Μηχανιστική ενόραση για την επαγόμενη από τη διοσμίνη νευροπροστασία και βελτίωση της μνήμης σε μοντέλο αρουραίου ενδοεγκεφαλοκοιλιακού-κινολινικού οξέος: Ανάσταση μιτοχονδριακών λειτουργιών και αντιοξειδωτικών Μέρος 2

2.8. Νέα εργασία αναγνώρισης αντικειμένων (NORT).

Ακολουθήθηκε το τυπικό πρωτόκολλο όπως δίνεται από τους Kumar και Bansal [23]. Το NORT είναι ένα ασύμφορο και μη εχθρικό εξωδεκτικό αρχέτυπο που χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση του λειτουργικού τύπου συλλογικής μνήμης που αξιοποιείται μέσω της παρορμητικής διερευνητικής αγωγιμότητας των τρωκτικών. Η έρευνα .e πραγματοποιείται σε ένα κυβοειδές δοχείο από ανοιχτό κόντρα πλακέ ταράτσας (80 cm × 42 cm × 62 cm), τοποθετημένο σε μια ήσυχη περιοχή, που φωτίζεται από ένα LED 60 W για τη διαχείριση της σταθερής φωτεινότητας στο δοχείο.

Τα τρωκτικά είναι ένα είδος μικρών θηλαστικών που ζουν στη Γη. Συχνά ζουν σε λιβάδια, δασικές εκτάσεις και άλλα μέρη. Ζουν μια ήπια ζωή και είναι σύντομοι και χαριτωμένοι. Σε σύγκριση με άλλους οργανισμούς, τα τρωκτικά έχουν ισχυρό πλεονέκτημα στη μνήμη και πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι η μνήμη των τρωκτικών είναι πολύ πέρα ​​από τη φαντασία μας.

Οι εγκέφαλοι των τρωκτικών είναι πολύ ευέλικτοι, ειδικά όταν ασχολούνται με εργασίες που σχετίζονται με την αποθήκευση πληροφοριών. Πολλά πειράματα έχουν δείξει ότι η μνήμη των τρωκτικών μπορεί να ξεπεράσει ακόμη και αυτή άλλων μεγάλων θηλαστικών. Στο πείραμα, ορισμένοι ερευνητές έδωσαν σε τρωκτικά όπως ποντίκια και χάμστερ πολλά διαφορετικά μέρη, αντικείμενα, γεγονότα και άλλες πληροφορίες, και στη συνέχεια παρατήρησαν τις αντιδράσεις τους και την επεξεργασία αυτών των πληροφοριών. Διαπιστώθηκε ότι αυτά τα τρωκτικά είχαν πολύ καλή απόδοση στη μνήμη και μπορούσαν ακόμη και να θυμηθούν πολλές διαφορετικές πληροφορίες και σκηνές, ακόμα καλύτερα από τους περισσότερους ανθρώπους.

Γιατί λοιπόν τα τρωκτικά έχουν καλύτερη μνήμη από άλλα ζώα; Αυτό είναι αδιαχώριστο από το περιβάλλον διαβίωσης των τρωκτικών. Αυτά τα μικρά ζώα ζουν συχνά σε επικίνδυνα περιβάλλοντα, επομένως πρέπει να μάθουν να προσαρμόζονται γρήγορα και να επιβιώνουν. Για να διατηρήσουν την επιβίωση και την αναπαραγωγή τους, τα τρωκτικά πρέπει να κατανοούν τις αλλαγές στο περιβάλλον και πληροφορίες, όπως οι τροχιές δραστηριότητας άλλων ζώων και φυτών. Αυτό απαιτεί να έχουν άριστες ικανότητες παρατήρησης και μνήμης, ώστε να μπορούν να προσαρμοστούν καλύτερα στο περιβάλλον διαβίωσης.

Επιπλέον, ο τρόπος ζωής και οι συνήθειες συμπεριφοράς των τρωκτικών μπορούν επίσης να βοηθήσουν στη βελτίωση της μνήμης τους. Ορισμένες μελέτες έχουν δείξει ότι στα τρωκτικά αρέσει να συλλέγουν και να αποθηκεύουν αντικείμενα, τα οποία μπορούν να προάγουν τη μνήμη και τη χωρική τους αντίληψη. Επιπλέον, στα τρωκτικά αρέσει επίσης να εκτελούν ορισμένες δραστηριότητες ρουτίνας, όπως η κίνηση κατά μήκος μιας συγκεκριμένης διαδρομής και η εκτέλεση του ίδιου τύπου εργασιών. Αυτή η συνηθισμένη συμπεριφορά μπορεί επίσης να τους βοηθήσει να ενισχύσουν τη μνήμη και τις ικανότητές τους να σχηματίσουν συνήθεια.

