Προϋπάρχουσα ανοσία Τ-κυττάρων στον SARS-CoV-2 σε μη εκτεθειμένους υγιείς μάρτυρες στον Εκουαδόρ, όπως ανιχνεύθηκε με ανάλυση COVID-19 ιντερφερόνης-γάμμα απελευθέρωσης

ΑΦΗΡΗΜΕΝΗ

Ιστορικό: Οι μελέτες των ανοσοαποκρίσεων των Τ-κυττάρων κατά του SARS-CoV-2 είναι σημαντικές για την κατανόηση της ανοσολογικής κατάστασης ατόμων ή πληθυσμών. Εδώ, χρησιμοποιούμε μια απλή, φθηνή και γρήγορη δοκιμασία διέγερσης ολικού αίματος - μια δοκιμασία απελευθέρωσης ιντερφερόνης-γάμμα (IGRA) - για τη μελέτη της ανοσίας των Τ-κυττάρων στο SARS-CoV-2 σε ασθενείς με COVID-19 που βρίσκονται σε ανάρρωση και μη εκτεθειμένες υγιείς επαφές από το Κίτο του Ισημερινού. Μέθοδοι: Η παραγωγή ιντερφερόνης γάμμα (INF-g) μετρήθηκε στο ηπαρινισμένο αίμα ατόμων που αναρρώνουν και δεν εκτέθηκαν μετά από διέγερση για 24 ώρες με την πρωτεΐνη SARS-CoV-2 Spike S1, την πρωτεΐνη του τομέα δέσμευσης υποδοχέα (RBD) ή την πρωτεΐνη Nucleocapsid (NP), αντίστοιχα. Η παρουσία αντισωμάτων πρωτεΐνης IgG-RBD και στις δύο ομάδες μελέτης προσδιορίστηκε με «εσωτερική» ELISA. Αποτελέσματα: Όπως μετρήθηκε με την παραγωγή INF-g, το 80 τοις εκατό των ανάρρων ασθενών με COVID{-19, όλοι οροθετικοί IgG-RBD, είχαν ισχυρή απόκριση των Τ-κυττάρων.

Ωστόσο, απροσδόκητα, το 44 τοις εκατό των μη εκτεθειμένων υγιών μαρτύρων, όλα οροαρνητικά IgG-RBD, είχαν ισχυρή απόκριση των Τ-κυττάρων για τον ιό με το COVID-19 IGRA, πιθανώς λόγω προηγούμενης έκθεσης σε κοροναϊούς που προκαλούν κοινό κρυολόγημα ή άλλους ιικά ή μικροβιακά αντιγόνα. Συμπέρασμα και συζήτηση: Το υψηλό ποσοστό μη εκτεθειμένων υγιών ατόμων με προϋπάρχουσα ανοσία υποδηλώνει ότι ένα μέρος του πληθυσμού του Ισημερινού είναι πιθανό να έχει αντιδραστικά Τ-κύτταρα SARS-CoV-2. Δεδομένου ότι η τεχνική IGRA είναι απλή και μπορεί εύκολα να κλιμακωθεί για έρευνες όπου απαιτείται μεγάλος αριθμός ασθενών, αυτό το IGRA για τον COVID{10}} μπορεί να χρησιμεύσει για να προσδιορίσει εάν η απόκριση μόνο των Τ-κυττάρων αντιπροσωπεύει προστατευτική ανοσία στον SARS-CoV -2 μόλυνση σε μια πληθυσμιακή μελέτη. © 2021 Οι Συγγραφείς. Εκδόθηκε από την Elsevier Ltd για λογαριασμό της Διεθνούς Εταιρείας Λοιμωδών Νοσημάτων.

Ταυτόχρονα, όταν το ανοσοποιητικό μας είναι χαμηλό, υπάρχουν πολλοί τρόποι για να βελτιώσουμε το ανοσοποιητικό μας, η πρόσληψη τροφών που μπορούν να ενισχύσουν την ανοσία, όπως η κιστάνα, οι πολυσακχαρίτες, οι πρωτεΐνες, τα αμινοξέα και άλλες ουσίες που περιέχονται στο κιστάνι μπορούν συχνά να ρυθμίσουν το σώμαiανοσοποιητικό σύστημα.

Κάντε κλικ στο προϊόν σε σκόνη εκχυλίσματος cistanche tubulosa

Εισαγωγή

Η ανοσολογική απόκριση στη λοίμωξη SARS-CoV-2 περιλαμβάνει όχι μόνο παραγωγή αντισωμάτων, αλλά η λοίμωξη προκαλεί επίσης απόκριση Τ-κυττάρων σε ασθενείς (Lipsitch et al., 2020, Ni et al., 2020). Γενικά, ο προσδιορισμός της παρουσίας και του μεγέθους μιας ειδικής απόκρισης Τ-κυττάρων μνήμης σε αυτή τη μόλυνση από κορωνοϊό πραγματοποιείται με έναν προσδιορισμό ELISPOT, προσδιορίζοντας τον αριθμό των λεμφοκυττάρων που παράγουν IFN-g μετά από διέγερση με ειδικά για τη νόσο αντιγόνα ή πεπτίδια (Ni et al., 2020, Pai et al., 2014, Abate et al., 2013, Braun et al., 2020, Grifono et al., 2020, LeBert et al., 2020, Sekine et al., 2020).

