Μέρος 1: Ηλικιωμένα ποντίκια παρουσιάζουν μειωμένη ενημέρωση μνήμης στο πρωτότυπο πρότυπο ενημέρωσης OUL

για περισσότερες πληροφορίες:Ali.ma@wecistanche.com

Κάντε κλικ εδώ για το Μέρος 2

Janine L. Kwapis1,2, Yasaman Alaghband1, Ashley A. Keiser1, Tri N. Dong1, Christina M. Michael1, Diane Rhee1, Guanhua Shu1, Richard T. Dang1, Dina P. Matheos1 και Marcelo A. Wood1

Οι μνήμες δεν παραμένουν σε μόνιμη, στατική κατάσταση, αλλά πρέπει να τροποποιούνται δυναμικά ως απόκριση σε νέες πληροφορίες. Αν και καινούργιομνήμηΟ σχηματισμός συνήθως μελετάται σε εργαστηριακό περιβάλλον, οι περισσότερες συσχετίσεις του πραγματικού κόσμου είναι τροποποιήσεις στις υπάρχουσες αναμνήσεις, ιδιαίτερα στον γερασμένο, έμπειρο εγκέφαλο. Μέχρι σήμερα, το πεδίο δεν είχε ένα απλό παράδειγμα συμπεριφοράς που μπορεί να μετρήσει εάν οι αρχικές και ενημερωμένες πληροφορίες απομνημονεύονται σε μία μόνο συνεδρία δοκιμής. Για να αντιμετωπίσουμε αυτό το κενό, αναπτύξαμε ένα μυθιστόρημαμνήμητο παράδειγμα ενημέρωσης, που ονομάζεται εργασία Αντικείμενα σε Ενημερωμένες Τοποθεσίες (OUL) και είναι ικανή να αξιολογήσειμνήμηενημέρωση σε μια μη αγχωτική εργασία που είναι κατάλληλη τόσο για μικρά όσο και για μεγάλα τρωκτικά. Πρώτα δείχνουμε ότι τα νεαρά ποντίκια θυμούνται με επιτυχία τόσο την αρχική μνήμη όσο και τις ενημερωμένες πληροφορίες στο OUL. Στη συνέχεια, αποδεικνύουμε ότι η ενδοϊπποκαμπική έγχυση του αναστολέα πρωτεϊνικής σύνθεσης ανισομυκίνης διαταράσσει τόσο τις ενημερωμένες πληροφορίες όσο και την αρχική μνήμη κατά τη δοκιμή, υποδηλώνοντας ότι η ενημέρωση μνήμης στο OUL εμπλέκει την αρχική μνήμη. Για να το επαληθεύσουμε αυτό, χρησιμοποιήσαμε την τεχνική Arc CatFISH για να δείξουμε ότι η περίοδος ενημέρωσης OUL επανενεργοποιεί ένα σε μεγάλο βαθμό επικαλυπτόμενο σύνολο νευρώνων ως το αρχικόμνήμη. Τέλος, χρησιμοποιώντας το OUL, το δείχνουμεμνήμηη ενημέρωση είναι μειωμένη κατά τη γήρανση, 18-μη ποντίκια. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο ιππόκαμποςμνήμηη ενημέρωση μειώνεται με τη γήρανση και αποδεικνύεται ότι το παράδειγμα OUL είναι μια αποτελεσματική, ευαίσθητη μέθοδος αξιολόγησης της ενημέρωσης μνήμης σε τρωκτικά.

