Ταϊλανδικά φυτά με υψηλά επίπεδα αντιοξειδωτικών, δράση καθαρισμού ελεύθερων ριζών, δράση κατά της τυροσινάσης και αντικολλαγενάσης

Επικοινωνία:

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Moragot Chatatikun1 και Anchalee Chiabchalard2

Αφηρημένη

Ιστορικό:Η υπεριώδης ακτινοβολία από το ηλιακό φως προκαλεί υπερπαραγωγή ενεργών ειδών οξυγόνου (ROS) με αποτέλεσμα διαταραχές φωτογήρανσης του δέρματος και υπερμελάγχρωση. Οι νέες λευκαντικές και αντιρυτιδικές ενώσεις από φυσικά προϊόντα έχουν αποκτήσει πρόσφατα αυξανόμενο ενδιαφέρον. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να βρει προϊόντα που μειώνουν το ROS σε 14 φυτικά εκχυλίσματα της Ταϊλάνδης.

Μέθοδοι:Για τον προσδιορισμό της ολικής φαινολικής καιφλαβονοειδέςπεριεχόμενο,αντιοξειδωτικόδραστηριότητα,αντι-τυροσινάσηδραστηριότητα και δράση κατά της κολλαγενάσης, συγκρίναμε εκχυλίσματα 14 φυτών της Ταϊλάνδης που παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας διαφορετικούς διαλύτες (πετρελαϊκός αιθέρας, διχλωρομεθάνιο και αιθανόλη).ΑντιοξειδωτικόΟι δραστηριότητες προσδιορίστηκαν με προσδιορισμούς DPPH και ABTS.

Αποτελέσματα:Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικό περιεχόμενο των 14 εκχυλισμάτων φυτών της Ταϊλάνδης βρέθηκε στα υψηλότερα επίπεδα σε αιθανόλη ακολουθούμενη από εκχυλίσματα διχλωρομεθανίου και πετρελαϊκού αιθέρα, αντίστοιχα, ενώφλαβονοειδέςπεριεκτικότητα κανονικά βρέθηκε στο κλάσμα διχλωρομεθανίου. Η δραστικότητα σάρωσης κυμαινόταν από 7 έως 99 τοις εκατό σάρωση όπως αξιολογήθηκε με προσδιορισμούς DPPH και ABTS. Το αιθανολικό εκχύλισμα φύλλων του Ardisia elliptica Thunb. είχε την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά, αντιοξειδωτική δράση και αναστολή της κολλαγενάσης, ενώ το Cassia alata (L.) Roxb. εκχύλισμα είχε το πλουσιότεροφλαβονοειδέςπεριεχόμενο. Είναι ενδιαφέρον ότι τρία εκχυλίσματα φυτών, τα οποία ήταν τα αιθανολικά κλάσματα των Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. και Senna alata (L.) Roxb. είχε υψηλήαντιοξειδωτικόπεριεχόμενο και δραστηριότητα και ανέστειλε σημαντικά και τα δύοτυροσινάσηκαι κολλαγενάση.

Συμπέρασμα:Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι τα κλάσματα αιθανόλης των Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. και Senna alata(L.) Roxb. δείχνει πολλά υποσχόμενα ως πιθανά συστατικά για καλλυντικά προϊόντα, όπως αντιρυτιδικούς παράγοντες και προϊόντα λεύκανσης του δέρματος.

Λέξεις-κλειδιά:Ardisia elliptica Thunb.,Αντιοξειδωτικόπεριεχόμενο, Δραστηριότητα καθαρισμού,Αντι-τυροσινάσηΔραστηριότητα, Αντι-κολλαγονάση

Τα φλαβονοειδή είναι ένα από τα στοιχεία τουκιστανάκι

Ιστορικό

Η υπεριώδης ακτινοβολία (UVR) από το ηλιακό φως είναι ο σημαντικότερος παράγοντας κινδύνου για μη μελανώματα και καρκίνους του μελανώματος [1]. Η υπερβολική έκθεση στο ηλιακό φως, ιδιαίτερα στις UVA και UVB, προκαλεί την υπερέκφραση ειδών αντιδραστικού οξυγόνου (ROS) που βλάπτουν τα λιπίδια, τις πρωτεΐνες και τα δεοξυριβονουκλεϊκά οξέα. Το κολλαγόνο είναι το κύριο θεμέλιο της εξωκυτταρικής μήτρας στο στρώμα του δέρματος του δέρματος. Το υπερβολικό ROS αυξάνει την έκφραση της κολλαγενάσης, μιας πρωτεάσης που αποδομεί το κολλαγόνο που μπορεί να οδηγήσει σε φωτογήρανση και ρυτίδες του δέρματος [2]. Επιπλέον, η έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία προκαλεί παραγωγή μελανίνης με αποτέλεσμα την υπερμελάγχρωση.Τυροσινάσηείναι το βασικό ένζυμο που ξεκινά τη μελάγχρωση του δέρματος. Πρώτον, η L-τυροσίνη υδροξυλιώνεται για να σχηματίσει 3,4-διυδροξυφαινυλαλανίνη (L-DOPA) από τυροσινάση. Στη συνέχεια, η L-DOPA οξειδώνεται σε DOPA κινόνη από τυροσινάση. Η κινόνη DOPA μετατρέπεται περαιτέρω σε DOPAchrome που μπορεί να μετατραπεί σε 5,6-διυδροξυινδόλη(DHI) ή 5,6-διυδροξυινδόλη-2-καρβοξυλικό οξύ (DHICA)[3]. Οι τρέχουσες θεραπείες για τη γήρανση του δέρματος περιλαμβάνουν υδροξυλικό οξύ για την απολέπιση της επιδερμικής στιβάδας, ρετινοειδή για τη μείωση του τραχιού δέρματος και πληρωτικό δέρματος που χορηγείται με έγχυση κολλαγόνου στο δέρμα. Ωστόσο, αυτές οι θεραπείες έχουν αρνητικές επιπτώσεις, όπως υπερμελάγχρωση, φλεγμονή, κυτταροτοξικότητα, ερεθισμό και βακτηριακή μόλυνση [4]. Ο πιο δημοφιλής παράγοντας λεύκανσης του δέρματος είναι η υδροκινόνη, η οποία αναστέλλειτυροσινάση, αλλά οι παρενέργειές του περιλαμβάνουν δερματίτιδα, οίδημα, αλλεργικές αντιδράσεις και ωχρόνοια [5]. Πρόσφατα, οι ερευνητές έχουν επικεντρωθεί σε φυσικά προϊόντα που αναστέλλουν τα ROS που προκαλούνται από την υπεριώδη ακτινοβολία, καταστέλλουν τα ένζυμα και μειώνουν το σχηματισμό μελανίνης ως εναλλακτικές για τις τρέχουσες θεραπείες. Για παράδειγμα, ενεργές φυτοενώσεις, όπως η αρβουτίνη, η αλοεσίνη, το γεντισικό οξύ,φλαβονοειδή, η εσπεριδίνη, η γλυκόριζα, η νιασιναμίδη, τα παράγωγα ζύμης και οι πολυφαινόλες, αναστέλλουν τη μελανογένεση χωρίς κυτταροτοξικότητα τα τομελανοκύτταρα [6]. Έτσι, τα φυτά μπορεί να μειώσουν το σχηματισμό ρυτίδων και την υπερμελάγχρωση που προκαλείται από την έκθεση στο ηλιακό φως.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αναλυθούν 14 φυτά της Ταϊλάνδης που εκχυλίστηκαν με τρεις διαφορετικούς διαλύτες ως προς τις δυνατότητές τους ως συστατικά κατά των ρυτίδων και λεύκανσης του δέρματος. Ο αριθμός τωναντιοξειδωτικόφαινόλες καιφλαβονοειδήαξιολογήθηκε για συσχέτιση με τη δράση σάρωσης των ελεύθερων ριζών και την αντικολλαγενάση καιαντι-τυροσινάσηδραστηριότητες. Τα αποσπάσματα είχαναντιοξειδωτικάπου απομάκρυνε τις ελεύθερες ρίζες και ανέστειλε ένζυμα που εμπλέκονται στο σχηματισμό ρυτίδων και χρωστικών. Αναγνωρίζουμε τα Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. και Senna alata (L.) Το Roxb είναι ένας πολλά υποσχόμενος υποψήφιος για χρήση σε καλλυντικά προϊόντα.