Για αυτήν την τεχνική, τα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώνονται από φρέσκο ​​ηπαρινισμένο αίμα με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας. Η έκκριση κυτοκινών από μεμονωμένα Τ-κύτταρα ποσοτικοποιείται με μικροσκόπιο ή με ειδική συσκευή – τον ​​αναγνώστη πλακών ELISPOT. Η ανάλυση ELISPOT είναι μια τεχνική "μόνο για ερευνητικά εργαστήρια" που είναι ιδιαίτερα επίπονη, τεχνικά απαιτητική, σχετικά δαπανηρή και δεν μπορεί εύκολα να χρησιμοποιηθεί σε κλινικό εργαστήριο ή να εφαρμοστεί σε πληθυσμιακές μελέτες. Λόγω του κόστους, της υποδομής και των εργαστηριακών απαιτήσεων που απαιτούνται για την εκτέλεση της ανάλυσης, η χρήση της σε περιβάλλοντα περιορισμένους σε πόρους όπως ο Ισημερινός μπορεί να είναι ελάχιστη.

Οι κυτταρικές ανοσοαποκρίσεις μπορούν επίσης να προσδιοριστούν με έναν πιο απλό προσδιορισμό: έναν προσδιορισμό απελευθέρωσης ιντερφερόνης γάμμα (IGRA). Αυτή η δοκιμασία, μια in vitro εξέταση αίματος, ποσοτικοποιεί τις κυτοκίνες που εκκρίνονται από Τ-κύτταρα (δηλαδή, γάμμα ιντερφερόνη (IFN-g), ωστόσο, άλλες κυτοκίνες όπως το TNF ή η IL-2 μπορούν επίσης να ποσοτικοποιηθούν) κατά τη διέγερση του ολικού αίματος (όχι μόνο τα απομονωμένα λεμφοκύτταρα) με συγκεκριμένα αντιγόνα (Pai et al., 2014, Abate et al., 2013). Η εκκρινόμενη κυτοκίνη IFN-g μετράται με έναν προσδιορισμό ELISA, μια εύκολα διαθέσιμη τεχνική στα περισσότερα εργαστήρια, και τα αποτελέσματα διαβάζονται με συσκευή ανάγνωσης πλακών ELISA. Τα IGRA έχουν βρει εφαρμογή στο κλινικό εργαστήριο και χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό μιας λανθάνουσας λοίμωξης με Mycobacterium tuberculosis (MTB) καθώς και για τη μέτρηση της ειδικής κυτταρικής ανοσίας που προκαλείται από τον κυτταρομεγαλοϊό (CMV) και την πρόβλεψη της μόλυνσης από CMV σε λήπτες μεταμόσχευσης (Pai et al. , 2014, Abate et al., 2013). Αυτές οι δοκιμές IGRA έχουν αξιολογηθεί εκτενώς και, σε σύγκριση με τη δοκιμασία ELISPOT, έχει αποδειχθεί ότι εμφανίζουν παρόμοιες ικανότητες για την πρόβλεψη μόλυνσης από MTB ή CMV. Επιπλέον, διατίθενται και εκτελούνται ευρέως αρκετές εμπορικές δοκιμασίες και δοκιμασίες με σήμανση FDA ή CE για την ανίχνευση ανοσίας έναντι της φυματίωσης ή του CMV.

Στην παρούσα μελέτη, διερευνούμε τη χρήση ενός COVID-19 IGRA και αξιολογούμε το μέγεθος της απελευθέρωσης IFN-g σε αναρρώσιμους ασθενείς με COVID-19 και υγιείς μάρτυρες χωρίς COVID-19 σε απόκριση σε συγκεκριμένα αντιγόνα του ιού SARS-CoV-2: η πρωτεΐνη RBD. το τμήμα S1 της πρωτεΐνης Spike. ή την πρωτεΐνη νουκλεοκαψιδίου (Ν). Επιπλέον, προσδιορίζουμε την παρουσία αντισωμάτων IgG ειδικών για τον SARS-CoV-2 σε αυτούς τους συμμετέχοντες με "εσωτερική" ELISA (Amanat et al., 2020, Guevara et al., 2021). Δείχνουμε ότι ένα σημαντικό ποσοστό μη εκτεθειμένων δοτών διαθέτει αντιδραστικά Τ-κύτταρα SARS-CoV-2 και συζητάμε αυτά τα αποτελέσματα.