Κάντε κλικ στοCistanche στα Ουρντού για βελτίωση της μνήμης

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Οι μνήμες πρέπει να ενημερώνονται δυναμικά για να ενσωματώνουν τις πιο σχετικές, πρόσφατες πληροφορίες στον χώρο αποθήκευσης. Αυτή η ικανότητα ενσωμάτωσης νέων πληροφοριών σε υπάρχουσεςμνήμηείναι κρίσιμο για να επιτραπεί στους οργανισμούς να προβλέπουν μελλοντικά αποτελέσματα και να προσαρμοστούν σε νέες καταστάσεις. Οι περισσότερες αναμνήσεις δεν είναι νέες συσχετίσεις, αλλά είναι τροποποιήσεις ή προσθήκες (ενημερώσεις) σε υπάρχουσες αναμνήσεις, ιδιαίτερα στον γερασμένο, έμπειρο εγκέφαλο. Παρά τη θεμελιώδη σημασία του, οι μηχανισμοί που υποστηρίζουν την ενημέρωση της μνήμης είναι σε μεγάλο βαθμό αχαρακτήριστοι, και ακόμη λιγότερο είναι κατανοητό για το πώς η απορρύθμιση αυτών των μηχανισμών μπορεί να συμβάλει στη γνωστική έκπτωση που σχετίζεται με την ηλικία. Η κατανόηση του τρόπου με τον οποίο οι μνήμες τροποποιούνται ως απάντηση σε νέες πληροφορίες είναι, επομένως, ένα σημαντικό βήμα προς τη βελτίωσημνήμησε όλη τη διάρκεια ζωής.

Οι μνήμες μπορούν να ενημερώνονται μέσω μιας διαδικασίας που ονομάζεται "επανενοποίηση", κατά την οποία η ανάκτηση ενεργοποιεί μια περίοδο αστάθειας που θα μπορούσε να επιτρέψει την ενσωμάτωση νέων πληροφοριών σε ένα υπάρχον, σταθερόμνήμη. Η διαδικασία επαναστερεοποίησης αποτελείται από μια αρχική φάση αποσταθεροποίησης που χαρακτηρίζεται από αποικοδόμηση πρωτεΐνης ακολουθούμενη από μια φάση επανασταθεροποίησης που χαρακτηρίζεται από πρωτεϊνοσύνθεση [1-9]. Πρόσφατη εργασία έχει δείξει ότι η επανενοποίηση ξεκινά μόνο όταν παρουσιάζονται νέες πληροφορίες κατά την ανάκτηση. όταν η ανάκτηση αποτελείται μόνο από γνωστές πληροφορίες, το πρωτότυπομνήμηπαραμένει σταθερό και ανθεκτικό σε αμνησιακούς παράγοντες όπως οι αναστολείς πρωτεϊνοσύνθεσης [2, 10-16]. Αυτό υποδηλώνει ότι οι νέες πληροφορίες ενεργοποιούν την αποσταθεροποίηση της μνήμης για να επιτρέψουν την τροποποίηση. Σε συμφωνία με αυτό, πολυάριθμες μελέτες δείχνουν τώρα ότι νέες πληροφορίες που παρουσιάζονται κατά την ανάκτηση μπορούν να αλλάξουν το περιεχόμενο της μνήμης [2, 3, 11, 17, 18], το συναισθηματικό συστατικό της μνήμης [19-22], και να προκαλέσει επίμονη εξαφάνιση [23-27 ], ή ακόμη και να αναδιοργανώσετε τη μνήμη σε επίπεδο κυκλώματος [11, 28].

τοποθεσίαμνήμηεργασία, που ονομάζεται το παράδειγμα Objects in Updated Locations (OUL). Οι στόχοι αυτής της μελέτης ήταν διπλοί. Πρώτον, στοχεύσαμε να καθιερώσουμε το έργο OUL ως μια νέα μέθοδο για τη μελέτη του εξαρτώμενου από τον ιππόκαμπομνήμηενημέρωση. Δεύτερον, στοχεύσαμε να χρησιμοποιήσουμε αυτό το παράδειγμα για να προσδιορίσουμε ανμνήμηΗ ενημέρωση μειώνεται με την ηλικία.

