Μέρος 2: Η εχινακοσίδη αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμινικού άλατος καταστέλλοντας το εξαρτώμενο από τάση Ca2 συν την είσοδο και την κινάση πρωτεΐνης C σε εγκεφαλοφλοιώδη νευρικά τερματικά

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 και Su Jane Wang 3,*

Κάντε κλικ εδώ πίσω στο Μέρος 1

3.2 Θεραπευτικές επιπτώσεις

Η διεγερτική τοξικότητα, μια παθολογική διαδικασία που προκαλείται από υπερβολική απελευθέρωση γλουταμικού και ενεργοποίηση υποδοχέα γλουταμικού, είναι η κύρια αιτία νευρωνικού θανάτου σε οξείες και χρόνιες εγκεφαλικές διαταραχές όπως το εγκεφαλικό επεισόδιο, η τραυματική εγκεφαλική βλάβη, οι νόσοι του Πάρκινσον και του Αλτσχάιμερ [13,41] και θεραπευτικές στρατηγικές που περιλαμβάνει αναστολή απελευθέρωσης γλουταμικού μπορεί να είναι πολλά υποσχόμενες νευροπροστατευτικές στρατηγικές για τη θεραπεία τέτοιων ασθενειών. Η εχινακοσίδη έχει επιβεβαιωθεί ότι διεισδύει στον αιματοεγκεφαλικό φραγμό (BBB) ​​και παρουσιάζει νευροπροστατευτικά αποτελέσματα σε διάφορα in vivo μοντέλα νευροτοξικότητας [8,10-12,42]. Αν και ο μηχανισμός αυτών των νευροπροστατευτικών επιδράσεων δεν είναι πλήρως κατανοητός, έχουν αναφερθεί αρκετοί πιθανοί μηχανισμοί, όπως η αναστολή της φλεγμονώδους απόκρισης, η σταθεροποίηση της μιτοχονδριακής λειτουργίας, η αντιοξείδωση, η σάρωση ελεύθερων ριζών και η μίμηση της νευροτροφικής λειτουργίας [5,9,12,42]. Στην τρέχουσα μελέτη, η ικανότητα τουεχινακοσίδηη μείωση της απελευθέρωσης γλουταμικού από τα νευρικά άκρα μπορεί επίσης να εξηγήσει εν μέρει τον νευροπροστατευτικό μηχανισμό του. Ωστόσο, εάν αυτό το αποτέλεσμα συμβάλλει στην προφανή θεραπευτική δυνατότητα τουεχινακοσίδησε εγκεφαλικές διαταραχές που σχετίζονται με διεγερτοτοξικότητα του γλουταμικού άλατος δικαιολογεί περαιτέρω έρευνα.

Νευροπροστατευτικές επιδράσεις τουcistancαυτός εχινακοσίδη

4.Υλικά και μέθοδοι

4.1. Χημικά

Fura-2-ακετοξυμεθυλεστέρας (Fura-2-AM) και ιωδιούχο 3',3',3'-διπροπυλθειαδικαρβοκυανίνη [DiSC3(5)] αγοράστηκαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). ο-κωνοτοξίνη MVIIC, ροττερίνη, 2-[1-(3-διμεθυλαμινοπροπυλ)ινδολ-3-υλ]-3-(ινδολ-3-υλ) μαλεϊμίδιο ( GF109203X), 5,6,7,13-τετραϋδρο- 13-μεθυλ-5-οξο-12Η-ινδολο[2,3-a]πυρρολο[3, {27}}c]καρβαζόλη-12-προπανιτρίλιο (Go6976) και N-[2-(ρ-βρωμοκινναμυλαμινο)αιθυλ]-5-ισοκινολινοσουλφοναμίδιο (H89) αγοράστηκαν από την Tocris Bioscience (Bristol, UK ).Εχινακοσίδη, δαντρολένιο, DL-θρεο-βήτα-βενζυλ-οξυασπαρτικό (DL-TBOA), 7-χλωρο-5-(2-χλωροφαινυλ)-1,5-διυδρο{ {10}},1-βενζοθειαζεπίνη-2(3Η)-όνη (CGP37157), 2-({{17}αμινο{-3- μεθοξυφαινυλ)-4Η -1-βενζοπυράνιο-4-one) (PD98059), αιθυλενογλυκόλη δις(-αμινοαιθυλαιθέρας)-N,N,N/,N/-τετραοξικό οξύ (EGTA) και όλα τα άλλα αντιδραστήρια αγοράστηκαν από τη Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, ΗΠΑ).

