Νευροπροστατευτικά οφέλη της άσκησης και του MitoQ στη λειτουργία της μνήμης, τη μιτοχονδριακή δυναμική, το οξειδωτικό στρες και τη νευροφλεγμονή σε γηρασμένους αρουραίους που προκαλούνται από D-γαλακτόζη Μέρος 1

Περίληψη:

Η άσκηση και τα αντιοξειδωτικά έχουν οφέλη για την υγεία που βελτιώνουν τη γνωστική εξασθένηση και μπορεί να δρουν συνεργικά. Σε αυτή τη μελέτη, εξετάσαμε τα αποτελέσματα της άσκησης σε διάδρομο (TE) και της στοχευμένης στα μιτοχόνδρια αντιοξειδωτικής μενακινόνης (MitoQ), μεμονωμένα ή συνδυαστικά, στη μάθηση και τη μνήμη, τη μιτοχονδριακή δυναμική, τη δραστηριότητα της οξειδάσης NADPH και τη νευροφλεγμονή και την αντιοξειδωτική δραστηριότητα στον ιππόκαμπο του D- γήρανση αρουραίων που προκαλούνται από γαλακτόζη.

Τα αντιοξειδωτικά είναι ουσίες που καταπολεμούν τις ελεύθερες ρίζες. Βοηθούν το σώμα να αποτρέψει την οξείδωση των κυττάρων. Η οξείδωση των κυττάρων μπορεί να οδηγήσει σε διάφορες ασθένειες, συμπεριλαμβανομένης της νόσου του Αλτσχάιμερ.

Καθώς η τάση της γήρανσης του πληθυσμού εντείνεται, όλο και περισσότεροι άνθρωποι ενδιαφέρονται για τρόπους καταπολέμησης της νόσου του Αλτσχάιμερ. Η σύγχρονη ιατρική έρευνα έχει βρει ότι τα αντιοξειδωτικά μπορούν να βοηθήσουν τους ανθρώπους να διατηρήσουν καλή μνήμη.

Μελέτες έχουν δείξει ότι η τακτική κατανάλωση τροφών που περιέχουν αντιοξειδωτικά, όπως φράουλες, βατόμουρα, ελαιόλαδο κ.λπ., μπορεί να μειώσει αποτελεσματικά τον κίνδυνο της νόσου του Αλτσχάιμερ. Ταυτόχρονα, το αντιοξειδωτικό σύστημα του σώματος μπορεί να ενισχυθεί μέσω της σωστής άσκησης, της τακτικής ζωής και μιας ισορροπημένης διατροφής, η οποία μπορεί επίσης να προστατεύσει αποτελεσματικά τον εγκέφαλό μας.

Εκτός από το ότι βοηθούν στη διατήρηση της μνήμης, τα αντιοξειδωτικά έχουν πολλά άλλα οφέλη. Για παράδειγμα, μπορούν να βελτιώσουν τις δερματικές παθήσεις, να μειώσουν τον κίνδυνο καρδιαγγειακών παθήσεων κ.λπ. Επομένως, η σωστή πρόσληψη τροφών που περιέχουν αντιοξειδωτικά και η διατήρηση ενός υγιεινού τρόπου ζωής ωφελεί το σώμα και τον εγκέφαλό μας.

Με λίγα λόγια, τα αντιοξειδωτικά είναι αδιαχώριστα από τη μνήμη. Προσέχοντας τη διατροφή και τον τρόπο ζωής μας, μπορούμε να προλάβουμε αποτελεσματικά τη νόσο του Αλτσχάιμερ διατηρώντας παράλληλα καλή σωματική και ψυχική υγεία. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη και το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη επειδή μπορεί επίσης να ρυθμίσει την ισορροπία των νευροδιαβιβαστών, όπως η αύξηση του επιπέδου της ακετυλοχολίνης και των αυξητικών παραγόντων, που είναι πολύ σημαντικοί για τη μνήμη και τη μάθηση. Επιπλέον, το Cistanche μπορεί επίσης να βελτιώσει τη ροή του αίματος και να προωθήσει την παροχή οξυγόνου, η οποία μπορεί να εξασφαλίσει ότι ο εγκέφαλος αποκτά επαρκή διατροφή και ενέργεια, βελτιώνοντας έτσι τη ζωτικότητα και την αντοχή του εγκεφάλου.

