ΜΕΡΟΣ 2 Αντιοξείδωση και κυτταροπροστασία της ακτεοσίδης και των παραγώγων της: σύγκριση και μηχανιστική χημεία

Μέρος 2 Πώς προστατεύει τα κύτταρα το αντιοξειδωτικό Cistanche Acteoside;

Κάντε κλικ εδώ για το μέρος 1

Για περισσότερες πληροφορίες επικοινωνήστε με:Joanna.jia@wecistanche.com

Το Cistanche deserticola έχει πολλά αποτελέσματα, κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

3. Συζήτηση

Η αντιοξειδωτική δράση των φυσικών φαινολικών ενώσεων είναι γνωστό ότι εμπλέκεται στη μεταφορά ηλεκτρονίων (ET) [18,19]. Έτσι, ορισμένες αναλύσεις αναγωγής μετάλλων με βάση το ET έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως για την αξιολόγηση των αντιοξειδωτικών επιπέδων φαινολικών, όπως οι προσδιορισμοί FRAP και CUPRAC. Οι οδηγίες του προσδιορισμού FRAP πρέπει να πληρούνται με pH μικρότερο από 3,6. Ένα τέτοιο όξινο περιβάλλον έχει καταστείλει επιτυχώς τον ιονισμό του Η συν από τα φαινολικά. Έτσι, η ανάλυση FRAP θεωρείται μια απλή διαδικασία ET [20,21]. Η αποτελεσματικότητα τουακτεοσίδηκαι τα παράγωγά του στον προσδιορισμό FRAP υποδηλώνουν ότι, όταν η ακτεοσίδη και τα παράγωγά της δρουν ως αντιοξειδωτικά, μπορούν να χρησιμοποιήσουν την οδό ΕΤ για να ασκήσουν την αντιοξειδωτική τους δράση.

Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε επίσης μια δοκιμασία CUPRAC σε ρυθμιστικό διάλυμα pH 7,4. Όπως φαίνεται στο Suppl. 1,ακτεοσίδηκαι τα παράγωγά του αύξησαν δοσοεξαρτώμενα τον Cu τους^{2 συν}-μειώνοντας τα ποσοστά ισχύος, υποδεικνύοντας ότι θα μπορούσαν να παραμείνουν δυναμικό ET σε φυσιολογικό pH. Ωστόσο, τα δυναμικά ET μειώθηκαν με την ακόλουθη σειρά:ακτεοσίδη> φορσυνθοσίδη Β > πολυουμοζίδη (Πίνακας 1). Αυτή η δυναμική υποδηλώνει ξεκάθαρα ότι το τμήμα απιοσυλίου στη φορσυνθοσίδη Β και το τμήμα ραμνοσυλίου στην πολυουμοζίδη μείωσαν το δυναμικό ET.

Για να ελεγχθεί η πιθανότητα εμφάνισης ET κατά τη διάρκεια των διαδικασιών δέσμευσης ριζών, εισήχθη στη μελέτη μια ελεύθερη ρίζα PTIO με επίκεντρο το οξυγόνο. Τα στοιχεία κυκλικής βολταμετρίας αποκάλυψαν ότι η PTIO・-καθαρισμός κάτω από το pH 5.0 είναι μια μεμονωμένη αντίδραση οξειδοαναγωγής ηλεκτρονίων. Η παρατήρηση ότιακτεοσίδηκαι τα παράγωγά της θα μπορούσαν να καθαρίσουν αποτελεσματικά τη ρίζα PTIO・ σε pH 4,5, υποδηλώνει την πιθανότητα ET κατά τη διάρκεια των διαδικασιών δέσμευσης ριζών. Προφανώς, αυτό το εύρημα υποστηρίζει περαιτέρω τα προαναφερθέντα αποτελέσματα από τις αναλύσεις FRAP και CUPRAC, καθώς και προηγούμενα αποτελέσματα ότι ένα ηλεκτρόνιο δωρητή (e) είναι χαρακτηριστικό των φαινολικών αντιοξειδωτικών [23].

Σε φυσιολογικό pH 7,4, ωστόσο, το δοκίμιο δέσμευσης PTIO・ δεν είναι απλώς μια οδός ET αλλά περιλαμβάνει επίσης μια οδό μεταφοράς πρωτονίων (Η συν). Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας, η PTIO・ έχει προταθεί να αποδεχθεί το H^συναπό φαινολικά για την παραγωγή της αιχμής του προϊόντος ([PTIO-H]^συν). Επειδή ο Χ^συν-η μεταφορά συνοδεύεται πάντα από ET σε βηματικούς ή σύγχρονους μηχανισμούς [24], το ρεαλιστικό (ή τελικό) προϊόν είναι ένα μόριο [PTIO-H] [22]. Η σάρωση PTIO・ σε pH 7,4 (Παράρτημα 1) σημαίνει ότιακτεοσίδηκαι τα παράγωγά του διαθέτουν επίσης δυναμικό μεταφοράς Η συν. Οι τιμές IC50 (Πίνακας 1) έδειξαν ότι το σχετικό H^συν-τα δυναμικά μεταφοράς ήταν κατά φθίνουσα σειρά τουακτεοσίδη>φορσυνηθοσίδη Β > πολυουμοζίδη. Σαφώς, τα τμήματα απιοσυλίου και ραμνοσυλίου εξασθένησαν επίσης το Η^συν- δυνατότητα μεταφοράς κατά τη διάρκεια της αντιοξειδωτικής διαδικασίας.

Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, κατά τη διάρκεια της αντιοξειδωτικής διαδικασίας των φαινολικών, το ET συνήθως συνοδεύεται από πρωτόνιο (H^συν) μεταφορά για να σχηματίσει αρκετούς αντιοξειδωτικούς μηχανισμούς [24], όπως μεταφορά ατόμου υδρογόνου (HAT) [23,25-27], διαδοχική μεταφορά ηλεκτρονίου-πρωτονίου (SEPT) [26,27], διαδοχική απώλεια πρωτονίου μονοηλεκτρονίου μεταφορά (SPLET) [26] και μεταφορά ηλεκτρονίων συζευγμένη με πρωτόνια (PCET) [24-26,28]. Για παράδειγμα, το ABTS plus • -scavenging, μια αντίδραση που κυριαρχείται από τη μεταφορά ενός ηλεκτρονίου (SET) [29], έχει επίσης αποδειχθεί ότι επηρεάζεται από τα επίπεδα H plus πρόσφατα [30]. Το ABTS plus • -scavenging είναι επομένως μια αντιοξειδωτική δοκιμασία βασισμένη σε πολλαπλές οδούς [21,31]. Το γεγονός οτιακτεοσίδηκαι τα παράγωγά του θα μπορούσαν να καθαρίσουν τις ρίζες ABTS συν ・ υποδηλώνει ότι η αντιοξειδωτική τους δράση μπορεί επίσης να μεσολαβείται μέσω πολλαπλών οδών. Αυτή η υπόθεση επιβεβαιώνεται περαιτέρω από τα στοιχεία από τον προσδιορισμό σάρωσης DPPH, μια αντίδραση που περιλαμβάνει πολλαπλές οδούς HAT, ET, SEPT και PCET [26,32]. Ωστόσο, το IC βασίζεται στην ποσοτική ανάλυση₅₀οι τιμές (Πίνακας 1) αποκάλυψαν ότι σε πτυχές ABTS που βασίζονται σε πολλαπλές διαδρομές συν --scavenging και DPPH*-scavenging,ακτεοσίδηήταν ανώτερη από την αντίστοιχη φορσυνθοσίδη Β και ραμνοσίδη πολιουμοσίδη. Έτσι, μπορεί να συναχθεί ότι τα τμήματα απιόλης και ραμνοζυλίου τελικά εμποδίζουν τα δυναμικά πολλαπλών οδών (ειδικά ET και H^συν-μεταφορά) κατά τη διαδικασία δέσμευσης ελεύθερων ριζών.

Όπως σημειώθηκε από τους συγγραφείς και άλλους [14,26], κατά τη διάρκεια της αντιοξειδωτικής διαδικασίας, μπορεί επίσης να εμφανιστεί μια αντίδραση RAF. Για να επαληθευτεί η πιθανότητα RAF, ωστόσο, τρεις φαινυλοπροπανοειδείς γλυκοσίδες μαζί με καφεϊκό οξύ μελετήθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS. Το καφεϊκό οξύ βρέθηκε να αποδίδει ένα διμερές προϊόν, ενώ τρεις φαινυλοπροπανοειδείς γλυκοσίδες δεν παρήγαγαν αιχμή του προϊόντος RAF. Αυτό το εύρημα υποδηλώνει ξεκάθαρα ότι τρεις φαινυλοπροπανοειδείς γλυκοσίδες δεν μπορούν να υποστούν την οδό RAF για να ασκήσουν την αντιοξειδωτική τους δράση. Εφόσον τρεις φαινυλοπροπανοειδείς γλυκοσίδες μπορούν να θεωρηθούν ως οι εστέρες του καφεϊκού οξέος (Εικόνα 1), μια τέτοια διαφορά μεταξύ των εστέρων του καφεϊκού οξέος και των εστέρων του καφεϊκού οξέος υποδεικνύει επίσης ότι το τεράστιο τμήμα μπορεί να εμποδίσει τη δημιουργία του RAF.

Λαμβάνονται μαζί, από μια άποψη εξάλειψης ελεύθερων ριζών,ακτεοσίδηκαι τα παράγωγά του μπορεί να υποστούν πολλαπλές οδούς για να ασκήσουν την αντιοξειδωτική τους δράση. Αυτά τα αντιοξειδωτικά μονοπάτια τουλάχιστον εμπλέκονται στη μεταφορά ET και H plus (αλλά όχι RAF). Τα ευρήματά μας υποστηρίζονται εν μέρει από τη θεωρητική μελέτη πουακτεοσίδηθα μπορούσε να ασκήσει αντιοξειδωτική δράση μέσω της οδού SPLET. Στη διαδικασία, η ακτεοσίδη μπορεί αρχικά να αποπρωτονιωθεί (H^συν-μεταφορά) για να δώσει ανιόν. Η αποπρωτονίωση πιστεύεται ότι συμβαίνει στα τμήματα κατεχόλης με ασθενή οξύτητα. Στη συνέχεια, το ανιόν δώρισε ηλεκτρόνια για να δώσει τη μορφή ρίζας φαινοξυ [33]. Ωστόσο, οι ρίζες φαινοξυ με σύζευξη pn είναι σταθερές σε κάποιο βαθμό. Φυσικά, από αυτή την άποψη, απαιτείται περαιτέρω πειραματική εργασία στο μέλλον.

Αξίζει να σημειωθεί ότι το κυτταρικό οξειδωτικό στρες μπορεί επίσης να προέρχεται από μέταλλα μετάπτωσης (ειδικά Fe^{2 συν}). Το Fe^{2 συν}Το ιόν, ωστόσο, μπορεί να μετασχηματίσει το H₂O₂μόριο σε μια πιο επιβλαβή ρίζα OH μέσω της αντίδρασης Fenton (Fe²συν H2O2 T Fe³συν συν ・OH συν OH^-). Επομένως, η εξασθένηση του Fe²τα επίπεδα συν μπορούν να αναστείλουν αποτελεσματικά τις ρίζες OH για την απελευθέρωση του κυτταρικού οξειδωτικού στρες. Στην πραγματικότητα, η χηλοποίηση του σιδήρου από φυσικά φαινολικά αντιοξειδωτικά έχει πλέον εξελιχθεί σε μια αποτελεσματική θεραπεία για ορισμένες ασθένειες του οξειδωτικού στρες [34,35].