Υλικό και μέθοδοι

Ανάρρωση ασθενείς με COVID-19, υγιείς μάρτυρες και η ρύθμιση

Αυτή η μελέτη διεξήχθη στο Κίτο του Ισημερινού, τον Σεπτέμβριο του 2020. Δεν χρησιμοποιήθηκαν στατιστικές μέθοδοι για τον προκαθορισμό του μεγέθους του δείγματος. Ο Πίνακας 1 δείχνει τα χαρακτηριστικά των 32 ασθενών σε αυτήν τη μελέτη: δεκατρείς ασθενείς με COVID-19 σε ανάρρωση, όλοι με μη σοβαρά συμπτώματα/σημεία COVID-19 και θετική διάγνωση RT-PCR τον Ιούνιο του 2020. και 17 μη εκτεθειμένοι υγιείς μάρτυρες. Αυτοί οι υγιείς έλεγχοι ήταν εξαιρετικά προσεκτικοί κατά τη διάρκεια της πανδημίας, αποφεύγοντας την επαφή με άλλα άτομα και δεν ανέφεραν μόνοι τους κανένα από τα τυπικά σημεία και συμπτώματα του COVID{10}} κατά τη διάρκεια της πανδημίας, όπως πυρετό, επίμονο βήχα, ή απώλεια όσφρησης ή γεύσης. Επίσης, δύο ασυμπτωματικοί φορείς SARS-CoV-2 συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Αυτά τα δύο άτομα δεν εμφάνισαν ποτέ συμπτώματα ή σημεία της νόσου COVID-19. Ωστόσο, η τεχνική RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε αυτούς ως προϋπόθεση για άδεια εργασίας τον Ιούνιο του 2020 και κατέληξε σε θετικές διαγνώσεις.

Ορρολογία

Οι ορολογικές εξετάσεις και οι IGRAs για όλους τους ασθενείς και τους μάρτυρες πραγματοποιήθηκαν κατά τις δύο τελευταίες εβδομάδες του Σεπτεμβρίου 2020, τρεις μήνες μετά τη διάγνωση RT-PCR των ασθενών που αναρρώνουν. Για τον προσδιορισμό της παρουσίας αντισωμάτων IgG ειδικών για τον κορωνοϊό στην ομάδα μελέτης μας, χρησιμοποιήθηκε μια "εσωτερική" ELISA IgG του τομέα σύνδεσης υποδοχέα SARS-CoV-2 (RBD) (9, 10).

Δοκιμασία απελευθέρωσης ιντερφερόνης γάμμα (IGRA)

Για το IGRA, λήφθηκε δείγμα ηπαρινισμένου αίματος (4 mL) και χωρίστηκε σε δείγματα των 250 mL και διεγέρθηκε με αντίστοιχα 2 mg/mL της πρωτεΐνης RBD (διαδικασία απομόνωσης από την αναφορά 9) ή 2 mg/mL του εμπορικά διαθέσιμου Nucleocapsid (Ν) πρωτεΐνη ή πρωτεΐνη Spike (S1) (ViroGen, Αριθμοί Καταλόγου: 00,221-V και 00,226-V αντίστοιχα). Μια καμπύλη δόσης συγκέντρωσης-απόκρισης με αίμα από IGRA-θετικούς και IGRA-αρνητικούς ασθενείς χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της βέλτιστης συγκέντρωσης των αντιγόνων για διέγερση στο IGRA. Στα 2 ug/mL, βρέθηκε μια μέγιστη απόκριση IFN-g στο αίμα από άτομα με COVID-19 χωρίς διέγερση στους μη μολυσμένους μάρτυρες. Για κάθε συμμετέχοντα, συμπεριλήφθηκε ένας μη διεγερμένος έλεγχος (NIL) και προσδιορίσαμε ένα δείγμα αίματος 250 mL με το μιτογόνο φυτοαιμοσυγκολλητίνη (PHA), έναν θετικό έλεγχο για την αξιολόγηση του ρυθμού απόκρισης κυτοκίνης του δείγματος αίματος. Η διέγερση πραγματοποιήθηκε σε 96-πλάκα ELISA με επίπεδο πυθμένα στους 37 C για 24 ώρες. Το πλάσμα συλλέχτηκε και η παραγωγή IFN-g προσδιορίστηκε με ELISA ανθρώπινης IFN-g (MaxTM Standard Set Biolegend αρ. κατ. 430,101).

