Μηχανιστική ενόραση για την επαγόμενη από τη διοσμίνη νευροπροστασία και βελτίωση της μνήμης σε μοντέλο αρουραίου ενδοεγκεφαλοκοιλιακού-κινολινικού οξέος: Ανάσταση μιτοχονδριακών λειτουργιών και αντιοξειδωτικών Μέρος 1

Ο νευροεκφυλισμός είναι το τελικό συμβάν μετά από έναν καταρράκτη παθογόνων μηχανισμών σε αρκετές εγκεφαλικές διαταραχές που οδηγούν σε γνωστική και νευρολογική απώλεια. Το κινολινικό οξύ (QA) είναι μια διεγερτική τοξίνη που προέρχεται από το μονοπάτι του μεταβολισμού της τρυπτοφάνης και εμπλέκεται σε πολλές ασθένειες, όπως το Αλτσχάιμερ, το Πάρκινσον, το Χάντινγκτον και η νόσος της ψύχωσης.

Καθώς οι άνθρωποι γερνούν, ο νευροεκφυλισμός έχει γίνει σταδιακά ένα κοινό φαινόμενο. Ο νευροεκφυλισμός μπορεί να έχει δυσμενείς επιπτώσεις στις σωματικές και πνευματικές ικανότητες των ανθρώπων, ιδιαίτερα στη μνήμη. Ωστόσο, μπορούμε να επιβραδύνουμε τον νευροεκφυλισμό και να βελτιώσουμε τη μνήμη μέσω της δράσης.

Πρώτον, η διατήρηση μιας θετικής στάσης απέναντι στη ζωή μπορεί να βοηθήσει στην ανακούφιση του νευροεκφυλισμού. Μελέτες έχουν δείξει ότι μια θετική νοοτροπία μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη και την αναδόμηση των νευρώνων, ενισχύοντας έτσι τις γνωστικές λειτουργίες των ανθρώπων. Άλλωστε, η χαρούμενη διάθεση έχει θετικό αντίκτυπο στην υγεία του εγκεφάλου.

Δεύτερον, μπορούμε να ενισχύσουμε τη μνήμη και να προωθήσουμε τη νευρική αναγέννηση μέσω της άσκησης. Η σωστή άσκηση μπορεί να διεγείρει τους νευρώνες στον εγκέφαλο να κάνουν νέες συνδέσεις, ενισχύοντας έτσι τις γνωστικές και μνημονικές ικανότητες των ανθρώπων. Επιπλέον, για τους ηλικιωμένους, η άσκηση μπορεί επίσης να μειώσει τη νευρική όρεξη που προκαλεί νευροεκφυλισμό, η οποία βοηθά στη διατήρηση της υγείας του εγκεφάλου.

Επιπλέον, η διατήρηση της διαφορετικότητας και της πρόκλησης των καθημερινών δραστηριοτήτων είναι επίσης ένας σημαντικός τρόπος για τη βελτίωση της μνήμης. Οι τακτικές και επαναλαμβανόμενες καθημερινές δραστηριότητες θα κάνουν τις δραστηριότητες του εγκεφάλου πολύ μηχανικές και μονότονες. Αντίθετα, οι διαφοροποιημένες δραστηριότητες αναζωογονούν τον εγκέφαλο και ενισχύουν τις γνωστικές και μνημονικές ικανότητες των ανθρώπων.

Συνοψίζοντας, αν και ο νευροεκφυλισμός μπορεί να έχει δυσμενείς επιπτώσεις στη μνήμη των ανθρώπων, μπορούμε να λάβουμε τις αντίστοιχες ενέργειες για να επιβραδύνουμε αυτό το αποτέλεσμα. Η θετική σκέψη, η σωστή άσκηση και οι ποικίλες δραστηριότητες μπορούν να βελτιώσουν τη μνήμη και να προωθήσουν την αναγέννηση των νεύρων. Ας αγαπάμε και ας προστατεύουμε τον εγκέφαλό μας για να τον κρατάμε υγιή και νέο. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη. Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη επειδή μπορεί επίσης να ρυθμίσει την ισορροπία των νευροδιαβιβαστών, όπως η αύξηση των επιπέδων ακετυλοχολίνης και αυξητικών παραγόντων, που είναι πολύ σημαντικοί για τη μνήμη και τη μάθηση. Επιπλέον, το Cistanche μπορεί επίσης να βελτιώσει τη ροή του αίματος και να προωθήσει την παροχή οξυγόνου, η οποία μπορεί να εξασφαλίσει ότι ο εγκέφαλος αποκτά επαρκή διατροφή και ενέργεια, βελτιώνοντας έτσι τη ζωτικότητα και την αντοχή του εγκεφάλου.