Στην παρούσα μελέτη, η ακτεοσίδη και τα παράγωγά της προτάθηκαν ως αποτελεσματικοί Fe^{2 συν}-χηλώσεις από τις αλλαγές στη φασματοσκοπία και τα χρώματα διαλύματος (Εικόνα 2). Ωστόσο, ο ακτεοσίδης είναι κατώτερος από τους δύο γλυκοζίτες στη χηλοποίηση του Fe^{2 συν}και η φορσυνθοσίδη Β με τμήμα απιοσυλίου είναι κατώτερη από την πολυουμοζίδη με τμήμα ραμνοσυλίου. Με βάση τη σύγκριση των προτιμησιακών τους διαμορφώσεων (Εικόνα 1, δεξιά), προτείνεται ότι το τμήμα απιοσυλίου (ή ραμνοσυλίου) μπορεί να βοηθήσει τον κύριο συνδετήρα (ομάδα φαινυλοπροπανοειδών) στη χηλοποίηση του Fe.^{2 συν}. Ένα τέτοιο συνεργιστικό αποτέλεσμα αναμφίβολα ενισχύει το Fe^{2 συν}-Χηλική ικανότητα και διευρύνει τις κορυφές της υπεριώδους ακτινοβολίας. Ωστόσο, το rhamnosyl είναι πιο αποτελεσματικό από το apiosyl στον Fe του^{2 συν}- χηλική ικανότητα. Η διαφορά μπορεί να αποδοθεί στο γεγονός ότι το ραμνοσύλιο εμφανίζεται σε εξωκυκλική μορφή (δηλ. aL-ραμνοπυρανοσύλιο), ενώ το απιοζύλιο είναι σε πεντακυκλική μορφή (δηλ. pD-απιοφουρανσύλιο). Μια εξωκυκλική μορφή είναι γνωστό ότι είναι μεγαλύτερη και πιο σταθερή. Ως εκ τούτου, το εξωκυκλικό ραμνοσύλιο είναι πιο αποτελεσματικό σε σύγκριση με το πεντακυκλικό απιοζύλιο στο Fe του^{2 συν}- χηλική ικανότητα.

Για να ελέγξουμε εάν η ακτεοσίδη και τα παράγωγά της μπορούν να σαρώσουν το ROS, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία αυτοοξείδωσης πυρογαλλόλης. Όπως φαίνεται στο Suppl. 1, όλα θα μπορούσαν να καθαρίσουν αποτελεσματικά το — ριζικό, ένα τυπικό ROS που εμφανίζεται στα κύτταρα. Ωστόσο, η σχετική βιοδραστικότητα μειώθηκε στην τάξη πολυουμοζίτη > φορσυνθοσίδη Β >ακτεοσίδη. Αυτή η σειρά είναι επίσης παράλληλη με εκείνη των κυτταροπροστατευτικών επιδράσεων (Πίνακας 2). Αυτό το εύρημα υποδεικνύει ότι η γενική επίδραση του τμήματος ραμνοσυλίου ή του τμήματος απιοσυλίου είναι η ενίσχυση των επιδράσεων σάρωσης ROS ή κυτταροπροστατευτικών αποτελεσμάτων.

4. Υλικά και μέθοδοι

4.1. Χημικά και Ζώα

Η ακτεοσίδη (αριθμός CAS: 61276-17-3, 97 τοις εκατό), η φορσιθοσίδη Β (αριθμός CAS: 81525-13-5, 97 τοις εκατό) ελήφθησαν από την BioBioPha (Kunming, China, Suppl. 3). Το Poliumoside (αριθμός CAS: 94079-81-9, 97 τοις εκατό ) απομονώθηκε από την ομάδα μας από το παραδοσιακό κινέζικο βότανοCallicarpa periHT Chang (Παράρτημα 3). Το DPPH・,(±)-6-υδροξυλ-2,5,7,8-τετραμεθυλοχρωμάνιο-2-καρβοξυλικό οξύ (Trolox), 2,9-διμεθυλ{{ 9}},10-φαινανθρολίνη (νεοκουπροΐνη), 2,4,6-τριπυριδυλτριαζίνη (TPTZ) και πυρογαλόλη αγοράστηκαν από τη Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co. (Σαγκάη, Κίνα). (Το NHq'ABTS [2,2'-αζινο-δις (3-αιθυλβενζολο-θειαζολίνη-6-άλας διαμμωνίου σουλφονικού οξέος)] ελήφθη από την Amresco Chemical Co. (Solon, ΟΗ, ΗΠΑ). PTIO・Η ρίζα αγοράστηκε από την TCI Development Co., Ltd. (Σαγκάη, Κίνα). Το καφεϊκό οξύ αγοράστηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Ελέγχου Φαρμακευτικών και Βιολογικών Προϊόντων (Πεκίνο, Κίνα). Τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco (DMEM), εμβρυϊκός ορός βοοειδών (FBS) και η θρυψίνη αγοράστηκαν από την Gibco (Grand Island, Νέα Υόρκη, Η.Π.Α.).

Αρουραίοι Sprague-Dawley (SD) ηλικίας 4 εβδομάδων ελήφθησαν από το Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Κινέζικης Ιατρικής Guangzhou. Το πρωτόκολλο αυτού του πειράματος πραγματοποιήθηκε υπό την επίβλεψη της Επιτροπής Ιδρυματικής Δεοντολογίας των Ζώων στο Πανεπιστήμιο Guangzhou της Κίνας (αριθμός έγκρισης 20170306A).

4.2. Δοκιμασίες μείωσης μετάλλων (FRAP& CUPRAC)

Οι δοκιμές αναγωγής μετάλλων περιλαμβάνουν το Fe^{3 συν}- προσδιορισμός αναγωγικής ισχύος και Cu^{2 συν}- προσδιορισμός μειωτικής ισχύος. Το Fe^{3 συν}-η αναγωγική δοκιμασία καθιερώθηκε από τους Benzie and Strain και ονομάζεται επίσημα FRAP [20]. Το πειραματικό πρωτόκολλο αυτής της δοκιμασίας περιγράφηκε σε προηγούμενη αναφορά [9]. Εν συντομία, το αντιδραστήριο FRAP παρασκευάστηκε πρόσφατα με ανάμειξη 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl_3,και {{0}}.25 Μ ρυθμιστικό οξικού σε αναλογία 1:1:10 σε ρΗ 3,6. Το δείγμα δοκιμής (x=4-20 L, 0,05 mg/mL) προστέθηκε σε (20-x) 95 τοις εκατό αιθανόλης ακολουθούμενο από 80 RL αντιδραστηρίου FRAP. Μετά από 30-λεπτή επώαση σε θερμοκρασία περιβάλλοντος, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 595 nm χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (Multiskan FC, Thermo Scientific, Shanghai, China). Η σχετική αναγωγική ισχύς του δείγματος υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο:

όπου ένας_{Μέγιστη}ήταν η μέγιστη απορρόφηση του μίγματος της αντίδρασης με το δείγμα και το Α_ελάχείναι η ελάχιστη απορρόφηση στη δοκιμή. Α είναι η απορρόφηση του δείγματος.

