Proteomics Τοπίο Χαρτογράφηση της νόσου Behçet που έχει επιλυθεί σε όργανα με χρήση εις βάθος Proteomics πλάσματος για τον προσδιορισμό της έκφρασης δεσμευτικής πρωτεΐνης υαλουρονικού 2 που σχετίζεται με αγγειακή συμμετοχή

Σκοπός.

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε για να αποσαφηνιστεί η παθογένεια και η ετερογένεια της νόσου του Behçet (BD) που περιλαμβάνει διαφορετικά όργανα χρησιμοποιώντας εις βάθος πρωτεομική για τον προσδιορισμό των βιοδεικτών για την κλινική αξιολόγηση και τη θεραπεία ασθενών με BD.

Μέθοδοι.

Μετρήσαμε τα επίπεδα έκφρασης των πρωτεϊνών σε δείγματα πλάσματος από 98 ασθενείς με BD και 31 υγιείς μάρτυρες χρησιμοποιώντας την εις βάθος πλατφόρμα πρωτεϊνικής μας με φασματόμετρο μάζας απόκτησης ανεξάρτητο από δεδομένα και μικροσυστοιχία αντισωμάτων. Πραγματοποιήσαμε αναλύσεις βιοπληροφορικής των βιολογικών διεργασιών και των μονοπατιών σηματοδότησης που άλλαξαν στην ομάδα BD και κατασκευάσαμε ένα πρωτεομικό τοπίο παθογένειας BD που αναλύεται σε όργανα. Στη συνέχεια επικυρώσαμε τους βιοδείκτες της σοβαρότητας της νόσου και το αγγειακό υποσύνολο σε μια ανεξάρτητη ομάδα 108 ασθενών με BD και 29 υγιών μαρτύρων χρησιμοποιώντας μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία.

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Αποτελέσματα.

Η ομάδα BD είχε 220 διαφορικά εκφρασμένες πρωτεΐνες, οι οποίες έκαναν διάκριση μεταξύ ασθενών με BD (88,6%) και υγιών μαρτύρων (95,5%). Οι αναλύσεις βιοπληροφορικής αποκάλυψαν διαφορετικές βιολογικές διεργασίες που σχετίζονται με παθογένειες BD, συμπεριλαμβανομένης της ενεργοποίησης του συμπληρώματος, της επούλωσης τραυμάτων, της αγγειογένεσης και της ανοσίας που προκαλείται από λευκοκύτταρα. Επιπλέον, το κατασκευασμένο τοπίο πρωτεομικής του BD που αναλύεται σε όργανα εντόπισε πρωτεομικά χαρακτηριστικά του BD που σχετίζονται με διαφορετικά όργανα και πρωτεϊνικούς στόχους που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την ανάπτυξη θεραπείας. Η πρωτεΐνη 2 που δεσμεύει το υαλουρονικό, η τενασκίνη και η σερπίνη Α3 επικυρώθηκαν ως πιθανοί βιοδείκτες για την κλινική αξιολόγηση της αγγειακής BD και των στόχων θεραπείας.

Συμπέρασμα.

Τα αποτελέσματά μας παρέχουν πολύτιμες πληροφορίες σχετικά με την παθογένεια της αναλυόμενης σε όργανα BD όσον αφορά τα πρωτεομικά χαρακτηριστικά και τους πιθανούς βιοδείκτες για κλινική αξιολόγηση και πιθανές θεραπείες για την αγγειακή BD.

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η νόσος Behçet (BD) είναι μια πολυσυστηματική, χρόνια αγγειίτιδα που είναι ιδιαίτερα διαδεδομένη στον πληθυσμό κατά μήκος της αρχαίας εμπορικής οδού γνωστής ως Silk Road. Μια μελέτη του 2016 διαπίστωσε ότι ο επιπολασμός της BD στην Τουρκία ήταν 602 ανά 100,000 στον πληθυσμό των εφήβων/ενήλικων (1). Η BD είναι εξαιρετικά ετερογενής και οι ασθενείς παρουσιάζουν πολυοργανική συμμετοχή, συμπεριλαμβανομένων στοματικών ελκών, ελκών των γεννητικών οργάνων, ραγοειδίτιδας και δερματικών βλαβών. Η BD μπορεί να είναι θανατηφόρα ως αποτέλεσμα ρήξης αγγειακών ανευρυσμάτων ή σοβαρών νευρολογικών επιπλοκών. Τα μοριακά χαρακτηριστικά της BD που σχετίζονται με διαφορετικά όργανα είναι άγνωστα. Οι κλινικές διαγνωστικές μέθοδοι και οι επακόλουθες θεραπευτικές επιλογές εξαρτώνται κυρίως από τα κλινικά συμπτώματα. Ωστόσο, δεν υπάρχουν διαθέσιμοι βιοδείκτες που να επιτρέπουν τη διαφοροποίηση της BD με βάση τη συμμετοχή διαφορετικών οργάνων. Σε σύγκριση με τη γονιδιωματική, η πρωτεομική προσφέρει μια εναλλακτική προσέγγιση για την απόκτηση άφθονων πληροφοριών σχετικά με την παθογένεση της BD και την εύρεση βιοδεικτών για τη διάγνωση και τη θεραπεία της BD. Οι Lee et al ανακάλυψαν 22 διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες χρησιμοποιώντας 2-διαστατική ηλεκτροφόρηση σε συνδυασμό με φασματομετρία μάζας χρόνου πτήσης με τη βοήθεια μήτρας εκρόφησης/ιονισμού λέιζερ (2). Τρεις μοναδικές πρωτεΐνες στο εντερικό BD (ινώδες, απολιποπρωτεΐνη A-IV και αμυλοειδές ορού Α) επικυρώθηκαν περαιτέρω σε μια ανεξάρτητη κοόρτη χρησιμοποιώντας ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA). Χρησιμοποιώντας συστοιχίες σφαιριδίων κυτοκίνης Bio-Rad που περιέχουν 25 φλεγμονώδεις κυτοκίνες, οι Lopalco et al διαπίστωσαν ότι ο υποδοχέας gp130/εκκρίνει ιντερλευκίνης-6 (IL{-6), εκκρίνει υποδοχέα IL-6, IL{19} } και τα επίπεδα του ορού της λεμφοποιητίνης της στρωματικής θυμικής αδένας αυξήθηκαν σημαντικά στην υποομάδα BD με βλεννογονοδερματικές εκδηλώσεις και οφθαλμική συμμετοχή σε σύγκριση με την υποομάδα με μόνο βλεννογονοδερματική συμμετοχή (3). Ωστόσο, οι πληροφορίες που ελήφθησαν σε αυτές τις μελέτες ήταν περιορισμένες, επειδή οι ομάδες πρωτεϊνών και ασθενών ήταν μικρές και οι βιοδείκτες που εντοπίστηκαν δεν είχαν επικυρωθεί επαρκώς. Για αυτήν τη μελέτη, πραγματοποιήσαμε, από ό,τι γνωρίζουμε, την πρώτη ολοκληρωμένη ανάλυση πρωτεώματος πλάσματος της BD χρησιμοποιώντας την εις βάθος πλατφόρμα πρωτεωμικής μας ενσωματωμένη με το φασματόμετρο μάζας λήψης ανεξάρτητα από δεδομένα (DIA-MS) με προσαρμόσιμες μικροσυστοιχίες αντισωμάτων (4). Με τα δεδομένα πρωτεϊνικής, αναλύσαμε πρωτεΐνες που εκφράστηκαν διαφορικά μεταξύ ασθενών με BD και μιας υγιούς ομάδας ελέγχου και τις βιολογικές διεργασίες και μονοπάτια αυτών των πρωτεϊνών σχετικά με την παθογένεση της BD. Επιπλέον, κατασκευάσαμε ένα όργανο-αναλυμένο τοπίο BD και προσδιορίσαμε τα πρωτεομικά χαρακτηριστικά κάθε οργάνου. Οι βιοδείκτες της αγγειακής BD και της σοβαρότητας της νόσου επικυρώθηκαν σε μια ανεξάρτητη κοόρτη.

ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας του Peking Union Medical College Hospital (JS-2049). Αυτό το άρθρο δεν περιέχει αναγνωρίσιμα δεδομένα για οποιονδήποτε ασθενή BD ή υγιή συμμετέχοντα ελέγχου. Η κοόρτη ανακάλυψης περιελάμβανε 98 ασθενείς με BD και 31 υγιείς μάρτυρες. Το πρωτέωμα του πλάσματος μετρήθηκε σε βάθος χρησιμοποιώντας DIA-MS και μικροσυστοιχία αντισωμάτων. Οι αναλύσεις βιοπληροφορικής χρησιμοποιήθηκαν για τον εντοπισμό των αλλοιωμένων βιολογικών μηχανισμών στην ομάδα BD και για την κατασκευή του πρωτεϊνικού τοπίου του BD που αναλύεται σε όργανα. Οι υποψήφιοι βιοδείκτες πλάσματος επικυρώθηκαν χρησιμοποιώντας ELISA σε ανεξάρτητες κοόρτες που περιλαμβάνουν υγιείς μάρτυρες και ασθενείς με αρτηρίτιδα BD και Takayasu. Τα κλινικά χαρακτηριστικά και οι πληροφορίες θεραπείας των κοορτών ανακάλυψης και επικύρωσης εμφανίζονται στους Συμπληρωματικούς Πίνακες 1-6 και οι λεπτομερείς πειραματικές διαδικασίες περιγράφονται στο Συμπληρωματικό Υλικό, που είναι διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Χαρακτηριστικά ασθενούς. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών με BD και η χρήση γλυκοκορτικοειδών (GCs) και ανοσοκατασταλτικών κατά τη στιγμή της συλλογής αίματος φαίνονται στον Συμπληρωματικό Πίνακα 1, που διατίθεται στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi / 10.1002/άρθρ.42348. Στην πρωτεομική ανάλυσή μας, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο φύλο και την ηλικία μεταξύ των 98 ασθενών με BD και των 31 υγιών ελέγχων (κοόρτη ανακάλυψης) (Συμπληρωματικός Πίνακας 1). Στην ομάδα BD, 45, 38 και 15 ασθενείς είχαν ήπια, μέτρια και σοβαρή BD, αντίστοιχα. Όλοι οι ασθενείς με BD είχαν στοματικά έλκη και > 20% είχαν έλκη των γεννητικών οργάνων (80,6%), δερματικές βλάβες (65,3%), οφθαλμικές βλάβες (23,5%) και αγγειακή συμμετοχή (22,4 %). Η αγγειακή συμμετοχή ασθενών με BD στην κοόρτη ανακάλυψης παρουσιάζεται στον Συμπληρωματικό Πίνακα 2 και τα χαρακτηριστικά των κοορτών επικύρωσης που εφαρμόστηκαν για την επαλήθευση της έκφρασης των υποψήφιων βιοδεικτών φαίνονται στους Συμπληρωματικούς Πίνακες 3-5 (διαθέσιμοι στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στοhttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Σε βάθος ανάλυση του πρωτεώματος του πλάσματος σε ασθενείς με BD χρησιμοποιώντας DIA-MS και μικροσυστοιχία αντισωμάτων. Μια σχηματική απεικόνιση της μελέτης πρωτεϊνικού προφίλ παρουσιάζεται στο Σχήμα 1Α και στο Συμπληρωματικό Σχήμα 1, που διατίθεται στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1{{11} }02/άρθρ.42348. Όλα τα δείγματα πλάσματος από ασθενείς με BD και υγιείς μάρτυρες μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας την εις βάθος πλατφόρμα πρωτεϊνικής πλάσματος που αποτελείται από DIA-MS και μικροσυστοιχία αντισωμάτων με υψηλή αναπαραγωγιμότητα. Οι συντελεστές συσχέτισης του Spearman για την ανίχνευση πρωτεϊνών πλάσματος χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχία αντισωμάτων ήταν 0.98 και 0.93 εντός και μεταξύ διαφορετικών συστοιχιών, αντίστοιχα (Συμπληρωματικά σχήματα 2Α και 2Β, διαθέσιμα στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Ο συντελεστής συσχέτισης του Spearman για την ανίχνευση πρωτεΐνης πλάσματος χρησιμοποιώντας DIA-MS ήταν 0,92 (εύρος 0,87–0,96, Συμπληρωματικό Σχήμα 2C). Αντιπροσωπευτικές σαρωμένες εικόνες από μικροσυστοιχία αντισωμάτων για ασθενείς με BD και υγιείς μάρτυρες φαίνονται στη Συμπληρωματική Εικόνα 3, διαθέσιμη στη διεύθυνση https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι, συνολικά, οι πρωτεΐνες του πλάσματος των ασθενών με BD ρυθμίστηκαν προς τα πάνω σε σύγκριση με τις πρωτεΐνες του πλάσματος των υγιών μαρτύρων. Με την εις βάθος πλατφόρμα μας για την πρωτεϊνική πλάσματος, εντοπίσαμε 759 πρωτεΐνες (Συμπληρωματικές Εικόνες 1, 4 και 5, διαθέσιμες στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348), τα οποία κατανεμήθηκαν σε περίπου 10 τάξεις μεγέθους στο πλάσμα (Εικόνα 1Β). Αυτές οι πρωτεΐνες περιελάμβαναν 410 βιοδείκτες πρωτεΐνης (Βάση δεδομένων βιοδεικτών πρωτεϊνών ανθρώπινων ασθενειών, διαδικτυακά στη διεύθυνση http://biokb.ncpsb. org. cn/hdpp/#/) και 388 θεραπευτικούς στόχους που είναι επί του παρόντος εγκεκριμένοι ή βρίσκονται υπό έρευνα σε συνεχείς κλινικές δοκιμές (Θεραπευτική Target Database, online στη διεύθυνση http://db.idrblab.net/ttd/) (Εικόνα 1Β). Οι λειτουργικοί σχολιασμοί αυτών των βιοδεικτών και των θεραπευτικών στόχων υποδεικνύουν ότι αυτές οι πρωτεΐνες ανήκουν σε διάφορες αυτοάνοσες και αυτοφλεγμονώδεις νόσους, συμπεριλαμβανομένης της BD, της νεφρίτιδας του λύκου, της αγκυλοποιητικής σπονδυλίτιδας και της αγγειίτιδας (Εικόνες 1C και 1D και συμπληρωματικοί πίνακες 7 και 8, διαθέσιμοι στο Arthritis & Rheum ιστοσελίδα στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι οι πρωτεΐνες του πλάσματος που ανιχνεύονται με την πλατφόρμα μας συνδέονται στενά με την εμφάνιση και την ανάπτυξη BD.

Σχήμα 1. Προσδιορισμός πρωτεϊνικών δειγμάτων πλάσματος από ασθενείς με νόσο Behçet (BD) χρησιμοποιώντας μια εις βάθος πλατφόρμα πρωτεομικής με φασματομετρία μάζας απόκτησης ανεξάρτητα από δεδομένα (DIA-MS) και ανάλυση μικροσυστοιχίας αντισωμάτων. Μια ροή εργασίας της πρωτεομικής μας μελέτης του BD. Β, Κατανομή των συγκεντρώσεων πρωτεΐνης πλάσματος που ανιχνεύθηκαν με DIA-MS και μικροσυστοιχία αντισωμάτων σύμφωνα με τις συγκεντρώσεις αναφοράς σε μια βάση δεδομένων πρωτεώματος ανθρώπινου πλάσματος (http://www.plasmaproteomedatabase.org/). Γ, Ασθένειες που σχετίζονται με τους ανιχνευμένους βιοδείκτες πρωτεΐνης, οι οποίοι ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια βάση δεδομένων βιοδεικτών πρωτεΐνης πλάσματος ανθρώπινης νόσου (HDPP) (http://biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/). Δ, Ασθένειες που σχετίζονται με τις ανιχνευμένες θεραπευτικές πρωτεΐνες-στόχους, οι οποίες ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μια βάση δεδομένων θεραπευτικού στόχου (TTD) (http://db.idrblab.net/ttd/). Τα μεγέθη των κύκλων σε C και D αντιστοιχούν στον αριθμό των πρωτεϊνών που εμπλουτίζονται σε κάθε ασθένεια. HC=υγιής έλεγχος. Προετοιμασία δείγματος με τη βοήθεια φίλτρου FASP =. QE-HF=Exactive HF Hybrid Quadrupole Orbitrap (ThermoFisher) φασματόμετρο μάζας. Strep-PE=στρεπταβιδίνη-φυκοερυθρίνη; ELISA=συνδεδεμένη με ένζυμο ανοσοπροσροφητικό προσδιορισμό. IgA=ανοσοσφαιρίνη Α.

Ανάλυση σε επίπεδο πρωτεώματος διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών πλάσματος που σχετίζονται με BD. Το συμπληρωματικό Σχήμα 1, διαθέσιμο στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348, δείχνει το διάγραμμα ροής του τρόπου με τον οποίο αναγνωρίστηκαν και ενσωματώθηκαν διαφορικά εκφρασμένες πρωτεΐνες από τα αποτελέσματα της μικροσυστοιχίας DIA-MS και αντισωμάτων. Συνολικά 493 πρωτεΐνες στοχεύτηκαν από το DIA-MS, από τις οποίες 379 πρωτεΐνες διατηρήθηκαν με<29 missing values in the BD group and < 7 missing values in the healthy control group. After 36 proteins with potential contaminations from blood cells (5) were removed, we analyzed 343 additional proteins for hypothesis testing, of which 166 proteins showed a statistically significant difference between the BD and healthy control groups. The antibody microarray detected 549 proteins. After 5 control proteins were removed, we retained 544 proteins for further analysis; of these, 74 proteins showed statistically significant differences between the BD group and the healthy control group (Supplementary Figure 1). In total, 220 (29.0%) of 759 proteins were significantly differently expressed between the BD group and the healthy control group (P < 0.05), as shown using our in-depth proteomics platform comprising DIA-MS and the antibody microarray (Figure 2A and Supplementary Figures 1 and 5, available at https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). The number of differentially expressed proteins is 10-fold more than previously reported (2,3,6). Among these proteins, 5 were identified as potential plasma or serum biomarkers in proteomics research for patients with BD, including haptoglobin, apoprotein, transthyretin, immunoglobulin light chain, and immunoglobulin heavy chain. Furthermore, growth arrest–specific 6, resistin, von Willebrand factor (VWF), and others were also identified to be increased in the BD group (Figure 2B). We identified 215 new proteins associated with BD, including serpin A3 (SERPINA3), glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D1 (GPLD1), and attractin (ATRN) (Figure 2C).

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Για να προσδιορίσουμε εάν οι ασθενείς με BD μπορούν να διακριθούν από τους υγιείς μάρτυρες, πραγματοποιήσαμε μια μη προκατειλημμένη ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης 220 διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών (P < 0.05), στην οποία 05), {3}}.0% των ασθενών με BD και 86.4% των υγιών μαρτύρων συγκεντρώθηκαν (Συμπληρωματικό Σχήμα 6, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/ 10.1002/άρθρ.42348). Μεταξύ 130 διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών (P < 0,01), βρήκαμε ότι το 88,6% των ασθενών με BD και το 95,5% των υγιών μαρτύρων συγκεντρώθηκαν (Εικόνα 2Δ). Περαιτέρω μερική ανάλυση διάκρισης ελαχίστων τετραγώνων αποκάλυψε ότι οι ασθενείς στην ομάδα BD ήταν σαφώς διακριτοί από τους υγιείς μάρτυρες σύμφωνα με την ταξινόμηση των διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών (Συμπληρωματικό Σχήμα 7, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Ο εμπλουτισμός ασθενειών με τη χρήση της πλατφόρμας DisGeNET (7) έδειξε περαιτέρω ότι αυτές οι διαφοροποιημένα εκφραζόμενες πρωτεΐνες σχετίζονται σημαντικά με φλεγμονή και αυτοάνοσες και αγγειακές παθήσεις, συμπεριλαμβανομένης της BD και της αγγειίτιδας (Εικόνα 2Ε και Συμπληρωματικός Πίνακας 9, διαθέσιμος στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Στη βιοπληροφορική μας ανάλυση χρησιμοποιώντας Cytoscape και CluGo, εντοπίστηκαν οι ακόλουθες 8 κύριες βιολογικές διεργασίες στο BD: 1) ενεργοποίηση συμπληρώματος, 2) ρύθμιση των επιπέδων σωματιδίων λιποπρωτεϊνών στο πλάσμα, 3) επούλωση τραυμάτων, 4) αγγειογένεση, 5) ανοσία που προκαλείται από λευκοκύτταρα, 6 ) δραστηριότητα πεπτιδάσης, 7) θετική ρύθμιση της κυτταρικής ενεργοποίησης και 8) μετανάστευση λευκοκυττάρων (Εικόνα 2ΣΤ και Συμπληρωματικός Πίνακας 10, διαθέσιμος στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 ). Αυτές οι βιολογικές διεργασίες συγκλίνουν στον παθολογικό μηχανισμό της φλεγμονής και της πήξης κατά την ανάπτυξη BD, στον οποίο τα λιπιδικά προφίλ και η τροποποίηση από το οξειδωτικό στρες κατά τη διάρκεια της φλεγμονής οδηγούν σε ενδοθηλιακή δυσλειτουργία και αγγειακά συμβάντα (8-11).

