Πιθανό θεραπευτικό όφελος της χαμηλής δόσης Cistanche στο σύνδρομο χρόνιας κόπωσης
May 27, 2022
Σύνδρομο χρόνιας κόπωσης(ME/CFS) είναι ένα εξουθενωτικό πολυσυστημικόχρόνια πάθηση άγνωστης αιτιολογίας κατηγορίαςfifiως ανοσολογική δυσλειτουργίασύνδρομο και νευρολογική διαταραχή. Η ανακάλυψη του ευρέως εκφραζόμενου ΜεταβατικούΔυναμικό υποδοχέα Μελαστατίνη 3 (TRPM3) ως κανάλι αλγοϋποδοχέων που στοχεύει ουσιαστικάαπό ορισμένους υποδοχείς οπιοειδών και η επίδρασή τους στο ασβέστιο (Ca2 συν)-εξαρτώμενος φυσικός δολοφόνοςΟι ανοσοποιητικές λειτουργίες των κυττάρων (ΝΚ) έχουν αυξήσει την πιθανότητα να είναι το TRPM3φαρμακολογικά στοχευμένα για τη θεραπεία χαρακτηριστικών συμπτωμάτων ME/CFS. Ναλτρεξόνηυδροχλωρίδιο (NTX) δρα ως ανταγωνιστής στο mu (m)-υποδοχέας οπιοειδών αναιρώντας έτσιτην ανασταλτική του λειτουργία στο TRPM3. Με βάση τα οφέληαναφέρθηκε από τους ασθενείς στο δικό τουςσυμπτώματα, χαμηλή δόση NTX (LDN, 3.0–5. Η θεραπεία με 0 mg/ημέρα) φαίνεται να προσφέρει κάποιο πιθανό όφελοςυποδηλώνοντας ότι η επίδρασή του μπορεί να στοχεύει στον παθομηχανισμό του ΜΕ/CFS. Καθώς δεν υπάρχει βιβλιογραφία που να το επιβεβαιώνειη αποτελεσματικότηταLDN για ασθενείς με ME/CFSin vitro, Αυτή η μελέτη διερευνά την πιθανή θεραπευτική επίδραση της LDN σε ασθενείς με ME/CFS. TRPM3Η δραστηριότητα του διαύλου ιόντων μετρήθηκε μετά από διαμόρφωση με θειική πρεγνενολόνη (PregS) και καμία σεΚύτταρα ΝΚ σε 9 ασθενείς με ME/CFS που έλαβαν LDN και 9 ταιριάστηκαν ανάλογα με την ηλικία και το φύλουγιείς μάρτυρες που χρησιμοποιούν την τεχνική ολοκύτταρου επιθέματος-σφιγκτήρα. Αναφέρουμε ότι ασθενείς με ME/CFSλαμβάνοντας LDN έχουν αποκαταστήσει τα ιονικά ρεύματα TRPM3-στα κύτταρα ΝΚ. Μικρά ιοντικά ρεύματα με ατυπικό TRPM3-όπως η διόρθωση προς τα έξωμετρήθηκαν μετά την εφαρμογή του PregS, αTRPM3-αγωνιστής, σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς που λαμβάνουν LDN. Επιπλέον, ιοντικό που προκαλείται από PregSτα ρεύματα μέσω του TRPM3 ήταν σημαντικάδιαμορφώνεται από κανένα σε, έναν ανταγωνιστή TRPM3-,σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν την υπόθεση ότιΤο LDN μπορεί να έχει δυνατότητα ως θεραπεία για ME/CFS χαρακτηρίζοντας το υποκείμενο ρυθμιστικούς μηχανισμούς θεραπείας με LDN που περιλαμβάνουν TRPM3 και υποδοχείς οπιοειδών στη ΝΚκύτταρα. Τέλος, η μελέτη αυτή μπορεί να χρησιμεύσει για τον επαναχρησιμοποίηση φαρμάκων που διατίθενται στην αγορά, καθώς και για υποστήριξητην έγκριση προοπτικών τυχαιοποιημένων κλινικών μελετών σχετικά με το ρόλο και τη δόση του NTX σεθεραπεία ασθενών με ME/CFS.
Λέξεις-κλειδιά:χαμηλή δόση κίστανχου, δυναμικό παροδικού υποδοχέα μελαστατίνη 3, ασβέστιο, υποδοχέας οπιοειδών, μυαλγικήεγκεφαλομυελίτιδα/σύνδρομο χρόνιας κόπωσης, φυσικά κύτταρα δολοφόνοι, ηλεκτροφυσιολογία εμπλάστρου-σφιγκτήρα ολόκληρων κυττάρων
ΕΙΣΑΓΩΓΗ
Μυαλγική Εγκεφαλομυελίτιδα/Σύνδρομο χρόνιας κόπωσης(ΜΟΥ/CFS) είναι μια σοβαρή πολυσυστημική κατάσταση που χαρακτηρίζεται απόεπίμονη εξουθενωτική κόπωση που συνοδεύεται από μια σειρά απόαπενεργοποίηση συμπτωμάτων όπως αδιαθεσία μετά την άσκηση, ύπνοςδυσλειτουργία, εκτεταμένος πόνος, καθώς και νευρογνωστικές,αυτόνομο, καρδιαγγειακό, νευροενδοκρινικό και ανοσοποιητικόεκδηλώσεις (1, 2). Υπάρχει ποικίλη σοβαρότητα του ME/CFS(ήπια έως πολύ σοβαρή) (3), όπου είναι σημαντικόκαι συνεπήςΑνοσολογική δυσλειτουργία και ανωμαλίες στο Natural killer (NK)κυτταρικές λειτουργίες έχουν αναφερθεί με βάση τη σοβαρότητα (4). Χωρίςμια κλινικά καθιερωμένη διαγνωστική εξέταση, η διάγνωση είναι πολύπλοκη καιανακριβής. Η διάγνωση αυτή τη στιγμή βασίζεται σε διαφορετικά συμπτώματαορισμούς περιπτώσεων, γνωστό ως Καναδικά Κριτήρια Συναίνεσης(CCC, 2003) και τα International Case Criteria (2011), τα οποίααντιμετώπιση των κλινικών χαρακτηριστικών του ME/CFS (2, 5, 6). οαιτιολογίας και ειδικήςπαθοφυσιολογία της κατάστασης, η οποίαεπηρεάζει 17 έως 24 εκατομμύρια ανθρώπους παγκοσμίως (7), παραμένουν άγνωστα.Το ME/CFS δυνητικά αναπτύσσεται λόγω βλάβηςΜη εκλεκτικό κατιόν δυναμικού μεταβατικού υποδοχέα (TRP).κανάλια που προκαλούνται είτε από γενετικούς είτε από επίκτητους παράγοντες (8–13). Προηγούμενες μελέτες υπέδειξαν τη σημασία της TRP Melastatin 3(TRPM3), ένα ευρέως εκφρασμένο ασβέστιο (Ca2 συν)-διαπερατόςμη εκλεκτικός δίαυλος κατιόντων, στην παθοφυσιολογία του ME/CFS(8–10). Πρόσφατα, ανεξάρτητες ηλεκτροφυσιολογικές έρευνεςέδειξε απώλεια λειτουργίας του διαύλου ιόντων TRPM3 μετάδιέγερση με δύο ισχυρούς TRPM3-αγωνιστές, την πρεγνενολόνηθειικό (PregS) και νιφεδιπίνη, και αναστολή με εκλεκτικόκαι ισχυρός αναστολέας, η δεοξυβεζοΐνη ονονετίνη, σε κύτταρα ΝΚ απότρεις διαφορετικές κοόρτες ασθενών με ME/CFS (11–13). Το TRPM3 έχει εντοπιστεί προηγουμένωςως χημειο- καιθερμοευαίσθητο κανάλι αλγοϋποδοχέων στο