4.2. Των ζώων

Χρησιμοποιήθηκαν αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley ηλικίας δύο μηνών. Τα ζώα στεγάστηκαν υπό τυποποιημένες περιβαλλοντικές συνθήκες (22 ± 1 oC, σχετική υγρασία 50 τοις εκατό, κύκλος φωτός/σκότους 12 ώρες) και επέτρεψαν απεριόριστη πρόσβαση σε τροφή και νερό. Τα ζώα θανατώθηκαν με αποκεφαλισμό και ο εγκεφαλικός φλοιός αφαιρέθηκε γρήγορα στους 4 oC. Οι πειραματικές διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Αξιοποίησης των Ζώων Fu Jen (A10259), σύμφωνα με τον Οδηγό Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Φροντίδα και τη Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου. Καταβλήθηκαν όλες οι προσπάθειες για να ελαχιστοποιηθεί η ταλαιπωρία των ζώων και να χρησιμοποιηθεί ένας ελάχιστος αριθμός ζώων που είναι απαραίτητος για την παραγωγή αξιόπιστων αποτελεσμάτων.

4.3. Συναπτοσωμικά Παρασκευάσματα

Τα συναπτοσώματα καθαρίστηκαν από τον εγκεφαλικό φλοιό των αρουραίων σε ασυνεχείς διαβαθμίσεις Percoll όπως περιγράφηκε προηγουμένως [43,44]. Εν συντομία, ο ιστός ομογενοποιήθηκε σε μέσο που περιείχε 0.32 Μ σακχαρόζη (pH 7,4), το ομογενοποίημα φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτό στα 3000× g (5{{25} }00 rpm σε ρότορα JA 25,5, Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) και 4 oC και το υπερκείμενο φυγοκεντρήθηκε ξανά για 12 λεπτά στα 14.500 × g (11, 000 σ.α.λ. σε ρότορα JA 25,5). Το ίζημα επαναιωρήθηκε απαλά σε 0,32 Μ σακχαρόζη (ρΗ 7,4) και ένα κλάσμα αυτού του συναπτοσωμικού εναιωρήματος (2 mL) τοποθετήθηκε σε ασυνεχή βαθμίδωση 3 mL Percoll που περιείχε 0,32 Μ σακχαρόζη, 1 mM EDTA, 0,25 mL DL, και 0,25 mL 3 τοις εκατό , 10 τοις εκατό και 23 τοις εκατό Percoll (pH 7,4). Μετά από φυγοκέντρηση στα 32.500 × g (16.500 rpm σε ρότορα JA 20,5) για 7 λεπτά στους 4 oC, τα συναπτοσώματα ανακτήθηκαν από τις ζώνες Percoll 10 τοις εκατό και 23 τοις εκατό και αραιώθηκαν σε τελικό όγκο 30 ml. Ρυθμιστικό μέσο HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2﹒ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM γλυκόζη και 10 mM HEPES (ρΗ 7,4)). Μετά από περαιτέρω φυγοκέντρηση στους 27,000× g (15.000 rpm σε JA 25,5) για 10 λεπτά, το σφαιρίδιο συναπτοσωμάτων επαναιωρήθηκε σε 3 mL ρυθμιστικού μέσου HEPES και η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία Bradford. Τέλος, 0,5 mg του εναιωρήματος συναπτοσωμάτων αραιώθηκαν σε 10 ml ρυθμιστικού μέσου HEPES και φυγοκεντρήθηκαν στα 3000 x g (5000 rpm σε ρότορα JA 20,1) για 10 λεπτά. Το υπερκείμενο απορρίφθηκε και τα σφαιρίδια που περιείχαν τα συναπτοσώματα αποθηκεύτηκαν σε πάγο και χρησιμοποιήθηκαν εντός 4-6 ωρών.