Κάντε κλικ στα συμπληρώματα γνώσης για να ενισχύσετε τη μνήμη

Η ΤΕ μόνη της και η ΤΕ σε συνδυασμό με μιτοχονδριακούς αρουραίους που γονιμοποιούν μείωσαν τους παράγοντες μιτοχονδριακής σχάσης (Drp1, Fis1) και αύξησαν τους μιτοχονδριακούς παράγοντες σύντηξης (Mfn1, Mfn2, Opa1).

Αυτές οι ομάδες εμφάνισαν επίσης βελτιωμένη δραστηριότητα οξειδάσης NADPH και αντιοξειδωτική δράση (SOD-2, καταλάση). Το TE ή το MitoQ μόνο μείωσαν τη νευροφλεγμονώδη απόκριση (COX-2, TNF-), αλλά η καταστολή ήταν μεγαλύτερη με τον συνδυασμό τους.

Επιπλέον, η αυξημένη νευροφλεγμονή στη γήρανση στην οδοντωτή έλικα μειώθηκε στην ΤΕ αλλά όχι στη θεραπεία με MitoQ.

Τα τεστ μάθησης και μνήμης έδειξαν ότι, αντιθέτως, μόνο το MitoQ επέδειξε κάποια παρόμοια αποτελέσματα με το ΤΕ αλλά όχι οριστική βελτίωση.

Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη έδειξε ότι το MitoQ άσκησε κάποια θετικά αποτελέσματα στη γήρανση όταν χρησιμοποιήθηκε ως μεμονωμένη θεραπεία, αλλά το TE είχε πιο αποτελεσματικό ρόλο στη γνωστική εξασθένηση, το οξειδωτικό στρες, τη φλεγμονή και τη δυσλειτουργία των μιτοχονδρίων.

Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι ο συνδυασμός TE και MitoQ δεν άσκησε συνεργιστικά αποτελέσματα και ότι η τακτική άσκηση πρέπει να είναι η προτεραιότητα στη νευροπροστασία της γνωστικής έκπτωσης που σχετίζεται με την ηλικία.

Λέξεις-κλειδιά: γήρανση; άσκηση σε διάδρομο? MitoQ; NADPH οξειδάση; μιτοχονδριακή δυναμική; νευροφλεγμονή.

1. Εισαγωγή

Η γήρανση είναι μια αναπόφευκτη διαδικασία σωματικής και λειτουργικής παρακμής, συμπεριλαμβανομένης μιας σταδιακής μείωσης της γνωστικής ικανότητας, όπως η μειωμένη μνήμη και η χωρική ικανότητα [1].

Οι αλλαγές στον εγκέφαλο που σχετίζονται με την ηλικία αυξάνουν την ευαισθησία σε διάφορες ασθένειες και τελικά έχουν ως αποτέλεσμα χαμηλότερη ποιότητα ζωής. Η επιτυχής γήρανση αναφέρεται γενικά στην απουσία ασθένειας ή βλάβης, στη διατήρηση της σωματικής και γνωστικής λειτουργίας και στη συνεχή συμμετοχή σε κοινωνικές και παραγωγικές δραστηριότητες [2]. Η διατήρηση της αξιοπρέπειας και της αξίας κάποιου ως ανθρώπου είναι ζωτικής σημασίας, ακόμη και κατά τη διαδικασία της γήρανσης.

Μεταξύ πολλών αλλαγών στον τρόπο ζωής που εντοπίστηκαν για την πρόληψη της γνωστικής έκπτωσης με τη γήρανση, η πρόσφατη προσοχή στράφηκε προς τη μη φαρμακευτική θεραπεία, όπως η σωματική δραστηριότητα και τα συμπληρώματα διατροφής, λόγω της έλλειψης φαρμακολογικών επιδράσεων και του αυξανόμενου κόστους της συμβατικής ιατρικής. Πράγματι, ένας συνδυασμός άσκησης και δίαιτας με αντιοξειδωτικά συμπληρώματα, όπως η επικατεχίνη και η ασταξανθίνη, έχει αποδειχθεί ότι επάγει συνεργιστικά αποτελέσματα στην εξαρτώμενη από τον ιππόκαμπο λειτουργία [3,4].

Αντίθετα, αρκετές μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι η άσκηση μόνη της, αλλά όχι σε συνδυασμό με διατροφικές αλλαγές, βελτιώνει τις λειτουργίες μάθησης και μνήμης [5,6], εγείροντας το ερώτημα εάν η συνδυασμένη παρέμβαση θα μπορούσε να έχει μεγαλύτερες επιπτώσεις στη γνωστική λειτουργία από την άσκηση από μόνη της.