σωματοαισθητικόσύστημα και εμπλέκεται στην ανίχνευση επιβλαβούς θερμότητας και φλεγμονήςυπεραλγησία θερμότητας καθώς και στη μετάδοση του πόνου(14). Πρόσφατη βιβλιογραφία προτείνει ότι τα μονοπάτια σηματοδότησηςσχετίζεται με την ενεργοποίηση ορισμένων συζευγμένων πρωτεϊνών GΟι υποδοχείς (GPCR), που ονομάζονται υποδοχείς οπιοειδών, μπορούν να αναστείλουν το TRPM3δραστηριότητα διαύλου ιόντων μέσω άμεσης δέσμευσης του Gbgυπομονάδα τουτριμερικές G-πρωτεΐνες στο κανάλι ιόντων (15–18). Φυσιολογικώς,οι υποδοχείς οπιοειδών ενεργοποιούνται από ενδογενή πεπτίδια οπιοειδών σερυθμίζουν τους μηχανισμούς πόνου και φλεγμονώδειςμονοπάτια (19). Τα οπιοειδή φάρμακα ή τα οπιούχα παράγουν τόσο αναλγησία όσο καιανεπιθύμητες παρενέργειες με σύνδεση με τους ίδιους GPCR (19). Τα στοιχεία δείχνουν ότι οι υποδοχείς οπιοειδών δεν εκφράζονται μόνοαπό το κεντρικό νευρικό σύστημα (ΚΝΣ), αλλά είναι ευρέως κατανεμημένεςσε ιστούς και συστήματα οργάνων εκτός του ΚΝΣ, όπως τοκύτταρα του ανοσοποιητικού (20). Ενεργοποίηση υποδοχέων οπιοειδών λευκοκυττάρωνοδηγεί στην έκκριση ενδογενών οπιοειδών πεπτιδίων, τα οποίαστη συνέχεια ενεργοποιούν τους νευρωνικούς υποδοχείς οπιοειδών και ανακουφίζουνπόνος (21). Τα οπιοειδή αποδείχθηκε επίσης ότι έχουν ανοσοκατασταλτικάεπιδράσεις στο έμφυτο και προσαρμοστικό ανοσοποιητικό σύστημα (22). ΜΟΥ/Η παθολογία του CFS μπορεί να θεωρηθεί ως διαταραχή του διαύλου ιόντων ήκαναλοπάθεια (8–13) καθώς και μια δυσλειτουργία του ανοσοποιητικούσύνδρομο και νευρολογική διαταραχή (23, 24). Επομένως, είναι ζωτικής σημασίαςνα διερευνήσει τους ρυθμιστικούς μηχανισμούς στους οποίους βασίζεται ηTRPM3-αλληλεπίδραση υποδοχέα οπιοειδών σε κύτταρα ΝΚ από ME/CFSασθενείς να κατανοήσουν καλύτερα την παθογένεια.Η ανακάλυψη του TRPM3 ως καναλιού υποδοχέα πόνουστοχεύονται ουσιαστικά από ορισμένους υποδοχείς οπιοειδών, καθώς και από αυτήνυπονοούμενα στο Ca2 συν-εξαρτώμενες ανοσοποιητικές λειτουργίες ΝΚ κυττάρωνυποδηλώνει ότι ο δίαυλος ιόντων TRPM3 μπορεί να είναι φαρμακολογικάστοχεύει στη θεραπεία ME/CFS. Η υδροχλωρική ναλτρεξόνη (ΝΤΧ) είναι αμακράς διαρκείας ανταγωνιστής οπιοειδών συγκεκριμέναστοχεύοντας το μου-οπιοειδέςυποδοχέας (ΜΟΡ) και, σε μικρότερο βαθμό, το δέλτα-οπιοειδέςυποδοχείς (dΉ) (25, 26). Το δέσιμο του NTX σεmΤο OR αναιρείτην ανασταλτική λειτουργία αυτών των υποδοχέων οπιοειδών στο TRPM3 (15, 17, 18, 26). Το έχουμε αναφέρει προηγουμένωςin vitroθεραπευτική αγωγήτων κυττάρων ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS με NTX για 24 ώρες, αποκαθιστάη δραστηριότητα του καναλιού ιόντων TRPM3 (13). Αποκατάσταση του ιόντος TRPM3η δραστηριότητα του καναλιού με τη σειρά του αποκατέστησε το κατάλληλο Ca2 συνσηματοδότηση καιper seΝΚ κύτταρα' λειτουργίες ενεργοποίησης και τελεστή(13). Το NTX χρησιμοποιείται συνήθως στη θεραπεία οπιοειδών καιεξάρτηση από το αλκοόλ σε δόση 50-100 mg/ημέρα (25). Στα ψηλάδοσολογία, το NTX πιστεύεται ότι εμποδίζει τα αισθήματα ευφορίας των βήτα-ενδορφινώνπου εμπλέκονται σε φυσικά κυκλώματα ανταμοιβής καιεπομένως μπορεί να διατηρήσει τον εθισμό (27). Μια χαμηλή δόση (3.0–5.0 mg/ημέρα,χαμηλή δόση NTX, LDN) φαίνεται να έχει αντίθετο αποτέλεσμα,ενισχύοντας την επίδραση της ενδορφίνης για μείωση του πόνου και τόνωσηευχαρίστηση (28). Αυτό πιστεύεται ότιέχουν σχέση με ασθένειεςόπως ME/CFS, όπου δεν επαρκείέκκριση ενδογενούςτα οπιοειδή πεπτίδια επηρεάζουν την ανοσολογική απόκριση ή τον έλεγχο του πόνου (29, 30), ή την απελευθέρωση προφλεγμονώδουςκυτοκίνες (25, 31). Πρόσφατομελέτη ανέφερε ότι το LDN είναι ασφαλές και αποτελεσματικό για την ανακούφιση του ME/CFSσυμπτώματα με αναδρομική εξέταση του κλινικού ασθενούςαρχεία 218 ασθενών με ME/CFS στους οποίους χορηγήθηκε LDN (27). Ακόμα κι αννέα στοιχεία δείχνουν ότι το LDN μπορεί να βελτιώσει την καθημερινή λειτουργία καιποιότητα ζωής σε ασθενείς με ME/CFS, περαιτέρωin vitroέρευνα είναιαπαιτείται για την κατανόηση των υποκείμενων ρυθμιστικών μηχανισμώνπου εμπλέκουν TRPM3 και υποδοχείς οπιοειδών σε κύτταρα ΝΚ για να βοηθήσουνκατανοούν τον παθομηχανισμό του ME/CFS και αναγνωρίζουνθεραπευτικούς στόχους.Η παρούσα μελέτη διερεύνησε το δυνητικό θεραπευτικό αποτέλεσματου LDN σε ασθενείς με ME/CFS με αποκατάσταση του διαύλου ιόντων TRPM3λειτουργούν σε κύτταρα ΝΚ χρησιμοποιώντας τεχνικές εμπλάστρου-σφιγκτήρα ολικών κυττάρων.Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN έχουναποκατέστησε TRPM3-όπως ιοντικά ρεύματα σε κύτταρα ΝΚ. Αποκατάσταση τουΗ λειτουργία TRPM3 απαιτείται για την προώθηση του Ca2 συναναδιαμόρφωση σήματοςσε κύτταρα ΝΚ καιper seΛειτουργίες ενεργοποίησης κυττάρων ΝΚ και τελεστών.Αυτό είναι το πρώτομελέτη για την αναφορά της αποτελεσματικότηταςτου LDN για ME/CFSασθενείςin vitro, επομένως επιβεβαιώνονταςτις δυνατότητές του για χρήση ως αθεραπεία για τη νόσο.
ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙΠρόσληψη Συμμετεχόντων
Εννέα ασθενείς με ME/CFS και εννέα υγιείς ανάλογα με την ηλικία και το φύλοοι έλεγχοι (HC) στρατολογήθηκαν χρησιμοποιώντας το Εθνικό Κέντρο γιαΑσθενής Νευροανοσολογίας και Αναδυόμενων Νοσημάτων (NCNED).βάση δεδομένων μεταξύ Σεπτεμβρίου 2019 και Φεβρουαρίου 2021.Οι συμμετέχοντες ήταν ηλικίας μεταξύ 18 και 60 ετών. Όλα ME/CFSοι ασθενείς είχαν λάβει προηγουμένως επιβεβαιωμένηιατρική διάγνωσηκαι ελέγχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ολοκληρωμένο διαδικτυακό ερωτηματολόγιοπου αντιστοιχεί με τα Κέντρα Ελέγχου Νοσημάτων καιΟρισμοί περιπτώσεων πρόληψης (CDC), CCC και ICC. Και οι εννέα ME/Ορίστηκαν ασθενείς με CFSαπό το CCC. Και οι εννέα ασθενείς με ME/CFSπροσλήφθηκαν από το NCNED καθώς είχαν ξεκινήσει προηγουμένως το LDNθεραπεία (3.0–5.0 mg/ημέρα) για τουλάχιστον 4 εβδομάδες ως μέρος τουσχέδιο διαχείρισης μετά από συνταγή από τον γενικό ιατρό τους.Η HC δεν ανέφερε περιστατικά κόπωσης και ήταν καλά στην υγεία τηςχωρίς στοιχεία ασθένειας. Οι συμμετέχοντες αποκλείστηκαν από αυτόμελέτησε εάν ήταν έγκυος ή θήλαζαν, ή αν ανέφεραν απροηγούμενο ιστορικό καπνίσματος, κατάχρησης αλκοόλ ή χρόνιας ασθένειας(για παράδειγμα, αυτοάνοσα νοσήματα, καρδιαγγειακά νοσήματα,διαβήτης, μεταβολικό σύνδρομο, νόσος του θυρεοειδούς, κακοήθειες,αϋπνία, χρόνια κόπωση και πρωτογενείς ψυχολογικές διαταραχές)ή ήταν παχύσαρκοι (ΔΜΣΜεγαλύτερο ή ίσο με30). Κανένας συμμετέχων δεν ανέφερε χρήση οπιοειδώνή οποιοδήποτε άλλο παυσίπονο τους προηγούμενους 3 μήνες καθώς καιφαρμακολογικούς παράγοντες που επηρεάζουν άμεσα ή έμμεσα TRPM3 ή Ca2 συνσηματοδότηση. Στους συμμετέχοντες χορηγήθηκε τοεπιλογή διακοπής οποιασδήποτε σύγκρουσηςφάρμακα για τουλάχιστον 14ημέρες πριν από την αιμοδοσία με την έγκριση του ιατρού τους.Όλοι οι συμμετέχοντες συμπλήρωσαν ένα διαδικτυακό ερωτηματολόγιο για παροχήκοινωνικοδημογραφικό υπόβαθρο, ιατρικό ιστορικό, φάρμακα καιιστορικό συμπτωμάτων για ασθενείς με ME/CFS (Τραπέζι 1). Το 36-στοιχείοσύντομη έρευνα για την υγεία (SF-36) και τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας(ΠΟΥ) Το Πρόγραμμα Αξιολόγησης Αναπηρίας (DAS) χρησιμοποιήθηκε γιακαθορίζει το επίπεδο αναπηρίας και την ποιότητα ζωής (Πίνακας 2) (32, 33). Τέλος, ζητήθηκε από τους ασθενείς με ME/CFS να αναφέρουν μόνοι τους τη σοβαρότητα τουσυμπτώματα πριν και μετά τη λήψη LDN (Πίνακας 3). ΑυτόΗ έρευνα εγκρίθηκε από τον ΓκρίφιθΠανεπιστημιακός ΆνθρωποςΕπιτροπή Δεοντολογίας Έρευνας (GU2019/1005) και Gold CoastΕπιτροπή Δεοντολογίας Ανθρώπινης Έρευνας Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου(HREC/2019/QGC/56469).
