ΜΕΡΟΣ 1 Προετοιμασία και αξιολόγηση της διαδερμικής χορήγησης με βάση το μικρογαλάκτωμα των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών Cistanche Tubulosa

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

JIANHUA YANG1*, HUANHUAN XU1-3*, & et al.

Αφηρημένη.

Ο πρωταρχικός στόχος της παρούσας μελέτης ήταν η ανάπτυξη ενός νέου σκευάσματος μικρογαλακτώματος (ΜΕ) για παροχήφαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche(PG) για χρήση σε λευκαντικά δέρματος και αντηλιακά. Η ελαιώδης φάση επιλέχθηκε με βάση τη διαλυτότητα του φαρμάκου, ενώ η επιφανειοδραστική ουσία και η συνεπιφανειοδραστική ουσία εξετάστηκαν και επιλέχθηκαν με βάση τη διαλυτοποιητική τους ικανότητα και την αποτελεσματικότητα με την οποία σχημάτισαν ME. Κατασκευάστηκαν διαγράμματα ψευδοτριαδικής φάσης για την αξιολόγηση των περιοχών ΜΕ και επιλέχθηκαν πέντε σκευάσματα ΜΕ ελαίου σε νερό ως οχήματα. Πραγματοποιήθηκαν in vitro πειράματα διείσδυσης δέρματος για τη βελτιστοποίηση της σύνθεσης ΜΕ και για την αξιολόγηση της διαπερατότητάς της σε σύγκριση με αυτή του αλατούχου διαλύματος. Οι φυσικοχημικές ιδιότητες του βελτιστοποιημένου ΜΕ και η ικανότητα διείσδυσης του PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche) που παραδόθηκε από αυτό το ΜΕ ερευνήθηκαν επίσης. Η βελτιστοποιημένη σύνθεση ΜΕ αποτελούνταν από μυριστικό ισοπροπυλεστέρα (7 τοις εκατό, β/β), Cremorphor EL (21 τοις εκατό, β/β), προπυλενογλυκόλη (7 τοις εκατό, β/β) και νερό (65 τοις εκατό, β/β). Η σωρευτική ποσότητα PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche) που διαπέρασε το δέρμα του ποντικού που είχε αφαιρεθεί όταν μεταφέρθηκε από το ΜΕ ήταν ~1,68 φορές από ότι όταν το PG μεταφέρθηκε μόνο με αλατούχο διάλυμα. Η αθροιστική ποσότητα PG στο μικρογαλάκτωμα (4149,650±37,3 μg·cm-2) ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από αυτή της PG στο αλατούχο διάλυμα (2288,63±20,9 μg· cm-2 ). Επιπλέον, ο συντελεστής διαπερατότητας έδειξε ότι το βελτιστοποιημένο μικρογαλάκτωμα ήταν πιο αποτελεσματικός φορέας για τη διαδερμική χορήγηση PG από το διάλυμα ελέγχου (8,87±0,49 cm/hx10-3 έναντι 5,41±0,12 cm/hx10-3 ). Συνολικά, η ικανότητα διείσδυσης του PG που μεταφέρεται με ΜΕ αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με το αλατούχο διάλυμα.

