Μέρος 2: Ολιγοσακχαρίτης ανθρώπινου γάλακτος 2/-φουκοσυλλακτόζη προκαλεί νευροπροστασία από εγκεφαλικό επεισόδιο ενδοεγκεφαλικής αιμορραγίας
Mar 23, 2022
Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
3. Συζήτηση
Σε αυτή τη μελέτη, το 2FL μείωσε την επαγόμενη από την αιμίνη ενεργοποίηση μικρογλοίας καινευροεκφυλισμόςσε πρωτογενή φλοιώδηνευρώναςκαι συγκαλλιέργεια μικρογλοίας BV2. Το 2FL βελτίωσε την κινητική δραστηριότητα σε αρουραίους ICH. Χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική ανάλυση και ανάλυση qPCR, δείξαμε ότι το 2FL ανέστειλε την ενεργοποίηση μικρογλοίας, τη διήθηση των λεμφοκυττάρων CD4(συν) και την έκφραση φλεγμονωδών δεικτών στρες και ER στον εγκέφαλο ICH. Το κύριο εύρημα αυτής της μελέτης είναι ότι το 2FL είναινευροπροστατευτικόέναντι τραυματισμού ICH.
Η ICH προκαλεί οξεία και μη αναστρέψιμη εγκεφαλική βλάβη. Μετά την οξεία προσβολή, ενεργοποιείται μια σειρά από αντιδράσεις καταρράκτη, οι οποίες καταλήγουν σε χρόνιο δευτερογενή εκφυλισμό. Η αιμοσφαιρίνη και τα προϊόντα αποδόμησής της συνδέονται στενά με δευτερογενή τραυματισμό. Η αιμίνη είναι κυτταροτοξική και συμβάλλει στην εγκεφαλική βλάβη, που συνοδεύεται από αιμορραγικό εγκεφαλικό [21,22]. Η υπερβολική αιμίνη καταλύει τις αλυσιδωτές αντιδράσεις ελεύθερων ριζών [23] και διευκολύνει την απόπτωση και τη μιτοχονδριακή σχάση [24]. Η αιμίνη επίσης ενισχύει την ενεργοποίηση των μικρογλοίων και επιδεινώνει τη φλεγμονώδη βλάβη μετά από ενδοεγκεφαλική αιμορραγία [25,26]. Σε αυτή τη μελέτη, η αιμίνη χρησιμοποιήθηκε για την προσομοίωση της ICH σε ανευρώναςκαι συγκαλλιέργεια μικρογλοίας BV2. Δείξαμε ότι η αιμίνη ήταννευροτοξικήκαι ενεργοποιημένη μικρογλοία. Η θεραπεία με 2FL μείωσε την ενεργοποίηση IBA1 που προκαλείται από την αιμίνη και αποκατέστησε την ανοσοαντιδραστικότητα του MAP2. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι το 2FL είναι αντιφλεγμονώδες καινευροπροστατευτικόσε ένα κυτταρικό μοντέλο ICH.
Προηγουμένως, αποδείξαμε ότι η τοπική έγχυση κολλαγενάσης είχε ως αποτέλεσμα ICH και βραδυκινησία σε αρουραίους [13]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήθηκε ένα παρόμοιο ζωικό μοντέλο για την εξέταση της προστατευτικής επίδρασης του 2FL in vivo. Δείξαμε ότι η συστηματική εφαρμογή 2FL για 5 ημέρες βελτίωσε τις κινητικές κινήσεις σε αρουραίους ICH. Καθώς η φλεγμονή παίζει κρίσιμο ρόλο στην εξέλιξη της ICH [7,8,27], βρήκαμε επίσης ενεργοποίηση μικρογλοίας στον εγκέφαλο ICH. Το 2FL μείωσε το IBA και αποκατέστησε εν μέρει τη διακλάδωση της μικρογλοίας στον τραυματισμένο ICH εγκέφαλο. Επιπλέον, διαπιστώσαμε ότι το 2FL ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση των φλεγμονωδών παραγόντων μικρογλοίας/μακροφάγου M2 (αντιφλεγμονώδους) στον εγκέφαλο αρουραίου ICH. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι το 2FL κατέστειλε την ενεργοποίηση μικρογλοίας που προκαλείται από ICH στον τραυματισμένο εγκέφαλο.
Το ICH προάγει τη μετανάστευση περιφερικών ανοσοκυττάρων, όπως τα CD4 plus και CD8 plus T κύτταρα, στον τραυματισμένο εγκέφαλο [28,29]. Αναφέραμε προηγουμένως την έκφραση κυτταροτοξικών δεικτών Τ-κυττάρων στον εγκέφαλο ICH [13]. Επιπλέον, η μέγιστη διήθηση των CD4 Τ κυττάρων ήταν μεταξύ 3 και 4 ημερών μετά από ισχαιμικό τραυματισμό στα ποντίκια [30]. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι η ICH αύξησε τη διήθηση CD4 συν λεμφοκυττάρων στο τραυματισμένο ραβδωτό σώμα την ημέρα 5 σε αρουραίους. Η διήθηση των κυττάρων CD4 μετριάστηκε σημαντικά με 2FL. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν την ιδέα ότι το 2FL αναστέλλει τη μετανάστευση των Τ-κυττάρων από την περιφέρεια στον εγκέφαλο ICH.