Cu^{2 συν}-Η ελαττωτική ισχύς μπορεί επίσης να χαρακτηρίσει το αντιοξειδωτικό επίπεδο και έτσι ονομάζεται CUPRAC. Αυτή η ανάλυση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με μια προηγουμένως δημοσιευμένη μέθοδο [36]. Εν συντομία, 12 RL υδατικού διαλύματος CuSOq (10 mmol/L), 12 RL αιθανολικού διαλύματος νεοκουπροΐνης (7,5 mmol/L) και (75 — x) RL CH₃COONH₄ρυθμιστικό διάλυμα ({{0}}.1 mol/L, ρΗ 7,5) προστέθηκαν σε φρεάτια με διαφορετικούς όγκους δείγματος (0,05 mg/mL, 4-20 |^L). Η απορρόφηση στα 450 nm μετά από 30 λεπτά μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον προαναφερθέντα αναγνώστη μικροπλάκας. Η σχετική ισχύς CUPRAC υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο για FRAP. ΕΝΑ_{Μέγιστη}ήταν η μέγιστη απορρόφηση του μίγματος της αντίδρασης με το δείγμα και το Α_ελάχείναι η ελάχιστη απορρόφηση στη δοκιμή. Α είναι η απορρόφηση του δείγματος.

4.3. PTI0・-Δοκιμασία καθαρισμού

Οι δοκιμασίες σάρωσης PTIO* (σε pH 4,5 ή pH 7,4) διεξήχθησαν με βάση τη μέθοδό μας [16]. Εν συντομία, το διάλυμα του δείγματος δοκιμής (x=0-20 ^L, 1 mg/mL για pH 4,5 και {{10}},5 mg/mL για pH 7,4) προστέθηκε στο (20 — x) rL 95 τοις εκατό αιθανόλης, ακολουθούμενο από 80 RL υδατικού διαλύματος PTIO*. Το υδατικό διάλυμα ΡΤΙΟ* παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας διάλυμα φωσφορικού βουτύρου (0,1 mM, ρΗ 4,5 ή ρΗ 7,4). Το μίγμα διατηρήθηκε στους 37 βαθμούς για 2 ώρες και η απορρόφηση στη συνέχεια μετρήθηκε στα 560 nm χρησιμοποιώντας την προαναφερθείσα συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών. Το ποσοστό αναστολής PTIO* υπολογίστηκε ως εξής:

όπου ένας βαθμός είναι η απορρόφηση του μάρτυρα χωρίς το δείγμα και Α είναι η απορρόφηση του μίγματος αντίδρασης με το δείγμα.

4.4. ABTSσυν*-Καθαρισμός και DPPH*-Δοκιμασίες καθαρισμού

Το ABTS*^συν-Η δραστηριότητα σάρωσης αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο [37]. Το ABTS συν * παρήχθη με ανάμιξη 0,2 mL άλατος διαμμωνίου ABTS (7,4 mmol/L) με 0,2 mL υπερθειικού καλίου (2,6 mmol/L). Το μείγμα διατηρήθηκε στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου για 12 ώρες για να επιτραπεί η ολοκλήρωση της δημιουργίας ριζών πριν αραιωθεί με απεσταγμένο νερό (σε αναλογία περίπου 1:20) έτσι ώστε η απορρόφησή του στα 734 nm να είναι { {16}}.35 土 0.01 χρησιμοποιώντας τον προαναφερθέντα αναγνώστη μικροπλακών. Για να προσδιοριστεί η δραστηριότητα καθαρισμού, το δείγμα δοκιμής (x=4-20 RL, 0,05 mg/mL) προστέθηκε σε (20 — x) RL απεσταγμένου νερού ακολουθούμενο από 80 RL αντιδραστηρίου ABTS συν * και η απορρόφηση στα 734 nm μετρήθηκε 3 λεπτά μετά την αρχική ανάμιξη, χρησιμοποιώντας απεσταγμένο νερό ως τυφλό.

Η δραστηριότητα δέσμευσης ριζών DPPH* προσδιορίστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Εν συντομία, 75 RL διαλύματος DPPH* (0.1 rM) αναμίχθηκαν με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις του δείγματος (0.025 mg/mL, 5-25 RL) διαλυμένο σε μεθανόλη. Το μίγμα διατηρήθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 519 nm χρησιμοποιώντας την προαναφερθείσα συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών.

Τα ποσοστά ABTS συν •-δραστικότητας σάρωσης και DPPH*-δραστικότητας σάρωσης υπολογίστηκαν με βάση τον τύπο που παρουσιάζεται στην Ενότητα 4.3.

4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—MS/MS Ανάλυση PPH* Προϊόντα Αντίδρασης

Αυτή η μέθοδος βασίστηκε στην προηγούμενη μελέτη μας [25]. Το διάλυμα μεθανόλης του ακτεοσιδίου αναμίχθηκε με ένα διάλυμα ριζών DPPH* σε μεθανόλη σε μοριακή αναλογία 1:2 και το προκύπτον μίγμα επωάστηκε για 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Το μίγμα του προϊόντος στη συνέχεια διηθήθηκε μέσω ενός 0.22-φίλτρου Rm και αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα UPLC εξοπλισμένο με στήλη C18 (2.0 mm id x 100). mm, 1,6 Rm, Phenomenex, Torrance, CA, ΗΠΑ). Η κινητή φάση χρησιμοποιήθηκε για την έκλουση του συστήματος και αποτελούνταν από ένα μείγμα μεθανόλης (φάση Α) και νερού (φάση Β). Η στήλη εκλούστηκε με ρυθμό ροής 0,3 mL/min με το ακόλουθο πρόγραμμα έκλουσης βαθμίδωσης: 0-10 min, 60-100 τοις εκατό A; 10-15 min, 100 τοις εκατό Α. Ο όγκος έγχυσης του δείγματος ορίστηκε σε 1 RL για τον διαχωρισμό των διαφορετικών συστατικών. Η ανάλυση ESI-Q-TOF-MS/MS πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Triple TOF 5600συνΦασματόμετρο μάζας (AB SCIEX, Framingham, MA, Η.Π.Α.) εξοπλισμένο με πηγή ESI, η οποία λειτουργούσε σε λειτουργία αρνητικού ιονισμού. Το εύρος σάρωσης ορίστηκε σε 100-2000 Da. Το σύστημα λειτουργούσε με τις ακόλουθες παραμέτρους: τάση ψεκασμού ιόντων, —4500 V; θερμαντήρας πηγής ιόντων, 550 βαθμοί C; αέριο κουρτίνας (CUR, N2), 30 psi; αέριο νεφελοποίησης (GS1, Air), 50 psi; Tis gas (GS2, Air), 50 psi. Το δυναμικό αποσύνθεσης (DP) ορίστηκε στα -100 V, ενώ η ενέργεια σύγκρουσης (CE) ορίστηκε στα -40 V με μια κατανομή ενέργειας σύγκρουσης (CES) 20 V. Τα προϊόντα RAF

ποσοτικοποιήθηκαν με εκχύλιση του αντίστοιχου μοριακού τύπου από το χρωματογράφημα συνολικών ιόντων (Παράρτημα 2).

