R. Vesicarius L. Ασκεί νεφροπροστατευτική δράση κατά του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από τη σισπλατίνη
Mar 26, 2022
Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Μδ Μαχμουντούλ Χασάν1, Οι περισσότεροι. Sayla Tasmin2, Ahmed M. El-Shehawi3, Mona M. Elseehy4, γιατρ. Αμπού Ρέζα1και ο Ariful Haque2*
Αφηρημένη
Ιστορικό:Η σισπλατίνη είναι ένα εξαιρετικό αντικαρκινικό φάρμακο, αλλά η χρήση της έχει μειωθεί σημαντικά λόγω της σοβαρής νεφροτοξικότητας. Το R. vicarious L. είναι ένα φυλλώδες λαχανικό που είναι εμφανές με αντι-αγγειογενετικό, αντιφλεγμονώδες, αντι-πολλαπλασιαστικό, ηπατοπροστατευτικό και νεφροπροστατευτικό δυναμικό. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να επιθεωρήσει το εκχύλισμα μεθανόλης (RVE) για πιθανή νεφροπροστατευτική δράση.
Μέθοδοι:Κυρίως, in vitro, η αντιοξειδωτική δράση του RVE επιβεβαιώθηκε με βάση την ικανότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών 2, 2-διφαινυλ-1-πικρυυλυδραζυλ (DPPH). Στη συνέχεια, τα αρσενικά ποντίκια Swiss Albino υποβλήθηκαν σε θεραπεία με σισπλατίνη (2,5 mg/kg) για 5 διαδοχικές ημέρες για να προκληθεί νεφροτοξικότητα. Η ανάρρωση από τη νεφροτοξικότητα εξετάστηκε λεπτομερώς με θεραπεία των ζώων με RVE (25, 50 και 100 mg/kg) ενδοπεριτοναϊκώς (IP) για τις επόμενες 5 διαδοχικές ημέρες. Μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας, ποντίκια θυσιάστηκαν και συλλέχθηκαν τα νεφρά. Μέρος του ομογενοποιήθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου για την αξιολόγηση του επιπέδου μηλονοδιαλδεΰδης (MDA), ένα άλλο μέρος χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της έκφρασης γονιδίου (NQO1, p53 και Bcl-2). Επιπλέον, η ικανότητα εξουδετέρωσης του υπεροξειδίου του υδρογόνου (H2O2) του RVE αξιολογήθηκε σε κύτταρα HK{15}} in vitro. Τέλος, τα βιοενεργά φυτοχημικά στο RVE προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας αέρια χρωματογραφία-φασματοσκοπία μάζας (GC-MS).
Αποτελέσματα:Το RVE έδειξε in vitro αντιοξειδωτική δράση με δοσοεξαρτώμενο τρόπο με τιμή IC50 37,39 ± 1,89 ug/mL.
Η θεραπεία με RVE αξιοσημείωτα (p < {{0}}.05)="" μείωσε="" την="" περιεκτικότητα="" σε="" mda="" στον="" ιστό="" των="" νεφρών.="" επιπλέον,="" η="" έκφραση="" των="" γονιδίων="" nqo,="" p53="" και="" bcl-2="" μετριάστηκε="" σημαντικά="" (p="">< 0,05)="" με="" δοσοεξαρτώμενο="" τρόπο="" λόγω="" της="" χορήγησης="" rve.="" το="" rve="" μείωσε="" σημαντικά="" (p="">< 0,05)="" το="" επίπεδο="" h2o2="" στα="" κύτταρα="" hk-2="" σε="" σχεδόν="" φυσιολογικό.="" από="" το="" gc-ms,="" δέκα="" ενώσεις="" συμπεριλαμβανομένων="" τριών="" γνωστών="" αντιοξειδωτικών="" "4h-pyran-4-one,="" 2,="" 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-"="" ,="" "εξαδεκανοϊκό="" οξύ"="" και="" "σκουαλένιο"="" ανιχνεύθηκαν.="" το="" εκχύλισμα="" ήταν="" πλούσιο="" με="" ένα="" αλκαλοειδές="">
Συμπέρασμα:Συνολικά, το RVE έχει προστατευτική δράση έναντι της νεφρικής βλάβης που προκαλείται από τη σισπλατίνη.
Λέξεις-κλειδιά:Cisplatin, R. vicarious, ποντίκια, νεφρός, κύτταρα HK-2, οξειδωτικό στρες, γονίδιο NQO1
Το Cistanche deserticola αποτρέπει τη νεφρική νόσο, κάντε κλικ εδώ για να λάβετε το δείγμα
Εισαγωγή
Το οξειδωτικό στρες είναι το αποτέλεσμα της δυσαναλογίας μεταξύ του σχηματισμού αντιδραστικών ειδών οξυγόνου (ROS) και των τακτικών αντιοξειδωτικών αμυντικών μηχανισμών [1]. Οι τακτικές βιοχημικές αντιδράσεις, η συχνή έκθεση στο δυσμενές περιβάλλον και η αυξημένη πρόσληψη ξενοβιοτικών έχουν ως αποτέλεσμα την παραγωγή ROS [1]. Τα ROS αλληλεπιδρούν με τα υπολείμματα κυστεΐνης των ευαίσθητων στην οξειδοαναγωγή μορίων σηματοδότησης συμπεριλαμβανομένων των παραγόντων μεταγραφής, των πρωτεϊνικών φωσφατάσες τυροσίνης και των πρωτεϊνικών κινασών. Συνεπώς, η οξείδωση των ομάδων θειόλης σε αυτά τα υπολείμματα οδηγεί σε αλλοιώσεις των στοχευόμενων πρωτεϊνών, βιολογικές δράσεις, ικανότητες σηματοδότησης, ανοσία και συμπληρωματικά παραδείγματα ζωντανών/νεκρών κυττάρων [2]. Τα χημικά είδη που περιέχουν οξυγόνο και έχουν αντιδραστικές ιδιότητες είναι γνωστά ως ROS που περιλαμβάνουν ελεύθερες ρίζες και μη ριζικά μόρια όπως το υπεροξείδιο και το H2O2, αντίστοιχα [3]. Το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από το ROS συνδέεται με την αιτιολογία πολλών ασθενειών συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου. Η οξεία μυελογενής λευχαιμία (AML) είναι μια καρκινική ανάπτυξη αιμοσφαιρίων εντός του μυελού των οστών. Τα κυτταρικά και μοριακά συμβάντα που υποκρύπτουν την AML περιλαμβάνουν βλάβη του DNA, κλωνική διάδοση, αυξημένο κυτταρικό θάνατο και περαιτέρω γενετική αστάθεια, τα οποία είναι το αποτέλεσμα του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από το ROS [4]. Η ανθρώπινη φυσιολογία έχει προικιστεί με πολυάριθμους μηχανισμούς που μπορούν να δημιουργήσουν αντιοξειδωτικά για να ασκήσουν προστασία από το οξειδωτικό στρες που οδηγεί στην προστασία των κυττάρων από τοξικές επιδράσεις και στην πρόληψη ασθενειών [5]. Ωστόσο, τα κύτταρα αναπτύσσουν ενδογενείς μηχανισμούς για την εξουδετέρωση του οξειδωτικού στρες και τη διατήρηση των απαιτούμενων ROS [6].