Το Cistanche έχει νευροπροστατευτική δράση
Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι το 2FL έχει προστατευτικά αποτελέσματα στην περιφέρεια. Στα ανθρώπινα εντεροκύτταρα, το 2FL μείωσε την επαγωγή του CD14 [18] και την έκφραση των IL-8, IL-1b και MIP-2 [31]. Το 2FL εξασθενεί επίσης τη σοβαρότητα της νεκρωτικής εντεροκολίτιδας στα νεογνικά έντερα ποντικών [32]. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι το 2FL έχει αντιφλεγμονώδη καινευροπροστατευτικόεπιδράσεις στον εγκέφαλο ICH. Άλλες μελέτες υποστηρίζουν επίσης ότι το 2FL βελτίωσε τη μάθηση και τη μακροπρόθεσμη ενίσχυση του ιππόκαμπου σε τρωκτικά [17], καθώς και απέτρεψε τον κυτταρικό θάνατο στον ισχαιμικό εγκέφαλο [19]. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ο 2FL έχει πολύπλευρες ευεργετικές επιδράσεις κατά του ΚΝΣ και της περιφερικής φλεγμονής και εκφυλισμού.
Η ICH μπορεί να προκαλέσει δευτερογενήνευροεκφυλισμόςμέσω του στρες ER [33]. Για παράδειγμα, η οδός PERK ενεργοποιήθηκε στον εγκέφαλο ICH, όπως αποδεικνύεται από την ανοδική ρύθμιση του p-eIF2& και του ATF4 [34]. Το προκύπτον στρες ER προκάλεσε περαιτέρωνευρωνικόαπόπτωση και κυτταρικός θάνατος. Αναφέραμε επίσης ότι η έκφραση των PERK, IRE1, CHOP, SigmaR1 και κασπάσης-3 ενισχύθηκε στον εγκέφαλο ICH. Το 2FL ανέστειλε σημαντικά αυτές τις αποκρίσεις. Οι λεπτομερείς μηχανισμοί που διέπουν τη ρύθμιση του στρες ER με 2FL δικαιολογούν έρευνα.
Υπάρχουν ορισμένοι περιορισμοί σε αυτή τη μελέτη. Δεν χρησιμοποιήσαμε το μέγεθος του αιματώματος για να αξιολογήσουμε το αποτέλεσμα μετά τη θεραπεία με 2FL. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, ο ποσοτικός προσδιορισμός της περιοχής του αιματώματος στις ιστολογικές τομές είναι συνήθως έντασης εργασίας και μερικές φορές υποκειμενικός [35]. Μια νέα προσέγγιση αναπτύχθηκε πρόσφατα για να επιτρέπει ακριβείς και αποτελεσματικές μετρήσεις του όγκου του εγκεφαλικού αιματώματος [35]. Θα είναι ενδιαφέρον να προσδιοριστεί η συσχέτιση του όγκου του αιματώματος με βελτιώσεις στην κινητική δραστηριότητα μετά από θεραπεία 2FL χρησιμοποιώντας αυτή τη νέα προσέγγιση. Η μελέτη μας διεξήχθη σε κυτταρικά και ζωικά μοντέλα ICH. Απαιτούνται πρόσθετες μελέτες πρωτευόντων εκτός ανθρώπου και προοπτικές τυχαιοποιημένες δοκιμές θεραπείας με 2FL σε ανθρώπους πριν από την κλινική χρήση της.
Το ανθρώπινο γάλα θεωρείται η καλύτερη πηγή διατροφής για τα νεογέννητα και τα αναπτυσσόμενα βρέφη. Πέρα από τη διατροφή του, το μητρικό γάλα περιέχει επίσης ευεργετικές ενώσεις [36], όπως το 2FL. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι το 2FL, ένα βιοδραστικό συστατικό στο ανθρώπινο γάλα, έχει προστατευτικά αποτελέσματα έναντι της ICH. Το 2FL μπορεί να έχει κλινικές επιπτώσεις για τη θεραπεία της ICH.
όφελος από το εκχύλισμα κιστάνι
4. Υλικά και Μέθοδοι
4.1. Των ζώων
Ενήλικοι αρσενικοί και έγκυοι επίμυες Sprague-Dawley αγοράστηκαν από την BioLASCO, Ταϊπέι, Ταϊβάν. Η χρήση ζώων εγκρίθηκε από την Επιτροπή Έρευνας Ζώων των Εθνικών Ινστιτούτων Ερευνών Υγείας της Ταϊβάν (NHRI-IACUC106101-A). Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τον Οδηγό Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Φροντίδα και Χρήση Ζώων Εργαστηρίου (Εκδόσεις ΝΙΗ Νο. 8023, αναθεωρημένο 1978).