Κάντε κλικ στο Μάθετε τρόπους για να βελτιώσετε τη μνήμη σας

Η διοσμίνη (DSM) είναι ένα φυσικό φλαβονοειδές που διαθέτει τέτοιες ιδιότητες που μπορεί να σταματήσουν την πορεία της νευροεκφυλιστικής εξέλιξης. Σε προηγούμενες μελέτες, η σάρωση των ελεύθερων ριζών, μαζί με ιδιότητες, όπως αντιυπεργλυκαιμικές, αντιφλεγμονώδεις και αγγειοδραστικές ιδιότητες, του DSM ήταν ρεαλιστικές. Ως εκ τούτου, στους τρέχοντες πειραματισμούς, η νευροπροστατευτική δραστηριότητα του DSM διερευνήθηκε στο πρωτότυπο αρουραίου QA.

Το QA χορηγήθηκε μέσω της ενδοεγκεφαλοκοιλιακής οδού (QA-ICV) σε αρουραίους την πρώτη ημέρα και το DSM (50 και 100 mg/kg, ενδοπεριτοναϊκή οδός) δόθηκε από την ημέρα 1 έως την 21η. Μνήμη, βάδιση, αισθητικοκινητικές λειτουργίες και βιοδείκτες οξειδωτικού ακρωτηριασμού και οι μιτοχονδριακές λειτουργίες αξιολογήθηκαν σε ολόκληρο τον εγκέφαλο. Τα αποτελέσματα έδειξαν σημαντική επιδείνωση της αισθητηριοκινητικής απόδοσης, της βάδισης και της εργασιακής και μακροπρόθεσμης μνήμης σε αρουραίους με QA-ICV. Αυτές οι ανωμαλίες συμπεριφοράς μετριάστηκαν σημαντικά από το DSM (50 και 100 mg/kg) και τη δονεπεζίλη (τυπικό φάρμακο).

Η επαγόμενη από το QA-ICV μείωση της μάζας σώματος (g), η δίαιτα και η κατάποση νερού μετριάστηκαν επίσης από θεραπείες DSM ή δονεπεζίλης. Το QA-ICV ανέστειλε τις δραστηριότητες του μιτοχονδριακού συμπλέγματος Ι και ΙΙ και προκάλεσε αύξηση του οξειδωτικού και νιτροδικού στρες μαζί με μείωση των ενδογενών αντιοξειδωτικών στον εγκέφαλο. Το DSM βελτίωσε τις μιτοχονδριακές λειτουργίες εξαρτώμενα από τη δόση και μειώθηκε το οξειδωτικό στρες σε αρουραίους που έλαβαν QA-ICV. Το DSM μπορεί να είναι μια πιθανή εναλλακτική λύση στη θεραπεία νευροεκφυλιστικών διαταραχών με υποκείμενη παθολογία μιτοχονδριακής δυσλειτουργίας.

1. Εισαγωγή

Ο προοδευτικός νευροεκφυλισμός με συνοδά γνωστικά και νευρολογικά ελλείμματα είναι οι κύριες εκδηλώσεις αρκετών παθήσεων του εγκεφάλου, όπως η νόσος Alzheimer (AD), η νόσος Parkinson (PD) και η νόσος Huntington (HD).

Συναπτική εξασθένηση και μειωμένη μακροχρόνια ενίσχυση λόγω της μειωμένης έκφρασης των νευροτροφινών (π.χ. νευροτροφικοί παράγοντες, καλσινευρίνη και παράγοντες νευρικής ανάπτυξης), νευροχημικές εκτροπές (π.χ. ακετυλοχολίνη, γλουταμικό, μονοαμίνες και γ-αμινοβουτυρικό οξύ), νευροπεπτίδια (π.χ. ουσία P, σωματοστατίνη και ορεξίνη), και οι αλλαγές στο εσωτερικό περιβάλλον του εγκεφάλου οδηγούν σε επιδείνωση της βραχυπρόθεσμης και μακροπρόθεσμης μνήμης [1].