Το παράδειγμα OUL είναι καινοτόμο καθώς είναι σε θέση να αξιολογήσει τόσο την αρχική μνήμη όσο και τις ενημερωμένες πληροφορίες σε μία μόνο συνεδρία δοκιμής. Επιπλέον, το OUL χρησιμοποιεί τυχαία μάθηση που εκμεταλλεύεται την έμφυτη προτίμηση των τρωκτικών για καινοτομία, αποφεύγοντας το περιττό άγχος και καθιστώντας το κατάλληλο για τον έλεγχο των ελλειμμάτων που σχετίζονται με την ηλικία στην ενημέρωση της μνήμης. Εδώ, επικυρώνουμε πρώτα την εργασία OUL, δείχνοντας ότι εμφανίζονται νεαρά ποντίκιαμνήμητόσο για την αρχική εκπαίδευση όσο και για την ενημέρωση μνήμης στη δοκιμαστική συνεδρία OUL. Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε δύο συμπληρωματικές μεθόδους (ενέσεις ανισομυκίνης εντός του ιππόκαμπου και Arc CatFISH) για να επαληθεύσουμε ότι η ενημέρωση OUL απαιτεί ανάκτηση της αρχικής μνήμης, αντί να σχηματίσει μια νέα, ανεξάρτητη μνήμη. Τέλος, χρησιμοποιώντας το OUL, αποδεικνύουμε ότι τα γερασμένα ποντίκια παρουσιάζουν βλάβεςμνήμηενημέρωση, υποδηλώνοντας ότι η αδυναμία ενημέρωσης των αναμνήσεων μπορεί να συμβάλει στη γνωστική έκπτωση που σχετίζεται με την ηλικία. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι το παράδειγμα OUL μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την κατανόηση των μηχανισμών που διέπουν την ενημέρωση της μνήμης του ιππόκαμπου σε όλη τη διάρκεια ζωής.

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Ποντίκια

Τα άτομα ήταν νεαρά ενήλικα (2–4-μηνών) ή ηλικιωμένα (18–20 μηνών) αρσενικά ποντίκια C57BL/6 J (Jackson Laboratory). Τα ποντίκια στεγάστηκαν, ταΐστηκαν και χειρίστηκαν όπως περιγράφεται στις Συμπληρωματικές Μέθοδοι. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνια και ήταν σε συμμόρφωση με τις οδηγίες των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας.

ΑΠΟΣΤΟΛΗ ΜΑΣ

Μετά τον χειρισμό και την εξοικείωση (βλ. Συμπληρωματικές Μέθοδοι), τα ποντίκια εκπαιδεύτηκαν με δύο πανομοιότυπα αντικείμενα σε συγκεκριμένες τοποθεσίες (Α1 και Α2) για 1 ή 3δ στο συνηθισμένο περιβάλλον. Εικοσιτέσσερις ώρες αργότερα, δόθηκε σε ποντίκια μια περίοδος ενημέρωσης, στην οποία αντιστοιχίστηκαν είτε στη συνθήκη Χωρίς ενημέρωση είτε στη συνθήκη ενημέρωσης. Κανένα ποντίκι Update δεν εκτέθηκε ξανά στις θέσεις εκπαίδευσης Α1 και Α2. Για τα ποντίκια Ενημέρωση, ένα αντικείμενο μετακινήθηκε σε νέα θέση (A3). Τέλος, στα ποντίκια δόθηκε μια δοκιμή κατακράτησης στην οποία εκτέθηκαν στα τρία αντικείμενα σε προηγούμενες θέσεις (Α1, Α2, Α3) και στο τέταρτο αντικείμενο σε μια νέα θέση Α4.Μνήμηγια τον αρχικό σχηματισμό εκπαίδευσης συνήχθη συγκρίνοντας την εξερεύνηση της νέας τοποθεσίας Α4 με τις τοποθεσίες Α1 και Α2.Μνήμηγια την ενημέρωση προέκυψε το συμπέρασμα συγκρίνοντας την εξερεύνηση της νέας τοποθεσίας Α4 με την τοποθεσία Α3.

Χειρουργική σωληνώσεων

Τα ποντίκια στο Σχ. 2 εμφυτεύτηκαν με χρόνιους σωληνίσκους όπως περιγράφηκε προηγουμένως [37] για να επιτραπεί η άμεση έγχυση ανισομυκίνης στον ιππόκαμπο μετά την ενημέρωση (βλ. Συμπληρωματικές Μέθοδοι). Τα ποντίκια ανάρρωσαν για τουλάχιστον 7 ημέρες πριν ξεκινήσει η δοκιμή συμπεριφοράς. Αμέσως μετά τη συνεδρία ενημέρωσης, τα ποντίκια εγχύθηκαν αμφίπλευρα με ανισομυκίνη (ANI, 125/ug/μL) ή φορέα (VEH) στον ραχιαίο ιππόκαμπο (1.0 μL/πλευρά). Οι τοποθετήσεις σωληνίσκου επιβεβαιώθηκαν με χρώση στεφανιαίων φετών με κρεζυλοβιολέ.