Αν και οι πιθανοί μηχανισμοί στους οποίους βασίζεται η άσκηση και/ή η αντιοξειδωτική θεραπεία, η λειτουργία του ιππόκαμπου περιλαμβάνει την πλαστικότητα των νευρώνων και τα σχετικά μοριακά της επίπεδα με νευροτροπικούς παράγοντες [4,7], μηχανισμοί, όπως η μιτοχονδριακή δυναμική και το νευρο-ανοσοποιητικό σύστημα, δεν είναι πλήρως κατανοητοί.

Τα μιτοχόνδρια είναι δυναμικά ενδοκυτταρικά οργανίδια υπεύθυνα για τη βιολογική οξείδωση στα περισσότερα ευκαρυωτικά κύτταρα, των οποίων η δυναμική ρυθμίζεται από επαναλαμβανόμενες διαδικασίες σύντηξης (επιμήκυνση των μιτοχονδρίων) και σχάσης (θρυμματισμός των μιτοχονδρίων) [8,9].

Αρκετές πρωτεΐνες που σχετίζονται με τη σύντηξη και τη σχάση εμπλέκονται στη δυναμική των μιτοχονδρίων, οι οποίες είναι απαραίτητες για τη διατήρηση της φυσιολογικής λειτουργίας των μιτοχονδρίων [10,11].

Ωστόσο, η ακανόνιστη έκφραση των πρωτεϊνών μπορεί να οδηγήσει σε μη φυσιολογικές αλλαγές στα μιτοχόνδρια. Συγκεκριμένα, η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία είναι χαρακτηριστικό της γήρανσης [12] και η επίμονη φλεγμονή, το οξειδωτικό στρες και η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία συμβάλλουν στη μειωμένη λειτουργία του εγκεφάλου επιταχύνοντας τη γήρανση του εγκεφάλου [13,14].

Επιπλέον, η γήρανση συνοδεύεται από χαμηλό επίπεδο χρόνιας φλεγμονής στο ανοσοποιητικό σύστημα και στο κεντρικό νευρικό σύστημα (ΚΝΣ), το οποίο είναι γνωστό ότι συμβάλλει σε πολλές ασθένειες που σχετίζονται με την ηλικία [15,16].

Η νευροφλεγμονή στο ΚΝΣ εξελίσσεται όταν τα νευρογλοιακά κύτταρα, όπως τα μικρογλοία και τα αστροκύτταρα, ενεργοποιούνται επίμονα ως απάντηση στο οξειδωτικό στρες [17].

Τα αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) παράγονται από την οξειδάση NADPH (NOX), η οποία είναι ένα σύμπλοκο ενζύμων που συνδέεται με τη μεμβράνη. Υπάρχουν διάφοροι υποτύποι NOX, μεταξύ των οποίων το NOX2 εκφράζεται σε διάφορους τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των νευρώνων και των ενδοθηλιακών κυττάρων, και εκφράζεται σε υψηλά επίπεδα σε μικρογλοιακά κύτταρα που εμπλέκονται στην ανοσοαπόκριση και τη φλεγμονή [18-20].

Το NOX2 περιλαμβάνει και τις δύο υπομονάδες μεμβράνης (gp91phox, p22phox) και κυτοσολικές (p47phox, p67phox). Τα αυξημένα επίπεδα ROS λόγω της δραστηριότητας NOX προάγουν τη φλεγμονή, ενεργοποιώντας τα νευρογλοιακά κύτταρα, τα οποία με τη σειρά τους ενισχύουν περαιτέρω την έκκριση προφλεγμονωδών κυτοκινών, το οξειδωτικό στρες και τον τραυματισμό των ελεύθερων ριζών, οδηγώντας τελικά τον θάνατο των νευρωνικών κυττάρων [21-23].

Η γήρανση του εγκεφάλου παίζει σημαντικό ρόλο στη γνωστική εξασθένηση και σχετίζεται στενά με τις νευροεκφυλιστικές διαταραχές. Αν και είναι αδύνατο να αποτραπεί η γενική έκπτωση της εγκεφαλικής λειτουργίας που συμβαίνει κατά τη φυσική γήρανση, η σωματική δραστηριότητα και η κατανάλωση αντιοξειδωτικών είναι χρήσιμες ως μη επεμβατικές μέθοδοι για τη διατήρηση της εγκεφαλικής λειτουργίας, ιδιαίτερα της γνωστικής λειτουργίας.