Οι διεγερτικές οδοί που διαμεσολαβούνται από γλουταμινεργικούς υποδοχείς συχνά συνδέονται με την εδραίωση της μακροπρόθεσμης μνήμης στον ιππόκαμπο και τον φλοιό του εγκεφάλου [2]. Υποδοχείς όπως το Ν-μεθυλ D-ασπαρτικό (NMDARs) είναι ένα ουσιαστικό συστατικό της μακροχρόνιας ενίσχυσης και κατάθλιψης, και η εισροή ασβεστίου μέσω των NMDARs και των καναλιών ασβεστίου (Ca2+) (VGCCs) ενισχύει τη σύναψη.

Ωστόσο, η υπερβολική διέγερση στον εγκέφαλο καταλήγει σε εγκεφαλοατροφία μέσω ελεύθερων ριζών, προφλεγμονωδών κυτοκινών και ενεργοποίησης των οδών κυτταρικού θανάτου [3, 4].

Το κινολινικό οξύ (QA) είναι προϊόν της οδού κυνουρενίνης του μεταβολισμού της τρυπτοφάνης και είναι ένας ενδογενής συνδετήρας των NMDARs [5]. Αν και η τρυπτοφάνη είναι υποχρεωτική για τη βιοσύνθεση σεροτονίνης και τρυπταμίνης, > 95% της τρυπτοφάνης μεταβολίζεται μέσω της οδού κυνουρενίνης [6]. Οι μεταβολίτες της οδού κυνουρενίνης (π.χ. κυνουρενικό οξύ) είναι νευροδραστικοί, συμπεριλαμβανομένου του QA, και εμπλέκονται σε ινσχιζοφρένεια, AD και HD7 ].

Το QA ενεργοποιεί το ανοσοποιητικό σύστημα (μικρογλοία και αστροκύτταρα), αυξάνοντας την έκφραση χημειοτακτικών παραγόντων (π.χ. μονοκυτταρική χημειοελκυστική πρωτεΐνη-1, RANTES) και διεγείροντας τις ελεύθερες ρίζες. Η αύξηση της διεισδυτικότητας του αιματοεγκεφαλικού φραγμού (BBB) ​​αποτρέπει την επίδραση θωράκισης έναντι της QA, η οποία προδιαθέτει τον εγκέφαλο σε υπερβολική εισροή QA. Το QA είναι ένας μεταβολικός αναστολέας που το καθιστά μια ισχυρή νευροτοξίνη [8].

Το QA αναστέλλει τη μονοαμινοξειδάση-Β (ΜΑΟ-Β), τη γλυκονεογένεση (μέσω της φωσφοενολοπυρουβικής καρβοξυκινάσης), την κινάση της κρεατίνης, τα μιτοχονδριακά σύμπλοκα και την κυτταρική αναπνοή και μειώνει τα επίπεδα ATP [9].

Το QA μπορεί να αυξήσει το οξειδωτικό στρες και να μειώσει τα αντιοξειδωτικά με τρόπο που εξαρτάται ή ανεξάρτητο από το NMDAR. Η αλληλεπίδραση QA-Fe2+υποκινεί τις ελεύθερες ρίζες, οδηγώντας σε υπεροξείδωση λιπιδίων και ακρωτηριασμό του DNA που τεκμηριώνεται από μια έξαρση ριζών ινυδροξυλίου, δραστηριότητας πολυ (ADP-ριβόζης) πολυμεράσης (PARP) και γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH) [10].

Τα κλινικά ευρήματα αποκάλυψαν επίσης ότι το QA ενισχύεται στον εγκέφαλο, το αίμα και το εγκεφαλονωτιαίο υγρό (ΕΝΥ) ασθενών με AD και HD [5]. Τα ευρήματα στο παρελθόν υποδεικνύουν ότι το QA μπορεί να προκαλέσει γνωστικά ελλείμματα και άλλες ανωμαλίες συμπεριφοράς σε μη πειραματόζωα [11].