Στον βιολογικό κόσμο, τα τρωκτικά έχουν μια μοναδική μνήμη και έχουν ισχυρές ικανότητες παρατήρησης, μνήμης και προσαρμογής. Για εμάς, η μνήμη των τρωκτικών μπορεί να αντιστοιχεί στις μαθησιακές και μνημονικές μας ικανότητες. Μπορούμε να μάθουμε από τα τρωκτικά ότι όσο παραμένουμε προσεκτικοί, συνεχίζουμε να μαθαίνουμε και να συσσωρεύουμε στις σπουδές και τη ζωή μας, μπορούμε επίσης να έχουμε τις ίδιες εξαιρετικές ικανότητες μνήμης και δημιουργίας συνήθειας με τα τρωκτικά. Αυτό δείχνει ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη μας και το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη μας, επειδή το Cistanche μπορεί επίσης να ρυθμίσει την ισορροπία των νευροδιαβιβαστών, όπως η αύξηση των επιπέδων ακετυλοχολίνης και αυξητικών παραγόντων, που είναι πολύ σημαντικοί για τη μνήμη και τη μάθηση. Επιπλέον, το Cistanche deserticola μπορεί να βελτιώσει τη ροή του αίματος και να προωθήσει την παροχή οξυγόνου, η οποία μπορεί να εξασφαλίσει ότι ο εγκέφαλος αποκτά επαρκή διατροφή και ενέργεια, βελτιώνοντας έτσι τη ζωτικότητα και την αντοχή του εγκεφάλου.

Κάντε κλικ στο Γνωρίστε τη βελτίωση της μνήμης

Τα ξύλινα αντικείμενα σε σχήμα κυλίνδρου (λευκού)-, πυραμίδας (κόκκινο)- και κύβου (μαύρου) (ύψους 12 cm) (σε πανομοιότυπα τρίδυμα) ήταν συμπαγή και είχαν αρκετό βάρος ώστε να τα καθιστούν ακίνητα από τα τρωκτικά. Το NORT πραγματοποιήθηκε τη 16η ημέρα σε 3 στάδια (S): εγκλιματισμός (S1), απόκτηση (S2) και στάδιο εξέτασης (κατακράτηση) αναγνώρισης νέου αντικειμένου (S3). Κατά τη διάρκεια του S1, τρεις διαδοχικές ημέρες πριν από την έκδοση των δοκιμών για την ανακάλυψη της άδειας βάσης δαπέδου του σκάφους (5 λεπτά) από τους αρουραίους. Με την ολοκλήρωση του S1, το μεμονωμένο ζώο εξοικειώθηκε σε οποιοδήποτε σύνολο στερεών στοιχείων στο στάδιο εκμάθησης (S2).

Δίδυμα πράγματα τοποθετήθηκαν σε 2 αυθαίρετα επιλεγμένες αντίθετες γωνίες του σκάφους (9 cm έως 11 cm κενό από τις πλευρικές επάλξεις). Ξεχωριστά, ένα τρωκτικό τοποθετήθηκε στο κέντρο του σκάφους με όψη απέναντι από τα δύο στερεά αντικείμενα και του επετράπη να ανακαλύψει τα δύο παρόμοια αντικείμενα για 5 λεπτά. Η οδήγηση του ρύγχους κοντά στο αντικείμενο σε απόσταση μικρότερη ή ίση με 2–3 cm ή η φυσική επαφή με το αντικείμενο με το ρύγχος υποτίθεται ως διερευνητική συμπεριφορά.

Μετά το S2, το τρωκτικό στεγάστηκε σε ένα σπίτι που περικλείεται από μια ενδοδοκιμαστική εσοχή (ITR) 60 λεπτών.