Αποτελέσματα

Η ELISA RBD IgG έδειξε ότι όλοι οι συμπτωματικοί ασθενείς με COVID{{{0}} (θετικοί RT-PCR) ήταν θετικοί για αντισώματα IgG έναντι της πρωτεΐνης RBD τρεις μήνες μετά τη διάγνωση RT-PCR. Οι δύο ασυμπτωματικοί θετικοί σε RT-PCR ασθενείς και όλοι οι υγιείς μη εκτεθειμένοι ασθενείς μάρτυρες ήταν οροαρνητικοί με αυτήν την ELISA (βλ. Πίνακα 1). Τα αποτελέσματα της διέγερσης ολικού αίματος στην ανάλυση COVID-19 IGRA φαίνονται στο σχήμα 1. Ισχυρή επαγωγή παραγωγής IFN-g βρέθηκε στο 80 τοις εκατό των συμπτωματικών ασθενών με COVID-19 με και τα τρία αντιγόνα, αλλά η πρωτεΐνη Ν και η πρωτεΐνη S ήταν οι πιο ισχυροί διεγέρτες μιας απόκρισης IFN-g (Εικόνα 1 Α, Β, Γ). Οι δύο ασυμπτωματικοί αλλά θετικοί στην RT-PCR ασθενείς (ασθενείς 14 και 15), και οι δύο χωρίς ειδικά αντισώματα SAR-CoV-2, έδειξαν επίσης μια ισχυρή επαγόμενη απόκριση ανοσίας των Τ-κυττάρων. Από τους παρελθόντες ασθενείς με COVID{19}}, το 45 τοις εκατό εμφάνισε επαγώγιμη ανοσία Τ-κυττάρων. Η ανταπόκριση σε αυτούς τους υγιείς μη εκτεθειμένους μάρτυρες με απόκριση Τ-κυττάρων στατιστικά δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε μέγεθος από τους ασθενείς με ανάρρωση με COVID{-19 για οποιοδήποτε από τα διεγερτικά αντιγόνα (τιμή p=0.271, 0,437, και 0,719 για τις πρωτεΐνες RBD, N και S1, αντίστοιχα).

Σχήμα 1. Παραγωγή IFN-g μετά από διέγερση ολικού αίματος ασθενών με COVID-19 σε ανάρρωση και υγιών μη εκτεθειμένων μαρτύρων με πρωτεΐνη RBD, N ή S1.

Τα αποτελέσματα της διέγερσης ασθενών που αναρρώνουν και μαρτύρων με, αντίστοιχα, την πρωτεΐνη RBD, N ή S1 φαίνονται στο Σχήμα 1Α, Β και Γ. Στο Σχήμα 1Δ, οι αποκρίσεις INF-g κάθε ασθενούς και στους τρεις τα αντιγόνα ομαδοποιούνται. Οι ασθενείς με επιβεβαιωμένη λοίμωξη από COVID-19 αριθμούνται 1–15, εκ των οποίων οι ασθενείς 14 και 15 ήταν ασυμπτωματικοί. Τα άτομα 16-33 είναι αφελείς ασθενείς με COVID-19.

Μετά από 24 ώρες διέγερσης, οι συγκεντρώσεις IFN-g στο πλάσμα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ που βασίζεται στο ένζυμο συνδεδεμένο με το ένζυμο ανθρώπινης IFN-g στο πλάσμα (Biolegend cat. No. 430,101). Το μέγεθος της διέγερσης εκφράστηκε ως η οπτική πυκνότητα στα 450 nm (OD450) για αίμα που διεγείρεται με αντιγόνο μείον το OD450 για αίμα χωρίς διέγερση αντιγόνου. Μια OD 1,0 αντιστοιχούσε με περίπου 400 pg/mL IFN-g. Η φυτοαιμοσυγκολλητίνη (PHA) χρησιμοποιήθηκε ως μιτογόνο σε τελική συγκέντρωση 5 mg/mL στο IGRA για την αξιολόγηση της ποιότητας και της ικανότητας απόκρισης του αίματος. Όλοι οι ασθενείς και οι μάρτυρες έδειξαν μέγιστη παραγωγή της κυτοκίνης με αυτό το μιτογόνο με μέση οπτική πυκνότητα (OD450) 2,54 (SD=0,13), που αντιπροσωπεύει περίπου 1000 pg/mL IFN-g. Δεν υπήρχε διαφορά στο διάμεσο επίπεδο IFN-g στο μη διεγερμένο αίμα ασθενών που αναρρώνουν και υγιών μαρτύρων (OD450=0.38, SD=0.14 έναντι OD450=0.32. SD=0.16). Αυτά τα αποτελέσματα δεν εμφανίζονται. Μια οριζόντια γραμμή έχει σχεδιαστεί σε κάθε γράφημα για να αναπαραστήσει την τιμή αποκοπής για διέγερση. Αυτή η τιμή προσδιορίστηκε με τον υπολογισμό του μέσου όρου συν δύο τυπικές αποκλίσεις της απόκρισης εννέα ατόμων (ασθενείς 16, 18, 19, 22, 27-31) της ομάδας ελέγχου με τη χαμηλότερη παραγωγή INF-g μετά τη διέγερση.

Συζήτηση και συμπεράσματα

Χρησιμοποιώντας μια εύκολη στην εκτέλεση ανάλυση ολικού αίματος που αξιολογεί τις αποκρίσεις των Τ-κυττάρων, διαπιστώσαμε ότι οι περισσότεροι ασθενείς που αναρρώνουν και ένα σημαντικό ποσοστό υγιών μη εκτεθειμένων ατόμων είχαν μια ειδική και ισχυρή απόκριση των Τ-κυττάρων που προσδιορίστηκε με την παραγωγή INF-g μετά από διέγερση με ειδικά αντιγόνα SARS-CoV-2 (Εικόνα 1). Αρκετές μελέτες, όλες με τη χρήση της ανάλυσης ELISPOT, έχουν αναφέρει την παρουσία ανταπόκρισης Τ-κυττάρων στους περισσότερους ή σε όλους τους αναρρώνοντες ασθενείς με COVID-19 (Braun et al., 2020, Grifono et al., 2020, LeBert et al. , 2020, Sekine et al., 2020, Moderbacher et al., 2020, Mateus et al., 2020, Peng et al., 2020).

