Party1: Αντιφλεγμονώδεις και αντιοξειδωτικές ιδιότητες του κεχρί δακτύλων (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) που καλλιεργούνται στη Σρι Λάνκα

Για περισσότερες πληροφορίες. Επικοινωνίαtina.xiang@wecistanche.com

Ο επιπολασμός των νόσων που προκαλούνται από φλεγμονές και οξειδωτικό στρες αυξάνεται παγκοσμίως, δημιουργώντας μια αυξανόμενη ζήτηση για νέες πηγέςαντιφλεγμονώδηπράκτορες καιαντιοξειδωτικά. Αυτή η μελέτη επικεντρώθηκε στον προσδιορισμό της in vitro αραχιδονικής {{0}}λιποξυγενάσης (A5-LOX), οξειδάσης ξανθίνης (XO), υαλουρονιδάσης, ανασταλτικών δραστηριοτήτων οξειδωτικής έκρηξης και αντιοξειδωτικών ιδιοτήτων των Ravi, Rawana , και ποικιλίες κεχρί δακτύλων Oshadha που χρησιμοποιούν αιθανολικά και μεθανολικά εκχυλίσματα. Μεταξύ όλων των εκχυλισμάτων, το μεθανολικό εκχύλισμα Oshadha παρουσίασε τις υψηλότερες ανασταλτικές δραστηριότητες A5-LOX （ICsvalue∶ 484,42ug/ml） και XO (ICsvalue∶764,34ug/ml). Όλα τα εκχυλίσματα έδειξαν λιγότερο από 50 τοις εκατό ανασταλτική δράση υαλουρονιδάσης σε συγκέντρωση 1 mg/ml, τα μεθανολικά εκχυλίσματα έδειξαν μέτριο ανασταλτικό δυναμικό σε δραστικά είδη οξυγόνου (ROS) που δημιουργούνται από φαγοκύτταρα πλήρους αίματος, με τιμές ICs{20}}που κυμαίνονται μεταξύ 26,9 και 27,7 ug/ml, σε σύγκριση με την ιβουπροφαίνη (IC.value:11,18ug/ml). Όλα τα εκχυλίσματα έδειξαν ισχυρή αναστολή του ROS που παράγεται από πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα που απομονώθηκαν από ανθρώπινο αίμα σε σύγκριση με την ιβουπροφαίνη (ICsvalue: 2,47 ug/ml) και οι τιμές IC των μεθανολικών και αιθανολικών εκχυλισμάτων κυμαίνονταν από 0,29 έως 0,47 ug/50ml έως 17. αντίστοιχα. Όλα τα εκχυλίσματα είχαν σημαντικά υψηλές ποσότητες φαινολικών ενώσεων συμπεριλαμβανομένωνφλαβονοειδήκαι τη δυνατότητα δέσμευσης κατιόντος του 2,2'-αζινο-δις({{4}αιθυλβενζοθειαζολίνης-6-σουλφονικού) οξέος (ABTS), 2,2-διφαινυλ-1-πικρυλ-υδραζυλ( DPPH) και ρίζες οξυγόνου. Επιπλέον, μπόρεσαν να μειώσουν τα μεταλλικά ιόντα και τα ιόντα χηλικών μετάλλων που τερματίζουν τις αντιδράσεις δημιουργίας ριζών. Αυτή είναι η πρώτη αναφορά ανασταλτικών ιδιοτήτων A5-LOX, XO, υαλουρονιδάσης και οξειδωτικής έκρηξης οποιουδήποτε εκχυλίσματος οποιασδήποτε ποικιλίας κεχρί που καλλιεργείται στη Σρι Λάνκα. Τα ευρήματα αποκάλυψαν τη δυνατότητα χρήσης αυτών των εκχυλισμάτων κεχριού ως φυσικές πηγές υποψήφιων αντιφλεγμονωδών φαρμάκων. Επιπλέον, τα ευρήματα έδειξαν ότι οι ποικιλίες Ravi, Rawana και Oshadha είναι καλές πηγές αντιοξειδωτικών. Ως εκ τούτου, η κατανάλωση αυτών των ποικιλιών κεχριού σε τακτική βάση μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην πρόληψη και τη διατροφική διαχείριση των ασθενειών που σχετίζονται με το οξειδωτικό στρες.

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα προϊόντα

1. Εισαγωγή

Φλεγμονήείναι μια αμυντική αντίδραση τωναπρόσβλητοςσύστημα για την εξάλειψη επιβλαβών ερεθισμάτων όπως παθογόνα, κατεστραμμένα κύτταρα και αλλεργικούς ή χημικούς ερεθισμούς καθώς και για την έναρξη της διαδικασίας επούλωσης. Αν και η φλεγμονή είναι μια φυσιολογική απόκριση εάν δεν ελεγχθεί, η υπερβολική φλεγμονή οδηγεί σε πολλές οξείες και χρόνιες ασθένειες. Επί του παρόντος, ο επιπολασμός των νόσων που προκαλούνται από φλεγμονές αυξάνεται παγκοσμίως, δημιουργώντας μια αυξανόμενη ζήτηση για νέους και αποτελεσματικούς αντιφλεγμονώδεις παράγοντες [1, 2].

