αντίσωμα (Affinity, AF7017), αντίσωμα κινάσης-1 (IRAK1) που σχετίζεται με υποδοχέα ιντερλευκίνης-1 (Συγγένεια, AF4742), αντίσωμα φωσφο-NF-κB p65 (Συγγένεια, AF2006). Κιτ GSH‑Px (Nanjing Jiancheng, A005‑1), κιτ SOD (Nanjing Jiancheng, A001‑1), κιτ MDA (Nanjing Jiancheng, A003‑1). IL-1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL-10 ELISA (Lianke Bio, EK310).

Μέθοδοι

 

2.1 Προετοιμασία μοντέλου αρουραίου EAP

Η παρασκευή καθαρισμένων προστατικών πρωτεϊνών αρουραίου ακολούθησε προηγούμενες μεθόδους [10]. Η μοντελοποίηση ανοσοποίησης [10-11] πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα καθιερωμένα πρωτόκολλα. Η επιτυχής μοντελοποίηση υποδεικνύεται από την εξαφάνιση των πτυχών του βλεννογόνου εντός των προστατικών αγωγών, την ατελή κυψέλη, το στρωματικό οίδημα και τη φλεγμονώδη κυτταρική διήθηση [12].

 

2.2 Παρασκευή αφεψήματος Dahuocao

Το αφέψημα Dahuocao (Anemone tomentosa) παρασκευάστηκε σύμφωνα με προηγούμενες πειραματικές διαδικασίες [10].

 

2.3 Ομαδοποίηση και χορήγηση φαρμάκων

Τριάντα επίμυες κατατάχθηκαν τυχαία από τον πίνακα τυχαίων αριθμών σε ομάδες κανονικών, μοντέλων και χαμηλών, μεσαίων και υψηλών δόσεων Dahuocao (n=6 ανά ομάδα). Μετά από επιτυχή μοντελοποίηση, ομάδες χαμηλής, μεσαίας και υψηλής δόσης έλαβαν αφέψημα Dahuocao με καθετήρα σε συγκεντρώσεις 1,46 g/mL, 2,92 g/mL και 5,84 g/mL, αντίστοιχα (4 mL/kg·d). Η φυσιολογική ομάδα και η ομάδα του μοντέλου έλαβαν φυσιολογικό ορό (4 mL/kg·d). Οι θεραπείες χορηγήθηκαν μία φορά την ημέρα για 4 εβδομάδες.

2.4 Ιστοπαθολογία προστάτη (χρώση H&E)

Οι ιστοί του προστάτη στερεώθηκαν, ενσωματώθηκαν και τεμαχίστηκαν. Οι τομές χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη-ηωσίνη και εξετάστηκαν με μικροσκόπιο φωτός για την αξιολόγηση των δομικών αλλαγών της κυψελίδας και της διήθησης των φλεγμονωδών κυττάρων.

 

2.5 Δείκτες οξειδωτικού στρες ορού: SOD, MDA, GSH‑Px

Τα επίπεδα SOD, MDA και GSH‑Px ορού μετρήθηκαν αυστηρά σύμφωνα με τις οδηγίες του αντίστοιχου κιτ.

 

2.6 Ανίχνευση ELISA IL-1 και IL-10 ορού

Οι συγκεντρώσεις IL-1 και IL-10 στον ορό μετρήθηκαν αυστηρά σύμφωνα με πρωτόκολλα κιτ ELISA.

 

2.7 Ανίχνευση Western blot των TLR-4, IRAK1 και pNF-κB p65 στον προστάτη

Περίπου 50 mg προστατικού ιστού αλέστηκαν σε λεπτή σκόνη σε υγρό άζωτο, μοιράστηκαν σε κλάσματα και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA. Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση, μεταφέρθηκαν, μπλοκαρίστηκαν, επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα, πλύθηκαν, επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα, πλύθηκαν και απεικονίστηκαν. Η έκφραση πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκε ως γκρι τιμές ζώνης στόχου/οικοκυρικής.

 

2.8 Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS 22.0. Τα κανονικά κατανεμημένα δεδομένα με ομοιογένεια διακύμανσης παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD και αναλύονται με μονόδρομη ANOVA με δοκιμές post hoc LSD‑t. Τα μη φυσιολογικά ή ετεροσκεδαστικά δεδομένα παρουσιάζονται ως M (QR) και αναλύονται με μη παραμετρικές δοκιμές. Μια διπλής όψης P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα (συνοπτική επαναδιατύπωση για σαφήνεια)

Σε σχέση με το φυσιολογικό: Προστατικό TLR‑4, IRAK1 και pNF‑κB p65↑ (P <0,01). SOD ορού και GSH‑Px↓ (P <0,01); MDA και IL-1 ↑ (P < 0,01).

Σε σχέση με το μοντέλο: Anemone tomentosa (Dahuocao) μειωμένο TLR‑4/IRAK1/pNF‑κB p65 (P <0,01). αυξημένο SOD, GSH-Px και IL-10 (P <0,01 ή P <0,05). μειωμένο MDA και IL-1 (P < 0,01 ή P < 0,05). Η ιστολογία έδειξε ανακούφιση του τραυματισμού του αδένα και της φλεγμονώδους διήθησης.