κιστανάκι

Εισαγωγή

Herba cistanche,ένα τονωτικό βότανο που διανέμεται συνήθως σε περιοχές της ερήμου, έχει χρησιμοποιηθεί συχνά στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Μέχρι σήμερα, έχουν διεξαχθεί πολλαπλές μελέτες για τη διερεύνηση των βιοφαρμακευτικών ιδιοτήτων του, συμπεριλαμβανομένης της βελτίωσης της μνήμης, της σεξουαλικής ισχύος, της δέσμευσης ελεύθερων ριζών και της αντιγηραντικής δράσης (1). Το κύριο συστατικό του H. cistanche είναιφαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο (PG). Προηγούμενες μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι η PG αναστέλλει τη δραστηριότητα της τυροσινάσης, του ενζύμου που περιορίζει τον ρυθμό για τη σύνθεση της μελανίνης στο ανθρώπινο σώμα (2). Επιπλέον, το Π.Γ(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche) έχει αναφερθεί ότι είναι υπεύθυνη για τον καθαρισμό 2,2-διφαινυλ-1-πικρυλυδραζυλικών ριζών (3) και την προστασία των κερατινοκυττάρων από την υπεριώδη ακτινοβολία (UV). Επομένως, αυτό το συστατικό μπορεί να έχει δυνατότητα αποχρωματισμού του δέρματος. Η τοπική φαρμακευτική αγωγή έχει χρησιμοποιηθεί συνήθως σε καλλυντικά πεδία, με το φάρμακο να χορηγείται απευθείας στην επιφάνεια του σώματος (4). Τα μικρογαλακτώματα (ΜΕ) είναι ένα νέο σύστημα χορήγησης φαρμάκων που συμβατικά αποτελείται από έλαιο, επιφανειοδραστικό, συνεπιφανειοδραστικό και υδατικές φάσεις (5) και έχει αναφερθεί ότι βελτιώνουν τον ρυθμό και την απορρόφηση των λιπόφιλων φαρμάκων (6). Επιπλέον, λόγω της ικανοποιητικής διαλυτότητάς του, του χαμηλού ερεθισμού του δέρματος και της υψηλής διαπερατότητάς του, αναμένεται να χρησιμοποιηθεί στην τοπική χορήγηση φαρμάκου (7,8). Από όσο γνωρίζουμε, λίγες μελέτες έχουν διεξαχθεί όπου η PG χορηγήθηκε μέσω τοπικής φαρμακευτικής αγωγής χρησιμοποιώντας μικρογαλάκτωμα. Στην παρούσα μελέτη, δημιουργήθηκε ένα σύστημα παροχής νανογαλακτώματος ελαίου σε νερό (O/W) για διαδερμική χορήγηση και το PG ενσωματώθηκε στο νανογαλάκτωμα (9,10). Εν τω μεταξύ, η προετοιμασία και ο χαρακτηρισμός του νανογαλακτώματος που βασίζεται σε PG πραγματοποιήθηκε με διερεύνηση της διαδερμικής απελευθέρωσης in vitro.

Υλικά και Μέθοδοι Αντιδραστήρια.

Το Cremorphor EL και ο μυριστικός ισοπροπυλεστέρας (IPM) αγοράστηκαν από τη Sigma Aldrich. Merck Millipore (Darmstadt, Γερμανία). Η αιθανόλη, το ελαϊκό οξύ (OA) και το Tween-80 αγοράστηκαν από την Guangcheng Chemical Reagent Co., Ltd. (Tianjin, Κίνα). Ο ελαϊκός αιθυλεστέρας αγοράστηκε από την Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. (Σαγκάη, Κίνα). Όλα τα χημικά και οι διαλύτες που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αναλυτικής ποιότητας αντιδραστηρίου. Προετοιμασία και αξιολόγηση διαδερμικής χορήγησης με βάση το μικρογαλάκτωμα φαινυλαιθανοειδών γλυκοζιτών Cistanche tubulosa JIANHUA YANG1*, HUAN HUAN XU1-3*, SHANSHAN WU2, BOWIE JU2, DANDAN ZHU2, YAO YAN1, MEI{9} } Τμήμα Φαρμακευτικής, Το Πρώτο Συνεργαζόμενο Νοσοκομείο. 2 Τμήμα Φυσικών Φαρμάκων, Κολλέγιο Φαρμακευτικής, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Xinjiang, Urumqi, Xinjiang 830011; 3 Τμήμα Φαρμακευτικής, Νοσοκομείο Kanghua, Dongguan, Guangdong 523003, PR Κίνα Λήψη στις 2 Δεκεμβρίου 2015. Έγινε αποδοχή στις 29 Νοεμβρίου 2016, DOI: 10.3892/MMR.2017.6147 Αλληλογραφία προς: Dr. Junping Hu, Department of Natural Medicines, College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, 393 Xinyi Road, Urumqi, Xinjiang 8300p011, @yeah.net * Συνεισέφερε εξίσου Λέξεις-κλειδιά: φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο, μικρογαλάκτωμα, διαδερμική χορήγηση, λεύκανση δέρματος, αντηλιακό yang et al: ME-BASED PG FOR COSMETIC APPLICATION 1110 Παρασκευή PhGs. PhG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche) παρασκευάστηκε όπως περιγράφεται συνήθως (11).

