Διαμόρφωση της οδού σηματοδότησης του υποδοχέα υδρογονάνθρακα αρυλίου στην αντιγραφή του ιού Junín Μέρος 2

3. Αποτελέσματα και συζήτηση

3.1. Η οδός AHR Υπερ-αντιπροσωπεύεται κατά τη διάρκεια της λοίμωξης JUNV

Το ήπαρ είναι ένας από τους κύριους στόχους κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από JUNV [22]. Για να διασαφηνίσουμε τους μοριακούς μηχανισμούς που εμπλέκονται σε μια λοίμωξη ηπατοκυττάρων, πραγματοποιήσαμε μια εξέταση μικροσυστοιχίας Affymetrix για να προσδιορίσουμε τα διαφορικά εκφρασμένα γονίδια σε ανθρώπινα κύτταρα HepG2 που προέρχονται από ήπαρ και μολυσμένα με JUNV IV4454 για 24 ή 48 ώρες.

Χρησιμοποιήσαμε το λογισμικό Transcriptome Analysis Console από την ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA για να αξιολογήσουμε τα διαφορικά εκφρασμένα γονίδια στα μολυσμένα με JUNV κύτταρα σε σύγκριση με τον έλεγχο (Εικόνα 1a,b). Συνολικά 266 και 313 διαφορικά εκφρασμένα γονίδια ανιχνεύθηκαν στις 24 και 48 ώρες pi, αντίστοιχα (Εικόνα 1a,b).

Δοκιμασία μικροσυστοιχίας Affymetrix (n=3 ανεξάρτητα πειράματα ανά συνθήκη). Τα γονίδια ξενιστές που εμφανίζουν τουλάχιστον 1.6-πλάσια αλλαγή στην έκφραση και 95 τοις εκατό πιθανότητα να εκφραστούν διαφορικά (ρ=0.05) ελήφθησαν υπόψη για περαιτέρω ανάλυση. Τα γονίδια που εμφανίζονται με κόκκινο ρυθμίστηκαν προς τα πάνω, τα γονίδια που εμφανίζονται με πράσινο ρυθμίστηκαν προς τα κάτω και τα γονίδια με γκρι δεν έδειξαν καμία αλλαγή στην έκφραση σε σύγκριση με τα μη μολυσμένα κύτταρα HepG2. (β) Διαφορικά εκφρασμένα γονίδια μεταξύ ψευδο-μολυσμένων και μολυσμένων με JUNV κυττάρων HepG2 στις 48 ώρες pi. (γ) Ανάλυση γονιδιακής οντολογίας γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά σε κύτταρα HepG2 μολυσμένα με JUNV στις 48 ώρες pi. (δ) Ανάλυση Υπεραναπαράστασης Μονοπατιού των κυττάρων HepG2 που έχουν μολυνθεί με JUNV σε σύγκριση με κύτταρα μολυσμένα με ψευδή που δείχνουν τις κύριες οδούς σηματοδότησης που επηρεάζονται κατά τη διάρκεια της μόλυνσης. Η κόκκινη γραμμή υπογραμμίζει τη διαδρομή AHR. Η διακεκομμένη μπλε γραμμή δείχνει p=0.05. Οι τιμές p καθορίστηκαν από το λογισμικό WebGestalt (http://www.webgestalt.org, πρόσβαση στις 3 Ιουλίου 2020).

Υπάρχει στενή σχέση μεταξύ των γονιδίων του ξενιστή και της ανοσίας. Τα γονίδια ξενιστή καθορίζουν σε μεγάλο βαθμό την ανάπτυξη και τη λειτουργία του ανοσοποιητικού συστήματος ενός ατόμου και μπορούν να επηρεάσουν την αντίσταση ενός ατόμου σε διαφορετικά παθογόνα.

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι ορισμένες γονιδιακές μεταλλάξεις μπορεί να οδηγήσουν σε ανισορροπίες στο ανοσοποιητικό σύστημα. Για παράδειγμα, μερικοί άνθρωποι μπορεί να υποφέρουν από ασθένειες στις οποίες το ανοσοποιητικό σύστημα αντιδρά υπερβολικά, προκαλώντας το ανοσοποιητικό σύστημα να επιτεθεί στους ιστούς του σώματός του, όπως ο ρευματοειδής, ο συστηματικός ερυθηματώδης λύκος και άλλες ασθένειες. Επιπλέον, η αντοχή σε παθογόνα όπως βακτήρια, ιοί και παράσιτα συνδέεται επίσης με γενετικές διαφορές. Μερικοί άνθρωποι γεννιούνται με ένα πιο αποτελεσματικό ανοσοποιητικό σύστημα που απομακρύνει τα παθογόνα γρηγορότερα και πληρέστερα.