cistanche bodybuilding

Μέθοδοι

Χημικά και αντιδραστήρια

Αντιδραστήριο φαινόλης Folin Ciocalteu, ανθρακικό νάτριο (Na2CO3), γαλλικό οξύ, κερκετίνη, 10 τοις εκατό χλωριούχο αλουμίνιο, αιθανόλη, 2, 2-διφαινυλ-1-πικρυλυδραζυλ (DPPH), ασκορβικό οξύ, 2,2'-αζινο- δις(3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) (ABTS), υπερθειικό κάλιο, κοτζικό οξύ, τυροσινάση μανιταριού (EC 1.14.18.1), 3,4-διυδροξυ-L-φαινυλαλανίνη (L- DOPA), Ν-[3-(2-φουρυλ)ακρυλοϋλ]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), κολλαγενάση από Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG) , χλωριούχο νάτριο, χλωριούχο ασβέστιο και διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) αγοράστηκαν από τη Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Πετρελαϊκός αιθέρας, διχλωρομεθάνιο, απόλυτη αιθανόλη, μεθανόλη, όξινο φωσφορικό δινάτριο και δισόξινο φωσφορικό νάτριο αγοράστηκαν από τη Merck (Darmstadt, Γερμανία). Όλα τα χημικά και τα αντιδραστήρια ήταν αναλυτικής ποιότητας.

Φυτικά υλικά και εκχύλιση

Δεκατρία είδη φύλλων της Ταϊλάνδης συλλέχθηκαν από τον HRH Princess Sirindhorn Herb Garden, στην επαρχία Rayong, Ταϊλάνδη. Τα Mangosteens ελήφθησαν από την επαρχία Chanthaburi της Ταϊλάνδης. Αυτά τα φυτά πιστοποιήθηκαν και κατατέθηκαν στο Herbarium, Departmentof Botany, Faculty of Science, Chulalongkorn University, Ταϊλάνδη. Τα επιστημονικά ονόματα, οι αριθμοί κουπονιών και τα μέρη φυτών φαίνονται στον Πίνακα 1. Τα φυτά εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας τη συσκευή Soxhlet. Εν συντομία, 10 g του ξηρού φυτού εκχυλίστηκαν χωριστά με πετρελαϊκό αιθέρα, διχλωρομεθάνιο και αιθανόλη. Οι διαλύτες απομακρύνθηκαν χρησιμοποιώντας περιστροφικό εξατμιστήρα κενού υπό μειωμένη πίεση χρησιμοποιώντας τον συμπυκνωτή MiVac Quattro. Τα συμπυκνωμένα δείγματα διαλύθηκαν σε DMSO στα 100 mg/ml και αποθηκεύτηκαν σε -20 βαθμό μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Οι αποδόσεις ξηρών εκχυλισμάτων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1 ως ποσοστό w/w ξηρών φυτικών υλικών.

Προσδιορισμός ολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά

Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά φυτικά εκχυλίσματα αξιολογήθηκε με τη μέθοδο Folin-Ciocalteu [7]. Εν συντομία, 5 0 ul εκχυλισμάτων σε 1 mg/ml σε απεσταγμένο νερό αναμίχθηκαν με 50 μΙ 10 τοις εκατό αντιδραστηρίου Folin-Ciocalteu και 50 μΙ 0,1 Μ Na2CO3. Το μίγμα της αντίδρασης επωάστηκε για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι. Η απορρόφηση στα 750 nm μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (Biotek, Η.Π.Α.). Ως πρότυπο χρησιμοποιήθηκε γαλικό οξύ από 1,56 έως 100 μg/ml. Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά εκχυλίσματα εκφράζεται σε mg ισοδύναμα γαλλικού οξέος (GAE) ανά g υλικού ξηρού φυτού. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν.

Προσδιορισμός περιεκτικότητας σε φλαβονοειδή

ΣύνολοφλαβονοειδέςΤο περιεχόμενο (TFC) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας χρωματομετρικό προσδιορισμό χλωριούχου αργιλίου (AlCl3) [7]. Εν συντομία, 50 μΙ των εκχυλισμάτων σε 1 mg/ml σε 80 τοις εκατό αιθανόλη αναμίχθηκαν με 50 μΙ διαλύματος AlCl3 2 τοις εκατό στο φρεάτιο μιας πλάκας τοιχώματος 96. Η πλάκα επωάστηκε για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Η απορρόφηση στα 435 nm μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Κερσετίνη από 1,56 έως 100 ug/ml χρησιμεύει ως πρότυπο. Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή εκφράζεται ως mg ισοδύναμα κερσετίνης (QE) ανά g ξηρού φυτού. Τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν.