4.2. Υλικά
Η 2'-φουκοσυλλακτόζη παρασχέθηκε από την Advanced Protein Technologies Corp. (Suwon-si, επαρχία Gyeonggi-do, Κορέα). Η αλβουμίνη βόειου ορού, η ένυδρη χλωράλη, ο εμβρυϊκός βόειος ορός, η L-γλουταμινική, η παραφορμαλδεΰδη, η πολυ-ϋ-λυσίνη, η αιμίνη και το Triton X-100 αγοράστηκαν από τη Sigma (St. Louis, MO, ΗΠΑ). Alexa Fluor 488 (δευτερεύον αντίσωμα), συμπλήρωμα B27, τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco,ΝευροβασικήΤο μέσο και η θρυψίνη αγοράστηκαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). Το αντίσωμα αντι-CD4 αγοράστηκε από την Proteintech (Rosemont, IL, USA). Το Anti-MAP2 αγοράστηκε από την Millipore (Burlington, VT, ΗΠΑ). Το αντίσωμα αντι-ΙΒΑ1 αγοράστηκε από την Wako (Richmond, VA, ΗΠΑ).
4.3. Πρωτογενής φλοιώδης νευρώνας αρουραίου (PCN) και Microglia Coculture
Πρωτογενής φλοιώδηςνευρώναςΟι καλλιέργειες (PCN) παρασκευάστηκαν από εμβρυϊκούς (E14-15) ιστούς φλοιού που ελήφθησαν από έμβρυα τελειόκυων αρουραίων Sprague-Dawley. Μετά την αφαίρεση των αιμοφόρων αγγείων και των μηνίγγων, οι συγκεντρωμένοι φλοιοί υποβλήθηκαν σε θρυψίνη (0.05 τοις εκατό ; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά το ξέπλυμα της θρυψίνης με προθερμασμένο μέσο Eagle's τροποποιημένο Dulbecco (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), τα κύτταρα διαχωρίστηκαν με λειοτρίβηση, μετρήθηκαν και απλώθηκαν σε πλάκες κυτταροκαλλιέργειας 96- φρεατίων (5,0 × 104/φρεάτιο) προεπικαλυμμένα με πολυ-ϋ-λυσίνη (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ΗΠΑ). Το μέσο επίστρωσης καλλιέργειας αποτελούνταν απόνευροβασικόςμέσο συμπληρωμένο με 2 τοις εκατό απενεργοποιημένο με θερμότητα FBS, 0,5 mmol/L L-γλουταμίνη, 0.025 mM L-γλουταμινικό και 2 τοις εκατό Β27 (Invitrogen, Carlsbad, CA, ΗΠΑ). Οι καλλιέργειες διατηρήθηκαν στους 37 О C σε μια υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5 τοις εκατό CO2 και 95 τοις εκατό αέρα. Οι καλλιέργειες τροφοδοτήθηκαν με ανταλλαγή 50 τοις εκατό του μέσου με θρεπτικό μέσο (νευροβασικό μέσο), 0.5 mmol/L L-γλουταμίνη και 2 τοις εκατό Β27 με ένα αντιοξειδωτικό συμπλήρωμα τις ημέρες in vitro ( DIVs) 3 και 5. Τα μικρογλοία BV2 καλλιεργήθηκαν χωριστά, αποσπάστηκαν με 0,05 τοις εκατό θρυψίνη-αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA, Invitrogen) και φυγοκεντρήθηκαν στα 100 χ g για 5 λεπτά. Τα κύτταρα BV2 επαναιωρήθηκαν στο θρεπτικό μέσο που περιείχε συμπλήρωμα Β27 χωρίς αντιοξειδωτικά (一AO, από την Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Η πυκνότητα των κυττάρων που επιβίωσαν μετρήθηκε χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία μπλε τρυπανίου. Τα κύτταρα επιστρώθηκαν στα επιστρωμένα με PCN φρεάτια σε συγκέντρωση 3,0 × 103/φρεάτιο σε DIV 7, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [37]. Οι συγκαλλιέργειες τροφοδοτήθηκαν με μέσο 一AO στα DIV 7 και 10. Στο DIV 10, οι καλλιέργειες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία γλουταμικού με 2FL ή φορέα. Στις 48 ώρες μετά τη θεραπεία με το φάρμακο, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη (PFA, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ΗΠΑ) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου.
νευροπροστατευτικές επιδράσεις του κίστανχου: θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον
4.4. Ανοσοκυτταροχημεία
Μετά την απομάκρυνση του διαλύματος PFA 4 τοις εκατό, τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS. Τα σταθεροποιημένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ένα διάλυμα αποκλεισμού (5 τοις εκατό BSA και 0,1 τοις εκατό Triton X-100 σε PBS) για 1 ώρα. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 1 ημέρα στους 4 Ο C με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού κατά του MAP2 (1:500· Millipore, Billerica, ΜΑ, ΗΠΑ) και πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού κατά του IBA1 (1:500· Wako, Richmond, VA, ΗΠΑ) , πριν ξεπλύνετε τρεις φορές σε PBS. Το συνδεδεμένο πρωτογενές αντίσωμα οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας AlexaFluor 488 κατσίκας αντι-ποντικού ή AlexFluoro 568 κατσίκας κατά κουνελιού δευτερογενές αντίσωμα (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας μια κάμερα DS-Qi2 (Nikon, Τόκιο, Ιαπωνία) συνδεδεμένη σε ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο NIKON ECLIPSE Ti2 (Nikon, Τόκιο, Ιαπωνία) από τυφλούς παρατηρητές. Η πυκνότητα εικονοστοιχείων του MAP2-ir ή του IBA1-ir αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό NIS Elements AR 5.11 (Nikon).