NAD(P)H: η οξειδορεδουκτάση της κινόνης 1 (NQO1) είναι ένα φλαβοένζυμο [7] που μπορεί να καταλύσει την αναγωγή δύο ή τεσσάρων ηλεκτρονίων και χρησιμοποιεί αυτή την ιδιότητα για την αποτοξίνωση των κινινών [8]. Μπορεί να προστατεύσει τα κύτταρα από την οξειδωτική βλάβη κρατώντας στην άκρη τον κύκλο οξειδοαναγωγής και μειώνοντας την παραγωγή ελεύθερων ριζών [8]. Εκτός από την ξενοβιοτική αποτοξίνωση, το NQO1 εμπλέκεται επίσης στην εξουδετέρωση υπεροξειδίου, στη ρύθμιση της πρωτεασωμικής αποικοδόμησης του p53 [9], στην αναστολή του Bcl{10}} [10] και στην αυξημένη ευαισθησία σε κυτταρικό τραυματισμό [11].
Η σισπλατίνη είναι το πρώτο αντικαρκινικό φάρμακο που έχει εγκριθεί από τον Οργανισμό Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) με βάση την πλατίνα [12]. Η σισπλατίνη ασκεί απόπτωση προκαλώντας οξειδωτικό στρες και υπερέκφραση του ογκοκατασταλτικού γονιδίου p53 [12]. Αρκετές ανεπιθύμητες ενέργειες, συμπεριλαμβανομένης της νεφροτοξικότητας, της ηπατοτοξικότητας, της γαστροτοξικότητας, της ωτοτοξικότητας, της μυελοκαταστολής και της νευροτοξικότητας είναι το αποτέλεσμα του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από τη σισπλατίνη [12]. Αυτές οι παρενέργειες έχουν μειώσει σημαντικά τη χρήση της σισπλατίνης αν και έχει εξαιρετική αντικαρκινική δράση. Η σισπλατίνη είναι γνωστό ότι προκαλεί οξειδωτικό στρες και καταστέλλει το γονίδιο NQO1 στους νεφρούς ποντικών [13]. Ως εκ τούτου, η αναζήτηση και η επικύρωση για αποτελεσματικές φυσικές πηγές αντιοξειδωτικών γίνεται ένας τομέας ευαισθητοποίησης. Η πρόσληψη φυτικών αντιοξειδωτικών όπως τα φλαβονοειδή, τα καροτενοειδή και οι φαινολικές ενώσεις μπορεί να οδηγήσει σε προστασία από καρδιαγγειακές παθήσεις, καταρράκτη και καρκίνο [14].
Το R. vicarious (Polygonaceae) είναι γνωστό ως "Takpalong/ Chukapalong/Amlabetom" στα Μπενγκάλι [15]. Αναπτύσσεται στις ερημικές και ημιερήμους περιοχές της Ασίας, της Αυστραλίας και της Βόρειας Αφρικής [16]. Είναι ένα ελάχιστα μελετημένο φυτό στο Μπαγκλαντές. Στο Μπαγκλαντές, οι άνθρωποι καταναλώνουν ολόκληρο το φυτό ως λαχανικό μετά το μαγείρεμα με αλάτι, διάφορα μπαχαρικά και λάδι. Μερικές φορές, οι άνθρωποι χρησιμοποιούν μόνο τα φρέσκα φύλλα σε ανάμεικτη σαλάτα ως εναλλακτική λύση στο μαρούλι. Το ωμό φύλλο είναι ελαφρώς ξινό, αλλά γίνεται πολύ ξινό μετά το μαγείρεμα. Επιπλέον, λίγος αριθμός φύλλων συνήθως αναμιγνύεται σε πιάτα με ψάρι κατά τη διάρκεια του μαγειρέματος για να έχει μια ήπια όξινη γεύση.
Αυτό το φυτό χρησιμοποιείται ως φυτικό και φαρμακευτικό βότανο παγκοσμίως [17]. Τα φύλλα και οι σπόροι χρησιμοποιούνται ως αντίδοτο για το δηλητήριο του φιδιού και του σκορπιού, αντίστοιχα [17]. Στη λαϊκή θεραπεία, το R. vicarious έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη θεραπεία ηπατικών παθήσεων, κακής πέψης, δυσκοιλιότητας, σωρών, εμετού, μετεωρισμού, καρδιακών προβλημάτων, πόνων, διαταραχών σπλήνας, δυσπεψίας, πονόδοντου, βρογχίτιδας, άσθματος, ψώρας, λευκοδερμίας και ως καθαρτικό, στομαχικό, ορεκτικό, τονωτικό, διουρητικό και αναλγητικό [18]. Αυτό το φυτό περιλαμβάνει πολυάριθμες βιολογικά σημαντικές ενώσεις όπως φλαβονοειδή, ανθρακινόνες, καροτενοειδή, βιταμίνες, λιπίδια και οργανικά οξέα, τα οποία είναι ευρέως γνωστά ως αντιοξειδωτικοί, αντιμικροβιακοί και αντικαρκινικοί παράγοντες [19]. Κάθε μέρος αυτού του φυτού περιέχει κερκετίνη (φλαβονοειδή) σε αυξημένη ποσότητα [15]. Αυτό το φυτό περιέχει 0,25 mg βιταμίνη Α, 1,33 mg βιταμίνη C, 2,37 mg βιταμίνη Ε [15], 3,38 mg φλαβονοειδή και 5,66 mg πολυφαινόλες [20] ανά 100 g ξηρού βάρους.
Ο Shahat και οι συνεργάτες του [21] έδειξαν αντι-αγγειογενετικές και αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις του μεθανολικού (80 τοις εκατό) εκχυλίσματος του εναέριου τμήματος του αντικαταστάτη του R. κατά του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος σε μοντέλο αρουραίου. Μια άλλη μελέτη έδειξε in vitro αντι-αγγειογενετικό δυναμικό του εκχυλίσματος R. vicarious [22]. Το μεθανολικό εκχύλισμα ολόκληρου του R. vicarious ασκεί προστασία από την επαγόμενη από τετραχλωράνθρακα ηπατοτοξικότητα in vivo [23]. Η αντιφλεγμονώδης δράση στα κουνέλια έχει γίνει εμφανής από το μεθανολικό εκχύλισμα φύλλων του R. vicarious [24]. Μια πρόσφατη μελέτη [25] ανέφερε in vivo νεφροπροστατευτική δράση του κλασματοποιημένου αιθανολικού εκχυλίσματος R. vicarious έναντι της τοξικότητας της γενταμυκίνης και του διχρωμικού καλίου.
Λαμβάνοντας υπόψη τις παραπάνω πληροφορίες, στοχεύσαμε να επιθεωρήσουμε την επίδραση των εκχυλισμάτων R. vicarious (RVE) όσον αφορά την ανάκτηση από νεφροτοξικότητα που προκαλείται από σισπλατίνη μέσω της διατήρησης της έκφρασης του γονιδίου NQO1 σε ένα ζωικό μοντέλο.