Δραστηριότητα σάρωσης DPPH

Η δοκιμασία δραστικότητας σάρωσης DPPH πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται από τους Yamasaki et al. [8]. Το διάλυμα DPPH παρασκευάστηκε πρόσφατα για κάθε δοκιμασία. Εν συντομία, 100 ug/ml εκχυλίσματα ή 1,56 έως 100 ug/ml πρότυπο ασκορβικού οξέος σε απόλυτη μεθανόλη αναμίχθηκαν με 180 ul αντιδραστηρίου DPPH σε πλάκα 96 φρεατίων. Το μίγμα της αντίδρασης επωάστηκε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι. Στη συνέχεια, η απορρόφηση στα 517 nm μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Η απορρόφηση στα 517 nm DPPH ήταν 0,70 ± 0,02 και η μειωμένη απορρόφηση μέτρησε τη δραστηριότητα σάρωσης. Η ικανότητα σάρωσης υπολογίστηκε ως δραστηριότητα σάρωσης ( ποσοστό )=100 τοις εκατό × [(훥A517 του ελέγχου - 훥A517 του δείγματος)/ 훥A517 του ελέγχου]. Τα ποσοστά της δραστικότητας σάρωσης DPPH των εκχυλισμάτων συγκρίθηκαν με εκείνα του ασκορβικού οξέος και εκφράζονται ως mg-βιταμίνη C ισοδύναμοαντιοξειδωτικόχωρητικότητα (VCEAC) ανά ξηρό φυτικό υλικό. Το IC50 προσδιορίστηκε από ένα γράφημα ποσοστιαίας αναστολής έναντι της συγκέντρωσης (από 0,78-100 ug/ml κάθε εκχυλίσματος).

Δραστηριότητα καθαρισμού ABTS

Η δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Το αντιδραστήριο εργασίας ABTS• plus παρασκευάστηκε με ανάμειξη 7 mM ABTS• και 2,45 mM υπερθειικού καλίου σε αναλογία όγκου/όγκου 8:12. Το διάλυμα εργασίας διατηρήθηκε για 16 έως 18 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι. Το διάλυμα ABTS• plus αραιώθηκε με απόλυτη αιθανόλη για να δώσει απορρόφηση στα 734 nm 0,70 ± 0,02. Στη συνέχεια, 100 ug/ml εκχυλίσματα ή 1,56 έως 100 ug/ml πρότυπο ασκορβικού οξέος σε απόλυτη αιθανόλη προστέθηκαν σε 180 ul ABTS• συν αντιδραστήριο εργασίας στα φρεάτια μιας πλάκας 96 φρεατίων. Η πλάκα επωάστηκε για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 734 nm. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Η ικανότητα σάρωσης υπολογίστηκε ως δραστηριότητα σάρωσης ( ποσοστό )=100 × [(훥A734 του ελέγχου - 훥A734 του δείγματος)/ 훥A734 του ελέγχου]. Τα ποσοστά της δράσης δέσμευσης ABTS των εκχυλισμάτων συγκρίθηκαν με αυτά του ασκορβικού οξέος και παρουσιάζονται ως ισοδύναμο βιταμίνης Cαντιοξειδωτικόχωρητικότητα (VCEAC) ανά g ξηρού φυτικού υλικού. Η IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα της ποσοστιαίας αναστολής έναντι της συγκέντρωσης (από 15,62-1000 ug/ml κάθε εκχυλίσματος).

Προσδιορισμός της αναστολής της τυροσινάσης μανιταριών

Η μέθοδος dopachrome πραγματοποιήθηκε με ελαφρά τροποποίηση [10]. Εν συντομία, 20 μΙ φυτικών εκχυλισμάτων ή DMSO (ως έλεγχος), 20 μΙ 203,3 μονάδες/ml τυροσινάσης μανιταριού και 140 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών 20 mM σε ρΗ 6,8 προεπωάστηκαν για 10 λεπτά στους 25 βαθμούς. Μετά την προ-επώαση, προστέθηκαν 20 μΙ L-DOPA 2,5 mM και τα δείγματα στη συνέχεια επωάστηκαν για επιπλέον 20 λεπτά στους 25 βαθμούς. Η ποσότητα ντοπαχρωμίου μετρήθηκε στα 492 nm με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Το Kojic acid (KA) χρησίμευσε ως θετικός έλεγχος για αναστολή. Η εκατοστιαία αναστολή της δραστικότητας της τυροσινάσης (%) ήταν εκφραστική επί τοις εκατότυροσινάσηαναστολή {{0}} × [(훥A492 του ελέγχου –훥A492 του δείγματος)/ 훥A492 του ελέγχου]. Οι τελικές συγκεντρώσεις των εκχυλισμάτων και του κοζικού οξέος ήταν 1 και 0,1 mg/ml, αντίστοιχα. Το IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα του ποσοστούτυροσινάσηαναστολή της συγκέντρωσης (από 15,62–1000 ug/ml κάθε εκχυλίσματος).

cistanche bodybuilding

Προσδιορισμός της αναστολής της κολλαγενάσης

Η αναστολή της κολλαγενάσης προσδιορίστηκε με μια μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Εν συντομία, 40 ul κολλαγενάσης από το Clostridium histolyticum σε 0.25 μονάδες/ml σε ρυθμιστικό διάλυμα Tricine 50 mM που περιέχει 10 mM CaCl2 και 400 mM NaCl, και 10 ul ρυθμιστικού διαλύματος Tricine 50 mM, αναμίχθηκαν με 1 των εκχυλισμάτων ή DMSO (ως έλεγχος). Ως θετικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε η γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG). Μετά από 15-λεπτή επώαση σε θερμοκρασία δωματίου, προστέθηκαν 50 μΙ Ν-[3-(2-φουρυλ)ακρυλοϋλ]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 340 nm αμέσως και συνεχώς για 20 λεπτά. Η ενζυμική δραστηριότητα αξιολογήθηκε με μειωμένη απορρόφηση κατά τη διάρκεια του χρονικού διαστήματος. Το ποσοστό αναστολής της δραστηριότητας της κολλαγενάσης υπολογίστηκε ως 100 × [(Δραστηριότητα ελέγχου – Δραστηριότητα δείγματος)/ Δραστηριότητα ελέγχου]. Οι τελικές συγκεντρώσεις των εκχυλισμάτων και της γαλλικής επιγαλλοκατεχίνης ήταν 1 και 0,1 mg/ml, αντίστοιχα. Η IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα της ποσοστιαίας αναστολής της κολλαγενάσης έναντι της συγκέντρωσης (από 15,62-1000 ug/ml κάθε εκχυλίσματος).

Στατιστικές αναλύσεις

Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα. Ο συντελεστής συσχέτισης (R2) μεταξύαντιοξειδωτικόΤο περιεχόμενο και η αντιοξειδωτική δράση προσδιορίστηκαν με χρήση λογισμικού SigmaPlotversion 12.2. Η διαφορά μεταξύ των δύο μέσων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το Student's t-test. Οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές όταν η τιμή P ήταν μικρότερη από 0.05.