Κατά συνέπεια, η πιο σημαντική οδός από τη βάση δεδομένων KEGG (διαθέσιμη στη διεύθυνση http://www.genome.ad.jp/kegg) ήταν οι καταρράκτες συμπληρώματος και πήξης (Εικόνα 3Α), όπου 38 πρωτεΐνες (P < 0.05 ) ταυτοποιήθηκαν, συμπεριλαμβανομένων 19 συστατικών συμπληρωμάτων (C) (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, C4B, C4b-δεσμευτική πρωτεΐνη άλφα αλυσίδα [C4BPA], C5, C6, C7, C8 άλφα αλυσίδα, C8 βήτα αλυσίδα, C8 γάμμα αλυσίδα [C8G], C9, παράγοντας συμπληρώματος [CF] B, CFH, πρωτεΐνη 4 [CFHR4] που σχετίζεται με CFH, CFI και πρωτεΐνη παρόμοια με τον υποδοχέα 1 του συστατικού), 5 παράγοντες πήξης (F11, F12, F13B, F5 και F9 ), 4 πρωτεΐνες που σχετίζονται με την πήξη (ενεργοποιητής πλασμινογόνου τύπου ιστού [PLAT], πρωτεΐνη C, αντιπηκτική πρωτεΐνη S [PROS1] και VWF) και 5 πρωτεΐνες οικογένειας σερπινών (SERPINA1, SERPINC1, SERPIND1, SERPINF2 και SERPING1). Είκοσι πέντε πρωτεΐνες στον καταρράκτη ήταν στόχοι που μπορούν να ληφθούν από φάρμακα για θεραπευτική αγωγή (Εικόνα 3Β). Είναι ενδιαφέρον ότι οι περισσότερες πρωτεΐνες που περιλαμβάνονται στο μονοπάτι KEGG και οι καταρράκτες του συμπληρώματος και της πήξης επικαλύπτονται με εκείνες που εμπλέκονται στις πιο εμπλουτισμένες βιολογικές διαδικασίες πήξης αίματος/επούλωσης πληγών (Εικόνα 3Β και Συμπληρωματικός Πίνακας 10, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/ doi/10.1002/art.42348.). Διάφορες οδοί παθογόνων λοιμώξεων εντοπίστηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση μονοπατιού KEGG στη μελέτη, συμπεριλαμβανομένης της λοίμωξης από Staphylococcus aureus, της νόσου πριόν, του κοκκύτη, της λοίμωξης από τον ιό των ανθρώπινων θηλωμάτων, του ιού απλού έρπητα 1 και των αλληλεπιδράσεων ιικών πρωτεϊνών με κυτοκίνη και υποδοχέα κυτοκίνης, υπογραμμίζοντας τον ρόλο της παθογόνου μόλυνσης σε BD (Συμπληρωματικό Σχήμα 8Α, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνσηhttps://onlineβιβλιοθήκη.

Σχήμα 2. Οι πρωτεΐνες εκφράστηκαν διαφορετικά μεταξύ των ασθενών με BD και των υγιών ομάδων ελέγχου που ταυτοποιήθηκαν με DIA-MS και μικροσυστοιχία αντισωμάτων. Μια γραφική παράσταση Ηφαιστείου που απεικονίζει τις πρωτεΐνες που δεν ρυθμίζονται σε ασθενείς με BD έναντι υγιών ομάδων ελέγχου. Σημαντικά ρυθμιζόμενες προς τα πάνω και προς τα κάτω πρωτεΐνες (P < 0.05) υποδεικνύονται ως κόκκινες και μπλε κουκκίδες, αντίστοιχα. Β, Διαγράμματα διασποράς που δείχνουν την ένταση έκφρασης αντιπροσωπευτικών πρωτεϊνών στο πλάσμα ασθενών με BD και υγιών μαρτύρων. Τα σύμβολα αντιπροσωπεύουν μεμονωμένα δείγματα. οι οριζόντιες γραμμές υποδεικνύουν τη διάμεσο. C, διάγραμμα Venn που συγκρίνει τον αριθμό των διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών σε ασθενείς με BD που προσδιορίστηκαν στη μελέτη μας με εκείνες που εντοπίστηκαν σε προηγούμενες μελέτες. D, Ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών (P < 0.01) μεταξύ των ομάδων BD και υγιών μαρτύρων, όπου συγκεντρώθηκαν το 88,6% των ασθενών με BD και το 95,5% των HCs. Η διακεκομμένη ορθογώνια περιοχή υποδεικνύει κάθε ομάδα μαζί με αντίστοιχες πρωτεΐνες υψηλής έκφρασης. Ε, Εμπλουτισμός ασθενειών (που προέρχονται από την πλατφόρμα DisGeNET) που σχετίζονται με μη ρυθμισμένες πρωτεΐνες σε ασθενείς με BD σε σχέση με υγιείς μάρτυρες (log10 [q value] < -15). F, Σημαντικά εμπλουτισμένες βιολογικές διεργασίες που προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες σε ασθενείς με BD σε σχέση με τους ελέγχους υγείας (P < 0.05). *=P < 0,05; **=P < 0,01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. GAS6=αναστολή ανάπτυξης–ειδικά 6; RETN=resistin; VWF=παράγοντας von Willebrand; SERPINA3=σερπίνη Α3 (1-αντιχυμοθρυψίνη); GPLD1=γλυκοσυλφωσφατιδυλινοσιτόλη-ειδική φωσφολιπάση D1. ATRN=προσέλκυση (βλ. Εικόνα 1 για άλλους ορισμούς).

Εικόνα 3. Μονοπάτια σηματοδότησης που σχετίζονται με την παθογένεση του BD. A, Σημαντικά εμπλουτισμένα μονοπάτια σηματοδότησης που σχετίζονται με διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες σε ασθενείς με BD σε σχέση με υγιείς μάρτυρες που εντοπίστηκαν χρησιμοποίησαν τις βάσεις δεδομένων KEGG και Reactome (P < 0.01). Η κόκκινη γραμματοσειρά υποδεικνύει μονοπάτια που σχετίζονται με την πήξη του αίματος και την ενεργοποίηση του συμπληρώματος. Β, καταρράκτες συμπληρώματος και πήξης, που προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων KEGG, που δείχνουν τις πιο σημαντικές συσχετίσεις με διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες στους ασθενείς με BD σε σχέση με υγιείς μάρτυρες. Υποδεικνύονται οι πρωτεΐνες υπογραφής που μπορούν να στοχευθούν από γνωστά εγκεκριμένα φάρμακα. C και D, Ο σημαντικά εμπλουτισμένος τομέας πρωτεΐνης (C) και τα κυτταρικά συστατικά (D) που προσδιορίζονται από τις σημαντικά εκφρασμένες πρωτεΐνες σε ασθενείς με BD σε σχέση με υγιείς μάρτυρες (P <0,01). Στα A, C και D, τα μήκη ράβδων υποδεικνύουν τη λογαριθμική βάση 10 της τιμής P και οι αριθμοί δίπλα στις ράβδους υποδεικνύουν τον αριθμό των πρωτεϊνών που εμπλέκονται σε κάθε κατηγορία. IGF=ινσουλινοειδής αυξητικός παράγοντας. IGFBP=πρωτεΐνη που δεσμεύει τον αυξητικό παράγοντα που μοιάζει με ινσουλίνη. C=συμπλήρωμα; ER=ενδοπλασματικό δίκτυο; ECM=εξωκυτταρική μήτρα. Το CUB=συμπληρώνει τα C1r/C1s, Uegf και Bmp1. EGF=επιδερμικός αυξητικός παράγοντας. Πάνω=ρυθμίστηκε προς τα πάνω. Κάτω=ρυθμίστηκε προς τα κάτω (δείτε Εικόνα 1 για άλλους ορισμούς).

wiley.com/doi/10.1002/art.42348) (12–17). Η οδός KEGG της λοίμωξης από Staphylococcus aureus που περιλαμβάνει 13 διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες (P <0,05) εμπλουτίστηκε σημαντικά (μερικές από αυτές σημειώνονται στο Συμπληρωματικό Σχήμα 8Β), υποδηλώνοντας το ρόλο της μόλυνσης από Staphylococcus aureus στην παθογένεση της BD (18,19). Τέλος, η ανάλυση εμπλουτισμού εντόπισε τομείς συμπληρώματος, συμπεριλαμβανομένης της περιοχής που είναι άφθονη σε πρωτεΐνες ελέγχου συμπληρώματος, επανάληψη σούσι, σύμπλοκο επίθεσης μεμβράνης/περφορίνη, περιοχή συστατικού συμπληρώματος C1q και περιοχή CUB (για συμπληρώματα C1r/C1s, Uegf και Bmp1 ) (Εικόνα 3Γ). Η ανάλυση εμπλουτισμού κυτταρικών συστατικών αποκάλυψε ότι οι προς τα πάνω ρυθμισμένες πρωτεΐνες εμπλουτίστηκαν, μεταξύ άλλων, στην εξωκυτταρική μήτρα που περιέχει κολλαγόνο, τον αυλό των εκκριτικών κόκκων, τον άλφα κόκκο αιμοπεταλίων και το σωματίδιο λιποπρωτεΐνης πλάσματος, αλλά οι προς τα κάτω ρυθμισμένες πρωτεΐνες εμπλουτίστηκαν κυρίως στο εξωκυτταρικός χώρος και εξώσωμα (Εικόνα 3D).