Οφέλη για την υγεία του cistanche: θεραπεία νεφρικών παθήσεων
Υλικά και μέθοδοι
Χημικά και αντιδραστήρια
Η σισπλατίνη και το 2, 2-διφαινυλ-1-πικρυλυδραζύλιο (DPPH) αγοράστηκαν από τη SIGMA-ALDRICH (ΗΠΑ).
Το κιτ χρωματομετρικής ανάλυσης κρεατινίνης (ID προϊόντος – 700.460) αγοράστηκε από την Cayman Chemical (ΗΠΑ). Το Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), ο εμβρυϊκός βόειος ορός (FBS) και το αντιβιοτικό (10,{3}} U/mL πενικιλλίνη και 10,000 ug/mL στρεπτομυκίνη) αγοράστηκαν από την Gibco (Gibco Laboratories, ΗΠΑ). Το κιτ ROS-Glo™ H2O2 Assay και το GoTaq® qPCR Master Mix ελήφθησαν από την Promega (ΗΠΑ). Το κιτ ανάστροφης μεταγραφής TIAN-Script M-MLV αγοράστηκε από την TIANGEN (Κίνα) και εκκινητές από την IDT (Integrated DNA Technologies, Μαλαισία). Όλα τα άλλα χημικά και αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτό το πείραμα ήταν αναλυτικής ποιότητας.
Συλλογή δειγμάτων φυτών και προετοιμασία εκχυλίσματος
Φρέσκα φυτά αντικαταστάτη R. αγοράστηκαν από μια τοπική αγορά στο Sonadighi, Rajshahi, Μπαγκλαντές. Το δείγμα φυτού αναγνωρίστηκε και επικυρώθηκε από τον Δρ. Ahmad Humayan Kabir, Τμήμα Βοτανικής, Πανεπιστήμιο Rajshahi, Μπαγκλαντές. Ένα δείγμα κάτω από το κουπόνι αρ. 00095 αποθηκεύτηκε στο βότανο του Τμήματος Βοτανικής του Πανεπιστημίου του Rajshahi. Τα εναέρια μέρη του φυτού καθαρίστηκαν, ξηράνθηκαν στους 37 βαθμούς, αλέστηκαν σε χονδροειδή σκόνη χρησιμοποιώντας ηλεκτρονικό στεγνωτήριο και αποθηκεύτηκαν σε σφραγισμένο δοχείο στους 4 βαθμούς. Η λεπτή σκόνη (10 g) διαλύθηκε σε μεθανόλη (500 mL). Το περιεχόμενο υποβλήθηκε σε υπερήχους (Soni-prep 150, China) στα 20 kHz για 10 λεπτά. Η διήθηση του εκχυλίσματος διεξήχθη χρησιμοποιώντας χαρτί φίλτρου Glass Fiber (Macherey NAGEL, GmBH, Γερμανικά) με Συσκευή Φιλτραρίσματος DURAN (Γερμανική). Τέλος, το διήθημα συμπυκνώθηκε χρησιμοποιώντας ξηραντήρα κατάψυξης (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA). Το εκχύλισμα τελικά ονομάστηκε RVE.
Δοκιμή αντιοξειδωτικής δράσης in vitro
Η in-vitro αντιοξειδωτική ικανότητα του RVE πραγματοποιήθηκε με βάση τον καθαρισμό του DPPH όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26] με μικρή τροποποίηση. Η ικανότητα σάρωσης ριζών DPPH του RVE αξιολογήθηκε με βάση τη μετατροπή του μωβ χρώματος του DPPH σε κίτρινο χρώμα. Το μείγμα της αντίδρασης σε κάθε σωλήνα μικροφυγοκέντρησης (2 mL) αποτελούνταν από 950 μL μεθανολικού διαλύματος ριζών DPPH (0,1 mM) και 50 μL RVE από πέντε διαφορετικές συγκεντρώσεις (200, 500, 1000, 2000 και 4000 ug. /mL μεθανόλης) για να γίνουν τελικές συγκεντρώσεις 10, 25, 50, 100 και 200 ug/mL. Ένα άλλο σωληνάριο που περιείχε 50 μL μεθανόλης και 950 μL μεθανολικού διαλύματος DPPH κρατήθηκε ως έλεγχος. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες αφέθηκαν για 30 λεπτά σε σκοτεινό μέρος. Η απορρόφηση των μιγμάτων λήφθηκε στα 517 nm χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο GENESYS 10S UV-VIS (Thermo SCIENTIFIC, USA). Τέλος, το ποσοστό της δραστηριότητας καθαρισμού ριζών (RSA) υπολογίστηκε με βάση τον αποχρωματισμό της DPPH χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο ποσοστού RSA=[(ADPPH − ARVE)/ADPPH] × 100 όπου ADPPH είναι η απορρόφηση του διαλύματος DPPH (μάρτυρας) και ARVE είναι η απορρόφηση του διαλύματος RVE. Η συγκέντρωση στην οποία το RVE οδήγησε σε 50 τοις εκατό RSA ονομάστηκε τιμή IC50 και υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα γράφημα τοποθετώντας το ποσοστό RSA έναντι διαφορετικών συγκεντρώσεων RVE που χρησιμοποιήθηκαν.
Πειραματόζωα και πειραματικός σχεδιασμός
Αρσενικά ποντίκια Swiss Albino ηλικίας 42 ημερών (30-32 g σωματικού βάρους) εγκλιματίστηκαν για 1 εβδομάδα πριν από την έναρξη του πειράματος σε ένα δωμάτιο (θερμοκρασία περίπου 25 ± 2 βαθμούς και ~ 50 τοις εκατό υγρασία, 12 ώρες κύκλος σκότους/φωτός). Το πόσιμο νερό και τα τρόφιμα παρέχονται κατά βούληση.
Τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε οκτώ ομάδες (n {{0}}). Η πρώτη ομάδα (μάρτυρας) υποβλήθηκε σε αγωγή με 0.2 mL 0,9 τοις εκατό NaCl. Οι επόμενες τέσσερις ομάδες υποβλήθηκαν σε θεραπεία με σισπλατίνη στα 2,5 mg/kg για 5 ημέρες σε διάστημα 24 ωρών. Μετά τη χορήγηση σισπλατίνης, μία ομάδα (δεύτερη ομάδα) αφέθηκε χωρίς περαιτέρω θεραπεία και ορίστηκε ως η ομάδα ελέγχου με στρες. Η τρίτη, η τέταρτη και η πέμπτη ομάδα υποβλήθηκαν σε περαιτέρω θεραπεία με RVE στα 25, 50 και 100 mg/kg, αντίστοιχα για 5 ημέρες. Άλλες τρεις ομάδες υποβλήθηκαν σε θεραπεία με RVE μόνο στα 25, 50 και 100 mg/kg, αντίστοιχα για 5 ημέρες. Η σισπλατίνη και η RVE διαλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό. Όλες οι θεραπείες χορηγήθηκαν ενδοπεριτοναϊκά. Μετά από 24 ώρες της τελευταίας θεραπείας, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία μετά από εξάρθρημα του τραχήλου της μήτρας [25]. Στη συνέχεια το περιτόναιο ανοίχτηκε με ψαλίδι, συλλέχθηκε αίμα μετά από παρακέντηση της καρδιάς και οι νεφροί συλλέχθηκαν με λαβίδες. Το αίμα υποβλήθηκε για έλεγχο του επιπέδου κρεατινίνης στον ορό. Οι νεφροί υποβλήθηκαν σε αξιολόγηση του επιπέδου της μηλονοδιαλδεΰδης και της γονιδιακής έκφρασης.
