Η ευαίσθητη στην ηλικία αποτελεσματικότητα του περιορισμού των θερμίδων στη μιτοχονδριακή βιογένεση και τη βλάβη του MtDNA στο ήπαρ αρουραίου

Παρακαλώ επικοινώνησεoscar.xiao@wecistanche.comΓια περισσότερες πληροφορίες

Αφηρημένη:Ο περιορισμός θερμίδων (CR) είναι η πιο αποτελεσματική θεραπεία για την καθυστέρηση της έναρξης αλλαγών που σχετίζονται με την ηλικία, όπως η δυσλειτουργία των μιτοχονδρίων. Ωστόσο, η ευαισθησία των μιτοχονδριακών δεικτών στην CR και τα σχετιζόμενα με την ηλικία όρια της αποτελεσματικότητας της CR δεν έχουν διευκρινιστεί πλήρως. Χρησιμοποιήσαμε δείγματα ήπατος από αρουραίους που τρέφονταν κατά βούληση (AL) χωρισμένα σε:18-μηνών (AL-18), 28-μήνων (AL-28) , και 32-month-old(AL{-32) ομάδες, και από CR-treated (CR) 28-month-old (CR-28) and 32- ενός μήνα(CR-32) για τον προσδιορισμό της επίδρασης του CR σε αρκετούς μιτοχονδριακούς δείκτες. Οι σχετιζόμενες με την ηλικία μειώσεις στη δραστηριότητα της κιτρικής συνθάσης, στις ποσότητες πρωτεϊνών TFAM, MFN2 και DRP1 και στην περιεκτικότητα σε mtDNA στην ομάδα AL{-28 αποτράπηκαν σε αντίστοιχες CR-28. Αντίστοιχα, η CR μείωσε την οξειδωτική βλάβη mtDNA που εκτιμήθηκε μέσω της συχνότητας οξειδωμένων πουρινών σε συγκεκριμένες περιοχές mtDNA σε CR-28 ζώα. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν την αντιγηραντική δράση του CR έως και 28 μήνες. Αντίθετα, οι ποσότητες πρωτεΐνης των LonP1, Cyt c, OGG1 και APE1 και το περιεχόμενο διαγραφής mtDNA 4,8 Kb δεν επηρεάστηκαν σε αρουραίους CR-28. Η απουσία σημαντικών διαφορών μεταξύ των τιμών AL{-32 και των αντίστοιχων CR{-32 υποδηλώνει ένα όριο CR Refficacy που σχετίζεται με την ηλικία σε αυτήν την ηλικία.πουριτανς βιταμίνη cΩστόσο, αυτό περιορίζει μόνο εν μέρει τα οφέλη της CR στην αντιμετώπιση της γενικευμένης μείωσης της γήρανσης και της σχετικής μιτοχονδριακής εμπλοκής.

Λέξεις-κλειδιά:συκώτι αρουραίου? γηράσκων; περιορισμός θερμίδων? μιτοχονδριακή βιογένεση; βλάβη mtDNA? ευαίσθητη στην ηλικία αποτελεσματικότητα του CR