Οποιοδήποτε μεμονωμένο αντικείμενο που προσφερόταν στο S2 αντικαταστάθηκε από ένα διαφορετικό στερεό στοιχείο και τα τρωκτικά παρουσιάστηκαν ξανά στα δίδυμα αντικείμενα, δηλαδή ένα αντίγραφο του γνωστού αντικειμένου και του διαφορετικού στοιχείου.. το σύνολο των συγχωνεύσεων και θέσεων των αντικειμένων αντισταθμίστηκαν σε να μειώσει την πιθανή προκατάληψη που προκαλείται από μια τάση για ορισμένες ρυθμίσεις ή αντικείμενα. Το δοχείο και τα στερεά αντικείμενα σκουπίζονταν σχολαστικά (αιθυλική αλκοόλη 15% και στεγνό πανί) μετά από κάθε έρευνα για να περιοριστούν τα σημάδια δυσοσμίας. Το .e periodexpend ανακάλυψη κάθε στοιχείου στα S2 και S3 τεκμηριώθηκε χρησιμοποιώντας ένα χρονόμετρο. .e η διάρκεια που δαπανήθηκε για τη διερεύνηση των δύο αντιστοιχιζόμενων στοιχείων στο S2 (I1 � Ii1 + Ii2) και η διάρκεια που δαπανήθηκε για τη διερεύνηση των δύο ανόμοιων στοιχείων, δηλαδή, γνωστά και διαφορετικά, στο S3 (I2 � Ii3 + Ib) καταγράφηκε. Η διακύμανση στη διάρκεια που δαπανάται για τη διερεύνηση του διαφορετικού στοιχείου και η διάρκεια της διερεύνησης του εξοικειωμένου αντικειμένου (Ib–Ii3 � DI) αποκαλύπτει τη διατήρηση της συλλογικής μνήμης.

DI (δείκτης διάκρισης)/Διάρκεια S3 διερεύνησης τόσο του γνωστού όσο και του νέου στοιχείου (τροποποιημένο DI) βελτιώνει τις επιμέρους αποκλίσεις στην πλήρη έρευνα και υποδηλώνει την τάση για διαφορετικά στοιχεία σε αντίθεση με τα γνωστά {DI � (Ib–Ii3 )/(Ii3 + Ib)}. Η συλλογική μνήμη εκτιμήθηκε ποσοτικοποιώντας την ικανότητα των τρωκτικών να ξεχωρίζουν τα γνωστά/μυθιστορήματα στο S3 και δηλώθηκε ως DI (τροποποιήθηκε για τη συνολική περίοδο έρευνας στο S3) [24].

2.9. MorrisWater Maze (MWM). Ακολουθήθηκε το πρότυπο πρωτόκολλο .e, όπως δίνεται από τους Kumar και Bansal [25]. Το MWM κρίνει τη χωρική μνήμη με δοκιμές κολύμβησης, στις οποίες το τρωκτικό βρίσκει μια οδό διαφυγής σε ένα κρυφό βάθρο.

Μια μαύρη κυκλική δεξαμενή (διάμετρος 2 m, 0.6 m ύψος) είχε νερό (25 ± 1 βαθμό ) γεμάτο σε βάθος 0,3 m. Η υδάτινη δεξαμενή χωρίστηκε δεξιόστροφα σε 4 παρόμοιες περιοχές (R1, R2, R3, και R4) χρησιμοποιώντας δύο νάιλον ίνες, στερεωμένες κάθετα στην επάνω περίμετρο της δεξαμενής.

Μια μαργαρίτα (10,5 cm χ 10,5 cm) τοποθετήθηκε υποβρύχια (1 cm κάτω από το νερό) στην περιοχή της δεξαμενής R4. Το σημείο της μαργαρίτας παρέμεινε ανέπαφο καθ' όλη τη διάρκεια της περιόδου απόκτησης. Κάθε αρουραίος παρουσιάστηκε με τέσσερις σειριακούς γύρους απόκτησης (5 λεπτά ITR) καθημερινά. .e τρωκτικό απελευθερώθηκε απαλά στην υδάτινη δεξαμενή που έβλεπε το τοίχωμα της δεξαμενής, με την τοποθεσία να ποικίλλει με κάθε δοκιμή από R1-R4, R2-R1, R3-R2 και R{{ 13}}R3 τις ημέρες 1 έως 4, αντίστοιχα, και επιτρεπόταν 120 δευτερόλεπτα για τον εντοπισμό του υποβρύχιου βάθρου. Τα τρωκτικά συνέχισαν να ξεκουράζονται στο βάθρο για 20 δευτερόλεπτα.

Η αποτυχία ανίχνευσης της πλατφόρμας εντός 120 δευτερολέπτων υποδείκνυε τη χειροκίνητη τοποθέτηση του ratson στην πλατφόρμα και στη συνέχεια επιτρεπόταν 20 δευτερόλεπτα στην πλατφόρμα. Ο χρόνος λανθάνοντος χρόνου διαφυγής (ELT) είναι η διάρκεια (οι) της ανακάλυψης της κρυμμένης μαρμαρυγής στην υδρόβια δεξαμενή. Η χωρική εκμάθηση χαρακτηρίστηκε από την πρώτη ημέρα έναντι της τέταρτης ημέρας ELT.