Η έρευνα για τη σχέση μεταξύ των γονιδίων του ξενιστή και της ανοσίας μας έδωσε μια βαθύτερη κατανόηση των αμυντικών μηχανισμών του σώματος και μας βοήθησε επίσης να κατανοήσουμε καλύτερα την ανταπόκριση του οργανισμού σε διάφορες ασθένειες. Αυτό έχει μεγάλη σημασία για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών.

Επομένως, θα πρέπει να δώσουμε προσοχή στη σημασία του γενετικού ελέγχου και να μάθουμε και να κατανοήσουμε τις διαφορές στα ανθρώπινα γονίδια για να προστατεύσουμε καλύτερα το ανοσοποιητικό μας σύστημα, να ενισχύσουμε τη σωματική μας διάπλαση και να χτίσουμε ένα δυνατό σώμα. Από αυτή την άποψη, πρέπει να βελτιώσουμε το ανοσοποιητικό μας. Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την ανοσία, επειδή το Cistanche είναι πλούσιο σε μια ποικιλία αντιοξειδωτικών ουσιών, όπως βιταμίνη C, βιταμίνη C, καροτενοειδή κ.λπ. Αυτά τα συστατικά μπορούν να καθαρίσουν τις ελεύθερες ρίζες και να μειώσουν το οξειδωτικό στρες. Διεγείρει και βελτιώνει την αντίσταση του ανοσοποιητικού συστήματος.

Κάντε κλικ στα οφέλη του σωληνίσκου cistanche

Για να μελετήσουμε περαιτέρω τον αντίκτυπο του JUNV στο κυτταρικό τοπίο, χρησιμοποιήσαμε το λογισμικό WebGestalt (http://www.webgestalt.org, πρόσβαση στις 3 Ιουλίου 2020), το οποίο χρησιμοποιεί τη βάση δεδομένων Wikipathways ως χώρο αποθήκευσης για την εκτέλεση ανάλυσης οντολογίας γονιδίων ( Σχήμα 1γ) και για να προσδιοριστεί ποιες οδοί σηματοδότησης τροποποιήθηκαν διαφορικά σε σύγκριση με τον έλεγχο (Εικόνα 1δ).

Όσον αφορά την Ανάλυση Γονιδιακής Οντολογίας από τα διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια, συμπεραίνεται ότι η μόλυνση από JUNV επηρεάζει την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με το μεταβολισμό του RNA, τις κινάσες του ξενιστή και τον μεταβολισμό των λιπιδίων (Εικόνα 1γ). Αξίζει να σημειωθεί ότι αυτές οι βιολογικές διεργασίες και οι μοριακές λειτουργίες έχουν αναφερθεί ότι στοχεύονται από το JUNV κατά τη διάρκεια του κύκλου αντιγραφής του [23].

Επιπλέον, η Ανάλυση Υπεραναπαράστασης Μονοπατιού αποκάλυψε ότι η μόλυνση από JUNV εμπλουτίζει την οδό σηματοδότησης AHR στις 48 ώρες pi (Εικόνα 1δ) μεταξύ πολλών άλλων οδών (p < 0.05). Συγκεκριμένα, εντοπίσαμε αυξημένη έκφραση του γονιδίου στόχου AHR CYP1B1, το οποίο αποδεικνύει αυξημένη δραστηριότητα της οδού AHR.

Τα τελευταία χρόνια, αρκετές μελέτες αποκάλυψαν τη σημασία του AHR ως θεραπευτικού στόχου κατά τη διάρκεια διαφορετικών παθολογικών σεναρίων. Έτσι, έχει αναπτυχθεί μια μεγάλη ποικιλία μικρών ενώσεων για τη ρύθμιση της δραστηριότητάς του. Αποφασίσαμε να μελετήσουμε περαιτέρω τον αντίκτυπο της διαμόρφωσης AHR κατά τη διάρκεια της in vitro μόλυνσης JUNV.