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

1. Εισαγωγή

Σύμφωνα με την εντυπωσιακή πρόοδο των μελετών που διερευνούν τη διαδικασία της γήρανσης, έχουν συντεθεί διαδοχικά αρκετοί διαφορετικοί ορισμοί της διαδικασίας και ένα σύνολο μονοπατιών και μεσολαβητών έχει αναγνωριστεί ως τα λεγόμενα χαρακτηριστικά γνωρίσματα της γήρανσης [1,2]. Μεταξύ αυτών, η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία, το οξειδωτικό στρες και η μοριακή βλάβη των μιτοχονδρίων έχουν αναδειχθεί ως κρίσιμοι παράγοντες. Ένα σημαντικό χαρακτηριστικό της γήρανσης είναι η εξειδίκευση των ιστών που έχει επισημανθεί για τη μιτοχονδριακή συμμετοχή [3,4], τις επιγενετικές αλλαγές [5] και άλλες αλλαγές όπως το μήκος των τελομερών [6]. Μεταξύ των διαφόρων θεραπειών που στοχεύουν στην πρόληψη ή την καθυστέρηση της εμφάνισης αλλαγών που σχετίζονται με την ηλικία, ο περιορισμός θερμίδων (CR) είναι η παλαιότερη στρατηγική που προτείνεται [7] και εξακολουθεί να αντιπροσωπεύει το χρυσό πρότυπο για τον πολύ μεγάλο αριθμό ευεργετικών επιδράσεων που μεταφέρει αυτή η παρέμβαση. Πράγματι, πρόσφατες μελέτες σχετικά με τους μοριακούς μηχανισμούς που προκαλούνται από την CR έχουν δείξει ότι πολλά μονοπάτια επηρεάζονται θετικά από αυτήν τη διατροφική παρέμβαση [8-10].sistancheΕπιπλέον, αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν επίσης έντονα την ύπαρξη μιας «πλαστικότητας» της γήρανσης [5,9,11,12] που μπορεί να ρυθμιστεί μέσω περιβαλλοντικών αλληλεπιδράσεων όπως διατροφικές ή φαρμακευτικές παρεμβάσεις ή συνήθειες τρόπου ζωής. Η CR έχει ήδη αποδειχθεί ότι εξουδετερώνει τις σχετιζόμενες με την ηλικία μεταβολές της μιτοχονδριακής βιογένεσης και του μεταβολισμού σε αρκετούς ιστούς αρουραίου με ιστοειδικές επιδράσεις [3,13,14]. Πιο συγκεκριμένα, προηγούμενες μελέτες από την ομάδα μας σε ήπαρ αρουραίου, το οποίο επηρεάζεται βαθιά από τη γήρανση σε μιτοχονδριακό επίπεδο, εξετάζοντας οργανικούς δείκτες έδειξαν θετική επίδραση της CR στις μεταβολές που σχετίζονται με την ηλικία των μιτοχονδρίων. Στην πραγματικότητα, σε αρουραίους ηλικίας 28-μηνών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με CR, το περιεχόμενο του μιτοχονδριακού DNA (mtDNA), η ποσότητα των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στη βιογένεση των μιτοχονδρίων ή είναι ευαίσθητα στο ROS και η έκταση της δέσμευσης του μιτοχονδριακού μεταγραφικού παράγοντα Α(TFAM) σε συγκεκριμένες περιοχές mtDNA εμφάνισαν τιμές σημαντικά διαφορετικές από εκείνες των ομολόγων τους που ταιριάζουν με την ηλικία ad libitum-ted(AL) και όχι στατιστικά διαφορετικές από εκείνες των νεότερων 18-μηνών ζώων που τρέφονται με AL [15]. Πιο πρόσφατα, η ανάλυση της μιτοχονδριακής βιογένεσης και της βλάβης του mtDNA στο ήπαρ από αρουραίους ηλικίας AL (28-μηνών) και εξαιρετικά ηλικιωμένους (32-μηνών), μας επέτρεψε να μελετήσουμε μια διαφορετική σειρά των μιτοχονδριακών παραμέτρων και να προτείνει διαφορετικό ρυθμό γήρανσης σε σχέση με τη μιτοχονδριακή συμμετοχή, στα λίγα ζώα που φθάνουν φυσικά σε μακροζωία σε σχέση με την πλειονότητα αυτών που γερνούν [16,17]. Με αυτές τις προϋποθέσεις, στοχεύσαμε στην αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της CR σε ένα μεγάλο σύνολο μιτοχονδριακών δεικτών σε διάφορες ηλικίες στο ήπαρ αρουραίου. Για τους σκοπούς αυτούς, χρησιμοποιήσαμε ζώα από το πολύ μακρόβιο υβριδικό στέλεχος Fischer 344× Brown Norway, από το οποίο επιλέχθηκαν ως μάρτυρες οι 18-μηνιαίοι επίμυες που τρέφονταν με βούληση (AL-18), να συγκριθεί με τα ζώα που τρέφονται κατά βούληση, ηλικιωμένα(AL{{-28) και εξαιρετικά ηλικιωμένα(AL-32) και τα αντίστοιχα ηλικίας που έλαβαν θεραπεία με CR(CR-28 και CR{ {39}}). Σε αυτές τις ομάδες αρουραίων, αξιολογήσαμε: τη δραστηριότητα του μιτοχονδριακού ενζύμου κιτρική συνθάση, την έκφραση ενός συνόλου πρωτεϊνών που περιλαμβάνουν TFAM, πρωτεάση Lon (LonP1) και κυτόχρωμα c(Cyt c), τα ένζυμα επιδιόρθωσης mtDNA 8- οξοϋΝΑ γλυκοζυλάση/απουρινική ή απυριμιδινική (ΑΡ) λυάση (OGG1) και απουρινική/απυριμιδινική ενδονουκλεάση 1 (APE1), και οι πρωτεΐνες μιτοχονδριακής δυναμικής μιτοφουζίνη 2 (MFN2) και πρωτεΐνη 1 (DRP1) που σχετίζεται με τη δυναμίνη. Τέλος, προσδιορίστηκε η περιεκτικότητα σε mtDNA και η οξειδωτική βλάβη σε συγκεκριμένες περιοχές.