βότανο κιστανάκι

4.4. Απελευθέρωση γλουταμικού

Η απελευθέρωση γλουταμικού προσδιορίστηκε με διαδικτυακή φθοριομετρία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [45,46]. Τα συναπτοσωμικά σφαιρίδια επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό μέσο HEPES (0.5 mg/mL) και προεπωάστηκαν στους 37 oC για 10 λεπτά παρουσία 16 μΜ αλβουμίνης ορού βοοειδών για να δεσμευτούν τυχόν ελεύθερα λιπαρά οξέα που απελευθερώθηκαν από τα συναπτοσώματα κατά την προεπώαση. Ένα κλάσμα 2-mL των συναπτοσωμάτων μεταφέρθηκε σε μια αναδευόμενη κυψελίδα που περιείχε 2 mM NADP συν, 50 μονάδες γλουταμικής αφυδρογονάσης και 1,2 mM CaCl2, και ο φθορισμός του NADPH μετρήθηκε σε Perkin-{14mer }} φασματοφθορόμετρο (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, ΗΠΑ) σε μήκη κύματος διέγερσης και εκπομπής 340 και 460 nm, αντίστοιχα. Καθώς τα συναπτοσώματα δεν επιδέχονται ηλεκτρική διέγερση, ο αναστολέας διαύλων καλίου 4-αμινοπυριδίνη χρησιμοποιήθηκε για τη διέγερση της απελευθέρωσης γλουταμικού. 4-η αμινοπυριδίνη αποσταθεροποιεί το δυναμικό της μεμβράνης και πιστεύεται ότι προκαλεί επαναλαμβανόμενη αυθόρμητη εκπόλωση εξαρτώμενη από το Na και το κανάλι που προσεγγίζει στενά την in vivo αποπόλωση του συναπτικού τερματικού που οδηγεί στην ενεργοποίηση των εξαρτώμενων από την τάση καναλιών Ca2 plus και απελευθέρωση νευροδιαβιβαστή [47 ]. Τα δεδομένα ελήφθησαν σε διαστήματα 2 δευτερολέπτων. Ένα πρότυπο εξωγενούς γλουταμικού (5 nmol) προστέθηκε στο τέλος κάθε πειράματος. Η τιμή της αλλαγής φθορισμού που παρήχθη από την τυπική προσθήκη χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του απελευθερωμένου γλουταμινικού ως νανομορίων γλουταμινικού ανά χιλιοστόγραμμα συναπτοσωμικής πρωτεΐνης (nmol/mg). Οι τιμές αποδέσμευσης που αναφέρονται στο κείμενο είναι επίπεδα που επιτυγχάνονται σε σταθερή κατάσταση μετά από 5 λεπτά αποπόλωσης (nmol/mg/5 λεπτά). Τα αθροιστικά δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας υπολογιστικά φύλλα Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, ΗΠΑ) και MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ΗΠΑ).

4.5. Δυνατότητα μεμβράνης πλάσματος

Το δυναμικό της πλασματικής μεμβράνης προσδιορίστηκε με μια χρωστική ευαίσθητη στο δυναμικό της μεμβράνης, DiSC3(5) [48]. Τα συναπτοσώματα επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό μέσο HEPES και δείγματα 2 mL μεταφέρθηκαν σε αναδευόμενη κυψελίδα που περιείχε 5 μΜ DiSC3(5) στους 37 oC σε φασματοφωτόμετρο Perkin–Elmer LS{10} (PerkinElmer Science, MAG, και Analyt) , ΗΠΑ). Αφού αφέθηκε το μείγμα να εξισορροπηθεί για 3 λεπτά, ο φθορισμός προσδιορίστηκε σε μήκη κύματος διέγερσης και εκπομπής 646 και 674 nm, αντίστοιχα. Τα δεδομένα συλλέχθηκαν σε διαστήματα 2 δευτερολέπτων. Τα αθροιστικά δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ΗΠΑ) και εκφράστηκαν σε μονάδες φθορισμού.