Συγκεκριμένα, η άσκηση φέρεται να βελτιώνει τη δυσλειτουργία του εγκεφάλου προάγοντας τη νευροπλαστικότητα, βελτιώνοντας τη μεταβολική απόδοση και αυξάνοντας την ανοχή στο οξειδωτικό στρες [24,25].

Ωστόσο, οι μοριακοί μηχανισμοί που είναι υπεύθυνοι για την ενίσχυση της γνωστικής λειτουργίας ή την πρόληψη της παρακμής της παραμένουν άγνωστοι. Όσον αφορά τα αντιοξειδωτικά, το στοχευμένο στα μιτοχόνδρια αντιοξειδωτικό μιτοκινόνη (MitoQ) είναι γνωστό ότι διασχίζει την εσωμιτοχονδριακή μεμβράνη και συσσωρεύεται στα μιτοχόνδρια, σε αντίθεση με άλλα αντιοξειδωτικά, για να μειώσει τα επίπεδα ROS που δημιουργούνται απευθείας στα μιτοχόνδρια [26].

Αν και λίγες μελέτες έχουν διεξαχθεί για το MitoQ, διάφορες αναφορές περιγράφουν τις αντιοξειδωτικές του επιδράσεις. Μελέτες των Gioscia-Ryan et al. [27] και Rossman et al. [28] έδειξε ότι το MitoQ μείωσε τα επίπεδα ROS και αύξησε την παραγωγή ΝΟ στα μιτοχόνδρια των γηρασμένων αιμοφόρων αγγείων.

Vergeadeet al. [29] και Braakhuis et al. [30] ανέφερε ότι το MitoQ διατήρησε τις δραστηριότητες των αντιοξειδωτικών ενζύμων, όπως το SOD-2, η καταλάση και το GPx, κατά τη διαδικασία γήρανσης.

Όσον αφορά την σύλληψη του εγκεφάλου, απαιτείται περαιτέρω έρευνα για την αποσαφήνιση των μοριακών μηχανισμών που ευθύνονται για τα θετικά αποτελέσματα της άσκησης και του MitoQ στη μείωση της εγκεφαλικής λειτουργίας.

Μέχρι τώρα, η έρευνα γήρανσης που χρησιμοποιεί διάφορα ζωικά μοντέλα έχει διερευνήσει τους υποκείμενους μηχανισμούς γήρανσης του εγκεφάλου. Συγκεκριμένα, η χορήγηση D-γαλακτόζης (D-gal) φέρεται να προκαλεί γήρανση σε ζώα που μοιάζει με την ανθρώπινη γήρανση, συμπεριλαμβανομένης της απώλειας μνήμης, νευροεκφυλισμού, μεταβολών στους βιοχημικούς δείκτες οξειδωτικού στρες, μειωμένης ανοσοδραστικότητας και μη φυσιολογικής ρύθμισης της γονιδιακής έκφρασης [31].

Τα τρωκτικά στα οποία χορηγήθηκε D-gal έδειξαν σταδιακή μείωση της μάθησης και της μνήμης, αυξημένη παραγωγή ελεύθερων ριζών στον εγκέφαλο, μειωμένη ομοιόσταση ασβεστίου και μιτοχονδριακή δυσλειτουργία [32,33], παρέχοντας έτσι ένα ζωικό μοντέλο γήρανσης του εγκεφάλου [34].

Επομένως, χρησιμοποιώντας το μοντέλο γήρανσης αρουραίων που προκαλείται από την D-γαλακτόζη, διερευνήσαμε τα αποτελέσματα της άσκησης σε διάδρομο (TE) και του MitoQ, ως ανεξάρτητες ή συνδυασμένες θεραπείες, στη σχάση και τη σύντηξη των μιτοχονδρίων, τη φλεγμονή και την αντιοξειδωτική δράση, καθώς και τη γνωστική ικανότητα που εξαρτάται από τον ιππόκαμπο.

Υποθέσαμε ότι μια 8-εβδομαδιαία άσκηση σε διάδρομο και MitoQ σε αρουραίους που έλαβαν θεραπεία με D-γαλακτόζη θα βελτίωνε είτε επιπρόσθετα είτε συνεργιστικά την πτώση της λειτουργίας μάθησης και μνήμης και επάγουσες ευεργετικές αλλαγές στα επίπεδα των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στη νευροπροστασία του ιππόκαμπου.

