Συνεργιστική επίδραση χρωματισμού κατά του δέρματος των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσίδων και της γλωσσίνης Cistanche

Περίληψη για τη διερεύνηση του συνεργιστικούΕπίδραση του cistancheΗ πλευρά της φαινυλαιόλης (PHGS) και η γλαμπριτίνη (GLA) κατά της χρωματισμού του δέρματος, η αναλογία μάζας των PhGs και Gla διαλογίστηκε από in vitro πειράματα αναστολής τυροσινάσης, 1, {{1} διφαινύλιο {{2} τρινυτροροφαινυδιζίνη (dPPH) 2, 2- diazo-bis (3- αιθυλο-βενζοζόλη -6- σουλφονικό οξύ διαμέτρου κατιέτου (Abts+) πειράματα καθαρισμού και μενάνης που προκαλείται από το UVB. δείκτες.

ΟεμπρηστικόςΤο μοντέλο των κυττάρων HACAT που επάγονται από το λιποπολυσακχαρίτη (LPS) δημιουργήθηκε και η αντιφλεγμονώδης επίδραση του φαρμάκου αξιολογήθηκε με την αναστολή της απελευθέρωσης της ιντερλευκίνης -6 (IL -6) και του παράγοντα νέκρωσης όγκου (TNF-). Το μοντέλο οξειδωτικού στρες των κυττάρων HaCat που επάγεται από την υδροχλωρική αζοδισοβουμιδίνη (ΑΑΑ) καθορίστηκε περαιτέρω και η ενισχυμένη δραστικότητα της δισμουτάσης υπεροξειδίου (SOD) και της καταλάσης (CAT) χρησιμοποιήθηκε ως δείκτες για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής επίδρασης του φαρμάκου. Η βέλτιστη αναλογία μάζας των PHGs και GLA προσδιορίστηκε από τα παραπάνω τρία μοντέλα κυττάρων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι υδατικά διαλύματα PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) και PHGS/GLA (10∶1) παρασκευάστηκαν με δραστικότητα M (PhGS) ∶m (GLA) {11} ∶1, 5∶1, 10∶1. Οι ρυθμοί αναστολής των PHGS/GLA (1∶1),
Τα υδατικά διαλύματα PHGS/GLA (5∶1) και PHGS/GLA (1 0 ∶1) με συγκέντρωση μάζας 0,4 g/L ήταν 94,37%, 92,93%και 88,06%αντίστοιχα. Τα ποσοστά καθαρισμού των ελεύθερων ριζών DPPH ήταν 89,44%, 88,72,%και 88,10%αντίστοιχα.
Τα ποσοστά καθαρισμού των ABTS+ ελεύθερων ριζών ήταν 1 0 0,13%, 100,0,1%και 99,87%αντίστοιχα. Όταν η συγκέντρωση μάζας των PHGS/GLA ήταν 25 ug/ml, τα υδατικά διαλύματα PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) και PHGS/GLA (10∶1) δεν έδειξαν κυτταροτοξικότητα σε κύτταρα B16F10 και HACAT. Η αναστολή της δραστικότητας τυροσινάσης σε υδατικό διάλυμα PHGS/GLA (1 ∶1) ήταν ισχυρότερη (δραστικότητα τυροσινάσης 23,80%) και η περιεκτικότητα σε μελανίνη (30,90%) μειώθηκε σημαντικά. Το υδατικό διάλυμα PHGS/GLA (1∶1) έδειξε την καλύτερη επίδραση αναστολής στην IL -6 και την απελευθέρωση TNF και την ικανότητα ενίσχυσης της δραστηριότητας του SOD και της CAT. Ο συνδυασμός των PHG και του GLA έδειξε καλή συνεργιστική απόδοση, ανώτερη Α προς ένα φάρμακο και υψηλότερο από τα PHGS/ GLA (5∶1) και PHGS/ GLA (10∶1) υδατικό διάλυμα. Ο συνδυασμός των PHG και GLA διαδραμάτισε συνεργιστικό ρόλο στη βελτίωση της χρωματισμού του δέρματος με την αναστολή της παραγωγής μελανίνης και των αντιφλεγμονώδους και αντιοξειδωτικών επιδράσεων.