Η αραχιδονική 5-λιποξυγενάση(A5-LOX) είναι ένα βασικό ένζυμο που εμπλέκεται στη βιοσύνθεση ισχυρών μεσολαβητών φλεγμονωδών διαταραχών και αλλεργικών αντιδράσεων. Καταλύει το σχηματισμό λευκοτριενίων από το αραχιδονικό οξύ [3]. Τα λευκοτριένια είναι ενδογενείς μεσολαβητές στην παθογένεση μιας σειράς φλεγμονωδών ασθενειών όπως το άσθμα, η αλλεργική ρινίτιδα, η χρόνια βρογχίτιδα, η ρευματοειδής αρθρίτιδα, η φλεγμονώδης νόσος του εντέρου και οι αλλεργικές αντιδράσεις [3,4]. Επομένως, η αναστολή του A5-LOX είναι σημαντική για την πρόληψη και τη θεραπεία διαφόρων φλεγμονωδών διαταραχών.

Η οξειδάση της ξανθίνης (XO) καταλύει την οξείδωση της υποξανθίνης σε ξανθίνη και της ξανθίνης σε ουρικό οξύ[5]. Οι αναστολείς XO εμποδίζουν τη βιοσύνθεση του ουρικού οξέος και κατά συνέπεια μειώνουν τα επίπεδα του ουρικού οξέος καθώς και το οξειδωτικό στρες των αγγείων. Κατά τη διάρκεια της καταλυτικής δράσης του XO, σχηματίζονται αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) και ως εκ τούτου, το XO παίζει παθογενετικό ρόλο και σε άλλες φλεγμονώδεις διαταραχές. Κατά συνέπεια, οι αναστολείς XO είναι σημαντικοί στη θεραπεία διαφόρων φλεγμονωδών διαταραχών που συνοδεύονται από την καταλυτική δράση του XO [2,5].

Η υαλουρονιδάση είναι ένα λυσοσωμικό ένζυμο που καταλύει την υδρόλυση βλεννοπολυσακχαριτών όπως το υαλουρονικό οξύ. Στη ρευματοειδή αρθρίτιδα, η υαλουρονιδάση αποδομεί υπερβολικά το υαλουρονικό οξύ και μειώνει την ποσότητα και το μοριακό του βάρος, προκαλώντας συμπτώματα αρθρίτιδας [6]. Η αναστολή της αποικοδόμησης του υαλουρονικού οξέος είναι κρίσιμη και επιτακτική για τον έλεγχο των παθολογικών καταστάσεων που προκαλούνται από την υαλουρονιδάση[7].

Σε φλεγμονώδεις καταστάσεις, τα κύτταρα του ανοσοποιητικού έλκονται στο σημείο της φλεγμονής. Κατά τη διάρκεια αμυντικών και ανοσολογικών αντιδράσεων, οι οξειδάσες NADPH που βρίσκονται στα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος ενεργοποιούνται και δημιουργούν ROS σε μεγάλες ποσότητες δημιουργώντας μια οξειδωτική έκρηξη [1, 8]. Χαμηλές και μέτριες ποσότητες ROS είναι ευεργετικές σε διαφορετικές φυσιολογικές διεργασίες. Ωστόσο, η υπερπαραγωγή των ROS απορυθμίζει τις κυτταρικές λειτουργίες, οι οποίες με τη σειρά τους ενισχύουν τη φλεγμονώδη κατάσταση [8,9]. Ως εκ τούτου, η αναστολή της οξειδωτικής έκρηξης που προκαλείται από το ROS είναι μια πιθανή επανόρθωση για την πρόληψη και τη διαχείριση ασθενειών που προκαλούνται από φλεγμονές.

Κατά την οξειδωτική φωσφορυλίωση,ελεύθερες ρίζεςσυμπεριλαμβανομένων των ROS σχηματίζονται ως υποπροϊόντα [10]. Εκτός από τον φυσιολογικό κυτταρικό μεταβολισμό, υπάρχουν πολλοί άλλοι παράγοντες που οδηγούν στο σχηματισμό ελεύθερων ριζών και εάν ο ρυθμός δημιουργίας ελεύθερων ριζών υπερβαίνει τον ρυθμό εξουδετέρωσης, το οξειδωτικό στρες δημιουργείται, και συμβάλλει σημαντικά σε όλες τις φλεγμονώδεις ασθένειες. Δεδομένου ότι τα αντιοξειδωτικά είναι ικανά να αποτρέψουν το σχηματισμό ελεύθερων ριζών και να σβήσουν τις ελεύθερες ρίζες, η ισορροπία μεταξύ των αντιοξειδωτικών και των ελεύθερων ριζών είναι απαραίτητη για τη σωστή διατήρηση των φυσιολογικών λειτουργιών [8,11,12].