Αποτελέσματα

Αποδόσεις εξόρυξης

Ο Πίνακας 1 δείχνει τα επιστημονικά ονόματα, τους αριθμούς κουπονιών και τα μέρη φυτών των 14 φυτών της Ταϊλάνδης που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτήν τη μελέτη. Οι ποσοστιαίες αποδόσεις των εκχυλισμάτων κυμαίνονταν από 0,73 τοις εκατό έως 31,11 τοις εκατό κατά βάρος (Πίνακας 1). Ardisia elliptica Thunb. είχε την υψηλότερη απόδοση στα εκχυλίσματα πετρελαϊκού αιθέρα (19,89%) και αιθανόλης (31,11%), ενώ το Garcinia mangostanaL. είχε την υψηλότερη επί τοις εκατό απόδοση από εκχύλιση διχλωρομεθανίου (11,07 τοις εκατό).

Φαινολική περιεκτικότητα 14 φυτών της Ταϊλάνδης

Επομένως, η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά φυτά προσδιορίστηκε με τη μέθοδο Folin-Ciocalteu. Τα εκχυλίσματα είχαν μεγάλο εύρος στον αριθμό των φαινολών όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, και οι τιμές διέφεραν κατά 33-πλάσιο μεταξύ των εκχυλισμάτων. Ardisiaelliptica Thunb. είχε την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φαινόλη και στους τρεις τύπους εκχυλισμάτων, ενώ η χαμηλότερη περιεκτικότητα σε φαινόλη υπήρχε στο Stemona curtissi Hook. φά. πετρελαϊκό αιθερικό εκχύλισμα.

Περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή 14 φυτών της Ταϊλάνδης

Παρόμοια με τις φαινόλες, ολφλαβονοειδέςΗ περιεκτικότητα ποικίλλει σημαντικά μεταξύ των φυτικών ειδών, κυμαινόμενη από 2.04 ± 0,16 έως 31,38 ± 0,81 mg QE ανά g ξηρού υλικού (Πίνακας 2). Γενικά, η εκχύλιση με διχλωρομεθάνιο απέδωσε τα υψηλότεραφλαβονοειδέςεπίπεδο σε σύγκριση με τους άλλους διαλύτες. Από όλα τα εκχυλίσματα, η υψηλότερη ποσότητα φλαβονοειδών βρέθηκε στο εκχύλισμα αιθανόλης από φύλλα Senna alata (L.) Roxb (31,38 ± 0,81 mg QE perg ξηρού υλικού). Από την άλλη πλευρά, Ardisia elliptica Thunb. (23,14 ± 1,10 mg QE ανά g ξηρού υλικού). είχε την πλουσιότερη περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο κλάσμα διχλωρομεθανίου. Επιπλέον, το Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. είχε την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή μεταξύ των εκχυλισμάτων πετρελαϊκού αιθέρα (27,48 ± 2,59 mg QE ανά g ξηρού υλικού). Το χαμηλότερο ανιχνεύσιμο επίπεδο φλαβονοειδών ήταν στο εκχύλισμα αιθανόλης από το Daturametel L. Σε πλήρη αντίθεση,φλαβονοειδήδεν βρέθηκαν στα εκχυλίσματα πετρελαϊκού αιθέρα και διχλωρομεθανίου από το Stemona curtisii Hook.f. και στα εκχυλίσματα πετρελαϊκού αιθέρα από το Streblus asper Lour. και Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή δεν συσχετίστηκε με τη συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά (R2=0.0284, Εικ. 1a).

Δραστηριότητα καθαρισμού ριζών DPPH σε διαφορετικά εκχυλίσματα από 14 φυτά της Ταϊλάνδης

Η δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών χρησιμοποιώντας το DPPH ως δείκτη είναι βασικήαντιοξειδωτικόδοκιμασία [12]. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, οι δραστηριότητες σάρωσης των εκχυλισμάτων διέφεραν πολύ, κυμαινόμενες από 7,11 ± 0,59 τοις εκατό έως 96,17 ± 0,05 τοις εκατό. Το εκχύλισμα αιθανόλης Ardisia ellipticaThunb είχε την υψηλότερη ενεργότητα καθαρισμού σε ποσοστό 96%. Επιπλέον, ο επόμενος ισχυρότεροςαντιοξειδωτικό activities (>90 τοις εκατό) παρατηρήθηκαν σε κλάσματα αιθανόλης από Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus(L.) Skeels. και Garcinia mangostana Linn. Όσον αφορά τους άλλους διαλύτες, το Ardisia elliptica Thunb είχε επίσης την πλουσιότερη εκκαθαριστική δράση μεταξύ των κλασμάτων πετρελαϊκού αιθέρα και το Garcinia mangostana L. είχε την υψηλότερη αντιοξειδωτική δράση στα κλάσματα διχλωρομεθανίου. Η χαμηλότερη ικανότητα απομάκρυνσης ανιχνεύθηκε στο Croton sublyratus Kurz στο κλάσμα πετρελαϊκού αιθέρα. Δεν ανιχνεύθηκε καμία δραστηριότητα καθαρισμού σε 7 εκχυλίσματα πετρελαϊκού αιθέρα και 2 εκχυλίσματα διχλωρομεθανίου.

Δραστηριότητα καθαρισμού ριζών ABTS σε διαφορετικά εκχυλίσματα από 14 φυτά της Ταϊλάνδης

ΑντιοξειδωτικόΗ δραστηριότητα των υδατικών και λιπιδικών φάσεων στα φυτά έχει επίσης αξιολογηθεί με έναν προσδιορισμό αποχρωματισμού ABTS [13]. Και πάλι, το ασκορβικό οξύ χρησίμευε ως το πρότυποαντιοξειδωτικό. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90 τοις εκατό, και η δραστικότητα σαρωτής ανιχνεύθηκε σε όλα τα εκχυλίσματα διχλωρομεθανίου και τα πετρελαϊκά αιθερικά εκχυλίσματα από Annona squamosa L. και Ipomoea pes-caprae(L.) R.br. η οποία δεν ανιχνεύθηκε με τη δοκιμασία DPPH.

Αναστολή δραστηριότητας τυροσινάσης από φυτικά εκχυλίσματα

Η ικανότητα των ενώσεων από τα φυτά της Ταϊλάνδης να αναστέλλουν τα μανιτάριατυροσινάσηΗ δραστικότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια invitro δοκιμασία με L-DOPA ως υπόστρωμα. Το Kojic acid χρησίμευε ως γνωστός αναστολέας και προκάλεσε μέγιστη αναστολή με ενζυματική στάθμη 93,38±1,63 τοις εκατό. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 5, μόνο τα εκχυλίσματα αιθανόλης ανέστειλαν σημαντικά τη δραστηριότητα της τυροσινάσης, με το Ardisia elliptica Thunb. τα παρασκευάσματα αποτελούν εξαίρεση. Τα κλάσματα πετρελαϊκού αιθέρα και διχλωρομεθανίου του Ardisia elliptica Thunb. ανέστειλε τη δραστηριότητα της τυροσινάσης κατά περίπου 20 τοις εκατό. Το κλάσμα αιθανόλης από Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (τιμή IC50 271,50 ug/ml) ήταν ο πιο ισχυρός αναστολέας τυροσινάσης, ακολουθούμενο από τα εκχυλίσματα αιθανόλης από Ardisia ellipticaThunb. και Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Άλλα κλάσματα αιθανόλης μείωσαν σημαντικά την ενζυματική δραστηριότητα κατά περισσότερο από 20 τοις εκατό (Πίνακας 5), ενώ τα υπόλοιπα εκχυλίσματα δεν είχαν ανιχνεύσιμη ανασταλτική δράση (τα δεδομένα δεν φαίνονται).