Λυκόψαρο

Ο υβριδισμός φθορισμού in situ για το CatFISH πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [38, 39] (βλ. Συμπλήρωμα για λεπτομέρειες). Ο επισημασμένος με DIG αντιπληροφοριακός ριβοανιχνευτής Arc υβριδοποιήθηκε με ιστό όλη τη νύχτα και οπτικοποιήθηκε με ένα συζυγές αντι-DIG-HRP, οπτικοποιήθηκε με κιτ υποστρώματος Cy3 και αντιχρωματίστηκε με DAPI.

Συγκεντρωτικές εικόνες συλλέχθηκαν στην περιοχή CA1b του ραχιαίου ιππόκαμπου και οι εικόνες βαθμολογήθηκαν για τον εντοπισμό του υποδιαμερίσματος εντοπισμού του Arc για τον υπολογισμό μιας βαθμολογίας ομοιότητας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [39].

Στατιστική ανάλυση

Η εργασία OUL βαθμολογήθηκε με το χέρι για τη μέτρηση των χρόνων εξερεύνησης αντικειμένων όπως περιγράφηκε προηγουμένως για τη θέση του αντικειμένουμνήμηπειράματα [40, 41]. Οι στατιστικές αναλύσεις (βλ. Συμπλήρωμα) πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασίες t Student δύο ουρών, μονόδρομες ANOVA ή αμφίδρομες ANOVA με δοκιμές t διορθωμένες με Sidak. Χρησιμοποιήθηκαν ANOVA μικτού μοντέλου όταν μια μεταβλητή ήταν επαναλαμβανόμενη μέτρηση. Απαιτήθηκε μια τιμή 0,05 για τη σημασία.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Τα νεαρά ζώα παρουσιάζονται με επιτυχίαμνήμητόσο για εκπαίδευση όσο και για ενημέρωση πληροφοριών στο OUL

Σκοπεύαμε αρχικά να επικυρώσουμε το έργο OUL ως ικανό να αξιολογήσειμνήμηενημέρωση σε νεαρά ποντίκια (Εικ. 1α). Μετά τη συνήθεια, τα ποντίκια εκπαιδεύτηκαν για πρώτη φορά να μάθουν τις θέσεις δύο πανομοιότυπων αντικειμένων σε ένα οικείο πλαίσιο (προπονητική συνεδρία, Ημέρα 1). Την επόμενη μέρα, κατά τη διάρκεια της συνεδρίας ενημέρωσης (Ημέρα 2), τα ποντίκια χωρίστηκαν σε δύο ομάδες. Η ομάδα Χωρίς ενημέρωση εκτέθηκε ξανά στις δύο γνωστές θέσεις αντικειμένων (A1 και A2). Η ομάδα Ενημέρωση εκτέθηκε σε μια οικεία θέση αντικειμένου (A1) και ένα αντικείμενο μετακινήθηκε σε μια νέα θέση (A3). Σε όλες τις ομάδες δόθηκε μια δοκιμαστική συνεδρία (την Ημέρα 3) για να αξιολογηθεί η μνήμη των ζώων τόσο για τις αρχικές θέσεις των αντικειμένων όσο και για την ενημερωμένη θέση. Βεβαιωθείτε ότι τα ποντίκια εκτέθηκαν σε τέσσερα πανομοιότυπα αντικείμενα: τρία σε προηγούμενα εκτεθειμένα σημεία (Α1, Α2 και Α3) και ένα σε νέα θέση (Α4).Μνήμηγια την αρχική εκπαίδευση αξιολογήθηκε συγκρίνοντας την εξερεύνηση της θέσης του νέου αντικειμένου (Α4) με την εξερεύνηση των θέσεων των αντικειμένων εκπαίδευσης (Α1 και Α2).Μνήμηγια τις ενημερωμένες πληροφορίες αξιολογήθηκαν συγκρίνοντας την εξερεύνηση της θέσης νέου αντικειμένου (A4) με την εξερεύνηση της "ενημερωμένης" θέσης αντικειμένου (A3). Καθώς τα ποντίκια προτιμούν την καινοτομία, η μνήμη είτε για την αρχική προπόνηση είτε για τις ενημερωμένες πληροφορίες αποδεικνύεται με αυξημένη εξερεύνηση του αντικειμένου στη νέα θέση (A4) σε σύγκριση με καθένα από τα άλλα τρία αντικείμενα (που υποδεικνύεται από υψηλότερη βαθμολογία στον δείκτη διάκρισης ( DI), βλέπε μεθόδους).