Μέτρηση κρεατινίνης ορού
Η κρεατινίνη ορού μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ χρωματομετρικής ανάλυσης κρεατινίνης-700,460 (Cayman Chemical, ΗΠΑ) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή που παρέχεται με το κιτ.
Μέτρηση νεφρικής υπεροξείδωσης λιπιδίων
Η μηλονοδιαλδεΰδη (MDA) είναι ένα τελικό προϊόν της υπεροξείδωσης των λιπιδίων στον ιστό των νεφρών και συνήθως μετράται ως δείκτης παραγωγής ROS. Ωστόσο, το επίπεδο MDA μετρήθηκε στον νεφρικό ιστό σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη [27]. Αρχικά, ο νεφρικός ιστός ομογενοποιήθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου (0.1 Μ, ρΗ 7,4). Ένα διάλυμα αντίδρασης που περιλαμβάνει 0,8 τοις εκατό θειοβαρβιτουρικό οξύ (1,5 mL), 8,1 τοις εκατό SDS (200 μL), 20 τοις εκατό (pH 3,5) οξικό οξύ (1,5 mL) και dH2O (600 μL) προστέθηκε στο 100 μL ομογενοποιημένου ιστού και το μείγμα στη συνέχεια επωάστηκε στους 95 βαθμούς για 1 ώρα. Μετά την ψύξη, τα μίγματα φυγοκεντρήθηκαν στα 10,000 g για 10 λεπτά στους 4 βαθμούς και η απορρόφηση του υπερκειμένου μετρήθηκε στα 532 nm με πρότυπο 1, 1, 3, 3- τετραμεθοξυπροπάνιο. Η ποσότητα της ολικής πρωτεΐνης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Bradford Protein Assay (BIO-RAD, USA) και συγκρίνοντάς την με την τυπική αλβουμίνη ορού βοοειδών (BSA). Η ένταση των υπεροξειδίων των λιπιδίων αρθρώθηκε ως νανομόρια (nM) MDA ανά χιλιοστόγραμμο (mg) πρωτεΐνης.
Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (PCR σε πραγματικό χρόνο)
Η PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28, 29]. Ολικό RNA από ιστό νεφρού απομονώθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο TRIZol® (Invitrogen) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχεται από τον κατασκευαστή. Το απομονωμένο RNA (1 μg) στη συνέχεια μετατράπηκε σε cDNA. Πρώτον, ελήφθησαν 2 μL τυχαίου εξαμερούς (10 μM), 2 μL dNTPs (10 mM), 1 ug RNA και HO χωρίς νουκλεάση έως 15 μL και επωάστηκαν για 5 λεπτά στους 70 βαθμούς. Το μίγμα τοποθετήθηκε αμέσως σε πάγο για 2 λεπτά. Στη συνέχεια προστέθηκαν 4 μL ρυθμιστικού διαλύματος 1ης αλυσίδας (5x) και 1 μL M-MLV ανάστροφης μεταγραφάσης σε κάθε σωληνάριο και επωάστηκαν για 10 λεπτά και 50
min στις 25 μοίρες και 42 μοίρες, αντίστοιχα. Τέλος, το ένζυμο ανάστροφης μεταγραφάσης M-MLV απενεργοποιήθηκε με επώαση του μίγματος στους 95 βαθμούς για 5 λεπτά. Τα συντιθέμενα προϊόντα cDNA υποβλήθηκαν σε PCR πραγματικού χρόνου για ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης NQO1, p53 και Bcl-2 χρησιμοποιώντας ειδικούς εκκινητές (Πίνακας 1). Κάθε αντίδραση (10 μL) πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν αποτελούμενη από 5 μL GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, ΗΠΑ), 0,5 μL (10 mM) από κάθε εκκινητή, 3 μL νερό χωρίς νουκλεάση και 1 μL cDNA σε 48-πλάκες αντίδρασης φρεατίου. Ο θερμικός κύκλος πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μηχανής PCR σε πραγματικό χρόνο (Eco™ Real-Time PCR System, Illumine®, USA) με τις ακόλουθες συνθήκες κύκλου: 95 μοίρες για 10 λεπτά, ακολουθούμενοι από 40 κύκλους των 95 μοιρών για 30 δευτερόλεπτα, 50 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα και 72 μοίρες για 25 δευτερόλεπτα. Η ειδικότητα των αντιδράσεων PCR επιβεβαιώθηκε με ανάλυση της καμπύλης τήγματος στους 95 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα, στους 45 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα και στους 95 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα. Η ειδικότητα των αντιδράσεων PCR επιβεβαιώθηκε με ανάλυση της καμπύλης τήγματος στους 95 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα, στους 45 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα και στους 95 βαθμούς για 15 δευτερόλεπτα. Η σχετική ποσοτικοποίηση της γονιδιακής έκφρασης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ενδογενές γονίδιο GAPDH ως έλεγχο με βάση τη μέθοδο ΔΔCq.
Κυτταρική καλλιέργεια και θεραπεία
Η ανθρώπινη νεφρική εγγύς επιθηλιακή κυτταρική σειρά, κύτταρα HK-2, διατηρήθηκαν σε DMEM συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό FBS και αντιβιοτικά (50 U/mL πενικιλίνης και 50 ug/mL στρεπτομυκίνη) σε επωαστήρα με 5 τοις εκατό CO2 και 95 τοις εκατό υγρασία στους 37 βαθμούς.
Δοκιμασία μέτρησης H2O2
Το επίπεδο H2O2 σε κύτταρα HK-2 υπολογίστηκε με τη χρήση κιτ ανάλυσης ROS- Glo™ H2O2 (Promega, ΗΠΑ) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχεται από τον κατασκευαστή του κιτ. Κύτταρα HK-2 (1000 κύτταρα) σε 70 μL DMEM τοποθετήθηκαν σε φρεάτια της πλάκας μικροτιτλοδότησης 96-πηγαδιού. Αφού επέτρεψε την προσκόλληση των κυττάρων στην επιφάνεια του τοιχώματος, 10 μL DMEM από φρεάτια της πλάκας μικροτιτλοδότησης αντικαταστάθηκαν με 10 μL σισπλατίνης (25 μΜ σε DMEM) και διατηρήθηκαν σε επωαστήρα για 12 ώρες. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 10 μL RVE για να γίνουν οι τελικές συγκεντρώσεις 125, 250 και 500 ug/mL σε DMEM και επωάστηκαν για άλλες 12 ώρες. Μετά από αυτό, προστέθηκαν 20 μL διαλύματος υποστρώματος H2O2 και 100 μL διαλύματος ανίχνευσης ROS-Glo™ σε κάθε φρεάτιο. Η αντίδραση επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά. Τέλος, η φωταύγεια μετρήθηκε με τη χρήση μετρητή φωταύγειας GloMax (Promega, ΗΠΑ).