Αναστολή δραστηριότητας κολλαγενάσης από 14 φυτά

Τα εκχυλίσματα δοκιμάστηκαν για δράση κατά της κολλαγενάσης χρησιμοποιώντας κολλαγενάση Clostridium histolyticum και το N-[3-(2-φουρυλ)ακρυλοϋλ]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) ως υπόστρωμα. Η γαλλική επιγαλλατεχίνη είναι γνωστός αναστολέας κολλαγενάσης και μειωμένη ενζυματική δραστηριότητα κατά 90,51 ± 2,79 τοις εκατό. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 5, μόνο 4 εκχυλίσματα αιθανόλης περιείχαν ανιχνεύσιμη ανασταλτική δράση κολλαγενάσης. Από αυτά που προκαλούν αναστολή, το Ardisia elliptica Thunb. (τιμή IC50 157,78 ug/ml) εμφάνισε το υψηλότερο επίπεδο αναστολής της κολλαγονάσης, ακολουθούμενο από το Annona squamosa L. (τιμή IC50 426,67 ug/ml), το Senna alata (L.) Roxb. και το Croton sublyratusKurz στην κατάταξη Σειρά. Άλλα φυτικά εκχυλίσματα δεν ανέστειλαν σημαντικά τη δράση της κολλαγενάσης υπό τις συνθήκες αντίδρασης που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

Η ηλιακή ακτινοβολία είναι ένας σημαντικός περιβαλλοντικός παράγοντας στην καταστροφή του δέρματος και μπορεί να προκαλέσει καρκίνο του δέρματος [14]. Η υπεριώδης ακτινοβολία προκαλεί προφλεγμονώδη απόκριση, αποικοδόμηση της εξωκυτταρικής μήτρας καιαντιοξειδωτικόεξάντληση [15, 16]. Η υπεριώδης ακτινοβολία προκαλεί το σχηματισμό αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS) που επάγουν υπερμελάγχρωση και έκφραση κολλαγενάσης [17, 18]. Η μελέτη μας διερεύνησε 14 φυτά της Ταϊλάνδης που εκχυλίστηκαν με τρεις διαφορετικούς διαλύτες για τις δυνατότητές τους ως συστατικά κατά των ρυτίδων και λεύκανσης του δέρματος. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε πετρελαϊκό αιθέρα, διχλωρομεθάνιο και αιθανόλη για εκχύλιση φυτών χρησιμοποιώντας τη συσκευή Soxhlet. Ardisia elliptica Thunb. είχε την υψηλότερη απόδοση στα εκχυλίσματα πετρελαϊκού αιθέρα και αιθανόλης, ενώ το Garcinia mangostana L. είχε την υψηλότερη ποσοστιαία απόδοση από εκχύλιση διχλωρομεθανίου. Αυτοί οι διαλύτες είναι μια σειρά οργανικών διαλυτών με αυξανόμενες πολικότητες. Η διακύμανση μεταξύ των ποσοστών αποδόσεων εξαρτιόταν από το είδος του φυτού και πιθανώς αντανακλούσε διαφορές στη χημική σύνθεση των φυτών.

Τα φαινολικά είναι η μεγαλύτερη ομάδα φυτοχημικών που βρίσκεται στα φυτά και έχουν διάφορες βιολογικές δραστηριότητες στα ζώα, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων [19]. Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά φυτά προσδιορίστηκε με τη μέθοδο Folin Ciocalteu. Συνολικά, το κλάσμα αιθανόλης είχε την πλουσιότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά, ακολουθούμενο από διχλωρομεθάνιο, ενώ ο πετρελαϊκός αιθέρας με χαμηλή πολικότητα είχε τη χαμηλότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά σε σύγκριση με τους άλλους διαλύτες. Σε αυτή τη μελέτη, η Ardisia elliptica Thunb. είχε την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά και στους τρεις τύπους εκχυλισμάτων. Σε προηγούμενες μελέτες, τα εκχυλίσματα φύλλων διχλωρομεθανίου του Ardisia elliptica Thunb έχουν φαινολική περιεκτικότητα 101 ± 1,3 mg GAE ανά g ξηρού φυτού, που είναι μεγαλύτερη από την περιεκτικότητα σε εκχύλισμα κλαδιών [20]. Επιπλέον, ένα μεθανολικό εκχύλισμα ώριμου φρούτου Ardisia περιείχε 5,64 ± 0,37 g GAE ανά 100 g εκχυλίσματος [21]. Ως εκ τούτου, τα φύλλα και οι καρποί της Ardisia ellipticaThunb. έχουν υψηλή περιεκτικότητα σε φαινολικά που μπορεί εύκολα να εκχυλιστεί με μεθανόλη, διχλωρομεθάνιο και αιθανόλη.

Φλαβονοειδήείναι χρωστικές στα άνθη, τα φύλλα, τους καρπούς και τους σπόρους. Αυτές οι ενώσεις είναι δευτερογενείς μεταβολίτες των φυτών και είναι ευρέως κατανεμημένες μεταξύ των φυτικών ειδών [22]. Στη συνέχεια, η περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στα φυτά της Ταϊλάνδης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη χρωματομετρική ανάλυση χλωριούχου αργιλίου. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η υψηλότερη ποσότητα φλαβονοειδών βρέθηκε στο εκχύλισμα αιθανόλης από το Senna alata (L.) Roxbleaves. Σε μια προηγούμενη μελέτη, βρέθηκε υψηλή περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο νερό (4,25 mg QE ανά 100 g) και σε κλάσματα μεθανόλης (3,97 mg QE ανά 100 g) του Senna alata (L.) Roxb.[23]. Έτσι, τα παρασκευάσματα Senna alata (L.) Roxb έχουν υψηλή περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή όταν εκχυλίζονται με διαλύτες υψηλής πολικότητας, όπως αιθανόλη, μεθανόλη και νερό. Ardisiaelliptica Thunb. είχε την πλουσιότερη περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή στο κλάσμα διχλωρομεθανίου. Ο καρπός αυτού του φυτού έχει επίσης υψηλή περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή 36,91 ± 2,37 mg QE ανά g εκχυλίσματος [24]. Ως εκ τούτου, ο καρπός και τα φύλλα του Ardisia elliptica Thunb. είναι πλούσια σε φλαβονοειδή. Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή δεν συσχετίστηκε με τη συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά. Ωστόσο,φλαβονοειδήέχουν πολλές βιολογικές δραστηριότητες όπως προστασία από την υπεριώδη ακτινοβολία [25], αντιφλεγμονώδη [26], αντιηπατοτοξικότητα [27] και αντικαρκινική [28].

Δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών με χρήση DPPH και ABTSassay. Στον προσδιορισμό DPPH, το DPPH λαμβάνει ένα υδρογονάτομο από ένααντιοξειδωτικό[29]. Βρήκαμε ότι το αιθανολικό εκχύλισμα Ardisiaelliptica Thunb είχε την υψηλότερη σαρωτική δράση. Άλλοι ερευνητές ανέφεραν επίσης κλάσματα διχλωρομεθανίου του Ardisia elliptica Thunb. Τα φύλλα και οι μίσχοι έχουν υψηλά επίπεδααντιοξειδωτικόδραστηριότητα όπως προσδιορίζεται από τον προσδιορισμό DPPH και, ως εκ τούτου, αυτό το φυτό είναι πολύ ενδιαφέρον να διερευνηθεί περαιτέρω ως θεραπεία με βότανα [20]. Τα εκχυλίσματα από το κλάσμα αιθανόλης με υψηλή πολικότητα έδειξαν σαφώς καλύτερααντιοξειδωτικόδραστηριότητα από τα κλάσματα με χαμηλότερες πολικότητες που περιέχουν διχλωρομεθάνιο και πετρελαϊκό αιθέρα. Τα αιθανολικά εκχυλίσματα περιείχαν τα υψηλότερα επίπεδα δράσης δέσμευσης ελεύθερων ριζών σε σύγκριση με τα άλλα εκχυλίσματα και όλα τα εκχυλίσματα αιθανόλης ήταν ενεργά. Στον προσδιορισμό ABTS, το ABTS μετατρέπεται στη ριζοσπαστικοποίηση του με την προσθήκη υπερθειικού καλίου. Με την παρουσία ενός αντιοξειδωτικού, το αντιδραστικό κατιόν ABTS (ή ABTS• plus ) μετατρέπεται στην άχρωμη φυσική του μορφή [9]. Σε συμφωνία με τον προσδιορισμό DPPH, τα αιθανολικά εκχυλίσματα περιείχαν τα υψηλότερα επίπεδα δραστικότητας καθαρισμού σε σύγκριση με τα άλλα εκχυλίσματα. Και πάλι, οι υψηλότερες δραστηριότητες σάρωσης εκχυλίσματα αιθανόλης, διχλωρομεθανίου και πετρελαϊκού αιθέρα ήταν από τα ίδια φυτά όπως φαίνεται από τον προσδιορισμό DPPH. Τα αποτελέσματα των αναλύσεων DPPH και ABTS συσχετίστηκαν σε μεγάλο βαθμό όπως αναμενόταν (Σχήμα 1f).

Ωστόσο, το σύνολοφλαβονοειδέςΗ περιεκτικότητα των φυτικών εκχυλισμάτων δεν συσχετίστηκε με τη δραστικότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών όπως ανιχνεύθηκε από τον προσδιορισμό DPPH (Εικ. 1c) ή από τον προσδιορισμό ABTS (Εικ. 1e). Τα ευρήματά μας δεν δείχνουν καμία σημαντική σχέση μεταξύ τουςφλαβονοειδέςτο περιεχόμενο και η δραστηριότητα καθαρισμού με χρήση της ανάλυσης ABTS είναι συνεπή με τα αποτελέσματα άλλων ερευνητών [30]. Αντίθετα, η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά συστατικά του φυτικού παρασκευάσματος συσχετίστηκε θετικά με τη σαρωτική δράση που μετρήθηκε και από τις δύο δοκιμές (Εικ. 1β και δ) ασυμφωνία με μια προηγούμενη μελέτη [31]. Είναι αξιοσημείωτο ότι αυτή η δραστηριότητα δέσμευσης εξαρτιόταν από τη συνολική περιεκτικότητα σε φαινόλη και τους διαλύτες με υψηλές πολικότητες, όπως η αιθανόλη και το διχλωρομεθάνιο. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το φαινολικό περιεχόμενο είναι το κύριο συστατικό μεαντιοξειδωτικόδραστηριότητα στα 14 φυτά της Ταϊλάνδης.

Η μελανίνη, η κύρια χρωστική ουσία του δέρματος και των μαλλιών, συντίθεται από τα μελανοκύτταρα μέσα στα μελανοσώματα. Η υπερπαραγωγή και η συσσώρευση μελανίνης στο δέρμα μπορεί να οδηγήσει σε διαταραχές της επιδερμίδας και αισθητικά προβλήματα. Η υπερμελάγχρωση εμφανίζεται σε περιοχές του δέρματος που εκτίθενται στον ήλιο [32]. Στη μελανογένεση,τυροσινάσηείναι το βασικό ένζυμο στο στάδιο περιορισμού του ρυθμού στο οποίο η L-τυροσίνη υδροξυλιώνεται σε L-DOPA, η οποία οξειδώνεται περαιτέρω σε DOPAquinone. Μετά από αυτό, μετατρέπεται σε DOPAchrome που είναι ένα υπόστρωμα για τη σύνθεση μελανίνης [3]. Υπορρύθμιση τουτυροσινάσηέχει προταθεί ότι είναι υπεύθυνη για τη μειωμένη παραγωγή μελανίνης. Η ανάπτυξη νέων φυτοχημικών ενώσεων λεύκανσης από φυσικά προϊόντα έχει γίνει πρόσφατα μια αυξανόμενη τάση. Το εύρημα μας έδειξε ότι το κλάσμα αιθανόλης από το Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz ήταν ο πιο ισχυρός αναστολέας τυροσινάσης, ακολουθούμενο από τα εκχυλίσματα αιθανόλης από το Ardisia elliptica Thunb. και Phyllanthus acidus (L.) Skeels. Προφανώς, 7 φυτά από 14 φυτά είχαν υψηλή περιεκτικότητα σε φαινολικά, ειδικά το Ardisiaelliptica Thunb. και Annona squamosa L. Επιπλέον, Senna alata (L.) Roxb. είχε τους πλουσιότερουςφλαβονοειδέςπεριεχόμενο που μπορεί να αναστείλει τη δραστηριότητα της τυροσινάσης. Δραστικές ενώσεις από τα φυτά όπως η αρβουτίνη, η αλοεσίνη, το γεντισικό οξύ, τα φλαβονοειδή, η εσπεριδίνη, η γλυκόριζα, η νιασιναμίδη, τα παράγωγα ζύμης και οι πολυφαινόλες, μπορούν να αναστείλουν τη μελανογένεση χωρίς κυτταροτοξικότητα στα μελανοκύτταρα [6].