 

Λέξεις -κλειδιά cistanche φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδες; Glabridin; συνεργιστικές επιδράσεις. anti-skin χρωματισμό. αντι-οξείδωση. αντιφλεγμονώδες. υλικά για ναρκωτικά

 

 

 

Cistanche φαινυλαιόλη πλευρά για λεύκανση

Επικοινωνήστε μαζί μας τώρα

Υποστηρικτική υπηρεσία του WECistanche-ο μεγαλύτερος εξαγωγέας Cistanche στην Κίνα:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις πιθανές εκπτώσεις, μη διστάσετε να επικοινωνήσετε με την ομάδα εξυπηρέτησης πελατών μας. Θα χαρούν να σας βοηθήσουν!

 

Η χρωματισμό του δέρματος είναι μια δερματική νόσο που προκαλείται από παράγοντες όπως τραυματισμός, φλεγμονή του δέρματος και υπεριώδη ακτινοβολία [1-2]. Αυτοί οι παράγοντες μπορεί να οδηγήσουν σε μια μη φυσιολογική αύξηση της μελανίνης, η οποία με τη σειρά της προκαλεί προβλήματα όπως το Chloasma, οι φακίδες και η μετα-φλεγμονώδης υπερχρωματισμός (PIH) [3-4], επηρεάζοντας την ψυχική κατάσταση και την ποιότητα ζωής των ανθρώπων. Επί του παρόντος, η θεραπεία της χρωματισμού του δέρματος επικεντρώνεται κυρίως στην αναστολή της τυροσινάσης, ενός βασικού ενζύμου στο σχηματισμό μελανίνης [5-6].
Η τελευταία έρευνα [7-8] δείχνει ότι η χρωματισμός του δέρματος εξαρτάται από τη στενή σχέση μεταξύ κερατινοκυττάρων και μελανοκυττάρων στην επιδερμίδα. Μόλις οι ελεύθερες ρίζες και οι φλεγμονώδεις παράγοντες που απελευθερώνονται από τα κερατινοκύτταρα έρχονται σε επαφή με μελανοκύτταρα, θα προκαλέσουν αύξηση της δραστικότητας τυροσινάσης, οδηγώντας σε αύξηση της περιεκτικότητας σε μελανίνη. Θα επιταχύνουν επίσης τη μεταφορά μελανίνης και θα προκαλέσουν την κατάθεση μελανίνης στην επιφάνεια του δέρματος. Ως εκ τούτου, η θεραπεία της χρωματισμού του δέρματος απαιτεί μια ποικιλία μέτρων όπως η αναστολή της παραγωγής μελανίνης, της αντιφλεγμονώδους και της αντι-οξείδωσης.