Για να διερευνήσουμε την επίδραση της θεραπείας στις πρωτεΐνες του πλάσματος, ομαδοποιήσαμε τους ασθενείς με BD σύμφωνα με τη θεραπεία με GC και ανοσοκατασταλτικά. Οι ασθενείς με BD με ή χωρίς θεραπεία θα μπορούσαν να διακριθούν σαφώς από τους υγιείς μάρτυρες (Συμπληρωματικό Σχήμα 9Α, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art. 42348). Η ανάλυση έδειξε ότι οι περισσότερες βιολογικές διεργασίες που άλλαξαν σε ασθενείς με BD που υποβλήθηκαν σε θεραπεία έναντι ασθενών με BD που δεν έλαβαν θεραπεία με GCs και ανοσοκατασταλτικά σχετίζονταν με τη ρύθμιση των ανοσολογικών αποκρίσεων (Συμπληρωματικό Σχήμα 9Β). Συγκρίναμε επίσης τη διαφορική έκφραση των πρωτεϊνών του πλάσματος μεταξύ ασθενών με BD χωρίς θεραπεία και ασθενών με BD που λάμβαναν GC και ανοσοκατασταλτική θεραπεία. Τα αποτελέσματα εντόπισαν 68 διαφορικά εκφρασμένες πρωτεΐνες (P <0,05) που εμπλέκονται, για παράδειγμα, στη ρύθμιση των επιπέδων σωματιδίων λιποπρωτεϊνών πλάσματος και της κάθαρσης και της δραστηριότητας ενδοπεπτιδάσης τύπου σερίνης (Συμπληρωματικό Σχήμα 10, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

Τοπίο πρωτεωμικής του οργάνου-αναλυμένου BD. Η BD είναι μια εξαιρετικά ετερογενής νόσος με πολυοργανική συμμετοχή, η οποία εμφανίζεται με διαφορετικές φαινοτυπικές εκδηλώσεις (Συμπληρωματικός Πίνακας 1, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art .42348). Μελέτες έχουν προσπαθήσει να υποκατηγοριοποιήσουν την BD με βάση τις κλινικές εκδηλώσεις (20-23). Για τη διερεύνηση της ετερογένειας μεταξύ των ασθενών με BD με βάση τα πρωτεομικά δεδομένα, πραγματοποιήσαμε συναινετική ομαδοποίηση χωρίς επίβλεψη στις 220 διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες (Εικόνα 4Α). Η ανάλυση των κύριων συστατικών αποκάλυψε έναν διακριτό διαχωρισμό του υποτύπου Ι και του υποτύπου II από τον υποτύπο III (Εικόνα 4Β). Οι ειδικές πρωτεΐνες του υποτύπου Ι εμπλέκονται κυρίως στην πήξη του αίματος και στην ενεργοποίηση του συμπληρώματος, οι ειδικές πρωτεΐνες του υποτύπου ΙΙ εμπλέκονται κυρίως στο μεταβολισμό της γλυκόζης και των πρωτεϊνών-λιπιδίων και οι ειδικές πρωτεΐνες του υποτύπου III συμμετέχουν στη φλεγμονώδη απόκριση (Εικόνα 4D και Συμπληρωματικό Σχήμα 11, διατίθεται στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Αν και δεν βρέθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφορές σχετικά με τα κλινικά χαρακτηριστικά μεταξύ των ομάδων BD με υποτύπο πρωτεϊνικής, βρήκαμε ότι ο υποτύπος Ι και ο υποτύπος II ήταν παρόμοιοι (Εικόνα 4Β), κάτι που ήταν συνεπές με τα αποτελέσματα της ανάλυσης των κύριων συστατικών. Οι ασθενείς με BD με υποτύπο Ι και υποτύπο ΙΙ είχαν υψηλότερα ποσοστά σοβαρών συμπτωμάτων, συμπεριλαμβανομένης της προσβολής του νευρικού συστήματος (13,8% στον υποτύπο Ι και 8,2% στον υποτύπο ΙΙ έναντι 0% στον υποτύπο III) και της αγγειακής συμμετοχής (27,6% στον υποτύπο Ι και 22,4 % μεταξύ του υποτύπου II έναντι 0% μεταξύ του υποτύπου III). Αν και οι ασθενείς με BD με υποτύπο ΙΙΙ είχαν σχετικά ήπια έως μέτρια συμπτώματα, παρουσίασαν υψηλότερο ποσοστό δερματικών βλαβών (87,5% στον υποτύπο ΙΙΙ έναντι 51,7% στον υποτύπο Ι και 65,3% στον υποτύπο ΙΙ) (Εικόνα 4Ε, Συμπληρωματικός Πίνακας 11, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Υπάρχουν συσσωρευμένα στοιχεία που δείχνουν αλλαγές σε πολλαπλές βιολογικές διεργασίες κατά την ανάπτυξη BD, συμπεριλαμβανομένης της αυτοφλεγμονής, της ανισορροπίας της οξειδοαναγωγής, των μεταβολικών αλλαγών, της δυσλιπιδαιμίας και της δυσλειτουργίας της πήξης (8,24-27). Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν ότι, αν και οι ασθενείς με BD που ανήκουν στις ομάδες πρωτεομικής υποτύπου Ι και υποτύπου II έχουν υψηλότερη σοβαρότητα BD, οι βιολογικοί μηχανισμοί για τις 2 ομάδες μπορεί να είναι διαφορετικοί.

φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα

Πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση συστάδων της κοόρτης BD με βάση κλινικά δεδομένα (φύλο, ηλικία, βαθμολογία σοβαρότητας και κλινικές εκδηλώσεις) χρησιμοποιώντας μια ανάλυση ομαδοποίησης {{0}}βημάτων (23). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Ε, οι ασθενείς με BD ταξινομήθηκαν σε 2 ομάδες (ομάδες 1 και 2), όπου οι ασθενείς κατηγοριοποιήθηκαν με συμπτώματα όπως στοματικά έλκη, δερματικές αλλοιώσεις, οφθαλμικές βλάβες και έλκη των γεννητικών οργάνων. Οι ασθενείς με BD στην ομάδα 1 είχαν σημαντικά μεγαλύτερη συχνότητα εμφάνισης του φαινοτύπου της αρθρίτιδας που περιλαμβάνει συμπτώματα αρθραλγίας (40,0%) και εμπλοκή του γαστρεντερικού (8,9%), του αγγειακού (48,9%) και του νευρικού συστήματος σε σύγκριση με τους ασθενείς με BD σε ομάδα 2. Στη συνέχεια, συγκρίναμε την κλινική και πρωτεϊνική ταξινόμηση στην ίδια κοόρτη BD. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι ασθενείς στις ταξινομήσεις υποτύπου I και II proteomics και στην κλινική ομάδα 1 μοιράζονταν παρόμοια κλινικά χαρακτηριστικά, με τους ασθενείς να παρουσιάζουν πολυοργανική συμμετοχή (δηλαδή, γαστρεντερικό, αγγειακό και νευρικό σύστημα) και υψηλότερη βαρύτητα της νόσου (Εικόνα 4Ε). Αντίθετα, οι ασθενείς στην κατηγορία πρωτεϊνικής υποτύπου III και στην κλινική ομάδα 2 εμφάνισαν παρόμοια κλινικά χαρακτηριστικά, χωρίς κανένας να καταδεικνύει συμμετοχή του γαστρεντερικού, του αγγειακού και του νευρικού συστήματος. Αυτά τα ευρήματα μπορούν περαιτέρω να υποστηριχθούν από μη προκατειλημμένες αναλύσεις ιεραρχικής ομαδοποίησης (Εικόνα 4ΣΤ), στις οποίες οι ασθενείς στον υποτύπο ΙΙΙ της πρωτεωμικής συγκεντρώθηκαν με την κλινική ομάδα 2 και οι ασθενείς στον υποτύπο πρωτεομικής Ι και ΙΙ ομαδοποιήθηκαν με την κλινική συστάδα 1. Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν τη δυνητική χρησιμότητα της ταξινόμησης πρωτεομικής για την ένδειξη της ετερογένειας και της σοβαρότητας της BD. Η θεραπευτική στρατηγική για ασθενείς με BD εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τα κλινικά χαρακτηριστικά και το όργανο που εμπλέκεται. Ωστόσο, τα πρωτεομικά χαρακτηριστικά της BD που αναλύεται σε όργανα είναι άγνωστα.

Σχήμα 4. Ταξινόμηση ασθενών με BD χρησιμοποιώντας πρωτεομικές και κλινικές μεταβλητές πλάσματος. A, Heatmap του συναινετικού πίνακα που δείχνει συνυπάρχουσες αναλογίες ασθενών με BD με κάθε υποτύπο πρωτεϊνικής. Β, Ανάλυση βασικών συστατικών των πρωτεομικών υποτύπων I, II και III σε ασθενείς με BD, που δείχνει αξιοσημείωτες διαφορές μεταξύ των ομάδων. C, Ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών (P < 0.05, μέση διαφορά έκφρασης P > 0,2) στους 3 υποτύπους πρωτεϊνικής σε ασθενείς με BD. Δ, Λειτουργικές ομάδες βιολογικών διεργασιών σύμφωνα με τις ειδικές πρωτεΐνες που σχετίζονται με τους 3 υποτύπους. Ε, Κατανομή δημογραφικών και κλινικών χαρακτηριστικών των ασθενών με BD σύμφωνα με υποτύπους πρωτεομικής και ομάδες κλινικής ταξινόμησης. F, Κατανομή κάθε κλινικού χαρακτηριστικού σύμφωνα με τους υποτύπους πρωτεομικής και τις ομάδες κλινικής ταξινόμησης στην κοόρτη BD, με βάση τη μη προκατειλημμένη ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης. Δείτε την Εικόνα 1 για ορισμούς.

Σχήμα 5. Χαρτογράφηση τοπίου BD που αναλύεται σε όργανα χρησιμοποιώντας πρωτεομική πλάσματος. A, Proteomics Landscape of organ-resolved BD. Αριστερά: Διάγραμμα που απεικονίζει την πολλαπλή αλλαγή στην έκφραση πρωτεΐνης σε ασθενείς με BD σε σχέση με υγιείς μάρτυρες σύμφωνα με τον φαινότυπο. Τα 3 μπλοκ αντιπροσωπεύουν, από αριστερά προς τα δεξιά, υγιείς μάρτυρες, ασθενείς με BD χωρίς (wo) αντίστοιχα συμπτώματα και ασθενείς BD με αντίστοιχα συμπτώματα. Η ένταση του χρώματος κάθε μπλοκ είναι ανάλογη με την αλλαγή της πτυχής στην έκφραση πρωτεΐνης μεταξύ των ομάδων BD και υγιών μαρτύρων. Το κόκκινο και το μπλε υποδεικνύουν πρωτεΐνες που ρυθμίζονται προς τα πάνω και προς τα κάτω, αντίστοιχα. Σωστά, η βιολογική διαδικασία που σχετίζεται με κάθε διαφορικά εκφρασμένη πρωτεΐνη, με γκρίζα ένταση τετραγώνων που υποδεικνύουν την τιμή P βάσει λογαριθμικής10-και τον αριθμό που υποδεικνύει τον αριθμό των πρωτεϊνών που εμπλέκονται σε κάθε κατηγορία. Β, Συσχέτιση (Pearson ή Spearman) μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης 2 που δεσμεύει την υαλουρονάνη (HABP2), της τενασκίνης C (TNC) και της σερπίνης Α3 (1-αντιχυμοθρυψίνη) (SERPINA3) και των βαθμολογιών σοβαρότητας των ασθενών με BD. Η σκίαση υποδεικνύει 95% CI. Γ, Διαγράμματα βιολιού που δείχνουν την ένταση έκφρασης των HABP2, TNC και SERPINA3 έναντι της σοβαρότητας της νόσου στον υγιή μάρτυρα και στις ήπιες, μέτριες και σοβαρές ομάδες BD. Τα σύμβολα αντιπροσωπεύουν μεμονωμένα δείγματα. η διακεκομμένη κόκκινη οριζόντια γραμμή υποδηλώνει τη διάμεσο, με τις πάνω και κάτω διακεκομμένες μαύρες γραμμές να υποδεικνύουν το εύρος των τεταρτημορίων. *=P < 0.{{20}}5; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Δείτε την Εικόνα 1 για ορισμούς.