Το δακτυλικό κεχρί (Eleusine coracana(L.)Gaertn.) είναι το πιο σημαντικό μικρό κεχρί στις τροπικές περιοχές και αρκετές θεραπευτικές ιδιότητες του δακτυλικού κεχρί έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [13-17]. Ωστόσο, για τις ποικιλίες κεχρί που καλλιεργούνται και καταναλώνονται επί του παρόντος στη Σρι Λάνκα, υπάρχει έλλειψη επιστημονικών στοιχείων σχετικά με τις θεραπευτικές ιδιότητες

και πιθανά οφέλη για την υγεία των καταναλωτών. Κατά συνέπεια, είναι επιτακτική ανάγκη να μελετηθούν οι αντιφλεγμονώδεις και αντιοξειδωτικές ιδιότητες των ποικιλιών κεχριού της Σρι Λάνκα και να αναγνωριστούν οι δυνατότητές τους να βελτιώσουν τη διατροφική κατάσταση και την υγεία των καταναλωτών. Ο επιπολασμός ασθενειών που προκαλούνται από φλεγμονές και σχετιζόμενες με το οξειδωτικό στρες αυξάνεται παγκοσμίως, δημιουργώντας μια αναδυόμενη ζήτηση για νέες πηγές αντιφλεγμονωδών παραγόντων και αντιοξειδωτικών[1, 2]. Με αυτό το υπόβαθρο, η παρούσα μελέτη επικεντρώθηκε στην αξιολόγηση των ποικιλιών κεχριού της Σρι Λάνκα για in vitro αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες όσον αφορά τις A5-LOX, XO, την υαλουρονιδάση, τις ανασταλτικές δραστηριότητες οξειδωτικής έκρηξης και τις αντιοξειδωτικές ιδιότητες χρησιμοποιώντας διαφορετικούς αντιοξειδωτικούς προσδιορισμούς .

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1.Συλλογή και προετοιμασία δειγμάτων. Οι ποικιλίες κεχριού που προτείνονται για καλλιέργεια στη Σρι Λάνκα από το Υπουργείο Γεωργίας, συγκεκριμένα οι Ravi, Rawana και Oshadha, συλλέχθηκαν από το Ινστιτούτο Έρευνας και Ανάπτυξης Καλλιεργειών αγρού (FCRDI), Mahailuppallama, Σρι Λάνκα. Αυτές οι ποικιλίες καλλιεργήθηκαν σε πειραματικά αγροτεμάχια στην Ξηρή Ζώνη Low Country, στο FCRDI, Mahailuppallama, και οι σπόροι πιστοποιήθηκαν από την Υπηρεσία Πιστοποίησης Σπόρων του Τμήματος Γεωργίας της Σρι Λάνκα.

Οι σπόροι του κεχριού από το δάκτυλο αφαιρέθηκαν (TM 05C, Satake Cor-poration, Ιαπωνία) και ελήφθησαν άλευρα από δημητριακά ολικής αλέσεως με άλεση (Pulverisette 14, Fritsch, Γερμανία) και περνώντας από κόσκινο 0,5 mm. Τα αλεύρια από δημητριακά ολικής αλέσεως εκχυλίστηκαν με αιθανόλη και μεθανόλη χωριστά. Αλεύρι ολικής αλέσεως (100 g) εκχυλίστηκε με τον διαλύτη (400 ml) όλη τη νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου (28±2 βαθμοί) χρησιμοποιώντας μαγνητικό αναδευτήρα και φυγοκεντρήθηκε στις 4000 rpm για 20 λεπτά. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε χωριστά και το υπόλειμμα επανεκχυλίστηκε δύο φορές χρησιμοποιώντας τις ίδιες συνθήκες. Τα υπερκείμενα συνδυάστηκαν και εξατμίστηκαν μέχρι ξηρού υπό μειωμένη πίεση στους 40 βαθμούς χρησιμοποιώντας έναν περιστροφικό εξατμιστή (R-114, Büchi Labortechnik AG, Ελβετία). Τα εκχυλίσματα χωρίς διαλύτες αποθηκεύτηκαν σε αεροστεγή γυάλινα δοχεία σε{14}} βαθμό μέχρι να χρησιμοποιηθούν για την ανάλυση.

2.2. Ένζυμα, Χημικές ουσίες και Εξοπλισμός. Αντιδραστήριο φαινόλης Folin-Ciocalteu, χλωριούχο αργίλιο, 2,4,6-Tri(2-πυριδυλ)-s-τριαζίνη (TPTZ), 2,2'-azobis (2-αμιδινοπροπάνιο) διυδροχλωρίδιο (AAPH), 2,{2-διφαινυλ-1-πικρυλυδραζυλ (DPPH), κερκετίνη,6-υδροξυ-2, 5,7,8-τετραμεθυλχρωμάνιο{{19} }καρβοξυλικό οξύ (Trolox), αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA), 2,2'-αζινο-δις(3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) άλας διαμμωνίου (ABTS), φλουορεσκεΐνη,3-( 2-Πυριδυλ)-5,6-διφαινυλ-1,2,4-τριαζίνη-ρ, μονονάτριο άλας πδισουλφονικού οξέος