Επί του παρόντος, αν και τα παραδοσιακά παρασκευάσματα φαρμάκων, όπως η υδροκινόνη και η υδροκινόνη, έχουν ορισμένες επιδράσεις στη θεραπεία της χρωματισμού του δέρματος, οι τρόποι δράσης τους είναι σχετικά ενιαίοι και μπορεί να προκαλέσουν ανεπιθύμητες αντιδράσεις [9-10]. Σε σύγκριση, τα φυσικά φάρμακα είναι φυσικά και ήπια σε ισχύ και αναγνωρίζονται ολοένα και περισσότερο από τους καταναλωτές [11-12]. Συγκεκριμένα, ο συνδυασμός πολλαπλών φυτικών εκχυλισμάτων [13-14] μπορεί όχι μόνο να αναστέλλει την παραγωγή μελανίνης, αλλά έχει επίσης πολλαπλά αποτελέσματα όπως αντιφλεγμονώδη και αντιοξειδωτικά αποτελέσματα, παρέχοντας νέες ιδέες και μεθόδους για τη θεραπεία της χρωματισμού του δέρματος.
Το Cistanche Deserticola MA έχει μοναδική φαρμακευτική αξία και είναι γνωστή ως "ερήμου ginseng". Μελέτες έχουν διαπιστώσει ότι το χαρακτηριστικό συστατικό φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδη που περιέχεται στο cistanche έχει καλή αντιοξειδωτική δραστικότητα [15] και αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα [16] και έχει επίσης ένα ορισμένο ανασταλτικό αποτέλεσμα τυροσινάσης [17]. Η γλυκυρρεζίνη είναι ένα συστατικό φλαβονοειδούς στο Glycyrrhiza Glabra L., το οποίο έχει ισχυρό εφέ λεύκανσης και είναι γνωστή ως "λεύκανση χρυσού" [18]. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική θεραπεία της χρωματισμού του δέρματος συνήθως ξεκινά από το FBYSTRENSINGING Η σπλήνα και τα νεφρά, εκκαθαρίζοντας τη θερμότητα και αποτοξίνωση και την αναπλήρωση του QI και του αίματος [19].
Οι φαινυλαιθανολικές γλυκοσίδες της Cistanche deserticola μπορούν να αναπληρώσουν το νεφρό Yang και να ωφελήσουν την ουσία και το αίμα, ενώ η Glycyrrhiza Glabra μπορεί να αναπληρώσει σπλήνα και Qi, να καθαρίσει τη θερμότητα και να αποτοξινώσει. Οι δύο μπορούν να συνεργαστούν για να αντισταθούν στην χρωματισμό. Ο συνδυασμός των γλυκοσίδων των φαινευλαιθανοειδών των cistanche deserticola και της γλαμπριδίνης μπορεί να αντισταθεί σε χρωματισμό του δέρματος από πολλαπλές διαστάσεις και στόχους, να προστατεύει από υπεριώδη ακτίνες σε ολόκληρη τη ζώνη, να αναστέλλουν συνεργιστικά τη δραστηριότητα της τυροσινάσης και να μειώσουν την παραγωγή μελανίνης και να μειώσουν τις ελεύθερες ριζοσπαστικές και τους φουσκωτούς παράγοντες, να μειώσουν την επιδερμίδα και να μειώσουν την παραγωγή μελανίνης και να ρυθμίσουν την παραγωγή και να μεταφέρουν την παραγωγή και να μεταφέρουν την παραγωγή και τη μεταφορά. Ωστόσο, υπάρχουν λίγες αναφορές στη βιβλιογραφία σχετικά με την συνεργιστική αναστολή της χρωματισμού του δέρματος από φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδες της Cistanche deserticola και της γλαμπριτίνης.
Το παρόν έγγραφο σκοπεύει να διερευνήσει εάν υπάρχει μια συνεργιστική επίδραση μεταξύ των πεπερεναιθυανοειδών των Cistanche deserticola (PHGs) και της γλαμπριτίνης (GLA) μέσω in vitro βιοχημικών πειραμάτων και της δημιουργίας 3 κυτταρικών μοντέλων, η ND αποκτούν τη βέλτιστη αναλογία μάζας σύνθεσης για μια συνεργιστική επίδραση. Αναμένεται να παρέχει θεωρητική υποστήριξη και πρακτική καθοδήγηση για την ανάπτυξη φυσικών προϊόντων φροντίδας του δέρματος των φυτών και να βοηθήσει στην προώθηση της βιομηχανίας φροντίδας του δέρματος να αναπτυχθεί σε μια πιο φυσική, υγιή και αποτελεσματική κατεύθυνση.

 

 

Πού: Μια αντίδραση είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος, του διαλύματος L-τυροσίνης, του διαλύματος PBS και της τυροσινάσης. Ένας έλεγχος αντίδρασης είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος, του διαλύματος L-τυροσίνης, του διαλύματος Ν και του PBS. Ένα κενό είναι η απορρόφηση του διαλύματος L-τυροσίνης, του διαλύματος PBS και του διαλύματος τυροσινάσης. Ένας κενός έλεγχος είναι η απορρόφηση των διαλυμάτων L-τυροσίνης και PBS.

'

1.3.2 Προσδιορισμός της ικανότητας καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH

Πρώτον, ζυγίστε με ακρίβεια {{0}}. 0 197 g ({7}}. mmol/l. Στη συνέχεια, τα PHGs και GLA παρασκευάστηκαν σε διάλυμα αιθανόλης PHGS και διάλυμα GLA αιθανόλης με συγκεντρώσεις μάζας 0 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml αντίστοιχα χρησιμοποιώντας 50% αιθανόλη κατ 'όγκο και VC αιθανόλη διάλυμα με τον ίδιο τρόπο. Στη συνέχεια, το διάλυμα αιθανόλης PHGS και το διάλυμα GLA αιθανόλης αναμίχθηκαν ομοιόμορφα σε Μ (διάλυμα PHGS) ∶ M (διάλυμα GLA) {{24} ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 για να ληφθούν 9 είδη phgs/gla solutions ethanol με διαφορετικούς λόγους μάζας, (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Διαλύματα αιθανόλης. Τέλος, προσθέστε 100 μΐ διαφορετικών διαλυμάτων δείγματος και 100 μΐ διάλησης εργασίας DPPH στο 96- καλά πλάκα, ανακατέψτε καλά και κρατήστε μακριά από το φως σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Μετρήστε την απορρόφηση στα 517 nm με δείκτη ενζύμου. Το VC χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος και κάθε πείραμα επαναλήφθηκε 3 φορές. Υπολογίστε το ρυθμό καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH (%) σύμφωνα με τον τύπο (2).
Ο ρυθμός καθαρισμού ελεύθερων ριζών DPPH/%=(1 -𝐴1 -𝐴3𝐴2) × 100 (2) όπου: A1 είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος + διάλυμα εργασίας DPPH. Το A2 είναι η απορρόφηση 50% αιθανόλης ανά όγκο + διάλυμα εργασίας DPPH. Το A3 είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος + 50% αιθανόλης κατ 'όγκο.

1.3.3 Προσδιορισμός της ικανότητας καθαρισμού ABTS+ ελεύθερων ριζών

Πρώτον, ζυγίστε 1 g (1,82 mmol) ABTS και διαλύστε το σε απιονισμένο νερό για να παρασκευαστεί ένα διάλυμα εργασίας ABTS με τελική συγκέντρωση 7,4 mmol/L. Ζυγίστε 0. Ανακατέψτε το διάλυμα εργασίας ABTS και το διάλυμα εργασίας του υπερχειοφόρου καλίου σε ίσους όγκους και αντιδράστε για 12 ώρες στο σκοτάδι για να προετοιμάσετε το διάλυμα εργασίας ABTS+. Στη συνέχεια, σύμφωνα με τη μέθοδο στην ενότητα 1.3.2, προετοιμάστε το διάλυμα αιθανόλης PHGS, διάλυμα αιθανόλης GLA, διάλυμα N και VC αιθανόλης, καθώς και διάλυμα PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) αιθανόλης.
Τέλος, προσθέστε 40 μΐ διαφορετικών διαλυμάτων δείγματος και 160 μΐ διάλυμα ABTS+ εργασίας στο 96- καλά πλάκα, ανακατέψτε καλά, αντιδράστε σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι για 6 λεπτά και μετρήστε την απορρόφηση του διαλύματος στα 734 nm χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη ELISA. Υπολογίστε το ποσοστό καθαρισμού των ABTS+ ελεύθερων ριζών (%) σύμφωνα με τον τύπο (3).

 

Πού: A1 είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος + ABTS + λύση εργασίας. Το A2 είναι η απορρόφηση του απιονισμένου νερού + ABTS + λύση εργασίας. Το Α3 είναι η απορρόφηση του διαλύματος δείγματος + απιονισμένο νερό.

 

1.4 Πείραμα κυττάρων

1.4.1 Κυτταρική καλλιέργεια

Μετά την αναζωογόνηση των κυττάρων B16F10 και HACAT, εμβολιάζονται σε μέσο υψηλής γλυκόζης DMEM (που περιέχει ένα μίγμα 10% εμβρυϊκού ορού και 1% πνικιλλίνη-στρεπεντίνη με μάζα) και καλλιεργείται σε επωαστήρα σε 37 μοίρες, 5% CO2 κλάσμα και 70% για 24 ώρες. Η κατάσταση ανάπτυξης των κυττάρων παρατηρείται κάτω από μικροσκόπιο και το μέσο αντικαθίσταται ή υποκαλλιεργείται ανάλογα με την κατάσταση ανάπτυξης των κυττάρων.

 

1.4.2 Πειραματική ομαδοποίηση

Τα κύτταρα B16F10 και HaCat στη φάση λογαριθμικής ανάπτυξης εμβολιάζονται σε 96- καλά πλάκες με κατάλληλους αριθμούς κυττάρων και καλλιεργούνται για 24 ώρες για να επιτρέψουν στα κύτταρα να προσκολληθούν στον τοίχο. Δείγματα διαλύματα διαφορετικών συγκεντρώσεων μάζας παρασκευάζονται χρησιμοποιώντας μέσο καλλιέργειας DMEM. Η κανονική ομάδα, η ομάδα μοντέλου, η ομάδα χαμηλής δόσης PHGS (125 μ.Γ./ml), ομάδα μέσης δόσεων (250 μ./Ml) ομάδα υψηλής δόσης (25 ug/ml) ομάδα χαμηλής δόσης GLA (6.25 μ. (1∶1) Ομάδα, ομάδα PHGS/GLA (5∶1) και PHGS/GLA (10∶1) Η μέση ομάδα καλλιέργειας δημιουργήθηκε.