Ωστόσο, όσον αφορά την απόκριση των Τ-κυττάρων σε υγιείς μη εκτεθειμένους μάρτυρες, έχουν αναφερθεί ποσοστά απόκρισης μεταξύ 28 και 50 τοις εκατό (Doshi, 2020, de Vries, 2020, Lipsitch et al., 2020, Sagar et al., 2020) και αρκετά μελέτες δεν αναφέρουν ανταπόκριση των Τ-κυττάρων σε ασθενείς με πρωτογενείς ελέγχους COVID-19 (de Vries, 2020, Moderbacher et al., 2020, Schwarzkopf et al., 2021). Οι περισσότερες από αυτές τις μελέτες πραγματοποιήθηκαν με τον προσδιορισμό ELISPOT, αλλά στην Ιταλία και τις ΗΠΑ, έχει χρησιμοποιηθεί επίσης ένα IGRA για την ανίχνευση της απόκρισης των Τ-κυττάρων SARS-CoV{13}} (Petrone et al., 2020, Murugesan et al. ., 2020). Και στις δύο μελέτες, ανιχνεύθηκε ειδική απόκριση των Τ-κυττάρων σε ασθενείς που αναρρώνουν. Ωστόσο, το IGRA δεν ανίχνευσε ανταπόκριση INF-g σε υγιή άτομα που δεν εκτέθηκαν.

Η προϋπάρχουσα ανοσία Τ-κυττάρων στον SARS-CoV-2 σε άτομα που δεν έχουν προσβληθεί από COVID-19 έχει αναθεωρηθεί σε αρκετές δημοσιεύσεις (Altmann and Boyton, 2020, Dosho et al., 2020, de Vries, 2020, Sette and Crotty, 2020). Ο λόγος για τον οποίο μπορεί να ανιχνευθεί μια συγκεκριμένη απόκριση των Τ-κυττάρων COVID-19 σε ένα υγιές άτομο που δεν έχει εκτεθεί παραμένει ασαφές και αποτελεί αντικείμενο εικασιών. Οι περισσότερες μελέτες ELISPOT με άτομα που δεν είχαν προσβληθεί από τον COVID{11}} χρησιμοποίησαν δείγματα ανθρώπινου αίματος που είχαν ληφθεί πριν από την ανακάλυψη του ιού SARS-CoV-2 το 2019, επομένως πριν από οποιαδήποτε πιθανότητα έκθεσης. Για το λόγο αυτό, αυτές οι μελέτες ELISPOT κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι η ανταπόκριση των Τ-κυττάρων σε υγιή άτομα που δεν εκτέθηκαν πιθανότατα προέρχεται από προηγούμενη επαφή με κυκλοφορούντες κορονοϊούς «κοινού κρυολογήματος» (Grifoni et al., 2020, Matheus et al., 2020) ή προηγούμενη έκθεση σε γρίπη και/ή ιούς CMV (Mahajan et al., 2020) ή άλλα ιικά ή μικροβιακά αντιγόνα (Tan et al., 2020). Η μελέτη μας χρησιμοποίησε αίμα που λήφθηκε κατά τη διάρκεια της πανδημίας από εθελοντές που ανέφεραν μηδενική επαφή, ήταν οροαρνητικό για το αντιγόνο COVID-19 RBD και δεν είχαν δείξει ποτέ σημεία ή συμπτώματα του COVID-19.

Επομένως, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι η ανταπόκριση των Τ-κυττάρων σε ορισμένους από τους «απλούς» υγιείς ελέγχους COVID-19 προέρχεται από ασυμπτωματικές λοιμώξεις από τον ιό SARS-CoV-2. Οι ασθενείς 14 και 15 της μελέτης μας είναι ένα παράδειγμα αυτού. Αυτά τα άτομα ταξινομήθηκαν ως ασθενείς με COVID-19 λόγω θετικής RT-PCR. Ωστόσο, ήταν ασυμπτωματικά και δεν ανέπτυξαν ανταπόκριση αντισωμάτων έναντι της πρωτεΐνης RBD, αλλά και τα δύο έδειξαν ισχυρή απόκριση των Τ-κυττάρων.