Πρόσφατες μελέτες αποκάλυψαν ότι τα φυσικά προϊόντα θα μπορούσαν να βελτιώσουν τα συμπτώματα της γνωστικής δυσλειτουργίας και να βελτιώσουν τη θεραπευτική έκβαση των νευροεκφυλιστικών διαταραχών [12, 13]. Ένα φλαβονοειδές γλυκοσίδιο, διοσμίνη (3',5,7-τριυδροξυ-4'-μεθοξυ φλαβόνη-7-ραμνογλυκοσίδη), συχνά βρίσκεται στο περικάρπιο των εσπεριδοειδών (Rutaceae) [14].

Το Diosmin(DSM) αποτελείται από μια ομάδα δισακχαρίτη (6-O-(-L-rhamnopyranosyl)- -D-glucopyranosyl) που συνδέεται με το τμήμα αγλυκόνης (diosmetin) μέσω γλυκοσιδικού δεσμού και μπορεί να βιοσυντεθεί από εσπεριδίνη.

Η εντερική χλωρίδα μετατρέπει τη γλυκοσίδη DSM σε τμήμα αγλυκόνης, η οποία στη συνέχεια απορροφάται γρήγορα μέσω του γαστρεντερικού σωλήνα. Στους απάνθρωπους, ο χρόνος ημιζωής του DSM είναι 26 έως 43 ώρες όταν χορηγείται μέσω της στοματικής οδού [15].

Είναι ένα αγγειοδραστικό φάρμακο που βελτιώνει τη μικροκυκλοφορία και τη λεμφική παροχέτευση και ενισχύει την ευκαμψία των φλεβών μειώνοντας τον μεταβολισμό της νορεπινεφρίνης από την κατεχόλη-Ο-μεθυλ τρανσφεράση. Το DSM καταργεί τη μικροαγγειακή διαπερατότητα, την εξαγγείωση των λευκοκυττάρων και την εμφάνιση μορίων προσκόλλησης, όπως το ICAM-1και το VCAM-1 [14, 15].

Αρκετές μελέτες έδειξαν ιδιότητες ερεθισμού ελεύθερων ριζών και εναρμόνισης του ανοσοποιητικού του DSM στον εγκέφαλο [16, 17]. Τα κλινικά στοιχεία συνιστούν ότι το DS είναι ένα καλά ανεκτό, ασφαλές και μη τοξικό φάρμακο [15]. Στα διατροφικά προϊόντα, το DSM (Daflon) προτείνεται συχνά για τη θεραπεία φλεβικών διαταραχών, συμπεριλαμβανομένων των αιμορροΐδων και των υπεργλυκαιμικών καταστάσεων.

Προηγούμενα ευρήματα έδειξαν ότι το DSM θα μπορούσε να διεγείρει την απελευθέρωση ινσουλίνης από τα κύτταρα, το μεταβολισμό των υδατανθράκων και την έκφραση των μεταφορέων γλυκόζης (GLUTs). Επίσης, μειώνει τις διαβητικές επιπλοκές [15].

Μειώνει τη δυσλιπιδαιμία και την ηπατική γλυκονεογένεση [16]. Προηγούμενες μελέτες, το DSM βελτίωσε τις γνωστικές λειτουργίες, μείωσε τα συμπτώματα της σχιζοφρένειας και έδειξε νευροπροστατευτικά αποτελέσματα σε πειραματόζωα [16-19].

Sawmiller et al. [20], σε μια μελέτη, σημείωσε μια μείωση που προκαλείται από το DSM στην υπερφωσφορυλίωση αμυλοειδούς και tau με εξασθένηση της κινάσης συνθάσης 3 του γλυκογόνου στο μοντέλο ποντικού 3 × Tg-AD. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν εύστοχα ότι το DSM έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει τις εγκεφαλικές δυσλειτουργίες έναντι του QA. Σε αυτή τη μελέτη, το QA χρησιμοποιήθηκε για να προκαλέσει άνοια και άλλα νευρολογικά ελλείμματα σε αρουραίους.

Το QA μπορεί να δράσει ως μια ισχυρή νευροτοξίνη που αναστέλλει διάφορες οδούς και μοριακούς μηχανισμούς στον εγκέφαλο για να προκαλέσει προοδευτικό νευροεκφυλισμό και ατροφία του εγκεφάλου. Η σύγχρονη έρευνα σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τα αποτελέσματα του DSM στο πρωτότυπο του αρουραίου QA-ICV.