4.6. Κυτοσολικό Ca2 συν συγκέντρωση ([Ca2 συν ]C)

Το [Ca2 συν ]C μετρήθηκε με τη φούρα δείκτη Ca2 plus-2. Τα συναπτοσώματα (0.5 mg/mL) προεπωάστηκαν σε ρυθμιστικό μέσο HEPES που περιείχε 5 uM fura-2 και 0.1 mM CaCl2, για 30 λεπτά στους 37 oC σε αναδευόμενο δοκιμαστικό σωλήνα . Μετά τη φόρτωση με φούρα{12}}, τα συναπτοσώματα φυγοκεντρήθηκαν σε μικροφυγόκεντρο για 30 δευτερόλεπτα στα 3000× g (5000 rpm). Τα συναπτοσωμικά σφαιρίδια εναιωρήθηκαν εκ νέου σε ρυθμιστικό μέσο HEPES και το συναπτοσωμικό εναιώρημα αναδεύτηκε σε θερμοστατική κυψελίδα σε φασματοφθορόμετρο Perkin-Elmer LS{17} (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). Προστέθηκε CaCl2 (1 mM) μετά από 3 λεπτά και περαιτέρω προσθήκες έγιναν μετά από επιπλέον 10 λεπτά. Τα δεδομένα φθορισμού συσσωρεύτηκαν σε μήκη κύματος διέγερσης 340 και 380 nm (μήκος κύματος εκπομπής 505 nm) σε διαστήματα 2 δευτερολέπτων. Το [Ca2 συν]C (nM) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας διαδικασίες βαθμονόμησης [49] και εξισώσεις που περιγράφηκαν προηγουμένως [50]. Τα αθροιστικά δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, ΜΑ, ΗΠΑ).

4.7. Western Blotting

Τα συναπτοσώματα ομογενοποιήθηκαν σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 10 mM, ρΗ 7,4), 1 τοις εκατό Triton Χ-100 και μίγμα αναστολέα πρωτεάσης. Τα προϊόντα λύσης διαυγάστηκαν με φυγοκέντρηση και η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Ίσες ποσότητες πρωτεϊνών διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση γέλης δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν στη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με αλατούχο διάλυμα Tris που περιείχε 5 τοις εκατό γάλα χαμηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά και επωάστηκαν με κατάλληλο πρωτογενές αντίσωμα (φωσφο-πρωτεϊνική κινάση C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) όλη τη νύχτα σε 4 oC. Μετά από τρεις πλύσεις σε αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με Tris, η μεμβράνη στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με το δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου (1:3000) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι μεμβράνες στη συνέχεια πλύθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές με αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με Tris και οπτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (Amersham, Buckinghamshire, UK). Ένα κλάσμα δειγμάτων φορτώθηκε και ανιχνεύθηκε με ένα αντίσωμα αντι-PKC για ανίχνευση PKC ως μάρτυρα φόρτωσης. Το επίπεδο έκφρασης ή φωσφορυλίωσης αξιολογήθηκε με την πυκνότητα της ζώνης, η οποία προσδιορίστηκε ποσοτικά με πυκνομετρία. Η πυκνομετρική ποσοτικοποίηση των ζωνών αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Syngene (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8. Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα ελήφθησαν από ένα μόνο συναπτοσωμικό παρασκεύασμα και δεν ήταν ανεξάρτητα το ένα από το άλλο. Για να ελεγχθεί η σημασία της επίδρασης ενός φαρμάκου έναντι του μάρτυρα, χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t Student δύο ουρών. Όταν χρειάστηκε μια πρόσθετη σύγκριση (όπως εάν μια δεύτερη θεραπεία επηρέασε τη δράση της εχινακοσίδης), χρησιμοποιήθηκε μια μονόδρομη ANOVA ακολουθούμενη από τη δοκιμή Tukey. Η ανάλυση ολοκληρώθηκε μέσω λογισμικού SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SEM. Η σημασία αξιολογήθηκε στο p < 0.05="" για="" όλες="" τις="" στατιστικές="">

κιστανάκι

5. Συμπεράσματα

Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει ότι η εχινακοσίδη αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού από τα εγκεφαλοφλοιώδη συναπτοσώματα αρουραίου μειώνοντας την εισροή Ca2 συν μέσω των καναλιών Cav2.2 και Cav2.1 και αυτή η αναστολή απελευθέρωσης πιθανότατα εξαρτάται από την καταστολή της πρωτεϊνικής κινάσης τουλάχιστον στην οδό C. μέρος. Το παρόν εύρημα είναι πολύτιμο επειδή παρέχει μια νέα εικόνα για τους μηχανισμούς δράσης της εχινακοσίδης στον εγκέφαλο.