Μονοπυρηνικό Κύτταρο Περιφερικού ΑίματοςΑπομόνωση και Απομόνωση Φυσικών Φονικών Κυττάρων
Συνολικά συλλέχθηκαν 85 ml ολικού αίματοςσωλήνες αιθυλενοδιαμινοτετραοξικού οξέος (EDTA).μέσωφλεβοκέντησηαπό ειδικευμένοφλεβοτόμος από κάθε συμμετέχοντα μεταξύ 8:30 π.μκαι 10:30 π.μ. στις τοποθεσίες συλλογής συμπεριλαμβανομένου του ΓκρίφιθΠανεπιστήμιο,Royal Brisbane and Women's Hospital, Robina Hospital, SunshineCoast University Hospital, Calvary John James Hospital,
Royal Melbourne Hospital, Αυστραλία. Πλήρης ανάλυση αίματος ρουτίναςδιενεργήθηκε εντός τεσσάρων ωρών από τη συλλογή για ερυθρά αιμοσφαίριαμέτρηση, αριθμός λευκών αιμοσφαιρίων και αριθμός κοκκιοκυττάρων για το καθένασυμμετέχων στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Gold Cost ή στο Royal MelbourneΝοσοκομείο, Αυστραλία.Δείγματα παρασχέθηκαν στο εργαστήριο και αποταυτοποιήθηκανχρησιμοποιώντας έναμοναδικός κωδικός από ανεξάρτητο συλλέκτη αίματος. Περιφερικό αίμαμονοπύρηνα κύτταρα (PBMCs) απομονώθηκαν από 80 ml ολόκληρουαίμα με φυγοκέντρηση σε μέσο βαθμίδωσης πυκνότητας (FicollPaque Premium; GE Healthcare, Ουψάλα, Σουηδία) όπως προηγουμένωςπεριγράφεται (34, 35). Τα PBMC χρωματίστηκαν με μπλε τρυπανίου(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) για τον προσδιορισμό του αριθμού κυττάρων καιβιωσιμότητα των κυττάρων. Τα PBMC προσαρμόστηκαν σε αfifiεθνική συγκέντρωση του5x107 κύτταρα/ml για απομόνωση κυττάρων ΝΚ.Τα κύτταρα ΝΚ απομονώθηκαν με ανοσομαγνητική επιλογή χρησιμοποιώντας έναΚιτ απομόνωσης ανθρώπινων αρνητικών κυττάρων NK EasySep (ΒλαστοκύτταραTechnologies, Βανκούβερ, BC, Καναδάς). Καθαρισμός κυττάρων ΝΚ καθορίστηκε χρησιμοποιώνταςflflow κυτταρομετρία. Τα κύτταρα ΝΚ επωάστηκανεπί 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου παρουσία CD56FITC ({{0}}.25μg/5μl) και CD3 PE Cy7 (0,25μg/20μl) μονοκλωνικάαντισώματα (BD Bioscience, San Jose, CA, USA) όπως προηγουμένωςπεριγράφεται (10). 7-αμινο-ακτινομυκίνη (7-AAD) (2,5 μl/τεστ) (BDBioscience, San Jose, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό του κυττάρουβιωσιμότητα. Τα κύτταρα πλύθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε 200ml απόρυθμιστικό διάλυμα λεκέδων (BD Bioscience, New Jersey, ΗΠΑ) και αποκτήθηκεστις 10,000 εκδηλώσεις χρησιμοποιώντας το LSRFortessa X-20 (BD Biosciences,Σαν Ντιέγκο, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Χρησιμοποιώντας μπροστινή και πλευρική διασπορά, τοΟ πληθυσμός των λεμφοκυττάρων περιορίστηκε κατά τη λήψη του δείγματος.Στη συνέχεια αναγνωρίστηκε ο πληθυσμός των κυττάρων ΝΚως CD3− CD56συνκύτταρα.
Καταγραφή Ηλεκτροφυσιολογίας Ολόκληρων Κυττάρων
Πραγματοποιήθηκαν ηλεκτροφυσιολογικές καταγραφές με βοριοπυριτικόγυάλινα τριχοειδή ηλεκτρόδια με εξωτερική διάμετρο 1,5 mm και ανεσωτερική διάμετρος 0.86 mm (Harvard Apparatus, Holliston, MA,ΗΠΑ). Αντίσταση πιπέτας όταν γεμίζεταιμε διάλυμα πιπέτας ήταν 8-12 MW. Οι πιπέτες τοποθετήθηκαν σε μια κεφαλή CV203BU(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) που συνδέονται με έναν 3-τρόποχοντρός χειριστής και μικρο-χειριστής (Narishige, Τόκιο,Ιαπωνία). Τα ηλεκτρικά σήματα ενισχύθηκανκαι καταγράφηκε χρησιμοποιώντας έναΕνισχυτής Axopatch 200Bκαι το λογισμικό PClamp 10.7 (MolecularDevices, Sunnyvale, CA, ΗΠΑ). Τα δεδομένα φιλτραρίστηκανστα 5 kHz καιδειγματοληψία ψηφιακά στα 10 kHzμέσωένα αναλογικό Digidata 1440Aψηφιακός μετατροπέας (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). οΤο πρωτόκολλο ράμπας τάσης ήταν ένα βήμα από το δυναμικό διατήρησης συν 10mV σε−90 mV, ακολουθούμενη από ράμπα 0,1 δευτερολέπτων σε συν 110 mV, πρινεπιστρέφοντας στα συν 10 mV (επαναλαμβανόμενο κάθε 10 δευτερόλεπτα). Η διασταύρωση υγρούδυναμικό μεταξύ της πιπέτας και του διαλύματος λουτρού (−10 mV) ήτανδιορθώθηκε. Δεν αφαιρέθηκε στοιχείο ρεύματος διαρροήςτα καταγεγραμμένα ρεύματα. Το ηλεκτρόδιο γέμισεμε την ενδοκυτταρικήδιάλυμα πιπέτας που περιέχει 30 mM CsCl, 2 mM MgCl2, 110 mML-ασπαρτικό οξύ, 1 mM EGTA, 10 mM HEPES, 4 mM ATP,0.1 mM GTP, ρυθμισμένο pH στο 7,2 με CsOH και ωσμωτικότητα του
290 mOsm/L με D-μαννιτόλη. Το διάλυμα της πιπέτας διηθήθηκε χρησιμοποιώντας ένα 0.22mm φίλτρο μεμβράνης(Sigma-Aldrich, St. Louise, MO,ΗΠΑ), χωρίζεται σε δείγματα και αποθηκεύεται σε−20 μοίρες. Λύση μπάνιουπεριέχεται: 130 mM NaCl, 10 mM CsCl, 1 mM MgCl2, 1,5 mMCaCl22H2Ο, 10 mM HEPES, ρυθμισμένο ρΗ στο 7,4 με NaOH καιωσμωτικότητα 300 mOsm/L με D-γλυκόζη. Όλα τα αντιδραστήρια ήταναγοράστηκε από τη Sigma-Aldrich, εκτός από την ATP και την GTP πουαγοράστηκαν από την Sapphire Bioscience. TRPM3 ιοντικόΤα ρεύματα στα κύτταρα ΝΚ διεγέρθηκαν με την προσθήκη 100mM PregS(Tocris Bioscience, Bristol, UK) στο διάλυμα λουτρού, ενώΤα ρεύματα TRPM3 που προκαλούνται από PregS μπλοκάρονται με την προσθήκη 10mM ononetin (Tocris Bioscience, Bristol, UK). Για κάθε συμμετέχοντα,Έγιναν 10 διαφορετικές ηχογραφήσεις. Ως εκ τούτου, το N αναφέρεται στον αριθμό τωνσυμμετέχοντες σε κάθε ομάδα (ασθενείς ME/CFS ή HC) και n, στουςαριθμός αναγνώσεων ή μέγεθος δείγματος. Όλες οι μετρήσεις ήτανεκτελείται σε θερμοκρασία δωματίου. Οι συγγραφείς αφαίρεσαν τοπιθανότητα εμπλοκής του ρεύματος χλωρίου στο TRPM3αξιολόγηση με χρήση L-ασπαρτικού οξέος στην ενδοκυτταρική πιπέταλύση. Αποκλείστηκαν επίσης κύτταρα που έχουν ασταθή ρεύματααπό την ανάλυση.Στατιστική ανάλυσηΤαυτοποιήθηκαν πληθυσμοί λεμφοκυττάρωναπό συνάδελφοκυτταρομετρία χρησιμοποιώνταςμπροστινά και πλαϊνά διασκορπίσματα με τελείες. Η καθαρότητα του CD3- CD56συνπροσδιορίστηκαν τα λεμφοκύτταρα. Τα δεδομένα κυτταρομετρίας εξήχθησαν απόFacsDiva v8.1 και αναλύθηκε με χρήση SPSS v24 (IBM Corp, Version24, Armonk, NY, ΗΠΑ) και GraphPad Prism v7 (GraphPadSoftware Inc., Έκδοση 7, La Jolla, CA, USA). ΗλεκτροφυσιολογικήΤα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό pCLAMP 10.7 (MolecularDevices, Sunnyvale, CA, ΗΠΑ). Προέλευση 2018 (OriginLabCorporation, Northampton, MA, ΗΠΑ) και GraphPad Prismv7 (GraphPad Software Inc., Έκδοση 7, La Jolla, CA, USA) ήτανχρησιμοποιείται για στατιστική ανάλυση και παρουσίαση δεδομένων. Οπτική καιχρησιμοποιήθηκαν υπολογιστικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της κανονικότητας τουανεξάρτητα δεδομένα.