Το στεγνωμένο στον αέραC. tubulosaτροφοδοτήθηκε και εξήχθη με διήθηση με 80 τοις εκατό EtOH. Το διήθημα εξατμίστηκε υπό πίεση, ακολουθούμενο από διήθηση του υπολειμματικού ρευστού. Το διήθημα συμπυκνώθηκε και χρωματογραφήθηκε σε στήλη μακροπορώδους ρητίνης SP-825 χρησιμοποιώντας 0, 30, 50, 70 και 90 τοις εκατό EtOH σε νερό ως διαλύτες έκλουσης. Τα 30-50 τοις εκατό εκλούσματα EtOH συμπυκνώθηκαν και ξηράνθηκαν για να ληφθεί κλάσμα πλούσιο σε PhG. Η φασματοφωτομετρία UV έδειξε το περιεχόμενο του PhG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche) ήταν 87,6 τοις εκατό. Έλεγχος ελαίων, επιφανειοδραστικών και συνεπιφανειοδραστικών για ME. Πραγματοποιήθηκαν δοκιμές διαλυτότητας για την επιλογή των κατάλληλων συστατικών για την παρασκευή ενός σκευάσματος ΜΕ με υψηλή ικανότητα φόρτωσης φαρμάκου. Σε αυτή τη διαδικασία, μια περίσσεια ποσότητα PG προστέθηκε σε 4 ml καθενός από τα ακόλουθα αντιδραστήρια: IPM, υγρή παραφίνη, OA, Cremophor EL, Tween-80, απόλυτη αιθανόλη, προπυλενογλυκόλη, γλυκερίνη και PEG400 , αντίστοιχα. Κατόπιν αυτού, το προκύπτον μείγμα ανακινήθηκε αμοιβαίως στους 37°C για 72 ώρες, ακολουθούμενο από φυγοκέντρηση στα 12.830 xg για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, το ίζημα επαναιωρήθηκε σε μεθανόλη και η PG προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας φασματοφωτομετρία UV στα 333 nm. Κατάλληλα αραιωμένα διαλύματα ελαίων, επιφανειοδραστικών και συνδιαλυτών σε μεθανόλη χρησίμευσαν ως τυφλό δείγμα ελέγχου. Κατασκευή διαγράμματος φάσεων. Για να ληφθεί ένα εύρος συγκέντρωσης συστατικών για το υπάρχον όριο μικρογαλακτώματος, κατασκευάστηκαν διαγράμματα ψευδοτριαδικής φάσης χρησιμοποιώντας μια μέθοδο τιτλοδότησης νερού όπως περιγράφηκε προηγουμένως (12). Παρασκευάστηκαν διαγράμματα τριών φάσεων με αναλογίες βάρους 1:3, 1:1 και 3:1 επιφανειοδραστικής ουσίας προς συνεπιφανειοδραστική ουσία. Η ελαιώδης φάση και το μίγμα τασιενεργών αναμίχθηκαν στη συνέχεια σε αναλογίες βάρους 1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2 και 9:1. . Το μίγμα ελαίου και τασιενεργού αναμίχθηκαν ομοιογενώς και αραιώθηκαν στάγδην με καθαρό νερό υπό μαγνητική ανάδευση (300 rpm) σε θερμοκρασία δωματίου μέχρις ότου ληφθεί διαφανές ΜΕ. Η συγκέντρωση των συστατικών καταγράφηκε προκειμένου να συμπληρωθεί το διάγραμμα ψευδοτριαδικής φάσης. Με βάση αυτά τα διαγράμματα, επιλέχθηκαν οι κατάλληλες συγκεντρώσεις υλικών για την παρασκευή ΜΕ με βάση το PG. Παρασκευή του ΜΕ και του υδατικού διαλύματος PG. Επιλέχθηκαν συνολικά 5 ME (ME{1-5) σύμφωνα με τα διαγράμματα φάσεων με αναλογία επιφανειοδραστικής ουσίας: συνεπιφανειοδραστικής ουσίας 3:1 (Πίνακας I). Τα συστήματα μικρογαλακτώματος παρασκευάστηκαν με ανάμιξη λαδιού με το μίγμα επιφανειοδραστικού και συνεπιφανειοδραστικού και νερό προστέθηκε με ακρίβεια σε ελαιώδεις φάσεις με μαγνητική ανάδευση (300 r/min) στους 37˚C. Τα συστήματα εξισορροπήθηκαν χρησιμοποιώντας ήπια μαγνητική ανάδευση για 30 λεπτά ακολουθούμενη από διάλυση της κατάλληλης ποσότητας PG υπό υπερήχους. Το υδατικό διάλυμα παρασκευάστηκε με την ίδια περιεκτικότητα PG διαλυμένη σε καθαρό νερό. Χαρακτηρισμός του μικρογαλακτώματος. Το μέσο μέγεθος σταγονιδίων και ο δείκτης πολυδιασποράς των ΜΕ αξιολογήθηκαν με φασματοσκοπία συσχέτισης φωτονίων (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK). Όλα τα δείγματα αραιώθηκαν με νερό σε αναλογία 1:5 και διηθήθηκαν μέσω φίλτρου 0,22 μm. Η δοκιμή πραγματοποιήθηκε σε θερμοστατικό θάλαμο στους 25°C εις τριπλούν. Η μορφολογία των μικρογαλακτωμάτων PG παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης (JEM-100CXII; JEOL Ltd., Τόκιο, Ιαπωνία). Εν συντομία, μία σταγόνα αραιωμένου δείγματος εναποτέθηκε σε ένα επικαλυμμένο με λεπτό υμένιο πλέγμα χαλκού, ακολουθούμενο από χρώση με μία σταγόνα υδατικού διαλύματος φωσφοβολφραμικού οξέος 2 τοις εκατό.