Ανάλυση GC-MS
Η ανάλυση GC-MS του RVE (διαλυμένη σε μεθανόλη) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30] χρησιμοποιώντας GCMS-QP2020 (SHIMADZU) που περιλαμβάνει έναν αυτόματο δειγματολήπτη (AOC{ {5}}s), ένας αυτόματος εγχυτήρας (AOC-20i) και ένας αέριος χρωματογράφος (GC-2010 Plus) που συνδέονται με ένα φασματόμετρο μάζας εξοπλισμένο με SH-Rxi{{1{{ 37}}}}Τριχοειδής στήλη Sil MS (30 m × 0,25 μm ID × 0,25 μm DF). Το φέρον αέριο Ήλιο διατηρήθηκε σε σταθερό ρυθμό ροής 1,72 mL/min και όγκος έγχυσης 5 μL υποβλήθηκε σε αναλογία διαχωρισμού 10:1. Η θερμοκρασία του εγχυτήρα διατηρήθηκε στους 220 βαθμούς, η θερμοκρασία πηγής ιόντων ήταν 280 μοίρες, η θερμοκρασία του φούρνου προγραμματίστηκε από 80 βαθμούς (κρατήστε για 2 λεπτά), με αύξηση 5 μοιρών / λεπτό σε 150 μοίρες (χρόνος αναμονής 5,0 min), στη συνέχεια 5 μοίρες /λεπτό έως 280 μοίρες, τελειώνοντας με ισοθερμικό 8 λεπτών στους 280 βαθμούς. Τα φάσματα μάζας λήφθηκαν στο 1,5 kV με ένα διάστημα σάρωσης 0,5 δευτερολέπτων και το δείγμα εκτελέστηκε σε μια περιοχή 45-350 m/z. Η καθυστέρηση του διαλύτη ήταν από 0 έως 3 λεπτά και ο συνολικός χρόνος λειτουργίας GC-MS ήταν 55 λεπτά. Η σχετική συγκέντρωση των ανιχνευόμενων ενώσεων μετρήθηκε συγκρίνοντας τη μέση επιφάνεια κορυφής με τη συνολική επιφάνεια. Η ερμηνεία του φάσματος μάζας στο GC-MS πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τις βάσεις δεδομένων του Εθνικού Ινστιτούτου Προτύπων και Τεχνολογίας (NIST), συμπεριλαμβανομένων των NIST08, NIST08 και NIST14.
Στατιστική ανάλυση
Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με ANOVA ακολουθώντας το τεστ Dunnett's T3 χρησιμοποιώντας το λογισμικό IBM SPPS (έκδοση 20). Τα δεδομένα αρθρώνονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD). Η σημαντική σύγκριση εξετάστηκε στη σελ<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">
Αποτελέσματα
Δοκιμή αντιοξειδωτικής δράσης in vitro
Αν και προηγουμένως αναφέρθηκε ότι το RVE έχει αντιοξειδωτική δράση, ελέγξαμε ξανά την αντιοξειδωτική δράση του εκχυλίσματος μας χρησιμοποιώντας την ικανότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH. Το RVE εξουδετέρωσε την DPPH ανάλογα με τη δόση (Εικ. 1). Το RVE αποκάλυψε σημαντική in vitro αντιοξειδωτική δράση και η υπολογισμένη τιμή IC50 του RVE ήταν 37,39 ± 1,89 ug/mL.
Μέτρηση κρεατινίνης ορού
Το επίπεδο κρεατινίνης ορού σε ποντίκια ήταν σημαντικά (p < {{0}}.05)="" αυξημένο="" μετά="" τη="" χορήγηση="" σισπλατίνης="" (πίνακας="" 2).="" η="" θεραπεία="" με="" rve="" βελτίωσε="" αξιοσημείωτα="" (p="">< 0,05)="" το="" επίπεδο="" κρεατινίνης="" με="" δοσοεξαρτώμενο="" τρόπο="" (πίνακας="">
Μέτρηση νεφρικής υπεροξείδωσης λιπιδίων
Σε σύγκριση με τον έλεγχο, η σισπλατίνη αύξησε σημαντικά (p < {{0}}}.05)="" το="" περιεχόμενο="" mda="" στον="" νεφρικό="" ιστό="" ποντικών="" (πίνακας="" 3).="" αντίθετα,="" η="" θεραπεία="" rve="" σημαντικά="" (p="">< 0,05)="" επανέφερε="" το="" mda="" σε="" σχεδόν="" φυσιολογικό="" τρόπο="" με="" τρόπο="" δοσοεξαρτώμενο="" (πίνακας="">
PCR σε πραγματικό χρόνο
Η σισπλατίνη σημαντικά (p < {{0}}.05)="" μείωσε="" την="" έκφραση="" του="" nqo1="" mrna="" κατά="" 0.15-πλάσια="" και="" αύξησε="" τα="" p53="" και="" bcl-2="" mrna="" του="" mrna.="" έκφραση="" κατά="" 24="" και="" 4.2-διπλώστε,="" αντίστοιχα="" (εικ.="" 2).="" το="" rve="" μείωσε="" σημαντικά="" την="" έκφραση="" του="" mrna="" nqo1,="" p53="" και="" bcl-2="" (p="">< 0.05)="" με="" τρόπο="" δοσοεξαρτώμενο="" (εικ.="" 2).="" σε="" σύγκριση="" με="" τη="" μοναδική="" ομάδα="" που="" υποβλήθηκε="" σε="" θεραπεία="" με="" σισπλατίνη,="" η="" έκφραση="" nqo1="" mrna="" αυξήθηκε="" κατά="" 3,57,="" 6,36="" και="" 9.28-πλάσιο="" σε="" 25,="" 50="" και="" 100="" mg/kg="" rve,="" αντίστοιχα="" (εικ.="" 2α).="" και="" πάλι,="" η="" έκφραση="" mrna="" του="" p53="" μειώθηκε="" κατά="" 0.63,="" 0.46="" και="" 0.21-="" φορές="" σε="" 25,="" 50="" και="" 100="" mg/kg="" rve,="" αντίστοιχα="" (εικ.="" 2b).="" η="" έκφραση="" του="" mrna="" του="" bcl-2="" μειώθηκε="" επίσης="" κατά="" 0,71,="" 0,40="" και="" 0.32-="" φορές="" σε="" 25,="" 50="" και="" 100="" mg/kg="" rve,="" αντίστοιχα="" (εικ.="" 2γ).="" ωστόσο,="" δεν="" βρέθηκαν="" σημαντικές="" αλλαγές="" (p=""> 0,05) στο επίπεδο έκφρασης των γονιδίων NQO1, p53 και Bcl-2 λόγω θεραπείας με RVE (Εικ. 3).