3.2. Η Φαρμακολογική Διαμόρφωση του AHR επηρεάζει την αναπαραγωγή του ιού

Για να αποσαφηνιστεί ο ρόλος που παίζει το AHR στις λοιμώξεις από JUNV, αποφασίσαμε να δοκιμάσουμε τις επιδράσεις των γνωστών προσδεμάτων AHR CH223191 (ανταγωνιστής) και κυνουρενίνης (αγωνιστής) σε in vitro λοιμώξεις με δύο διαφορετικά εξασθενημένα στελέχη JUNV: IV4454 και Candid#1. Οι θεραπείες και οι λοιμώξεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας κύτταρα Huh-7 και Vero. Δεδομένου ότι αυτή η τελευταία κυτταρική σειρά δεν μπορεί να εκφράσει και να εκκρίνει ιντερφερόνη τύπου Ι (IFN-I), η χρήση της επιτρέπει να προσδιοριστεί η σημασία της έκφρασης της IFN-I στην πιθανή αλληλεπίδραση ξενιστή-ιού που προκαλείται από το AHR.

Πρώτον, η κυτταροτοξικότητα διαφορετικών συγκεντρώσεων τόσο του CH223291 όσο και της κυνουρενίνης αξιολογήθηκε μέσω ανάλυσης ΜΤΤ (Εικόνα 2α, β) και παρατηρήσεων οπτικής μικροσκοπίας (Εικόνα 2γ, δ).

Όσον αφορά το CH223191, μια μείωση στη βιωσιμότητα των κυττάρων και μορφολογικές αλλοιώσεις που σχετίζονται με κυτταροτοξικές επιδράσεις ανιχνεύθηκαν μόνο σε συγκεντρώσεις 80 μΜ (Εικόνα 2a,c). Από την άλλη πλευρά, η κυνουρενίνη δεν προκάλεσε κυτταροτοξικές επιδράσεις σε καμία συγκέντρωση που δοκιμάστηκε (Εικόνα 2b,d).

Για να διερευνηθεί η επίδραση της φαρμακολογικής διαμόρφωσης AHR κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από JUNV, οι κυτταρικές καλλιέργειες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με φορέα (DMSO), CH223191 ή κυνουρενίνη και στη συνέχεια μολύνθηκαν με JUNV για 48 ώρες για να προσδιοριστεί η απόδοση του ιού. Εν συντομία, τα κύτταρα Vero και Huh-7 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με όχημα ή υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις του μικρού μορίου CH223191 (2,5, 5 μΜ, 10 μΜ και 20 μΜ) ή κυνουρενίνης (5 μΜ, 10 μΜ, 20 μΜ και 40 μΜ) πριν και μετά την JUNV μόλυνση με IV4454 και Candid#1 σε ΜΟΙ 0,5. Μετά από 48 ώρες, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για να μολύνουν κύτταρα Vero για τον προσδιορισμό PFU (Εικόνα 3).

Ο αποκλεισμός AHR μείωσε σημαντικά την παραγωγή ιικών σωματιδίων με τρόπο δόσης-απόκρισης, ακόμη και με τη χαμηλότερη συγκέντρωση CH223191 που δοκιμάστηκε. Είναι σημαντικό ότι αυτό το αποτέλεσμα παρατηρήθηκε όχι μόνο χρησιμοποιώντας και τα δύο εξασθενημένα με JUNV στελέχη αλλά και στις δύο μολυσμένες κυτταρικές σειρές (Vero και Huh7). Η θεραπεία με CH223191 των μολυσμένων με JUNV κυττάρων Vero και Huh-7 μείωσε τον αριθμό των ιικών πλακών κατά 93 τοις εκατό και 97 τοις εκατό, αντίστοιχα (Εικόνα 3α, β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν έντονα ότι η οδός σηματοδότησης AHR είναι ένας σημαντικός κυτταρικός παράγοντας κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από JUNV (Εικόνα 3a,b). Από την άλλη πλευρά, η χορήγηση κυνουρενίνης πριν και μετά τον εμβολιασμό JUNV δεν άλλαξε σημαντικά τον ιικό τίτλο που ελήφθη σε σύγκριση με τον ιικό έλεγχο (Εικόνα 3c,d).

Συνολικά, τα αποτελέσματα απέδειξαν για πρώτη φορά ότι το AHR είναι ένας σημαντικός κυτταρικός παράγοντας κατά τη διάρκεια της in vitro μόλυνσης από JUNV, υποδηλώνοντας έναν προ-ιικό ρόλο διευκολύνοντας τον κύκλο αντιγραφής του ιού.