Κατά τη διάρκεια της εκπαίδευσης, τα ποντίκια και στις δύο ομάδες έδειξαν παρόμοια επίπεδα εξερεύνησης των αντικειμένων Α1 και Α2, με αποτέλεσμα έναν δείκτη διάκρισης (DI) κοντά στο μηδέν και για τις δύο ομάδες (Εικ. 1bi; T-test Student δύο ουρών: t(17) {{ 6}}.086, σ=0.40). Τα συνολικά επίπεδα εξερεύνησης ήταν επίσης παρόμοια μεταξύ των ομάδων Χωρίς Ενημέρωση και Ενημέρωση κατά τη διάρκεια της εκπαίδευσης (Εικ. 1bii; t-test Student δύο ουρών: t(17)=0.035, p=0.97, n=10,9).

Για να επιβεβαιώσετε ότι η αρχική θέση του αντικειμένουμνήμηαποκτήθηκε με επιτυχία, στη συνέχεια αξιολογήσαμε την απόδοση κατά τη διάρκεια της περιόδου λειτουργίας ενημέρωσης (Εικ. 1γ). Τα ποντίκια στην ομάδα Χωρίς ενημέρωση έδειξαν ίση προτίμηση για τις θέσεις Α1 και Α2 που εκτέθηκαν εκ νέου, με αποτέλεσμα ένα DI σχεδόν μηδέν (Εικ. 1ci). Τα ποντίκια στην ομάδα Update, από την άλλη πλευρά, εξερεύνησαν κατά προτίμηση το μετακινούμενο αντικείμενο A3 σε σύγκριση με το μη μετακινημένο αντικείμενο A1 και έδειξαν σημαντικά υψηλότερο DI σε σύγκριση με την ομάδα No Update (Εικ. 1ci, t-test Student δύο ουρών: t( 17)=3.57, p=0.002). Η συνολική εξερεύνηση ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη στην ομάδα Ενημέρωση σε σύγκριση με την ομάδα Χωρίς ενημέρωση κατά τη διάρκεια της συνεδρίας ενημέρωσης (Εικ. 1cii; Δοκιμασία t-test Student δύο ουρών: t(17)=3.39, p {{22} }.004), υποδηλώνοντας ότι τα ποντίκια αφιέρωσαν περισσότερο χρόνο εξερευνώντας τα αντικείμενα όταν εισήχθη μια νέα τοποθεσία. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν ότι οι αρχικές θέσεις αντικειμένων μαθεύτηκαν σε νεαρά ποντίκια που εκτέθηκαν σε μια συνεδρία εκπαίδευσης 10- λεπτών, σύμφωνα με προηγούμενες αναφορές [41, 42].