2. Αποτελέσματα

2.1.Αξιολόγηση επιδράσεων ηλικίας και CR στους δείκτες της μιτοχονδριακής λειτουργικότητας

Η δραστηριότητα της κιτρικής συνθάσης, η οποία είναι επίσης δείκτης μιτοχονδριακής μάζας, προσδιορίστηκε και στις πέντε ομάδες αρουραίων για να αξιολογηθεί η ευαισθησία της μιτοχονδριακής λειτουργικότητας στη γήρανση και την CR (Εικόνα 1).

Μια σχετιζόμενη με την ηλικία στατιστικά σημαντική μείωση στη δραστηριότητα της κιτρικής συνθάσης παρατηρήθηκε σε αρουραίους AL-28(-41 τοις εκατό ) και AL-32(-40 τοις εκατό ) σε σύγκριση με τους AL{{{ 5}} έλεγχος ηλικίας. Δεν βρέθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων AL{-28 και AL-32. Το φαινόμενο CR αποδείχθηκε από τη σημαντικά υψηλότερη ( συν 40 τοις εκατό ) ενζυμική δραστηριότητα στους αρουραίους CR-28 σε σύγκριση με την τιμή AL-28 που αντιστοιχεί στην ηλικία του. Επιπλέον, η δραστηριότητα CR-28 ήταν παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε στους νεότερους αρουραίους ελέγχου AL{-18 (Εικόνα 1). Αυτό το αποτέλεσμα αμβλύνθηκε στα ζώα CR-32. Στην πραγματικότητα, στην μεγαλύτερη ηλικία των 32 μηνών, δεν παρατηρήθηκε στατιστική διαφορά μεταξύ των ομάδων AL και CR.

το cistanche μπορεί να αντιγηρανθεί

Για να εμβαθύνουμε την ανάλυση των επιπτώσεων ηλικίας και CR στη μιτοχονδριακή λειτουργικότητα, η ποσότητα πρωτεΐνης του TFAM και του LonP1 προσδιορίστηκε στα μιτοχόνδρια που απομονώθηκαν από όλες τις ομάδες αρουραίου με αναλύσεις Western blot, στις οποίες η πρωτεΐνη από την εξωτερική μιτοχονδριακή μεμβράνη VDAC χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος φόρτωσης (Εικόνα 2).