3.3. Η διαμόρφωση AHR έχει αντίκτυπο στην έκφραση της πρωτεΐνης JUNV

Για να μελετήσουμε περαιτέρω τα αποτελέσματα της διαμόρφωσης AHR στη μόλυνση από JUNV, πραγματοποιήσαμε μια έμμεση ανάλυση ανοσοφθορισμού. Η πρωτεΐνη JUNV NP είναι η πιο άφθονη δομική και λειτουργική πρωτεΐνη στην οικογένεια Arenaviridae. Έτσι, το NP επιλέχθηκε ως ένας ενδιαφέρον στόχος χρώσης δεδομένου ότι μόνο λίγες μελέτες ανέφεραν το πρότυπο έκφρασης NP διαφορετικών εξασθενημένων στελεχών JUNV. Το πρώτο μας βήμα ήταν να προσδιορίσουμε την κατανομή NP και των δύο στελεχών JUNV στα κυτταρικά μας μοντέλα για να συγκρίνουμε την ανεκτικότητα των διαφορετικών κυτταρικών σειρών και την ιική διάδοση και των δύο εξασθενημένων στελεχών σε αυτές τις κυτταρικές καλλιέργειες (Εικόνα 4).

Ο εντοπισμός NP ήταν αποκλειστικά κυτταροπλασματικός και εμφάνισε ένα ομοιογενές μοτίβο συσσώρευσης μεγάλης στίξης, παρόμοιο και για τα δύο στελέχη στις κυτταρικές σειρές Vero και Huh-7 (Εικόνα 4).

Στη συνέχεια, αξιολογήσαμε με ανοσοφθορισμό τον αντίκτυπο της φαρμακολογικής διαμόρφωσης του AHR στην έκφραση NP σε κυτταροκαλλιέργειες μολυσμένες με JUNV.

Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν πάνω από γυάλινες καλυπτρίδες, προκατεργάστηκαν είτε με όχημα (DMSOCH223191 (10 μΜ) είτε με κυνουρενίνη (40 μΜ), και στη συνέχεια μολύνθηκαν με ψευδή ή μολυσμένα με JUNV για 48 ώρες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία μέσω ανοσοφθορισμού δοκιμασία (Εικόνα 5).

Η χορήγηση CH223191 μείωσε αξιοσημείωτα τον αριθμό των ΝΡ-θετικών κυττάρων και στις δύο κυτταροκαλλιέργειες και για τα δύο στελέχη JUNV (Εικόνα 5). Αυτές οι παρατηρήσεις συσχετίζονται με προηγούμενα αποτελέσματα που φαίνονται στο Σχήμα 3α,β. Ο αποκλεισμός του AHR μείωσε όχι μόνο το ποσοστό των μολυσμένων με JUNV κυττάρων αλλά και το μέγεθος των ιικών εστιών. Κυτταρικές καλλιέργειες Vero που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με CH223191 και μολύνθηκαν είτε με IV4454 είτε με Candid#1 έδειξαν 57,14 τοις εκατό (SD ± 7,98) και 41,17 τοις εκατό (SD ± 9,05) μείωση στο μέγεθος των εστιών, αντίστοιχα. Επιπλέον, οι κυτταρικές καλλιέργειες Huh-7 που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με τον ανταγωνιστή και μολύνθηκαν είτε με IV4454 είτε με Candid#1, έδειξαν 28,57 τοις εκατό (SD ± 8,70) και 12,50 τοις εκατό (SD ± 9,30) μείωση του μεγέθους των εστιών, αντίστοιχα. Από την άλλη πλευρά, παρατηρήθηκε ότι η θεραπεία με κυνουρενίνη δεν άλλαξε το ποσοστό των θετικών σε ΝΡ κυττάρων (Εικόνα 5) ή το μέγεθος των εστιών (δεν φαίνεται), σε σύγκριση με τα μολυσμένα κύτταρα που δεν υποβλήθηκαν σε αγωγή.

Επιπλέον, μια πιο λεπτομερής μικροσκοπική επιθεώρηση έδειξε ότι οι ιικές εστίες ήταν μεγαλύτερες σε μολυσμένες κυτταροκαλλιέργειες Vero σε σύγκριση με τις μολυσμένες με Huh-7-καλλιέργειες κυττάρων. Παρατηρήσαμε ότι ο μέσος όρος των μολυσμένων με JUNV κυττάρων Vero ανά εστία αποτελούνταν από 35 κύτταρα, ενώ ο μέσος όρος των μολυσμένων με JUNV κυττάρων Huh-7 ανά εστία αποτελούνταν από 6 κύτταρα. Αυτή η αναμενόμενη παρατήρηση είναι σύμφωνη με το περιορισμένο ιικό περιβάλλον που επέβαλαν κύτταρα ικανά για IFN στον πολλαπλασιασμό JUNV [24].