H2O2δοκιμασία μέτρησης
Στη δοκιμασία μέτρησης H2O2, το H2O2επίπεδο θεωρήθηκε ανάλογο με τη φωταύγεια. Η χορήγηση σισπλατίνης (p < {{0}}.{11}}5)="" αύξησε="" σημαντικά="" το="" επίπεδο="" h2o2="" κατά="" 2.2-φορές="" (εικ.="" 4).="" η="" θεραπεία="" με="" rve="" μειώθηκε="" σημαντικά="" (p="">< {0.05)="" το="" επίπεδο="" h2o2="" κατά="" 0,25,="" 0,38="" και="" 0.{16}}="" φορές="" σε="" 125,="" 250="" και="" 500="" ug/ml,="">
Ανάλυση GC-MS
Συνολικά 10 ενώσεις (Πίνακας 4 και Εικ. 5) συμπεριλαμβανομένων "Ισοβορνεόλη, πενταμεθυλδισιλανυλαιθέρας (σεσκιτερπενική αλκοόλη)", "Θυμίνη (νουκλεόβαση πυριμιδίνης)", "4H-Py-ran-4-one, 2,{{ 8}}διυδρο-3,5-διυδροξυ-6-μεθυλ- (σαπωνίνη)", "Εξαδεκανοϊκό οξύ, μεθυλεστέρας (μεθυλεστέρας λιπαρού οξέος)", "9,12- Οκταδεκαδενοϊκό οξύ, μεθυλεστέρας (μεθυλεστέρας λιπαρού οξέος)", "9-Οκταδεκενοϊκό οξύ (Ζ)-, μεθυλεστέρας (μεθυλεστέρας λιπαρού οξέος)", "στεατικό μεθυλεστέρα (μεθυλεστέρας λιπαρού οξέος)", "Φθαλικός διϊσοοκτυλεστέρας (εστέρας)", "13-Εδοκοσεναμίδιο, (Ζ)- (αλκαλοειδές)" και "Σκουαλένιο (τριτερπένιο)" ανιχνεύθηκαν στο RVE.
Οφέλη cistanche tubolosa: μείωση των λιπιδίων του αίματος
Συζήτηση
Τα φυσικά και συνθετικά αντιοξειδωτικά έχουν μελετηθεί εκτενώς και αποκαλύφθηκε ότι είναι λειτουργικά είτε για την πρόληψη είτε για τη βελτίωση της τοξικότητας στη φυσιολογία των ζώων [31]. Τα αντιοξειδωτικά συμπληρώματα είναι το συστατικό που αναπτύχθηκε είτε με χημική σύνθεση είτε με εκχύλιση από φυσικές τροφές, αλλά δεν είναι πανομοιότυπα σε σύνθεση με τα αντιοξειδωτικά που διατίθενται στα τρόφιμα [5]. Ως εκ τούτου, οι απόψεις διαχωρίζονται με την πάροδο του χρόνου εάν τα συνθετικά αντιοξειδωτικά προσφέρουν ή όχι παρόμοια οφέλη για την υγεία με τα φυσικά αντιοξειδωτικά [32]. Έρχεται η ανάγκη να μειωθεί η χρήση συνθετικών αντιοξειδωτικών συμπληρωμάτων και να αναζητηθούν εναλλακτικές, φθηνές, ανανεώσιμες, φυσικές και πιθανώς ασφαλέστερες πηγές αποτελεσματικών φυσικών αντιοξειδωτικών.
Ένας από τους πιο σημαντικούς μηχανισμούς είναι η οδός που σχετίζεται με τον πυρηνικό παράγοντα ερυθροειδούς-2 παράγοντα-2 (Nrf2) που γενικά προστατεύει τα κύτταρα από το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από εξωγενείς ή ενδογενείς στρεσογόνους παράγοντες [27]. Τα αποτελεσματικά αντιοξειδωτικά προκαλούν έκφραση του Nrf2, το οποίο κινείται περαιτέρω στον πυρήνα και συνδέεται με το στοιχείο αντιοξειδωτικής απόκρισης (ARE) που προκαλεί έκφραση του αποτοξινωτικού και αντιοξειδωτικού γονιδίου φάσης II NQO1 [33, 34]. Το NQO1 εκφράζεται ευρέως και διαφορικά με έναν ειδικό για τον ιστό τρόπο. Το NQO1 είναι μια κυτοσολική αντιοξειδωτική φλαβοπρωτεΐνη που καταλύει την 2-αναγωγή ηλεκτρονίων των κινονών σε υδροκινόνες, με αποτέλεσμα την αποτοξίνωση των ηλεκτροφίλων και την πρόβλεψη του κύκλου οξειδοαναγωγής [35]. Σύμφωνα με μια προηγούμενη μελέτη [36], η -λαπαχόνη ενεργοποιεί το NQO1, το οποίο αυξάνει περαιτέρω το ενδοκυτταρικό επίπεδο NAD plus και προστατεύει το νεφρό από οξεία βλάβη που προκαλείται από τη σισπλατίνη.
Η σισπλατίνη είναι γνωστό ότι προκαλεί βλάβη στη μεμβράνη σπειραματικής διήθησης μέσω οξειδωτικού στρες, φλεγμονής και απόπτωσης που συνολικά οδηγούν σε μειωμένο ρυθμό σπειραματικής διήθησης και απώλεια της φυσιολογικής διαπερατότητας της μεμβράνης [37]. Ως εκ τούτου, το επίπεδο κρεατινίνης ορού ήταν αυξημένο. Η κρεατινίνη ορού είναι ένας από τους πιθανούς δείκτες νεφρικής λειτουργικότητας. Η θεραπεία με σισπλατίνη αύξησε την περιεκτικότητα σε MDA στον ιστό των νεφρών που είναι δευτερεύον προϊόν υπεροξείδωσης λιπιδίων και αυτή η αναφορά είναι σταθερή με προηγούμενες μελέτες [27, 35, 37, 38]. Η θεραπεία με RVE μείωσε σημαντικά την περιεκτικότητα σε MDA στον ιστό των νεφρών. Ταυτόχρονα, το επίπεδο κρεατινίνης ήταν επίσης μειωμένο υποδεικνύοντας τη βελτιωτική επίδραση του RVE.
Επιπλέον, η έκφραση NQO1 μειώθηκε σημαντικά και η έκφραση p53 και Bcl-2 αυξήθηκαν σημαντικά μετά την έκθεση σε σισπλατίνη. Όσον αφορά την έκφραση NQO1 και p53 in vivo, το αποτέλεσμά μας είναι σύμφωνο με μια προηγούμενη μελέτη [13]. Μια πρόσφατη μελέτη [39] έδειξε ότι η σισπλατίνη μείωσε σημαντικά την έκφραση του Bcl-2 στους νεφρούς των ποντικών, αλλά παραδόξως βρήκαμε αυξημένη έκφραση. Αυτή η διαφορά μπορεί να είναι αποτέλεσμα διαφοράς δόσης [40] καθώς ο Mohamed και οι συνεργάτες του [39] χρησιμοποίησαν 8 mg/kg για 12 ημέρες, ενώ εμείς χρησιμοποιήσαμε 2,5 mg/kg μόνο για 5 ημέρες. Μια άλλη μελέτη [41] ανέφερε ότι η σισπλατίνη μπορεί να αυξήσει την έκφραση του Bcl-2 σε μια δόση όταν είναι μη κυτταροτοξική. Και πάλι, η αυξημένη έκφραση Bcl-2 ευαισθητοποιεί τα κύτταρα στο οξειδωτικό στρες [40].