Είναι πιθανό ότι, μετά τον αποικισμό του ρινοφάρυγγα από SARS-CoV-2, το ανοσοποιητικό σύστημα αυτών των δύο ασυμπτωματικών ασθενών τους άφησε μια απόκριση μόνο για κύτταρα μνήμης και δεν είχαν ειδικά αντισώματα SARS-CoV-2 που προκαλείται. Μια άλλη εξήγηση είναι ότι η απόκριση των Τ-κυττάρων προέρχεται από μια προηγούμενη λοίμωξη που μοιάζει με κορώνα και η προϋπάρχουσα ανοσοαπόκριση των Τ-κυττάρων προστάτευσε αυτούς τους δύο ασθενείς από την ανάπτυξη ενός πιο διεισδυτικού προτύπου νόσου. Τα προϋπάρχοντα διασταυρούμενα αντιδραστικά Τ-κύτταρα θα μπορούσαν να είναι σημαντικά για να εξηγήσουν ορισμένες από τις διαφορές στα ποσοστά μόλυνσης ή στην παθολογία (Le Bert et al., 2020, Sagar et al., 2020). Όσον αφορά τη κοόρτη των προηγούμενων ελέγχων, αποκλείσαμε ότι αυτή η ομάδα περιέχει σημαντικό αριθμό ατόμων μολυσμένων με SARSCoV-2 με μη ανιχνεύσιμη ασυμπτωματική λοίμωξη, βασικά επειδή όλα τα ενσωματωμένα στοιχεία της ομάδας ελέγχου είναι οροαρνητικά IgG για το αντιγόνο RBD.

Ένας άλλος λόγος είναι ότι ο επιπολασμός της μόλυνσης στον Ισημερινό είναι σχετικά χαμηλός. Την εποχή αυτής της μελέτης, τον Σεπτέμβριο του 2020, ο Ισημερινός είχε αναφέρει περίπου 200,000 επιβεβαιωμένα κρούσματα COVID-19 (περίπου 1,1 τοις εκατό του πληθυσμού). Φυσικά, ο πραγματικός επιπολασμός λοίμωξης θα μπορούσε να ήταν αρκετές φορές υψηλότερος, αλλά ακόμα κι έτσι, είναι απίθανο το 45 τοις εκατό αυτής της ομάδας ελέγχου να μολύνθηκε και, επομένως, εξετάζουμε μια απόκριση των Τ-κυττάρων ειδική για έναν SARS-CoV {9}} μόλυνση.

Συμπερασματικά, η εύρεση υψηλού ποσοστού μη εκτεθειμένων υγιών ατόμων με προϋπάρχουσα ανοσία στο Κίτο του Ισημερινού, αυξάνει την προσδοκία ότι ένα σημαντικό μέρος του πληθυσμού μας είναι πιθανό να έχει αντιδραστικά Τ-κύτταρα SARS-CoV-2 επειδή προηγούμενης έκθεσης σε γρίπη, ιούς CMV ή κορωνοϊούς που προκαλούν κοινό κρυολόγημα. Οι μελλοντικές έρευνες θα πρέπει να στοχεύουν στο να προσδιορίσουν εάν η προϋπάρχουσα ανοσοαπόκριση είναι προστατευτική και/ή μπορεί να ξεπεράσει μια πιο σοβαρή ασθένεια COVID-19 ή συμβάλλει σε ταχύτερη ανάρρωση.

Σημασία και περιορισμός αυτής της μελέτης

Η μελέτη μας έδειξε ότι το COVID-19 IGRA είναι ένα χρήσιμο και ευαίσθητο νέο εργαλείο που μπορεί να αξιολογήσει την έκθεση σε κοροναϊούς ή τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα σε παρόμοιους ιούς, προσδιορίζοντας την απελευθέρωση IFN-g μετά από διέγερση με ειδικά για τον ιό αντιγόνα. Η τεχνική είναι απλή, σχετικά φθηνή και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε κλινικό εργαστήριο. Αυτό σίγουρα δεν συμβαίνει με την ανάλυση ELISPOT. Επιπλέον, η ανάλυση IGRA μπορεί εύκολα να κλιμακωθεί για μελέτες και έρευνες με βάση τον πληθυσμό όπου απαιτείται μεγάλος αριθμός ασθενών. Μαζί με την ορολογία, το IGRA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο των αποκρίσεων τόσο των αντισωμάτων όσο και των Τ-κυττάρων μεμονωμένων ασθενών για την καλύτερη κατανόηση της ανοσίας σε επίπεδο πληθυσμού και τον προσδιορισμό της προϋπάρχουσας ανοσίας σε οροαρνητικά άτομα.

Ένας σημαντικός περιορισμός της μελέτης μας είναι ότι το δείγμα της μελέτης δεν είναι αντιπροσωπευτικό του πληθυσμού. Δεν χρησιμοποιήθηκαν στατιστικές μέθοδοι για τον προκαθορισμό του μεγέθους του δείγματος. Επιπλέον, η δοκιμασία μας δεν διαφοροποίησε την παραγωγή IFN-g κυττάρων CD4 plus ή CD8 plus, αλλά η διέγερση με καθορισμένα πεπτίδια CD8 (συν) και CD4 (συν) μπορεί να ληφθεί υπόψη (Grifoni et al., 2020, Peng et al. , 2020) και έχει χρησιμοποιηθεί στα IGRA που περιγράφονται στους Petrone et al., 2020 και Murugesan et al., 2020). Επίσης, η επαγωγή άλλων κυτοκινών μπορεί να μετρηθεί με αυτό το IGRA (Petrone et al., 2020). Παρομοίως, το IGRA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για παρακολούθηση του εμβολιασμού για τον προσδιορισμό της ανάπτυξης της απόκρισης των Τ-κυττάρων σε εμβολιασμένα άτομα ή μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προσδιοριστεί εάν η παρουσία Τ-κυττάρων μνήμης διασταυρούμενης αντίδρασης σχετίζεται με προστατευτική ανοσία και μπορεί να μειώνουν τις εκδηλώσεις της νόσου από τη μόλυνση από SARS-CoV-2 (Sagar et al., 2020).