Συγκεκριμένα, ιστογράμματα και τοΧρησιμοποιήθηκαν δοκιμασία κανονικότητας Shapiro-Wilk, λοξότητα και κύρτωσηγια τον προσδιορισμό της κατανομής των δεδομένων και της κανονικότητας. Σε συνάρτησησχετικά με την κανονικότητα, πραγματοποιήθηκε στατιστική σύγκριση χρησιμοποιώντας τοανεξάρτητη μη παραμετρική δοκιμή Mann-Whitney U, ήανεξάρτητο παραμετρικό t-test. Χρησιμοποιήθηκε το ακριβές τεστ Fishersπροσδιορίζουν την ευαισθησία των ΝΚ κυττάρων στην ονονετίνη. Σημασίαήταν ρυθμισμένοστη σελ<0.05 and="" the="" data="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" sem="" unless="">δηλώνεται διαφορετικά.ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑΧαρακτηριστικά Συμμετεχόντων καιΠαράμετροι αίματοςΣυμπεριλήφθηκαν δεκαοκτώ συμμετέχοντες με αντιστοιχία ηλικίας και φύλουαυτή η έρευνα. Τα δημογραφικά στοιχεία για τους ασθενείς είναισυνοψίζονται σεΤραπέζι 1. Δεν υπήρχε κανένα σημαντικόδιαφορά σεηλικία ή φύλο μεταξύ ασθενών με ME/CFS και HC. Το SF-36 καιΟι έρευνες WHODAS χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό της υγείας των συμμετεχόντωνσχετική ποιότητα ζωής (Πίνακας 2) (36, 37).
Όπως ήταν αναμενόμενο, υπήρξε μια σημαντικήδιαφορά στις βαθμολογίες SF-36 και WHODAS μεταξύΑσθενείς με ME/CFS και HC. Επιπλέον, πλήρης εξέταση αίματοςμετρήθηκαν παράμετροι για κάθε υγιή συμμετέχοντα καιΑσθενείς με ME/CFS (Πίνακας 2). Ενώ αναφέραμε ένα σημαντικό διαφορά για τα ηωσινόφιλα μεταξύ υγιών συμμετεχόντων και ME/Οι ασθενείς με CFS, όλα τα αποτελέσματα ήταν εντός των καθορισμένωναναφοράκυμαίνεται όπως παρέχεται από το Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Gold CoastΠαθολογική Μονάδα, διαπιστευμένο εργαστήριο ΝΑΤΑ. Κανένα σημαντικό αναφέρθηκαν διαφορές σε άλλες παραμέτρους. Τέλος, ME/CFSοι ασθενείς ανέφεραν βελτίωση στην εξασθενημένη σκέψη,συγκέντρωση και γνωστική υπερφόρτωση καθώς και άλλα ανοσοποιητικάσυμπτώματα διαταραχών (πονόλαιμος, διευρυμένη ή ευαίσθητη λέμφοςκόμβους και ευαισθησία στο κρυολόγημα/γρίπη) μετά από θεραπεία μεLDN (Πίνακας 3), όπως περιγράφηκε προηγουμένως (27, 38).
Φυσική καθαρότητα κυττάρων φονέων
Κύτταρο ΝΚκαθαρότητα (CD3- /CD56συν) ήταν 92,42 τοις εκατό ± 1,849 για HC και82,20 τοις εκατό ± 9,409 για ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN όπως προσδιορίστηκεμεflflω κυτταρομετρία (Σχήμα 1Α). Δεν υπήρχε κανένα σημαντικό διαφορά στην καθαρότητα των ΝΚ κυττάρων σε ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDNσε σύγκριση με HC (Εικόνα 1Β).
Δραστηριότητα καναλιού ιόντων TRPM3 ΜετάΔιέγερση πρεγνενολόνης σε κύτταρα ΝΚΑπό ME/CFS ασθενείς που λαμβάνουν LDNΣε σύγκριση με κύτταρα NK από HC
Η δραστηριότητα του διαύλου ιόντων TRPM3 καταγράφηκε σε απομονωμένη ανθρώπινη ΝΚκύτταρα από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN (3.0–5.0 mg/ημέρα) καισε σύγκριση με απομονωμένα ανθρώπινα κύτταρα ΝΚ από αντιστοιχία ηλικίας και φύλουHC, με τη χρήση της τεχνικής ολοκύτταρου patch-clamp.Η ενδογενής λειτουργία καναλιού ιόντων TRPM3 ήταν γρήγορη καιενεργοποιείται αναστρέψιμα με την εφαρμογή του 100mM PregS, ανευρωνικό στεροειδές. Διέγερση με μέτρηση με δυνατότητα PregSενός μικρού προς τα έξω ανορθωτικού ρεύματος κάτω από τον σφιγκτήρα τάσηςσυνθήκες και παρατήρηση τυπικού σχήματος ρεύματος-τάσης TRPM3σχέση (I–V) (Σχήμα 2). Εμείς, λοιπόν,μέτρησε ένα μικρό ιονικό ρεύμα με τυπικό TRPM3-όπωςεξωτερική διόρθωσησε κύτταρα ΝΚ που απομονώθηκαν από HC μετά τηνπροσθήκη PregS (Σχήματα 2Α, Β). Είναι ενδιαφέρον ότι το PregSεφαρμογή σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDNμιμήθηκε την επαγόμενη από το PregS αύξηση σε κύτταρα ΝΚ από HC(Εικόνες 2C, D). Έτσι, η διέγερση PregS προκάλεσε αύξησητου εξωτερικά διορθωμένουπλάτη ρεύματος σε κύτταρα ΝΚ απόΑσθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN στο ίδιο επίπεδο με κύτταρα ΝΚ απόHC (Εικόνα 2Ε). Επιπλέον, τα ρεύματα που προκαλούνται από PregS παρουσιάζουν ατυπικόςI–V του TRPM3 (Εικόνα 2Δ). Τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ME/Οι ασθενείς με CFS που λαμβάνουν LDN δεν έχουν πλέον βλάβηΔραστηριότητα καναλιού TRPM3 όπως αναφέρθηκε προηγουμένως (11–13), καιΣυνεπώς, το LDN μπορεί να έχει δυνητικό θεραπευτικό όφελοςΓιατην παθολογία.
