Πώς εχινοσίδη από cistanche θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον?

Επικοινωνία: emily.li@wecistanche.com

Μέρος Ι.:Νευροπροστατευτικές επιδράσεις και σχετικοί μηχανισμοί του Echinacoside σε PD που προκαλείται από MPTPΝόσος του Πάρκινσον(ΠΔ)Ποντίκια

Ζεν-Νιαν Ζανγκ'*Ζεν Χουίλ Τσανγκ Τσεν Γιαν Λιάνγκ Λι-Λι Τανγκ'Σου-Λέι Γουάνγκ Τσενγκ-Τσενγκ Ξουλ Χούι Γιανγκ'Τζινγκ-ΣιΖάνγκ²Γιανγκ Ζάο

Στόχος: Διερεύνηση της νευροπροστατευτικής δράσης και των σχετικών μηχανισμών τηςεχινοκοσίδη (ECH) Σας ευχαριστώ, κύριε Πρόεδρε.απόcistancheσε επαγόμενη από 1-μεθυλο-4-φαινυλο-1,2,3,6-τετραϋδροπυριδίνη (MPTP)Νόσος του Πάρκινσον(ΠΔ) ποντίκια. Μέθοδοι: Η νόσος του Πάρκινσον προκαλείται σε ποντίκια από το MPTP και παρατηρούνται οι νευροσυμπεριφορές ποντικών σε διαφορετικές ομάδες. Στη συνέχεια, η ανοσοϊστοχημεία και η ανάλυση δυτικής κηλίδας υιοθετούνται για τη μέτρηση της έκφρασης της υδροξυλάσης τυροσίνης (TH) και της α-συνουκλεΐνης στη μέλαινα ουσία (SN). Η περιεκτικότητα σε ντοπαμίνη (DA) και άλλων νευροδιαβιβαστών στον εγκέφαλο ανιχνεύεται από υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία. Η έκφραση των αυξητικών παραγόντων των νεύρων και των φλεγμονωδών παραγόντων στο SN σε ποντίκια σε κάθε ομάδα μετράται με ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Τέλος, μετράται η έκφραση των παραμέτρων που σχετίζονται με το οξειδωτικό στρες σε κάθε ομάδα. Αποτελέσματα: Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, ο χρόνος αναρρίχησης σε πόλο μεταξύ των ποντικών στη μέτρια και υψηλή δόσηεχινοκοσίδηοι ομάδες μειώνονται σημαντικά (P< 0.01).="" the="" rotarod="" staying="" time,="" as="" well="" as="" fore="" and="" hind-limb="" strides,="" shows="" a="" significant="" increase="" (p="">< 0.01),="" as="" does="" spontaneous="" activity="" (p="">< 0.01).="" moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" th,="" da,="" glial="" cell="" line-derived="" neurotrophic="" factor,="" and="" brain-derived="" neurotrophic="" factor="" in="" sn="" in="" mice="" show="" significant="" increases="" in="" these="" two="" groups="" (p="">< 0.01).="" the="" content="" of="" superoxide="" dismutase,="" catalase,="" and="" glutathione="" peroxidase="" indicates="" significant="" increases="" in="" the="" low,="" moderate,="" and="" high-dose="">εχινοκοσίδηομάδες (P< 0.01),="" and="" the="" content="" of="" mda="" was="" reduced="" (p="">< 0.01).="" in="" the="" high-dose="">εχινοκοσίδηομάδα, η έκφραση της ιντερλευκίνης (IL) 6 και του παράγοντα νέκρωσης όγκων-α μειώνεται σημαντικά (P< 0.01),="" while="" the="" expression="" of="" il-10="" shows="" a="" marked="" increase="" (p="">< 0.01)="" alongside="" a="" decrease="" in="" the="" expression="" of="" α-synuclein="" (p="">< 0.01).="" conclusion:="">Εχινοκοσίδηαπόcistancheβελτιώνει τα νευροσυμπεριφορικά συμπτώματα σεΝόσος του Πάρκινσονποντίκια και αυξάνει σημαντικά την έκφραση των TH και DA. Το νευροπροστατευτικό αποτέλεσμα συσχετίζεται δυνητικά με αντιφλεγμονώδεις και αντι-οξειδωτικές δράσεις, προάγει την έκφραση των αυξητικών παραγόντων των νεύρων και μειώνει τη συσσώρευση α-συνουκλεΐνης.