Ωστόσο, η έκφραση της ρ53 είναι χαμηλή σε φυσιολογικές φυσιολογικές συνθήκες, αλλά αναμένεται να ρυθμιστεί προς τα πάνω μόλις υποβληθεί σε θεραπεία με σισπλατίνη επειδή αυτός ο χημειοθεραπευτικός παράγοντας με βάση την πλατίνα ενεργοποιεί την εξαρτώμενη από την ρ53 αποπτωτική οδό. Μόλις λάβαμε θεραπεία σε ποντίκια με σισπλατίνη, η ρ53 αυξήθηκε σημαντικά στους νεφρούς των ποντικών σε σύγκριση με τον έλεγχο. Ένα άλλο πρωτο-ογκογονίδιο Bcl-2 συσχετίζεται επίσης με το επίπεδο έκφρασης NQO1. Μιμούμενοι την έκφραση p53, διαπιστώσαμε επίσης ότι τα επίπεδα Bcl- 2 αυξήθηκαν με τη θεραπεία με σισπλατίνη, αλλά καλύφθηκαν ξανά σημαντικά κατά τη θεραπεία με RVE. Αυτό είναι δυνατό, ως απόκριση στο οξειδωτικό στρες, το γονίδιο p53 ενεργοποιείται και έχει ως αποτέλεσμα τη διακοπή του κυτταρικού κύκλου, της γήρανσης ή της απόπτωσης [6]. Με την αποτοξίνωση, η υπερέκφραση NQO1 θεωρείται συχνά ότι συσχετίζεται με την απόπτωση στα καρκινικά κύτταρα [10], αν και ο υποκείμενος μηχανισμός της απόπτωσης και η υπερέκφραση του NQO1 είναι ακόμα αμφιλεγόμενος. Επιπλέον, στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, η υπερέκφραση NQO1 μειώνει την έκφραση Bcl-2 [10]. Το πρωτο-ογκογονίδιο Bcl- 2 έχει επίσης p53 όπως η συσχέτιση με την έκφραση NQO1. Το p53 είναι ένας ειδικός για την αλληλουχία μεταγραφικός παράγοντας που ενεργοποιείται από πολλούς τύπους κυτταρικού στρες [42], ενώ η υπερέκφραση του Bcl-2 λειτούργησε ως σταθεροποιητής μιτοχονδριακών πόρων για να διευκολύνει την απελευθέρωση του κυτοχρώματος-c κατά το οξειδωτικό στρες [12]. Στην περίπτωσή μας, ελέγξαμε και τις δύο αποκρίσεις γονιδίων με θεραπεία με σισπλατίνη σε φυσιολογικό νεφρικό ιστό και βρήκαμε την αυξημένη έκφρασή τους. Η θεραπεία με RVE επανέφερε την έκφραση της p53 και της Bcl-2 σε σχεδόν φυσιολογική με δοσοεξαρτώμενο τρόπο. Αυτός ο τύπος ακύρωσης έκφρασης Bcl-2 παρουσιάστηκε επίσης χρησιμοποιώντας το ROS scavenger Trolox [43]. Επιπλέον, το επίπεδο H2O2 ήταν επίσης αξιοσημείωτα αυξημένο στα κύτταρα HK-2 λόγω θεραπείας με σισπλατίνη in vitro. Μετά τη θεραπεία με RVE, το επίπεδο H2O2 αποκαταστάθηκε σημαντικά περίπου στο φυσιολογικό. Αυτό ίσως οφείλεται στην επίδραση της θεραπείας RVE που αύξησε την έκφραση NQO1 [44], η οποία προστατεύει από το οξειδωτικό στρες [6].
Το χρωματογράφημα GC-MS επιβεβαίωσε την ύπαρξη δέκα ενώσεων στο RVE. Μεταξύ αυτών, "4H-Pyran- 4-one, 2, 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-", "Hexadecanoic acid" και " Το Squalene» είναι γνωστά αντιοξειδωτικά[45–47]. Αυτές οι τρεις ενώσεις συνολικά πιθανώς άσκησαν μια συνεργική νεφροπροστατευτική δράση. Προηγούμενες μελέτες ανέφεραν επίσης για την επαγωγή της έκφρασης NQO1 από τη βιταμίνη Α [48], τη βιταμίνη C [49], τη βιταμίνη Ε [50], τα φλαβονοειδή [51] και τις πολυφαινόλες [50]. Επομένως, αυτή η έκθεση προτείνει να διευκρινιστεί εάν αυτό το συγκεκριμένο εκχύλισμα περιέχει κάτι μεταξύ βιταμίνης Α, βιταμίνης C, βιταμίνης Ε, φλαβονοειδή και πολυφαινόλης ή όχι.
συμπέρασμα
Το συνολικό εύρημα υποδηλώνει ότι το RVE είναι φυσιολογικά αποτελεσματικό στην προστασία των νεφρών από βλάβη που προκαλείται από τη σισπλατίνη. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να διευκρινιστούν οι ακριβείς ενώσεις που είναι υπεύθυνες για τον μετριασμό της νεφροτοξικότητας που προκαλείται από τη σισπλατίνη, η οποία μπορεί να γίνει ευεργετική για την ανθρώπινη εφαρμογή.
Ευχαριστίες
Οι συγγραφείς είναι ευγνώμονες στο Συμβούλιο Επιστημονικής και Βιομηχανικής Έρευνας του Μπαγκλαντές (BCSIR), Rajshahi Branch για την παροχή εργαστηριακής υποστήριξης για την ποσοτικοποίηση του RNA.
Συνεισφορές συγγραφέων
Η MMH πραγματοποίησε πειραματικό σχεδιασμό, πειραματισμό, ανάλυση και προετοιμασία δεδομένων, συγγραφή και επιμέλεια χειρογράφων, αναθεώρηση και σύνταξη χειρογράφων. Το MST & MME έκανε πειραματισμό και ανάλυση δεδομένων. Η AME & MAR συνεισέφερε στην εποπτεία και στους πόρους. Ο AH ήταν υπεύθυνος για τη σύλληψη, την επίβλεψη, τους πόρους και την επιμέλεια χειρογράφων. Όλοι οι συγγραφείς
εξέτασε το χειρόγραφο. Οι συγγραφείς διάβασαν και ενέκριναν το τελικό χειρόγραφο.
Χρηματοδότηση
Η τρέχουσα εργασία χρηματοδοτήθηκε από το Taif University Researchers Supporting Project number (TURSP - 2020/75), Πανεπιστήμιο Taif, Taif, Σαουδική Αραβία.