Για να προσδιορίσετε αν το πρωτότυπομνήμητροποποιήθηκε για να συμπεριλάβει την ενημερωμένη θέση αντικειμένου (A3), δόθηκε σε ποντίκια μια δοκιμαστική συνεδρία στην οποία δοκιμάστηκε κάθε γνωστή τοποθεσία (A1, A2 και A3).σε μια νέα θέση αντικειμένου (A4) (Εικ. 1δ). Ακατέργαστο ποσοστό χρόνου εξερεύνησης για καθένα από τα τέσσερα αντικείμενα κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής συνεδρίας φαίνεται στο συμπληρωματικό Σχήμα 5Α. Και οι δύο ομάδες έδειξαν άθικτεςμνήμηγια τις αρχικές πληροφορίες, καθώς και τα ζώα Update και No Update προτίμησαν παρομοίως τη νέα θέση A4 σε σχέση με τις δύο αρχικές τοποθεσίες A1 (Εικ. 1di; T-test Student δύο ουρών: t(17)=0.31, p { {8}}.76) και A2 (Εικ. 1dii; t-test Student δύο ουρών: t(17)=1.66, p=0.12). Αυτό επιβεβαιώνει ότι μετά την ενημέρωση, οι αρχικές πληροφορίες διατηρούνται. Για να ελέγξουμε εάν οι ενημερωμένες πληροφορίες μαθεύτηκαν με επιτυχία, συγκρίναμε επίσης την εξερεύνηση της νέας τοποθεσίας Α4 με την ενημερωμένη τοποθεσία Α3 κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής περιόδου. Τα ποντίκια στην ομάδα Χωρίς ενημέρωση έδειξαν ίση προτίμηση για τα αντικείμενα A3 και A4, με αποτέλεσμα ένα DI που δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό από το μηδέν (Εικ. 1diii, t-test ενός δείγματος σε σύγκριση με 0: t(9)=1.55, p {{30}}.156). Τα ποντίκια που έλαβαν την ενημέρωση, από την άλλη πλευρά, εξερεύνησαν κατά προτίμηση την νέα θέση A4 έναντι της ενημερωμένης τοποθεσίας A3 (Εικ. 1diii, ένα δείγμα t-test σε σύγκριση με 0: t(8)=3.42, p { {41}}.009; t-test Student δύο ουρών που συγκρίνει την Ενημέρωση με την Χωρίς ενημέρωση: t(17)=2.92, p=0.0096), υποδεικνύοντας ότι ανακαλούν την ενημερωμένη τοποθεσία. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στη συνολική εξερεύνηση κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής συνεδρίας μεταξύ των ομάδων (Εικ. 1div; T-test Student δύο ουρών: t(17)=1.27, p=0.22). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν ότι τα νεαρά ζώα παρουσιάζουν συμπεριφορές προτίμησης που συνάδουν με την επιτυχή ανάκληση τόσο των αρχικών πληροφοριών όσο και των ενημερωμένων πληροφοριών κατά τη δοκιμή.

Εικ. 1 Τα νεαρά ποντίκια εκτελούν επιτυχώςμνήμηενημέρωση στην εργασία OUL. ένα Πειραματικό σχέδιο. β Συμπεριφορά προπονητικής περιόδου. Τα ποντίκια δείχνουν χαμηλό DI, υποδεικνύοντας ότι δεν προτιμούν το αντικείμενο A1 ή A2 (αριστερά) και έχουν παρόμοια επίπεδα συνολικής εξερεύνησης αντικειμένων (δεξιά). γ Ενημέρωση συμπεριφοράς συνεδρίας. (i) Τα ποντίκια στη συνθήκη Ενημέρωση προτιμούν τη νέα θέση Α3 από την οικεία θέση Α1, ενώ τα ποντίκια Χωρίς ενημέρωση εμφανίζουν παρόμοια εξερεύνηση των γνωστών θέσεων Α1 και Α2, με DI κοντά στο μηδέν. (ii) Τα ποντίκια ενημέρωσης εμφανίζουν σημαντικά μεγαλύτερη συνολική εξερεύνηση αντικειμένων από τα ποντίκια Χωρίς ενημέρωση. d Συμπεριφορά κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής συνεδρίας. (i) Τα ποντίκια τόσο στην ομάδα Ενημέρωση όσο και στην ομάδα Χωρίς ενημέρωση εμφανίζουν ανέπαφη μνήμη για την αρχική θέση αντικειμένου εκπαίδευσης A1. (ii) Και οι δύο ομάδες δείχνουν επίσηςμνήμηγια την αρχική θέση εκπαίδευσης Α2. (iii) Μόνο η ομάδα Ενημέρωση εμφανίζει μια προτίμηση για τη νέα τοποθεσία A4 έναντι της ενημερωμένης τοποθεσίας A3. Τα ποντίκια Χωρίς ενημέρωση προτιμούν εξίσου τα αντικείμενα Α3 και Α4. (iv) Τα ποντίκια εμφανίζουν παρόμοια επίπεδα συνολικής εξερεύνησης αντικειμένων κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής συνεδρίας. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. **p <>