Ευχαριστίες: Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε με επιχορήγηση του Υπουργείου Επιστήμης και Τεχνολογίας (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Συνεισφορές συγγραφέα: Οι Tzu Yu Lin και Su Jane Wang συνέλαβαν και σχεδίασαν τα πειράματα. Ο Cheng Wei Lu πραγματοποίησε τα πειράματα. Οι Cheng Wei Lu και Shu Kuei Huang ανέλυσαν τα δεδομένα. Η Su Jane Wang έγραψε την εφημερίδα.

Σύγκρουση συμφερόντων: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

εκχύλισμα βοτάνου κιστάνς

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Tu, PF; Wang, Β.; Deyama, Τ.; Zhang, ZG; Lou, ZC Ανάλυση φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων του Herba cistanchis από RP-HPLC. Acta Pharm. Αμαρτία. 1997, 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, Η.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Συνεργικές αντιοξειδωτικές επιδράσεις αλκαμιδίων, παραγώγων καφεϊκού οξέος και κλασμάτων πολυσακχαρίτη από Echinacea purpurea στην in vitro οξείδωση ανθρώπινων λιποπρωτεϊνών χαμηλής πυκνότητας. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Ντάπας, Β.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, Β.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Ανοσοτροποποίηση που προκαλείται από ένα φυτικό σιρόπι που περιέχει ένα τυποποιημένο εκχύλισμα ρίζας Echinacea: Μια πιλοτική μελέτη σε υγιή άτομα για την έκφραση γονιδίου κυτοκίνης. Phytomedicine 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Αυτός, WJ; Fang, TH; Tu, PF Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τις φαρμακολογικές δραστηριότητες της εχινακοσίδης. China J. Chin. Μητήρ. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, Μ.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Υ.; Li, ZB; Το Wang, YH Echinacoside σώζει τα νευρωνικά κύτταρα SHSY5Y από την επαγόμενη από το TNFalpha απόπτωση. Ευρώ. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro νευροπροστατευτικές δράσεις φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από διχώτωμα Callicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Το Du, GH Echinacoside Προστατεύει από 6-Μιτοχονδριακή δυσλειτουργία που προκαλείται από υδροξυντοπαμίνη και φλεγμονώδεις αποκρίσεις σε κύτταρα PC12 μέσω της μείωσης της παραγωγής ROS. Evid. Βασισμένο Συμπλήρωμα. Εναλλακτική. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, Μ.; Lu, C.; Li, W. Η παροδική έκθεση στην εχινακοσίδη είναι επαρκής για να ενεργοποιήσει τη σηματοδότηση Trk και να προστατεύσει τα νευρωνικά κύτταρα από τη ροτενόνη. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, Χ.; Tian, ​​Χ.; Tu, Ρ.; Pu, X. Νευροπροστατευτικά αποτελέσματα της εχινακοσίδης στο μοντέλο MPTP ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. Ευρώ. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, Η.; Jiang, Υ.; Tu, PF; Zhong, Μ.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Επιδράσεις της εχινακοσίδης σε ιστιοκεντρικά επίπεδα ενεργού μάζας σε αρουραίους απόφραξης μέσης εγκεφαλικής αρτηρίας. Biomed. Περιβάλλω. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Reversal by υδατικά εκχυλίσματα Cistanche tubulosa από ελλείμματα συμπεριφοράς στο μοντέλο αρουραίου που μοιάζει με τη νόσο του Alzheimer: Σχέση με την εναπόθεση αμυλοειδούς και τη λειτουργία του κεντρικού νευροδιαβιβαστή. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Νευροτροφικά και νευροδιασωτικά αποτελέσματα της εχινακοσίδης στο υποξεία μοντέλο MPTP ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Γλουταμινικό ως νευροδιαβιβαστής στον εγκέφαλο: ανασκόπηση φυσιολογίας και παθολογίας. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Όχι, YH; Kim, Η.; Kim, SY; Weinreb, RN; Το Ju, WK Coenzyme Q10 αναστέλλει την διεγερτική τοξικότητα του γλουταμικού και τη μεσολαβούμενη από οξειδωτικό στρες μιτοχονδριακή αλλοίωση σε μοντέλο γλαυκώματος ποντικού. Ερευνήστε. Ophthalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Ασβέστιο και διεγερτική νευρωνική βλάβη. Αννα. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, Α.; Tymianski, M. Glutamate receptors, neurotoxicity and neurodegeneration. Pflugers. Αψίδα. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Molecular mechanisms of glutamate-mediated receptor-mediated excitotoxic neuronal cell death. ΜοΙ. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Νευροπροστασία από ανταγωνιστές υποδοχέα γλουταμικού έναντι διεγερτικού τοξικού κυτταρικού θανάτου που προκαλείται από επιληπτικές κρίσεις στον γερασμένο εγκέφαλο. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, Κ.; Namavar, R. Νευροπροστατευτικές επιδράσεις του NMDA και των μεταβοτροπικών ανταγωνιστών του γλουταμινικού υποδοχέα της ομάδας Ι έναντι του νευροεκφυλισμού που προκαλείται από την ομοκυστεΐνη στον ιππόκαμπο αρουραίου: Μελέτη in vivo. J. ΜοΙ. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Ο ρόλος της διεγερτικής τοξικότητας στη νευροεκφυλιστική νόσο: επιπτώσεις στη θεραπεία. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Θεραπευτικές προσεγγίσεις με βάση το γλουταμικό: Κλινικές δοκιμές με ανταγωνιστές NMDA. Curr. Γνώμη. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, Μ.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordán, J.; Hernández-Guijo, JM Νευροπροστατευτική μινοκυκλίνη καταστέλλει τη γλουταμινεργική νευροδιαβίβαση και τη σηματοδότηση Ca2 plus στους νευρώνες του ιππόκαμπου. Ευρώ. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Το Memantine καταστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού μέσω της αναστολής της εξαρτώμενης από την τάση εισόδου Ca2 συν και πρωτεϊνικής κινάσης C στα τερματικά νεύρου του εγκεφαλικού φλοιού αρουραίου: Ένας μηχανισμός ανεξάρτητος από τον υποδοχέα NMDA. Neurochem. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Μη ανταγωνιστικός μεταβοτροπικός ανταγωνιστής υποδοχέα γλουταμικού 5 (Ε)-2-μεθυλ-6- στυρυλ-πυριδίνη (SIB1893) καταστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού μέσω της αναστολής της εξαρτώμενης από την τάση εισόδου Ca2 συν στα άκρα των εγκεφαλοφλοιωδών νεύρων αρουραίου. J. Pharmacol. Exp. Εκεί. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, ΡΕ; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Μια γρήγορη μέθοδος για την απομόνωση συναπτοσωμάτων σε διαβαθμίσεις Percoll. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, Α.; Li, Ν.; Doyle, RT; Haydon, απελευθέρωση γλουταμικού εξαρτώμενου από πρωτεΐνη PG SNARE από αστροκύτταρα.J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Θεραπευτικές προσεγγίσεις με βάση το γλουταμικό: Στοχεύοντας το σύστημα μεταφοράς γλουταμικού.