Στη δοκιμή με ανιχνευτή (5η ημέρα), τα τρωκτικά ερεύνησαν τη δεξαμενή για 120 δευτερόλεπτα, αλλά στερήθηκαν το βάθρο. Καταγράφηκε η μέση διάρκεια που δαπανήθηκε σε ολόκληρη τη δεξαμενή (4 περιοχές). Η μέση διάρκεια που δαπανήθηκε σε R4 (TSTQ:χρόνος που δαπανήθηκε στο τεταρτημόριο στόχο) ανίχνευσης για το κρυφό βάθρο θεωρήθηκε ως δείκτης μνήμης αναφοράς. .συγκριτική ρύθμιση της δεξαμενής σε σχέση με τα αντικείμενα του εργαστηρίου που λειτουργούν ως οπτικά σημάδια και η θέση του ερευνητή παρέμεινε αδιατάρακτη [26].

2.10. Εκτίμηση Βιοχημικών Παραμέτρων. Μετά την ολοκλήρωση των εξετάσεων συμπεριφοράς, ο πλήρης εγκέφαλος των θηραμάτων συγκεντρώθηκε και τοποθετήθηκε σε κονιοποιημένα παγάκια και ακολούθησε μπάνιο με αποστειρωμένο αλατούχο ορό (ισοτονικό 308 mOsmol/l NaCl) για να αφαιρεθούν τα υπολείμματα και το αίμα.

Η ομογενοποίηση ολόκληρου του εγκεφάλου πραγματοποιήθηκε αμέσως σε ένα ρυθμιστικό διαχωρισμού κατάψυξης (pH 7,4) με τη σύνθεση 215 mM D-μαννιτόλη, 20 mM 2-[4-(2-υδροξυαιθυλο )πιπεραζιν-1-υλ]αιθανοσουλφονικό οξύ, 1 mM 1,2-δις[2-[δις(καρβοξυμεθυλ)αμινο]αιθοξυ]αιθάνιο, 75 mM σακχαρόζη και 0,1% BSA. Το ομογενοποίημα .e φυγοκεντρήθηκε στους 4 βαθμούς χρησιμοποιώντας δύναμη 13000 χ g για 5 λεπτά. Το ίζημα απορρίφθηκε και το υπερκείμενο διαχωρίστηκε σε δύο μέρη και επαναφυγοκεντρήθηκε (4 βαθμοί) με δύναμη 13000 χ g για 5 λεπτά. Το ακατέργαστο μιτοχονδριακό σφαιρίδιο διαχωρίστηκε και φυγοκεντρήθηκε ξανά σε ρυθμιστικό διαχωρισμού με 1,2-δις[2-[δις(καρβοξυμεθυλ)αμινο]αιθοξυ]αιθάνιο στα 12.500 × g για 11 λεπτά (4 βαθμοί). Η ημιστερεή απόθεση που ελήφθη με τον τρόπο αυτό και περιλαμβάνει μη μολυσμένα μιτοχόνδρια επαναιωρήθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα αποχωρισμού (pH 7,4) που περιέχει 75 mM σακχαρόζη, 20 mM 2-[4-({{35}υδροξυαιθυλο)πιπεραζίνη{{36} υλ]αιθανοσουλφονικό οξύ και 215 mM D-μαννιτόλη [27].

Αργότερα, το μιτοχονδριακό κλάσμα του ομογενοποιήματος ολόκληρου του εγκεφάλου χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των βιοχημικών δεικτών χρησιμοποιώντας τυπικές μεθόδους.

2.11. Εκτίμηση μιτοχονδριακού συμπλέγματος

2.11.1. NADH: Δραστηριότητα Οξιδορεδουκτάσης Ubiquinone.

Ο ρυθμός δραστικότητας του συμπλόκου Ι (αφυδρογονάση NADH) ποσοτικοποιήθηκε (nmol οξειδωμένης NADH/λεπτό/mg πρωτεΐνης) ακολουθώντας την τεχνική των King και Howard [28]. Η οξειδωτική παραγωγή NAD+ από NADH συνοδεύεται από αναγωγή του κυτοχρώματος c. Το μίγμα της δοκιμασίας αποτελούνταν από κυτόχρωμα c (10.5 mM), 6 mM-νικοτιναμίδιο αδενινοδινουκλεοτίδιο (DPNH) διαλυμένο χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα διγλυκίνης 2 mM και ρυθμιστικό διάλυμα διγλυκίνης (0,2 Μ, ρΗ 8,5).