ένυδρη (φερροζίνη), αραχιδονική 5-λιποξυγενάση, λινελαϊκό οξύ, βαϊκελαΐνη, οξειδάση ξανθίνης, ξανθίνη, αλλοπουρινόλη, υαλουρονιδάση, άλας νατρίου υαλουρονικού οξέος, π-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδη, γαλλικό οξύ, ταννικό σουλουφενικό οξύ, αγοράστηκαν από διμεθυλοπροοξειδίδιο, Sigma-Aldrich, MO, Η.Π.Α. Τα HBS* plus και HBSS αγοράστηκαν από την Thermo Fisher Sci-entific Inc., Μασαχουσέτη, ΗΠΑ. Το Zymosan αγοράστηκε από την Wako Pure Chemical Industries Ltd., Οσάκα, Ιαπωνία.

Η Luminol (3-αμινοφθαλυδραζίδη) αγοράστηκε από την Alfa Aesar GmbH & Co KG, Καρλσρούη, Γερμανία. Το μέσο διαχωρισμού λεμφοκυττάρων αγοράστηκε από την MP Biomedicals, Inc., Οχάιο, ΗΠΑ. Όλα τα άλλα χημικά και αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν στα πειράματα ήταν ACS, HPLC και αναλυτικών βαθμών. Για τον προσδιορισμό της ικανότητας απορρόφησης ριζών οξυγόνου, χρησιμοποιήθηκε συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών φθορισμού (SpectraMax-Gemini EM, Molec-ular Devices Inc., USA). Για προσδιορισμούς χημειοφωταύγειας, χρησιμοποιήθηκε φωτόμετρο (Luminoskan RS, Labsystems, Finland). Για όλους τους άλλους βιοπροσδιορισμούς, χρησιμοποιήθηκε ένας αναγνώστης μικροπλακών (Spectra-Max Plus384, Molecular Devices Inc, USA).

2.3.Προσδιορισμός Ολικής Φαινολικής Περιεκτικότητας. Η ολική περιεκτικότητα σε φαινόλη (TPC) προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο Folin-Ciocalteu 【18】. Το εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (20ul) αναμίχτηκε με 110 λίτρα πρόσφατα παρασκευασθέντος 10 φορές αραιωμένου αντιδραστηρίου Folin-Ciocalteu και 70 λίτρα διαλύματος ανθρακικού νατρίου (10 τοις εκατό w/v) και επωάστηκε σε θερμοκρασία δωματίου (RT) για 30 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 765 nm. Χρησιμοποιήθηκε γαλλικό οξύ για τη γραφική παράσταση της τυπικής καμπύλης (y{=0.0532x συν 0.0339;r=0.9992) και η TPC υπολογίστηκε ως mg ισοδύναμα γαλλικού οξέος (GAE) ανά 100 g αλεύρου σε ξηρό βάση βάρους.

2.4. Προσδιορισμός Ολικής Περιεκτικότητας σε Φλαβονοειδή. Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή (TFC) προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη χρωματομετρική μέθοδο χλωριούχου αργιλίου [19]. Εκχύλισμα δακτυλικού κεχριού (100 μΙ) αναμίχθηκε με διάλυμα χλωριούχου αργιλίου (2 τοις εκατό w/v, 100 μΙ), επωάστηκε για 10 λεπτά σε ΘΔ και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 415 nm. Η κερσετίνη χρησιμοποιήθηκε για τη γραφική παράσταση της τυπικής καμπύλης (y=0.0349x-0.2091; r²=0.9974）, και ο TFC υπολογίστηκε ως mg ισοδύναμα κερσετίνης ανά 100 g αλεύρου σε ξηρό βάρος.

2.5.Προσδιορισμός Δραστηριότητας Σάρωσης Ριζικών DPPH. Η ικανότητα δέσμευσης ριζών DPPH προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Blois [20]. Το εκχύλισμα του δακτύλου (50 μΙ) αναμίχθηκε με 90 μΙ μεθανόλης και 60 μλ διαλύματος DPPH (0,02 τοις εκατό w/v) και επωάστηκε σε ΘΔ στο σκοτάδι για 10 λεπτά. Οι τιμές απορρόφησης του δείγματος (As) και του ελέγχου (Ac) μετρήθηκαν στα 517 nm. Το Trolox χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Η δραστικότητα σάρωσης ριζών DPPH ως ποσοστιαία αναστολή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (1). Η τιμή ICs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας γραφήματα δόσης-απόκρισης.