Σχήμα 2. Ποσότητες πρωτεϊνών TFAM και LonP1 σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από AL-18, AL-28, CR-28, AL-32 και CR-32-μήνα - παλιοί αρουραίοι. (ΕΝΑ). Ποσότητες πρωτεΐνης TFAM σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από διαφορετικές ομάδες αρουραίων. Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από καθεμία από τις ομάδες που προσδιορίστηκαν. Οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες, από πάνω προς τα κάτω, αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από TFAM και VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του TFAM, κανονικοποιημένη στην ένταση των ποσοτήτων πρωτεΐνης VDAC.(B).LonP1 σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από διαφορετικές ομάδες αρουραίου. Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από καθεμία από τις ομάδες που προσδιορίστηκαν. Από πάνω προς τα κάτω, οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από το LonP1 και το VDAC.τι είναι το cistancheΤο ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του LonP1, κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC. (A, B) Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τα αποτελέσματα από πειράματα Western blot τριπλών και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή ANOVA μονής κατεύθυνσης και τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Tukey . Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές και το SD για τις πέντε πειραματικές ομάδες. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε σχέση με την τιμή των αρουραίων AL-18, που καθορίστηκε ως 1.*p<0.05 versus="" al-18=""><0.05 versus="" al-28="" rats.="" n:="" number="" of="" analyzed="" animals.="" aging="" led="" to="" a="" statistically="" significant="" (-31%)decrease="" in="" the="" tfam="" amount="" comparing="" al-18="" control="" rats="" with="" both="" al-28="" and="" al-32="" animals,="" whereas="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" values="" of="" al-28="" and="" al-32="" groups.="" as="" an="" effect="" of="" cr,="" the="" cr-28="" rats="" had="" a="" tfam="" amount="" significantly="" higher(+39%)="" than="" that="" of="" the="" age-matched="" al="" counterparts="" and="" not="" different="" from="" that="" of="" the="" younger="" al-18="" controls.="" conversely,="" such="" diet="" effect="" was="" not="" visible="" anymore="" in="" the="" cr-32="" animals="" that="" showed="" a="" tfam="" amount="" not="" statistically="" different="" from="" that="" of="" the="" age-matched="" al="" group="" and="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" al-18="" rats.="" as="" for="" the="" lonp1="" amount,="" there="" was="" a="" statistically="" significant="" (-65%)="" age-related="" decrease="" in="" the="" al-28="" group="" with="" respect="" to="" the="" al-18="" value.="" the="" age="" progression="" made="" the="" statistically="" significant="" decrease="" in="" the="" lonp1="" amount,="" with="" respect="" to="" the="" al-18="" rats,="" more="" marked(-75%)in="" the="" al-32="" group.="" interestingly,="" there="" was="" no="" evident="" effect="" of="" cr="" on="" the="" lonp1="" amount="" since="" the="" comparison="" between="" the="" al-28="" value="" and="" the="" cr="" age-matched="" counterpart="" did="" not="" show="" any="" significant="" difference="" and="" the="" same="" occurred="" for="" the="" comparison="" between="" the="" al-32="" and="" cr-32="">

Για να αξιολογήσουμε την επίδραση της γήρανσης και του CR σε μια άλλη μιτοχονδριακή μεταβολική λειτουργία που είναι η έναρξη της μιτοχονδριακής εγγενούς αποπτωτικής οδού, προσδιορίσαμε, με πειράματα Western blot, την ενδο-μιτοχονδριακή ποσότητα του Cyt c (Εικόνα 3).