Διαμόρφωση των προκλημένων ρευμάτων PregSΜε Ononetin σε NK Cells From ME/CFSΑσθενείς που λαμβάνουν LDN σε σύγκριση με NKΚύτταρα από HC
Ca που προκαλείται από PregS2 συν-εισροήκαι ιοντικά ρεύματα μέσω TRPM3τα κανάλια ιόντων μπορούν να ανασταλούν αποτελεσματικά από μια φυσική ένωση,δεοξυβεζοΐνη ονονετίνη (39). Επομένως, για επιβεβαίωσηότι TRPM3η δραστηριότητα εμπλέκεται σε ιοντικά ρεύματα που προκαλούνται από PregS σε κύτταρα ΝΚ, εμείςεπόμενη χρήση 10mΜ ονετίνη για τη ρύθμιση του διαύλου ιόντων TRPM3δραστηριότητα (Εικόνα 3). Όπως φαίνεται προηγουμένως (11–13), το ιοντικότα ρεύματα που προκλήθηκαν από την εφαρμογή του PregS ήταν αποτελεσματικάαναστέλλεται από την ταυτόχρονη εφαρμογή κανενός σε μεμονωμέναΝΚ κύτταρα από HC (Σχήματα 3Α–C). Επιπλέον, τοI–V τουτα ευαίσθητα ρεύματα ονονετίνης διορθώθηκαν προς τα έξωκαι τυπικόγια TRPM3 (Εικόνα 3Β). Είναι ενδιαφέρον ότι τα ιοντικά ρεύματα προκάλεσανμε την εφαρμογή PregS αναστέλλονταν επίσης αποτελεσματικά απόταυτόχρονη εφαρμογή 10mΜ ονονετίνη σε απομονωμένη ΝΚκύτταρα από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN (Εικόνες 3D–G). Πράγματι, το TRPM3-εξαρτώμενο ιονικό ρεύμα ήταν παλαιότερααναφέρθηκε ότι είναι ανθεκτικό στην ονονετίνη σε απομονωμένα κύτταρα ΝΚ απόΑσθενείς με ME/CFS (11–13). Ωστόσο, κύτταρα ΝΚ από ME/CFSΟι ασθενείς που λαμβάνουν LDN είναι ευαίσθητοι στην ονονετίνη στο ίδιο εύροςως κύτταρα ΝΚ από HC (Εικόνα 3G). Επιπλέον, τοI–V της ονονετίνηςτα ευαίσθητα ρεύματα διορθώθηκαν προς τα έξωκαι τυπικό για το TRPM3
(Εικόνα 3Ε). Τελικά,Εικόνα 3Ηαναφέρει το ρεύμα TRPM3πλάτη μετά από διέγερση PregS και διαμόρφωση ονονετίνηςεντός των ομάδων HC και ME/CFS που λαμβάνουν LDN και μόνο οιέχουν συμπεριληφθεί αρχεία ευαίσθητα στην ονονετίνη. Ενα σημαντικό μείωση του πλάτους ρεύματος TRPM3 αναφέρθηκε μετάτροποποίηση με ονονετίνη και στους δύο ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουνΟμάδες LDN (p=0.0336) και HC (p=0.0205). Αυτό το γράφημα επιβεβαιώνειΤο κανάλι ιόντων TRPM3 λειτουργεί παρόμοια στο ME/CFSασθενείς που λαμβάνουν LDN σε σύγκριση με HC ως το ίδιο ρεύμααναφέρονται εύρη πλάτους (Εικόνα 3Η). Συλλογικά αυτάεπιβεβαιώνουν τα αποτελέσματαότι οι ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN δεν έχουνμειωμένη δραστηριότητα διαύλου ιόντων TRPM3, η οποία αναφέρεται ότι είναιχαρακτηριστικό της νόσου (11–13). Συμπερασματικά, θεραπείαμε LDN επιτρέπει την επαναφορά της λειτουργίας καναλιού ιόντων TRPM3 σε ME/ασθενείς με CFS και, ως εκ τούτου, έχει ένα δυνητικό θεραπευτικό αποτέλεσμα.
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε το έμπλαστρο-σφιγκτήρα ολόκληρου κυττάρουτεχνική για τη μέτρηση του ενδογενούς διαύλου ιόντων TRPM3λειτουργούν σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN. Εμείςαναφορά για την πρώτηχρόνο που έχουν οι ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDNαποκατέστησε TRPM3-όπως ιοντικά ρεύματα σε κύτταρα ΝΚ. Πράγματι, τοΗ εφαρμογή του PregS επέτρεψε τη μέτρηση μικρών ιοντικώνρεύματα με τυπικό TRPM3-όπως η ανόρθωση προς τα έξωστη ΝΚκύτταρα από ασθενείς που λαμβάνουν LDN. Επιπλέον, ιοντικό που προκαλείται από PregSτα ρεύματα μέσω του TRPM3 ήταν σημαντικάδιαμορφώνεται απόονονετίνη σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN ωςπεριγράφεται ομοίως στο HC. Αυτά τα αποτελέσματα αντικατοπτρίζουνπροηγούμενα ευρήματά μαςαναφέροντας μια αποκατάσταση της λειτουργίας καναλιού ιόντων TRPM3σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS μετάin vitroθεραπεία μεNTX (13). Αυτά τα αποτελέσματα είναι επίσης συνεπή με τα προηγούμεναέρευνες που υποδηλώνουν ME/CFS μπορεί να θεωρηθούν ως ακαναλοπάθεια που προκαλείται από απώλεια λειτουργίας TRPM3 καιπου χαρακτηρίζεται από μείωση των επαγόμενων από το PregS ιοντικών ρευμάτωνκαθώς και αντίσταση στην ονονετίνη σε κύτταρα ΝΚ από ME/CFSασθενείς (8–13). Η απώλεια λειτουργίας TRPM3 μπορεί να ευθύνεταιγια μειωμένο Ca2 συνσηματοδότησης και Ca2 συν- μεσολαβούμενες κυτταρικές λειτουργίες,συμπεριλαμβανομένων των λειτουργιών του ανοσοποιητικού κυττάρων ΝΚ (11–13). Η παρούσα νέα μας μελέτη είναι η πρώτη in vitroεπιβεβαιωτική μελέτη η αποτελεσματικότητακαι θεραπευτικό όφελοςLDN για ασθενείς με ME/CFSχαρακτηρίζοντας τους υποκείμενους ρυθμιστικούς μηχανισμούς του LDNθεραπεία που περιλαμβάνει TRPM3 και την αλληλεπίδραση του υποδοχέα οπιοειδώνσε κύτταρα ΝΚ. Το LDN έχει αναφερθεί προηγουμένως ότι είναι ευεργετικόγια τοθεραπεία μιας ποικιλίας ασθενειών, όπως η σκλήρυνση κατά πλάκας,Crohn'νόσος, ινομυαλγία, καρκίνος, φλεγμονώδηςέντεροασθένεια και ME/CFS (40–44). Πιο συγκεκριμένα, στοπροκαταρκτική μελέτη που διεξήχθη από τους Polo et al. για την ασφάλεια καιαποτελεσματικότητα της θεραπείας με LDN, 73,9 τοις εκατό των ασθενών με ME/CFSανέφερε θετική ανταπόκριση στη θεραπεία (27). Οι περισσότεροι ασθενείςπαρουσίασε βελτιωμένη εγρήγορση/εγρήγορση και βελτιωμένη φυσική κατάστασηκαι γνωστική απόδοση. Μερικοί ασθενείς ανέφεραν επίσης λιγότερο πόνοκαι πυρετό, αποδεικνύοντας ότι το LDN μπορεί να δείξει κάποια πιθανότητα ναανακουφίζει ένα ευρύ φάσμα συμπτωμάτων ME/CFS (27). Ομοίως,Μπόλτον και συν. περιέγραψε τρεις αναφορές περιπτώσεων που συνέταξε η ME/CFSασθενείς που έλαβαν LDN και ανέφεραν το εύρος των απαντήσεων,από την αλλαγή της ζωής στη μείωση μόνο ορισμένων συμπτωμάτων (38).