Cistanche για τη θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον

Λέξεις-κλειδιά: Νόσος του Πάρκινσον, MPTP, εχινοκόσίδη,α-συνουκλεΐνη, οξειδωτικό στρες, νευροπροστασία, BDNF, GDNF, IL-6, TNF-α, IL-10

Εισαγωγή

Νόσος του Πάρκινσον (PD)είναι μια χρόνια και προοδευτική νευροεκφυλιστική ασθένεια. Ένα τυπικό παθολογικό χαρακτηριστικό τουΝόσος του Πάρκινσονείναι ο σχηματισμός σωμάτων Lewy, στα οποία α-συνουκλεΐνη και η ουβικουιτίνη είναι τα κύρια συστατικά. Αν και η παθογένεια τουΝόσος του Πάρκινσονδεν έχει αποσαφηνιστεί πλήρως, ακόμη περισσότερα στοιχεία δείχνουν ότι οι περιβαλλοντικοί παράγοντες, το οξειδωτικό στρες, η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία, η μείωση της ρύθμισης των νευροτροφικών παραγόντων, η ανοσολογική φλεγμονή, η διεγερτική τοξικότητα αμινοξέων, η υπερφόρτωση ασβεστίου και άλλοι μηχανισμοί παθολογίας αλληλεπιδρούν και συμμετέχουν στην εμφάνιση ή ανάπτυξηΝόσος του Πάρκινσον. Μελέτες έδειξαν ότι παράγοντες κινδύνου, όπως το αυξημένο οξειδωτικό στρες και η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία, μπορούν να οδηγήσουν σε λανθασμένη αναδίπλωση και ανώμαλη συσσωμάτωση α- συνουκλεΐνης. Αυτό με τη σειρά του μπορεί να επιδεινώσει το οξειδωτικό στρες και τη μιτοχονδριακή δυσλειτουργία. Αυτοί οι παράγοντες μπορεί να αλληλεπιδρούν μεταξύ τους και να ενισχύουν συνεχώς την επίδραση του τραυματισμού, οδηγώντας τελικά σε προοδευτικό εκφυλισμό και θάνατο των ντοπαμινεργικών νευρώνων.3 Λαμβάνοντας υπόψη ότι κανένα φάρμακο δεν μπορεί να αποτρέψει την εξέλιξη τηςΝόσος του Πάρκινσονπρος το παρόν, σε συνδυασμό με την παθογένεση και τα βασικά παθολογικά χαρακτηριστικά τουΝόσος του Πάρκινσον, η στόχευση α-συνουκλεΐνης μπορεί να υποδεικνύει μια σημαντική κατεύθυνση για την εύρεση φαρμάκων που μπορούν να καθυστερήσουν την εξέλιξη της νόσου και να διερευνήσουν τις νευροπροστατευτικές επιδράσεις.

Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότιεχινοκοσίδη(ECH) Σας ευχαριστώ, κύριε Πρόεδρε.απόcistancheέχει ένα ευρύ φάσμα φαρμακολογικών επιδράσεων, συμπεριλαμβανομένων των αντιφλεγμονωδών, αντιοξειδωτικών και νευροπροστατευτικών λειτουργιών. Επιπλέον, μπορεί να συμβάλει στη βελτίωση της μάθησης και της μνήμης, να παρέχει ηπατική προστασία και ανοσολογική ρύθμιση και να παρέχει αντικαρκινικές επιδράσεις.5 Υπάρχουσες μελέτες που διεξήχθησαν από την παρούσα ομάδα μελέτης επιβεβαίωσαν επίσης ότιεχινοκοσίδη απόcistancheμπορεί να είναι σε θέση να βελτιώσει το μη φυσιολογικό βάδισμα στην 1-μεθυλο-4-φαινυλο-1,2,3,6-τετραϋδροπυριδίνη (MPTP)- που προκαλείταιΝόσος του Πάρκινσονμοντέλο ποντικών. Μπορεί επίσης να μειώσει σημαντικά την έκφραση του Bax/Bcl-2 και να αναστείλει τη μείωση των ντοπαμινεργικών νευρώνων στο ραβδωτό σώμα, καθώς και να αναστείλει την ενεργοποίηση των μικρογλοίων και των νέων τύπων νευρογλοιακών κυττάρων.6–10 Στην παθογένεση τουΝόσος του Πάρκινσον, η ενεργοποίηση των μικρογλοίων μπορεί να εκκρίνει πολλές νευροτοξικές ουσίες όπως χημειοκίνες, φλεγμονώδεις παράγοντες και αντιδραστικές ρίζες χωρίς οξυγόνο και να επιδεινώσει τη βλάβη στους νευρώνες μέσω οξειδωτικού στρες, φλεγμονής και επαγωγής της απόπτωσης. Οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι στο MPTP που προκαλείται από το MPTPΝόσος του Πάρκινσονμοντέλο ποντικών, αναστέλλοντας την ενεργοποίηση των μικρογλοίων μπορεί να αποτρέψει το θάνατο των ντοπαμινεργικών νευρώνων.8 Τα κυτταρικά μοντέλα έδειξαν ότιcistancheεχινοκοσίδημπορεί να είναι σε θέση να μειώσει την έκφραση των φλεγμονωδών παραγόντων που προκαλούνται από 6-υδροξυδοπαμίνη. Ωστόσο, υπάρχουν λίγες αναφορές σχετικά με τις επιπτώσεις τηςεχινοκοσίδη απόcistancheκαι τους σχετικούς θεραπευτικούς μηχανισμούς για την κάθαρση της α-συνουκλεΐνης, του βασικού παθολογικού προϊόντος σεΝόσος του Πάρκινσον. Στην παρούσα μελέτη, η αποβολή της α-συνουκλεΐνης μελετήθηκε περαιτέρω συνδυάζοντας υπάρχουσες μελέτες, λαμβάνοντας υπόψη τους νευροπροστατευτικούς μηχανισμούς του ECH (αντιφλεγμονώδες, αντιοξειδωτικό στρες) και την ενίσχυση του αυξητικού παράγοντα νεύρων που προέρχεται από γλοιακά κύτταρα (GDNF) και του αυξητικού παράγοντα νεύρων που προέρχεται από τον εγκέφαλο (BDNF).