Εικόνα 3. Ποσότητες πρωτεΐνης Cyt c σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από AL-18, AL-28, CR-28, AL-32 και CR-32-μήνα- γέροι αρουραίοι. Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από καθεμία από τις ομάδες που προσδιορίστηκαν. Από πάνω προς τα κάτω, οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από Cyt c και VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του Cyt c κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC. Όλα τα δεδομένα αντιπροσώπευαν τα αποτελέσματα από πειράματα κηλίδας Western εις τριπλούν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή ANOVA μονής κατεύθυνσης και τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Tukey. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές και το SD για τις πέντε πειραματικές ομάδες. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε σχέση με την τιμή των αρουραίων AL-18, που καθορίστηκε ως 1.* p<0.05 versus="" al-18=""><0.05 versus="" al-28="" rats.="" n:="" number="" of="" analyzed="" animals.="" the="" age-related="" effect="" on="" the="" intra-mitochondrial="" cyt="" c="" amount="" was="" peculiar="" since="" there="" was="" a="" marked(-44%)statistically="" significant="" decrease="" passing="" from="" the="" al-18="" rats="" to="" the="" al-28="" animals,="" but="" such="" decrease="" was="" partially="" prevented="" in="" the="" al-32="" group="" showing="" a="" small(-13%)="" decrease="" in="" comparison="" with="" the="" al-18counterpart="" and="" a="" significant="" marked="" (+55%)="" increase="" in="" comparison="" with="" the="" al-28="" rats.="">Αντιγηραντικό κιστανάκιΤο αποτέλεσμα CR δεν ήταν καθόλου σχετικό αφού δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στις ποσότητες πρωτεΐνης Cyt c μεταξύ των ταιριασμένων με την ηλικία ομάδων AL και CR στους 28 καθώς και στους 32 μήνες. Η σχετιζόμενη με την ηλικία μείωση των ποσοτήτων Cyt c στις δύο ομάδες έδειξε μια τάση παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε στις ομάδες AL-28 και AL{-32 με πιο σχετική μείωση στα ζώα CR{-28 αποτρέπεται μερικώς στους παλαιότερους αρουραίους CR-32.

2.2. Αξιολόγηση της ηλικίας και των επιδράσεων CR στα ένζυμα επιδιόρθωσης mtDNA

Δεδομένου ότι η γήρανση έχει αποδειχθεί σε μεγάλο βαθμό ότι σχετίζεται με τη συσσώρευση βλάβης στο mtDNA, μετρήσαμε, με πειράματα Western blot, σε μεμονωμένα ηπατικά μιτοχόνδρια την έκφραση δύο κύριων ενζύμων επιδιόρθωσης mtDNA, συγκεκριμένα της 8-οξοϋΝΑ γλυκοζυλάσης/απουρινικής ή την απυριμιδινική(ΑΡ)λυάση (OGG1) και την απουρινική/απυριμιδινική ενδονουκλεάση 1 (APE1), που εμπλέκονται και οι δύο στην επιδιόρθωση της εκτομής βάσης (BER) που είναι ο επικρατέστερος μηχανισμός επιδιόρθωσης του mtDNA (Εικόνα 4).

Εικόνα 4. Ποσότητες πρωτεϊνών OGG1 και APEl σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από AL-18, AL-28, CR-28, AL{-32 και CR-32-μήνα - παλιοί αρουραίοι. (Α). Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από κάθε μία από τις ομάδες που υποβλήθηκαν σε ανάλυση. Οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες, από πάνω προς τα κάτω αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από OGGl και VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του OGG1 κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC. (Β). Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από καθεμία από τις ομάδες που προσδιορίστηκαν.cistanche benefíciosΑπό πάνω προς τα κάτω, οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από το APE1 και το VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του APE1 κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC. (Α, Β) Τα δεδομένα αντιπροσώπευαν τα αποτελέσματα από πειράματα κηλίδας Western εις τριπλούν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή ANOVA μονής κατεύθυνσης και τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Tukey. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές και το SD για τις πέντε πειραματικές ομάδες. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν έναντι της τιμής των αρουραίων AL-18, που ορίστηκε ως 1. n: Αριθμός αναλυθέντων ζώων.

Οι ποσότητες ενδο-μιτοχονδριακής πρωτεΐνης και των δύο ενζύμων είχαν παρόμοιες τάσεις με τις επιδράσεις της ηλικίας και της CR. Ειδικότερα, οι OGG1 και APE1 δεν έδειξαν καμία στατιστικά σημαντική αλλαγή σχετιζόμενη με την ηλικία και στις δύο ομάδες AL και CR, γεγονός που υποδηλώνει ότι δεν υπήρχε καμία επίδραση στην ηλικία. Απροσδόκητα, επίσης, η CR δεν προκάλεσε καμία σημαντική επίδραση στις ποσότητες OGG1 και APE1 στην ομάδα CR-28 σε σύγκριση με τα ζώα AL που ταιριάζουν με την ηλικία, καθώς και μεταξύ των ομάδων ηλικίας 32-μηνών.