2. Υλικό και Μέθοδοι

2.1. Πειραματικά Ζώα.

.είναι η έρευνα επιτρέπεται από την IAEC βάσει του πρωτοκόλλου αριθ. ASCB/IAEC/14/20/145. Οι αρουραίοι AlbinoWistar (οποιουδήποτε φύλου, 200 g έως 250 g, ηλικίας 8 έως 9 μηνών) διατηρήθηκαν σε κυβοειδείς θαλάμους πολυπροπυλενίου τυπικού μεγέθους κάτω από τεχνητές ρυθμίσεις θερμοκρασίας (23 ± 2 βαθμοί), 12:12 ώρες ακολουθίες σκότους/φωτός και υγρασία (40 ± 10%) εντός του ιδρυματικού ζωοτροφείου. Τα τρωκτικά τρέφονταν με τυπικά θρεπτικά τρόφιμα (Ashirwad Manufacturers, Punjab) και καθαρίζονταν με νερό κατά βούληση.

Όλες οι διαδικασίες σε ζώα εκτελούνται αποκλειστικά σύμφωνα με τις οδηγίες της CPCSEA, GOI, Νέο Δελχί. Οι κηδεμόνες και οι χειριστές ζώων τυφλώθηκαν σχετικά με διαφορετικά θεραπευτικά σχήματα που διευκολύνθηκαν σε κοόρτες ζώων.

Πραγματοποιήθηκαν ερευνητικές δοκιμές σε ζώα, που πέτυχαν τουλάχιστον ένα δεκαπενθήμερο διάρκειας εξοικείωσης. Όλες οι έρευνες με ζώα πραγματοποιήθηκαν μεταξύ 0900- και 1600-ώρες την ημέρα.

2.2. Φάρμακα και Χημικά.

Η διοσμίνη (DSM: 520-27-4), το κινολινικό οξύ (QA: 89-00-9) και οι τυπικές αναλυόμενες ουσίες αποκτήθηκαν από τη Merck (Ινδία). Δισόξινο φωσφορικό νάτριο (NaH2PO4), υδροξείδιο του νατρίου (NaOH), διβασικό φωσφορικό κάλιο (K2HPO4), νιτροβλουτετραζόλιο (NBT), μεθοθειική φαιναζίνη (5-μεθυλθειϊκό μεθυλφαιναζίνιο), αιθυλενοδιαμινολευκωματικό οξύ (BSAUEDTA) 7}}[4-(2-υδροξυαιθυλ)πιπεραζιν-1-υλ]αιθανοσουλφονικό οξύ (HEPES), 1,2-δις[2-[δις(καρβοξυμεθυλ) αμινο]αιθοξυ]αιθάνιο (EGTA), ριβοφλαβίνη, κυανιούχο νάτριο (NaCN), νατριουμαζίδη (NaN3), πυροφωσφορικό τετρανάτριο, υπεροξείδιο του υδρογόνου (H2O2), δινάτριο NADH (DPNH), τετρανάτριο NADPH (Συνένζυμο II), ανηγμένο τετραφωσφορικό άλας Αντιδραστήριο Folin and Ciocalteu's (FCR) και σουλφοσαλικυλικό οξύ (5-SSA) (HiMedia Laboratories, Maharashtra, Ινδία). διγλυκίνη, παγόμορφο οξικό οξύ (CH3COOH), αντιδραστήριο Ellman (3-Καρβοξυ-4-νιτροφαινυλδισουλφίδιο, DTNB), αζαβενζόλιο (C5H5N) και λαυρυλοθειικό νάτριο (SLS) (LobaChemie, Mumbai, Ινδία). 4,6-Διυδροξυ-2-μερκαπτοπυριμιδίνη (2-TBA), ανθρακικό δινάτριο (Na2CO3) και (2-μερκαπτοαιθυλ)τριμεθυλαμμώνιο οξικό ιωδιούχο (TCI chemicals, Ινδία); θειικός ψευδάργυρος (ZnSO4), άλας Rochelle (L(+)-τρυγικό νάτριο κάλιο), διυδροχλωρική {{34}(1-ναφθυλαμινο)αιθυλαμίνη, νιτρώδες οξύ (NaNO2) και π-αμινοβενζολοσουλφοναμίδιο (SiscoResearch India, ) Χρησιμοποιήθηκε βουτυλική αλκοόλη (Fisher Scientific, India).