4.5. Χειρουργική επέμβαση
Οι αρουραίοι στεγάστηκαν σε κύκλο σκότους 12 ωρών (7 μ.μ. έως 7 π.μ.) και 12 ωρών φωτός (7 π.μ. έως 7 μ.μ.). Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν και τοποθετήθηκαν σε στερεοταξικό πλαίσιο. Η κολλαγενάση τύπου VII (0.5 U/uL × 1.0 uL, C{{10}}, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) εγχύθηκε στερεοτακτικά στο δεξί ραβδωτό σώμα (συντεταγμένες: 0.0 χιλ. ράμφος και 3.0 χιλ. πλάγια προς το βρεγματικό σώμα, 5,5 χλστ. κάτω από το κρανίο) σε 0,4 uL/λεπτό για 5 λεπτά την ημέρα 0. Στη συνέχεια, 2FL (400 mg/kg/ημέρα × 5 ημέρες) ή φορέας χορηγήθηκαν ενδοπεριτοναϊκά από την 1η έως την ημέρα 5. Τα ζώα θυσιάστηκαν την ημέρα 5 για ιστολογική και PCR ανάλυση.
4.6. Κινητική μέτρηση συμπεριφοράς
Η κίνηση μετρήθηκε την 5η ημέρα χρησιμοποιώντας ένα μόνιτορ υπέρυθρης δραστηριότητας (Accuscan, Columbus, OH, USA). Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν μεμονωμένα σε θάλαμο συμπεριφοράς 3D υπέρυθρης ακτινοβολίας (42 × 42 × 21 cm) για 120 λεπτά. Μετρήθηκαν έξι μεταβλητές: (i) η κατακόρυφη δραστηριότητα (VACTV, ο συνολικός αριθμός των διακοπών δέσμης που σημειώθηκαν στους κατακόρυφους αισθητήρες), (ii) η συνολική απόσταση που διανύθηκε (TOTDIST, η απόσταση, σε εκατοστά, που διανύθηκαν από τα ζώα), (iii) ) χρόνος κάθετης κίνησης (VTIME), (iv) οριζόντια δραστηριότητα (HACTV, ο συνολικός αριθμός διακοπών δέσμης που σημειώθηκαν στους οριζόντιους αισθητήρες), (v) χρόνος οριζόντιας κίνησης (MOV- TIME) και (vi) αριθμός κάθετων κινήσεων (VMOVNO).
4.7. Ανοσοϊστοχημεία
Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν και εγχύθηκαν διακαρδιακά με αλατούχο διάλυμα ακολουθούμενο από 4 τοις εκατό PFA σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (PB; 0.1 mol/L, ρΗ 7.2). μετα-μονιμοποιήθηκαν για 18–20 ώρες και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε 20 τοις εκατό σακχαρόζη σε 0,1 M PB για τουλάχιστον 16 ώρες. Σειριακές τομές εγκεφάλου
κόπηκαν σε πάχος 3{4}} um χρησιμοποιώντας έναν κρυοστάτη (μοντέλο: CM 3050 S; Leica, Χαϊδελβέργη, Γερμανία). Οι τομές εγκεφάλου ξεπλύθηκαν σε PB και αποκλείστηκαν με 4 τοις εκατό αλβουμίνη ορού βοοειδών (Sigma-Aldrich) με 0,3 τοις εκατό Triton X-100 (Sigma-Aldrich) σε 0,1 mM PB. Οι φέτες του εγκεφάλου στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτογενή αντισώματα κατά του CD4 (polyclonal 1:100, protein tech, Rosemont, USA) ή IBA1 (monoclonal 1:100, Wako, Richmond, VA, USA) στους 4 ° C όλη τη νύχτα. Οι τομές ξεπλύθηκαν σε 0,1 mM ΡΒ και επωάστηκαν σε διάλυμα δευτερογενούς αντισώματος Alexa Fluor 488 (1:500· Molecular Probes, Eugene, OR, USA). Οι τομές ελέγχου επωάστηκαν χωρίς το πρωτεύον αντίσωμα. Τα τμήματα του εγκεφάλου τοποθετήθηκαν σε διαφάνειες και γλιστρήθηκαν. Η συνεστιακή ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Nikon D-ECLIPSE 80i (Nikon Instruments, Inc., Τόκιο, Ιαπωνία) και λογισμικό EZ-C1 3.90 (Nikon, Tokyo, Japan). Η οπτική πυκνότητα της ανοσοαντιδραστικότητας IBA1 ή CD8 προσδιορίστηκε ποσοτικά σε δύο διαδοχικές τομές εγκεφάλου με οπτικοποιημένη πρόσθια κοίτη σε κάθε ζώο. Λήφθηκαν δύο μικροφωτογραφίες κατά μήκος της περιοχής που υπέστη βλάβη ανά εγκεφαλική τομή. Η οπτική πυκνότητα IBA1 ή CD4 αναλύθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό NIS Elements AR 3.2 (Nikon) και υπολογίστηκε ο μέσος όρος σε κάθε εγκέφαλο για στατιστική ανάλυση. Όλες οι ανοσοϊστοχημικές μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν από τυφλούς παρατηρητές.