Η αναστολή της πρωτεϊνοσύνθεσης του ιππόκαμπου μετά την ενημέρωση διαταράσσει τόσο τις ενημερωμένες πληροφορίες όσο και την αρχικήμνήμηΣτη συνέχεια δοκιμάσαμε εάν οι ενημερωμένες πληροφορίες που μάθαμε στην εργασία OUL τροποποιούν το πρωτότυπομνήμηή σχηματίζει μια νέα, ανεξάρτητη ένωση. Για να είναι η εργασία OUL ένα χρήσιμο μοντέλο ενημέρωσης μνήμης, η αρχική μνήμη πρέπει να ανακτηθεί και να τροποποιηθεί ώστε να ενσωματωθούν οι νέες πληροφορίες θέσης αντικειμένου που παρουσιάζονται κατά την ενημέρωση. Για να το ελέγξουμε αυτό, χρησιμοποιήσαμε δύο συμπληρωματικές μεθόδους για να εξετάσουμε αν το πρωτότυπομνήμησυμμετέχει στη συνεδρία ενημέρωσης του OUL: εγχύσεις ανισομυκίνης και ανάλυση catFISH.

Αρχικά, δοκιμάσαμε εάν η ανισομυκίνη που εφαρμόστηκε μετά την περίοδο λειτουργίας ενημέρωσης θα επηρεάσειμνήμηγια τις αρχικές πληροφορίες εκπαίδευσης. Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι η μετά την ανάκτηση έγχυση του αναστολέα πρωτεϊνοσύνθεσης ανισομυκίνης (ANI) μπορεί να εμποδίσει την επανασυγκράτηση υπό ορισμένες συνθήκες [43, 44] τουλάχιστον προσωρινά [βλέπε 45]. Μάλλον το πρωτότυπομνήμηκαθίσταται ασταθής από τις νέες πληροφορίες που παρουσιάζονται κατά την ανάκτηση, αλλά αποτυγχάνει να επανασταθεροποιηθεί σωστά απουσία πρωτεϊνικής σύνθεσης de novo, οδηγώντας σε διαταραχή της αρχικής μνήμης [6-9]. Όταν δεν παρουσιάζονται νέες πληροφορίες κατά τη διάρκεια της δοκιμής ανάκτησης, από την άλλη πλευρά, οι εγχύσεις ANI δεν έχουν κανένα αποτέλεσμα, καθώς απαιτούνται νέες πληροφορίες για την έναρξη της επανενοποίησης [6].

Για να προσδιορίσετε εάν οι ενημερωμένες πληροφορίες στην εργασία OUL δεσμεύουν το πρωτότυπομνήμη, εγχύσαμε ανισομυκίνη αμέσως μετά τη συνεδρία ενημέρωσης και αξιολογήσαμε εάν αυτό εξασθένησε την αρχική συσχέτιση (Εικ. 2α). Εγχύσαμε το ANI απευθείας στον ραχιαίο ιππόκαμπο (DH) μετά τη συνεδρία ενημέρωσης (Εικ. 2β, μεμονωμένες τοποθετήσεις σωληνίσκου φαίνονται στο Συμπληρωματικό Σχήμα 1Α), καθώς οι μνήμες θέσης χωροαντικειμένου είναι ιδιαίτερα ευαίσθητες σε χειρισμούς σε αυτήν την περιοχή [40, 46, 47 ] και αυτό θα μας επέτρεπε να τοπικοποιήσουμε τομνήμηενημέρωση και αποφυγή επιπτώσεων εκτός στόχου της παγκόσμιας αναστολής της πρωτεϊνοσύνθεσης. Τα ποντίκια έδειξαν παρόμοια εξερεύνηση των αντικειμένων Α1 και Α2 κατά την προπόνηση (αμφίδρομη ANOVA, καμία σημαντική κύρια επίδραση ή ενημέρωση x αλληλεπίδραση φαρμάκων) και είχαν παρόμοια επίπεδα συνολικής εξερεύνησης (αμφίδρομη ANOVA, καμία σημαντική κύρια επίδραση ή ενημέρωση x αλληλεπίδραση φαρμάκων) (Συμπληρωματικό Σχ. 1Β, Γ). Κατά τη διάρκεια της περιόδου λειτουργίας ενημέρωσης, τα ποντίκια στη συνθήκη Ενημέρωση έδειξαν σημαντική προτίμηση για το κινούμενο αντικείμενο και τα ποντίκια στη συνθήκη Χωρίς ενημέρωση συνέχισαν να δείχνουν παρόμοια εξερεύνηση των αντικειμένων και στις δύο γνωστές τοποθεσίες (Εικ. 2ci, αμφίδρομη ANOVA, σημαντική κύρια επίδραση της ενημέρωσης (F(1,29) {{10}}.31, p <0,0001), αλλά="" όχι="" σημαντική="" επίδραση="" του="" φαρμάκου="" ή="" σημαντική="" αλληλεπίδραση,="" n="6,6,12,9" )).="" δεν="" παρατηρήθηκαν="" διαφορές="" ομάδων="" μεταξύ="" ζώων="" που="" προορίζονταν="" να="" λάβουν="" ανισομυκίνη="" ή="" φορέα="" και="" δεν="" παρατηρήθηκε="" διαφορά="" στη="" συνολική="" εξερεύνηση="" αντικειμένων="" κατά="" την="" ενημέρωση="" (εικ.="" 2cii,="" αμφίδρομη="" anova,="" καμία="" σημαντική="" κύρια="" επίδραση="" ή="" αλληλεπίδραση).="" αυτό="" υποδηλώνει="" ότι="" πριν="" από="" την="" έγχυση="" ανισομυκίνης,="" τα="">