Ένα διαλυτό μιτοχονδριακό κλάσμα ενσωματώθηκε στη σύνθεση της δοκιμασίας για να πυροδοτήσει την αντίδραση. Παρακολουθήθηκε η διακύμανση της οπτικής πυκνότητας (OD) στα λmax £ 550 nm για 120 δευτερόλεπτα.2.11.2. Succinate: Ubiquinone Oxidoreductase Activity..e ρυθμός δραστικότητας ηλεκτρικής αφυδρογονάσης (σύμπλοκο II) ποσοτικοποιήθηκε (nmol οξειδωμένο ηλεκτρικό/λεπτό/mg πρωτεΐνης) ακολουθώντας την τεχνική του King [29].

Η οξείδωση του ηλεκτρικού οξέος πυροδοτείται από έναν ψευδή δέκτη ηλεκτρονίων, το κυανοφερρικό κάλιο (K3Fe(CN)6). .e μείγμα ανάλυσης που αποτελείται από ηλεκτρικό οξύ (0.63 M), 1% BSA, K3Fe(CN)6 (0.036 M) και Na+-K+ [PO4]{12}} ρυθμιστικό (0,23 Μ, ρΗ 7,6). Ένα διαλυτό μιτοχονδριακό κλάσμα ενσωματώθηκε στη σύνθεση της δοκιμασίας για να πυροδοτήσει την αντίδραση. Παρακολουθήθηκε η μεταβολή της OD στο μέγιστο 420 nm για 120 δευτερόλεπτα.

2.12. Προσδιορισμός βιοδεικτών οξειδωτικού στρες2.12.1. αντιδραστικές ουσίες ιοβαρβιτουρικού οξέος (TBARS). Για την αξιολόγηση του TBARS (nmol ανά mg πρωτεΐνης) [30], ο συνδυασμός ανάλυσης (τελική ποσότητα ~4 ml) που περιλαμβάνει0.10 ml ομογενοποιημένο εγκέφαλος, 1,51 ml 4,6-διυδροξυ-2-μερκαπτοπυριμιδίνη (0,8%), 200 μl SLS (8,18%), 1,49 ml παγοξεικό οξύ (21%, pH 3,51) και 0,71 ml απιονισμένου νερού θέρμανση σε υδατόλουτρο στους 96 βαθμούς για 60 λεπτά.

Μια αναλογία 15:1 βουτυλική αλκοόλη/αζαβενζόλιο (5,1 ml) συμπληρώθηκε σε μείγμα ανάλυσης που φυγοκεντρήθηκε στα 4, 000 × gpower (10 λεπτά) και το υπερκείμενο απομονώθηκε. Με ένα φασματοφωτόμετρο διπλής δέσμης UV1700 (Shimadzu, Ιαπωνία), χρωμοφόρο μηλονοδιαλδεΰδη-4,6-διυδροξυ-2-μερκαπτοπυριμιδίνη OD εκτιμήθηκε σε μήκος κύματος (λmax � 532 × nm), και ε5. 105/M/cm (μοριακός συντελεστής εξάλειψης) εφαρμόστηκε στον υπολογισμό 4,6-διυδροξυ-2-προσαγωγών μερκαπτοπυριμιδίνης.

2.12.2. Μειωμένα Επίπεδα Γλουταθειόνης (Lc-Γλουταμυλ-L-Κυστεϊνυλ-γλυκίνη). Η διαδικασία του Ellman [31] εφαρμόστηκε για την εκτίμηση της περιεκτικότητας σε L-γλουταθειόνη (GSH). .e δοκιμαστικό παρασκεύασμα που περιελάμβανε ομογενοποίηση (1,1 ml) και 1 ml 4% 2-υδροξυ-5-σουλφοβενζοϊκού οξέος (5-SSA) φυγοκεντρήθηκε (4 μοίρες) για 11 λεπτά σε ισχύ 2.500 × g .

Αργότερα, 2,8 ml Na+-K+[PO4]2- ρυθμιστικού διαλύματος (51,2 mM, pH 7,77) και {{10}},21 ml 3-καρβοξυλίου{{13 }}νιτροφαινυλ δισουλφίδιο (0.12 mM, ρΗ 7,89) αναμίχθηκαν με το παραπάνω διαχωρισμένο υπερκείμενο (0,12 ml). Το τριπεπτίδιο (μmolGSH ανά mg πρωτεΐνης) προσδιορίστηκε ποσοτικά με το φασματοφωτόμετρο διπλής δέσμης UV1700 (λmax � 412 nm). εφαρμογήε � 1,36 ×104/M/cm.