3.4. Η καταστολή του AHR μειώνει τα επίπεδα του ιού JUNV

Τέλος, για να αξιολογηθεί εάν ένας αποκλεισμός AHR επηρεάζει τα επίπεδα RNA JUNV, τα κύτταρα Vero και Huh-7 υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με όχημα, CH223191 (10 μΜ) είτε με κυνουρενίνη (40 μΜ) και στη συνέχεια μολύνθηκαν με ψευδή ή JUNV για 48 h. Στη συνέχεια, οι μονοστοιβάδες κυττάρων συλλέχθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για RT-qPCR για την παρακολούθηση των επιπέδων ahr, cyp1a1 και np RNA (Εικόνα 6).

Παρατηρήθηκε ότι τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με CH223191-και τα μολυσμένα με JUNV παρουσίασαν μια τάση προς χαμηλότερα επίπεδα mRNA του ahr σε σύγκριση με δείγματα που είχαν μολυνθεί με όχημα-JUNV (Εικόνα 6a,b). Αντίθετα, η χορήγηση κυνουρενίνης εμφάνισε μια τάση προς αύξηση των επιπέδων mRNA του ahr σε κύτταρα μολυσμένα με JUNV σε σύγκριση με δείγματα μολυσμένα με JUNV που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με όχημα (Εικόνα 6α, β). Σύμφωνα με αυτά τα αποτελέσματα, η θεραπεία με CH223191 έδειξε μια τάση προς μείωση των επιπέδων mRNA του cyp1a1 στα κύτταρα Huh-7, ενώ η θεραπεία με κυνουρενίνη έδειξε αντίθετα αποτελέσματα (Εικόνα 6γ). Όσον αφορά το επίπεδο RNA JUNV, παρατηρήθηκε ότι η θεραπεία με τον ανταγωνιστή AHR CH223191 μείωσε τα επίπεδα ιικού RNA σε μολυσμένα κύτταρα σε σύγκριση με δείγματα που έλαβαν θεραπεία με όχημα-JUNV, ενώ τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με κυνουρενίνη και τα μολυσμένα με JUNV κύτταρα έτειναν μια αύξηση του ιού. Επίπεδα RNA (Εικόνα 6d,e).

Σε αυτή την εργασία, δείξαμε για πρώτη φορά ότι η in vitro λοίμωξη JUNV προκαλεί την ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης AHR σε κυτταροκαλλιέργειες που προέρχονται από το ήπαρ. Τα δεδομένα ανάλυσης μικροσυστοιχίας έδειξαν ότι η οδός σηματοδότησης AHR υπερεκφράζεται σε κυτταροκαλλιέργειες μολυσμένες με JUNV στις 48 ώρες pi.

Αρκετές μελέτες ανέφεραν ότι η ενεργοποίηση του AHR μπορεί να έχει μια ποικιλία επιδράσεων στη κυτταρική φυσιολογία, επηρεάζοντας τον πολλαπλασιασμό και τις έμφυτες ανοσολογικές αποκρίσεις [6,25]. Στην πραγματικότητα, την τελευταία δεκαετία, η ενεργοποίηση AHR έχει περιγραφεί ότι έχει ρυθμιστική δράση της IFN που ασκεί επιδράσεις στην έκκριση κυτοκίνης [26,27]. Είναι σημαντικό ότι η σηματοδότηση ανοδικής ρύθμισης AHR μπορεί να μειώσει τις αντιικές ανοσοαποκρίσεις της IFN-I [28]. Σχετικά με αυτό, αξιολογήσαμε την επίδραση της διαμόρφωσης της οδού σηματοδότησης AHR σε μη ικανές και ικανές κυτταρικές καλλιέργειες IFN, όπως τα κυτταρικά μοντέλα Vero και Huh-7, χρησιμοποιώντας ανταγωνιστή και αγωνιστή AHR μικρά εμπορικά μόρια κατά τη διάρκεια in vitro μόλυνσης JUNV με δύο διαφορετικά εξασθενημένα στελέχη.