Έγκριση δεοντολογίας και συναίνεση συμμετοχής

Το αίμα συλλέχθηκε μετά από ενημερωμένη γραπτή συγκατάθεση. Η Επιτροπή Δεοντολογίας του Υπουργείου Υγείας του Ισημερινού ενέκρινε το πρωτόκολλο μελέτης 004–2020.

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Συνεισφορές συγγραφέα

Σχεδιασμός μελέτης; JHW και GE? Συλλογή δεδομένων και εργαστηριακά πειράματα: GE, AG, JC, AMR και MMV. Ανάλυση δεδομένων; JHW, GE και ET. Γράψιμο: JHW, GE και ET.

Ευχαριστίες

Εκφράζουμε την ευγνωμοσύνη μας σε όλους τους δωρητές και το προσωπικό υγειονομικής περίθαλψης που εμπλέκεται σε αυτό το έργο, ιδιαίτερα τη Sandra Vivero και τη Sandra Fonseca, για τη βοήθεια στη συλλογή δειγμάτων. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ένα ερευνητικό ταμείο από το Universidad de las Américas. Το Ινστιτούτο Βιώσιμων Επιστημών, Σαν Φρανσίσκο, Καλιφόρνια, ΗΠΑ και το Ίδρυμα "Por Todos" στον Ισημερινό παρείχαν την πρωτεΐνη RBD και την "εσωτερική" ELISA. Ευχαριστούμε τους Howard E. Takiff και Flor Pujol (IVIC, Βενεζουέλα), Paulina E. Andrade (USFQ, Ισημερινός) και Lilly Verhagen (UMC, Ολλανδία) για τις γόνιμες συζητήσεις τους.

βιβλιογραφικές αναφορές

Abate D, Saldan Α, Mengoli C, Fiscon Μ, Silvestre C, Fallico L, et al. Σύγκριση δοκιμασιών ανοσοπροσροφητικής κηλίδας συνδεδεμένου με κυτταρομεγαλοϊό (CMV) και ποσοτικού προσδιορισμού γάμμα ιντερφερόνης για την αξιολόγηση του κινδύνου μόλυνσης από CMV σε λήπτες μεταμόσχευσης νεφρού. J Clin Microbiol 2013;51(8):2501–7.

Altmann DM, Boyton RJ. SARS-CoV-2 Ανοσία Τ-κυττάρων: ειδικότητα, λειτουργία, ανθεκτικότητα και ρόλος στην προστασία. Sci Immunol 2020;5(49)eabd6160.

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S, Nguyen THO, Chromikova V, McMahon Μ, et al. Μια ορολογική ανάλυση για την ανίχνευση ορομετατροπής SARS-CoV-2 σε ανθρώπους. Nat Med 2020; 26:1033–6.

Braun J, Loyal L, Frentsch M, Wendisch D, Georg P, Kurth F, et al. SARS-CoV-2- αντιδρώντα Τ κύτταρα σε υγιείς δότες και ασθενείς με COVID-19. Nature 2020; 587:270–4.

de Vries RD. Ειδικά Τ-κύτταρα SARS-CoV-2-σε μη εκτεθειμένους ανθρώπους: η παρουσία διασταυρούμενων κυττάρων μνήμης δεν ισοδυναμεί με την προστατευτική ανοσία. Sig Transduct Target Ther 2020; 5:224.

Doshi P. Covid-19: έχουν πολλοί άνθρωποι προϋπάρχουσα ανοσία; BMJ 2020; 370: m3563.

Grifoni Α, Weiskopf D, Ramirez SI, Mateus J, Dan JM, Moderbacher CR, et al. Στόχοι αποκρίσεων Tcell στον κορονοϊό SARS-CoV-2 σε ανθρώπους με νόσο COVID-19 και σε άτομα που δεν έχουν εκτεθεί. Cell 2020;181(7)1489–501.

Guevara A, Vivero S, Nipaz V, Guaraca V, Coloma J. Μια χαμηλού κόστους SARS-CoV-2 ELISA rRBD για την ανίχνευση οροκατάστασης στον πληθυσμό του Ισημερινού με COVID-19. Am J Trop Med Hyg [39_TD$DIFF]2021.