Στο μοντέλο χρωματισμού B16F10 που προκαλείται από UVB, τα κύτταρα ομάδας μοντέλων προστέθηκαν με 30 μΐ PBS (pH =7. Η πειραματική ομάδα υποβλήθηκε σε προεπεξεργασία με 100 μΐ διαλύματος δείγματος διαφορετικών συγκεντρώσεων μάζας για 1 ώρα, στη συνέχεια προστέθηκε με 30 μΐ PBS και τοποθετήθηκε 3 cm ακριβώς κάτω από τον ακτινοβολητή UVB για 110 s. Η κανονική ομάδα χρησιμοποίησε πάντα μέσο καλλιέργειας DMEM υψηλής γλυκόζης. Η κενή ομάδα δεν εμβολιάστηκε με κύτταρα, αλλά με ίση ποσότητα μέσου καλλιέργειας.

Στο μοντέλο φλεγμονής κυττάρων HACAT που προκαλείται από LPS, η ομάδα μοντέλου καλλιεργήθηκε με διάλυμα PBS του LPS σε συγκέντρωση 20 ug/ml για 24 ώρες. Η πειραματική ομάδα υποβλήθηκε σε προεπεξεργασία με 100 μΐ διαλύματα δείγματος διαφορετικών συγκεντρώσεων μάζας για 24 ώρες και στη συνέχεια προστέθηκε με διάλυμα LPS 20 ug/mL για 24 ώρες. Η κανονική ομάδα χρησιμοποίησε πάντα μέσο DMEM υψηλής γλυκόζης. Η κενή ομάδα δεν εμβολιάστηκε με κύτταρα, αλλά με ίση ποσότητα μέσου καλλιέργειας.

Στο μοντέλο οξειδωτικού στρες που προκαλείται από AAPH που προκαλείται από AAPH, η ομάδα μοντέλου καλλιεργήθηκε με διάλυμα 100 mL AAPH (2,5 mmol) σε συγκέντρωση 25 mmol/L για 24 ώρες, Η πειραματική ομάδα υποβλήθηκε σε προκατεργασία με 100 μΐ διαλύματα δείγματος διαφορετικών συγκεντρώσεων μάζας για 24 ώρες και στη συνέχεια προστέθηκε με διάλυμα AAPH σε συγκέντρωση 25mmol/L για 24 ώρες. Η κανονική ομάδα χρησιμοποίησε πάντα μέσο DMEM υψηλής γλυκόζης. Η κενή ομάδα δεν εμβολιάστηκε με κύτταρα, αλλά με ίση ποσότητα μέσου καλλιέργειας.

Κάθε ομάδα δημιουργήθηκε με 3 επαναληπτικά πηγάδια και καλλιεργήθηκε σε ένα φυτώριο σε 37 μοίρες, 5% κλάσμα όγκου CO2 και 70% υγρασία.

1.4.3 Δοκιμασία κυτταροτοξικότητας

Η μέθοδος CCK8 χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της κυτταροτοξικότητας. B16F1 0 και τα κύτταρα HaCat στη φάση λογαριθμικής ανάπτυξης υποβλήθηκαν σε πέψη με 0,25% θρυψίνη για 3 λεπτά. Μετά την τερματισμό της πέψης, το μέσο καλλιέργειας εκτοξεύτηκε επανειλημμένα για να κάνει μια κυτταρική εναιώρημα με πυκνότητα 1 × 104 κύτταρα/ml. Τα κύτταρα ενοφθαλμίστηκαν ομοιόμορφα σε πλάκα 96-, 100 μΐ ανά φρεάτιο και PBS προστέθηκε στα πηγάδια γύρω από τα κύτταρα. Αφού προστέθηκαν τα κύτταρα στο τοίχωμα, προστέθηκαν διαφορετικές συγκεντρώσεις μάζας διαλύματος δείγματος, 3 αντιγράφει φρεάτια ανά ομάδα και καλλιεργήθηκαν σε εκκολαπτήριο σε 37 μοίρες, κλάσμα όγκου 5% CO2 και 70% υγρασία για 24, 48 και 72 ώρες και στη συνέχεια απορρίφθηκε το διάλυμα. Όλες οι ομάδες προστέθηκαν με 100 μΐ πλήρους μέσου καλλιέργειας που περιείχε 10% κλάσμα όγκου CCK8 και επωάστηκε για 60 λεπτά. Η απορρόφηση του διαλύματος στα 450 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη ELISA. Η κυτταρική βιωσιμότητα (%) υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο (4).