Μέσω διαφορετικών προσεγγίσεων, επιβεβαιώθηκε ότι η αρνητική τροποποίηση AHR μέσω φαρμακολογικής αναστολής με CH223191 είχε αντιική δράση έναντι του JUNV. Μετά τον αποκλεισμό του AHR, η in vitro λοίμωξη JUNV βρέθηκε ανασταλμένη. Μια σημαντική μείωση στην έκφραση της ιικής πρωτεΐνης παρατηρήθηκε σε μολυσμένες με JUNV κυτταροκαλλιέργειες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με τον ανταγωνιστή AHR. Επιπλέον, ο αποκλεισμός AHR μείωσε την παραγωγή εξωκυτταρικών μολυσματικών ιικών σωματιδίων και των δύο εξασθενημένων στελεχών IV4454 και Candid#1 του JUNV που μελετήθηκαν σε αυτή την εργασία. Επιπλέον, παρατηρήθηκε μια τάση προς μείωση των επιπέδων ιικού RNA σε κύτταρα που έλαβαν CH223191-. Είναι ενδιαφέρον ότι αυτά τα ευρήματα παρατηρήθηκαν και στις κυτταρικές σειρές Huh-7 και Vero και έδειξαν ισοδύναμο μέγεθος, υποδηλώνοντας ότι ο προ-ιικός ρόλος του AHR κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από JUNV μπορεί να είναι ανεξάρτητος από την οδό σηματοδότησης IFN-I. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με τις προηγούμενες παρατηρήσεις μας σε άλλα μοντέλα ιών [13]. Θα χρειαστούν περισσότερες μελέτες για να αποσαφηνιστεί ποιο στάδιο του κύκλου αντιγραφής JUNV επηρεάζεται από τον αποκλεισμό του AHR.

Μελέτες που δείχνουν την ενεργοποίηση της AHR από ανθρωπογενείς συνδέτες έχουν κερδίσει ιδιαίτερο ενδιαφέρον λόγω της αυξανόμενης ευαισθητοποίησης σχετικά με την ακατάλληλη περιβαλλοντική εκμετάλλευση και την αλληλεπίδρασή της με τη σοβαρότητα της ιογενούς μόλυνσης [2]. Σημείωση, η περιοχή ενδιαιτημάτων που καλύπτεται από τρωκτικά-φορείς JUNV περιλαμβάνει μια μεγάλη περιοχή. Ωστόσο, επί του παρόντος, το AHF επηρεάζει μόνο μια περιορισμένη και περιορισμένη περιοχή όπου αναλαμβάνονται κυρίως αγροτικές δραστηριότητες [29]. Επιπλέον, οι εργαζόμενοι στη γεωργία είναι ο κύριος πληθυσμός που κινδυνεύει να υποστεί σοβαρές εκδηλώσεις κατά τη διάρκεια της νόσου AHF. Η παρούσα εργασία μας προτείνει ότι η έκθεση τρωκτικών/ανθρώπων σε αγωνιστές AHR μπορεί να έχει αντίκτυπο στην έκβαση της λοίμωξης από JUNV.

Αν και έχουν αφιερωθεί εντατικές προσπάθειες τις τελευταίες δεκαετίες στην έρευνα κατά των ιών κατά των αρεναϊών [30], δεν υπάρχει επί του παρόντος διαθέσιμη ειδική αντιική χημειοθεραπεία για τη θεραπεία της AHF και των ανθρώπινων ασθενειών που προκαλούνται από άλλα παθογόνα μέλη των Arenaviridae. Συγκεκριμένα, ο ιός Lassa (LASV) είναι ο παράγοντας του πυρετού Lassa (LF), ο οποίος αντιπροσωπεύει μια σοβαρή ανθρώπινη απειλή σε περιοχές της Δυτικής Αφρικής με πολύ υψηλό ποσοστό θνησιμότητας [31]. Προς το παρόν, η μόνη εναλλακτική θεραπεία κατά της LF είναι η εκτός ετικέτας χρήση του αναλόγου γουανοσίνης ριμπαβιρίνης, το οποίο έχει αποδειχθεί μερικώς αποτελεσματικό σε ασθενείς με LF μόνο εάν η χορήγησή του ξεκινήσει εντός 6 ημερών από την έναρξη των συμπτωμάτων [32,33]. Επιπλέον, η ριμπαβιρίνη μπορεί να προκαλέσει ανεπιθύμητες παρενέργειες περιορίζοντας τη σύσταση χορήγησής της μόνο σε ασθενείς υψηλού κινδύνου. Στη συνέχεια, υπάρχει πραγματική ζήτηση για νέα αποτελεσματικά αντιιικά φάρμακα για τη θεραπεία των αιμορραγικών πυρετών από αρένα. Το AHR αντιπροσωπεύει έναν νέο στόχο κεντρικού υπολογιστή που πρέπει να ληφθεί υπόψη. Πράγματι, υπάρχουν αρκετές εν εξελίξει κλινικές δοκιμές που περιλαμβάνουν αναστολείς AHR (BAY2416964, IK-175 και HP163) στη θεραπεία διαφορετικών καρκίνων. Ωστόσο, αυτές οι δοκιμές βρίσκονται σε πρώιμα στάδια και καμία δεν επικεντρώνεται στην αντιική δυνατότητα της φαρμακολογικής στόχευσης AHR. Είναι αξιοσημείωτο ότι τα φάρμακα που κατευθύνονται σε κυτταρικούς παράγοντες που απαιτούνται στον κύκλο πολλαπλασιασμού του ιού έχουν ανακτήσει το ενδιαφέρον για την ανάπτυξη αντιιών, δίνοντας την ευκαιρία να αποκτήσουν έναν αναστολέα ευρέος φάσματος που επηρεάζει έναν στόχο ξενιστή κοινό σε πολλά ανθρώπινα παθογόνα [34,35], χαρακτηριστικό που σχετίζεται με το AHR.