Έτσι, εντοπίσαμε 58 πρωτεΐνες που εκφράζονται ειδικά σε διαφορετικές ομάδες ασθενών με BD που εμφάνισαν διαφορετικούς φαινότυπους οργάνων (Εικόνα 5Α). Η αναζήτησή μας στη βάση δεδομένων DrugBank (διαθέσιμη στη διεύθυνση https://go.drugbank.com/) αποκάλυψε ότι 26 πρωτεΐνες, συγκεκριμένα, απολιποπρωτεΐνη A-IV, CFI, σερουλοπλασμίνη (CP), γλουταμική αφυδρογονάση 1 (GLUD1), πρωτεΐνη δέσμευσης υαλουρονικού 2 (HABP2), F5, SERPINC1, SERPINA3, πρωτεΐνη υποδοχέα τρανσφερίνης 1 (TFRC), VWF, SERPINF2, CD44, υποδοχέας περιοχής Fc III-A, αμινοτρανσφεράση αλανίνης 1, υδρολάση λευκοτριενίου Α{16}}, προπρωτεϊνική κονβερτάση σουμπτιλισίνη/ 9, αγγειοτενσινογόνο, C8G, απτοσφαιρίνη, πεπτιδυλ-προλυλ cis-trans ισομεράση Α, σεληνοπρωτεΐνη P, SERPIND1, SERPING1, C4BPA, λεμφοτοξίνη άλφα, C4B και βαριά αλυσίδα 4 της ενδοθρυψίνης, είναι στόχοι θεραπευτικών φαρμάκων ή που χρησιμοποιούνται στην ανάπτυξη θεραπευτικών φαρμάκων (Συμπληρωματικός Πίνακας 12, διαθέσιμος στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Μεταξύ των φαινοτύπων, ο φαινότυπος της αρθρίτιδας που περιλαμβάνει συμπτώματα αρθραλγίας εμπλουτίζεται με τις βιολογικές διεργασίες που σχετίζονται με την αυτοανοσία, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης της χυμικής ανοσολογικής απόκρισης που προκαλείται από τις κυκλοφορούσες ανοσοσφαιρίνες, της ρύθμισης της ανοσίας που προκαλείται από Β κύτταρα και της ρύθμισης της ανοσολογικής απόκρισης που προκαλείται από ανοσοσφαιρίνη ; ο γαστρεντερικός φαινότυπος σχετίζεται με τη ρύθμιση της ενεργοποίησης του συμπληρώματος και της ανοσίας που προκαλείται από Β κύτταρα. ο φαινότυπος που εμπλέκεται στην καρδιά σχετίζεται με τη δραστηριότητα του υποδοχέα κυτοκίνης, τη ρύθμιση της μεταβολικής διαδικασίας του κολλαγόνου και την αποσυναρμολόγηση της εξωκυτταρικής μήτρας. ο φαινότυπος της επιδιδυμίτιδας σχετίζεται με την απόκριση οξείας φάσης. και ο φαινότυπος της δερματικής βλάβης σχετίζεται με τη δραστηριότητα αναστολέα ενδοπεπτιδάσης τύπου σερίνης, την πήξη του αίματος, την χυμική ανοσολογική απόκριση που προκαλείται από την κυκλοφορούσα ανοσοσφαιρίνη και άλλες διεργασίες (Εικόνα 5Α και Συμπληρωματικός Πίνακας 13, διαθέσιμος στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary .wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348).

Ο αγγειακός φαινότυπος έχει τον μεγαλύτερο αριθμό διαφορικά εκφραζόμενων πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένης της GLUD1, της τενασκίνης C (TNC), του υποκαταστάτη χημειοκίνης με μοτίβο XC, του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα που περιέχει την πρωτεΐνη εξωκυτταρικής μήτρας 1, HABP2, F5, ATRN, SERPINC1, GPLD1, σε πρωτεΐνη 6 που δεσμεύει αυξητικό παράγοντα, 2 που δεσμεύει μαννόζη λεκτίνης, SEPRINA3, TFRC, VWF, SERPINF2 και ριβονουκλεάση Α μέλος της οικογένειας 4 (Εικόνα 5Α). Η βιοπληροφορική ανάλυση αποκάλυψε περαιτέρω ότι αυτές οι διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες εμπλέκονται στην αποκοκκίωση των αιμοπεταλίων, στην πήξη του αίματος, στη μεταμεταφραστική φωσφορυλίωση πρωτεΐνης, στη δραστηριότητα αναστολέα της ενδοπεπτιδάσης τύπου σερίνης και στην οξεία φλεγμονώδη απόκριση, μεταξύ άλλων λειτουργιών. Όλα αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν το πρωτεομικό τοπίο της αναλυόμενης σε όργανα BD, από την οποία θα μπορούσε να αναπτυχθεί εξατομικευμένη φαρμακευτική αγωγή για τις πρωτεΐνες-στόχους σε κάθε φαινότυπο οργάνου.

Οφέλη από το cistanche για τους άνδρες-ενισχύουν το ανοσοποιητικό σύστημα

Identification of plasma proteins related to BD severity. Among the 220 unique differentially expressed proteins (P < 0.05), 28 were positively correlated with the severity of BD (Figures 5B and 5C and Supplementary Figure 12, available on the Arthritis & Rheumatology website at https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Seven proteins displayed a linear correlation with the severity score, namely, TNC, HABP2, SERPINA3, F5, ATRN, C4B, and CFH (Figure 5B and Supplementary Figure 12A). The expression of these 7 proteins was up-regulated in the severe BD group compared with the mild and moderate BD groups and the healthy control group, as indicated in the scatter plot in Figure 5C (see also Supplementary Figure 12A). Next, we selected and validated 7 protein candidates (TNC, HABP2, SERPINA3, ATRN, C4BPA, GPLD1, and C5) in an independent cohort composed of 108 patients with BD and 29 healthy controls by using quantitative ELISA (Supplementary Table 3, available at https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). The reproducibility of the ELISA for the validation of plasma proteins was >0.9 (Συμπληρωματική Εικόνα 13, διαθέσιμη στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348). Τα αυξημένα επίπεδα πλάσματος των HABP2, TNC και SERPINA3 επιβεβαιώθηκαν στην ομάδα BD σε σύγκριση με την υγιή ομάδα ελέγχου (Εικόνα 6Α), καθώς και η συσχέτισή τους με τη σοβαρότητα της νόσου (Εικόνες 6Β και 6Γ). Συγκρίναμε επίσης την έκφραση του HABP2, όπως αξιολογήθηκε με χρήση ELISA, μεταξύ ασθενών με BD (n=39) και ομάδων ελέγχου ασθενών με αρτηρίτιδα Takayasu (n=8) και υγιών μαρτύρων (n {= 10 ) (Συμπληρωματικό Σχήμα 14 και Συμπληρωματικός Πίνακας 5, διαθέσιμος στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348.). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η συγκέντρωση HABP2 ήταν σημαντικά υψηλότερη στην ομάδα BD από τη συγκέντρωση στην αρτηρίτιδα Takayasu και υγιείς ομάδες ελέγχου (Συμπληρωματικό Σχήμα 14), υποδεικνύοντας την ειδικότητα του HABP2 ως δυνητικού βιοδείκτη για τη διάγνωση BD.

Σύμφωνα με τη βαθμολογία σοβαρότητας Krause, τα αγγειακά συμπτώματα έχουν μέγιστο βάρος. Έτσι, χωρίσαμε τους ασθενείς σε αγγειακές ομάδες BD και μη αγγειακές ομάδες BD ανάλογα με την παρουσία φλεβικής θρόμβωσης, αρτηριακής στένωσης, απόφραξης, διαστολής ή ανευρύσματος (Συμπληρωματικός Πίνακας 4, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary. wiley.com/doi/1 0.10{{2{0}}2/άρθρ.42348). Συγκρίναμε τα επίπεδα έκφρασης των HABP2, TNC και SERPINA3 μεταξύ των αγγειακών BD, των μη αγγειακών BD και των υγιών ομάδων ελέγχου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι 3 πρωτεΐνες ρυθμίστηκαν σημαντικά προς τα πάνω στην αγγειακή ομάδα BD (Εικόνα 6D). Πραγματοποιήθηκε επίσης ανάλυση καμπύλης χαρακτηριστικής λειτουργίας δέκτη για HABP2, TNC και SERPINA3, στην οποία προσδιορίστηκαν η αποκοπή, η ευαισθησία και η ειδικότητα (Συμπληρωματικός Πίνακας 14, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1{{24 }}.1002/άρθρ. 42348.). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το HABP2 (περιοχή κάτω από την καμπύλη [AUC] 0,68, ευαισθησία 0,69 και ειδικότητα 0,69) και το TNC (AUC 0,71, ευαισθησία 0,58 και ειδικότητα 0,77) μπορούν να διακρίνουν την αγγειακή από τη μη αγγειακή BD. Τα επίπεδα των 3 βιοδεικτών συγκρίθηκαν μεταξύ ασθενών με ανενεργό και ενεργό αγγειακό BD. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης των HABP2, TNC και SERPINA3 ήταν σταθερά υψηλότερα σε ασθενείς με BD ανεξάρτητα από την αγγειακή δραστηριότητα BD (Συμπληρωματικό Σχήμα 15, διαθέσιμο στον ιστότοπο Arthritis & Rheumatology στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi /10.1002/άρθρ.42348).