2.6. Προσδιορισμός Δραστηριότητας Καθαρισμού Ριζικών Κατιόντων ABTS. Η ικανότητα δέσμευσης ριζών κατιόντων ABTS προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Re et al. [21] με ορισμένες τροποποιήσεις. Το διάλυμα ρίζας κατιόντων ABTS παρασκευάστηκε με επώαση 10 mg ABTS σε 2,5 ml υπερθειικού καλίου στους 37 βαθμούς C στο σκοτάδι για 16 ώρες και αραίωση 7 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 50 mM (ρΗ 7,4). Εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (12,5 μΙ) αναμίχθηκαν με φυσιολογικό ορό φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος (147,5 μΙ) και πρόσφατα παρασκευασμένο διάλυμα ρίζας κατιόντων ABTS (40 μλ) και επωάστηκαν σε ΘΔ στο σκοτάδι για 10 λεπτά. Οι τιμές απορρόφησης του δείγματος (As) και του ελέγχου (Ac) μετρήθηκαν στα 734 nm. Το Trolox χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Η δραστικότητα δέσμευσης ριζών κατιόντων ABTS ως ποσοστιαία αναστολή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (2). Η τιμή ICs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας γραφήματα δόσης-απόκρισης.

2.7. Προσδιορισμός της ικανότητας απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC). Το ORAC αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Ou et al.[22] Με ορισμένες τροποποιήσεις. Διαλύματα φλουορεσκεΐνης (4,8 μΜ) και AAPH (40 mg/ml) παρασκευάστηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 75 mM (ρΗ 7,4). Εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (10 μλ) αναμίχθηκαν με 40 μλ ρυθμιστικού φωσφορικού και 100 μλ. φλουορεσκεΐνης και επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά. Προστέθηκε AAPH (50 ul) και η διάσπαση της φλουορεσκεΐνης μετρήθηκε σε μήκη κύματος διέγερσης και εκπομπής 494 nm και 535 nm, αντίστοιχα, στους 37 βαθμούς για 35 λεπτά σε διαστήματα 1 λεπτού χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας φθορισμού. Το Tro-lox χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Καταγράφηκαν οι τιμές περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) του δείγματος (AUC), του ελέγχου (AUC) και του Trolox (AUC-). Η τιμή ORAC υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση(3) όπου συμπ. σημαίνει συγκέντρωση. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως mg ισοδύναμα Trolox ανά 100 g αλεύρου σε βάση ξηρού βάρους.

2.8. Προσδιορισμός Δραστικότητας Χηλικής Χηλώσεως Ιόντων Σιδήρου (FIC).. Η ικανότητα χηλικοποίησης ιόντων σιδήρου προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Carter [23]. Εκχύλισμα δακτυλικού κεχριού (100 μΙ) αναμίχθηκε με 1 mM διάλυμα θειικού σιδήρου (20 μΙ) και 40 μΙ απεσταγμένου νερού. Στη συνέχεια, προστέθηκε 1 mM διάλυμα φερροζίνης (40 μΙ) και επωάστηκε για 10 λεπτά σε ΘΔ. Οι τιμές απορρόφησης του δείγματος (As) και του ελέγχου (Ac) καταγράφηκαν στα 562 nm. Ως πρότυπο χρησιμοποιήθηκε το EDTA. Η ενεργότητα FIC ως ποσοστιαία χηλίωση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (4).

2.9. Προσδιορισμός της αντιοξειδωτικής δύναμης μείωσης του σιδήρου (FRAP). Το FRAP προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Benzine και Szeto [24] με ορισμένες τροποποιήσεις. Το αντιδραστήριο FRAP παρασκευάστηκε με ανάμειξη 300 mM ρυθμιστικού οξικού (ρΗ 3,6), 20 mM χλωριούχου σιδήρου και 10 mM TPTZ σε αναλογία 10:1:1 και επώαση στους 37 βαθμούς C για 10 λεπτά. Εκχύλισμα δακτυλικού κεχριού (20 ul) αναμίχθηκε με 30 λίτρα ρυθμιστικού διαλύματος οξικού και 150 λίτρα πρόσφατα παρασκευασμένου αντιδραστηρίου FRAP, επωάστηκε σε RT για 8 λεπτά και η απορρόφηση καταγράφηκε στα 600nm. Το Trolox χρησιμοποιήθηκε για τη γραφική παράσταση της τυπικής καμπύλης (y=0.17x συν 0.15; 产{=1.00) και το FRAP υπολόγισε ως mg ισοδύναμα Trolox ανά 100 g αλεύρου σε βάση ξηρού βάρους.

2.10. Προσδιορισμός Ανασταλτικής Δραστηριότητας A5-LOX. Μια{{0}}Ανασταλτική δραστηριότητα LOX αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον Tappel [25] με ορισμένες τροποποιήσεις. Εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (10 ul) αναμίχθηκε με 115 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού νατρίου 100 mM (ρΗ 8,0) και 50 μλ διαλύματος Α5-LOX (5000 U/ml) και επωάστηκε σε RT για 10 λεπτά. Η αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη 25 μΐ 0,08 mM λινολεϊκού οξέος. Η αλλαγή της απορρόφησης καταγράφηκε στα 234 nm σε διαστήματα 1 λεπτού για 10 λεπτά σε RT και καταγράφηκαν οι τιμές μέγιστης ταχύτητας (Vmxk) του δείγματος (Vmaxs) και του ελέγχου (Vmaxc). Ως πρότυπο χρησιμοποιήθηκε η Baicalein. Μια5-ανασταλτική δραστηριότητα LOX ως αναστολή ποσοστού ηλικίας υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση(5). Η τιμή ICs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας γραφήματα δόσης-απόκρισης.