Υλικά και συσκευές

Πειραματόζωα:Η πειραματική ομάδα περιλάμβανε 108 αρσενικά ποντίκια C57BL/6J ηλικίας οκτώ εβδομάδων (βαθμός ειδικής περιεκτικότητας σε παθογόνα (SPF)) βάρους 20-22 g. Τέσσερα ποντίκια διατηρήθηκαν ανά κλωβό στους 22°C–25°C. Τα ποντίκια παρασχέθηκαν από το Κέντρο Πειραματόζωων της Σαγκάης, κινεζική Ακαδημία Επιστημών, που στεγάζεται στο Πανεπιστήμιο Κινεζικής Ιατρικής nanjing (Nanjing, Κίνα). Τα ζώα αντιμετωπίστηκαν ανθρώπινα σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας σε ένα δωμάτιο ποιότητας SPF με θερμοκρασία 22 ° C - 25 ° C, 55% σχετική υγρασία και υπό κιρκάδιο ρυθμό 12 ωρών. Τα ποντίκια είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. Πρωτογενή αντιδραστήρια: Τα κύρια αντιδραστήρια που χρησιμοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη ήταν τα εξής: MPTP (Sigma-Aldrich, Αριθμός προϊόντος: M0896), μονοκλωνικό αντι-σώμα μονοκλωνικής αντι-τυροσίνης ποντικού (TH) μονοκλωνικό αντίσωμα (Sigma-Aldrich Company), αντι-κουνέλι Alexa Fluor 555 (Biyuntian Institute of Biotechnology), Alexa Fluor 488 αντι-κουνέλι αντίσωμα (Biyuntian Institute of Biotechnology), σελεγιλίνη (Sigma-Aldrich), αντι-χρένο υπεροξειδάσης (HRP)-αιγοπρόβατο αντι-κουνέλι δευτερογενές αντίσωμα (Biyuntian Institute of Biotechnology), σελεγινικό (Sigma-Aldrich), αντι-χρένο υπεροξειδάσης (HRP)-κατσίκα αντι-κουνέλι δευτερογενές αντίσωμα (Biyuntian Institute of Biyuntian Institute of Biotechnology), Βιοτεχνολογία), πολυκλωνικό α-συνουκλεΐνης αντισωμάτων κουνελιού (Τεχνολογία Κυτταρικής Σηματοδότησης), Δευτερεύον αντίσωμα HRP-goat αντι-ποντικών (Ινστιτούτο Βιοτεχνολογίας Biyuntian), καιcistancheεχινοκοσίδη(Chengdu Linghangzhe Βιοτεχνολογίας Co, Ε.Π.Ε.). Προετοιμασία του MPTP: 100 mg κόνις MPTP προστέθηκαν σε 10 ml 0,9% φυσιολογικό ορό, ανακινήθηκαν επιμελώς και αναμείχθηκαν για να αποφευχθεί το φως και στη συνέχεια χωρίστηκαν σε 10 σωλήνες Eppendorf 1,5 mL και αποθηκεύτηκαν στους -20 °C. Πριν από τη χρήση, το διάλυμα αραιώθηκε μία φορά για να επιτευχθεί τελική συγκέντρωση 5 mg/ml.

Πειραματικές Μέθοδοι

Ομαδοποίηση πειραματόζωων:Τα 108 ποντίκια C57BL/6J χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες με 18 ποντίκια σε κάθε ένα. Οι λεπτομέρειες της ομαδοποίησης ήταν οι εξής: η κανονική ομάδα ελέγχου (η κανονική ομάδα φυσιολογικού ορού, η ομάδα MPTP, η χαμηλή δόσηεχινοκοσίδηομάδα [η ομάδα EL], μέτριας δόσηςεχινοκοσίδηομάδα [η ομάδα EM], υψηλή δόσηεχινοκοσίδη [η ομάδα EH] και η ομάδα σελεγιλίνης [η ομάδα SL]). Μοντελοποίηση των πειραματόζωων και της φαρμακευτικής αγωγής: Η δόση του MPTP για ενδοπεριτοναϊκή ένεση ήταν 30 mg/ kg/ημέρα για επτά συνεχόμενες ημέρες. Η δόση καθετήρα σελεγιλίνης ήταν 1 mg/kg/ημέρα. Η δόση τουεχινοκοσίδηστις ομάδες EL, EM και EH ήταν 10 mg/kg/ημέρα, 20 mg/kg/ημέρα και 30 mg/kg/ημέρα, αντίστοιχα. Μεταξύ αυτών των ομάδων, τα ποντίκια στην κανονική αλατούχο ομάδα χορηγήθηκαν ενδογαστρικά με 0,1 ml φυσιολογικού ορού και εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με 0,1 mL φυσιολογικού ορού κατά τη διάρκεια της περιόδου μοντελοποίησης. Ο καθετήρας ξεκίνησε στις τρεις δόσειςεχινοκοσίδηκαι την ομάδα SL, 3 ημέρες πριν από την ένεση MPTP, και τα ποντίκια συνέχισαν να λαμβάνουν καθετήρα για 7 ημέρες μετά τον τερματισμό της ένεσης MPTP.