Εικόνα 6. Επικύρωση των αγγειακών βιοδεικτών BD όπως αξιολογήθηκαν με ELISA στην ανεξάρτητη κοόρτη. A, C και D, συγκεντρώσεις πλάσματος (Conc) της πρωτεΐνης 2 (HABP2) που δεσμεύει την υαλουρονίνη, της τενασκίνης C (TNC) και της σερπίνης A3 (1-αντιχυμοθρυψίνη) (SERPINA3) στην υγιή ομάδα ελέγχου έναντι όλων των BD ασθενείς (A), έναντι ασθενών BD στις ομάδες ήπιας, μέτριας και σοβαρής νόσου (C) και έναντι μη αγγειακών BD (N-VBD) και αγγειακών BD (VBD) ασθενών (D). Β, Συσχέτιση (Pearson ή Spearman) μεταξύ των συγκεντρώσεων HABP2, TNC και SERPINA3 και βαθμολογιών σοβαρότητας BD. Η σκίαση υποδεικνύει 95% CI. *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Δείτε την Εικόνα 1 για ορισμούς.

Ανάλυση συσχέτισης μεταξύ πρωτεϊνών πλάσματος, βαθμολογίας μορφής τρέχουσας δραστηριότητας της νόσου Behçet και κλινικών δεδομένων. Το HABP2, το TNC και το SERPINA3 έδειξαν αυξημένα επίπεδα στην ενεργό ομάδα BD σε σύγκριση με την ανενεργή ομάδα BD και υγιείς ομάδες ελέγχου (P < 0.001) (Συμπληρωματικό Σχήμα 16A, διαθέσιμο στο Arthritis & Rheumatology). ιστοσελίδα στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Το επίπεδο της SERPINA3 ήταν αυξημένο σε ομάδες με υψηλές βαθμολογίες της μορφής τρέχουσας δραστηριότητας της νόσου Behçet (BDCAF) (Συμπληρωματικό Σχήμα 16Β). Επιπλέον, σε ασθενείς με BD, τα επίπεδα των βαθμολογιών SERPINA3 και BDCAF συσχετίστηκαν θετικά (r=0.39, p=0.0036), ενώ τα επίπεδα HABP2 και TNC δεν έδειξαν θετική συσχέτιση με την Βαθμολογίες BDCAF. Αναλύσαμε περαιτέρω τη συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του ασθενούς στο πλάσμα και των κλινικών δεδομένων (Συμπληρωματικό Σχήμα 17Α και Συμπληρωματικός Πίνακας 15, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Ένας συντελεστής συσχέτισης r > 0,3 επισημάνθηκε στην γραφική παράσταση της χορδής. Αντιπροσωπευτικά διαγράμματα διασποράς φαίνονται στα συμπληρωματικά σχήματα S17B–G. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα HABP2, TNC και SERPINA3 συσχετίστηκαν θετικά με το επίπεδο C-αντιδρώσας πρωτεΐνης, τον αριθμό ουδετερόφιλων, το πλάτος κατανομής ερυθρών αιμοσφαιρίων, την αναλογία ουδετερόφιλων προς λεμφοκύτταρα, τον αριθμό των αιμοπεταλίων και το πλάτος κατανομής των αιμοπεταλίων. Όλα αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα HABP2, TNC και SERPINA3 σχετίζονται λειτουργικά με τη φλεγμονή, τη λειτουργία του ενδοθηλίου και την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και μπορεί να χρησιμεύσουν ως βιοδείκτες για να υποδείξουν τη σοβαρότητα και τη δραστηριότητα της BD, η οποία θα πρέπει να επικυρωθεί σε διαφορετική κλινική κοόρτη στο μέλλον. .

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Η BD είναι μια συστηματική αγγειίτιδα με ετερογενή κλινική εικόνα που αντανακλά τους διαφορετικούς παθογόνους μηχανισμούς που είναι υπεύθυνοι για την πρόκληση φλεγμονής σε αρτηρίες και φλέβες όλων των μεγεθών σε ανθρώπινους ιστούς και όργανα. Σε αυτή τη μελέτη, εντοπίσαμε ένα μεγάλο σύνολο απορρυθμισμένων πρωτεϊνών (n=220) στην ομάδα ασθενών με BD που συμμετέχουν σε διαφορετικές βιολογικές διεργασίες και χρησιμοποιήσαμε ανάλυση βιοπληροφορικής για να προσδιορίσουμε την αλληλεπίδραση ανοσολογικής φλεγμονής, την παρουσία θρόμβωσης και ο παθολογικός ρόλος που διαμεσολαβείται από το σύστημα συμπληρώματος στην BD. Η ανάλυση KEGG αποκάλυψε περαιτέρω τη συσχέτιση της BD με τους καταρράκτες του συμπληρώματος και της πήξης και τη βακτηριακή μόλυνση. Το σύστημα συμπληρώματος μεσολαβεί στην έμφυτη ανοσία και τη φλεγμονή για την άμυνα έναντι των παθογόνων με αποκοκκίωση, χημειοταξία, φαγοκυττάρωση, σηματοδοτική οδό υποδοχέα Β κυττάρων και λύση κυττάρων από το σύμπλεγμα επίθεσης μεμβράνης, ενώ οι καταρράκτες πήξης εμπλέκονται στην αντιφλεγμονώδη απόκριση, αγγειοδιαστολή. αυξημένη ενδοθηλιακή διαπερατότητα και ενεργοποίηση αιμοπεταλίων. Χρησιμοποιώντας δεδομένα συσχέτισης σε όλο το γονιδίωμα, οι Bakir-Gungor et al έδειξαν ότι ο καταρράκτης του συμπληρώματος και της πήξης είναι 1 από τα 6 κοινά μονοπάτια μεταξύ Τούρκων και Ιαπώνων ασθενών με BD, το οποίο υποστηρίζει τα αποτελέσματά μας από το γενετικό υπόβαθρο και καταδεικνύει περαιτέρω τον φλεγμονώδη μηχανισμό και την αγγειοπάθεια/ θρομβοφιλία στην παθογένεση BD (28). Η ανοσία που προκαλείται από λευκοκύτταρα, η θετική ρύθμιση της κυτταρικής ενεργοποίησης και η μετανάστευση λευκοκυττάρων καταδεικνύουν τις ενεργές ανοσολογικές και φλεγμονώδεις αποκρίσεις στην BD. Τα ουδετερόφιλα ενεργοποιούνται για να παράγουν ελεύθερες ρίζες οξυγόνου και εξωκυτταρικές παγίδες ουδετερόφιλων, προκαλώντας φλεγμονώδη βλάβη στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα, φλεβική θρόμβωση και ανευρύσματα. Τα ενεργά είδη οξυγόνου που παράγονται από ενεργά ουδετερόφιλα θα μπορούσαν επίσης να προκαλέσουν οξείδωση και τροποποίηση λιπιδίων και λιποπρωτεϊνών, ιδιαίτερα λιποπρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας, όπως φαίνεται με αυξημένη υπεροξείδωση λιπιδίων (9,11), η οποία κατά συνέπεια αυξάνει τον καρδιαγγειακό κίνδυνο (9,10) και, σειρά, αυξάνει τη φλεγμονώδη απόκριση (10). Αυτό το συμβάν είναι σύμφωνο με τις βιολογικές διαδικασίες ρύθμισης των επιπέδων σωματιδίων λιποπρωτεϊνών πλάσματος και της αναδιαμόρφωσης του συμπλέγματος πρωτεΐνης-λιπιδίων που παρατηρήθηκαν στη μελέτη μας. Τα στοιχεία από τη μελέτη μας συνάδουν με τα ευρήματα από τους Emmi et al που συνδέουν την παραγωγή δραστικών ειδών οξυγόνου λευκοκυττάρων και την υπεροξείδωση των λιπιδίων του πλάσματος (8).

Η συναινετική ανάλυση ομαδοποίησης χρησιμοποιώντας πρωτεομική αποκάλυψε την ετερογένεια των ασθενών με BD. Οι ασθενείς με υποτύπο Ι είχαν πιο σοβαρά συμπτώματα, τα οποία μπορεί να σχετίζονται με την ενεργό βιολογική διαδικασία της πήξης του αίματος και την ενεργοποίηση του συμπληρώματος. Αντίθετα, οι ασθενείς με υποτύπο III είχαν σχετικά ήπια συμπτώματα και η φλεγμονώδης απόκριση μπορεί να είναι η κύρια παθολογική διαδικασία σε αυτήν την υποομάδα. Επιπλέον, εντοπίσαμε τα πρωτεομικά χαρακτηριστικά των ασθενών με BD με διαφορετική προσβολή οργάνων. Οι αναλύσεις βιοπληροφορικής μας απεικονίζουν αποτελεσματικά τις λειτουργίες των πρωτεϊνικών χαρακτηριστικών κάθε φαινοτύπου οργάνου, όπως αποδεικνύεται από τη συσχέτιση μεταξύ αυτοανοσίας και φαινοτύπου αρθρίτιδας με συμπτώματα αρθραλγίας (29-31). Τα κύρια αγγειακά συμβάντα, οι οφθαλμικές βλάβες και η νευρολογική συμμετοχή είναι οι κύριες αιτίες νοσηρότητας και θνησιμότητας (16). Η θεραπεία της BD εξαρτάται από τον τύπο του οργάνου που εμπλέκεται και τη σοβαρότητα της νόσου εντός αυτού του συστήματος οργάνων. Ωστόσο, από όσο γνωρίζουμε, δεν υπάρχει μέχρι σήμερα διαθέσιμη στοχευμένη θεραπεία για BD. Τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν ότι οι διαγνωστικές διαδικασίες και οι θεραπευτικές μέθοδοι για κάθε BD που αναλύεται σε όργανο μπορεί να διαφέρουν λόγω της ετερογένειας των παθογόνων μηχανισμών. Ορισμένες βασικές πρωτεΐνες θα μπορούσαν να είναι στόχοι που μπορούν να ληφθούν για φάρμακα για φαινοτύπους, συμπεριλαμβανομένων γαστρεντερικών, νευρικών, οφθαλμικών, αρθρικών και αγγειακών βλαβών.