2. Υλικά και Μέθοδοι

2.1. Πειραματικά Ζώα

Αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (SD) ηλικίας έξι εβδομάδων ελήφθησαν από την JA Bio (Gyeonggi-do, Κορέα). Οι αρουραίοι εκτράφηκαν στο Εργαστήριο Ζώων του Εθνικού Αθλητικού Πανεπιστημίου της Κορέας (22 ± 2◦C, υγρασία 50% ± 5% και κύκλος φωτός/σκότους 12/12 ώρες).

Τρόφιμα και πόσιμο νερό παρείχαν κατά βούληση. Οι αρουραίοι χωρίστηκαν σε 5 ομάδες: νεαρή ομάδα ελέγχου (Y-CON, n=12), ομάδα D-γαλακτόζης (D-CON, n=12), ομάδα D-γαλακτόζη συν ΤΕ (D- TE,n=12), D-γαλακτόζη συν ομάδα MitoQ (D-MI, n=12) και D-γαλακτόζη συν TE και MitoQgroup (D-COMBI, n=12). Οι αρουραίοι υπέστησαν ευθανασία μετά την ολοκλήρωση 8 εβδομάδων ΤΕ και δοκιμών συμπεριφοράς μνήμης με εισπνοή CO2 χρησιμοποιώντας θάλαμο ευθανασίας.

Το πρωτόκολλο της μελέτης έλαβε έγκριση από την Επιτροπή Θεσμικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Εθνικού Αθλητικού Πανεπιστημίου της Κορέας (KNSU-IACUC-2018-05).

2.2. Οργάνωση Φαρμάκων

Η μέθοδος που περιγράφεται από τους Lei et al. [31] χρησιμοποιήθηκε για να προκαλέσει τη γήρανση των πειραματόζωων. Συγκεκριμένα, το D-gal (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ) διαλύθηκε σε φυσιολογικό ορό και μια δόση 100 mg/kg χορηγήθηκε με ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) ένεση μία φορά την εβδομάδα για 10 εβδομάδες.

Η μέθοδος σίτισης που προτείνεται από τους Smith και Murphy [26] προσαρμόστηκε για τη χορήγηση του MitoQ σε αυτό το πείραμα.

Το MitoQ αναμίχθηκε με στείρο ορό για τελική αραίωση 0,1 mM/mL. Οι ηλικιωμένοι αρουραίοι που προκλήθηκαν από D-γαλακτόζη εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με 100 μΜ/kg MitoQ (δύο φορές την εβδομάδα) για 8 εβδομάδες.

2.3. Άσκηση σε διάδρομο (ΤΕ)

Οι ομάδες D-TE και D-COMBI υποβλήθηκαν σε ένα πρόγραμμα άσκησης προοδευτικής φόρτωσης χρησιμοποιώντας έναν διάδρομο τρωκτικών (8 Lanes, Daemyung Scientific Co, Ltd., Σεούλ, Κορέα).

Τα ζώα πραγματοποίησαν αρχικά εκπαίδευση εγκλιματισμού για 1 εβδομάδα (2 m/min για τα πρώτα 5 λεπτά, 5 m/min για τα επόμενα 5 λεπτά και 8 m/min για τα τελευταία 20 λεπτά).

Το κύριο πρόγραμμα άσκησης εκτελούνταν 5 ημέρες την εβδομάδα τις επόμενες 8 εβδομάδες. Αυτό το πρόγραμμα σχεδιάστηκε ως εξής, σχετικά με το πρόγραμμα προοδευτικής άσκησης που προτείνεται από τους Hong et al. [35]:10–12 m/min για 10 λεπτά την εβδομάδα 1. 10–12 m/min για 20 λεπτά την εβδομάδα 2. 18–20 m/min για 20 λεπτά την εβδομάδα 3. 18–20 m/min για 30 λεπτά την Εβδομάδα 4. και 18–20 m/min για 50 λεπτά στις Εβδομάδες 5–8. Η κλίση του διαδρόμου ορίστηκε στο 0%.

2.4. Εργασία Παθητικής Αποφυγής

Η εργασία παθητικής αποφυγής είναι μια δοκιμασία με κίνητρο φόβου που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση της ικανότητας εργασιακής μνήμης μικρών πειραματόζωων. Στην παρούσα μελέτη, η εργασία παθητικής αποφυγής πραγματοποιήθηκε 3 ημέρες πριν από το τέλος του προγράμματος ΤΕ.