Συμπερασματικά, τα συνδυασμένα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης υπογραμμίζουν τη συνάφεια της διαμόρφωσης της οδού σηματοδότησης AHR ως δυνητικού θεραπευτικού στόχου κατά του JUNV. Θα χρειαστούν μελλοντικές μελέτες για την εφαρμογή θεραπειών στόχευσης AHR για να ξεπεραστούν σημαντικές προκλήσεις, όπως η παράδοση των προσδεμάτων AHR στους επιθυμητούς ιστούς και κύτταρα για να ελαχιστοποιηθούν πιθανά αποτελέσματα διαμόρφωσης AHR εκτός στόχου.

Συνεισφορές συγγραφέα:

Conceptualization, CCG; μεθοδολογία, MAP, AEADL και ABM· λογισμικό, FG; επικύρωση, MAP και FG. επίσημη ανάλυση, MAP και MFT. έρευνα, MAP και MFT. πόρους, EBD και CCG· επιμέλεια δεδομένων, FG; γραφή—προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, MAP και MFT. συγγραφή — κριτική και επεξεργασία, EBD και CCG. εποπτεία, CCG; διαχείριση έργου, CCG; εξαγορά χρηματοδότησης, EBD και CCG Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.

Χρηματοδότηση:

Αυτή η εργασία χρηματοδοτήθηκε από το Universidad de Buenos Aires (UBA) (αριθμός επιχορήγησης 20020170100363BA) και το Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET) (αριθμός επιχορήγησης PIP11220170100171CO). Η EBD και η CCG είναι μέλη της ερευνητικής σταδιοδρομίας από την CONICET. Οι MFT, AEADL και ABM είναι συνεργάτες της CONICET. Ο MAP είναι υπότροφος από το UBA.

Δήλωση του Συμβουλίου Θεσμικής Αναθεώρησης:

Δεν εφαρμόζεται.

Δήλωση ενημερωμένης συναίνεσης:

Δεν εφαρμόζεται.

Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων:

Τα δεδομένα που υποστηρίζουν τα ευρήματα αυτής της μελέτης είναι διαθέσιμα από τον αντίστοιχο συγγραφέα κατόπιν εύλογου αιτήματος.

Ευχαριστίες:

Ευχαριστούμε όλα τα μέλη των εργαστηρίων που συμμετείχαν για χρήσιμες συμβουλές και συζητήσεις.

Σύγκρουση συμφερόντων:

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων. Οι χρηματοδότες δεν είχαν κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης. στη συλλογή, αναλύσεις ή ερμηνεία δεδομένων· στη συγγραφή του χειρογράφου· ή στην απόφαση δημοσίευσης των αποτελεσμάτων.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Κεφάλι, JL; Lawrence, BP Ο υποδοχέας υδρογονάνθρακα Aryl είναι ένας διαμορφωτής της ανοσίας κατά των ιών. Biochem. Pharmacol. 2009, 77, 642-653. [PubMed]

2. Torti, MF; Giovannoni, F.; Quintana, FJ; García, CC Ο υποδοχέας υδρογονάνθρακα αρυλίου ως διαμορφωτής της ανοσίας κατά των ιών. Εμπρός. Immunol. 2021, 12, 624293. [PubMed]

3. Shinde, R.; McGaha, TL The Aryl Hydrocarbon Receptor: Connecting Immunity to the Microenvironment. Trends Immunol. 2018, 39, 1005–1020. [PubMed]

4. Stockinger, Β.; Hirota, Κ.; Duarte, J.; Veldhoen, M. Εξωτερικές επιδράσεις στο ανοσοποιητικό σύστημα μέσω ενεργοποίησης του υποδοχέα υδρογονάνθρακα αρυλίου. Σεμιν. Immunol. 2011, 23, 99–105.