Το ποσοστό των ασθενών με αγγειακή BD μεταξύ διαφορετικών φυλών και εθνοτήτων κυμαίνεται από 7,7% έως 43% (32). η νόσος σχετίζεται σχεδόν πάντα με αρτηριοφλεβική θρόμβωση και/ή ανεύρυσμα υψηλού κινδύνου, υψηλή βαρύτητα της νόσου και σωρευτικό 5-ετησιακό ποσοστό υποτροπής 38,4% (33). Η ανοσία και οι φλεγμονώδεις παράγοντες θεωρείται ότι συμβάλλουν στην αγγειακή συμμετοχή και τις εκδηλώσεις στην BD. Η βλάβη στα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι γνωστό ότι οδηγεί σε τάση για θρομβωτικό κίνδυνο (34). Επιπλέον, τα εξασθενημένα τοιχώματα των αγγείων μετά την ίνωση μπορεί να οδηγήσουν σε εξασθενημένα αρτηριακά τοιχώματα και διάταση των τοιχωμάτων των αγγείων με επακόλουθα ανευρύσματα (35,36). Ανωμαλίες, στένωση και απόφραξη μπορεί επίσης να προκληθούν κατά τη διάρκεια της οξείας φλεγμονής και μετά την ίνωση (37), ενώ η χρόνια φλεγμονή προάγει περαιτέρω τις δυσλειτουργικές αγγειοδιασταλτικές ιδιότητες του ενδοθηλίου (38). Το HABP2, που ονομάζεται επίσης πρωτεάση που ενεργοποιεί τον παράγοντα VII, ανακαλύφθηκε αρχικά μέσω της ικανότητάς του να συνδέεται με το υαλουρονικό οξύ, μια γλυκοζαμινογλυκάνη που παίζει ρόλο στη ρύθμιση του φραγμού των ενδοθηλιακών κυττάρων (39) και εμπλέκεται στην πήξη του αίματος και την ινωδόλυση (40). Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι το HABP2 μπορεί να ενεργοποιήσει τη φλεγμονή, την απόπτωση και την κυτταρική ανάπτυξη των λείων μυών των αγγείων και των ενδοθηλιακών κυττάρων (41-43) και θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως ρυθμιστής της αγγειακής ακεραιότητας και διαπερατότητας μέσω των υποδοχέων που ενεργοποιούνται από πρωτεάση (PARs, παρόμοια με τη θρομβίνη )/RhoA/ Σηματοδοτική οδός πρωτεϊνικής κινάσης που σχετίζεται με Rho (ROCK) (44). Η σίγαση (με χρήση μικρού παρεμβαλλόμενου RNA) του HABP2 ή του PAR/RhoA/ROCK αναστέλλει τη διαταραχή του φραγμού των ενδοθηλιακών κυττάρων που προκαλείται από το HABP2- (44). Το TNC είναι μια προφλεγμονώδης γλυκοπρωτεΐνη εξωκυτταρικής μήτρας που συμβάλλει στον σχηματισμό και τη ρήξη της πλάκας ενεργοποιώντας τα αιμοπετάλια ή ρυθμίζοντας προς τα κάτω τον ενεργοποιητή του πλασμινογόνου των ιστών (45). Τα επίπεδα TNC στον ορό έχουν συσχετιστεί με τη σοβαρότητα της αθηροσκλήρωσης (46) και η παροδική έκφραση TNC έχει αποδειχθεί ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω κατά τη διάρκεια της αγγειακής βλάβης αλλά καθαρίζεται μετά την ολοκλήρωση της επιδιόρθωσης (45).

Το SERPINA3, επίσης γνωστό ως 1-αντιχυμοθρυψίνη, αναστέλλει αρκετές πρωτεάσες σερίνης, ιδιαίτερα την καθεψίνη G (47). Εκτός από τα φλεγμονώδη κύτταρα, τα λιγότερο συσταλτικά λεία μυϊκά κύτταρα θα μπορούσαν να αποδιαφοροποιηθούν σε έναν φαινότυπο που μοιάζει με μακροφάγο, ο οποίος μπορεί επίσης να είναι η πηγή των κυτοκινών και του SERPINA3 στο σημείο του τραυματισμού του τοιχώματος των αγγείων (48). Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι ο ενεργός ρόλος του SERPINA3 στην αρνητική ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των αγγειακών λείων μυϊκών κυττάρων (49) ή στην αναστολή της συσσώρευσης ουδετερόφιλων (47) θα μπορούσε να είναι προγνωστικός της εμφάνισης ανεπιθύμητων καρδιαγγειακών συμβάντων. Ωστόσο, το εάν το SERPINA3 παίζει ρόλο κατά την παθογένεση της αγγειίτιδας σε ασθενείς με BD ή είναι προϊόν της παθογόνου διαδικασίας παραμένει ασαφές. Συγκεκριμένα, το φάρμακο HABP2 υαλουρονικό οξύ είναι μια ανιονική, μη θειωμένη γλυκοζαμινογλυκάνη που επιδεικνύει αντιφλεγμονώδη, αποκατάσταση τραυμάτων, αναγέννηση ιστού και άλλες σημαντικές ιδιότητες. Το υαλουρονικό οξύ έχει διερευνηθεί στον καρκίνο, την οφθαλμολογία, την αρθρολογία, την πνευμονολογία, τη ρινολογία και την ουρολογική θεραπεία και για άλλες χρήσεις (50). Υπάρχουν πολλά μικρά μόρια (οξικός ψευδάργυρος, θειικός ψευδάργυρος, ψευδάργυρος, χλωριούχος ψευδάργυρος) που στοχεύουν το SERPINA3 (Συμπληρωματικός Πίνακας 12, διαθέσιμος στη διεύθυνση https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι οι βιοδείκτες που προσδιορίζονται στην εργασία μας μπορούν επίσης να χρησιμεύσουν ως στόχοι στην ανάπτυξη νέων θεραπειών για ασθενείς με BD. Η μελέτη μας έχει αρκετούς περιορισμούς. Πρώτον, ο αριθμός των δειγμάτων πλάσματος ήταν περιορισμένος. Οι βιοδείκτες που προσδιορίστηκαν στη μελέτη μας θα πρέπει να επικυρωθούν σε διαφορετική και μεγαλύτερη κοόρτη με διαφορετικές αυτοφλεγμονώδεις και αυτοάνοσες ασθένειες ως μάρτυρες. Δεύτερον, τα αποτελέσματα πρέπει να επαληθεύονται σε κοόρτες ασθενών με BD που είναι αφελείς στη θεραπεία. Τρίτον, οι βιολογικές λειτουργίες των πρωτεϊνών βιοδεικτών στην παθογένεση της BD θα πρέπει να εξεταστούν σε μελλοντικές μελέτες χρησιμοποιώντας κυτταρικά και ζωικά μοντέλα.

Συνολικά, αυτή είναι, από ό,τι γνωρίζουμε, η πρώτη μελέτη που αναλύει διεξοδικά τα πρωτεομικά χαρακτηριστικά της BD που αναλύεται σε όργανα. Τα αποτελέσματα παρέχουν θεμελιώδεις γνώσεις για την ετερογένεια και την παθογένεια της BD και τονίζουν τις πρωτεΐνες του πλάσματος (HABP2, TNC και SERPINA3) ως πιθανούς βιοδείκτες για μελλοντική κλινική αξιολόγηση και θεραπεία της αγγειακής BD.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Bas¸ Υ, Seçkin HY, Kalkan G, et al. Διερεύνηση της νόσου του Behçet και της συχνότητας υποτροπιάζουσας αφθώδης στοματίτιδας: ο υψηλότερος επιπολασμός στην Τουρκία. Balkan Med J 2016;33:390–5.

2. Lee HJ, Kim JH, Kim SW, et al. Πρωτεομική ανάλυση του αμυλοειδούς ορού ως δυνητικού δείκτη στην εντερική νόσο Behçet. Dig Dis Sci 2017; 62:1953–62.

3. Lopalco G, Lucherini OM, Lopalco Α, et αϊ. Υπογραφές κυτοκίνης στη βλεννογονοδερματική και οφθαλμική νόσο Behçet. Front Immunol 2017; 8:200.

4. Xu M, Deng J, Xu K, et αϊ. Η σε βάθος πρωτεομική ορού αποκαλύπτει βιοδείκτες της σοβαρότητας της ψωρίασης και της ανταπόκρισης στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Theranostics 2019; 9:2475–88.

5. Geyer PE, Voytik E, Treit PV, et al. Δημιουργία προφίλ πρωτεώματος πλάσματος για τον εντοπισμό και την αποφυγή προκαταλήψεων που σχετίζονται με δείγματα σε μελέτες βιοδεικτών. EMBO Mol Med 2019; 11:e10427.

6. Mao L, Dong Η, Yang Ρ, et αϊ. Το MALDI-TOF/TOF-MS αποκαλύπτει αυξημένη απτοσφαιρίνη ορού και αμυλοειδές Α στη νόσο Behcet. J Proteome Res 2008; 7:4500–7.

7. Piñero J, Ramírez-Anguita JM, Saüch-Pitarch J, et al. Η πλατφόρμα γνώσης DisGeNET για τη γονιδιωματική ασθένεια: ενημέρωση 2019. Nucleic Acids Res 2020;48:D845-55.

8. Emmi G, Bagni G, Lastraioli Ε, et al. Ένα μοναδικό κυκλοφορούν προφίλ miRNA υπογραμμίζει τη θρομβοφλεγμονή στο σύνδρομο Behçet. Ann Rheum Dis 2022, 81:386–97.

9. Orem A, Yandi YE, Vanizor B, et al. Η αξιολόγηση των αυτοαντισωμάτων έναντι της οξειδωτικά τροποποιημένης λιποπρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας (LDL), της ευαισθησίας της LDL στην οξείδωση, των επιπέδων λιπιδίων και υδροϋπεροξειδίου των λιπιδίων στον ορό, της συνολικής αντιοξειδωτικής κατάστασης, των αντιοξειδωτικών ενζυμικών δραστηριοτήτων και της ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας σε ασθενείς με νόσο Behçet. Clin Biochem 2002; 35:217–24.

10. Kayatas K, Karatoprak C, Cebeci F, et al. Παρουσία χαμηλών επιπέδων λιπιδίων σε ασθενείς με νόσο Behcet ως προστατευτικό κατά της αθηροσκλήρωσης. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2013; 17:2330–4.

11. Buldanlioglu S, Turkmen S, Ayabakan HB, et al. Οξείδιο του αζώτου, υπεροξείδωση λιπιδίων και αντιοξειδωτικό αμυντικό σύστημα σε ασθενείς με ενεργό ή ανενεργό νόσο Behçet. Br J Dermatol 2005; 153:526-30.

12. Cho SB, Zheng Z, Ahn KJ, et αϊ. Αντιδραστικότητα IgA ορού έναντι GroEL του Streptococcus sanguinis και ανθρώπινης ετερογενούς πυρηνικής ριβονουκλεοπρωτεΐνης A2/B1 σε ασθενείς με νόσο Behçet. Br J Dermatol 2013; 168:977–83.