Η κολλαγενάση είναι μια διαμεμβρανική πεπτιδάση ψευδαργύρου που διασπά τον δεσμό X-Gly του κολλαγόνου. Το κολλαγόνο είναι μια άφθονη δομική πρωτεΐνη και συστατικό εξωκυτταρικής μήτρας [33]. Οι μειωμένες ίνες κολλαγόνου και ελαστίνης αυξάνονται με την ηλικία και οι βλάβες από την υπεριώδη ακτινοβολία προκαλούν ρυτιδωμένο δέρμα[34]. Η αναστολή της κολλαγενάσης έχει προταθεί για την πρόληψη της γήρανσης του δέρματος. Από αυτά που προκαλούν αναστολή στη μελέτη μας, το Ardisiaelliptica Thunb. παρουσίασε το υψηλότερο επίπεδο αναστολής της κολλαγενάσης, ακολουθούμενο από τα Annona squamosa L., Senna alata(L.) Roxb. και Croton sublyratus Kurz κατά σειρά κατάταξης. Σε προηγούμενη μελέτη, το εκχύλισμα λοβού κακάο είχε φαινολικό οξύ καιφλαβονοειδήπου ανέστειλε τη δραστηριότητα ελαστάσης και κολλαγενάσης [35]. Συγκεκριμένα, τρία εκχυλίσματα αιθανόλης (Ardisia elliptica Thunb., Annona squamosa L. και Senna alata (L.) Roxb. ανέστειλαν και τα δύοτυροσινάσηκαι κολλαγενάση. Αυτά τα φυτά είχαν επίσης υψηλά επίπεδα φαινολικών και φλαβονοειδών καιαντιοξειδωτικόΕίναι ενδιαφέρον ότι αυτά τα εκχυλίσματα έχουν πιθανές χρήσεις ως συστατικά για καλλυντικά προϊόντα.

συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα εκχυλίσματα 14 φυτών της Ταϊλάνδης είχαν διάφορους βαθμούς ολικής φαινολικής καιφλαβονοειδέςπεριεχόμενο καθώς και δραστηριότητες δέσμευσης ελεύθερων ριζών, ανάλογα με τους διαλύτες εκχύλισης. Υπήρξε υψηλή συσχέτιση μεταξύ της συνολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά και της δραστηριότητας δέσμευσης ελεύθερων ριζών που αξιολογήθηκε με τις αναλύσεις DPPH και ABTS. Το κλάσμα αιθανόλης του Ardisia ellipticaThunb. είχαν την υψηλότερη περιεκτικότητα σε φαινολικά, ακολουθούμενη από το Annona squamosa L. Και τα δύο φυτά ανέστειλαν σημαντικά τις δραστηριότητες τυροσινάσης και κολλαγενάσης, ενώ το Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz έδειξε την υψηλότερη αναστολή τυροσινάσης. Επιπλέον, ο Senna alata (L.) Roxb. ήταν πλουσιότερο σε περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή, και επίσης εκτέθηκετυροσινάσηκαι ανασταλτική συμπεριφορά της κολλαγενάσης. Το κλάσμα αιθανόλης τριών φυτών, δηλαδή τα Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb και Senna alata (L.) Roxb., έχουν τη δυνατότητα να αποτελούν συστατικά σε καλλυντικά προϊόντα για αντιρυτιδικά καθώς και λεύκανση δέρματος. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για τη διερεύνηση των δραστικών συστατικών και της ασφάλειας αυτών των εκχυλισμάτων.

cistanche bodybuilding

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Moehrle M. Υπαίθρια αθλήματα και καρκίνος του δέρματος. Clin Dermatol. 2008; 26 (1): 12–5.

2. Lopez-Camarillo C, Ocampo EA, Casamichana ML, Perez-Plasencia C, Alvarez-Sanchez E, Marchat LA. Ενεργοποίηση πρωτεϊνικών κινασών και μεταγραφικών παραγόντων ως απόκριση στην υπεριώδη ακτινοβολία του δέρματος: επιπτώσεις για την καρκινογένεση.Int J Mol Sci. 2012; 13 (1): 142–72.

3. Iwata M, Corn T, Iwata S, Everett ΜΑ, Fuller BB. Η σχέση μεταξύ της δραστηριότητας της τυροσινάσης και του χρώματος του δέρματος στις ανθρώπινες ακροποσθίες. J Investig Dermatol.1990;95(1):9–15.

4. Πρύμνη RS. Θεραπεία της Φωτογήρανσης. N Engl J Med. 2004;350(15):1526–34.

5. Levin CY, Maibach H. Exogenous ochronosis. Μια ενημέρωση για τα κλινικά χαρακτηριστικά, τους αιτιολογικούς παράγοντες και τις θεραπευτικές επιλογές. Am J Clin Dermatol. 2001;2(4):213–7.

6. Zhu W, Gao J. Η χρήση βοτανικών εκχυλισμάτων ως τοπικών παραγόντων λεύκανσης του δέρματος για τη βελτίωση των διαταραχών μελάγχρωσης του δέρματος. J Investig DermatolSymp Proc. 2008; 13 (1): 20–4.

7. Zongo C, Savadogo A, Ouattara L, Bassole IHN, Ouattara CAT, Ouattara AS,Barro N, Koudou J, TraoreI AS. Περιεκτικότητα σε πολυφαινόλες, αντιοξειδωτική και αντιμικροβιακή δράση του Ampelocissus grantii (αρτοποιός) Planch. (Vitaceae): φαρμακευτικό φυτό από την Μπουρκίνα Φάσο. Int J Pharmacol. 2010;6(880–887)

8. Yamasaki K, Hashimoto A, Kokusenya Y, Miyamoto T, Sato T. Ηλεκτροχημική μέθοδος για την εκτίμηση των αντιοξειδωτικών επιδράσεων των μεθανολικών εκχυλισμάτων ακατέργαστων φαρμάκων. Chem Pharm Bull (Τόκιο). 1994;42(8):1663–5.

9. Re R, Pellegrini Ν, Proteggente Α, Pannala Α, Yang Μ, Rice-Evans C. Αντιοξειδωτική δραστικότητα με εφαρμογή βελτιωμένης ανάλυσης κατιόντος αποχρωματισμού ριζών ABTS. Free Radic Biol Med. 1999;26(9–10):1231–7.

10. Nithitanakool S, Pithayanukul P, Bavovada R, Saparpakorn P. Μελέτες Moleculardocking and anti-tyrosinase activity of Thai mango seed kernelextract. Μόρια. 2009; 14 (1): 257–65.