Οι μέσες διάμετροι σταγονιδίων των μικρογαλακτωμάτων προσδιορίστηκαν με όργανο φασματοσκοπίας συσχέτισης φωτονίων (BI{0}}SM· Brookhaven Instruments Corporation, Holtsville, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) σε θερμοκρασία δωματίου. Το ιξώδες των οχημάτων ME μετρήθηκε στους 25˚C, χρησιμοποιώντας το ψηφιακό ιξωδόμετρο NDJ-8S (Shanghai Precision and Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China) με αρ. 1 ρότορας ρυθμισμένος στις 60 σ.α.λ. Προσδιορισμός pH. Οι τιμές pH των ME προσδιορίστηκαν στους 25˚C χρησιμοποιώντας το ψηφιακό οξύμετρο Phs‑3C (Shanghai REX Instruments Factory, Shanghai, Κίνα). Οι δείκτες διάθλασης μετρήθηκαν με ένα θερμοστατικό διαθλασίμετρο Abbe (Optical Instrument Factory, Shanghai, Κίνα). Προετοιμασία των ιστών του δέρματος. Αρσενικά ποντίκια Kunming βάρους 20 g αγοράστηκαν από το Κέντρο Πειραματικών Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (Xinjiang, Κίνα). 10 ποντίκια (ηλικίας 6 εβδομάδων) υποβλήθηκαν σε προσαρμοστική σίτιση για 1 εβδομάδα σε κύκλο 12 ωρών φωτός/12 ωρών σκότους, σε θερμοκρασία δωματίου (24±2˚C), με υγρασία 50±15 τοις εκατό. Όλα τα ζώα είχαν πρόσβαση σε μια τυπική δίαιτα και νερό. Τα μαλλιά αφαιρέθηκαν με ηλεκτρική κουρευτική μηχανή. Μετά την τελική αναισθησία με ένυδρη χλωράλη (10 τοις εκατό) μέσω υποδόριας ένεσης, οι ιστοί του δέρματος αφαιρέθηκαν από την κοιλιακή περιοχή και το υποδόριο λίπος και ο συνδετικός ιστός αφαιρέθηκαν. Τα χαρτομάντιλα τοποθετήθηκαν σε ψυγείο στους 4°C όλη τη νύχτα. Τα πρωτόκολλα της μελέτης εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (Xinjiang, Κίνα). Μελέτη διείσδυσης in vitro. Πειράματα διείσδυσης διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως (12). Το αποκομμένο δέρμα συσφίχθηκε μεταξύ του θαλάμου του δότη και του υποδοχέα ενός κυττάρου κατακόρυφης διάχυσης με αποτελεσματική περιοχή διάχυσης 2,8 cm2. Ο θάλαμος του υποδοχέα γέμισε με φρέσκο, φυσιολογικό ορό. Η κυψέλη διάχυσης διατηρήθηκε στους 37˚C χρησιμοποιώντας ένα λουτρό ανακυκλοφορίας νερού και το διάλυμα στους θαλάμους του υποδοχέα αναδεύτηκε συνεχώς στις 200 rpm. Μετά από αυτό, το σκεύασμα δοκιμής (1,0 ml) τοποθετήθηκε απαλά στον θάλαμο δότη. Στη συνέχεια, 3 ml του διαλύματος στον θάλαμο του υποδοχέα αφαιρέθηκαν και αντικαταστάθηκαν με ίσο όγκο φρέσκου φυσιολογικού ορού σε προκαθορισμένα διαστήματα (0, 2, 4, 6, 8, 10 και 24 ώρες). Το δείγμα που ελήφθη από τον θάλαμο υποδοχέα χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche)επίπεδα χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία UV σε μήκος κύματος 333 nm. Η αθροιστική ποσότητα PG που διείσδυσε μέσω του αποκομμένου δέρματος ποντικού υπολογίστηκε σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:

Όπου Qn ήταν η συσσωρευμένη ποσότητα σε μια δεδομένη χρονική στιγμή t, Cn είναι η συγκέντρωση φαρμάκου του διαλύματος δέκτη σε κάθε χρόνο δειγματοληψίας, Ci είναι η συγκέντρωση του φαρμάκου του δείγματος, S είναι η αποτελεσματική περιοχή διάχυσης (S{{0 }}.8 cm2) και V0 και Vi είναι οι όγκοι του διαλύματος του δέκτη και του δείγματος, αντίστοιχα. Η σωρευτική ποσότητα (Qn) του PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche)διαποτίστηκε γραφικά ως συνάρτηση του χρόνου (t) για κάθε σκεύασμα. Ο ρυθμός διείσδυσης του PG σε μια σταθερή κατάσταση (Jss, μg/cm-2 /h-1) μέσω του δέρματος του ποντικιού υπολογίστηκε από την κλίση του γραμμικού τμήματος των διαγραμμάτων του χρόνου Qnversus. Ο συντελεστής διαπερατότητας (Kp, cm/h) υπολογίστηκε σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:

Όπου Kp είναι ο συντελεστής διαπερατότητας, Jss είναι η εκροή που υπολογίζεται σε σταθερή κατάσταση και το C0αντιπροσωπεύει τη συγκέντρωση φαρμάκου που παρέμεινε σταθερή στο όχημα. Μελέτη κατακράτησης δέρματος. Οι ακόλουθες ενότητες περιγράφουν λεπτομερώς τη σύγκριση της συμπεριφοράς διείσδυσης ex vivo, της σωρευτικής ποσότητας, του ρυθμού διείσδυσης, του συντελεστή διαπερατότητας και των χαρακτηριστικών συγκράτησης του δέρματος μεταξύ βελτιστοποιημένων σκευασμάτων ME (περιεκτικότητα PG, 2 τοις εκατό, w/w) και του υδατικού διαλύματος. Στο τέλος του πειράματος διείσδυσης, το υπολειπόμενο επίπεδο φαρμάκου στο δέρμα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια μέθοδο ομογενοποίησης. Μετά από πλύση με φυσιολογικό ορό, το δέρμα κόπηκε σε μικρά τμήματα και τοποθετήθηκε σε γυάλινο σωλήνα που περιείχε 3 ml μεθανόλης σε λουτρό πάγου. Το δείγμα ομογενοποιήθηκε με ταχύτητα 12000 r/min. rpm για 2 λεπτά και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στα 12.830 xg οριζόντια για 30 λεπτά στους 25˚C. Το υπερκείμενο διήλθε μέσω μικροπορώδους φίλτρου (0,45 μm) και το PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche)Τα επίπεδα στο υπερκείμενο προσδιορίστηκαν με φασματοσκοπία UV σε μήκος κύματος 333 nm. Μελέτη σταθερότητας. Η φυσική σταθερότητα του ME φορτωμένου με PG διερευνήθηκε μέσω της διαύγειας, της ανάλυσης μεγέθους σωματιδίων και του διαχωρισμού φάσης, ο οποίος παρατηρήθηκε στους 2‑8˚C και σε θερμοκρασία δωματίου για 3 μήνες. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση στα 12.830 xg για 30 λεπτά στους 25˚C για να εκτιμηθεί η φυσική σταθερότητα του ΜΕ. Ο διαχωρισμός φάσης και η συγκέντρωση του PG ερευνήθηκαν μηνιαίως για να κριθεί η βέλτιστη θερμοκρασία αποθήκευσης. Η χημική σταθερότητα αξιολογήθηκε σε σκευάσματα φορτωμένα με φάρμακο, αποθηκευμένα στους 2‑8˚C και σε θερμοκρασία δωματίου, με την περιεκτικότητα σε PG να προσδιορίζεται με φασματοφωτομετρία UV στα 333 nm. Τεστ ευαισθησίας δέρματος. Πραγματοποιήθηκαν δοκιμές ευαισθησίας δέρματος σε κουνέλια (βάρους 2,02,5 kg) για την αξιολόγηση του ερεθιστικού δυναμικού της τοπικής εφαρμογής του αναπτυγμένου σκευάσματος όπως περιγράφηκε προηγουμένως (13). Εννέα κουνέλια Holland (ηλικίας 16 εβδομάδων, βάρους 2.0-2.5 kg, 5 αρσενικά και 4 θηλυκά) ελήφθησαν από το Κέντρο Πειραματικών Ζώων του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang. Τα ζώα υποβλήθηκαν σε προσαρμοστική σίτιση για 1 εβδομάδα σε κύκλο φωτός 12 ωρών/12 ωρών σκότους, σε θερμοκρασία δωματίου (24±2˚C), με υγρασία 50±15 τοις εκατό. Όλα τα ζώα είχαν πρόσβαση σε μια τυπική δίαιτα και νερό. Για τη θυσία χρησιμοποιήθηκε εμβολή αέρα. Τα πρωτόκολλα που χρησιμοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (Xinjiang, Κίνα). Οι τρίχες στο πίσω μέρος αφαιρέθηκαν ~24 ώρες πριν από τη χορήγηση των σκευασμάτων ΜΕ. Τα ζώα χωρίστηκαν στις ακόλουθες ομάδες: Μια βελτιστοποιημένη ομάδα ΜΕ (n=3), με τοπική χορήγηση βελτιστοποιημένης ΜΕ που περιέχει 2 τοις εκατό (w/w) PG. μια ομάδα αλατούχου PG (n=3), με τοπική χορήγηση αλατούχου διαλύματος που περιέχει 2 τοις εκατό (w/w) PG. και ομάδα φυσιολογικού ορού ελέγχου (n=3), που υπόκειται σε τοπική χορήγηση φυσιολογικού ορού. Η χορήγηση πραγματοποιήθηκε δύο φορές την ημέρα για 5 ημέρες. Τα ζώα παρατηρήθηκαν για οποιαδήποτε σημάδια κνησμού ή αλλαγές στο δέρμα, συμπεριλαμβανομένου του ερυθήματος, της βλατίδας, του ξεφλουδίσματος και της ξηρότητας (14). Μετά τη διακοπή του φαρμάκου, η παρατήρηση για εφάπαξ ή πολλαπλές χορηγήσεις συνεχίστηκε για 3 ημέρες. Οι βαθμολογίες ερεθισμού της περιοχής δοκιμής αξιολογήθηκαν κρίνοντας την έκταση του ερυθήματος και του οιδήματος σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: 1, καμία ορατή αντίδραση. 2, μια ελαφριά αντίδραση? 3, μέτρια αντίδραση και 4, σοβαρή αντίδραση (15,16). Τέλος, οι συνολικές βαθμολογίες ερεθισμού για κάθε κατάσταση υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση:

Στατιστική ανάλυση. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως η μέση ± τυπική απόκλιση. Η ανάλυση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από τη δοκιμή της λιγότερο σημαντικής διαφοράς. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS έκδοση 19.0 (IBM SPSS, Armonk, NY, ΗΠΑ). Π<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Αποτελέσματα και συζήτηση