Σύναψη
Το IRAK1 μπορεί να αντιπροσωπεύει έναν κεντρικό κόμβο στη συνομιλία μεταξύ οξειδωτικού στρες και IL-1 κατά τη διάρκεια χρόνιας φλεγμονής του προστάτη σε αρουραίους EAP. Το Anemone tomentosa (Dahuocao), ένα εθνοϊατρικό βότανο TCM/Zhuang για την προστατίτιδα, μπορεί να αναστείλει τη χρόνια φλεγμονή μειώνοντας το οξειδωτικό στρες και την IL-1 μέσω της ρύθμισης της οδού σηματοδότησης TLR-4/IRAK1/NF-κB p65.

Σημειώσεις αρχής και πηγής

Η επιδημιολογία και το βιοϊατρικό πλαίσιο βασίζονται στην εθνική βιβλιογραφία ουρολογίας/ανδρολογίας [1-6].

Η ταυτότητα, οι ιδιότητες και οι ενδείξεις TCM του Anemone tomentosa (Dahuocao) αναφέρονται στην Κρατική Διοίκηση της Κινεζικής Επιτομής Materia Medica της TCM [7], μια έγκυρη πηγή.

Η κλινική παρατήρηση και οι μηχανιστικές μελέτες σε ζώα για το Dahuocao για CP/CNP υποστηρίζονται από κινεζικά περιοδικά με κριτές και τυποποιημένες πειραματικές οδηγίες [8–12], ενισχύοντας την αξιοπιστία της χρήσης βοτάνου TCM για προστατίτιδα.

 

Αναφορές

[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Epidemiological characteristics of chronic prostatitis in China. Chin J Androl. 2012;18(7):579‑582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL, et al. Πρόοδοι στην αιτιολογία και την παθογένεια της χρόνιας προστατίτιδας. Σύγχρονη διάγνωση και θεραπεία. 2019;30(11):1810-1813.
[3] Paulis G. Φλεγμονώδεις μηχανισμοί και οξειδωτικό στρες στην προστατίτιδα: ο πιθανός ρόλος της αντιοξειδωτικής θεραπείας. Res Rep Urol. 2018;10:75-87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H, et al. Οι επιδράσεις του Κορεατικού Κόκκινου Τζίνσενγκ στις φλεγμονώδεις κυτοκίνες και την απόπτωση σε ένα μοντέλο αρουραίου χρόνιας μη βακτηριακής προστατίτιδας. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X, et al. Παραδοσιακή κινεζική ιατρική για τη χρόνια προστατίτιδα/σύνδρομο χρόνιου πυελικού πόνου: μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση. Ιατρική (Βαλτιμόρη). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. TCM διαγνωστική και θεραπευτική σκέψη για χρόνια προστατίτιδα. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268-269.
[7] Συντακτική επιτροπή της κινεζικής Materia Medica, Κρατική Διοίκηση της TCM. Κινεζική Materia Medica. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press; 1999:1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM, et al. Κλινική παρατήρηση κλύσματος κατακράτησης με Dahuocao (Zhuang φάρμακο) σε 60 περιπτώσεις χρόνιας προστατίτιδας. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55-56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003‑7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J, et al. Το Dahuocao αναστέλλει τις φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε ένα μοντέλο αρουραίου μη βακτηριακής προστατίτιδας. Σύγχρονη Ανοσολογία. 2021;41(6):504-508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM, et al. Ο ρόλος του μονοπατιού miRNA-146a/TLR-4/NF-κB των προστατικών σωμάτων αμυλικής σε χρόνια φλεγμονή αρουραίων EAP και παρέμβαση του Dahuocao. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518-2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW, et al. Παρέμβαση ρεσβερατρόλης σε κυτοκίνες σε προστατικό ιστό μοντέλου αρουραίου προστατίτιδας. Chin J Androl. 2017;31(3):14-18.
[12] Επαγγελματική Επιτροπή Πειραματικής Φαρμακολογίας της TCM, Κινεζική Ένωση Κινεζικής Ιατρικής. Σχέδιο προδιαγραφών για την προετοιμασία ζωικών μοντέλων χρόνιας προστατίτιδας. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2018;24(19):10-14.

Προαιρετικές λέξεις-κλειδιά συντάκτη για ευρετηρίαση (για δυνατότητα εντοπισμού)

Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική; Zhuang εθνομιατρική; Νταχουκάο; Anemone tomentosa Maxim.; προστατίτιδα? σύνδρομο χρόνιου πυελικού πόνου. TLR4; ΗΡΑΚ1; NF‑κB; οξειδωτικό στρες? αντιοξειδωτικά ένζυμα? κυτοκίνες; ELISA; Western blot; μοντέλο αρουραίου? EAP; φυτικά αντιφλεγμονώδη· Βότανο TCM για προστατίτιδα.