 

 

Πού: Μια πειραματική ομάδα είναι η απορρόφηση των φρεατίων που περιέχουν κύτταρα και το διάλυμα δείγματος υπό ακτινοβολία UVB. Μια κανονική ομάδα είναι η απορρόφηση των φρεατίων που περιέχουν κύτταρα και διάλυμα δείγματος χωρίς ακτινοβολία UVB. Μια κενή ομάδα είναι η απορρόφηση των φρεατίων που περιέχουν μέσο καλλιέργειας, αλλά όχι κύτταρα.

 

1.4.5 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε μελανίνη

Η περιεκτικότητα σε μελανίνη προσδιορίστηκε με τη μέθοδο λύσης NaOH. Μετά τη θεραπεία των κυττάρων για 72 ώρες σύμφωνα με τη μέθοδο στην ενότητα 1.4.2, το υπερκείμενο απορρίφθηκε και πλύθηκε δύο φορές με PBS και προστέθηκε 100 μΐ υδατικού διαλύματος ΝαΟΗ που περιείχε 10% DMSO κατ 'όγκο (συγκέντρωση 1 mol/L). Αφού τοποθετήθηκε σε φούρνο 90 ​​μοιρών για 1 ώρα, η απορρόφηση του διαλύματος στα 490 nm προσδιορίστηκε με δείκτη ενζύμου. Το πείραμα επαναλήφθηκε 3 φορές. Η περιεκτικότητα σε μελανίνη (%) υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο (5).

 

1.5 Προσδιορισμός του περιεχομένου του φλεγμονωτικού παράγοντα και του δείκτη οξειδωτικού στρες

Μετά τη θεραπεία των κυττάρων για 48 ώρες σύμφωνα με τη μέθοδο στην ενότητα 1.4.2, τα κύτταρα HACAT σε κάθε ομάδα συλλέχθηκαν με ξύστρα κυττάρων, φυγοκεντρήθηκαν και συλλέχθηκε το υπερκείμενο. Το περιεχόμενο του IL -6 και του TNF- προσδιορίστηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ELISA.
Μετά τη θεραπεία των κυττάρων για 48 ώρες σύμφωνα με τη μέθοδο στην ενότητα 1.4.2, τα κύτταρα HACAT σε κάθε ομάδα συλλέχθηκαν με ένα ξύστρα κυττάρων και τα κύτταρα σπάστηκαν με επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη. Τα κύτταρα φυγοκεντρήθηκαν στα 12000 R/min σε 4 μοίρες για 10 λεπτά και το υπερκείμενο συλλέχθηκε. Η δραστηριότητα SOD και η περιεκτικότητα σε γάτα προσδιορίστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ELISA.

1.6 Προσδιορισμός του συνδυασμένου δείκτη
Η μέθοδος συνδυασμένου δείκτη (CI) [20] χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί εάν τα PHG και GLA σε διαφορετικές αναλογίες μάζας είχαν συνεργιστική επίδραση στην αναστολή της δραστικότητας τυροσινάσης και της αντι-οξείδωσης. Ο δείκτης συνδυασμού υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 υποδεικνύει ένα ανταγωνιστικό αποτέλεσμα, το CI =1 υποδεικνύει ένα πρόσθετο αποτέλεσμα και CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 Ανάλυση δεδομένων

Όλα τα δεδομένα εκφράζονται ως "αριθμητική μέση ± τυπική απόκλιση (𝑥̅ ± 𝑠)". Graph Prism 9.5. 0 Το λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση. Η μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση μεταξύ πολλαπλών ομάδων. Π.<0.05 was considered statistically significant.