νευροπροστατευτικές επιδράσεις του cistanche: νόσος αντιπάρκινσον
4.8. Ποσοτική Αντίστροφη Μεταγραφή PCR (RT-PCR)
Συλλέχθηκαν ραβδωτικοί ιστοί από τα αλλοιωμένα και μη ημισφαίρια. Ολικά RNA απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο TRIzol (ThermoFisher, #15596-018, Waltham, MA, ΗΠΑ) και συντέθηκαν cDNA από 1 ug ολικού RNA με τη χρήση ενός κιτ σύνθεσης cDNA RevertAid H Minus First-Strand cDNA (Thermo Scientic , #K1631, Waltham, MA, ΗΠΑ). Τα επίπεδα cDNA για τα CD86, CD206, TGF, PERK, IRE1, CHOP, Sigmar1, BIP, ATF6, κασπάση3, ακτίνη και GAPDH προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας συγκεκριμένα σετ εκκινητών-ανιχνευτών βιβλιοθήκης καθολικού ανιχνευτή ή εκκινητές ειδικούς για γονίδιο (T 2). Τα δείγματα αναμίχθηκαν με TaqMan Fast Advanced Master Mix (Life Technologies, #4444557, Carlsbad, CA, USA) ή SYBR (Luminaris Color HiGreen Low ROX qPCR Master Mix; ThermoScientic, Waltham, MA, USA). Πραγματοποιήθηκε ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qRT-PCR) χρησιμοποιώντας το σύστημα QuantStudio™ 3 Real-Time PCR (ThermoScientic, Waltham, MA, ΗΠΑ). Η έκφραση των γονιδίων-στόχων κανονικοποιήθηκε σε σχέση με τα ενδογενή γονίδια αναφοράς (μέσες τιμές βήτα-ακτίνης και GAPDH) χρησιμοποιώντας έναν τροποποιημένο αλγόριθμο δέλτα-δέλτα-Ct. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν.
4.9. Στατιστική
Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση τιμή 士 SEM. Για στατιστικές συγκρίσεις χρησιμοποιήθηκε ένα μη ζευγαρωμένο t-test ή μια μονόδρομη ή αμφίδρομη ANOVA, με επίπεδο σημαντικότητας p < 0.05.="" σε="" περίπτωση="" πολλαπλών="" συγκρίσεων,="" διεξήχθη="" ένα="" post="" hoc="" τεστ="">
Συνεισφορές συγγραφέα: T.-WH, συγγραφή χειρογράφων, χειρουργική επέμβαση ζώων και συλλογή ή/και συναρμολόγηση δεδομένων. K.-JW, χειρουργική επέμβαση ζώων και συλλογή ή/και συγκέντρωση δεδομένων. Y.-SW, PCR, συλλογή και/ή συγκέντρωση δεδομένων. E.-KB, κυτταροκαλλιέργεια, ανοσοκυτταροχημεία και ανάλυση δεδομένων. YS και JY, 2′ -FL σύνθεση, ανάλυση και ερμηνεία δεδομένων και παροχή υλικού μελέτης. S.-JY, σύλληψη και σχεδιασμός, συγγραφή χειρογράφων, διοικητική υποστήριξη και τελική έγκριση του χειρογράφου. Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.
Χρηματοδότηση: Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από τα Εθνικά Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας της Ταϊβάν (NP-109-PP-02) και το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας της Ταϊβάν (MOST 106-2320-B{{3 }}MY2; ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΟ 108-2320-Β-400-023).
Δήλωση θεσμικής επιτροπής αναθεώρησης: Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες της Διακήρυξης του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Έρευνας Ζώων της Εθνικής Υγείας
Ερευνητικά Ινστιτούτα της Ταϊβάν (NHRI-IACUC106101-A).
Δήλωση συγκατάθεσης μετά από ενημέρωση: Δεν ισχύει.
Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων: Τα δεδομένα που υποστηρίζουν τα ευρήματα αυτής της μελέτης είναι διαθέσιμα από τον αντίστοιχο συγγραφέα κατόπιν εύλογου αιτήματος.
Ευχαριστίες: Οι συγγραφείς ευχαριστούν τον Yun Wang για τα επικριτικά του σχόλια. Σύγκρουση συμφερόντων: Η YS και η JY είναι υπάλληλοι της Advanced Protein Technologies.