Εικ. 2 Διαταραχή της πρωτεϊνοσύνθεσης μετάμνήμηΗ ενημέρωση βλάπτει τόσο το πρωτότυπομνήμηκαι τις ενημερωμένες πληροφορίες σε νεαρά ποντίκια. ένα Πειραματικό σχέδιο. β Αντιπροσωπευτική τοποθέτηση σωληνίσκου με στόχο την περιοχή CA1 του ραχιαίου ιππόκαμπου. γ Ενημέρωση συμπεριφοράς συνεδρίας. (i) Και οι δύο ομάδες ποντικών στη συνθήκη Ενημέρωση προτίμησαν την νέα θέση Α3 έναντι της γνωστής τοποθεσίας Α1, ενώ τα ποντίκια Χωρίς ενημέρωση εμφανίζουν DI κοντά στο μηδέν, υποδεικνύοντας καμία προτίμηση. (ii) Τα ποντίκια παρουσιάζουν παρόμοια συνολική εξερεύνηση μεταξύ των ομάδων. d Συμπεριφορά κατά τη διάρκεια της δοκιμαστικής συνεδρίας. (i) Για το αρχικό αντικείμενο εκπαίδευσης A1, τα ποντίκια στην κατάσταση Χωρίς ενημέρωση εμφανίζουν ανέπαφη μνήμη ανεξάρτητα από τη φαρμακευτική αγωγή. Για την συνθήκη Update, τα ποντίκια που έλαβαν ανισομυκίνη εμφανίζουν σημαντικά μειωμένο DI για το A1 σε σύγκριση με τους μάρτυρες φορέα, υποδεικνύοντας ότι η ανισομυκίνη έχει εξασθενήσειμνήμηγια τις αρχικές πληροφορίες εκπαίδευσης στο Update animals. (ii) Για το αρχικό αντικείμενο εκπαίδευσης Α2, δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση της ανισομυκίνης σε ζώα χωρίς ενημέρωση ή ενημέρωση. (iii) Για την ενημερωμένη θέση A3, τα ζώα No Update εμφάνισαν χαμηλό DI σε σύγκριση με το αντικείμενο A4, ανεξάρτητα από την έγχυση φαρμάκου. Ενημερωμένα ζώα στα οποία δόθηκε ανισομυκίνη εμφάνισαν σημαντικά χαμηλότερο DI από τους ελέγχους οχημάτων, υποδεικνύοντας ότι η ανισομυκίνη εξασθενούσε τη μνήμη για τις ενημερωμένες πληροφορίες. iv) Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στη συνολική εξερεύνηση κατά τη δοκιμή. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. **p < 0.01,="" ***p="">< 0.001,="" ****p="">< 0,0001.="" veh,="" όχημα;="" ani,="">