Αναφορές

1. Betarbet R, Sherer TB, MacKenzie G, Garcia-Osuna M, Panov AV, Greenamyre JT. Η χρόνια συστηματική έκθεση σε φυτοφάρμακα αναπαράγει χαρακτηριστικά τηςΝόσος του Πάρκινσον. Νατ Ντέιβις. 2000;3 (12):1301–1306. doi:10.1038/81834

2. Dunnett SB, Björklund A. Προοπτικές για νέες επανορθωτικές και νευροπροστατευτικές θεραπείες στοΝόσος του Πάρκινσον. Φύση. 1999;399(6738 Συμπλ): Α32–Α39. doi:10.1038/399a032

3. Parihar MS, Parihar A, Fujita M, Hashimoto M, Ghafourifar P. Μιτοχονδριακή συσχέτιση της άλφα-συνουκλεΐνης προκαλεί οξειδωτικό στρες. Κύτταρο Mol Life Sci. 2008;65(7–8):1272–1284. doi:10.1007/ s00018-008-7589-1

4. Λιου Μ, Χε ΖΛ. Τα στοιχεία για τους αγωνιστές των υποδοχέων της ντοπαμίνης στη θεραπεία τηςΝόσος του Πάρκινσον. Chin J Evid Βασισμένο Med. 2010;10 (03):232–234. Άρθρο στα κινέζικα.

5. He WJ, Fang TH, Tu PF. Η πρόοδος της έρευνας σχετικά με τις φαρμακολογικές δραστηριότητες τουεχινοκοσίδη. Ζονγκούο Ζονγκ Γιάο Ζα Ζι. 2009;34 (04):476–479. Άρθρο στα κινέζικα.

6. Zhao Q, Gao J, Li W, Cai D. Νευροτροφική και νευροανακριτικήεπιδράσεις της εχινοκοσίδηςΣτο υποξεία μοντέλο ποντικιού MPTP τουΝόσος του Πάρκινσον. Εγκέφαλος Res. 2010;1346:224–236. doi:10.1016/j. εγκέφαλοι.2010.05.018

7. Ζου Μ, Ζου Μ, Σι Υ, Λι Γου. Επιδράσεις τηςcistancheεχινοκοσίδησχετικά με τον μιτοχονδριακό κατακερματισμό που προκαλείται από MPP (+), τη μιτοφαγία και την κυτταρική απόπτωση σε κύτταρα SH-SY5Y. Ζονγκ Σι Γι Τζι Χε Χουε Μπάο. 2012;10 (12):1427–1432. doi:10.3736/jcim20121215

8. Ζανγκ Τζ, Ζανγκ Ζ, Ξιάνγκ Τζ, κ.ά. Νευροπροστατευτικές επιδράσεις τηςεχινοκοσίδησχετικά με τη ρύθμιση των ενεργών στο στρες σημάτων p38MAPK και NF-κB p52 στο μοντέλο ποντικών τουΝόσος του Πάρκινσον. Neurochem Res. 2017;42 (4):975–985. doi:10.1007/s11064-016-2130-7

9. Zhao Q, Yang X, Cai D, κ.ά.Εχινοκοσίδηαπόcistancheπροστατεύει από τη νευρωνική απόπτωση που προκαλείται από MPP (+) μέσω της ρύθμισης της οδού ROS / ATF3 / CHOP. Νευροεπιστήμος Ταύρος. 2016;32(4):349–362. doi:10.1007/s12264- 016-0047-4

10. Τσεν Γ, Σιά Β, Τανγκ Λ, κ.ά.cistancheΕχινοκοσίδηπροστατεύει από τη νευροτοξικότητα που προκαλείται από MPTP / MPP + μέσω της ρύθμισης της οδού αυτοφαγίας που μεσολαβείται από το Sirt1. Metab Εγκεφάλου Dis. 2019;34(1):203–212. doi:10.1007/s11011-018-0330-3