όφελος cistanche: νευροπροστασία
βιβλιογραφικές αναφορές
1. Goulart, AC; Bensenor, IM; Fernandes, TG; Alencar, AP; Fedeli, LM; Lotufo, PA Θανατηφόρο περιστατικό εγκεφαλικού επεισοδίου πρώιμου και ενός έτους στο Σάο Πάολο της Βραζιλίας: Εφαρμογή των Βημάτων εγκεφαλικού επεισοδίου του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας. J. Stroke Cerebrovasc. Dis. 2012, 21, 832–838. [CrossRef]
2. Kojic, B.; Burina, Α.; Hodzic, R.; Pasic, Ζ.; Sinanovic, O. Οι παράγοντες κινδύνου επηρεάζουν τη μακροπρόθεσμη επιβίωση μετά από αιμορραγικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Med. Αψίδα. 2009, 63, 203–206.
3. Feigin, VL; Lawes, CM; Bennett, DA; Barker-Collo, SL; Parag, V. Παγκόσμια επίπτωση εγκεφαλικού επεισοδίου και πρώιμη θανατηφόρα περιστατικά που αναφέρθηκαν σε 56 πληθυσμιακές μελέτες: Μια συστηματική ανασκόπηση. ΝυστέριNeurol. 2009, 8, 355–369. [CrossRef]
4. De Miguel-Yanes, JM; Lopez-de-Andres, Α.; Jimenez-Garcia, R.; Hernandez-Barrera, V.; de Miguel-Diez, J.; Mendez-Bailon, Μ.; Perez-Farinos, N.; Munoz-Rivas, Ν.; Carabantes-Alarcon, D.; Lopez-Herranz, M. Επίπτωση και αποτελέσματα αιμορραγικού εγκεφαλικού επεισοδίου
μεταξύ ενηλίκων στην Ισπανία (2016–2018) ανάλογα με το φύλο: Μια αναδρομική μελέτη, κοόρτης, παρατήρησης, αντιστοιχισμένης βαθμολογίας τάσης.
J. Clin. Med. 2021, 10, 3753. [CrossRef]
5. Marrugat, J.; Arboix, Α.; Garcia-Eroles, L.; Salas, Τ.; Vila, J.; Castell, C.; Tresserras, R.; Elosua, R. Η εκτιμώμενη επίπτωση και το ποσοστό θανάτου από ισχαιμική και αιμορραγική εγκεφαλοαγγειακή νόσο το 2002 στην Καταλονία. Εσπ. Cardiol. 2007, 60, 573–580. [CrossRef] [PubMed]
6. Arboix, Α.; Garcia-Eroles, L.; Massons, J.; Oliveres, Μ.; Targa, C. Αιμορραγικό λανθάνον εγκεφαλικό επεισόδιο. Εγκεφαλοαγγειακό. Dis. 2000, 10, 229-234. [CrossRef]
7. Keep, RF; Hua, Υ.; Xi, G. Ενδοεγκεφαλική αιμορραγία: Μηχανισμοί τραυματισμού και θεραπευτικοί στόχοι. ΝυστέριNeurol. 2012, 11, 720–731. [CrossRef]
8. Sheth, KN; Rosand, J. Στοχεύοντας το ανοσοποιητικό σύστημα στην ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. ΤΖΑΜΑNeurol. 2014, 71, 1083–1084. [CrossRef] [PubMed]
9. Chu, Χ.; Wu, Χ.; Feng, Η.; Zhao, Η.; Tan, Υ.; Wang, L.; Ran, Η.; Yi, L.; Peng, Υ.; Tong, Η.; et al. Η σύζευξη μεταξύ της ιντερλευκίνης-1R1 και του συμπλέγματος νεκροσώματος περιλαμβάνει την επαγόμενη από την αιμίνηνευρωνικόνεκρόπτωση μετά από ενδοκρανιακή αιμορραγία. Stroke 2018, 49, 2473–2482. [CrossRef]
10. Gram, Μ.; Sveinsdottir, S.; Ruscher, Κ.; Hansson, SR; Cinthio, Μ.; Akerstrom, Β.; Ley, D. Η αιμοσφαιρίνη προκαλεί φλεγμονή μετά από πρόωρη ενδοκοιλιακή αιμορραγία με σχηματισμό μεθαιμοσφαιρίνης. J.Νευροφλεγμονή. 2013, 10, 100. [CrossRef]
11. Tschoe, C.; Bushnell, CD; Duncan, PW; Alexander-Miller, MA; Wolfe, SQΝευροφλεγμονήμετά από ενδοεγκεφαλική αιμορραγία και πιθανούς θεραπευτικούς στόχους. J. Stroke 2020, 22, 29–46. [CrossRef]
12. Wang, J. Προκλινική και κλινική έρευνα για τη φλεγμονή μετά από ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. Επαιτώ.Neurobiol. 2010, 92, 463-477. [CrossRef]