Le Bert Ν, Tan ΑΤ, Kunasegaran Κ, Tham CYL, Hafezi Μ, Chia Α, et αϊ. Ειδική ανοσία του SARS-CoV-2- σε περιπτώσεις COVID-19 και SARS και μη μολυσμένα στοιχεία ελέγχου. Nature 2020;584(7821):457–62.

Lipsitch M, Grad YH, Sette A, Crotty S. Διασταυρούμενα αντιδραστικά Τ κύτταρα μνήμης και ανοσία αγέλης στον SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol 2020.

Mahajan S, Kode V, Bhojak K, Magdalene CM, Lee K, Manoharan Μ, et al. Ανοσοκυρίαρχοι επίτοποι Τ-κυττάρων από το αντιγόνο ακίδας SARS-CoV-2 αποκαλύπτουν ισχυρή προϋπάρχουσα ανοσία Τ-κυττάρων σε μη εκτεθειμένα άτομα. bioRxiv 2020.

Mateus J, Grifoni Α, Tarke Α, Sidney J, Ramirez SI, Dan JM, et αϊ. Εκλεκτικοί και διασταυρούμενοι επίτοποι Τ-λεμφοκυττάρων SARS-CoV-2 σε μη εκτεθειμένους ανθρώπους. Science 2020;370 (6512):89–94.

Moderbacher RC, Ramirez SI, Dan JM, Grifoni A, Hastie KM, Weiskopf D, et al. Αντιγονοειδική προσαρμοστική ανοσία στον SARS-CoV-2 σε οξύ COVID-19 και συσχετίσεις με την ηλικία και τη σοβαρότητα της νόσου. Κύτταρο 2020; S0092-8674(20):31235–6.

Murugesan Κ, Jagannathan Ρ, Pham TD, Pandey S, Bonilla HF, Jacobson Κ, et αϊ. Δοκιμασία απελευθέρωσης ιντερφερόνης γάμμα για ακριβή ανίχνευση της απόκρισης των Τ κυττάρων SARS-CoV-2. Clin Infect Dis 2020;ciaa1537.

Ni L, Ye F, Cheng ML, Feng Y, Deng YQ, Zhao H, et al. Ανίχνευση ειδικής χυμικής και κυτταρικής ανοσίας SARS-CoV-2- σε άτομα που αναρρώνουν από COVID-19. Immunity 2020;52(6)971–7.

Pai M, Denkinger CM, Kik SV, Rangaka MX, Zwerling A, Oxlade O, et al. Δοκιμασίες απελευθέρωσης γάμμα ιντερφερόνης για ανίχνευση λοίμωξης από Mycobacterium tuberculosis. Clin Microbiol Rev 2014;27(1):3–20.

Peng Y, Mentzer AJ, Liu G, Yao X, Yin Z, Dong D, et al. Ευρεία και ισχυρή μνήμη CD4 plus και CD8 plus Τ κύτταρα που προκαλούνται από SARS-CoV-2 σε άτομα που αναρρώνουν στο Ηνωμένο Βασίλειο μετά από COVID-19. NatImmunol 2020.

Petrone L, Petruccioli Ε, Vanini V, Cuzzi G, Fard SN, Alonzi Τ, et αϊ. Μια εξέταση ολικού αίματος για τη μέτρηση της ειδικής ανταπόκρισης SARS-CoV-2-σε ασθενείς με COVID-19. Clin Microbiol Infect 2020.

Sagar Μ, Reifler Κ, Rossi Μ, Miller NS, Sinha Ρ, White L, et αϊ. Η πρόσφατη ενδημική μόλυνση από κορωνοϊό σχετίζεται με λιγότερο σοβαρό COVID-19. J Clin Invest 2020.

Schwarzkopf S, Krawczyk Α, Knop D, Klump Η, Heinold Α, Heinemann FM, et al. Κυτταρική ανοσία σε ασθενείς με COVID-19 με λοίμωξη επιβεβαιωμένη με PCR αλλά με μη ανιχνεύσιμο SARS-CoV-2-Ειδικό IgG. Emerg Infect Dis. 2021; 27 (1).

Sekine T, Perez-Potti A, Rivera-Ballesteros O, Strålin K, Gorin JB, Olsson A, et al. Ισχυρή ανοσία Τ-λεμφοκυττάρων σε άτομα που βρίσκονται σε ανάρρωση με ασυμπτωματικό ή ήπιο COVID-19. Cell 2020; 183(1)158–68.

Sette A, Crotty S. Προϋπάρχουσα ανοσία στον SARS-CoV-2: τα γνωστά και τα άγνωστα. Nat Rev Immunol. 2020; 20(8)457–8.

Tan CCS, Owen CJ, Tham CYL, Bertoletti A, van Dorp L, Balloux F. Η προϋπάρχουσα διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με τη μεσολάβηση Τ κυττάρων στον SARS-CoV-2 δεν μπορεί να εξηγηθεί αποκλειστικά από την προηγούμενη έκθεση σε ενδημικούς ανθρώπινους κοροναϊούς. bioRxiv 2020;2020.

For more information:1950477648nn@gmail.com