Το προαναφερθέν πείραμα επαναλήφθηκε χρησιμοποιώντας φορσυθοσίδη Β, πλευρά βάθρου και καφεϊκό οξύ. Το αντίστοιχοm/zΟι κορυφές εκχυλίστηκαν από τον αντίστοιχο μοριακό τύπο από το χρωματογράφημα ολικών ιόντων (Παράρτημα 2).

4.6. UV-Vis-Spectra Analysis ofFe^{2 συν}-Χηλικά προϊόντα

Το Fe^{2 συν}-προϊόντα αντίδρασης χηλίωσης ακτεοζίτη-Fe^{2 συν}αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία UV-Vis [13]. Για το πείραμα, 300 από ένα μεθανολικό διάλυμα ακτεοζίτη (0,24 mM) προστέθηκε σε 700 rL ενός υδατικού διαλύματος FeCl? 4Η2Ο (168 mM). Το διάλυμα στη συνέχεια αναμίχθηκε έντονα. Στη συνέχεια, το προκύπτον μίγμα σαρώθηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο UV-Vis μετά από μία ώρα (Unico 2600A, Shanghai, Κίνα) από 200-850 nm.

Το προαναφερθέν πείραμα επαναλήφθηκε χρησιμοποιώντας φορσυθοσίδη Β, ή πλευρά βάθρου, αντί για ακτεοσίδη.

4.7. Δοκιμασία αυτοοξείδωσης πυρογαλολόλης για ανιόν υπεροξειδίου (•O2~) Καθαρισμός

Η μέτρηση της δραστηριότητας σάρωσης ανιόντων υπεροξειδίου (・.{{0}}) βασίστηκε στη μέθοδό μας [17]. Εν συντομία, το δείγμα διαλύθηκε σε αιθανόλη σε 1 mg/mL. Το διάλυμα δείγματος (x rL) αναμίχθηκε με ρυθμιστικό Tris-HCl (980 - x rL, 0,05 Μ, ρΗ 7,4) που περιείχε EDTA (1 mM). Όταν προστέθηκαν 20 RL πυρογαλλόλης (60 mM σε 1 mM HCl), το μίγμα ανακινήθηκε αμέσως σε θερμοκρασία δωματίου. Η απορρόφηση στα 325 nm του μίγματος μετρήθηκε (Unico 2100, Σαγκάη, Κίνα) έναντι του ρυθμιστικού διαλύματος Tris-HCl ως τυφλό κάθε 30 δευτερόλεπτα για 5 λεπτά. Η ικανότητα σάρωσης υπολογίστηκε ως εξής:

4.8. Κυτταροπροστατευτική επίδραση σε bmMSC με οξειδωτικά στρες (ΜΤΤ Δοκιμασία)

Τα bmMSCs καλλιεργήθηκαν σύμφωνα με τις προηγούμενες αναφορές μας [38] με μικρές τροποποιήσεις. Εν συντομία, λήφθηκε μυελός των οστών από το μηριαίο οστό και την κνήμη ενός αρουραίου. Τα δείγματα μυελού αραιώθηκαν με DMEM (χαμηλή γλυκόζη) που περιείχε 10 τοις εκατό FBS. Τα bmMSC παρασκευάστηκαν με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης στα 900 g για 30 λεπτά σε 1,073 g/mL Percoll. Τα παρασκευασμένα κύτταρα αποσπάστηκαν με κατεργασία με 0,25 τοις εκατό θρυψίνη και πέρασαν σε φιάλες καλλιέργειας σε 1 x 104/cm². Τα bmMSCs στο πέρασμα 3 αξιολογήθηκαν για ομοιογένεια καλλιεργημένων κυττάρων χρησιμοποιώντας ανίχνευση CD44 χρησιμοποιώντας ανάλυση ΜΤΤ [39].

Η ανάλυση MTT χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της κυτταροπροστατευτικής επίδρασης της ακτεοσίδης και των παραγώγων της έναντι των bmMSCs [40]. Το μοντέλο τραυματισμού καθιερώθηκε με βάση την προηγούμενη μελέτη [41]. Το πειραματικό πρωτόκολλο απεικονίζεται εν συντομία στο Σχήμα 3.

4.9. Στατιστική ανάλυση

Κάθε πείραμα στις Ενότητες 4.2-4.4 και 4.7 εκτελέστηκε εις τριπλούν και το πείραμα προσδιορισμού ΜΤΤ πραγματοποιήθηκε εις διπλούν. Τα δεδομένα καταγράφηκαν ως μέσος όρος土SD (τυπική απόκλιση). Οι καμπύλες δόσης-απόκρισης σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας επαγγελματικό λογισμικό Origin 6.0 (OriginLab, Northampton, MA, ΗΠΑ). Η τιμή IC50 ορίστηκε ως η τελική συγκέντρωση 50 τοις εκατό αναστολής ριζών (σχετική αναγωγική ισχύς) [42]. Έγιναν στατιστικές συγκρίσεις με μονόδρομη ANOVA για τον εντοπισμό σημαντικών διαφορών χρησιμοποιώντας το SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) για Windows.p< 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