Curr. Γνώμη. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. The sarcoplasmic reticulum Ca2 plus channel/ryanodine receptor: Modulation by ενδογενείς τελεστές, φάρμακα και καταστάσεις ασθένειας. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Υ.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Πρωτεϊνική κινάση C δέλτα κυτταροτοξικότητα της 6-Υδροξυντοπαμίνης μέσω παρατεταμένης εξωκυτταρικής ενεργοποίησης κινάσης 1/2 ρυθμιζόμενης από σήμα σε κύτταρα PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, Μ.; Müller, HJ; Kielbassa, Κ.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, ένας νέος αναστολέας πρωτεϊνικής κινάσης. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Ασβεστιοεξαρτώμενη και ανεξάρτητη απελευθέρωση γλουταμικού από συναπτοσώματα παρακολουθούμενη με συνεχή φθοριομέτρηση. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Η σύζευξη των υποδοχέων νευροδιαβιβαστών με τα κανάλια ιόντων στον εγκέφαλο. Science 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptic inhibition of excited neurotransmitter release. Trends Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Φαρμακολογικός χαρακτηρισμός προσυναπτικών διαύλων ασβεστίου χρησιμοποιώντας δευτερεύουσες βιοχημικές μετρήσεις συναπτοσωματικής νευροέκκρισης. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Διαφορική σύζευξη διαύλων ασβεστίου τύπου N- και P/Q σε εξωκύττωση γλουταμικού στον εγκεφαλικό φλοιό αρουραίου. Neurosci. Κάτοικος της Λατβίας. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, Ε.; Sanchez-Prieto, J. Η προσυναπτική ρύθμιση της απελευθέρωσης γλουταμικού στοχεύει διαφορετικούς διαύλους ασβεστίου στα άκρα του εγκεφαλοφλοιώδους νεύρου αρουραίου. Ευρώ. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, Ρ.; Mercer, Α.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN Νευρικό τερματικό Υποδοχείς GABAA Ενεργοποιούν τη σηματοδότηση Ca2 συν / εξαρτώμενη από την καλμοδουλίνη για να αναστέλλουν την ελεγχόμενη από τάση Ca2 συν εισροή και απελευθέρωση γλουταμικού. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; Μαύρο, ED; Joyal, JL; Σάκοι, DB; Madara, JL PKC-εξαρτώμενη ρύθμιση της διαεπιθηλιακής αντίστασης: Ρόλοι της MLC και της MLC κινάσης. Είμαι. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Η ρύθμιση της έκκρισης νευροδιαβιβαστών από την πρωτεϊνική κινάση C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, ΓΔ; Pocock, JM Η φωσφορυλίωση της συναψίνης Ι και του MARCKS στα νευρικά άκρα προκαλείται από την είσοδο Ca2 plus μέσω ενός ευαίσθητου σε Aga-GI καναλιού Ca2 plus που συνδέεται με εξωκυττάρωση γλουταμικού. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Αλλοιωμένη γλουταμινεργική μετάδοση σε νευρολογικές διαταραχές: Από υψηλό εξωκυτταρικό γλουταμικό έως υπερβολική συναπτική αποτελεσματικότητα. Επαιτώ. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, Η.; Το Wang, JB Echinacoside αναστέλλει την ινιδοποίηση αμυλοειδούς του HEWL και προστατεύει από νευροτοξικότητα που προκαλείται από Α. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού στα άκρα των εγκεφαλοφλοιωδών νεύρων αρουραίου. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Η εσπεριδίνη αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού και ασκεί νευροπροστασία έναντι της διεγερτικής τοξικότητας που προκαλείται από το καϊνικό οξύ στον ιππόκαμπο των αρουραίων. Neurotoxicology 2015, 2015, 157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Το Sihra, τα TS Synaptosomes διαθέτουν μια εξωκυτταρωτική δεξαμενή γλουταμινικού. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Το Wang, SJ Dimebon, ένα αντιισταμινικό φάρμακο, αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού στα άκρα των εγκεφαλοφλοιωδών νεύρων αρουραίου. Ευρώ. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Δυναμικά επαναλαμβανόμενης δράσης σε απομονωμένα νευρικά άκρα παρουσία 4-αμινοπυριδίνης: Επιδράσεις στην απελευθέρωση Ca2 συν και γλουταμικού ελεύθερου κυτοσολίου. J. Neurochem. 1989, 53,1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, Ε. Ιονική εξάρτηση του δυναμικού μεμβράνης και αποκρίσεις συνδεδεμένες με υποδοχέα γλουταμικού σε συναπτονευροσώματα όπως μετρήθηκαν με μια χρωστική κυανίνης, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, Ε.; Η είσοδος Nicholls, DG Localized Ca2 plus επιδρά κατά προτίμηση στην αποφωσφορυλίωση, τη φωσφορυλίωση και την απελευθέρωση γλουταμικών πρωτεϊνών. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, Μ.; Tsien, RY Μια νέα γενιά δεικτών Ca2 plus με πολύ βελτιωμένες ιδιότητες φθορισμού. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]