Διαθεσιμότητα δεδομένων και υλικών.
Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι διαθέσιμα και μπορούν να παρασχεθούν κατόπιν αιτήματος στον αντίστοιχο συγγραφέα.
Δηλώσεις
Έγκριση δεοντολογίας και συναίνεση συμμετοχής
Η δεοντολογία για τη διεξαγωγή αυτού του πειράματος εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιδρυματικής Ζώων, Ιατρικής Δεοντολογίας, Βιοασφάλειας και Βιοασφάλειας (IAMEBBC), Ινστιτούτο Βιολογικών Επιστημών (IBSc), Πανεπιστήμιο του Rajshahi και παρασχέθηκε με το σημείωμα με αριθμό 31/{{1} }IAMEBBC/IBSc. Όλες οι μέθοδοι πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες και τους κανονισμούς που παρέχονται από την προαναφερθείσα επιτροπή δεοντολογίας. Αυτή η μελέτη διεξήχθη σε συμμόρφωση με τις οδηγίες ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments). Η "Συγκατάθεση για συμμετοχή" δεν ισχύει για αυτήν τη μελέτη.
Στοιχεία συγγραφέα
1 Εργαστήριο Επιστήμης Μοριακής Βιολογίας και Πρωτεϊνών, Τμήμα Γενετικής Μηχανικής και Βιοτεχνολογίας, Σχολή Επιστημών Ζωής και Γης, Πανεπιστήμιο Rajshahi, Rajshahi 6205, Μπαγκλαντές. 2 Εργαστήριο Μοριακής Παθολογίας, Ινστιτούτο Βιολογικών Επιστημών, Πανεπιστήμιο Rajshahi, Rajshahi 6205, Μπαγκλαντές. 3Department of Biotechnology, College of Science, Taif University, PO Box 11099, Taif 21944, Saudi Arabia. 4Τμήμα Γενετικής, Γεωπονική Σχολή, Πανεπιστήμιο Αλεξάνδρειας, Αλεξάνδρεια 21545, Αίγυπτος.
βιβλιογραφικές αναφορές
1. Bagchi K, Puri S. Ελεύθερες ρίζες και αντιοξειδωτικά στην υγεία και τις ασθένειες: μια ανασκόπηση. East Mediterr Health J. 1998; 4:350–60.
2. Koh EM, Lee EK, Song CH, Song J, Chung HY, Chae CH, et al. Το Ferulate, ένα ενεργό συστατικό του φύτρου σιταριού, βελτιώνει την ανισορροπία PTK/PTP που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες και την αδρανοποίηση PP2A. Toxicol Res. 2018; 34 (4): 333–41.
3. Hassan AI, Ibrahim RY. Ορισμένα γενετικά προφίλ στο ήπαρ των ποντικών που φέρουν όγκο ασκίτη Ehrlich υπό το άγχος της ακτινοβολίας. J Radiat Res Appl Sci. 2014; 7 (2): 188–97.
4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang BY, et al. Συμμετοχή του οξειδωτικού στρες στην υποτροπή της οξείας μυελογενούς λευχαιμίας. J Biol Chem. 2010;285(20):15010–5.
5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. Ελεύθερες ρίζες, αντιοξειδωτικά σε ασθένειες και υγεία. Int J Biomed Sci. 2008; 4:89–96.
6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. Roles of NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) στην εξέλιξη του καρκίνου και τη χημειοανθεκτικότητα. J Clin Exp Oncol. 2017; 6:1–6.
7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: οξειδορεδουκτάση κινόνης 1 (NQO1) στην ευαισθησία και την αντοχή σε αντικαρκινικές κινόνες. Biochem Pharmacol. 2012;83(8):1033–40.
8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: oxidoreductase 1 (NQO1) δέκτης κινόνης, ένα πολυλειτουργικό αντιοξειδωτικό ένζυμο και εξαιρετικά ευέλικτη κυτταροπροστασία. Arch Biochem Biophys. 2010; 501 (1): 116–23.
9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady Μ, Gaut AW, Liu J, Zhang YP, et al. Αναστολή δικουμαρόλης του NADPH: η οξειδορεδουκτάση της κινόνης επάγει την αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου του παγκρέατος μέσω ενός μηχανισμού που διαμεσολαβείται από υπεροξείδιο. Cancer Res. 2003; 63(17):5513–20.
10. Zhang X, Han K, Yuan DH, Meng CY. Η υπερέκφραση του NAD (P) H: η οξειδορεδουκτάση της κινόνης 1 αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος και προκαλεί απόπτωση ενεργοποιώντας την οδό AMPK/PGC-1. DNA Cell Biol. 2017; 36 (4): 256–63.
11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. Η καταστολή της NAD (P) H-κινόνης oxidoreductase 1 ενίσχυσε την ευαισθησία των κυττάρων χολαγγειοκαρκινώματος σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες. J Exp Clin Cancer Res. 2014; 33 (1): 1– 13.
12. Dasari S, Tchounwou PB. Η σισπλατίνη στη θεραπεία του καρκίνου: μοριακοί μηχανισμοί δράσης. Eur J Pharmacol. 2014; 740:364–78.
13. Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allylmercaptocysteine εξασθενεί τη νεφροτοξικότητα που προκαλείται από σισπλατίνη μέσω της καταστολής της απόπτωσης, του οξειδωτικού στρες και της φλεγμονής. ΘΡΕΠΤΙΚΕΣ ουσιες. 2017; 9 (2): 166.
14. Matkowski A. Φυτέψτε in vitro καλλιέργεια για την παραγωγή αντιοξειδωτικών-ανασκόπηση. Biotechnol Adv. 2008;26(6):548–60.
15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA. Αντιοξειδωτική δράση του Rumex vicarious L. στο βλαστικό στάδιο ανάπτυξης. Asian J Pharm Clin Res. 2012; 5:111–7.
16. Rechinger KH. Rumex (Polygonaceae) στην Αυστραλία: μια επανεξέταση. Νουίτσια. 1984; 5:75-122.
17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya ΜΑ, Higgins Μ, Dinkova-Kostova ΑΤ. NAD (P) H: Δραστικότητα επαγωγέα της οξειδοαναγωγάσης κινόνης 1 ορισμένων φαρμακευτικών φυτών της Σαουδικής Αραβίας. Planta Med. 2013;79(06):459–64.
18. El-Hawary SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. Ένα προφίλ βιοδραστικών ενώσεων του Rumex vicarious L. J Food Sci. 2011;76(8): C1195–202.
19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF, et al. Πηγές άλφα-, βήτα-, γάμμα-, δέλτα- και έψιλον-καροτενίων: μια ανασκόπηση του εικοστού αιώνα. Σουτιέν Rev. 2008; 18 (1): 135–54.
20. Laouini SE, Ouahrani MR. Φυτοχημικός έλεγχος, in vitro αντιοξειδωτική και αντιβακτηριακή δράση του εκχυλίσματος Rumex vicarious L.. Science Study Res: Chem Chem Engi Biotech Food Ind. 2017; 18:367–76.