Η συσκευή για την εργασία της παθητικής αποφυγής αποτελούνταν από δύο θαλάμους: Ο μπροστινός θάλαμος ήταν ένα καλά φωτισμένο, φωτεινό, λευκό κουτί (18 × 18 × 25 cm3), συνδεδεμένο με τον πίσω θάλαμο, ο οποίος ήταν ένα σκούρο μαύρο κουτί (18 × 18 × 25 cm3).

Ο πίσω θάλαμος είχε ένα δάπεδο από ανοξείδωτο χάλυβα ικανό να προκαλεί ηλεκτροπληξία. Ο τοίχος μεταξύ των δύο θαλάμων είχε μια πόρτα τύπου γκιλοτίνας που μπορούσε να ανοίγει και να κλείνει.

Ο χρόνος που χρειάστηκε για να εισέλθει το ζώο στον πίσω θάλαμο μέσω του μπροστινού θαλάμου μετρήθηκε (αρχικός χρόνος λανθάνουσας κατάστασης) και στη συνέχεια έγινε ηλεκτροπληξία (0,5 mA) για 2 δευτερόλεπτα.

Το ζώο αφαιρέθηκε μετά από 5 δευτερόλεπτα και επέστρεψε στον κλωβό εκτροφής του. Η εργασία επαναλήφθηκε 72 ώρες αργότερα χρησιμοποιώντας μια πανομοιότυπη μέθοδο, και ο χρόνος εισόδου του ζώου στον πίσω θάλαμο μέσω του μπροστινού θαλάμου καταγράφηκε (χρόνος λανθάνουσας διατήρησης) έως το μέγιστο των 300 δευτερολέπτων.

2.5. Δοκιμή λαβύρινθου νερού Morris

Το τεστ υδάτινου λαβύρινθου Morris χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση της χωρικής μάθησης και μνήμης των τρωκτικών. Η δοκιμή πραγματοποιήθηκε σε δωμάτιο με ελεγχόμενη θερμοκρασία (21–23 ◦C), υγρασία (50–60%) και φωτισμό χρησιμοποιώντας κυκλική δεξαμενή νερού (διάμετρος 120 cm × ύψος 15 cm) γεμάτη με νερό (20–24 ◦C). ).

Προστέθηκε αποβουτυρωμένο γάλα σε σκόνη στο νερό για να κρύψει την πλατφόρμα διαφυγής (διάμετρος 10 cm), η οποία τοποθετήθηκε στο πάτωμα της δεξαμενής περίπου 1 cm κάτω από την επιφάνεια του νερού.

Η απόσταση που διένυσε το ζώο πριν φτάσει στην πλατφόρμα (απόσταση διαφυγής) και ο χρόνος που χρειάστηκε για να φτάσει στην πλατφόρμα (χρόνος καθυστέρησης διαφυγής) μετρήθηκαν πριν και μετά το πρόγραμμα TE χρησιμοποιώντας λογισμικό παρακολούθησης βίντεο EthoVision XT8 (Noldus, Wageningen, Ολλανδία) και κάμερα εγκατεστημένο στην οροφή πάνω από το κέντρο της δεξαμενής. Η δεξαμενή νερού χωρίστηκε σε τέταρτα με την ένδειξη Ζώνες 1–4 και η πλατφόρμα τοποθετήθηκε στη Ζώνη 1.

Για κάθε ομάδα θεραπείας, η δοκιμή υδάτινου λαβύρινθου πραγματοποιήθηκε 5 ημέρες την εβδομάδα. Ο αρουραίος ξεκινούσε πάντα από την ίδια θέση και του επιτρέπονταν δύο 60- απόπειρες εξάσκησης να προσπαθήσει να φτάσει στην πλατφόρμα, η οποία βρισκόταν πάντα στην ίδια τοποθεσία.

Μετά από 48 ώρες ανάπαυσης, η πλατφόρμα αφαιρέθηκε την έβδομη ημέρα. Η απόσταση διαφυγής και ο χρόνος καθυστέρησης διαφυγής μετρήθηκαν για 60 δευτερόλεπτα με τον αρουραίο να ξεκινά από την ίδια θέση.

For more information:1950477648nn@gmail.com