5. Συμπεράσματα

Τρεις φυσικοί φαινυλοπροπανοειδείς γλυκοσίτες, συγκεκριμένα, η ακτεοσίδη, η φορσυνθοσίδη Β και η πλευρά του βάθρου, μπορούν να εμπλέκονται σε πολλαπλές οδούς για την άσκηση αντιοξειδωτικής δράσης, συμπεριλαμβανομένης της μεταφοράς ET, H συν. και Fe^{2 συν}-χηλικοποίηση, αλλά όχι RAF. Ο ET και ο H^συν-Οι οδοί μεταφοράς μπορεί να παρεμποδίζονται από τμήμα ραμνοσυλίου ή απιοσυλικό τμήμα. ωστόσο, το Fe^{2 συν}-η οδός χηλικοποίησης μπορεί να ενισχυθεί από υπολείμματα σακχάρου (ειδικά το τμήμα ραμνοσυλίου). Η γενική επίδραση του τμήματος ραμνοσυλίου ή του τμήματος απιοσυλίου είναι η ενίσχυση της ικανότητας σάρωσης ROS που εμπλέκονται σε πολλαπλές οδούς. Έτσι, η φορσυνθοσίδη Β και η πολυουμοζίδη είναι ανώτερες από την ακτεοσίδη σε κυτταροπροστατευτικά αποτελέσματα.

Συμπληρωματικά Υλικά:Συμπληρωματικό υλικό είναι διαθέσιμο στο διαδίκτυο. 1. Καμπύλες δόσης-απόκρισης. 2. Φάσματα HPLC-MS. 3. Πιστοποιητικά ανάλυσης ακτεοσίδης, φορσυνθοσίδης Β και πολιουμοσίδης.

Ευχαριστίες:Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (81573558, 81603269), το Πρόγραμμα Επιστήμης και Τεχνολογίας του Γκουανγκντόνγκ (2017A050506043) και το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Γκουανγκντόνγκ (2 017A030312009, 2015A49103).

Συνεισφορές συγγραφέα:Οι Xian Li και Dongfeng Chen συνέλαβαν και σχεδίασαν τα πειράματα. Ο Aichi Wu παρασκεύασε πολυουμοζίτη. Οι Yulu Xie, Qian Guo και Penghui Xue πραγματοποίησαν τα αντιοξειδωτικά πειράματα. Οι Ke Li και Wei Zhao πραγματοποίησαν τα πειράματα MTT. Ο Χονγκ Σι ανέλυσε τα δεδομένα. Ο Jiasong Guo πραγματοποίησε το πείραμα στο Σχήμα 2D. Ο Xian Li έγραψε την εφημερίδα. Όλοι οι συγγραφείς διάβασαν και ενέκριναν το τελικό χειρόγραφο.

Σύγκρουση συμφερόντων:Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

ακτεοσίδησεκιστανάκι

Μια συντομογραφία

ABTS plus • 2,2'-αζινο-δις (3-αιθυλβενζο-θειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) ρίζα

bmMSCs μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα που προέρχονται από μυελό των οστών

CUPRAC χαλκός που μειώνει την αντιοξειδωτική ικανότητα

dAMP 2'-δεοξυαδενοσίνη-5'-μονοφωσφορική ρίζα

DMEM Το τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco

dGMP 2^/-μονοφωσφορική ρίζα δεοξυγουανοσίνης-5'

DPPHe 1, ρίζα 1-διφαινυλ-2-πικρυλ-υδραζίνης

Μεταφορά ηλεκτρονίων ET; FBS: Εμβρυϊκός βόειος ορός

FRAP ιόντος σιδήρου που μειώνει την αντιοξειδωτική δύναμη.

Μεταφορά ατόμου υδρογόνου HAT

ΜΤΤ 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5-διφαινυλ

Μεταφορά ηλεκτρονίων συζευγμένη με πρωτόνιο PCET

PTIOe Ρίζα 2-φαινυλ-4,4,5,5-τετραμεθυλιμιδαζολίνης-1-οξυλ3-}}

Σχηματισμός ριζικής προσαγωγής RAF

ROS αντιδραστικά είδη οξυγόνου

Πυρηνική μεταφορά σωματικών κυττάρων SCNT

SEPT διαδοχική μεταφορά ηλεκτρονίου-πρωτονίου

Διαδοχική απώλεια πρωτονίων SPLET μεταφορά ενός ηλεκτρονίου

TPTZ 2,4,6-τριπυριδυλ τριαζίνη

Trolox (±)-6-υδροξυλ-2,5,7,8-τετραμεθλυχρωμάνιο-2-καρβοξυλικό οξύ

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Kubica, Ρ.; Szopa, Α.; Ekiert, Η. Παραγωγή βερμπασκοσίδης και φαινολικών οξέων σε βιομάζα Verbena Officinalis L. (vervain) που καλλιεργείται υπό διαφορετικές συνθήκες in vitro. Nat. Κέντρο. Res. 2017, 31, 1663-1668.

2. Lee, JH; Chun, JL; Kim, KJ; Kim, EY; Kim, DH; Lee, BM; Han, KW; Park, KS; Lee, KB; Kim, MK Επίδραση ακτεοσίδης ως προστατευτικό κυττάρων για την παραγωγή ενός κλωνοποιημένου σκύλου. PLoS ONE 2016,11, e0159330.

3. Wang, HQ; Xu, YX; Yang, J.; Zhao, XY; Sun, XB; Zhang, YP; Guo, JC; Zhu, CQ Acteoside Προστατεύει τα κύτταρα SH-SY5Y ανθρώπινου νευροβλαστώματος από |3-επαγόμενο από αμυλοειδές κυτταρικό τραυματισμό. Brain Res. 2009,1283,139-147.

4. Yang, JH; Yan, Υ.; Liu, ΗΒ; Wang, JH; Hu, JP Protective Effects of Acteoside έναντι βλάβης που προκαλείται από ακτίνες Χ σε ινοβλάστες ανθρώπινου δέρματος. ΜοΙ. Med. Απ. 2015,12, 2301-2306.

5. Liu, CH; Liu, TS; Luo, CQ; Zhang, J.; Zeng, XY; Cui, L.; Xie, LJ Προσδιορισμός forsythiaside B και poliumoside σε διαφορετική προέλευση και μέρη από Callicarpa kwangtungensis. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013, 38, 3324-3326.

6. Jiang, WL; Tian, ​​JW; Fu, FH; Zhu, ΗΒ; Hou, J. Νευροπροστατευτική Αποτελεσματικότητα και Θεραπευτικό Παράθυρο Forsythoside B: Μοντέλο Ina Rat Εγκεφαλικής Ισχαιμίας και Τραυματισμού Επαναιμάτωσης. Ευρώ. J. Pharmacol. 2010, 640, 75-81.