13. Yu, S.-J.; Wu, K.-J.; Wang, Y.-S.; Song, J.-S.; Wu, C.-H.; Jan, J.-J.; Bae, Ε.; Chen, Η.; Shia, Κ.-Σ.; Wang, Y. Προστατευτική επίδραση του ανταγωνιστή CXCR4 CX807 σε μοντέλο αρουραίου αιμορραγικού εγκεφαλικού επεισοδίου. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2020, 21, 7085. [CrossRef]
14. Mosca, F.; Gianni, ML Ανθρώπινο γάλα: Σύνθεση και οφέλη για την υγεία. Παιδιατρ. Med. Chir. 2017, 39, 155. [CrossRef]
15. Donovan, SM; Comstock, SS Οι ολιγοσακχαρίτες ανθρώπινου γάλακτος επηρεάζουν τη νεογνική βλεννογόνο και τη συστηματική ανοσία. Αννα. Nutr. Metab. 2016, 69, S42–S51. [CrossRef]
16. Oliveros, E.; Ramirez, Μ.; Vazquez, Ε.; Barranco, Α.; Grant, Α.; Delgado-Garcia, JM; Buck, R.; Rueda, R.; Martin, MJ Το από του στόματος συμπλήρωμα 2 -φουκοσυλλακτόζης κατά τη διάρκεια της γαλουχίας βελτιώνει τη μνήμη και τη μάθηση σε αρουραίους.' J. Nutr. Biochem. 2016, 31, 20–27. [CrossRef]
17. Vazquez, Ε.; Barranco, Α.; Ramirez, Μ.; Grant, Α.; Delgado-Garcia, JM; Martinez-Lara, Ε.; Blanco, S.; Martin, MJ; Castanys, Ε.; Buck, R.; et al. Επιδράσεις ενός ολιγοσακχαρίτη ανθρώπινου γάλακτος, 2'-φουκοσυλλακτόζης, στη μακροπρόθεσμη ενίσχυση του ιππόκαμπου και στις ικανότητες μάθησης σε τρωκτικά. J. Nutr. Biochem. 2015, 26, 455–465. [CrossRef] [PubMed]
18. He, Y.; Liu, S.; Kling, DE; Leone, S.; Lawlor, NT; Huang, Υ.; Feinberg, SB; Hill, DR; Newburg, DS Ο ολιγοσακχαρίτης 2'-φουκοσυλλακτόζη του ανθρώπινου γάλακτος ρυθμίζει την έκφραση CD14 στα ανθρώπινα εντεροκύτταρα, εξασθενώντας έτσι τη φλεγμονή που προκαλείται από το LPS. Gut 2016, 65, 33–46. [CrossRef] [PubMed]
19. Wu, K.-J.; Chen, Υ.-Η.; Bae, Ε.-Κ.; Τραγούδι, Υ.; Min, W.; Yu, S.-J. Ο ολιγοσακχαρίτης 2' -φουκοσυλλακτόζη ανθρώπινου γάλακτος μειώνεινευροεκφυλισμόςσε εγκεφαλικό εγκεφαλικό. Μετάφρ. Stroke Res. 2020, 11, 1001–1011. [CrossRef] [PubMed]
20. Wang, Τ.; Lu, Η.; Li, D.; Η μεσολαβούμενη από Huang, W. TGF-βήτα1-ενεργοποίηση του SERPINE1 εμπλέκεται σε αποπτωτική και φλεγμονώδη βλάβη που προκαλείται από αιμίνη στα κύτταρα HT22.Neuropsychiatr. Dis. Θεραπεύω. 2021, 17, 423–433. [CrossRef]
21. Dang, TN; Επίσκοπος, GM; Dringen, R.; Robinson, SR Ο μεταβολισμός και η τοξικότητα της αιμίνης στα αστροκύτταρα. Glia 2011, 59, 1540–1550. [CrossRef]
22. Robinson, SR; Dang, TN; Dringen, R.; Bishop, GM Τοξικότητα αιμίνης: Μια πηγή εγκεφαλικής βλάβης που μπορεί να προληφθεί μετά από αιμορραγικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Redox Rep. 2009, 14, 228–235. [CrossRef]
23. Gutterridge, JM; Smith, A. Αντιοξειδωτική προστασία από αιμοπηξίνη της διεγερμένης από αιμό υπεροξείδωσης λιπιδίων. Biochem. J. 1988, 256, 861–865. [CrossRef]
24. Dai, J.; Wu, Ρ.; Xu, S.; Li, Υ.; Zhu, Υ.; Wang, L.; Wang, C.; Zhou, Ρ.; Shi, H. Αλλαγές στην υπερδομή των μιτοχονδρίων σε κύτταρα SH-SY5Y κατά την απόπτωση που προκαλείται από την αιμίνη.Neuroreport2017, 28, 551–554. [CrossRef]
25. Lin, S.; Γιν, Q.; Zhong, Q.; Lv, F.-L.; Zhou, Υ.; Li, J.-Q.; Wang, J.-Z.; Su, Β.-Υ.; Yang, Q.-W. Η αίμη ενεργοποιεί φλεγμονώδη βλάβη με τη μεσολάβηση TLR μέσω της οδού σηματοδότησης MyD88/TRIF στην ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. J. Neuroinflamm. 2012, 9, 46. [CrossRef]