2.12.3. Δραστηριότητα υπεροξειδάσης γλουταθειόνης. Η δράση της υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης (GPx) (EC 1.11.1.9) εκτιμήθηκε με την εφαρμογή της τεχνικής των Mohandas et al. [32]. .eanalyze μείγμα που αποτελείται από 100 μl 10% ομογενοποιημένου προϊόντος, 100 μl αζιδίου του νατρίου (1,11 mM), 100 μl EDTA (1,13 mM), 40 μl αναγωγάσης γλουταθειόνης-δισουλφιδίου (GSR, 1 IU/ml) (EC1.8.1.7), 10 μl H2O2 (0,28 mM), 40 μl Lc-γλουταμυλ-L-κυστεϊνυλ-γλυκίνη (1,2 mM), 100 μl συνένζυμου II ανηγμένο τετρανάτριο άλας (0,22 mM ) και 0,12 Μ 1,49 ml Na+-K+ [PO4]2-ρυθμιστικού διαλύματος (ρΗ 7,4) σε ολόκληρη ποσότητα 2000 μl. Η απώλεια τετρανάτριου μειωμένου με το συνένζυμο II σε λmax £ 340 nm τεκμηριώθηκε σε θερμοκρασία 25 βαθμών.

Ο ρυθμός GPx υπολογίστηκε ως nmol οξειδωμένης NADPH/λεπτό/mg πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας ε 6,22 x 103/M/cm.

2.12.4. Δραστικότητα υπεροξειδίου δισμουτάσης. Ο ρυθμός δράσης SOD (EC1.15.1.1) (μονάδες ανά mg πρωτεΐνης) εξετάστηκε με τη διαδικασία των Kakkar et al. [33]. Το παρασκεύασμα της αντίδρασης περιελάμβανε 0.3 ml ομογενοποιημένου προϊόντος, 100 μl 5-θειικό μεθυλφαιναζινομεθυλεστέρα (197 μΜ) και 1,3 ml διφωσφορικό νάτριο χρησιμοποιώντας 200 μl δινουκλεοτιδίου αδενίνης-νικοτιναμίδης (DPNH) (780 μΜ) σταμάτησε 60 δευτερόλεπτα αργότερα χρησιμοποιώντας 1 ml glacialCH3COOH σε αυτό το μείγμα.

Η παραγόμενη ποσότητα χρωμογόνου υπολογίστηκε σημειώνοντας την ένταση του χρώματος σε λmax� 56{{10}} nm.2.12.5. Δραστηριότητα καταλάσης. Για να εκτιμηθεί ο ρυθμός δράσης της καταλάσης (EC1.11.1.6), η απόκλιση OD (λmax � 240 nm) της αναλυόμενης σύνθεσης (3.0 ml) που περιλαμβάνει 50 μl ερευνητικού δείγματος, 1,22 ml H2O2 (0,03 M) σε ρυθμιστικό διάλυμα Na+-K+ [PO4]2- (pH7,91, 0,06 M) και 1,63 ml 0,06 M Na+-K+ [PO4]{{33} Καταγράφηκε } ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 7,1). Η δραστηριότητα καταλάσης (μmol H2O2 σε αποσύνθεση ανά λεπτό ανά mg πρωτεΐνης εγκεφάλου) υπολογίστηκε με την εφαρμογή ε 43,6/M/cm [34].

2.12.6. Επίπεδο ολικών νιτρωδών. .e τεχνική των Sastry et al.[35] εφαρμόστηκε για την αξιολόγηση ολόκληρων νιτρωδών του εγκεφάλου (μmolper mg πρωτεΐνης εγκεφάλου). Σε δοκιμαστικούς σωλήνες που περιελάμβαναν 100 μl ερευνητικό δείγμα, 145 mg αμαλγάματος χαλκού-καδμίου, 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος H2CO3 (pH 8,89), 0,44 M 100 μl NaOH και 119,8 mM 400 μl κεντροποιήθηκαν σε ZnSO4 για 10 λεπτά, και το περιττό άνω υγρό (υπερκείμενο) απομονώθηκε.