Με βάση τα οφέληαναφέρθηκαν από ασθενείς για τα συμπτώματά τους,Η θεραπεία με LDN μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πιθανή θεραπεία και μπορείστοχεύουν στον παθομηχανισμό του ME/CFS.Η παθογένεση του ME/CFS είναι άγνωστη αλλά μη φυσιολογικό ιόνκανάλια και πιο συγκεκριμέναεξασθενημένη λειτουργία TRPM3 έχουνπρόσφατα εμφανίστηκε ως χαρακτηριστικό γνώρισμα της ασθένειας (8–13). Έχουμε αναφέρει στο παρελθόν απώλεια λειτουργίας TRPM3 μετάδιαμόρφωση με ισχυρούς3-αγωνιστές και ανταγωνιστές TRPM στη ΝΚκύτταρα από τρεις διαφορετικές ομάδες ασθενών με ME/CFS (11–13). Το TRPM3 έχει περιγραφεί ως κεντρικός ηθοποιός του Ca2 συν- εξαρτώμενα μονοπάτια σηματοδότησης, τόσο σε διεγέρσιμες όσο και σε μη διεγέρσιμεςκύτταρα, όπου Ca2 συντα σήματα οδηγούν το διαφορετικό κυψελοειδέςδιαδικασίες (45). Papanikolaou et al, εντόπισανTRPM3 ως ανσημαντικό συστατικό του'Ca2 συνεργαλειοθήκη' που στηρίζει τη λειτουργία του καταστήματοςCa2 συνεισόδου και τη βιωσιμότητα του Ca2 συνσηματοδότησηΚΝΣ λευκή ουσία γλοία (46). Ομοίως, το TRPM3 αποδείχθηκε ότι προηγείταισε αύξηση Ca2 συν εισροήστα βήτα κύτταρα του παγκρέατος με αποτέλεσμαεπακόλουθη απελευθέρωση ινσουλίνης (47). Κάθε τύπος κυττάρου παρουσιάζει ένα μοναδικόσηματοδοτικό φαινότυπο ικανό να παρέχει αυστηρά ρυθμισμένοχωροχρονικό Ca2 συνσήματα για τη διαμόρφωση της συγκεκριμένης λειτουργίας του(48). Κατά συνέπεια, τυχόν ανεπαίσθητες δυσρυθμίσεις του Ca2 συνσήματα μπορείεπηρεάζουν πολύ τις κυτταρικές λειτουργίες και καταλήγουν σε ασθένειες (48, 49). Τα κύτταρα ΝΚ απαιτούν επίσης Ca2 συνγια αποτελεσματικόδιέγερση καιλειτουργίες συμπεριλαμβανομένης της κυτταροτοξικότητας των ΝΚ κυττάρων (50–53). ΣυμβιβασμένοιΗ κυτταροτοξική λειτουργία των ΝΚ κυττάρων είναι καλά τεκμηριωμένη και συνεπήςχαρακτηριστικό του ME/CFS (54). Ως εκ τούτου, η απώλεια λειτουργίας του TRPM3 ενδέχεταισυμβάλλουν στη συμπτωματολογία ME/CFS επηρεάζονταςCa2 συνσηματοδότησης και Ca2 συν- μεσολαβούμενες κυτταρικές λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένου του ΝΚανοσοποιητικές λειτουργίες των κυττάρων.Μια καλά χαρακτηρισμένη λειτουργία του TRPM3 στη βιβλιογραφία είναι αυτήρόλο στην ανίχνευση επιβλαβούς θερμότητας (οξύς πόνος) καθώς και φλεγμονώδουςυπεραλγησία (οξύς και χρόνιος πόνος) (14). Συντίθενται ενδογενή οπιοειδήin vivoγια να διαμορφώσετε τοφυσιολογικές αναλγητικές αποκρίσεις σε φλεγμονώδειςκαινευροπαθητικός πόνος. Τα ενδογενή και εξωγενή οπιοειδή συνδέονται μετα ORs, που βρίσκονται στην περιφέρεια, σε προσυναπτικά και μετασυναπτικάθέσεις στο ραχιαίο κέρας του νωτιαίου μυελού και στο εγκεφαλικό στέλεχος,θάλαμος και φλοιός, σε αυτό που συνιστά τον ανιούσα πόνοσύστημα μετάδοσης (55). Πρόσφατες μελέτες έχουν αναφέρει ότιΟι υποδοχείς οπιοειδών εκφράζονται επίσης από κύτταρα του ανοσοποιητικού για να εκτελέσουνανοσοποιητική κυτταρική αναλγησία με οπιοειδή παράγοντας ενδογενήοπιοειδή πεπτίδια, τα οποία περιλαμβάνουν Gai/o–Gbg–φωσφολιπάση C(PLC)–υποδοχέας ινοσιτόλης 1,4,5-τριφωσφορικού (IP3R)– ενδοκυτταρικήCa2 συνμονοπάτι. Τα απελευθερωμένα οπιοειδή πεπτίδια στη συνέχεια ενεργοποιούνταιπεριφερικοί νευρωνικοί υποδοχείς οπιοειδών και ανακουφίζουν τον πόνο (21). Τα οπιοειδή αποδείχθηκε επίσης ότι ρυθμίζουν άμεσα τις λειτουργίες τουλεμφοκύτταρα και άλλα κύτταρα που εμπλέκονται στην άμυνα του ξενιστή καιανοσία με αποτέλεσμα ανοσοκατασταλτικά αποτελέσματα (56, 57). Πιο συγκεκριμένα, ενεργοποίηση του OR από οπιοειδή αλκαλοειδή καιπεπτίδια όπως η μορφίνη και τα ενδογενή πεπτίδια,συμπεριλαμβανομένης της βήτα-ενδορφίνης και των πεπτιδίων δυνορφίνης, που οδηγεί σε αμειωμένος αριθμός μακροφάγων, μειωμένα λευκοκύτταραπολλαπλασιασμός και μετανάστευση σε φλεγμονώδητοποθεσίες, μειώθηκανφαγοκυτταρωτική δραστηριότητα των μακροφάγων, μειωμένη χημειοταξία καιπαραγωγή υπεροξειδίου από ουδετερόφιλα και μακροφάγα,επιταχυνόμενη απόπτωση μακροφάγων, εξασθενημένη μικροβιολογικήπροστασία και μειωμένη προσκόλληση των λευκοκυττάρων και του ενδοθηλίουκύτταρα (58). Άλλες αρνητικές επιπτώσεις έχουν επίσης περιγραφεί στοσχέση με μαστοκύτταρα, δενδριτικά κύτταρα και κύτταρα ΝΚ με αμειωμένη κυτταροτοξικότητα κυττάρων ΝΚ και παραγωγή κυτοκίνης (22, 56, 59, 60). Τα κύτταρα του ανοσοποιητικού, τα γλοία και οι νευρώνες σχηματίζουν επομένως έναολοκληρωμένο δίκτυο που συντονίζει τις ανοσολογικές αποκρίσεις καιρυθμίζει τη διεγερσιμότητα των οδών πόνου (61). Στοχεύοντας τοΟι υποδοχείς οπιοειδών στα κύτταρα του ανοσοποιητικού μπορεί να οδηγήσουν σε αλλαγές σεανοσοαποκρίσεις για την προώθηση της επίλυσης του inflflammation ωςκαθώς και ρύθμιση του πόνου σε ασθενείς με ME/CFS.