2.3. Ενδοεγκεφαλοκοιλιακή Έγχυση Κινολινικού Οξέος.

Τα ζώα υποβλήθηκαν σε αναισθησία με χορήγηση ενδοπεριτοναϊκώς (IP) κεταμίνης (90 mg/kg) και ξυλαζίνης (10 mg/kg) κοκτέιλ χρησιμοποιώντας αποστειρωμένο νερό για ένεση. Το σώμα ήταν ξαπλωμένο σε πρηνή θέση σε ένα ζεστό μαξιλάρι θέρμανσης και στη βάση ενός οργάνου στερεοταξικής χειρουργικής, το κεφάλι ήταν τοποθετημένο. Το τριχωτό της κεφαλής κόπηκε στο ισόβελον σημείο και το κρανίο αποκαλύφθηκε με ανάσυρση του δέρματος.

Οποιαδήποτε από τις δύο πλάγιες κοιλίες επιλέχθηκε αυθαίρετα, και στο κρανίο, το βρεγματικό οστό είχε τρυπηθεί (στερεοταξικές συντεταγμένες -0.8 mm προσθοπίσθια από το βρεγμά, ±1,5 mm μεσόπλευρο από το μεσαίο ράμμα και ±3,6 mm οπίσθια οπίσθια οσφυϊκή περιοχή ) για να κάνετε μια τρύπα για γρέζια [21].

Την πρώτη ημέρα, το διάλυμα κινολινικού οξέος (QA) δημιουργήθηκε πρόσφατα (240 nmol) σε PBS (Na+-K+ [PO4]2- ρυθμισμένος ορός, pH 7,4) και εγχύθηκε σταδιακά χρησιμοποιώντας μια μικροσύριγγα Hamilton με ρυθμό ροής 1 μl/λεπτό στην αριστερή ή δεξιά εγκεφαλική κοιλία των αρουραίων σε διάρκεια 5 έως 6 λεπτών με όγκο ένεσης 5 μl οχήματος ICV [22].

Μετά τον ενοφθαλμισμό ολόκληρου του φαρμάκου, η μικροβελόνα δεν απομακρύνθηκε για 4 έως 5 λεπτά για να καταστεί δυνατή η διάχυση του φαρμάκου στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό και να αποτραπεί η παλινδρόμησή του. Ισοδύναμος όγκος (10 μl) του οχήματος PBS χορηγήθηκε ICV σε shamrats που χειρουργήθηκαν πανομοιότυπα, ωστόσο, το QA δεν εγχύθηκε.

Μετά τις ενέσεις φαρμάκου, οι τρύπες αποκαταστάθηκαν με τη χρήση ενός παράγοντα ώθησης (φωσφορικός ψευδάργυρος, PYRAX®) και ολοκληρώθηκε η ραφή του δέρματος. Για να αποφευχθεί η μόλυνση (βακτηριακή ανάπτυξη), το Neosporin® εφαρμόστηκε εκ των προτέρων.

Χορηγήθηκε μετεγχειρητική σήψη, Orizolin (Zydus Cadila), δόση 30 mg/kg (IP). Σε κάθε αρουραίο παρασχέθηκε ζεστό περιβάλλον (37 ± 0,5 μοίρες) για να αποτραπεί η μετεγχειρητική υποθερμία. Σε κάθε αρουραίο αφέθηκε ημιστερεή τροφή (μέσα στο κλουβί) και νερό δωρεάν μετά από χειρουργική επέμβαση για επτά ημέρες και στεγάστηκε διακριτά σε ένα ξεχωριστό κλουβί (30 × 23 × 14 cm3).

2.4. Πειραματικό Πρωτόκολλο. Το DSM ενέθηκε σε δόσεις 50 και 100 mg/kg ανά σωματικό βάρος (bw) σε επίμυες μέσω της ενδοπεριτοναϊκής (IP) οδού χρησιμοποιώντας 0,5% διμεθυλοσουλφοξείδιο σε φυσιολογικό ορό (δόση-όγκος 5 ml/kg) [17].