2.11. Προσδιορισμός Ανασταλτικής Δραστηριότητας XO. Η ανασταλτική δράση του XO προσδιορίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Lee et al. [26] με ορισμένες τροποποιήσεις. Εκχύλισμα δακτυλικού κεχριού (10 ul) αναμίχθηκε με 150 ul ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικού νατρίου 50 mM (ρΗ 7,4) και 20 μΙ XO (0,15 U/ml) και επωάστηκε για 10 λεπτά σε ΘΔ. Η αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη 20 μΙ ξανθίνης 0,1 mM. Η αλλαγή της απορρόφησης καταγράφηκε στα 295 nm σε διαστήματα λεπτών για 15 λεπτά σε RT και καταγράφηκαν οι τιμές Vmax του δείγματος (Vmaxs) και του ελέγχου (Vmaxc). Η αλλοπουρινόλη χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Η ανασταλτική δράση XO ως ποσοστιαία αναστολή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (6). Η τιμή ICs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας γραφήματα δόσης-απόκρισης.

2.12. Προσδιορισμός Ανασταλτικής Δραστικότητας Υαλουρονιδάσης. Η ανασταλτική δράση της υαλουρονιδάσης αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Sahasrabudhe και Dedhar [27] με ορισμένες τροποποιήσεις. Το εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (50 ul) αναμείχθηκε με 10 ul υαλουρονιδάσης (8400 U/ml) και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά. Το ένζυμο ενεργοποιήθηκε προσθέτοντας 20 μΐ χλωριούχου ασβεστίου (12,5 mM) και επωάζοντας στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά. Η αντίδραση ξεκίνησε με την προσθήκη υαλουρονικού νατρίου (50 μΙ) και επωάστηκε στους 37 βαθμούς C για 40 λεπτά. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 10 μΐ υδροξειδίου του νατρίου 0,9 Μ και 20 μλ βορικού νατρίου 0,2 Μ και επωάστηκαν στους 100 βαθμούς για 3 λεπτά. Μετά από ψύξη σε RT, προστέθηκαν 50 μΙ 67 mM ρ-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδης και επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά. Οι τιμές απορρόφησης του δείγματος (As) και του ελέγχου (Ac) μετρήθηκαν στα 585 nm. Ως πρότυπο χρησιμοποιήθηκε ταννικό οξύ. Η ανασταλτική δράση της υαλουρονιδάσης ως ποσοστιαία αναστολή υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (7).

2.13. Προσδιορισμός Ανασταλτικών Δραστηριοτήτων Οξειδωτικών ριπών. Τα αντιφλεγμονώδη δυναμικά όσον αφορά τις ανασταλτικές δραστηριότητες οξειδωτικής έκρηξης στο πλήρες ανθρώπινο αίμα και τα απομονωμένα πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό χημειοφωταύγειας ενισχυμένης με λουμινόλη [28, 29] με ορισμένες τροποποιήσεις. Τα πειράματα διεξήχθησαν στο Κέντρο Μοριακής Ιατρικής και Έρευνας Φαρμάκων του Δρ. Panjwani, Διεθνές Κέντρο Χημικών και Βιολογικών Επιστημών, Πανεπιστήμιο του Καράτσι, Πακιστάν και το ινστιτούτο έχει την ηθική άδεια για μελέτες σε ανθρώπινο αίμα από την ανεξάρτητη επιτροπή δεοντολογίας, ICCBS, UoK . No:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/Protocol/1.0.

2.13.1. Προσδιορισμός Ανασταλτικής Δραστικότητας Οξειδωτικής Έκρηξης σε Ολόκληρο Ανθρώπινο Αίμα. Ανθρώπινο αίμα (1 ml) συλλέχθηκε ασηπτικά με παρακέντηση φλέβας σε ηπαρινισμένο σωληνάριο από έναν υγιή εθελοντή μη καπνιστή, ο οποίος δεν έλαβε κανένα φάρμακο ή συμπληρώματα για περισσότερο από μία εβδομάδα και αραιώθηκε (1:20 αραίωση) με HBSs συν *(Hanks Balanced Διάλυμα άλατος, που περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο). Εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (25 μΙ) αναμίχθηκε με αραιωμένο πλήρες αίμα (25 μΙ) και επωάστηκε στους 37 βαθμούς C για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 25 μΐ οψονισμένης ορού ζυμοσάνης και 25 μλ. λουμινόλης. Η παραγωγή ROS με οξειδωτική έκρηξη παρακολουθήθηκε για 50 λεπτά χρησιμοποιώντας ένα φωτόμετρο με επαναλαμβανόμενες σαρώσεις σε διαστήματα 30 δευτερολέπτων και χρόνο μέτρησης 1 δευτερολέπτου. Ως τυπικό φάρμακο χρησιμοποιήθηκε η ιβουπροφαίνη. Το ποσοστό αναστολής υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (8).