Είναι ενδιαφέρον ότι τα μόρια που συνδέονται και ενεργοποιούν το οπιοειδήυποδοχείς σημαντικάμειώστε τον πόνο που εξαρτάται από το TRPM3-. Σεαπόκριση στην οξεία ενεργοποίηση από αγωνιστές, υποδοχείς οπιοειδώνζευγάρι στο Γi/o πρωτεΐνες, οι οποίες διασπώνται σε Gai/o και Γbgυπομονάδες για αλληλεπίδραση με ενδοκυτταρικούς τελεστές (62). TRPM3η δραστηριότητα αναστέλλεται έντονα από την ενεργοποίηση του μOR μέσωη άμεση αλληλεπίδραση με τον Γbgως TRPM3-εξαρτώμενο Ca2 συνοι καταχωρήσεις αναστέλλονται έντονα και αναστρέψιμα όταν το κελίμεμβράνη είναιflflστριμωγμένο με εξαγνισμένο Gbg(15–18). Το NTX είναι μακράς διαρκείαςανταγωνιστής οπιοειδών συγκεκριμέναανασταλτικόςmORs, έτσιαναιρώντας την ανασταλτική λειτουργία αυτού του υποδοχέα οπιοειδώνTRPM3 (22, 26). Σε προηγούμενη μελέτη μας, το έχουμε αναφέρειin vitroΗ θεραπεία με NTX αποκαθιστά το κανάλι ιόντων TRPM3δραστηριότητα σε κύτταρα ΝΚ που απομονώθηκαν από ME/CFS (13). Ομοίως, σεΣτην τρέχουσα μελέτη, τα κύτταρα ΝΚ που απομονώθηκαν από ασθενείς που έλαβαν LDN το έκανανδεν παρουσιάζουν μειωμένη δραστηριότητα διαύλου ιόντων TRPM3. LDNΗ θεραπεία σε ασθενείς με ME/CFS φαίνεται να αποκαθιστά το ιόν TRPM3λειτουργία καναλιού σε κύτταρα ΝΚ, με αποτέλεσμα Ca2 συνσήματααναδιαμόρφωση για να συμβάλει στην αποκατάσταση της ακεραιότηταςκαι σταθερότητα του ειδικού για τα κύτταρα ΝΚσυστήματα σηματοδότησης (10–13). Είναι ενδιαφέρον ότι έχει αναφερθεί ότι η επίδραση ανταγωνισμού τουNTX ενεργοποιημένοmΤο OR διακόπτει επίσης τη ρύθμιση αρνητικής ανατροφοδότησης σχετικά μεdΉ, αυξάνοντας έτσιdOR λειτουργία.
Ενίσχυση τουdΉΗ δραστηριότητα προάγει την κυτταροτοξικότητα των ΝΚ κυττάρων σε απόκριση στις βήτα-ενδορφίνες in vitroσε σπληνοκύτταρα αρουραίου, υποδηλώνοντας τη δυνατότηταχρήση του NTX στη θεραπεία της ανοσολογικής ανεπάρκειας (63). Ο μηχανισμός που βρίσκεται κάτω από το LDN's αποτελεσματικότηταγια την κούραση,Crohn'νόσος, ινομυαλγίακαι η σκλήρυνση κατά πλάκας, επομένως,περιλαμβάνει διακοπτόμενο αποκλεισμό των υποδοχέων οπιοειδών που ακολουθείται απόCa2 συν εξαρτημένη παραγωγήκαι ανοδική ρύθμιση της ενδογενούςοπιοειδή. Οι Ludwig et al. ανέφερε ότι ο ορός [Met5 ]-εγκεφαλίνητα επίπεδα ήταν χαμηλότερα στους ανθρώπους με σκλήρυνση κατά πλάκας σε σχέση μεασθενείς με σκλήρυνση κατά πλάκας και η LDN αποκατέστησε τα επίπεδά τους.Ομοίως, σε πειραματικά ποντίκια με αυτοάνοση εγκεφαλομυελίτιδα,[Συνάντησε5 Τα επίπεδα της ]-εγκεφαλίνης ήταν μειωμένα πριν από την εμφάνισηκλινικής νόσου και αποκαταστάθηκαν με θεραπεία LDN(28). Επομένως, φαίνεται ότι η θεραπεία με LDN έχει ως αποτέλεσμα τηνενίσχυση των αναλγητικών αποτελεσμάτων και μπορεί να είναι σχετική σεME/CFS, όπου δεν επαρκείη έκκριση οπιοειδών πεπτιδίων επηρεάζειανοσοαπόκριση ή έλεγχος πόνου (29, 30), ή την απελευθέρωση προφλεγμονώδουςκυτοκίνες (25, 31). Πράγματι, μείωσε τις βήτα-ενδορφίνεςέχει αναφερθεί συγκέντρωση στο ME/CFSασθενείς που πάσχουν από δυσρύθμιση της θερμορύθμισηςαποκρίσεις και γενικευμένος σοβαρός ή μακροχρόνιος πόνος (64). Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη για την πρώτηχρόνος που αξιολογήθηκε και προσδιορίστηκεη επίδραση του LDN στη λειτουργία του καναλιού ιόντων TRPM3 στοΝΚ κύτταρα σε ασθενείς με ME/CFS. Αυτή η νέα μελέτη αναφέρει τουποκείμενη αποκατάσταση του καναλιού υποδοχέα οπιοειδών TRPM3-αλληλεπίδραση σε κύτταρα ΝΚ από ασθενείς με ME/CFS που λαμβάνουν LDN.Επιπλέον, η ευρεία κατανομή των καναλιών ιόντων TRPM3 στοσώμα υποδηλώνει ότι η διαταραγμένη λειτουργία τους μπορεί να συμβάλει σεσημεία και συμπτώματα ME/CFS και συνεπώς θεραπεία μεΤο LDN μπορεί να έχει θεραπευτικό ρόλο. Τέλος, η μελέτη αυτή εξυπηρετείυποστήριξη του σχεδιασμού και της έγκρισης των υποψήφιων τυχαιοποιημένωνκλινικές μελέτες σχετικά με το ρόλο και τη δόση του NTX στη θεραπεία της ΜΕ/Ασθενείς με CFS.