7. Pan, Ν.; Hori, H. Antioxidant Action of Acteoside and Its Analogs on Lipid Peroxidation. Redox Rep. 1996, 2, 149-154.

8. Zheng, RL; Shi, ΥΜ; Jia, ZJ; Zhao, CY; Zhang, Q.; Tan, XR Fast Repair of DNA Radicals. Chem. Soc. Αναθ. 2010, 39, 2827-2834.

9. Li, XC; Mai, WQ; Chen, DF Chemical Study on Protective Effect Against Hydroxyl-induced DNA Damage and Antioxidant Mechanism of Myricitrin. J. Chin. Chem. Soc. 2014, 61, 383-390.

10. Shi, ΥΜ; Wang, WF; Huang, CY; Jia, ZJ; Yao, S.; Zheng, RL Γρήγορη επιδιόρθωση της βλάβης του οξειδωτικού DNA από φαινυλοπροπανοειδή γλυκοσίδες και τα ανάλογα τους. Mutagenesis 2008, 23, 19-26.

11. Jiang, Q.; Li, XC; Tian, ​​YG; Lin, QQ; Xie, Η.; Lu, WB; Chi, YG; Τα λυοφιλοποιημένα υδατικά εκχυλίσματα Chen, DF Mori Fructus και Mori Ramulus προστατεύουν τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα από βλάβες που έχουν υποστεί επεξεργασία με eOH: Βιοδοκιμασία και αντιοξειδωτικός μηχανισμός. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2017, 17, 242.

12. Wang, TT; Zeng, GC; Li, XC; Zeng, HP In Vitro Μελέτες σχετικά με την αντιοξειδωτική και προστατευτική επίδραση των 2-Υποκατεστημένης-8-υδροξυκινολίνης παραγώγων κατά του H2O2-Προκαλούμενου οξειδωτικού στρες σε BMSC. Chem. Biol. Drug Des. 2010, 75, 214-222.

13. Liu, JJ; Li, XC; Lin, J.; Li, YR; Wang, TT; Jiang, Q.; Chen, DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) Προστατεύει τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα από το οξειδωτικό στρες: Μια βιοαξιολόγηση και μηχανιστική χημεία. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2016, 16, 423.

14. Li, XC; Han, L.; Li, YR; Zhang, J.; Chen, JM; Lu, WB; Zhao, XJ; Lai, ΥΤ; Chen, DF; Wei, G. Προστατευτικό αποτέλεσμα της Σιναπίνης έναντι Βλάβης που προκαλείται από ρίζες υδροξυλίου σε μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα και πιθανούς μηχανισμούς. Chem. Pharm. Ταύρος. 2016, 64, 319-325.

15. Bertolo, Α.; Capossela, S.; Frankl, G.; Baur, Μ.; Potzel, Τ.; Stoyanov, J. Η οξειδωτική κατάσταση προβλέπει την ποιότητα σε ανθρώπινα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα. Stem Cell Res. Εκεί. 2017, 8, 3.

16. Li, XC 2-Phenyl-4,4,5,5-Tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-Oxide (PTIOe) Radical Scavenging: A New and Simple Antioxidant Δοκιμασία In Vitro. J. Agric. Food Chem. 2017, 65, 6288-6297.

17. Li, X. Βελτιωμένη μέθοδος αυτοξείδωσης πυρογαλολόλης: Μια αξιόπιστη και φθηνή δοκιμασία καθαρισμού υπεροξειδίου, κατάλληλη για όλα τα αντιοξειδωτικά. J. Agric. Food Chem. 2012, 60, 6418-6424.

18. Li, XC; Jiang, Q.; Wang, TT; Liu, JJ; Chen, DF Σύγκριση των αντιοξειδωτικών επιδράσεων της κουερσιτρίνης και της ισοκερκιτρίνης: Κατανόηση του ρόλου της ομάδας 6〃-OH. Molecules 2016, 21,1246.

19. Leopoldini, Μ.; Μαρίνο, Τ.; Russo, Ν.; Toscano, M. Antioxidant Properties of Phenolic compounds: H-atom Versus Electron Transfer Mechanism. J. Phys. Chem. A 2004,108, 4916^922.

20. Benzie, IFF; Στέλεχος, JJ Η ικανότητα μείωσης του σιδήρου του πλάσματος (FRAP) ως μέτρο της «αντιοξειδωτικής ισχύος»: Η ανάλυση FRAP. Πρωκτικός. Biochem. 1996, 239, 70-76.

21. Gulcin, I. Antioxidant Activity of Food Constituents: An Overview. Αψίδα. Toxicol. 2012, 86, 345-391.

22. Goldstein, S.; Russo, Α.; Samuni, Α. Αντιδράσεις PTIO και Carboxy-PTIO με ・NO, ・NO2 και O2. J. Biol. Chem. 2003, 278, 50949-50955.

23. Li, Χ.; Han, WJ; Mai, WQ; Wang, L. Antioxidant Activity and Mechanism of Tetrahydroamentoflavone in vitro. Nat. Κέντρο. Commun. 2013, 8, 787-789.

24. Zhang, HY; Wu, W.; Mo, YR Μελέτη μεταφοράς ηλεκτρονίων συζευγμένων με πρωτόνιο (PCET) με τέσσερις ρητές διαβατικές καταστάσεις στο επίπεδο ab Initio. Υπολογιστής. Θεωρ. Chem. 2017, 1116, 50-58.

25. Lin, J.; Li, XC; Chen, L.; Lu, WZ; Chen, XW; Han, L.; Chen, DF Protective Effect Against Βλάβη DNA που προκαλείται από ρίζες υδροξυλίου και αντιοξειδωτικός μηχανισμός [6]-gingerol: A Chemical Study. Ταύρος. Korean Chem. Soc. 2014, 35, 1633-1638.

26. Iuga, C.; Alvarez-Idaboy, JR; Russo, N. Antioxidant Activity of Trans-Resveratrol Toward Hydroxyl and Hydroperoxyl Radicals: A Quantum Chemical and Computational Kinetics Study. J. Org. Chem. 2012, 77, 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, XC; Hu, QP; Jiang, SX; Li, F.; Lin, J.; Han, L.; Hong, YL; Lu, WB; Gao, YX; Το Chen, DF Flos Chrysanthemi Indici Προστατεύει από βλάβες που προκαλούνται από το υδροξύλιο στο DNA και τα MSCs μέσω του Αντιοξειδωτικού Μηχανισμού. J. Saudi Chem. Soc. 2015,19, 454-460.