Τα ζώα κατανεμήθηκαν τυχαία σε 5 ομάδες σε μια απλή τυφλή λειτουργία (n � 5): (i) ψευδής (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv) QA + DSM100 και (v) QA + DNP. Οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ενδοεγκεφαλοκοιλιακή χορήγηση QA (QA-ICV) ή εικονική χειρουργική επέμβαση την 1η ημέρα. Το DSM χορηγήθηκε για 21 συνεχόμενες ημέρες καθημερινά 120 λεπτά μετά το QA-ICV από την πρώτη ημέρα και μετά.

Η Donepezil (DNP) χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο φάρμακο σε αυτή τη μελέτη και ενέθηκε (δόση 3 mg/kg, ενδοπεριτοναϊκώς) σε αρουραίους στους οποίους έγινε ένεση QAICV για 21 διαδοχικές ημέρες. Στα ζώα στις ομάδες ελέγχου του sham και του QA χορηγήθηκε όχημα (στείρο 0.5% διμεθυλοσουλφοξείδιο σε φυσιολογικό ορό σε δόση-όγκο 5 ml/kg) από την ημέρα 1 έως την 21η. .e ολόκληρη η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με το σχήμα που απεικονίζεται Εικόνα 1.2.5. Κινητική Δραστηριότητα.

Σε όλες τις ομάδες αρουραίων, η μέση κινητική δραστηριότητα τεκμηριώθηκε χρησιμοποιώντας μια συσκευή ακτοφωτόμετρου για 5 λεπτά. Ένα ξεχωριστό ζώο τοποθετήθηκε στο ακτοφωτόμετρο για 3 λεπτά εγκλιματισμού. Έπειτα στους αρουραίους .e δόθηκαν 5 λεπτά και τα αποτελέσματα αναφέρθηκαν ως μετρήσεις ανά 5 λεπτά [11].

2.6. Rotarod Test. In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 δευτερόλεπτα στη ράβδο που περιστρέφεται με εννέα περιστροφές ανά λεπτό (rpm).

Μετά τις δοκιμές απόκτησης, ένας ξεχωριστός αρουραίος τοποθετήθηκε στον κυλινδρικό άξονα και η ταχύτητα περιστροφής ενισχύθηκε σε ένα σταθερό διάλειμμα 10 δευτερολέπτων από τις 6 σ.α.λ. (προκαταρκτική ταχύτητα) στις 30 σ.α.λ. (ταχύτητα ολοκλήρωσης), που εκτείνεται σε 50 δευτερόλεπτα. Η μέση καθυστέρηση πτώσης (σε δευτερόλεπτα) από τον περιστρεφόμενο κυλινδρικό άξονα δηλώθηκε στα αποτελέσματα.

2.7. Ανάλυση αποτυπώματος. Η αρχή πίσω από την εκτέλεση ανάλυσης αποτυπώματος σε αρουραίους είναι η αξιολόγηση των ανωμαλιών βάδισης.

Για τα ίχνη, τα πόδια του αρουραίου βυθίστηκαν σε τέσσερις διαφορετικές έγχρωμες μη τοξικές βαφές τροφίμων και τους επετράπη να τρέξουν σε κεκλιμένο διάδρομο (70 cm × 10 cm × 8 cm). Η βάση του διαδρόμου ήταν κλεισμένη με ένα φύλλο κυτταρίνης λευκού χρώματος. Οι αρουραίοι παρακινήθηκαν σε ένα αμυδρό ανηφορικό τμήμα στο τέλος του διαδρόμου για να αποκτήσουν καθαρά ίχνη. Η βαφή .e αφαιρέθηκε απαλά από κάθε ζώο χρησιμοποιώντας χλιαρό νερό μετά τις δοκιμές. Τα ίχνη .e σαρώθηκαν και το "μήκος διασκελισμού" μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν τυπικό χάρακα. Το μήκος του διασκελισμού ποσοτικοποιήθηκε με τον υπολογισμό της απόστασης μεταξύ των διαδοχικών τοποθετήσεων του ίδιου ποδιού του αρουραίου [11].

For more information:1950477648nn@gmail.com