Ακατέργαστη χημική ουσία (50 µl) περιλήφθηκε σε 100 µl s περιττού υγρού. Μετά από 60 λεπτά επώασης, OD (λμέγιστο μήκος κύματος 548 nm) σημειώθηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο διπλής δέσμης UV1700 (Shimadzu). Σχεδιάστηκε μια τυπική καμπύλη νιτρώδους οξέος νατρίου (0,02–0,2 mM) και εξισορροπήθηκε ολόκληρο το νιτρώδες άλας.

2.12.7. Προσδιορισμός Ολικών Πρωτεϊνών. Το συνολικό επίπεδο πρωτεΐνης (mg/ml ομογενοποιημένου προϊόντος) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας άτυπη γραφική παράσταση καμπυλότητας αλβουμίνης ορού βοοειδών με την ισχύ του διαλύματος που κυμαίνεται από 0.3 έως 3,8 mg/ml. Ο συνδυασμός εξέτασης οργανώθηκε με 250 μl ομογενοποιήματος, 5,1 ml αντιδραστηρίου Lowry, ρυθμιστικό διάλυμα Na+-K+ [PO4]2- (900 μl) και 1,1 Ν 500 μl FCR. .e ασυμφωνία του OD παρατηρήθηκε σε λmax 650 nm [36].

2.13. Τομές Εγκεφάλου Ιστοπαθολογία. Χρησιμοποιώντας μια διάταξη διάχυσης που τροφοδοτείται με βαρύτητα, οι αρουραίοι διαχέθηκαν ενδοκαρδιακά (μέσω της αριστερής κοιλίας) με 10% ουδέτερο ρυθμισμένο διάλυμα φορμαλδεΰδης (10% NBF) και αναισθητοποιήθηκαν οξεία. Ο ιππόκαμπος και οι φλοιώδεις τομείς βυθίζονται σε ένα σταθεροποιητικό (10:1 σταθεροποιητικό: αναλογία ιστού), συγκεκριμένα 10% NBF για μία εβδομάδα (4 βαθμοί), συνοδευόμενο από 0,04% νατριουμαζίδη (ρΗ 7,4).

Αιθυλική αλκοόλη (70%) χρησιμοποιήθηκε ως διάλυμα συσκευασίας για σταθερά τμήματα ιστού που διατηρήθηκαν στους 4 βαθμούς. Χρησιμοποιήθηκε κοπτικό μικροτόμου (τύπου περιστροφής) για την απόκτηση λεπτών τμημάτων (8,0 μm), τα οποία στη συνέχεια βάφτηκαν με χρωστική αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E). Οι διαφάνειες έγιναν μόνιμες χρησιμοποιώντας ρητίνη DPX, οι οποίες αργότερα γλίστρησαν με κάλυμμα και επιθεωρήθηκαν μέσω ενός οπτικού μικροσκοπίου (διόφθαλμος) σε μεγεθύνσεις ×40.

2.14. Στατιστική ανάλυση. Ένας έμπειρος πειραματιστής τύφλωσε διάφορα σχήματα φαρμάκων που δόθηκαν σε κοόρτες ζώων εξονυχιστικά και αξιολόγησε τα δεδομένα. Οι ακραίες τιμές δεν ήταν πραγματικές (δοκιμή Grubb) στα δεδομένα και η δοκιμή Kolmogorov–Smirnov και η δοκιμή Levene επιβεβαίωσαν την κανονική κατανομή των μεταβλητών και την ομοιογένεια της διακύμανσης (HOV p > 0.05, δοκιμή Levene), αντίστοιχα.

Διαφορετικά, σε περίπτωση άνισης διακύμανσης (HOV p < {{0}}.05, δοκιμή Levene), ANOVA του Welch (p < 0.05, F'-στατιστική) και Παιχνίδια–Μπορούν να εφαρμοστούν post hoc τεστ Howell. Οι μέσοι όροι των κανονικά κατανεμημένων μεταβλητών εξετάστηκαν και συσχετίστηκαν με μονόδρομες ή επαναλαμβανόμενες μετρήσεις αμφίδρομης ανάλυσης διακύμανσης (ANOVA). Στην περίπτωση της ANOVA, τα αποτελέσματα είναι σημαντικά (p < 0,05) στις στατιστικές F, εφαρμόστηκαν πολλαπλές συγκρίσεις, συγκεκριμένα HSD ​​του Tukey (ειλικρινής σημαντική διαφορά) ή Bonferroni. Η στατιστική σημαντικότητα κρίθηκε στο p < 0,05 και τα αποτελέσματα δηλώθηκαν ως μέσος όρος-± Τυπικό σφάλμα μέσου όρου (SEM).