26. Wang, Y.-C.; Zhou, Υ.; Fang, Η.; Lin, S.; Wang, P.-F.; Xiong, R.-P.; Chen, J.; Xiong, Χ.-Υ.; Lv, F.-L.; Liang, Q.-L.; et al. Το ετεροδιμερές 2/4 του υποδοχέα τύπου Toll προκαλεί φλεγμονώδη βλάβη στην ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. Αννα. Neurol. 2014, 75, 876–889. [CrossRef] [PubMed]
27. Kuramatsu, JB; Huttner, HB; Schwab, S. Προόδους στη διαχείριση της ενδοεγκεφαλικής αιμορραγίας. J. Neural. Μεταμ. 2013, 120, S35–S41. [CrossRef]
28. Suzuki, S.; Kelley, RE; Dandapani, BK; Reyes-Iglesias, Υ.; Dietrich, WD; Duncan, RC Οξεία απόκριση λευκοκυττάρων και θερμοκρασίας σε υπερτασική ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. Stroke 1995, 26, 1020–1023. [CrossRef] [PubMed]
29. Wang, J.; Dore, S. Φλεγμονή μετά από ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. J. Cereb. Blood Flow Metab. 2007, 27, 894–908. [CrossRef]
30. Stevens, SL; Bao, J.; Hollis, J.; Lessov, NS; Clark, WM; Stenzel-Poore, MP Η χρήση της κυτταρομετρίας ροής για την αξιολόγηση των χρονικών αλλαγών σε φλεγμονώδη κύτταρα μετά από εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία σε ποντικούς. Brain Res. 2002, 932, 110–119. [CrossRef]
31. Yu, ZT; Nanthakumar, NN; Newburg, DS Ο ολιγοσακχαρίτης 2' -φουκοσυλλακτόζη του ανθρώπινου γάλακτος σβήνει τη φλεγμονή που προκαλείται από το καμπυλοβακτηρίδιο νήστιδας στα ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα HEp-2 και HT-29 και στον εντερικό βλεννογόνο του ποντικού. J. Nutr. 2016, 146, 1980–1990. [CrossRef] [PubMed]
32. Good, M.; Sodhi, CP; Yamaguchi, Υ.; Jia, Η.; Lu, Ρ.; Fulton, WB; Martin, LY; Prindle, Τ.; Nino, DF; Zhou, Q.; et al. Ο ολιγοσακχαρίτης 2'-φουκοσυλλακτόζη του ανθρώπινου γάλακτος εξασθενεί τη σοβαρότητα της πειραματικής νεκρωτικής εντεροκολίτιδας ενισχύοντας τη μεσεντέρια αιμάτωση στο νεογνικό έντερο. Br. J. Nutr. 2016, 116, 1175–1187. [CrossRef] [PubMed]
33. Thangameeran, SIM; Tsai, S.-T.; Hung, Η.-Υ.; Hu, W.-F.; Pang, C.-Y.; Chen, S.-Y.; Liew, H.-K. Ένας ρόλος για το στρες του ενδοπλασματικού δικτύου στην ενδοεγκεφαλική αιμορραγία. Cells 2020, 9, 750. [CrossRef] [PubMed]
34. Huang, Q.; Lan, Τ.; Lu, J.; Zhang, Η.; Zhang, D.; Lou, Τ.; Xu, Ρ.; Ren, J.; Zhao, D.; Sun, L.; et al. Το DiDang tang αναστέλλει την απόπτωση που προκαλείται από το στρες του ενδοπλασματικού δικτύου που προκαλείται από στέρηση οξυγόνου-γλυκόζης και ενδοεγκεφαλική αιμορραγία μέσω αποκλεισμού των οδών GRP78-IRE1/PERK. Εμπρός. Pharmacol. 2018, 9, 1423. [CrossRef]
35. Zhang, Ζ.; Cho, S.; Rehni, AK; Quero, HN; Dave, KR; Zhao, W. Αυτοματοποιημένη αξιολόγηση του όγκου αιματώματος τρωκτικών που υποβλήθηκαν σε πειραματικό ενδοεγκεφαλικό αιμορραγικό εγκεφαλικό επεισόδιο με την προσέγγιση κατάτμησης Bayes. Μετάφρ. Stroke Res. 2020, 11, 789–798. [CrossRef]
36. Bode, L. Ολιγοσακχαρίτες ανθρώπινου γάλακτος: Πρεβιοτικά και όχι μόνο. Nutr. Αναθ. 2009, 67, S183–S191. [CrossRef]
37. Yu, S.-J.; Wu, K.-J.; Bae, Ε.; Wang, Y.-S.; Chiang, C.-W.; Kuo, L.-W.; Harvey, ΒΚ; Greig, NH; Wang, Y. Η μετα-θεραπεία με θέση μειώνει το στρες του ενδοπλασματικού δικτύου και τον νευροεκφυλισμό στον εγκεφαλικό εγκεφαλικό επεισόδιο. iScience 2020, 23, 100866. [CrossRef]