2.3. Evaluation of Age and CR Effects on Mitochondrial Dynamics

Έχοντας αναφέρει προηγουμένως μια αξιοσημείωτη επίδραση της ηλικίας στην έκφραση των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στη σύντηξη (MFN2) και τη σχάση (DRP1)[16], αξιολογήσαμε εδώ τις επιδράσεις της CR για μεγάλο χρονικό διάστημα σε αυτούς τους δείκτες. Επομένως, οι ποσότητες πρωτεΐνης MFN2 και DRP1 προσδιορίστηκαν, με πειράματα στυπώματος Western, σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από όλες τις ομάδες αρουραίου (Εικόνα 5).

Σχήμα 5. Ποσότητες πρωτεϊνών MFN2 και DRP1 σε απομονωμένα μιτοχόνδρια ήπατος από AL-18, AL-28, CR-28, AL-32 και CR-32-μήνα - παλιοί αρουραίοι. (Α). Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από κάθε μία από τις ομάδες που υποβλήθηκαν σε ανάλυση. Από πάνω προς τα κάτω, οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από το MFN2 και το VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του MFN2 κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC.(B). Στο ένθετο, ένα αντιπροσωπευτικό στύπωμα Western πραγματοποιήθηκε σε έναν αρουραίο από καθεμία από τις ομάδες που προσδιορίστηκαν. Οι ανοσοαντιδραστικές ζώνες, από πάνω προς τα κάτω αντιπροσωπεύουν, αντίστοιχα, τα σήματα από DRP1 και VDAC. Το ιστόγραμμα δείχνει την ποσοτικοποίηση της έντασης των ζωνών του DRP1 κανονικοποιημένη στην ένταση του VDAC. (Α, Β) Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τα αποτελέσματα από πειράματα κηλίδας Western εις τριπλούν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή ANOVA μονής κατεύθυνσης και τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης του Tukey. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν τις μέσες τιμές και το SD για τις πέντε πειραματικές ομάδες. Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν σε σχέση με την τιμή των αρουραίων AL-18, που ορίστηκε ως 1. *p<0.05 versus="" al-18=""><0.05 versus="" al-28="" rats.n:="" number="" of="" analyzed="">

Βρήκαμε μια στατιστικά σημαντική μείωση που σχετίζεται με την ηλικία (-43 τοις εκατό ) στο MFN2 στους αρουραίους AL-28 σε σύγκριση με τους ελέγχους AL{-18. Αυτή η μείωση αποτράπηκε στους αρουραίους AL-32 που έδειξαν ένα φαινόμενο σύνθετης ηλικίας, παρόμοιο με αυτό που αναφέρθηκε για το Cyt c. Ωστόσο, διαφορετικά από το Cyt c, το CR είχε πολύ θετική επίδραση στα ζώα 28-μηνών, αποτρέποντας στους αρουραίους CR-28 τη μείωση που σχετίζεται με την ηλικία των ζώων AL-28 και οδηγώντας σε σημαντική αξιοσημείωτη αύξηση (συν 52 τοις εκατό) στο MFN2 σε σύγκριση με το αντίστοιχο της AL που αντιστοιχεί στην ηλικία. Επιπλέον, η ποσότητα MFN2 στους αρουραίους CR-28 δεν ήταν διαφορετική από την τιμή στους ελέγχους AL{-18, υποδεικνύοντας αποτελεσματική πρόληψη της επίδρασης που σχετίζεται με την ηλικία. Δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων AL{-32 και CR-32, υποδεικνύοντας έτσι μια περιορισμένη επίδραση της CR στα γηραιότερα ζώα. Επιπλέον, δεν βρέθηκε επίδραση σχετιζόμενη με την ηλικία για το MFN2 στην ομάδα AL-32 σε σύγκριση με την αντίστοιχη AL{-18. Ομοίως, οι ποσότητες της πρωτεΐνης DRP1 εμφάνισαν σημαντική μείωση σχετιζόμενη με την ηλικία (-49 τοις εκατό ) σε αρουραίους AL{-28 σε σύγκριση με την ομάδα AL{-18 η οποία προλήφθηκε από CR στο {{29 }}ζώα μηνών. Πράγματι, η ομάδα CR-28 παρουσίασε μια θετική διαφορά ( συν 50 τοις εκατό ) σε σύγκριση με την ομάδα AL{-28, επιδεικνύοντας ισχυρή επίδραση CR. Ωστόσο, η απουσία διαφοράς μεταξύ AL-32 και CR-32 ως προς τις ποσότητες πρωτεΐνης DRP1 έδειξε περαιτέρω περιορισμένη αποτελεσματικότητα της CR στην παρατεταμένη γήρανση. Και πάλι, δεν υπήρχε εμφανής επίδραση ηλικίας επίσης για τα ποσά DRP1 που περνούσαν από την ομάδα AL{-18 στην ομάδα AL{-32. Στη συνέχεια, προσδιορίσαμε τις τιμές του δείκτη σύντηξης (FI ως η αναλογία μεταξύ MFN2/DRP1 για κάθε έναν από τους εξετασθέντες αρουραίους (Εικόνα 6).