όπου το RLU είναι η ένδειξη του μετρητή φωταύγειας ως προς τις σχετικές μονάδες φωτός (RLU) για τον έλεγχο και το RLU είναι η ένδειξη του μετρητή φωταύγειας στο RLU για το δείγμα. Η τιμή ICs υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας γραφήματα δόσης-απόκρισης.

2.13.2. Προσδιορισμός ανασταλτικής δραστηριότητας οξειδωτικής έκρηξης σε απομονωμένα πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα. Ολόκληρο ανθρώπινο αίμα (10 ml) αναμίχθηκε με ίσους όγκους HBSS (Hanks Balanced Salt Solution, χωρίς ασβέστιο και μαγνήσιο) και μέσο διαχωρισμού λεμφοκυττάρων (LSM) και αφέθηκαν τα ερυθροκύτταρα να καθιζάνουν για 30 λεπτά σε RT. Στη συνέχεια, το πλάσμα τοποθετήθηκε προσεκτικά σε LSM και φυγοκεντρήθηκε στα 400 xg για 20 λεπτά σε ΘΔ. Το υπερκείμενο αφαιρέθηκε. Τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο προκύπτον σφαιρίδιο λύθηκαν με ανάμιξη με κρύο απιονισμένο νερό, αναμίχθηκαν με κρύο HBSS7 και φυγοκεντρήθηκαν στα 300xg για 10 λεπτά στους 4 βαθμούς. Το ίζημα πλύθηκε δύο φορές και η βιωσιμότητα των προκύπτων πολυμορφοπυρηνικών ουδετερόφιλων ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο αποκλεισμού Trypan blue. Η συγκέντρωση των κυττάρων ρυθμίστηκε σε 1x10 βαθμούς κύτταρα/ml. Απομονωμένα πολυμορφοπύρηνα ουδετερόφιλα (25 μΐ) αναμίχθηκαν με εκχύλισμα κεχριού δακτύλου (25 μΙ) και επωάστηκαν για 15 λεπτά στους 37 βαθμούς. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 25 ul ορού οψονισμένης ζυμοσάνης και 25 λίτρα λουμινόλης και η παραγωγή ROS με οξειδωτική έκρηξη παρακολουθήθηκε για 50 λεπτά χρησιμοποιώντας ένα φωτόμετρο με επαναλαμβανόμενες σαρώσεις σε διαστήματα 30 δευτερολέπτων και χρόνο μέτρησης σημείων ls. Ως τυπικό φάρμακο χρησιμοποιήθηκε η ιβουπροφαίνη. Το ποσοστό αναστολής υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (8).

2.14. Στατιστική ανάλυση. Τα δεδομένα κάθε πειράματος αναλύθηκαν στατιστικά χρησιμοποιώντας το λογισμικό IBM SPSS Statistics (έκδοση 20) και τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέσος όρος±τυπικό σφάλμα (SE). Η στατιστική σημασία ορίστηκε σε επίπεδο εμπιστοσύνης 95 τοις εκατό. Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) και δοκιμή Tukey για τον προσδιορισμό των διαφορών μεταξύ των ποικιλιών και των εκχυλισμάτων. Για την ανάλυση συσχέτισης χρησιμοποιήθηκε ο συντελεστής συσχέτισης Pearson.

Ταξινόμηση της φλεγμονής

Οξεία φλεγμονή: χαρακτηρίζεται κυρίως από ερυθρότητα, οίδημα, πόνο κ.λπ., δηλαδή φλεγμονή που αποτελείται κυρίως από την αντίδραση του αγγειακού συστήματος.

Χρόνια φλεγμονή: κυρίως ορισμένες χρόνιες φλεγμονώδεις ασθένειες, όπως χρόνια γαστρεντερίτιδα, χρόνια ηπατίτιδα, υποτροπιάζουσες γυναικολογικές φλεγμονές και άλλες παθήσεις.

Αιτία Φλεγμονής

Οποιοσδήποτε παράγοντας που μπορεί να προκαλέσει βλάβη στους ιστούς μπορεί να είναι αιτία φλεγμονής, δηλαδή, οι φλεγμονώδεις παράγοντες μπορούν να ομαδοποιηθούν στις ακόλουθες κατηγορίες:

(1) Βιολογικοί παράγοντες

Τα βακτήρια, οι ιοί, τα μυκόπλασμα, οι μύκητες, οι σπειροχαίτες και τα παράσιτα είναι οι πιο κοινές αιτίες φλεγμονής. Η φλεγμονή που προκαλείται από βιολογικά παθογόνα ονομάζεται επίσης μόλυνση. Οι εξωτοξίνες και οι ενδοτοξίνες που παράγονται από βακτήρια μπορούν να βλάψουν άμεσα τους ιστούς. Η αντιγραφή του ιού σε μολυσμένα κύτταρα οδηγεί σε κυτταρική νέκρωση. ορισμένα αντιγονικά παθογόνα βλάπτουν τους ιστούς μέσω επαγόμενων ανοσολογικών αποκρίσεων μετά τη μόλυνση, όπως οι παρασιτικές λοιμώξεις και η φυματίωση.