13. Zheng Z, Sohn S, Ahn KJ, et αϊ. Αντιδραστικότητα ορού έναντι της πρωτεΐνης UL48 του ιού του απλού έρπητα τύπου 1 σε ασθενείς με νόσο Behçet και μοντέλο ποντικού τύπου Behçet. Acta Derm Venereol 2015; 95:952–8.

14. Lule S, Colpak AI, Balci-Peynircioglu Β, et al. Ο ορός της νόσου Behçet είναι ανοσοαντιδραστικός στο μέσο νευροϊνώματος το οποίο μοιράζεται κοινούς επιτόπους στο βακτηριακό HSP-65, έναν υποτιθέμενο έναυσμα. J Autoimmun 2017;84: 87–96.

15. Tong Β, Liu X, Xiao J, et αϊ. Ανοσοπαθογένεση της νόσου Behcet. Front Immunol 2019; 10:665.

16. Greco A, De Virgilio A, Ralli M, et al. Νόσος Behçet: νέες γνώσεις για την παθοφυσιολογία, τα κλινικά χαρακτηριστικά και τις θεραπευτικές επιλογές. Autoimmun Rev 2018; 17:567–75.

17. Marta M, Santos E, Coutinho E, et al. Ο ρόλος των λοιμώξεων στη νόσο Behçet και στο σύνδρομο νευρο-Behçet. Autoimmun Rev 2015;14: 609–15.

18. Hatemi G, Bahar H, Uysal S, et al. Οι φλυκταινώδεις δερματικές βλάβες στο σύνδρομο Behcet δεν είναι στείρες. Ann Rheum Dis 2004; 63:1450–2.

19. Galeone Μ, Colucci R, D'Erme ΑΜ, et αϊ. Πιθανή λοιμώδης αιτιολογία της νόσου του Behçet. Patholog Res Int 2012;2012:595380.

20. Karaca M, Hatemi G, Sut N, et al. Η βλατιδοβλατιδώδης αλλοίωση/αρθρίτιδα του συνδρόμου Behçet συγκεντρώνεται επίσης σε οικογένειες. Ρευματολογία (Οξφόρδη) 2012, 51:1053–60.

21. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Αγγειακή συμμετοχή στο σύνδρομο Behçet: αναδρομική ανάλυση συσχετίσεων και χρονική πορεία. Ρευματολογία (Οξφόρδη) 2014; 53:2018–22.

22. Zou J, Luo JF, Shen Υ, et αϊ. Ανάλυση συστάδων φαινοτύπων ασθενών με σύνδρομο Behçet: μια μεγάλη μελέτη κοόρτης από ένα κέντρο παραπομπής στην Κίνα. Arthritis Res Ther 2021; 23:45.

23. Soejima Υ, Kirino Υ, Takeno Μ, et αϊ. Οι αλλαγές στην αναλογία των κλινικών συστάδων συμβάλλουν στη φαινοτυπική εξέλιξη της νόσου Behçet στην Ιαπωνία. Arthritis Res Ther 2021; 23:49.

24. Leiba Μ, Seligsohn U, Sidi Υ, et αϊ. Οι θρομβοφιλικοί παράγοντες δεν είναι η κύρια αιτία θρόμβωσης στη νόσο του Behçet. Ann Rheum Dis 2004; 63:1445–9.

25. Becatti Μ, Emmi G, Silvestri Ε, et αϊ. Η ενεργοποίηση των ουδετερόφιλων προάγει την οξείδωση του ινωδογόνου και το σχηματισμό θρόμβων στη νόσο Behçet. Κυκλοφορία 2016;133:302–11.

26. Zheng W, Wu X, Goudarzi Μ, et αϊ. Μεταβολικές αλλοιώσεις που σχετίζονται με τη νόσο Behçet. Arthritis Res Ther 2018;20:214.

27. Xu J, Su G, Huang X, et αϊ. Η μεταβολική ανάλυση του υδατοειδούς υγρού προσδιορίζει ανώμαλο μεταβολισμό αμινοξέων και λιπαρών οξέων στη νόσο VogtKoyanagi-Harada και Behcet. Front Immunol 2021; 12: 587393.

28. Bakir-Gungor B, Remmers EF, Meguro Α, et al. Προσδιορισμός πιθανών παθογόνων οδών στη νόσο του Behçet χρησιμοποιώντας δεδομένα μελέτης συσχέτισης σε όλο το γονιδίωμα από δύο διαφορετικούς πληθυσμούς. Eur J Hum Genet 2015; 23:678–87.

29. Tong D, Lönnblom Ε, Yau AC, et αϊ. Ένας κοινός επίτοπος κολλαγόνου τύπου XI και τύπου II αναγνωρίζεται από παθογόνα αντισώματα σε ποντίκια και ανθρώπους με αρθρίτιδα. Front Immunol 2018; 9:451.

30. Durlik-Popinska K, _ Zarnowiec P, Lechowicz Ł, et al. Τα αντισώματα που απομονώνονται από ασθενείς με ρευματοειδή αρθρίτιδα έναντι του λιποπολυσακχαρίτη Proteus mirabilis O3 (S1959) που περιέχει λυσίνη μπορεί να αντιδράσουν με το κολλαγόνο τύπου Ι. Int J Mol Sci 2020;21:9635.

31. Jung JH, Han KD, Lee YB et al. Η νόσος Behçet σχετίζεται με τη σκλήρυνση κατά πλάκας και τη ρευματοειδή αρθρίτιδα: μια μελέτη βασισμένη στον πληθυσμό της Κορέας. Δερματολογία 2021:1–6.

32. Düzgün N, Ates¸ A, Aydintug OT, et al. Χαρακτηριστικά της αγγειακής συμμετοχής στη νόσο Behçet. Scand J Rheumatol 2006; 35:65–8.

33. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Αγγειακή συμμετοχή στο σύνδρομο Behçet: αναδρομική ανάλυση συσχετίσεων και χρονική πορεία. Ρευματολογία (Οξφόρδη) 2014; 53:2018–22.

34. Le Joncour A, Martos R, Loyau S, et al. Ο κρίσιμος ρόλος των εξωκυτταρικών παγίδων ουδετερόφιλων (NETs) σε ασθενείς με νόσο Behcet. Ann Rheum Dis 2019; 78:1274–82.

35. Al-Basheer M, Hadadin F. Τύπος σχηματισμού ανευρύσματος της αγγειακής νόσου-Behcet. Heart Lung Circ 2007; 16:407–9.

36. Chambers JC, Haskard DO, Kooner JS. Αγγειακή ενδοθηλιακή λειτουργία και μηχανισμοί οξειδωτικού στρες σε ασθενείς με σύνδρομο Behçet. J Am Coll Cardiol 2001; 37:517–20.

37. Demirtürk OS, Tünel HS, Alemdaroglu U. Αγγειακές εκδηλώσεις της νόσου Behçet. Στο: Gonul M, Kartal S, εκδότες. Νόσος Behcet. Λονδίνο: IntechOpen; 2017.

38. Aksu K, Donmez A, Keser G. Θρόμβωση που προκαλείται από φλεγμονή: μηχανισμοί, συσχετίσεις ασθενειών και διαχείριση. Curr Pharm Des 2012; 18:1478–93.

39. Choi-Miura NH, Tobe T, Sumiya J, et αϊ. Καθαρισμός και χαρακτηρισμός μιας νέας πρωτεΐνης δέσμευσης υαλουρονάνης (PHBP) από ανθρώπινο πλάσμα: έχει τρία EGF, ένα kringle και έναν τομέα πρωτεάσης σερίνης, παρόμοια με τον ενεργοποιητή αυξητικού παράγοντα ηπατοκυττάρων. J Biochem 1996, 119: 1157–65.

40. Kanse SM, Parahuleva Μ, Muhl L, et αϊ. Πρωτεάση που ενεργοποιεί τον παράγοντα VII (FSAP): αγγειακές λειτουργίες και ρόλος στην αθηροσκλήρωση. Thromb Haemost 2008; 99:286–9.

41. Byskov Κ, Boettger Τ, Ruehle PF, et αϊ. Ο παράγοντας VII που ενεργοποιεί την πρωτεάση (FSAP) ρυθμίζει την έκφραση των φλεγμονωδών γονιδίων στους λείους μυς των αγγείων και στα ενδοθηλιακά κύτταρα. Αθηροσκλήρωση 2017;265: 133–9.

42. Parahuleva MS, Maj R, Hölschermann Η, et al. Ρύθμιση της λειτουργίας μονοκυττάρων/μακροφάγων από πρωτεάση που ενεργοποιεί τον παράγοντα VII (FSAP). Αθηροσκλήρωση 2013; 230:365-72.

43. Kannemeier C, Al-Fakhri Ν, Preissner ΚΤ et αϊ. Η πρωτεάση που ενεργοποιεί τον παράγοντα VII (FSAP) αναστέλλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό που προκαλείται από τον αυξητικό παράγοντα και τη μετανάστευση των αγγειακών λείων μυϊκών κυττάρων. FASEB J 2004;18: 728–30.

44. Mambetsariev Ν, Mirzapoiazova T, Mambetsariev Β, et al. Η πρωτεΐνη 2 που δεσμεύει το υαλουρονικό οξύ είναι ένας νέος ρυθμιστής της αγγειακής ακεραιότητας. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2010;30:483–90.

45. Midwood KS, Hussenet Τ, Langlois Β, et αϊ. Πρόοδοι στη βιολογία tenascin-C. Cell Mol Life Sci 2011; 68:3175-99.

46. ​​Gao W, Li J, Ni H, et αϊ. Tenascin C: ένας πιθανός βιοδείκτης για την πρόβλεψη της σοβαρότητας της στεφανιαίας αθηροσκλήρωσης. J Atheroscler Thromb 2019; 26:31–8.

47. Sanchez-Navarro Α, Gonzalez-Soria I, Caldiño-Bohn R, et al. Μια ολοκληρωμένη άποψη των σερπινών στην υγεία και τις ασθένειες: η συμβολή του SerpinA3. Am J Physiol Cell Physiol 2021;320:C106–18.

48. Sorokin V, Woo CC. Ο ρόλος της Serpina3 στην αγγειακή βιολογία. Int J Cardiol 2020; 304:154–5.

49. Qian LL, Ji JJ, Guo JQ, et αϊ. Προστατευτικός ρόλος του serpina3c ως νέος αναστολέας θρομβίνης κατά της αθηροσκλήρωσης σε ποντίκια. Clin Sci (Λονδίνο) 2021; 135:447–63.

50. Fallacara Α, Baldini Ε, Manfredini S, et al. Υαλουρονικό οξύ στην τρίτη χιλιετία. Πολυμερή (Βασιλεία) 2018;10.