Έλεγχος ελαίων, επιφανειοδραστικών και συν-επιφανειοδραστικών για ME. PG(φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο από το cistanche)ήταν σχεδόν αδιάλυτο σε υγρή παραφίνη και ελαϊκό οξύ, αλλά μέτρια διαλυτότητα παρατηρήθηκε στο IPM (Πίνακας II). Το IPM αυξάνει τον συντελεστή διάχυσης στο δέρμα και έχει ως αποτέλεσμα την αύξηση του συντελεστή διείσδυσης (17,18). Επιπλέον, το IPM επιλέγεται συνήθως για την παρασκευή ME λόγω των γνωστών ιδιοτήτων ενίσχυσης της διείσδυσης και της βιοσυμβατότητάς του. Η επιλογή τασιενεργού είναι κρίσιμης σημασίας για την επιτυχή σύνθεση των ME, καθώς συμβάλλει στη μείωση της διεπιφανειακής τάσης σχηματίζοντας μια μεμβράνη στη διεπιφάνεια λαδιού-νερού (19). Στην παρούσα μελέτη, το PG εμφάνισε υψηλότερη διαλυτότητα στο Cremophor-EL (40,193 mg/ml, Πίνακας II) σε σύγκριση με το Tween-80 (28,051 mg/ml, Πίνακας II). Ως εκ τούτου, το CremophorEL επιλέχθηκε για χρήση σε περαιτέρω μελέτες λόγω του προφίλ διαλυτότητάς του και του χαμηλού επιπέδου τοξικότητάς του ως μη ιοντικό επιφανειοδραστικό. Επιπλέον, το υδατικό του διάλυμα έδειξε καλή διαλυτότητα της PG. Η υψηλότερη διαλυτότητα της PG μεταξύ των συν-τασιενεργών παρατηρήθηκε στην προπυλενογλυκόλη (48,714 mg/ml, Πίνακας II). Επιπλέον, η προπυλενογλυκόλη έχει την ικανότητα να σχηματίζει ΜΕ με IPM και CremophorEL. Συνολικά, το IPM, το CremophorEL και η προπυλενογλυκόλη χρησιμοποιήθηκαν ως ελαιώδης φάση, επιφανειοδραστικό και συνεπιφανειοδραστικό, αντίστοιχα, για τη σύνθεση MEs με PG. Κατασκευή διαγραμμάτων ψευδοτριμερών φάσεων. Στην παρούσα μελέτη, κατασκευάστηκαν διαγράμματα φάσεων για την επιλογή του εύρους συγκέντρωσης των συστατικών για τα μικρογαλακτώματα, και οι σημειωμένες περιοχές υποδεικνύουν την καθαρή περιοχή O/WME (Εικ. 1). Έχει αναφερθεί προηγουμένως μια στενή σχέση μεταξύ της επίδρασης ενυδάτωσης της κεράτινης στιβάδας και της δερματικής διείσδυσης (20) και η θερμοδυναμική δραστηριότητα των φαρμάκων σε ΜΕ ήταν μια σημαντική κινητήρια δύναμη πίσω από την απελευθέρωση και τη διείσδυση φαρμάκων στο δέρμα (20,21 ). Η θερμοδυναμική δραστηριότητα των φαρμάκων σε ΜΕ με χαμηλότερη περιεκτικότητα σε μίγμα τασιενεργών αποδείχθηκε ότι είναι μια σημαντική κινητήρια δύναμη για την απελευθέρωση και τη διείσδυση του φαρμάκου στο δέρμα (22,23).

The decreased concentration of surfactant in dispersed systems may also increase the rate of drug release and its permeation in the skin (24,25). Thus, the water content ranged between 50 and 70%, while that of the surfactant and cosurfactant ranged between 20 and 45%. The microemulsion domain was determined by visual inspection for clarity and fluidity. The rest of the region in the phase diagrams represents turbid and conventional emulsions based on visual observation (Fig. 1). No liquid crystalline structure was observed using the cross polarizer. The area of the O/W ME region was expanded following the increase of the Km value (Fig. 1). These findings were consistent with previous studies, which demonstrated that a higher level of surfactant reduces interfacial tension of the colloidal solution more effectively, thereby improving the fluidity of the interface and increasing the entropy of the system (21,24). Thus, it is reasonable to speculate that the effect of CremophorEL on ME regions depends on the other ME components, especially the cosurfactant. The combination of short to medium carbon chain length alcohols, including propylene glycol, with single-chain surfactants, may lower interfacial tension due to increased fluidity at the interface. Additionally, medium carbon chain length alcohols may induce elevation of miscibility of the aqueous and oily phases due to the partitioning behavior between the two phases. Finally, in the presence of a Km ratio of 3:1, the ratio of the surfactant mixture to oil was 1:9 or 2:8. MEs prepared with a ratio of surfactant mixture to oil >2:8 ήταν θολά και ασταθή (Εικ. 2).