5. Rothhammer, V.; Borucki, DM; Tjon, EC; Takenaka, MC; Chao, CC; Ardura-Fabregat, Α.; de Lima, KA; Gutiérrez-Vázquez, C.; Hewson, Ρ.; Staszewski, Ο.; et al. Μικρογλοιακός Έλεγχος Αστροκυττάρων σε Απόκριση σε Μικροβιακούς Μεταβολίτες. Nature 2018, 557, 724–728. [CrossRef]

6. Quintana, FJ; Basso, AS; Iglesias, AH; Korn, Τ.; Farez, MF; Bettelli, Ε.; Caccamo, Μ.; Oukka, Μ.; Weiner, HL Control of Treg and TH17 Cell Differentiation by the Aryl Hydrocarbon Receptor. Nature 2008, 453, 65–71. [CrossRef]

7. Marshall, NB; Kerkvliet, NI Διοξίνη και ρύθμιση του ανοσοποιητικού: Αναδυόμενος ρόλος του υποδοχέα υδρογονάνθρακα αρυλίου στη δημιουργία ρυθμιστικών κυττάρων Τ. Αννα. NY Acad. Sci. 2010, 1183, 25–37.

8. Vogel, CFA; Khan, ΕΜ; Leung, PSC; Gershwin, ME; Chang, WLW; Wu, D.; Haarmann-Stemmann, Τ.; Hoffmann, Α.; Denison, MS Cross-Talk μεταξύ του Aryl Hydrocarbon Receptor and the Inflammatory Response: A Role for Nuclear Factor-KB. J. Biol. Chem. 2014, 289, 1866–1875. [CrossRef]

9. Bankoti, J.; Rase, Β.; Simones, Τ.; Shepherd, DM Λειτουργικές και Φαινοτυπικές Επιδράσεις της Ενεργοποίησης AhR σε Φλεγμονώδη Δενδριτικά Κύτταρα. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2010, 246, 18–28. [CrossRef]

10. Vogel, CFA; Goth, SR; Dong, Β.; Pessah, IN; Matsumura, F. Aryl Hydrocarbon Receptor Signaling Μεσολαβεί στην έκφραση της ινδολεαμίνης 2,3-Διοξυγενάσης. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2008, 375, 331–335. [CrossRef]

11. Jin, GB; Moore, AJ; Κεφάλι, JL; Neumiller, JJ; Η ενεργοποίηση του υποδοχέα υδρογονάνθρακα Lawrence, BP Aryl μειώνει τη λειτουργία των δενδριτικών κυττάρων κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από τον ιό της γρίπης. Toxicol. Sci. 2010, 116, 514–522. [CrossRef]

12. Giovannoni, F.; Bosch, Ι.; Polonio, CM; Torti, MF; Wheeler, MA; Li, Ζ.; Romorini, L.; Rodriguez Varela, MS; Rothhammer, V.; Barroso, Α.; et al. Το AHR είναι ένας παράγοντας ξενιστή του ιού Zika και ένας υποψήφιος στόχος για αντιική θεραπεία. Nat. Neurosci. 2020, 23, 939–951. [CrossRef]

13. Giovannoni, F.; Li, Ζ.; Remes-Lenicov, F.; Dávola, ME; Elizalde, Μ.; Paletta, Α.; Ashkar, AA; Mossman, KL; Dugour, AV; Figueroa, JM; et al. Η σηματοδότηση AHR προκαλείται από μόλυνση με κοροναϊούς. Nat. Commun. 2021, 12, 5148. [CrossRef]

14. Buchmeier, MJ; de La Torre, JC; Peters, CJ Arenaviridae: Οι ιοί και η αναπαραγωγή τους. In Fields Virology, 4η έκδ.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, USA, 2013; σελ. 1283–1303.

15. Enria, DA; Briggiler, AM; Sánchez, Z. Θεραπεία Αργεντινού Αιμορραγικού Πυρετού. Antivir. Res. 2008, 78, 132–139. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com