28. Amic, Α.; Markovic, Ζ.; Markovic, JMD; Stepanic, V.; Lucic, Β.; Amic, D. Towards an Improved Prediction of the Free Radical Scavenging Potency of Flavonoids: The Significance of Double PCET Mechanisms. Food Chem. 2014, 152, 578-585.

29. Lee, CH; Yoon, JY UV Direct Photolysis of 2,2'-and-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) (ABTS) in Aqueous Solution: Kinetics and Mechanism. J. Photochem. Photobiol. A 2008, 197, 232-238.

30. Aliaga, C.; Lissi, EA Reaction of 2,2'-Azinobis(3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid (ABTS) Derived Radicals with Hydroperoxides. Kinetics and Mechanism. Int. J. Chem. Kinet. 1998, 30, { {8}}.

31. Osman, AM; Wong, KKY; Fernyhough, A. ABTS Radical-Driven Oxidation of Polyphenols: Isolation and Structural Elucidation of Covalent Adducts. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006, 346, 321-329.

32. Osman, AM Multiple Pathways of the Reaction of 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl Radical (DPPHe) with ( plus )-catechin: Evidence for the Formation of a Covalent Adduct of the DPPHE and the Oxidized Form της Πολυφαινόλης. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2011, 412, 473-478.

33. Lopez-Munguia, Α.; Hernandez-Romero, Υ.; Pedraza-Chaverri, J.; Miranda-Molina, Α.; Regla, Ι.; Martinez, Α.; Castillo, Ε. Ανάλογα Γλυκοζίτη Φαινυλοπροπανοειδούς: Ενζυμική Σύνθεση, Αντιοξειδωτική Δραστηριότητα και Θεωρητική Μελέτη του Μηχανισμού Καθαρισμού Ελεύθερων Ριζών. PLoS ONE 2011, 6, e20115.

34. Perron, NR; Brumaghim, JL Μια ανασκόπηση των αντιοξειδωτικών μηχανισμών των ενώσεων πολυφαινόλης που σχετίζονται με τη δέσμευση σιδήρου. Cell Biochem. Biophys. 2009, 53, 75-100.

35. Devos, D.; Moreau, C.; Devedjian, JC; Kluza, J.; Perrault, Μ.; Laloux, C.; Jonneaux, Α.; Ryckewaert, G.; Garcon, G.; Rouaix, Ν.; et al. Στόχευση χηλικού σιδήρου ως θεραπευτική μέθοδος στη νόσο του Πάρκινσον. Αντιοξειδωτικό. Σήμα οξειδοαναγωγής. 2014, 21,195-210.

36. Cekic, SD; Baskan, KS; Totem, Ε.; Apak, R. Δοκιμασία τροποποιημένης αντιοξειδωτικής ικανότητας μείωσης του χαλκού (CUPRAC) για τη μέτρηση των αντιοξειδωτικών ικανοτήτων πρωτεϊνών που περιέχουν θειόλη σε πρόσμιξη με πολυφαινόλες. Talanta 2009, 79, 344-351.

37. Li, XC; Chen, DF; Mai, Υ.; Wen, Β.; Wang, XZ Συμφωνία μεταξύ των Αντιοξειδωτικών Δραστηριοτήτων in vitro και των Χημικών Συστατικών του Radix Astragali (Huangqi). Nat. Κέντρο. Res. 2012, 26, 1050-1053.

38. Chen, DF; Li, XC; Xu, ZW; Liu, XB; Du, SH; Li, Η.; Zhou, JH; Zeng, HP; Hua, ZC Εξαδεκανοϊκό Οξύ από αφέψημα Buzhong Yiqi που προκάλεσε πολλαπλασιασμό μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων μυελού των οστών. J. Med. Τρόφιμα 2010,13, 967-975.

39. Li, Χ.; Liu, JJ; Lin, J.; Wang, TT; Huang, JY; Lin, YQ; Chen, DF Προστατευτικές Επιδράσεις της Διυδρομυρικετίνης κατά της Βλάβης των Μεσεγχυματικών Βλαστοκυττάρων που προκαλείται από ΟΗ και της Μηχανιστικής Χημείας. Molecules 2016,21, 604.

40. Wang, GR; Li, XC; Zeng, Σύνθεση HP, Αντιοξειδωτική δράση του (Ε)-9-π-τολύλ-3-2-(8-υδροξυ-κινολ- 2-υλ)βινυλ-καρβαζόλης και (Ε){{8 }}(ρ-Ανισύλιο)-3-2-(8-υδροξυ-κινολ-2-υλ)βινυλ-καρβαζόλη και ο επαγωγικός πολλαπλασιασμός τους μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων. Acta Chim. Αμαρτία. 2009, 67, 974-982.

41. Li, Χ.; Wei, G.; Wang, X.; Liu, D.; Deng, R.; Li, Η.; Zhou, J.; Li, Υ.; Zeng, Η.; Chen, D. Η στόχευση της οδού Shh από ατρακτυλενολίδες προάγει τη χονδρογονική διαφοροποίηση των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων. Biol. Pharm. Ταύρος. 2012, 35,1328-1335.

42. Li, XC; Gao, YX; Li, F.; Liang, AF; Xu, ZM; Bai, Υ.; Mai, WQ; Han, L.; Το Chen, DF Maclurin προστατεύει από βλάβες που προκαλούνται από τις ρίζες υδροξυλίου στα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα: Αξιολόγηση αντιοξειδωτικών και μηχανιστική διορατικότητα. Chem. Biol. Αλληλεπιδρώ. 2014, 219, 221-228.

Διαθεσιμότητα δείγματος: Ένα δείγμα της ένωσης πολυουμοζίτη είναι διαθέσιμο από τους συγγραφείς.

© 2018 από τους συγγραφείς. Δικαιούχος αδείας MDPI, Βασιλεία, Ελβετία. Αυτό το άρθρο είναι ένα άρθρο ανοιχτής πρόσβασης που διανέμεται υπό τους όρους και τις προϋποθέσεις της άδειας Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).