Οι τιμές FI στην ομάδα AL{{{{0}} κάλυψαν ένα στενό εύρος από 1,37 έως 2,64, ενώ στην ομάδα AL-28 όλες οι τιμές ήταν υψηλότερες και κυμαίνονταν από 2,20 έως 8,24 . Οι τιμές FI της ομάδας CR{{1{0}} κυμαίνονταν από 0,99 έως 5,14 και ήταν αρκετά παρόμοιες με αυτές των αρουραίων AL{-18. Στα ζώα AL{-32, οι τιμές FI κυμαίνονταν από 0,70 έως 2,27, καλύπτοντας έτσι ένα διάστημα παρόμοιο με αυτό της ομάδας AL{-18 που υποδηλώνει την απουσία έντονης επίδρασης ηλικίας. Στην ομάδα CR-32, οι τιμές FI κυμαίνονταν από 0,87 έως 2,02 και ήταν συγκρίσιμες με αυτές των ζώων AL{-32, υποστηρίζοντας έτσι την ιδέα ότι η παρατεταμένη γήρανση (32 μήνες) μπορεί να είναι λιγότερο ευαίσθητη στην CR από τη γήρανση (28 μήνες).

Η στατιστική ανάλυση των τιμών FI από όλες τις ομάδες παρουσιάζεται στο Σχήμα 7. Στη σύγκριση μεταξύ των ομάδων AL-18 και AL{-28, η υψηλότερη τιμή FI της τελευταίας έδειξε μια αλλαγή που σχετίζεται με την ηλικία του δυναμική ισορροπία. Όσον αφορά τους αρουραίους που έλαβαν θεραπεία με CR, η τιμή της ομάδας CR-28 δεν ήταν διαφορετική από αυτή της αντίστοιχης AL{-18 και υποστήριξε την αποτελεσματικότητα της δίαιτας σε σύγκριση με τους αντίστοιχους με την ηλικία τους αντίστοιχους που τρέφονταν με AL . Αναλύοντας τις τιμές AL-32 και CR-32 του FI, η απουσία σημαντικής διαφοράς μεταξύ τους ήταν εμφανής, ενισχύοντας την ιδέα της μειωμένης αποτελεσματικότητας της δίαιτας στα ζώα που φθάνουν φυσικά σε παρατεταμένη γήρανση. Επιπλέον, οι τιμές FI και των δύο 32-ομάδων ηλικίας μηνών δεν ήταν διαφορετικές από τις αντίστοιχες AL{-18, υποστηρίζοντας την απουσία σημαντικής επίδρασης ηλικίας στα γηραιότερα ζώα.

Αυτό το άρθρο εξάγεται από το Int. J. ΜοΙ. Sci. 2021, 22, 1665