2) Φυσικοί παράγοντες

Υψηλή θερμοκρασία, χαμηλή θερμοκρασία, ραδιενεργές ουσίες, υπεριώδεις ακτίνες κ.λπ., και μηχανικές βλάβες.

(3) Χημικοί παράγοντες

Εξωγενείς χημικές ουσίες όπως ισχυρό οξύ, ισχυρό αλκάλιο και νέφτι. Ενδογενείς τοξικές ουσίες όπως προϊόντα αποσύνθεσης νεκρωτικού ιστού και μεταβολίτες όπως η ουρία συσσωρεύονται στο σώμα υπό ορισμένες παθολογικές καταστάσεις.

(4) Ξένο σώμα

Ξένα σώματα που εισέρχονται στο ανθρώπινο σώμα με διάφορα μέσα, όπως διάφορα μέταλλα, υπολείμματα ξύλου, σκόνη στον αέρα, χειρουργικά ράμματα κ.λπ., μπορούν να προκαλέσουν διαφορετικούς βαθμούς φλεγμονωδών αποκρίσεων λόγω της διαφορετικής αντιγονικότητάς τους.

(5) Νεκρωτικός ιστός

Αιτίες όπως η ισχαιμία ή η υποξία μπορεί να προκαλέσουν νέκρωση ιστού, η οποία είναι ένας πιθανός φλεγμονώδης παράγοντας. Οι συμφορητικές αιμορραγικές ταινίες και η διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων στις άκρες των φρέσκων εμφράκτων είναι και οι δύο εκδηλώσεις φλεγμονής.

(6) Αλλεργίες

Όταν η ανοσολογική απόκριση του σώματος είναι ανώμαλη, μπορεί να προκαλέσει ακατάλληλη ή υπερβολική ανοσολογική απόκριση, προκαλώντας βλάβη στους ιστούς και τα κύτταρα και να οδηγήσει σε φλεγμονή. Όπως η αλλεργική ρινίτιδα, η κολίτιδα, η κνίδωση, η φυματίωση, η σπειραματονεφρίτιδα και άλλες ασθένειες.

Τα αντιβιοτικά είναι βακτηριοκτόνα και αντιφλεγμονώδη, η μακροχρόνια χρήση θα καταστρέψει τη φυσιολογική χλωρίδα του ανθρώπινου σώματος, θα σκοτώσει καλά βακτήρια, θα προκαλέσει ανισορροπία της εντερικής χλωρίδας, θα προκαλέσει μια ποικιλία εντερικών δυσλειτουργιών και ανεπιθύμητων αντιδράσεων και θα προκαλέσει δευτερογενή μόλυνση, θα μειώσει το σώμα. αντίσταση. Επιπλέον, τα αντιβιοτικά μεταβολίζονται ως επί το πλείστον από το ήπαρ και τα νεφρά και η κατάχρηση αντιβιοτικών είναι πολύ πιθανό να προκαλέσει βλάβη στη λειτουργία του ήπατος και των νεφρών. Μπορείτε να δώσετε προσοχή στις λέξεις "χρήση με προσοχή σε ασθενείς με κακή ηπατική και νεφρική λειτουργία" στις οδηγίες όλων των αντιφλεγμονωδών φαρμάκων. Επιπλέον, τα αντιβιοτικά μπορούν επίσης να αυξήσουν τις αλλεργικές αντιδράσεις στα φάρμακα. Τα τελευταία χρόνια, η υψηλή συχνότητα εμφάνισης αλλεργικής ρινίτιδας και αλλεργικού άσθματος σχετίζεται με την κατάχρηση αντιβιοτικών.

Πειράματα έδειξαν ότι το εκχύλισμα Cistanche pipiensis πλούσιο σε εχινακοσίδη έχει καλή βελτιωτική επίδραση στην κολίτιδα. Το Cistanche γλυκοσίδιο K και το piposide B έχουν καλή ανασταλτική δράση στην έκκριση του μονοξειδίου του αζώτου στα κύτταρα, δείχνοντας ότι η καλή αντιφλεγμονώδη δράση του.Cistancheείναι ένα κινέζικο φαρμακευτικό υλικό με την ίδια προέλευση με το φάρμακο και τα τρόφιμα. Είναι ένα από τα δέκα κορυφαία κινέζικα φυτικά φάρμακα στη χώρα μου. Είναι ένας θησαυρός από τα βάθη της ερήμου και ένα φυσικό τονωτικό. Το Cistanche Το Cistanche έχει ιατρικό ιστορικό σχεδόν 2,000 ετών. Ηχογραφήθηκε για πρώτη φορά στο "Shen Nong's Materia Medica". Το 2005, το Cistanche συμπεριλήφθηκε στη «Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας» ως γνήσιο φαρμακευτικό υλικό. Το Cistanche ήταν ένα καλό τονωτικό από την αρχαιότητα, χωρίς κανένα ιστορικό τοξικότητας, γεγονός που αποδεικνύει πλήρως την ασφάλειά του.