3. Αποτελέσματα

3.1. Αποτελέσματα του DSM στη μάζα σώματος (g), τη δίαιτα και την κατάποση νερού αρουραίων που χορηγήθηκαν QA-ICV. Το σωματικό βάρος, η τροφή και η κατάποση νερού αναλύονταν εβδομαδιαία, ξεκινώντας από την ημέρα 1. Μια σημαντική μείωση (p < 0.001) στη μάζα σώματος (g), στη τροφή και στην πρόσληψη νερού τις ημέρες 7, 14 και 21 ήταν ρεαλιστική σε αρουραίους που υποβλήθηκαν σε έγχυση QA-ICV την ημέρα 1 σε σύγκριση με τους αντίστοιχους (Εικόνα 2).

Η δόση DSM (100 mg/kg) προκάλεσε σημαντική αύξηση στο σωματικό βάρος (ημέρα 7p < 0.05, ημέρα 14 p < {{14} }.01, ημέρα 21 p < {{20}}.001), τροφοδοσία (ημέρα 7 p < 0,05, ημέρα 14 p < 0,01, ημέρα 21 p < 0,001) και πρόσληψη νερού (ημέρα 7 ρ < 0,01, ημέρα 14 ρ < 0,05) σε επίμυες έναντι QA-ICV.

Το DSM (50 mg/kg) μείωσε επίσης σημαντικά τη μείωση του σωματικού βάρους που προκλήθηκε από QA-ICV (ημέρα 21 p < 0.05) και την πρόσληψη τροφής (ημέρα 7 p < 0.{{20}}1) αρουραίων σε σχέση με αρουραίους που έχουν κάνει ενέσεις QA-ICV. Οι αρουραίοι που έλαβαν QA-ICV και DNP αποκάλυψαν σημαντική κλιμάκωση στη μάζα σώματος (g) (ημέρα 7p < 0.05, ημέρα 14 p < 0.001, ημέρα 21 p < 0. < 0,001), τροφή (ημέρα 7 p < 0,001, ημέρα 14 p < 0,01, ημέρα 21 p < 0,001) και πρόσληψη νερού (ημέρα 7, 14, 21 p < 0,01) σε σχέση με αρουραίους που παρέμειναν εκτεθειμένοι σε μοναχικό QA-ICV.

3.2. Επίδραση του DSM στην κίνηση, τον κινητικό συντονισμό και το βάδισμα των αρουραίων έναντι του QA-ICV. Σε αυτή τη μελέτη, οι κινητικές δραστηριότητες των ζώων δεν επηρεάστηκαν από το QA-ICV ή τις φαρμακευτικές θεραπείες.

Η ομάδα QA δεν απεικόνισε σημαντική αλλαγή στις μέσες μετρήσεις θεμάτων ανά 5 λεπτά στη συσκευή ακτοφωμέτρου σε σύγκριση με την εικονική ομάδα (Εικόνα 3(α)). Η ανάλυση του Rotarod και του αποτυπώματος χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της αισθητηριοκινητικής απόδοσης και της βάδισης των αρουραίων.

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το QA-ICV παρεμπόδισε σημαντικά (p < 0.001) τον συντονισμό του κινητήρα (Εικόνα 3(β)) και το βάδισμα (Εικόνα 3(γ)) των αρουραίων, που αντικατοπτρίζεται από τη μείωση της καθυστέρησης πτώσης από τον περιστρεφόμενο άξονα και το μήκος του βήματος των αρουραίων στην ανάλυση του αποτυπώματος σε σύγκριση με τους ομολόγους τους.

Οι ομάδες QA + DSM50 και QA + DSM100 παρουσίασαν μια αξιοσημείωτη αύξηση στην πτωτική καθυστέρηση (p < {0.05, p <0.01) και στο μήκος διασκελισμού (p < 0,05, p < 0,001) σε σχέση με την ομάδα QA.

Η θεραπεία με DNP εξασθένησε σημαντικά το QA-ICV και προκάλεσε μείωση της καθυστέρησης πτώσης (p < 0.001) και του μήκους διασκελισμού (p < 0,001) σε σύγκριση με τους αρουραίους στους οποίους δόθηκε. QA-ICV μόνο. Επιπλέον, η θεραπεία με DSM (100 mg/kg) εμφάνισε σημαντική βελτίωση (ρ < 0,01) στην άνοδο σε σχέση με το DSM (50 mg/kg) σε αρουραίους που υποβλήθηκαν σε QA-ICV.

For more information:1950477648nn@gmail.com