11. Bonvicini F, Antognoni F, Iannello C, Maxia A, Poli F, Gentilomi GA. Σχετική και εκλεκτική δράση του Pancratium Illyricum L. έναντι των κλινικών απομονώσεων Candida Albicans: μια συνδυασμένη επίδραση στην ανάπτυξη και τη λοιμογόνο δράση της ζύμης. BMCComplement Altern Med. 2014; 14 (1): 409.

12. Sharma OP, Bhat TK. Επανεξετάστηκε η αντιοξειδωτική δοκιμασία DPPH. Food Chem. 2009; 113 (4): 1202–5.

13. MacDonald-Wicks LK, Wood LG, Garg ML. Μεθοδολογία για τον προσδιορισμό της βιολογικής αντιοξειδωτικής ικανότητας in vitro: μια ανασκόπηση. J Sci Food Agric. 2006;86(13):2046–56.

14. Armstrong BK, Kricker A. Η επιδημιολογία του καρκίνου του δέρματος που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία. JPhotochem Photobiol B Biol. 2001; 63 (1–3): 8–18.

15. Bashir MM, Sharma MR, Werth VP. Η UVB και η προφλεγμονώδης κυτταροκινητικότητα ενεργοποιούν την παραγωγή TNF- στα κερατινοκύτταρα μέσω ενισχυμένης μεταγραφής γονιδίων. J Investig Dermatol. 2009; 129 (4): 994–1001.

16. Watson RE, Gibbs NK, Griffiths CE, Sherratt MJ. Βλάβη στην εξωκυτταρική μήτρα του δέρματος που προκαλείται από την έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία. Σήμα αντιοξειδωτικής οξειδοαναγωγής. 2014; 21 (7): 1063–77.

17. D'Orazio J, Jarrett S, Amaro-Ortiz A, Scott T. UV ακτινοβολία και το δέρμα. Int JMol Sci. 2013; 14 (6): 12222–48.

18. Pittayapruek P, Meephansan J, Prapapan O, Komine M, Ohtsuki M. Role ofmatrix Metalloproteinases in Photoaging and Photocarcinogenesis. Int J MolSci. 2016;17(6):868.

19. Sulaiman CT, Balachandran I. Ολικά φαινολικά και ολικά φλαβονοειδή από επιλεγμένα ινδικά φαρμακευτικά φυτά. Indian J Pharm Sci. 2012; 74 (3): 258–60.

20. Mamat N, Jamal JA, Jantan I, Husain Κ. Δραστηριότητες αναστολής της οξειδάσης ξανθίνης και DPPH ριζικής δέσμευσης ορισμένων ειδών Primulaceae. SainsMalaysiana. 2014;43(12):1827–33.

21. Wetwitayaklung P, Charoenteeraboon J, Limmatvapirat C, Phaechamud T. Αντιοξειδωτικές δραστηριότητες ορισμένων ταϊλανδικών και εξωτικών φρούτων που καλλιεργούνται στην Ταϊλάνδη. Res J Pharm, Biol Chem Sci. 2012; 3 (1): 12–21.

22. Falcone Ferreyra ML, Rius SP, Casati P. Φλαβονοειδή: βιοσύνθεση, βιολογικές λειτουργίες και βιοτεχνολογικές εφαρμογές. Front Plant Sci. 2012; 3:222.

23. Devendra K, Kiran D, Ritesh V, Satyendra B, Abhishek K. Στην αξιολόγηση των ολικών φαινολικών και φλαβονοειδών σε διαφορετικά φυτά του Chhattisgarh. JPharmacognosy Phytochem. 2013; 2 (4): 116–8.

24. Siti-Azima AM, Northam A, Nurhuda M. Αντιοξειδωτικές δραστηριότητες των SyzygiumCumini και ArdisiaElliptica σε σχέση με τις εκτιμώμενες φαινολικές συνθέσεις και τις χρωματικές τους ιδιότητες. Int J Biosci Biochem Bioinform. 2013; 3(4): 314–7.

25. Solovchenko A, Schmitz-Eiberger M. Significance of skin flavonoids for UV-B προστασία σε φρούτα μήλου. J Exp Bot. 2003;54(389):1977–84.

26. Gonzalez-Gallego J, Sanchez-Campos S, Tunon MJ. Αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες των διαιτητικών φλαβονοειδών. Nutr Hosp. 2007; 22 (3): 287–93.

27. Sudha Α, Sumathi Κ, Manikandaselvi S, Prabhu NM, Srinivasan P. Αντιηπατοτοξική δράση του ακατέργαστου κλάσματος φλαβονοειδών του Lippia Nodiflora L. επαγόμενη από την ονεθανόλη ηπατική βλάβη σε αρουραίους. Asian J Anim Sci. 2013; 7 (1): 1–13.

28. Sak K. Κυτταροτοξικότητα διαιτητικών φλαβονοειδών σε διαφορετικούς τύπους ανθρώπινου καρκίνου. Pharmacogn Rev. 2014;8(16):122–46.

29. Kedare SB, Singh RP. Γένεση και ανάπτυξη της μεθόδου αντιοξειδωτικής ανάλυσης DPPH. J Food Sci Technol. 2011;48(4):412–22.

30. Boo HO, Kim TS, Koshio K, Shin JH, Chon SU. Επίπεδα ολικών φαινολικών και αντιοξειδωτικές ιδιότητες σε εκχυλίσματα μεθανόλης από διάφορα άγρια ​​φυτά του Βιετνάμ. Korean J Plant Res. 2011; 24 (6): 659–65.

31. Dudonne S, Vitrac X, Coutiere P, Woillez Μ, Merillon JM. Συγκριτική μελέτη αντιοξειδωτικών ιδιοτήτων και ολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά 30 εκχυλίσματα φυτών βιομηχανικού ενδιαφέροντος χρησιμοποιώντας προσδιορισμούς DPPH, ABTS, FRAP, SOD και ORAC. J AgricFood Chem. 2009, 57 (5): 1768–74.

32. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Μελάγχρωση μελανίνης στο δέρμα θηλαστικών και η ορμονική του ρύθμιση. Physiol Rev. 2004;84(4):1155–228.

33. Shoulders MD, Raines RT. Δομή και σταθερότητα του κολλαγόνου. Annu RevBiochem. 2009; 78:929-58.

34. Cua AB, Wilhelm KP, Maibach ΗΙ. Ελαστικές ιδιότητες του ανθρώπινου δέρματος: σχέση με την ηλικία, το φύλο και την ανατομική περιοχή. Arch Dermatol Res. 1990;282(5):283–8.

35. Karim AA, Azlan A, Ismail A, Hashim P, Gani SSA, Zainudin BH, Abdullah NA. Φαινολική σύνθεση, αντιοξειδωτική, αντιρυτιδική και ανασταλτική δράση τυροσινάσης εκχυλίσματος κακάο. BMC Complement Altern Med. 2014; 14 (381): 1–13.