Οι τελικές συνθέσεις του ΜΕ1-5 παρατίθενται στον Πίνακα Ι. Παρασκευή και χαρακτηρισμός ΜΕ. Οι φυσικές ιδιότητες του ME1-5 παρατίθενται στον Πίνακα III. Τα συστήματα διασποράς ήταν μακροσκοπικά πανομοιότυπα, ομοιογενή και διαφανή, χωρίς ιζήματα. Τα μέσα μεγέθη σταγονιδίων αυτών των ME κυμαίνονταν μεταξύ 30,56 και 79,21 nm (Εικ. 3, Πίνακας III), με τιμές δείκτη πολυδιασποράς που κυμαίνονται μεταξύ 0.187 και 0.321 (Πίνακας III). Αυτό έδειξε ένα ομοιόμορφο ΜΕ με στενή κατανομή μεγέθους. Επιπλέον, το μέγεθος των σταγονιδίων αυξήθηκε αναλογικά με την περιεκτικότητα σε λάδι, αλλά μειώθηκε με την περιεκτικότητα σε μίγμα επιφανειοδραστικών. Αυτό το φαινόμενο μπορεί να αποδοθεί στη διαστολή του πυρήνα ελαίου ΜΕ και στην υψηλή συγκέντρωση τασιενεργού που μειώνει δυναμικά τη διεπιφανειακή τάση λαδιού-νερού για τη μείωση του μεγέθους των σταγονιδίων. Επιπλέον, το ιξώδες ME ήταν αυξημένο ως αποτέλεσμα του αυξημένου επιφανειοδραστικού και του μειωμένου νερού. Οι τιμές του pH όλων των ME ήταν εντός του κατάλληλου εύρους 5.{15}}.5 (Πίνακας III) και έτσι ήταν συμβατές με αυτές των ιστών του δέρματος. Όσον αφορά τη φυσική σταθερότητα, δεν παρατηρήθηκε διαχωρισμός φάσης, θραύση ή κατακρήμνιση φαρμάκου σε κανένα από τα ME που δοκιμάστηκαν, υποδεικνύοντας ότι τα ΜΕ διέθεταν ικανοποιητική θερμοδυναμική σταθερότητα έναντι της φυγοκέντρησης. Η δοκιμή διαλυτότητας βαφής αποκάλυψε ότι μια υδατοδιαλυτή βαφή (πορτοκαλί μεθυλίου) κατανεμήθηκε ομοιόμορφα σε όλο το σύστημα ΜΕ, πράγμα που υπονοούσε ότι το σχηματιζόμενο ΜΕ ήταν τύπου O/W (τα δεδομένα δεν φαίνονται). Οι μικρογραφίες αποκάλυψαν ξεχωριστά μεμονωμένα σταγονίδια ΜΕ5 με σφαιρικό περίγραμμα (Εικ. 4). Μελέτη διείσδυσης δέρματος Exvivo. Τα προφίλ διείσδυσης όλων των οχημάτων που δοκιμάστηκαν ακολουθούσαν κινητικές απελευθέρωσης μηδενικής τάξης (26,27) και το ME5 παρείχε την υψηλότερη διαδερμική ροή PG (86.795±0.23 μg/cm{{28 }} /h-1· Εικ. 5· Πίνακας III). Στην παρούσα μελέτη, προσδιορίστηκαν οι επιδράσεις της περιεκτικότητας σε λάδι και του μίγματος επιφανειοδραστικών στη διείσδυση του δέρματος του PG. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επιφανειοδραστικά ενισχύουν τη διείσδυση του δέρματος αυξάνοντας τη ρευστότητα της μεμβράνης, τη διαλυτοποίηση του φαρμάκου και την εξαγωγή λιπιδίου από την κεράτινη στοιβάδα. Ο ρυθμός διείσδυσης του ME5 (86.795±0.23 μg/cm-2 /h-1) ήταν σημαντικά αυξημένος σε σύγκριση με τους ρυθμούς διείσδυσης του ME1 (69,57±{ {48}}.78, P=0.0094), ME2 (44.326±{0.84, P{{5{79}}}} .0052), ME3 (79,859±0,12, P=0,039) και ME4 (58,332±0,39 µg/cm-2 /h-1 , P=0.0063, Εικ. 5, Πίνακας III) Αυτό ήταν σύμφωνο με τα αποτελέσματα μιας προηγούμενης μελέτης, στην οποία η θερμοδυναμική δραστηριότητα του φορτίου του φαρμάκου ΜΕ μπορεί να μειωθεί με την αύξηση των επιφανειοδραστικών (12,28 ). Το ιξώδες του ME5 (30,43±0,12 mPa.s) ήταν χαμηλότερο σε σύγκριση με το άλλο ME1 (80,51±0,87 mPa.s, P=0,0076), ME2 (47,52±0,54 mPa.s, P{88 }}.0089), ME3 (60.49±1.34 mPa.s, P=0.0094) και ME4 (43.27±0.21 mPa.s, P=0.0059).